TW200843778A - Pterin analogs - Google Patents

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200843778 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明大體上係關於四氫生物喋呤類似物、含有其之組 合物及藉由投與該類似物治療患有對四氫生物嗓呤起反應 之病狀之個體的方法。 ~ 【先前技術】 四氫生物喋呤（本文中亦稱為”BH4")是一種天然存在之 化合物且為喋呤家族之生物學活性胺。一種立體異構物， 沙丙喋呤（sapropterin)係如下式II所示：

式II 儘管四氫生物嗓吟天然存在，然其亦可藉由多種方法合 成，該等方法中之一些揭示於以下專利中：例如美國專利 第 2,601，215 號、第 3,505,329 號、第 4,540,783 號、第 4,550，109 號、第 4,587,340 號、第 4,595,752 號、第 4,649，197 號、第 4,665，182 號、第 4,701，455 號、第 4,713,454 號、第 4,937,342 號、第 5,037,981 號、第 5，198,547 號、第 5,350,851 號、第 5,401，844 號、第 5,698,408號及第5,698,4〇8號，及加拿大專利申請案第 2,420,374號- 128231.doc 200843778 喋呤為包括％嗪環及嘧啶環之具有羰基氧及胺基之雙環 化合物。喋呤在酶促催化作用中充當輔因子。四氫生物喋 呤充當多種不同酶之辅因子，該等酶包括苯丙胺酸羥化酶 (PAH)、酪胺酸3-羥化酶、色胺酸5-羥化酶及氧化氮合成 酶（NOS)之所有三種形式。四氫生物喋呤亦為在造血細胞 中具有增殖活性之三帶短膜蟲（〇/ί/π·ί/ζ·α /asckw/aia)之生 長因子’且充當氧化氮毒性之自保護因子。四氮生物嗓吟 之此等及其他辅因子及細胞功能以及四氫生物喋呤缺乏相 關病症揭示於Thony等人（2000)Biochem.L 347々l-16中。四 氫生物喋呤缺乏相關病症亦一般描述於Blau等人， Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease ^ 1275-776(第 8版，McGraw胃Hill Publishing Co·，New York， NY，2QQI)中之 Disorders of Tetrahydrobiopterin and Related Biogenic Amines 中0 四氫生物喋呤為難以穿過膜以及通過血腦屏障之親水性 化合物。血腦屏障通常為控制血液中之物質進入中樞神經 系統（CNS)之膜。其充當局部血管與大部分cns之間的物 理屏障’防止某些（及許多）化合物到達Cns。體内界定毛 細管之壁係由經小間隙分隔之内皮細胞組成。此等間隙允 許組織内之可溶性化學物進入血流，以使該等化合物可運 送遍布體内，且隨後離開血液進入不同組織。在腦中，此 等内皮細胞更緊密堆積，且因此間隙甚至更小。此等較小 間隙阻止除因脂質溶解性而穿過細胞膜之分子（例如氧、 二氧化碳、乙醇）及藉由特定轉運系統通過之分子（例如 128231.doc 200843778 糖、選擇性胺基酸）之外的所有分子通過。許多藥物不能 以有效提供治療之量穿過血腦屏障。除為CNS提供物理= 障之外，腦中之内皮細胞亦可代謝某些分子（藥物）以使其 不會到達CNS。 仍需要較有效地傳遞四氫生物喋呤至體内以及cns以提 供對於對四氫生物喋呤起反應之病症及病狀之有效的治 療。 【發明内容】 本文中揭示四氫生物喋呤類似物、含有其之組合物及藉 由投與一或多種該等類似物治療患有對四氫生物喋呤治療 起反應之病狀之個體的方法。 本文中所揭示之化合物為四氫生物喋呤或四氫生物喋呤 衍生物之類似物且可為其前藥，其可在活體内分別產生四 氫生物喋呤或其衍生物。四氫生物喋呤為天然存在之化合 物’其亦可精由熟習此項技術者已知之化學合成獲得。 已發現經口投與四氫生物喋呤具有較低生物可用性。通 常據信此較低生物可用性可能歸因於以下情況中之至少一 者：胃腸（GI)道之不良吸收、GI道及/或血流中之氧化作 用、吸收前降解或代謝及吸收後降解或代謝。此外，據信 四氫生物喋呤在胃及血流中展現不良（脂質）溶解性、潛在 化學不穩定性，且不能滲透GI道壁。 本發明之一態樣係關於藉由向有需要之個體投與治療有 效量之四氫生物喋呤之類似物及/或前藥來改善個體中四 氫生物蝶呤之生物可用性，其中若該類似物為BH4之前 128231.doc 200843778

藥，則内源酶可在活體内分別釋放活性四氫生物喋呤或四 氫生物喋呤衍生物。在四氫生物喋呤之情況下前藥法尤其 有用，因為此化合物與至少6種不同酶（例如苯丙胺酸羥化 酶、酪胺酸羥化酶、色胺酸羥化酶、内皮細胞氧化氮合成 酶、神經7〇氧化氮合成酶及誘導性氧化氮合成酶）相互作 用。此外，四氫生物喋呤在參與羥化反應之後經歷需要兩 種其他酶之再循環。因此，不能既完全既與此等6種酶相 互作用亦完全由兩種其他酶再循環之四氫生物喋呤類似物 可能不會良好地作為辅因子發揮作用且不能以化學計量使 用，尤其在是未完全再循環時。因此，產生天然四氫生物 喋呤化合物之類似物遠優於具有較佳生物可用性但不能完 全與四氫生物喋呤之所有細胞標靶相互作用之化合物。 口此’本發明之一態樣係關於四氫生物嗓呤之類似物。 四氫生物喋呤之一種類似物為式〗化合物（以一種特定立體 異構物形式如下展示）或其醫藥學上可接受之鹽： R6

R7 R4

式I。 亦涵蓋其他7種可能的BH4立體異構物。在一類實施例 中，BH4類似物為可在生物條件下釋放bH4之前藥。

根據式I化合物之一較佳實施例，、I、r5、^及R 128231.doc 200843778 均為氫，且R#r2一起為_c(RC)Rd_且形成五員環 R2獨立地為氫、Cu環掠美、Γ Pi ^ 1 1匕3·8銥烷基Cl·40烷基、經取代之烷

基、Cw雜環烷基、Clw伸烷基Cw環烷基、Ci，伸烷^ c3-8雜我基、芳基、雜芳基、伸烷基芳基、伸烷基：二 基C3·8%烯基、C2_4〇烯基、C：2·4。經取代之烯基、C 祕：M： 3-8雜主衣 知基、c2-40伸烯基c3.8環燒基、C24〇伸稀基C38環婦基、 C2-4。伸烯基G：3-8雜環烷基、伸烯基Cy雜環烯基、 伸烯基芳基、c2_4。伸烯基雜芳基、C⑼H、c⑼C"環： ^、c(o)c〗_4G烷基、c(0)Cl_4G經取代之烷基、c(〇)c二二 衣烷基、(:⑼。…伸烷基。3-8環烷基、go)。"。伸烷基 雜環烧基、C⑼芳基、c(0)雜芳基、c(〇)伸烧基芳基、· c(〇)伸烷基雜芳基、C(0)C3_8環烯基、C(〇)C24〇烯基、 匚（〇)(：2-你經取代之烯基、C(0)C38雜環烯基、C(〇)C24〇伸 烯基〇3.8環烷基、c(0)c2_4Q伸烯基c3-8環烯基、c(〇)Cw〇 伸浠基C3_8雜環燒基、C(0)C2-4〇伸烯基c3 8雜環烯基、 C(〇)C2-4〇伸烯基芳基、C(0)C2 4〇伸烯基雜芳基、 c⑴)NRaRb、C(0)ORa、C(0)SRa或胺基酸衍生物其限制 條件為1^及112不同時為氫、C(0)H、葡糖基、胺基葡糖基 或相同（:（0)(:^0烷基。在此實施例中，更佳心及尺〗獨立地 選自胺基酸衍生物，且另外較佳非胺基酸衍生之尺基團為 氫。舉例而言，Rl可選自胺基酸衍生物且1為氫，或心係 選自胺基酸仿生物且R〗為氫，較佳為後者。在上述之任一 者中’諸如1或化2之胺基酸衍生物較佳包含異纈草胺醯基 胺基酸部分。 128231.doc •10- 200843778 根據^化合物之另一較佳實施例，Ri、Hu I均為虱；且RdR4獨立地為氫、。3-8環烷基、C“。烷 基广❶經取代之燒基、。雜環烧基〜伸烧基^環 =、1=°伸坑基c"雜環院基、芳基、雜芳基、伸烧基 基雜芳基、C3.8環稀基、C2.4。烯基、C2_4。經取 ^烯土、（：3.8雜環烯基、C2，伸稀基C3 8環烧基、^伸 烯基c3_8環烯基、C24“申烯基C38雜環烷基、“伸浠基 c3-8雜㈣基、c2,伸稀基芳基、c⑽伸稀基雜芳基、 C(〇)H、c⑼C3.8環燒基、C⑼Ci 4。院基、c(〇)^。經取 代之炫基、c(0)c3.8雜環職、⑽c⑽伸録C3 8環烧 基、C(O)Cl.40伸烧基c38雜環烧基、c(〇)芳基、c⑼雜芳 基、C⑼伸院基芳基、c⑼伸烧基雜芳基、c⑼c"環稀 f、C(0)c2.4。烯基、C(())C2•祕取代之烯基、c(〇)c"雜 環稀基、C(〇)C2-40伸烯基c3-8環烧基' C(〇)C24〇伸稀基h 環烯基' c(o)C2·4。伸烯基C3 8雜環烷基、c(〇)C2⑽伸烯基 Cw雜環烯基、C(0)C2M伸烯基芳基、C(0)C2⑷伸烯基雜 芳基、C(0)NRaRb、C(0)ORi c(〇)SRa，其限制條件為若 R3為氫，則R4不為氫或核糖，且若R4為氫，則I不為氫、 C(0)H、乙酸根、羥基甲基或胺基烷基。 根據式I化合物之另一較佳實施例，R〗、I、I、&及 R5均為氫；且I及&獨立地為氫、CM環烷基、C】·切烷 基、Ci-w經取代之烷基、Cs_8雜環烷基、Ci^伸烷基。3^壤 烷基、Cbw伸烷基(^-8雜環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基 芳基、伸烷基雜芳基、Cw環烯基、CM❶烯基、Cm❹經取 128231.doc -11- 200843778 代之烯基、c：3·8雜環烯基、C2,伸烯基C3 8環烷基、 ^2-40 伸 烯基Cw環烯基、伸烯基C3·8雜環烷基、伸烯美 C3-8雜環烯基、C2_4〇伸烯基芳基、（^⑽伸烯基雜芳基、 C(0)H、0(〇)(：3.8環烷基、C(0)Cl-4G烷基、c(〇)Ci·切經取 代之烷基、C(0)C3·8雜環烷基、c(〇)Ci_4G伸烷基Cw環烷 基、CCCOCwo伸烧基c3_8雜環烷基、c(0)芳基、雜芳 基、c(0)伸烷基芳基、c(0)伸烷基雜芳基、c(〇)C3·8環烯 基、c(o)c2-4G烯基、c(o)c2.4G經取代之烯基、c(0)Cu雜 環烯基、C(0)C2_4G伸烯基(：3.8環烷基、C(0)C2 4G伸烯基〇" 環烯基、C(0)C2_4G伸烯基Cw雜環烷基、c(〇)C24G伸烯基 C3-8雜環烯基、C(0)C2_4G伸烯基芳基、C(0)C2 4❹伸烯基雜 芳基、C(0)NRaRb、C(0)0Ra4 c(〇)SRa，其限制條件為若 R6為氫，則R?不為氫、甲基、叫仰丄⑺出或CKCH2· 芳基’且若I為氫，則汉6不為氫。 根據式I化合物之另一較佳實施例，Ri、R2、&、&、 R6及R7均為氫；且1為環烷基、Ci,烷基、Ci,經取 代之烷基、C3·8雜環烷基、伸烷基C3_8環烷基、Ci⑽伸 烷基C3·8雜環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳基、伸烷基 雜芳基、Cw環烯基、C2,烯基、C2-4〇經取代之烯基、c3.8 雜環烯基、C24G伸烯基Cl8環烷基、Chw伸烯基C3-8環烯 基、C2-4()伸烯基C3·8雜環烷基、伸烯基C3_8雜環烯基、 C2-40伸烯基芳基、C2.40伸烯基雜芳基、c(o)H、c(0)c3_8 磙烷基、c(〇)cl 4()烷基、c(〇)Ci 4G經取代之烷基、 c(o)c3_8雜環烷基、c(〇)Ci4伸烷基c3 8環烷基、C(〇)C14〇 128231.doc -12· 200843778 伸烧基C3·8雜J哀烧基、c(o)方基、c(0)雜芳基、c(〇)伸烧 基芳基、c(o)伸烷基雜芳基、c(0)c3-8環烯基、C(0)C2_^ 稀基' c(o)C2·4。經取代之烯基、0(0)(：：38雜環烯基、 c(o)c2-4G伸烯基c3-8環烷基、C(0)C2 4G伸烯基c^環烯 基、c(o)c2-4G伸烯基c3-8雜環烷基、C(0)C2 4G伸烯基c3 8 雜環烯基、C(〇)C2_4Q伸烯基芳基、C(0)C2·4◦伸浠基雜芳 基、C(0)NRaRb、C(0)0Ra或 C(〇)SRa。 在式I化合物之另一涵蓋類型之實施例中，R3、&、 Rs、R6及R7均為氫，且Rl&R2各自獨立地選自氫及胺基酸 衍生物，其中rjr2不能同時為氯。在-該類型之實施例 中，該胺基酸衍生物為經由酯鍵連接之式j化合物之一部 分。在特定實施财，絲酸衍生物為單一胺基酸，而在 其他實施例中，胺基酸衍生物為經由醯胺鍵或g旨鍵或兩者 共價鍵聯在一起之2種、3種、4種或更多種胺基酸。舉例 而言，在特定涵蓋之實施例中，&為氫且R2包含丙胺酸、 類胺酸或包含麩胺酸及丙胺酸之二肽。在其他特定實施例 中’ Ri與R2均包含纈胺酸。 在式1化合物之另一涵蓋類型之實施例中，Rl、R2、 R4、r5、m7均為氫，且以胺基酸衍生物。在一該類 型之實施射，胺基酸衍生物為單_胺基酸，而在其他實 &例中’胺基酸衍生物為經由酿胺鍵或醋鍵或兩者共價鍵 聯在-起之2種、3種、4種或更多種胺基酸。 在式I化合物之上述較佳實施例中之各者中，尺3及…獨 立地為氫、心環院基〜燒基、Ci_4〇經取代之烧基、 128231.doc 200843778 C3_8雜環烷基、c〗-4。伸烷基Cw環烷基、Ci,伸烷基Cw雜 環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳基、伸烷基雜芳基、 C3-8環烯基、C2-4〇烯基、（^.經取代之烯基、C3·8雜環烯 基、Cwo伸烯基C3_8環燒基、C2-4G伸烯基c3_0t稀基、 伸烯基Cw雜環烷基、C2·4^伸稀基C3·8雜環烯基、Q⑽伸烯 基芳基、c2-4()伸烯基雜芳基、C(0)H、C(0)C3 8環烷基、

CCCOCi.40烷基、（：（0)(^-40經取代之烷基、C(〇)Cw雜環烷 基、0(0)6-40伸烷基(：3.8環烷基、c(0)Ci 4G伸烷基雜 環烷基、c(o)芳基、c(0)雜芳基、c(〇)伸烷基芳基、c(〇) 伸烷基雜芳基、c(o)c3-8環烯基、C(0)C2-4G烯基、c(〇)C2M f取代之浠基、C(0)C3_8雜環烯基、C(0)C2,伸烯基C3_8 環烷基、c(o)c2_4。伸烯基(：3-8環烯基、c(〇)C24G伸烯基。^ 雜環烷基、C(0)C2-4〇伸烯基C：3·8雜環烯基、聚乙二醇、 C(〇)C2_4G伸烯基芳基或烯基雜芳基。 並且，在式I化合物之上述較佳實施例中之各者中，y 與!^-起為侧氧基，或r及Rd獨立地為氫、〜環烧基、

Gw烷基、（^七經取代之烷基、C3·8雜環烷基、Ci 4G伸烷 基C3_8環烷基、Cl_4G伸烷基C38雜環烷基、芳基 '雜芳基、 伸烧基芳基、伸烧基雜芳基' c3_8環烯基、^烯基、^ 經取代之烯基、c3.8雜環烯基、c2_4G伸烯基〜環烧基、 伸烯基C：3·8環烯基、C24G伸烯基C3·8雜環烷基、伸 稀基C3.8雜環浠基、c2.4G㈣基芳基、c⑽伸烯基雜芳 基、C(0)H、c⑼c3_8我基、c(0)Ci 4〇院基、c⑼Ci4〇 經取代之雜㈣基、c(0)Ci4。伸烧基c" 12g231.doc -14 - 200843778 環烷基、¢:(0)(^4伸烷基c3-8雜環烷基、C(〇)芳基、c(〇) 雜芳基、C(〇)伸烷基芳基、c(0)伸烷基雜芳基、c(〇)Cw 環烯基、C(0)C2-4()烯基、C(0)C2 4。經取代之烯基、 c(o)c3-8雜環烯基、C(0)C24()伸烯基c3-8環烷基、c(〇)c24 伸烯基C3-8環烯基、C(0)C2 4G伸烯基雜環烷基、 C(0)C2-4〇伸烯基C：3-8雜環烯基、伸烯基芳基或 C(O)C2-40伸婦基雜芳基。 本發明亦係關於提供一種用於治療患有對四氫生物嗓呤 治療起反應之病狀之個體的組合物。該等組合物通常可包 括式I化合物之上述較佳實施例中之任一者且視情況包括 用於其之醫藥學上可接受之諸如稀釋劑或載劑之賦形劑。 本發明之另一態樣提供一種藉由投與上述組合物中之任 一者治療患有BH4反應性病狀之個體的方法。該方法包括 向個體投與治療有效量之式I化合物。BH4反應性病狀通常 包括對BH4或其竹生物敏感之病狀。BH4反應性病狀包括 糖尿病相關血管併發症，包括（但不限於）一般血管功能病 症（異常血管順應性、内皮細胞功能障礙及高血壓）；頌固 性高血壓；胰島素敏感性/葡萄糖控制病症；異常周邊灌 流（間歇性跋行、降低之周邊灌流、降低之皮膚血流量及 不良創傷癒合）；心臟病（充血性心臟衰竭、伴有或無充血 性心臟哀竭之肺動脈高壓、運動相關絞痛、冠狀動脈疾 病、相關動脈粥樣硬化）’眼病（視神經萎縮、糖尿病性視 網膜疾病）；及腎病（糖尿病性腎病中之微量白蛋白尿、腎 衰竭、降低之腎小球濾過率）。 12B231.doc -15- 200843778 BH4反應性病狀亦包括選自 下疾病組成之群的非糖 尿病相關血管疾病：肺部血管疾病、溶血性貧血、中風及 相關缺血性血營疾；忘『接如由 s疾扃（4如中風、心臟或冠狀動脈疾病、 動脈硬化或周邊血管疾病）、血栓症、移植相關内皮細胞 功能障礙及心臟或冠狀動脈疾病。在—實施例中，肺部血 管疾病包括（但不限於）鐮狀細胞貧血及其他血紅蛋白病中 之肺部張力、特發性肺動脈高壓、新生兒持續性肺動脈高

壓（PPHN)。在另-實施例中，溶血性貧血包括遺傳性溶血 性貧A及後天溶血性貧血。遺傳性溶錄貧血包括（但不 限於）鐮狀細胞貧血、地中海貧血、因G6pD缺失或與溶血 作用相關之溶血性貧血、丙酮酸激酶缺乏症、遺傳性擴圓 形紅細胞增多症、遺傳性球形紅細胞增多症、遺傳性口形 紅細胞增多症、遺傳性卵形紅細胞增多症、陣發性睡眠性 血紅蛋白尿及血紅蛋白SC疾病。後天溶血性貧血包括㈠旦 不限於）微血管病性溶血性貧血、特發性自身免疫性溶血 性貝血、由化學或物理試劑或裝置（左心室辅助裝置、人 工心瓣膜及繞道手術裝置）引起之非免疫性溶血性貧血及 繼發性免疫性溶血性貧血。 在另一實施例中，中風及相關缺血性血管疾病包括（但 不限於）血管痙攣，諸如中風後腦血管痙攣。血栓症包括 (但不限於）血塊形成、血栓形成、凝結及凝血。在另一實 施例中，移植相關内皮細胞功能障礙包括（但不限於）實體 器官移植後之血管功能障礙及環孢黴素（Cycl〇sp〇rine)A誘 發之内皮細胞功能障礙。在另一實施例中，心臟或冠狀動 128231.doc -16- 200843778 脈疾病包括（但不限於）充錄心臟衰竭、與高膽固醇血症 相關之血管功能障礙及絞痛及與吸煙相關之血管功能障礙 及絞痛。 本發明之其他特徵可由以下實施方式之評述且結合隨附 申請專利範圍對一般技術者顯而易見。 【實施方式】

經口投與之四氫生物喋呤展現不良生物可用性，其原因 在於藥物進人血流之量時常不能產生有效治療或需要投與 較大劑量之化合物以達成顯著之臨床效益。此外，雖然血 腦屏障通常對於小分子可滲透，但（例如）其為四氫生物嗓 呤吸收之天然屏p章。本發明解決經口投與四A生物喋吟之 不良生物可用性及難以向身體與CNS提供有效量之四氫生 物嗓吟以提供對於對四氫生物4呤起反應之病狀之治療的 問題。 本發明大體上係關於四氫生物^ η令類似#、+有其之醫 藥組合物及藉由投與_似物治療患 嗓起 反應之病狀之個體的方法，所有以上者更詳細j = 下。 别藥可能尤其有用，因為ΒΗ4袁1 士夕丄， U馮具有多重作用之天然產 物’因此難以產生不僅需要呈右令 ^丨里而罟具有改良生物可用特性且亦必 須保持與多種細胞標乾作用能七 犯邗用此力之類似物。避免類似物之 抑制作用或意外的毒性作用可接用白 丨f用J 1更用自月腸道進入血流之後 轉化為天然化合物之前藥達成。 術語 128231.doc -17- 200843778 如本文中所使用之術語”生物可用性"係指投與劑量之藥 物進入全身循環之部分。若該藥物為靜脈内投與，則其生 物可用性理論上應為100%。然而，若該藥物經由其他途 徑（諸如經口）投與，則其生物可用性由於（例如）GI道中不 完全吸收、吸收之前降解或代謝及/或肝臟初次通過效應 而通常應小於100%。

如本文中所使用之術語"烧基，，係指直鏈及支鏈烴基，其 非限制性實例包括甲基、乙基及直鏈及支鏈丙基及丁基。 術浯烷基”包括”橋接烷基"，亦即雙環或多環烴基，例如 降艸伯基、金剛烷基、雙環[2·2·2]辛基、雙環[221]庚 基、雙ί哀[3 ·2·1]辛基或十氫萘基。烷基視情況可經（例如） ^基（ΟΗ)、函基 '芳基、雜芳基、環烷基、雜環烧基及胺 基取代。特別涵蓋在本文中如式述之類似物中（包括本 文中所述之其任何較佳子集），燒基係由1-40個碳原子，較 佳1-25個碳原子，較佳Κ15個碳原子，較佳卜^個碳原 子’較佳1-10個碳原子，較佳1-8個碳原子及較佳w個碳 原子組成。 本文中所使用之術語"環烧基”係指環烴基，例如環丙 基、％ 丁基、環己基及環戊基。"雜環烷基，，係類似於環烷 基疋義，其例外為該環含有丨至3個獨立地選自由氧、氮及 、、且成之群之雜原子。雜環烷基之非限制性實例包括哌啶 四氫夫南基、四氫哌喃基、二氫呋喃基及其類似基 團％烷基及雜環烷基可為視情況經以下基團取代之飽和 或部分不飽和環系統：例如丨至3個獨立地選自由烷基、伸 128231.doc -18- 200843778 烷基OH、C(0)NH2、NH2、侧氧基（=〇)、芳基、_烧基、 鹵基及OH組成之群之基團。雜環烷基視情況可另外經烧 基、羥基烷基、伸烷基芳基或伸烷基雜芳基”取代。 如本文中所使用之術語"烯基"係與”烷基，，同樣定義，其 例外為該基團含有至少1個碳-碳雙鍵。 如本文中所使用之術語”伸烷基”係指具有取代基之燒 基。舉例而言，術語"伸烷基雜環烷基"係指經雜環烷基取

代之烷基。伸烷基視情況經一或多個先前作為可選烷基取 代基所列之取代基取代。 如本文中所使用之術語”伸烯基”係與”伸烷基"同樣定 義’其例外為該基團含有至少1個碳_碳雙鍵。 如本文中所使用之術語"芳基”係指單環或多環芳基，較 佳為單環或雙環芳基，例如苯基或萘基。除非另有所述， 否則芳基可未經取代或經一或多個且詳言之丨至4個獨立地 選自以下基團之基團取代：例如_基'烷基、烯基、 0CF3、N02、CN、NC、〇H、烧氧基、胺基、c〇2H、c〇2 二基、芳基及雜芳基。例示性芳基包括(但不限於)苯基、 奈基、四氫萘基、氯苯基、甲基苯基、甲氧基苯基、三氟 甲基苯基、硝基苯基、2,4·甲氧基氯苯基及其類似基團一。 如本文中所使用之術語"雜芳基"係指含有〗或2個芳環且 芳環中含有至Μ個氮、氧或硫原子之單環或雙環系統。 除非另有所述，否則雜芳基可未經取代或經一或多個且詳 言之1至4個選自以下取代基之取代基取代：例如幽基、烷 基、烯基、ocf3、而2、CN、NC、〇Η、烧氧基、胺基、 128231.doc -19- 200843778 CC^H、C〇2烧基、芳基及雜芳基。雜芳基之實例包括（但 不限於）嘆吩基、吱喃基、π比咬基、。惡嗤基、喹琳基、嗟 吩基、異喹琳基、,π朵基、三σ秦基、三u坐基、異嗟唾基、 異噁唑基、咪唑基、苯并嗟唑基、处嗪基、嘧咬基、噻唑 基及嗟二唾基。 如本文中所使用之術語”胺基酸衍生物”係指具有以 ΝΗ2、NHR或NR2形式之胺官能基與羧酸官能基之部分。 胺基酸可為α-胺基酸、β-胺基酸或γ-胺基酸。除非另外規 定，否則本文中所提及之胺基酸結構可為任何可能之立體 異構物，例如D鏡像異構物或l鏡像異構物。胺基酸可為 天然存在之胺基酸，諸如甘胺酸、丙胺酸、β_丙胺酸、白 胺酸、異白脖酸、天冬胺酸、麵胺酸、麩醯胺酸、天冬醯 胺酸、精胺酸、半胱胺酸、曱硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺 酸、色胺酸、組胺酸、離胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸 或顯胺酸之L鏡像異構物。可使用其他胺基酸，諸如甘胺 酸、丙胺酸、β-丙胺酸、白胺酸、異白胺酸、天冬胺酸、 麩fel、麵酸胺酸、天冬胺酸、精胺酸、半胱胺酸、甲 硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、組胺酸、離胺酸、 脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或纈胺酸之D鏡像異構物，或其 他胺基酸，諸如鳥胺酸、經取代之苯丙胺酸（例如4_甲氧基 苯丙胺酸）、吡啶基丙胺酸及其類似物。胺基酸可根據已 知技術合成，或可自例如Sigma_Aldric}l (Miiwaukee，WI) 或 Chem-Impex International，Inc (Wood Dale，IL)之供應商 購得。在各類較佳實施例中，胺基酸衍生物較佳為纈胺 128231.doc -20 - 200843778 酸、丙胺酸、白胺酸或異白胺酸。舉例而言，涵蓋一類實 施例，其中胺基酸衍生物可具有2種或2種以上胺基酸，例 如如以下式I化合物中所示，其中I為γ_〇_麩胺酸_D_丙胺 酸衍生物：

如本文中所使用之術語”聚乙二醇"係指式R〇(CH2CH2)n〇-之化學基團’其中R為烷基且11為1至1〇〇〇之整數，且可為 10至 500、20至 300、25至 250或 30至 200。 如本文中所使用之術語"保護基"係指展現以下特徵之化 學基團：（1)選擇性地與需要保護之所需官能基以優良產率 反應以產生對目標反應穩定的受保護之受質；（2)可自該受 保護之受質選擇性地移除以產生所需官能基；及（3)可以優 良產率由與該等保護反應中所產生之其他官能基相容之試 劑移除。保護基之實例可見於Greene等人，”Pr〇tective

Groups in Organic Synthesis，"第 2版（John Wiley & Sons，

Inc·，New York，1991)中 〇 四氫生物喋呤之前藥 本發明之一態樣係關於四氫生物喋呤之前藥。四氫生物 喋呤之前藥可為式I化合物（如下所示）或其醫藥學上可接受 之鹽，其在各種條件下可經代謝或轉化以提供四氫生物嗓 呤： 128231.doc -21 * 200843778

C-Γ及/或C-2,位置上之修飾

在式I化合物之一較佳實施例中，該化合物僅在C4，與c_ 2*位置中之一者或兩者上經修飾。在該實施例中，I、 R4、R5、R6及R7均為氫，且^^與化2一起為-C(Rc)Rd_且形成 五員環，或1及1獨立地為氫、CM環烷基、Ci 4G烷基、 Cl-4G經取代之烷基、Gw雜環烷基、伸烷基€：3_8環烷 基、4·^伸烷基Cw雜環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳 基、伸烷基雜芳基、Cw環烯基、a·烯基、經取代 之烯基、C3·8雜環烯基、伸烯基〇3_8環烷基、Q⑽伸烯 基C3·8環稀基、伸烯基Cw雜環烷基、C24G伸烯基 雜環烯基、C2_4G伸烯基芳基、C2 4❶伸烯基雜芳基、 C(0)H、C(0)C3_8環烷基、c(〇)Ci_4g烷基、c(〇)Ci 4。經取 代之烷基、C(0)C3_8雜環烷基、c(0)Ci4G伸烷基Cy環烷 基、C^COCm。伸烷基c3-8雜環烷基、c(0)芳基、c(⑺雜芳 基、c(o)伸烷基芳基、c(0)伸烷基雜芳基、c(〇)Cw環烯 基、c(o)c2-4G烯基、C(0)C2，經取代之烯基、c(〇)Cw雜 環晞基、c(o)c2，伸稀紅3 8環烧基、c⑼C2，伸烯基〜 環烯基、C(0)C2·4。伸烯基Cs_8雜環烷基、c(〇)C24G伸烯基 128231.doc -22- 200843778 〜雜環埽基、⑽C2.4。伸烯基芳基、c(〇)C24。伸稀基雜 芳基、c(o)NRaRb、⑽⑽或c_Ra，其限制條件為^ 及r2不同時為氫、c(攀' 葡糖基、胺基葡糖基或相同 ¢:(0)(^.1G 烷基。

Ra及Rb獨立地為氫、c3-8環烷基、Ci 4。烷基、Ci.4。經取 代之烷基、c3.8雜環烷基、。。伸烷基。3 8環烷基、c丨4。伸 烷基C3-8雜環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳基、伸烷基 雜芳基、C3-8環烯基、C2.4〇稀基、〇24〇經取代之烯基、^ 雜環烯基、C2·4。伸烯基b環烧基、c2_4G伸稀基c38環烯 基2 4G伸婦基C3·8雜環烷基、C2.4〇伸浠基cs_8雜環烯基、 C2-4()伸烯基芳基、c2-4()伸烯基雜芳基、c(〇)H、c(〇)c3 8 環烷基、c(o)c丨.4。烷基、c(0)Ci-4G經取代之烷基、 C⑼c3.8雜環燒基、c⑼Ci.4。伸燒基C38環燒基、c⑼·^ 伸烷基C3_8雜環烧基、c(0)芳基、c(0)雜芳基、c(〇)伸12 基芳基、c(o)伸烷基雜芳基、C(0)C3 8環烯基、c(〇)cJ^ 烯基、c(0)c2_4。經取代之烯基、c(〇)c"雜環烯基、 c(0)c2.4。伸烯基c3_8環烧基、c(〇)c2 4。伸烯基心環稀 基、C(O)C2.40㈣基c38雜環烧基、C(〇)C24〇伸稀基 雜環烯基、聚乙二醇、C(0)C2-4〇伸烯基芳基或C⑼c“。伸 烯基雜芳基。 ^與…一起為側氧基，或獨立地為氫、CM環烷 基、Cwo烷基、Ci_4❶經取代之烷基、Cs·8雜環烷基、Cl切 伸烷基C3_8環烷基、Cl，伸烷基^8雜環烷基、芳基、雜芳 基、伸烷基芳基、伸烷基雜芳基、C38環烯基、C2•二 128231.doc -23- 200843778 二=、絲代之烯基、C3 8雜環縣、c⑽伸稀基心環 2·4°伸埽基k環烯基、〜。伸稀基c3-8雜環燒基、 C2:㈣基c3.8雜環稀基、〜。伸烯基芳基、心。伸稀基 雜方基C(〇)H、C(0)C3 8環烧基、c(〇)CM。燒基、 C(〇)Cl，4Gf取代之燒基、C⑼〜雜環㈣、C⑼(:⑷伸 > C(°)Cl-40# ^^C3.8# Jf , C(〇)^ C(0)C3-8 環稀基、c〔0、r 、膝 A nrrwr^ M^)C2-4G烯基、C(0)C2.4G經取代之烯 基、c(o)c3.8雜環烯基、c⑼C24G伸烯基c38環烧基、 C(〇)C2.4G伸烯基C：38環烯基、C(0)C2M伸烯基雜環烷 基、C(_芳基、c(〇)伸燒基芳基、c⑼伸燒基雜芳基、

基、c(o)C2_4〇伸烯基C：3 8雜環烯基、C(〇)C2_4〇伸烯基芳基 或C(0)C2_4G伸烯基雜芳基。 如本文中所揭示，涵蓋BH4之酯及二酯為類似物且可為 前藥。一級及二級醇易於由諸如酸氯化物（例如乙醯基氣） 及酸酐之多種化學試劑轉化為酯。酸氯化物（例如乙醯基 氯）可與醇部分在除酸劑（例如三乙基胺）存在下反應以形成 相應目曰及鹽酸D類似地，酸針（例如乙酸酐）可與醇部分反 應以形成相應酯及乙酸。與酸酐反應通常較柔和，因為副 產物為相應有機酸（例如對於乙酸酐而言為乙酸），與無機 酸（例如對於乙醯基氯而言為鹽酸）形成對比。參見（例 如）Harden 等人（1989)J. Med. Chem· 32:1738-43。涵蓋四氫 生物嗓呤（二醇）亦可由此等化學試劑轉化。此等反應對於 醇應具有超過相對於胺之選擇性，以使四氫生物嗓呤上之 胺部分不被不適宜地修飾。 128231.doc -24 - 200843778 C-Γ與C-2*位置中之一者或兩者上之修飾可以多種方法 實現。舉例而言，可將四氫生物喋呤（下文中亦稱為 ΠΒΗ4”）溶解於諸如咄啶或三乙基胺之鹼捕獲溶劑中。所溶 解之ΒΗ4可與莫耳過量之酸酐反應以形成ΒΗ4之單g旨，且 繼續反應完成使得c= Γ與c_2，位置上之羥基均轉化而得到 二醋前藥。如下所示之反應流程⑴為適合於修飾^，與c_ 2位置中之一者或兩者之合成的代表性描述： R C(〇)2〇 二甲基胺基吡啶 ch2ci2

h2n^n^n^7 0H Η 5, 6, 7, 8-四氫-L-生物嗓呤 反應流程（I)。 替代性合成可包括使用保護基保護C-2、N-3、N-5及N-8 位置上具有潛在反應性之胺。 如所揭示作為類似物涵蓋的BH4之酯及二酯可衍生自胺 基酸’例如BH4之1，，2，-二醇亦可轉化為胺基酸酯。阿昔洛 羊（acyclovir)之醇轉化為l-纈胺酸胺基酸酯，從而使得生 物可用性顯著增加，其係歸因於經由人類腸肽轉運之 hPEPTl穿過腸之主動轉運。其他胺基酸亦可有效。副產 物呈生物學良性。胺基酸（AA)衍生物之實例可如反應流程 (ΙΑ)、（IA’）及（IB)中概述製備。反應流程（IA)展示製備BH4 之胺基酸類似物之方法，其中該胺基酸係位於Ci，、C2,或 兩者位置上。反應流程（IA，）展示特定替代性實例，其涉及 使用4N HC1/二噁烷直接使二氺0(：亞胺去保護以得到最終 產物。反應流程（IB)展示製備BH4之肽基衍生物之方法， 12823I.doc -25- 200843778 其中Cl’、C2’或兩者均經二肽、三肽或四肽部分修飾。亦 可使用類似合成方法進行較長肽修飾。區別保護之胺基酸 衍生物可經由已知合成技術或經由諸如Sigma-Aldrich (Milwaukee，WI)或 Chem Impex (Wood Dale，IL)之市售來 源獲得。 (Boc)?0 或 Cbz-C! 0比咬，rt

N,N-二曱基曱醯胺 二乙醇縮乙醛，DMF.rt R= Z 或 Boc 孤

HoN N N 2 Η 2HCI

R = H或CO-AA-NBoc R = Η 或 CO-AA-NH2

反應流程（ΙΑ) 128231.doc -26- 200843778

1) Βο〇2〇, DMAP, 吡咬_^ 2) MP-破酸酯> MeOH

BH-4 DMF/DEA DMF, 2 hr

2

Boc-L-Val l DCC, DCM, , rt, ovn

O Boc OH

反應流程（IAf) 128231.doc 27· 200843778

反應流程（IB) 環縮酮及縮醛可藉由使二醇分別與酮及醛反應來形成。 參見（例如），Harden 等人（1989) Λ Mei Chem. 32:1738-43 ; Song 等人（2005)义 Med C/zem. 48:1274-77 〇 環縮酮及 縮醛可在活體内以水解方式或酶促方式代謝還原成二醇。 形成ΒΗ4之縮醛類似物之修飾（其中1與R2—起為-C(Re)Rd-且形成五員環）可如反應流程（II)中所闡明，如下所示，藉 由使BH4之l’，2f-二醇與醛（例如Ν，Ν·二曱基甲醯胺（DMF)) 在2,2-二甲氧基丙烷及單水合對甲苯磺酸（pTSA)存在下反 128231.doc -28 - 200843778 應以形成BH4之縮醛類似物來達成：

形成B Η 4之縮酮類似物之修飾（其中R i與I 一起為 -C(Re)Rd-且形成五員環）可如反應流程（ΙΠ)中所闡明，如下 所示，藉由使ΒΗ4之1，，2，-二醇與酮在催化劑存在下反應來 達成：

反應流程（III)。 N-5及/或N-8位置上之修飾 在式I化合物之另一較佳實施例中，該化合物僅在N巧 N-8位置中之一者或兩者上經修飾。在該實施例中，& 、R5、R6及R7均為氫；且心及以獨立地為氫、^8環 基、C2,烷基、Cl,經取代之烷基、Cw雜環烷基、Ci 伸烧基c3_8環燒基、Ci 4Q輕基〜雜環烧基、芳基、雜 基、伸烷基芳&、伸烷基雜芳基、c"環烯基、一。 基、C2，經取代之烯基、〜雜環烯基、c2,伸稀基c3 8 … 4G伸烯基C3·8^烯基、C2_4()伸烯基(：3-8雜環烷基 C 2 - 4 0 C ^ tsl L3C_ ^ 8雜％烯基、C2-㈣伸烯基芳基、C2_4G伸烯 12823 Ldoc -29- 200843778 雜芳基、C⑼H、C(0)C3.8環烧基、c(〇)Ci4Q烧基、 C(〇)Cl-4。經取代之烧基、c(〇)c3_8雜環烷基、c(〇)Ci 4〇伸 烷基cw環烷基、c(0)Cl_4〇伸烷基CM雜環烷基、c(〇)芳 基、c(0)雜芳基、c(0)伸烧基芳基、c(〇) c(o)c3-8環稀基、c(〇)c2-4()烯基、C(0)C24G經取代之烯 基、c(o)C3-8雜環烯基、c(0)c2•切伸烯基c38環烷基、 C(0)C2·4。伸稀基C3·8環稀基、C(0)C2_4G伸烯基c3-8雜環烷 基、C(O)C2-40伸稀基C3-8雜環婦基、C(〇)C2 4Q伸烯基芳 基、C(0)C2_4〇 伸細基雜方基、C(0)]SiRaRb、c(0)0Ra 或 C(0)SRa，其限制條件為若R3為氫，則汉4不為氫或核糖， 且若R4為氫’則R3不為氣、C(0)H、乙酸根、經基甲基或 胺基烷基。在一類實施例中，Rh為胺基酸衍生物。 N-5與N· 8位置中之一者或兩者上之修飾可以多種方法實 現。舉例而言，BH4之醯胺（或二-醯胺）類似物可藉由以莫 耳過量之諸如第三丁基二甲基矽烷基氣化物（TBDMSC1)的 合適醇保護基在咪唑存在下處理BH4以保護反應性二醇位 置來獲得。此後，可使經保護之BH4與鹼反應繼而與酸氣 化物反應以產生經保護之N-5及/或N-8中間物。此等反應 之後，將中間物上之二醇位置藉由以合適去保護劑（例如 在TBDMSC1之情況下為四-正丁基氟化銨（TBAF))處理中間 物來去保護以產生BH4之醯胺類似物。該合成通常按照如 下所示之反應流程（IV): 128231.doc -30- 200843778

O OTBDMS 0^RΝΗ*:Λ™ ΙΗ； Η;ώ:Λ Ο人R Ν-5, Ν-8二醯基-6, 7-二氫生物喋呤 反應流程（IV)。 在另一實施例中，ΒΗ4之胺甲醯基（或二-胺甲醯基）類似 物可藉由以莫耳過量之諸如TBDMSC1的醇保護基在咪唑存 在下處理ΒΗ4以保護反應性二醇位置來獲得。此後，可使 經保護之ΒΗ4與鹼反應繼而與氯甲酸酯（例如氯甲酸丁醯 酯）反應。此等反應之後，將中間物上之二醇位置（例如）藉 由以TBAF處理該中間物來去保護以產生ΒΗ4之二-醯胺類 似物。該合成通常按照如下所示之反應流程（V): Ο ΟΗ η2ν人工自工δΗ 5, 6, 7, 8-四氫-L-生物嗓呤 反應流程（V)。 在另一類實施例中，式I化合物在N-5位置上經胺基酸或 肽基部分修飾。該等衍生物可根據以下反應流程（VI)製 備。 Ο OHΗ；0φ^ 5, 6, 7, 8-四氩-L-生物嗓吟 TBDMSC1 咪嗤~ 〇^〇2

2HCI 反應流程（VI)。 C-2位置上之修飾 在式I化合物之另一較佳實施例中，該化合物僅在C-2位 置上經修飾。在該實施例中，Ri、R2、R3、R4及R5均為 128231.doc -31- 200843778 氫；且I及I獨立地為氫、C3·8環烷基、Ci,烷基、 一 1^4-0

、、二取代之烷基、Cw雜環烷基、伸烷基Ch環烷基、 Ci-4〇伸烷基C34雜環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳基、 伸烷基雜芳基、CW裏烯基、一。烯基、C24。經取代之烯 基、C3_8雜環烯基、C24Q伸烯基環烷基、伸烯基 C3-8%烯基、cVw伸烯基q·8雜環烷基、伸烯基雜 %烯基、C2_4〇伸烯基芳基、（^⑽伸烯基雜芳基、c(〇)h、 c(〇)c3.8環烧基、⑽Ci,燒基、c⑼^，經取代之燒 基、c(o)c3.8雜環烷基、c(〇)Ci4Q伸烷基環烷基、 qCOCHo伸烷基c3-8雜環烷基、c(〇)芳基、c(⑺雜芳基、 c(0)伸烧基芳基、c⑼伸烧基㈣基、c(〇)c^環稀基、 c(0)c2.4G職、經取代之烯基、c(Q)Gw雜環稀 基、C(〇)C2·40伸烯基C3-8環烷基、C(0)C2·4。伸烯基c3-8環烯 基、c(o)c2-4G伸烯基（^8雜環烷基、c(〇)c2·⑽伸烯基雜 锿烯基、c(o)C2-4G伸烯基芳基、c(〇)C2⑽伸烯基雜芳基、 C(0)NR R 、C(〇)〇Ra或C(〇)SRa，其限制條件為若R6為 氫，則 R7 不為氳、甲基、CH2(CH2)4C〇2H4CH2CH2i 基’且若R7為氫，則尺6不為氫。 C-2上之修飾可經由多種典型有機化學技術進行，該等 技術包括SBH4二醇部分之保護基操作，隨後使用已知反 應（例如）將胺轉化為醯胺、使胺烷基化、使胺芳基化及其 類似轉化來修飾C-2上之NH2基團。經保護之二醇部分可視 情況隨後去保護以提供僅在c_2位置上經修飾之bh4類似 物0 I28231.doc -32- 200843778 N-3位置上之修飾 在式i化合物之另一較佳實施例中’該化合物僅在1^3位 置^經修飾。在該實施例中，R]、R2、&、&、心及心均 為氫，且Rs為Cl8環烷基、q·4。燒基、Ci·4。經取代之烷 基、C3-8雜環烧基、Cl_4G伸烧基C3·8環烧基、Ci4d申燒基 〜雜環烧基、芳基、雜芳基、伸燒基芳基、伸烧基雜芳 基、C3_8環烯基、c2，烯基、C2，經取代之烯基、C"雜環 稀基、C2_4Q伸烯基c3.8環烧基、C24。伸浠基一環稀基、

C2了伸烯基q·8雜環烷基、c：2·4。伸烯基C38雜環烯基、C2M 伸烯基芳基、（：2·4〇伸烯基雜芳基、c(〇)H、c(〇)C3 8環烷 基、C(〇)Cl.4G烧基、C(〇)Ci_4。經取代之烧基、c(〇)c3 8雜 環燒基、C(o)Cl-40伸院基C3.8環燒基、c(〇)c⑷伸燒基k 雜環烧基、c(o)芳基、c(〇m芳基、c⑼伸烧基芳基、 c(0)伸烷基雜芳基、C⑼。3.8環烯基、C(0)C2 4。烯基、 C(〇)C2.4()經取代之稀基、⑽c環縣、❶伸 烯基〇：3-8環烷基、C(0)C2_4G伸烯基c38環烯基、c(〇)C2〜 伸烯基C3_8雜環烷基、C(0)C2·4。伸烯基C38雜環烯基、0 C(〇)C2-4〇伸烯基芳基' C(0)C2 4〇伸烯基雜芳基、 C(0)NRaRb、C(0)0Ra或 C(0)SRa。 在式Ϊ化合物之上述較佳實施例中之各者中， 立地為氫、c3-8環烷基、Cl_4。烷基' Ci 4。經取代之烷基' =-8雜環烧基、Cl.4。伸燒基C38環燒基、％伸⑨基雜 環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳基、伸烷基雜芳基、 C3.8環烯基、c2.40婦基、C2_4〇經取代之烯基、〜雜環埽 128231.doc -33 - 200843778

基、C2-4G伸細基[3-8¾烧基、C2-4G伸炸基C3-8環稀基、C2-4O 伸烯基c3_8雜環烷基、C2-4G伸烯基c3_8雜環烯基、C2_4G伸烯 基芳基、C2_4G伸烯基雜芳基、C(0)H、C(0)C3.8環烷基、 CCCOCwo烷基、CCCOCu經取代之烷基、c(o)c3_8雜環烷 基、CXCOCwo伸烷基C3_8環烷基、qCOCwo伸烷基c3_8雜 環烷基、c(o)芳基、c(o)雜芳基、c(o)伸烷基芳基、c(o) 伸烷基雜芳基、c(o)c3_8環烯基、c(o)c2.4()烯基、C(O)C2_40 經取代之烯基、C(0)C3-8雜環烯基、c(o)c2.4G伸烯基c3_8 環烷基、c(o)c2_4G伸烯基c3_8環烯基、c(o)c2_4G伸烯基c3.8 雜環烷基、c(o)c2_4{)伸烯基C3-8雜環烯基、聚乙二醇、 c(o)c2_4〇伸烯基芳基或c(o)c2_4G伸烯基雜芳基。 N-3位置上之修飾可經由多種典型有機化學技術進行， 該等技術包括前對BH4二醇部分之保護基操作，隨後使用 已知反應（例如）將胺轉化為醯胺、使胺烷基化、使胺芳基 化及其類似轉化來修飾胺。 BH4之醯基衍生物 亦涵蓋BH4在cr、C2’及N5上之修飾以提供三醯基衍生 物。該等化合物可如以下反應流程（VII)中所概述製備。

反應流程（VII)。 評估四氫生物嗓呤類似物之方法 128231.doc -34- 200843778 本文中所揭示之四氫生物喋呤類似物可以多種方法評 估。舉例而言，可對此等類似物之代謝穩定性進行評估。 藥物代謝係經由肝内兩種主要酶反應達成。丨相酶包括位 於平滑内質網中之細胞色素450(CYP)酶家族。1相反應包 括氧化、還原及/或水解，其中許多反應係由CYp_介導且 而要NADPH作為辅因子。反應係位於細胞質及内質網 中且涉及（諸如）與葡糖醛酸、谷胱甘肽、硫酸鹽及麩醯胺 酸之共輛作用。II相反應可使藥物滅活且/或使該藥物分子 由身體更好地清除。藥物可經j相或π相反應或兩者代謝。 測定測試化合物之代謝穩定性以評估該化合物在丨相代謝 期間產生潛在毒性或藥理學上無活性代謝物或由於不足之 代謝降解而積累之能力。肝微粒體為含有包括CYp之許多 種藥物代謝酶之亞細胞部分（内質網）。肝微粒體通常用作 活體外模型系統來評估測試化合物之代謝結果。代謝穩定 性之其他態樣可與四氫生物喋呤或衍生物之氧化作用有 關。四氫生物喋呤對可在哺乳動物身體條件下根據溫度及 氧化還原電位經由代謝作用或經由物理作用進行之氧化作 用敏感。此外，可測試該類似物之經由酯酶及其他可裂解 該類似物且可存在於組織以及血流中之酶的代謝。 亦可評估此等類似物之水溶性以及親油性。水溶性為備 選藥物之生物可用性及有效性的重要決定因子。濁度測定 法（光散射）是一種迅速測定許多主導化合物之表觀溶解性 的已接叉技術。親油性可使用辛醇··水分配係數作為膜模 型來測定。辛醇：水分配係數亦可使用電腦計算之碎片法 128231.doc -35- 200843778 估算。據認為約為2之分配係數的對數（log P)代表膜滲透 之最佳log P。舉例而言，水解某些醇之纈胺酸酯的類聯苯 羥化酶蛋白已自來源於人類腸之CaCO-2細胞鑑別。 (Amidon等人，J. Biol. Chem. 2003，273，25348-25356) 〇 此外，可評估此等類似物之膜滲透率。CaCO-2細胞通 常用以評估膜滲透率，且進而評估潛在的經口生物可用 性。CaCO-2細胞係來源於人類結腸癌細胞株且通常生長 於置於擴散室中之緊密單層或多孔膜過濾器中。膜滲透率 係基於接受區中出現測試化合物之速率量測。單層之頂端 (供體）表面由微絨毛組成且因此保持腸刷狀緣之特徵。此 外，該等細胞亦可表現功能性轉運蛋白及代謝酶（Imii等 人，J. Pharmacol. Exp. Ther. 261:195-201 (1992) ; Lu等 人，Pharm. Res. 11 :S-258 (1994) ; Jorge 等人，Pharm· Res· 8:1441-1443 (1991))。據認為使用CaCO-2細胞進行活 體外評估可預測人類體内之胃腸吸收（Stewart等人， Pharm· Res· 12:693-699 (1995))。亦已確定來源於人類腸 之CaCO-2細胞表現多種可在通過腸膜期間自前藥釋放母 體藥物之酿酶（Imai 等人，Drug Metabolism and Disposition 2005，33，1 185-1 190 ; Miyazaki 等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2004，48，2604-2609) o 另外，可評估此等類似物之腸滲透率。評估意欲經口投 與之化合物的腸滲透率在選擇備選者進行市售藥物開發中 起重要作用。按吸收電位次序對一系列主導化合物進行排 列有助於化合物選擇及優化。目前已接受之研究一系列化 128231.doc -36- 200843778 合物之吸收電位的方法係藉由比較穿過CaCO-2或MDCK單 層培養物之表觀滲透率（Artusson&Borchardt，Pharm.Res. 1997，14，1655-1657)。此等吸收模型亦適用於瞭解與進一 步進展研發之化合物相關之任何吸收問題，包括涉及主動 轉運機制之問題。 可另外使用諸如大鼠或犬之動物模型來評估類似物之生 物可用性及BH4轉化率。在此等情況中，將經口投與之藥 物與靜脈内提供之藥物比較，且相對於藥物濃度分析兩種 途徑之藥物代謝動力學。可分析所研究組織（包括肝、心 臟、jk管系統及腦）之四氫生物嗓呤之組織含量，且與投 與類似物及天然形式之後達成之濃度相比較。 含有式I化合物之組合物 本發明之另一態樣係關於一種包括本發明之化合物以及 用於其之醫藥學上可接受之諸如稀釋劑或載劑之賦形劑的 醫藥組合物。適用於本發明之化合物及醫藥組合物包括其 中該化合物可以有效量投與以達成其所欲目的之化合物及 醫藥組合物。投與化合物在下文中進行更詳細描述。 合適醫藥調配物可由熟習此項技術者視投藥途徑及所需 劑量進行確定。參見（例如）Remington’s Pharmaceutical Sciences，1435-712(第 18版，Mack Publishing Co，Easton， Pennsylvania，1990)。調配物可影響所投與藥劑之物理狀 態、穩定性、活體内釋放速率及活體内清除速率。視投藥 途徑而定，合適劑量可根據體重、體表面積或器官大小計 算。確定適當治療劑量所必需之計算之進一步改進通常由 128231.doc -37- 200843778 一般技術者在不進行過多實驗之情況下作出，尤其根據本 文中所揭示之劑量資訊及檢定以及可經由動物或人類臨床 試驗獲得之藥物代謝動力學數據。 短語"醫藥學上可接受”或"藥理學上可接受"係指當向動 物或人類投與時不產生不利、過敏性或其他不良反應之分 子實體及組合物。本文中所使用之"醫藥學上可接受之載 劑"包括任何及所有溶劑、分散介質、塗料、抗細菌劑及 抗真菌劑、等渗劑及吸收延遲劑及其類似物。用於醫藥學 活性物質之該等賦形劑之使用係此項技術中所熟知。除非 任何習知"貝或藥劑與治療組合物不相容，否則涵蓋其在 治療組合物中之用途。補充活性成份亦可併入該等組合物 在例:T f生實知例中，該調配物可包含玉米糖褒固形 物、高油酸紅花子油、椰子油、大豆油、L-白胺酸、磷酸 三約Ή胺酸、L脯胺酸、L•離胺酸乙酸鹽、 驗腿（乳化劑）、L省酿胺酸、l肩胺酸、相氫二卸、 冬醯胺I、L-絲胺酸、檸檬酸 产 文鉀、L-穌胺酸、檸檬酸鈉、 二、L-組胺酸、。甲硫胺酸、抗壞血酸、碳_、l· 麩胺酸、L-胱胺酸二鹽酸鹽、 化膽驗、牛谱酸、門肌冑* w、L•天冬胺酸、氯 丨-日夂 間肌醇、石奋βL 一 技缺冰 後酉夂亞鐵、抗壞血酸基棕櫚酸 酉曰ϋ辞、L·肉鹼、α•生育 产 胺、混合生古酪、 文®日、氯化鈉、菸鹼醯 4夸4二—/ I鈣、硫酸銅、氯化硫胺鹽酸鹽、維 生素Α棕櫊酸酯、硫酸錳 ^ β ^ κ素、吡哆醇鹽酸鹽、葉 酉文、β-胡蘿fc素、碘化鉀、葦 業、、杂I '生物素、硒酸鈉、氯 128231.doc -38- 200843778 化鉻、錮酸鈉、維生素D3及氰鈷胺素。補充物中之胺基 酸、礦物質聽生素應以提供每—種峰之減日劑量之 量提供。

本文中所使用之"醫藥學上可接受之載劑"包括任何及所 有命劑、分散介質、塗料、抗細菌劑及抗真菌齊丨、等滲劑 及吸收延遲劑及其類似物。用於醫藥活性物質之該等賦形 劑之使用係此項技術中所熟知。除非任何習知介質或藥劑 與活性成份不相容’否則涵蓋其在治療組合物中之用途。 補充活性成份亦可併入該等組合物中。 本文中所使用之，，醫藥學上可接受之鹽，，包括（例如）驗加 成鹽及酸加成鹽。 醫藥學上可接受之鹼加成鹽可以諸如鹼金屬及鹼土金屬 或有機胺的金屬或胺形成。化合物之醫藥學上可接受之睡 亦可以醫藥學上可接受之陽離子製備。合輕藥學上可^ 受之陽離子為熟習此項技術者熟知’ i包括鹼金屬、鹼土 金屬、銨及四級銨陽離子。亦可能為碳酸鹽或碳酸氫鹽。 用作陽離子之金屬之實例為鈉、冑、鎂、銨、鈣或鐵及盆 類似物。合適胺之實例包括異丙基胺、三甲基胺、組胺 酸、N，N’·二苯甲基乙二胺、氯普魯卡因⑽。哪。—㈣、 膽鹼、二乙醇胺、二環己基胺、乙二胺、n_甲基葡糖胺及 普魯卡因（procaine)。 醫藥學上可接受之酸加成鹽包括無機或有機酸鹽。合適 酸式鹽之實例包括鹽酸鹽、乙酸鹽、擰檬酸鹽、水揚酸 鹽、确酸鹽、射鹽。其他合適醫藥學上可接受之鹽為熟 128231.doc •39- 200843778 習此項技術者所熟知且包括（例如）乙酸、檸檬酸、草酸、 酒石酸或扁桃酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸或磷酸之鹽；與有 機魏酸、續酸（sulfonic acid)、石黃酸（sulfo acid)或膦酸或N 取代胺磺酸，例如乙酸、三氟乙酸（TFA)、丙酸、乙醇 酸、琥珀酸、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、甲基順丁烯 二酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、乳酸、草酸、葡糖 酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁 桃酸、水揚酸、4-胺基水楊酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙醯

氧基苯甲酸、恩波酸（embonic acid)、於驗酸或異於酸之 鹽；及與胺基酸之鹽，該等胺基酸諸如合成天然蛋白質過 程中所涉及之20種α胺基酸，例如麵胺酸酸或天冬胺酸， 以及與苯基乙酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、2-羥基乙烷磺 酸、乙烷1，2-二磺酸、苯磺酸、4_甲基苯磺酸、萘2_磺 酸、奈1，5-二續酸之鹽、2_磷酸甘油酸鹽或3·磷酸甘油酸 鹽、葡糖-6-磷酸鹽、Ν•環己基胺磺酸（形成環己基胺磺酸 鹽）’或與諸如抗壞血酸之其他酸有機化合物之鹽。 類似物與無機或有機酸之鹽為較佳。替代性類似物鹽开多 式之非限·$Π生實例包括類似物之乙酸鹽、檸檬酸鹽、草酸 鹽、酒石酸鹽、反丁烯二酸鹽及扁桃酸鹽。然、#，用於本 文所述之組合物中之_物調配為二鹽酸鹽甚至更佳。 “含有本發明之類似物的醫藥組合物可以習知方式(例如) 1w α ’合解、造粒、製成糖衣藥丸、水磨、乳 =囊封、覆埋或;東乾方法製造。適當調配物取決於所選 投樂途徑。當治療有效量之本發明之類似物經口投與時， 128231.doc 200843778 該組合物通常呈固體調配物（例如錠劑、膠囊、丸劑、散 劑或口含錠劑）或液體調配物（例如水性懸浮液、溶液、酏 劑或糖漿劑）形式。 ~ 當以錠劑形式投與時’該組合物可另外含有功能性固體 • 或固體載劑’諸如明膠或佐劑。錠劑、膠囊及散劑可 +有約1%至約95%本發明之類似物，且較佳約25%至約 • 90%本發明之類似物。 t以液體或懸浮液形式投與時，可添加功能性液體及/ 或液體載劑，諸如水、石油或動物或植物來源之油。液體 形式之組合物可另外含有生理食鹽水溶液、糖醇溶液、右 旋糖或其他醣類溶液，或二醇類。糖醇溶液為較佳。當以 液體或懸浮液形式投與時，該組合物可含有約〇 5重量％至 :90重量％本發明之類似物’且較佳為約!重量％至約5〇重 量％本發明之類似物。在所涵蓋之一實施例中，液體載劑 非水性或大體上非水性的。對於以液體形式投與而言，該 φ 、组°物可以迅速溶解之固體調配物形式提供以在即將投與 之前溶解或懸浮。 當治療有效量之本發明之類似物經靜脈内、經皮膚或皮 ’ 下'主射投與時，該組合物係呈無熱原質、非經腸可接受之 Κ ’合液形式。適當考慮？11值、等滲性、穩定性及其類似因 素之該等非經腸可接受之溶液的製備係在熟習此項技術者 技術乾圍内。用於靜脈内、經皮膚或皮下注射之較佳組合 物通吊除本發明之化合物外，亦含有等渗媒劑。該等類似 物組合物可經製備用於以與諸如羥基丙基纖維素之界面活 128231.doc -41· 200843778 性劑適當混合的游離驗或藥理學上可接受之鹽於水中之溶 液之形式技與。亦可於甘油、液體聚乙二醇及其混合物中 及於油劑中製備分散液。在—般儲存及使㈣件下， 製劑可視情況含有防腐劑以防止微生物生長。 、可注射類似物組合物可包括無菌水溶液、懸浮液或分散 =及用於臨時製備無菌可注射溶液、懸浮液或分散液之無 ::末。在所有情況下，該形式必須為無菌的且必須為： 一=度上易於注射之流體。其必須在製造及儲存條件下 :%疋的且必須視情況包含防腐劑以阻止微生物(諸如細 菌及真菌）之污染作用。載劑可為含有（例如）水、乙醇、多 元醇（例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物）、其 合適混合物及植物油之溶劑或分散介質。在所涵蓋之一實 施例中，載劑為非水性或大體上非水性的。可（例如）藉由 使用塗料（諸如卵磷脂），藉由維持類似物所需粒徑（在分散 液N况下）及藉由使用界面活性劑來保持適當流動性。可 以例如對氧苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及 其類似物之各種抗細菌劑及抗真菌劑實現微生物作用之預 防在許多情況下，較佳包括例如糖或氯化鈉之等滲劑。 可注射性組合物之延長吸收可藉由在該等組合物中使用延 緩吸收之藥劑（例如單硬脂酸鋁及明膠）來實現。 無菌可注射溶液係藉由將所需量之活性化合物以及各種 以上所列舉之其他成份併入適當溶劑中且（視需要）繼而過 濾滅菌來製備。通常，分散液係藉由將各種經滅菌之活性 成份併入含有鹼性分散介質及來自彼等以上所列舉之所需 128231.doc -42- 200843778 其他成份的無菌媒劑中來製 液之1苗认士 ± 你州％ I備無囷可注射溶 履之無減粉末之情況下，較 乾焊# ώ ^ 1備方法為真空乾燥及冷凍 乾岛技術，其自先前無菌 盆妯娇币 > 、慮，合液產生活性成份加上任何 其他所高成份的粉末。

類I:而言，合適組合物可易於藉由使本發明之 與此項技術中所熟知之諸如載劑之醫藥學上可接受 =賦形劑組合來調配。該等賦形劑及載劑使本發明之化合 :能夠調配成鍵劑、丸劑、糖衣藥丸、膠囊、液體、凝 ，糖水、装液、懸浮液及其類似物用於待治療之患者經 口攝取 '經口使用之醫藥製劑可藉由添加式!化合物及固 體賦形劑’視情況研磨所得混合物且在添加合適助劑之後 加工顆粒劑混合物(若需要)以獲得錠劑或糖衣藥丸核心而 獲得。合適賦形劑包括（例如）填充劑及纖維素製劑。若需 要了添加朋解劑。對於各種類型調配物之醫藥學上可接 又之成伤係所熟知的且可為（例如）用於各種調配物類型之 黏&背](例如天然或合成聚合物）、潤滑劑、界面活性劑、 甜味劑及調味劑、1料、防腐劑、染料、稠化劑、佐劑、 抗微生物劑、抗氧化劑及載劑。 適用於本文所述之組合物的黏合劑之非限制性實例包括 育蓄樹膠、阿拉伯膠、澱粉、明膠及諸如以下各物之生物 可降解聚合物：二羧酸、烷二醇、聚烷二醇及/或脂族羥 基竣酸之均聚酯或共聚酯；二羧酸、伸烷基二胺及/或脂 族胺基竣酸之均聚醯胺或共聚醯胺；相應聚酯-聚醯胺_共 聚合物、聚酸酐、聚原酸酯、聚磷氮烯及聚碳酸酯。該等 128231.doc •43· 200843778 生物可降解聚合物可為 ... ^ f為直鏈、支鏈或交聯的。特定實例為 聚乙酵酸、聚乳酸及聚咣1-丙交酯/乙交酯。聚合物之其他 實例為水溶性聚合物，諸如聚氧料（聚氧乙烯、聚氧丙 稀及其混合聚合物）、聚丙烯醯胺及經基燒基化聚丙烯酿 ^、聚順丁稀二酸及其醋或醯胺、聚丙締酸及其酯或酿 胺、聚乙烯醇及其酷或乙曉、聚乙烯味唾、聚乙^比洛咬 酮及如聚葡萄胺糖之天然聚合物。 適用於本文所述之組合物的錠劑賦形劑之非限制性實例 包括諸如構酸氫約之碟酸鹽。 適用於本文所述之組合物的界面活性劑可為陰離子、陽 離子、兩性或中性的。適用於本文所述之組合物的界面活 生劑之非限制性實例包括卵構脂、填脂、硫酸辛酯、硫酸 癸Sg、硫酸十二统酯、硫酸十四烧酯、硫酸十六烧酯及硫 酸十八烧酯；油酸鈉或癸酸鈉；醯基胺基乙烧_2_確酸， 諸如1_辛醯基胺基乙烷-2-磺酸、1-癸醯基胺基乙烷-2-石黃 十一酿基胺基乙烧-2-績酸、1-十四酿基胺基乙燒_2_ 石黃酸、：U十六醯基胺基乙烷_2_磺酸及1-十八醯基胺基乙 烧-2-磺酸；及牛磺膽酸及牛磺去氧膽酸；膽汁酸及其鹽， 諸如膽酸、去氧膽酸及甘膽酸鈉；癸酸鈉或月桂酸鈉；油 酸鈉、月桂基硫酸鈉、鯨蠟基硫酸鈉、硫酸化篆麻油及二 辛基磺基琥珀酸鈉；可可醯胺基丙基甜菜鹼及月桂基甜菜 驗；脂肪醇、膽固醇、單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油 酉旨、單油酸甘油或二油酸甘油_及單棕櫚酸甘油1旨或二 棕櫚酸甘油酯及聚氧乙烯硬脂酸酯。 12823l.d( • 44- 200843778 糖的甜味劑之非限制性實例包括 醇、阿拉伯=二::、:梨糖醇，、赤藻糖 糖於一… 心穿糖％、麥芽糖醇及乳糖醇；以及 糖精、二氣庶糖及阿斯 ^ 嚴糖為較佳，且較佳避免豸_、阿斯巴甜糖及三氯 避免用糖。適用於本文所述之組合物 、=狀非限制性實例包括胡椒薄荷、冬青油或諸如櫻 桃及橙調味劑之水果調味劑。

、用於本文所述之組合物的塗料之非限制性實例包括滑 石、玉米澱粉、二氧化石夕、月桂基硫酸納、明膠、蠟、蟲 膠、糖、生物可降解聚合物及金屬硬脂酸鹽，較佳為滑 石、玉米澱粉、二氧化石夕、月桂基硫酸納、明膠、蠟、生 物可降解聚合物及金屬硬脂酸鹽。塗料可以約0.2重量❶/。至 約15重量％’較佳約〇·5重量％至約5重量％之量存在於組合 物中。 可用於組合物中之潤滑劑包括（但不限於）天然或合成 油、脂肪、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鈉、硬脂酸、硬 月曰醯反丁烯一酸納、氫化棉子油（gter〇tex)、滑石及壤，包 括（但不限於）蜂蠟、巴西棕櫚蠟、鯨蠟醇、硬脂酸甘油 S旨、棕櫚酸甘油酯、蘿酸甘油酯、氫化植物油及硬g旨醇。 潤滑劑可以約0.2重量％至約2〇重量％，較佳約0.5重量％至 約5重量％之量存在。 適用於本文所述之組合物的防腐劑之非限制性實例包括 山梨酸、氣丁醇、硫柳汞、苯曱醇、氯化苯甲烴銨、笨 盼、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、苯甲酸、笨氧基乙醇、 128231.doc -45- 200843778 對羥基苯曱酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯及以上任一者之組 合0 適用於本文所述之組合物的佐劑之非限制性實例包括氳 氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁鉀（礬）、硫酸鈹、二氧化矽、高 嶺土、碳、油中水乳液、水中油乳液、胞壁醯基二肽、細 菌内毒素、脂質X、短棒狀桿菌

(痤瘡丙酸桿菌，απα)、百日咳博德 氏桿菌、多核糖核苦酸、海藻酸納、 羊毛脂、溶血卵磷脂、維生素A、皂苷、脂質體、左旋哺 唑、DEAE-葡聚糖、嵌段共聚物或其他合成佐劑。該等佐 劑可自各種來源購得，例如Merck佐劑65(Merck and Company，Inc.，Rahway，N.J·)或弗氏（Freund’s)不完全佐劑 及完全佐劑（Difco Laboratories，Detroit，Michigan)。通 常，使用諸如Amphigen(水中油型）、Alhydrogel(氫氧化 銘）或Amphigen與Alhydrogel之混合物之佐劑。 適用於本文所述之組合物的抗微生物劑之非限制性實例 包括三氣生（triclosan)、苯氧基異丙醇、苯氧基乙醇、 PCMX、天然精油及其關鍵成份，及其混合物。 適用於本文所述之組合物的抗氧化劑之非限制性實例包 括抗壞血酸（維生素C)、α生育酚（維生素E)、維生素A、 石西、β-胡蘿_素、類胡蘿_素、黃酮、類黃酮、葉酸、雙 氫黃酮、雙氫異黃酮、兒茶素、花青素、查耳酮及其組 合。 緩釋或持續釋放型調配物亦可自本文所述之類似物製備 128231.doc * 46 - 200843778 以達成與GI道中體液接觸之活性化合物之控釋且在血漿中 提供大體上恆定且有效含量之活性化合物。舉例而言，釋 放可藉由一或多種溶解、擴散及離子交換來控制。此外， 緩釋法可提高經由GI道内可飽和或有限路徑之吸收。舉例 而言’出於此目的，可將類似物包埋於生物可降解聚合 物、水溶性聚合物或兩者之混合物的聚合物基質及視情況 合適界面活性劑中。包埋在本文中可意謂將小粒子併入聚 合物基質中。控釋型調配物亦經由將分散小粒子或乳化小 液滴經由已知分散液或乳液塗佈技術囊封獲得。 對於藉由吸入投與而言，本發明之化合物可便利地以由 加壓包或霧化器藉助於合適推進劑提供之氣溶膠噴霧形式 傳遞。在加壓氣溶膠情況下，劑量單位可藉由提供閥以傳 遞所計量之量來測定。適用於用於吸入器或吹入器中之膠 囊劑及（例如）明膠之濾筒可經調配以含有該化合物與合適 之散劑主劑（諸如乳糖或澱粉）的粉末混合物。 該類似物可經調配用於藉由注射（例如藉由快速注射或 連續輸注）之非經腸投藥。用於注射之調配物可以單位劑 型（例如以安瓶形式或以多劑量容器形式）與添加之防腐劑 一起提供。組合物可採用該等如於油性或含水媒劑中之^ 浮液、溶液或乳液的形式且可含有調配劑，諸如懸浮劑了 穩定劑及/或分散劑。 用於非經腸投藥之醫藥調配物包括該類似物水溶性形式 之水溶液。另夕卜，該等類似物之懸浮液可製備為適當油性 注射懸洋液。合適親脂溶劑或媒劑包括脂肪油或合成脂肪 128231.doc -47- 200843778 酸醋。水性注射懸浮液可含有增加懸浮液黏度之物質。視 情況，該懸浮液亦可含有合適穩定劑或增加該等化合物溶 解性且使得可製備高濃度溶液之藥劑。或者，本發明之組 合物可在使用之前以散劑形式與合適媒劑（例如=菌無熱 原質水）組合。 本發明之類似物亦可以直腸組合物形式調配，諸如拴劑 或保留灌腸劑’例如含有習知栓劑主劑。除先前所述之; 配物外，該等類似物亦可調配為儲槽式製劑。該等長效調 配物可藉由植入（例如皮下或肌肉内）或藉由肌肉内注射投 與。因此（例如）該等化合物可以合適聚合或疏水性材料⑼ 如調配為於可接受之油劑中之乳液）或離子交換樹脂調 配’或調配為微溶性衍生物（例如調配為微溶性睡）。 :言之’本發明之類似物可以含有賦形劑(諸如澱粉或 礼糖）之錠劑形式，或以單獨或與賦形劑混合之膠囊劑或 卵狀小體（ovule)形式，每以冬古,土十丨 ”式切3有调味劑或著色劑之酿劑或 =形式經口、經頻或舌下投與。該等液體製劑可以醫 非Γ膜可接文之諸如懸浮劑之添加劑製備。類似物亦可經 、二/主射’例如靜脈内、肌肉内、皮下或冠狀動脈内注 X於非經腸投藥而言，該類似物以無菌水溶液形式使 二最二該無菌水溶液可含有例如鹽或糖醇(諸如甘露糖 知）或《萄糖之其他物質以使該溶液與血液等滲。 根：Γ獸醫ί用而言’本發明之類似物或其無毒鹽類係以 易乂於禮醫實踐適當可接受之調配物形式投與。獸醫可 易於確定最適合於特定祕之給藥巧及投藥途徑。 128231.doc -48- 200843778

在本發明之某些態樣中’用於單獨或與另一藥劑或介入 組合使用腦類似物治療疾病之所有必要組份可封裝於套 組中，其中該藥劑或介人係傳統上用於治療該疾病。特定 言之’本發明提供適用於介人治療疾病之套組，其包含娘 封裝之-組藥劑（包括刪或其衍生物之類似物以及緩衝液 及用於製備可傳遞形式之該等藥劑的其他組份)，及/或傳 遞該等樂劑之裝置，及/或任何用於與基於腦之藥劑也人 治療之藥劑，及/或與該等藥劑_起封裝之治療該疾病: 說明。該等說明可固定於任何有形媒體中，該媒體諸如瘦 印刷之紙張或電腦可讀取磁或光媒體，或參考經由網際網 路可獲得之諸如全球資訊網網頁之遠程電腦數據 明。 利用式I化合物之治療方法 如上所述，本發明之—態樣包括含有四氫生物喋吟類似 :之組合物。本發明之另一態樣包括一種藉由投與上述組 合物中之任-者治療患有BH4反應性病狀之個體的方法。 該方法包括向個體投與治療有效量之式！化合物。刪反應 性病狀通常包括對刪或其衍生物敏感之病狀。BH4反應 隹病狀包括I型糖尿病、π型糖尿病、糖尿病性視網膜病、 糖尿病性腎病、血管疾病、溶血性貧血（例如與溶血作用 相關）、，狀細胞貧血、神經精神異常、腦缺之相關神經 精神異常、路胺㈣化酶功能降低或色胺㈣化酶功能降 低相關神經/精神異常、諸如代謝症候群之代謝障礙、高血 壓、周邊動脈疾病、間歇性跛行、嚴重肢體缺血、心臟衰 128231.doc -49- 200843778 竭、動脈粥樣硬化、内皮細胞功能障礙及高苯丙胺酸血 症。此等病狀在下文中更詳細描述。 "治療有效量"意謂治療或預防所治療之受檢者之現有症 狀之發展或減輕現有症狀之有效量。確定有效量充分在熟 習此項技術者能力範疇内，尤其根據本文所提供之詳細揭 示内容來確定。通常"治療有效劑量"係指使所需作用達成 之類似物之量。舉例而言，在一較佳實施例中，如本文所 揭示之治療有效量之Β η 4類似物使血流介導之擴張研究中 響應於諸如5分鐘缺血之正常信號之血管擴張程度增加 50%或刚％或更高。在另—較佳實施例中，如本文所揭示 之治療有效量之ΒΗ4類似物使收縮血壓降低5 mm Hg*i〇 mmHg’或在一些患者中降低15mmHg或更多。在另一較 仏只鈿例中，如本文所揭示之治療有效量之類似物如 血流介導之擴張所量測使内皮細胞功能障礙減少，或使諸 如細胞黏著分子表現、過量氧化性物質產生或促進凝血或 血栓形成之傾向的其他態樣減少。在另—較佳實施例中， 如本文所揭示之治療有效量之麵類似物使BH4反應性患 者中之L·多巴（L.Dopa)或血清素之神經傳遞素含量增加至 少 10%。 9 類似物之毒性及治療功效可藉由在細胞培養物或實驗動 物中（例如）用於測定LD50(50%群體致死劑量）及咖0(5㈣ 群體治療有效劑量）之標準醫藥程序來測定。毒性作用與 治療作用之間的劑量比率為治療指數，其表示為LD50與 ED5〇之間的比率。展現較高治療指數之化合物為較佳。 128231.doc 200843778 斤獲得之數據可用於調配適用於人類之劑量範圍。該等化 合物之齊]量較佳處於具有極低或不具冑毒性之ED5〇的循 環濃度範圍内。劑量可視所使用之劑型及所使用之投藥途 徑而定在此範圍内變化。 確切之調配物、投藥途徑及劑量可由個別醫師鑒於所治 療之特疋疾病及患者之病狀選擇。可個別調節劑量及時間 間隔以提供足以維持治療作用之BH4類似物、BH4或其組 合之血*裝含量。 所投類似物之量可視所治療之受檢者、受檢者之年齡、 健康情況、性別及體重，同時治療之種類（若存在）、病痛 之嚴重轾度、所需作用之性質、治療方式及頻率及開藥醫 師之診斷而定。給藥頻率亦可視對於動脈氧壓力之藥效性 作用而定。然而，如熟習此項技術者無需過多實驗即理解 及確定’可針對個別受檢者設計最佳劑量。此通常涉及調 節標準劑量，例如若患者具有較低體重時降低劑量。 雖然個體需要不同，但確定類似物之有效量之最佳範圍 仍在此項技術者之技術範疇内。對於在治癒性治療或預防 性治療本文所確定之病狀及病症中向人類投藥而言，例 如’本發明之類似物之典型劑量可為每日每公斤體重約 0.1毫克活性部分（mg/kg)至約40 mg/kg，例如至少0.2 mg/kg，至少 〇·3 mg/kg，至少 〇·4 mg/kg或至少 〇·5 mg/kg， 且較佳為30 mg/kg或低於3〇 mg/kg，或20 mg/kg或低於20 mg/kg ’其可為（例如）每曰約2·5 mg(0.5 mg/kg x 5 kg)至每 曰約2000 mg(20 mg/kg χ 100 kg)。該等劑量可以單次劑量 128231.doc -51 - 200843778 投與或其可為分成多次劑量。在例示性實施例中，日劑量 可為 〇.5 mg/kg、！ mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、4 、$ —kg、6 mg/kg、7 mg/kg、8 叫⑽、9 吨心、ι〇 mg/kg、n mg/kg、12 mg/kg、13 mg/kg、i4 mg/kg、i5 mg/kg、16mg/kg、17mg/kg'18mg/kg、i9mg/k^2〇 mg/kg，或其任何部分。 適當劑量可經由使用已建立之檢定測定苯丙胺酸 血液含s以及相關劑量反應數據來確定。最終給藥方案應 由主治醫師考慮改變藥物作用之因素來讀定，該等因素例 如藥物比活性，患者損傷嚴重程度及反應，患者之年齡、 病狀、體重、性別及飲食，任何? π W U木之厫重程度，投藥時 間及其他臨床因素。進行研究時，將獲得針對特定疾病及 病狀之關於適當劑量及治療持續時間的其他資訊。 應瞭解本發明之醫藥組合物及治療方法可適用於人類醫 學及獸醫學領域。因此，待治療之個體(或受檢者)可為哺 礼動物，較佳為人類或其他動物。對於獸醫用目的而言， 受檢者包括（例如）家畜，包括牛、綿羊、豬、馬及山羊. 伴侣動物，諸如犬及貌；外來及/或動物園動物；實驗動 物，包括小鼠、大鼠、兔子、豚鼠及倉鼠；及家禽，諸如 雞、火雞、鴨及鵝。 當涵蓋連續、每日投藥時’適宜的為當料臨床指標經 改良高於特定臨限值時停止治療。當然，若臨床改良指標 惡化則可再次開始治療。實際中，由醫師確定最適合於個 別患者之實際給藥方案，且劑量隨特定患者之年齡、體重 128231.doc -52· 200843778 及反應而變化。以上劑量範圍為例示性-般情況，伸可存 較佳之個別情況，且該等情況係在本發 本發明之類似物可單獨投與或與針對該錢或針對 病之其他症狀之其他治療組合投與。該類似物通常盥根據 所欲投藥途徑及標準醫藥實 、 焉殘選擇之醫樂學上可接受之都 劑混合投與。因此，根據本 、 十知月使用之醫樂組合物可以習 去方式使4多種生理上可接受之載劑調配，該等載劑 =㈣將類似物加工成醫藥學上可使用之製劑的賦形 劑及助劑。 BH4反應性病狀 ❿ 如上所述，麵反綠錢包括I型糖尿病、η型糖尿 病丄糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、血管疾病、溶血 性貝金、鐮狀細胞貧血、神經精神異常、βη4缺乏相關神 經精神異常、路胺酸經化酶功能降低或色胺酸經化酶功能 降低相關神經精神異常、諸如代謝症候群之代謝障礙、高 亡壓、周邊動脈疾病、間歇性跛行、嚴重肢體缺血、心臟 哀竭、動脈粥樣硬化、内皮細胞功能障礙及高苯丙胺酸血 症0 、4反應性病狀尤其為j型糖尿病、η型糖尿病、糖尿病 性視網膜病及糖尿病性腎病。糖尿病及其他心血管疾病病 況之特徵為氧化氮⑽）生物活性缺乏，其導致改變内皮細 已中血&擴張劑與血官收縮劑之間的平衡且促使内皮細胞 力月t*障礙&皮細胞功能障礙造成血f收縮增加，從而導 128231.doc •53· 200843778 致高血壓；對血流或其他信號不足之擴張反應；血塊形成 及血小板凝集增加；細胞表面黏著分子（諸如選擇蛋白）增 加；凝血因子增加及由於諸如反應性氧物質（R〇s)(例如超 氧分子）之過量自由基產生而造成之動脈粥樣硬化加速。 由於NO在維持血管内穩定中起主要作用，因κΝ〇生物活 性缺乏促進血管疾病發病機制且為該等疾病之不利結果之 才不^。此外，在不存在足夠四氫生物喋呤之情況下的反應 性氧化性物質之產生亦促使動脈粥樣硬化加速。 暴露於氧化應激之動脈中ΒΗ4之加速生物合成及分解代 謝可促進已知存在於患有糖尿病之患者動脈中之内皮細胞 功忐IV礙之發病機制。另外，增加之葡萄糖由於抑制產生 ΒΗ4之路徑中稱為GTP環水解酶之第一生物合成酶而可防 止細胞中ΒΗ4含量增加。經由解偶合内皮細胞氧化氮合成 酶產生過量氧化性物質導致四氫生物喋呤之進一步降解以 及促使針對eNOS之ΒΗ4含量可用性降低。由eN〇s產生氧 化性物質因BH4限制性缺乏增強且此等氧化性物質（例如產 生過氧亞硝基之超氧化物）進一步破壞BH4，而導致自持下 降螺旋（self sustaining downward spiral)。幸運的是在動物 及人類中，實驗性補充BH4已顯示對内皮細胞功能有利之 作用。預期本文所揭示之BH4類似物可顯示類似有利作用 而劑量大體上低於天然BH4。使用患有糖尿病或動脈粥樣 硬化之動物之血管環及患有糠尿病之患者之乳動脈環中之 高濃度BH4補充研究證明以下觀點·· BH4可潛在地改善内 皮細胞功能障礙，減少氧化應激且恢復血管功能。預期本 128231.doc -54- 200843778 文所揭示之BH4類似物可類似地改善内皮細胞功能障礙且 恢復血管功能。BH4對於心血管及糖尿病受檢者之正面作 用之一些實例包括：投與BH4表現出加強對於患有糖尿病 或高膽固醇血症之患者而不加強正常受檢者中前臂血流量 . 之 NO介導作用（Heitzei* 等人，Diabetologia_43(ll):1435-8 ' (2000))。急性BH4恢復靜脈移植物中之血管功能及經歷冠 * 狀動脈繞道移植手術之糖尿病受檢者之動脈血管功能 (Guzik等人，Circulation 105(14):1656-1662 (2002))。與對 _ 照受檢者相比，BH4增加患有II型糖尿病及冠心病之患者 中之胰島素敏感性（Nystrom等人，Am J Physiol Endocrinol Metab. 2004年 11 月；287(5): E919-25. Epub (2004)) 〇 補充 生物合成途徑中之BH4前軀物亦已展示有助於增加細胞内 BH4含量及改善活體内NO合成及改善内皮細胞功能。 另一 BH4反應性病狀為血管疾病。較佳地，血管疾病為 選自由以下各疾病組成之群之疾病：周邊血管疾病、間歇 性跛行、冠狀動脈疾病、高膽固醇血症相關血管疾病、吸 • ^ ^ 煙相關血管疾病、尚企壓、頑固性咼血壓或未控制之咼血 壓、肺部動脈高血壓、特發性肺動脈高壓、新生兒肺動脈 : 高壓（PPHN)、動脈粥樣硬化、中風、中風後血管痙攣、心 ' 肌梗塞、缺血再灌注損傷、充血性心臟衰竭、移植後缺血 再灌注損傷、移植後血管損傷、血管痙攣、血塊形成、血 栓形成、凝結及凝血。 通常，治療血管疾病旨在維持内穩定、提供辅助治療及 提供特定治療以改善臨床相關終點。此等作用經由改良響 128231.doc -55- 200843778 應於正常信號之血管擴張、減少對血管之氧化性損傷及一 般減少及潛在逆轉動脈粥樣硬化或傾向於阻塞血管系統或 使血管系統形成血栓之其他病狀介導。此等臨床終點可包 括心肌梗塞之發病率、因絞痛住院、因心血管疾病死亡、 ； ㈣肢體缺損之不良周邊灌流、皮膚潰瘍減少。改良之血 _ &力犯可使用血流介導之擴張評估臂動脈響應於5分鐘缺 • 蚊擴張來量測，或對於周邊灌流而言，可使用分級踏旋 ㈣㈣小腿不遭受耗之行走之能力Μ生㈣之行走 _量來量測。亦可對患者絞痛發作或減少之心臟灌流之 病徵或表現之運動測試進行研究。此外，可進行超音心動 圖以二估噴血分數、心輸出量、心臟舒張功能、心臟體 ^ 大瓣逆/;,L速度及其他心臟或血管疾病病徵。冠狀血 I可經由血管攝影術檢定以評估心臟響應於乙醯膽驗之灌 ^。内穩定通常藉由在不產生損害性自由基（例如產生過 氧亞肖基之超氧自由基）的情況下修正導致血管功能障礙 • 之^括低含量刪及助產生不足之因素來維持。輔助治療 L系匕括投與增加初始治療有效性之藥劑或介入。特定治 . 療旨在維持正常臨床相關終點。 預期本文所揭不之BH4類似物可用以治療包含患有各種 • 开^式血管疾病之受檢者的患者群體，該等血管疾病包括 (不限於）頑固性或未控制之高血壓、間歇性跛行、冠狀 力月b〜臟衰竭、肺部動脈高血壓及包括鐮狀細胞病 生貧灰，該等患者患有或不患有糖尿病。本文所揭 不之該等BH4類似物可單獨或與通常用於治療血管性病症 128231.doc -56- 200843778

之任何其他治療劑及/或介入組合投與。用以治療糖尿病 之藥劑包括（但不限於）改良胰島素敏感性之藥劑，諸如 PPAR γ配體（嗟嗤咬酮（thiazolidinedone)、格列酮 (glitazone)、曲格列酮（troglitazone)、羅格列酮 (rosiglitazone，Avandia)、吼格列酮(pioglitazone));胰島 素分泌刺激劑，諸如磺醯基脲類（格列喹酮（gliquidone)、 甲苯石黃丁腺（tolbutamide)、格列美脲（glimepride)、氣石黃丙 脲（chlorpropamide)、格列 °比 σ秦（glipizide)、格列本脲 (glyburide)、乙醯苯磺醯環己脲（acetohexamide))及美格列 奈類（meglitinide)(美格列奈、瑞格列奈（repaglinide)、那 格列奈（nateglinide))及減少肝臟產生葡萄糠之藥劑，諸如 二甲雙胍。用以治療血管疾病之藥劑包括（但不限於）通常 用於治療高血壓及其他内皮細胞功能障礙相關病症之内皮 素受體拮抗劑，諸如波生坦（bosentan)、達盧生坦 (darusentan)、恩拉生坦（enrasentan)、替吐生坦（tezosentan) 、阿曲生坦（atrasentan)、安貝生坦（ambrisentan)、塞塔生 坦（sitaxsentan);平滑肌弛缓藥，諸如PDE5抑制劑（間接作 用）及敏樂定（minoxidil)(直接作用）；血管緊張素轉化酶 (ACE)抑制劑，諸如卡托普利（captopril)、依那普利 (enalapril)、賴諾普利（lisinopril)、福辛普利（fosinopril)、 培哚普利（perindopril)、喧那普利（quinapril)、群多普利 (trandolapril)、貝那普利（benazepril)、雷米普利（1^!}1^1^1) •，血管緊張素II受體阻斷劑，諸如厄貝沙坦（irbesartan)、 洛沙坦（losartan)、綠沙坦（valsartan)、依普羅沙坦 128231.doc -57- 200843778

(eprosartan)、奥美沙坦（olmesartan)、坎地沙坦 (candesartan)、替米沙坦（telmisartan); β阻斷劑，諸如阿 替洛爾（atenolol)、美托洛爾（metoprolol)、納多洛爾 (nadolol)、比索洛爾（bisoprolol)、品多洛爾（pindolol)、醋 丁洛爾（acebutolol)、倍他洛爾（betaxolol)、普萘洛爾 (propranolol);利尿劑，諸如二氫氯噻嗪、呋喃苯胺酸、 托西邁（torsemide)、美托拉宗（metolazone);約通道阻斷 劑，諸如胺氯地平（amlodipine)、非洛地平（felodipine)、 尼索地平（nisoldipine)、硝苯地平（nifedipine)、異搏定 (verapamil)、硫氮酮（diltiazem) ; α受體阻斷劑，多沙。坐 口秦（doxazosin)、特拉唾嗪（terazosin)、阿夫嗤嗓（alfuzosin) 、他蘇洛辛（tamsulosin);及中樞α促效劑，諸如可樂定 (clonidine)。用以治療高脂質血症之藥劑包括（但不限於） 降低LDL之藥劑，諸如他汀類（statin)(阿托伐他汀 (atovastatin)、氟伐他、;丁（fluvastatin)、洛伐他汀（lovastatin) 、普伐他汀（pravastatin)、羅素他汀（|*〇811¥38131:1|1)#5、辛伐 他汀（simvastatin))及於驗酸；刺激PPAR α之藥劑，諸如纖 維酸酯類、吉非羅齊（gemfibrozil)、非諾貝特（fenofibrate) 、苯紮貝特（bezafibrate)、環丙貝特（ciproHbrate);約束 (bind)且防止膽汁酸再吸附及降低膽固醇含量之藥劑，諸 如膽汁酸錯隔劑、消膽胺及考來替潑（colestipol);及膽固 醇吸收抑制劑。 如上所述，本發明之實施例係關於藉由向受檢者單獨或 與習知血管治療組合投與包含BH4類似物之組合物來治療 128231.doc -58- 200843778 血管疾病，其中與未單獨或與習知血管治療組合投與BH4 類似物之濃度相比，投與有效改良該受檢者之臨床相關終 點。本發明之一實施例可包括向具有異常終點之個體以有 效使值正常化之量投與BH4類似物。在一較佳實施例中， - 該個體經診斷患有特定血管疾病。本發明涵蓋向經診斷患 ^ 有由特定症狀及/或用以診斷特定血管疾病之通用測試表 - 徵之特定血管疾病之患者以有效使終點改良為正常含量之 量投與本文所述之BH4類似物。 _ BH4反應性病狀亦尤其為溶血性貧血及鐮狀細胞貧血。 一些數據展示内皮細胞功能障礙發生於患有溶血性貧血之 患者中且缺乏NO造成該問題。BH4缺乏可能係由氧化性破 壞BH4池或導致生物合成及維持BH4池含量之能力降低之 内皮細胞損傷所引起。動物研究表明NO響應於鐮狀細胞 病相關慢性血管損傷發揮代償作用。循環血漿血紅蛋白及 超氧化物之組合作用導致破壞NO(Reiter等人，Current Opinions in Hematology 10:99-107 (2003))。已考慮提高 ® NO生物可用性或抑制與鐮狀細胞病相關之氧化應激及未 控制之自由基增殖之新療法。共同投與精胺酸與羥基脲可 . 增加NO產生且改良精胺酸在患有SCD患者中之穩態使用。 Λ 參見 Morris 等人（2003)J. Pediatric Hematology 25:629-34。 除羥基脲及精胺酸外，亦已考慮其他治療，諸如吸入NO 以增加NO含量，吸入別σ票吟醇（allopurinol)以減少1^0破壞 及吸入他汀類（statins)及西地那非（sildenafil)以加強NO反 應。參見Mack等人，（2005，in press) Inti· J. Biochem. Cell 128231.doc -59- 200843778

Bio卜美國專利申請公開案2003/0078231描述使用分子矯 正磺基-腺苷曱硫胺酸衍生物作為具有抗氧化劑特性之營 養或食品增補劑來治療數種由氧化應激及未控制之自由基 增殖所致之疾病，包括鐮狀細胞貧血。美國專利申請公開 - 案第2005/0239807 A1號描述使用包括提供NO供體生物活 性之基團之反應性氧產生酶抑制劑（例如別嗓呤醇）來治療 » 氧化應激相關疾病，諸如鐮狀細胞貧血。 在鐮狀細胞病中，NO減少内皮細胞黏著分子表現及後 _ 續紅血球與白血球黏著，因此防止血管閉塞危症之發展。 參見 Space 等人（2000)Am. J. Hematology 63:200-04。細胞 相關NADPH氧化酶已展示為超氧化物之來源。參見Wood 等人（2005)FASEB J. 19:989-91。鐮狀細胞病相關超氧自由 基之快速產生可引發諸如OH及ONOO之次級反應性氧及氮 代謝物之產生，該等代謝物已知可氧化BH4，因此導致 BH4缺乏。在一項研究中，向鐮狀細胞轉殖基因（ps)小鼠 投與BH4之前躺物墨嗓呤（sepiapterin)與血細胞黏著降低相 • 關。參見 Wood 等人（2006)J· Free Radical Biology &

Medicine 40:1443-53。儘管與本發明一致，但作者特別指 : 出墨喋呤缺乏外源性BH4之抗氧化特性及自身氧化特性， ' 而使用外源性BH4係涵蓋於本發明中。此外，轉殖基因鐮 狀細胞小鼠模型可能不會精確反映人類中所觀察到的控制 NOS、NO及BH4含量的複雜自動調節機制。參見Reiter等 人（2003)Current Opinion in Hematology 10:99-107。預期 本文所揭示之BH4類似物可類似於BH4使用來治療如溶血 128231.doc -60- 200843778 性貧血及鐮狀細胞之病狀。 BH4反應性病狀亦包括神經精神異常、BH4缺乏相關神 經精神異常及酪胺酸羥化酶功能降低或色胺酸羥化酶功能 降低相關神經精神異常。神經精神異常較佳為選自由以下 — 病症組成之群之病症··帕金森氏症（Parkinson、Disease) ' ^ 注意力不足過動症、雙極性病症、自閉症' 抑鬱症及肌張 * 力障礙。 通吊，許多神經精神異常病症與減少或不足之神經傳遞 含里有關。在抑鬱症中，血清素之含量不足可造成抑鬱 症且口此使用企π素再吸收抑制劑來增加神經末梢血清 素含量。ΒΗ4為血清素生物合成所需之輔因子且在缺乏病 況中，如在一些研究PKU患者之血小板中血清素含量之研 究中所觀察，添加ΒΗ4可刺激▲清素產生。亦已觀察到精 神分裂症患者可能具有較低兒茶盼胺含量及較低生物喋呤 含量，且因此添加BH4由於BH4在生物合成中酪胺酸羥化 φ &兒命盼胺路徑中之作用而可提高兒茶紛胺神經傳遞素產 生。此外…些研究已表明刪可與受體在神經末梢處結 合而改變神經傳遞素釋放，其可能為BH4在控制神經傳遞 . 巾之另4乍用。BH4亦已被推薦用於治療兒童之 : 屢/細叫機^進症候群。在此等患者中，使用刺激 劑有助於抑制增加之活性含量且獲得較佳濃度。腦可提 f或，良刺激性神經傳遞素之產生或釋放從而提高對機能 几進订為之抑制。預期本文所揭示之BH4類似物可類似地 使用來冶療神經精神異常、bh4缺乏相關神經精神 128231.doc -61 - 200843778 異常及酪胺酸羥化酶功能降低或色胺酸羥化酶功能降低相 關神經精神異常。 預期本文所揭示之治療有效量之BH4前藥將提高酪胺酸 备化酶功能或色胺酸羥化酶功能。 另一 BH4反應性病狀為代謝症候群。通常，患有代謝症 候群之患者顯示血壓增加、抗胰島素症、高脂質血症、身 體質量指數增加及動脈粥樣硬化增加。代謝症候群之確切 潛在病源學倍受爭論，但顯然高脂肪高碳水化合物膳食及 減少之運動導致肥胖症。BH4含量在該病狀中可能較低且 可能為此症候群病因之部分及該症候群之進程。在導致抗 胰島素症之果糖餵養大鼠模型中，BH4含量較低且補給 BH4改良抗胰島素病況之血管作用。預期本文所揭示之 BH4類似物可類似地如BH4使用以治療代謝症候群。 BH4反應性病狀亦尤其為高苯丙胺酸血症。高苯丙胺酸 血症較佳係選自由以下病症組成之群：輕度苯丙酮尿症、 典型苯丙酮尿症及嚴重苯丙酮尿症（ρκυ)，以及與BH4生 物合成或循環中基因缺失相關之非常型或惡性高苯丙胺酸 血症，肝病相關高苯丙胺酸血症及癔疾相關高苯丙胺酸血 症。 通常，PKU係由苯丙胺酸羥化酶之基因或表現或活性之 缺失而導致高苯丙胺酸血液含量所引起。此等高含量導致 腦損傷及其他神經及身體疾病，包括癲癇發作、皮疹、不 良濃度、執行功能降低及腦白質異常。高苯丙胺酸含量通 常係經由限制苯丙胺酸攝取之嚴格醫療膳食控制。在許多 128231.doc -62 - 200843778 公開病例及系列報導中已使用BH4降低經口攝取後之血液 Phe含量（Blau等人2002)。患有PKU之患者已成功地治療超 過5年且Phe含量已達成臨床上明顯降低，其使得該等患者 可降低其對限制性醫療膳食之依賴。當BH4缺乏時，投與 BH4可大大降低血液苯丙胺酸含量且可改良腦脊髓液中之 神經傳遞素含量。然而，適當治療腦疾病由於βΗ4之不良 CNS滲透而較為困難。預期本文所揭示之刪類似物可類 似地如BH4使用來治療高苯丙胺酸血症。 本發明描述基於投與BH4類似物之醫藥介入血管性病 症。此外’預期呈穩定或其他形式之類似物可用以治療包 含患有各種形式血管疾病（患有或不患有糖尿病）之受檢者 之患者群體’該等血管疾病包括（但不限於）高血壓；頑固 性或未控制之高血壓；肺部動脈高血壓；特發性肺動脈高 壓；、新生兒肺動脈高壓（PPHN);及包括鐮狀細胞病之溶血 性負血，油狀動脈疾病；任何動脈之動脈粥樣硬化，該等 動脈包括冠狀動脈、頸動脈、腦或周邊也管動脈；中風； 中風後血管痙攣；心肌梗塞；缺企再灌注損傷；充血性心 臟衰竭；移植後缺a再灌注損傷；移植後㈣損傷；血管 痙攣；血塊形成， ·企栓形成；凝結；凝血；内皮細胞損 傷；器：及組織之氧流不足；全身企管阻力增加(高血 壓）；血管平滑肌增殖；企管狹窄（窄化）及發炎進程；缺也 再灌注損傷；高血壓；糖尿病；糖尿病性異種移植血管疾 病；心血管疾:病；周邊血管疾病；間歇性跛行；高膽固醇 血症相關金管疾病；吸煙相& 及理祁關血官疾病；或源自缺血及/ 128231.doc •63· 200843778 或血管發炎之神經退化性病狀。 因此，本發明之方法涵蓋治療此等病狀中之任一者。該 等基於刪之組合物可單獨或與通常用於治療包括糖： 病'金管疾病、高血壓及高脂質血症之相關臨床症狀或潛 在病症之任何其他治療劑及/或介入（包括本文所述之已知 治療劑）組合投與。 本發明之特定實施例係關於向受檢者單獨或與習知血管 治療組合投與包含麵或其前軀物或衍生物之類似物之組 合物來治療血管功能障礙，丨中與未單獨或與習知血管治 療組合投與類似物之濃度相比，單獨或與f知血管治療組 合投與類似物有效改良該受檢者之臨床相關終點。… 示ί1生實知例中，BH4或前軀物或衍生物之類似物係 以有效量投與以使刪反應性患者中之血壓降低平均約5 随Hg ’或使BH4反應性患者中之Ν〇血清或尿含量增加平 均約5/。、1〇%、15%、2〇%或3〇%或高達約鳩％。 亦已表明提高氧化氮合成酶活性亦使增加之超氧化物含 曰咸乂胰島素敏感性提高及抗騰島素症相關血管功能障 礙減），如美國專利第6,41〇,535號所述，該專利以引用的 " 本文中。因此，本發明涵蓋治療糖尿病（I型或II 型)J兩胰島素血症或抗胰島素症。具有抗胰島素症相關 血官功能障礙之疾病包括由抗胰島素症引起或由於抗胰島 素症加重之疾病’或由於抗胰島素症治癒延遲之疾病，諸 如高血壓、古η匕併丄 间細貝血症、動脈硬化、冠狀動脈血管收縮絞 痛勞力型纹痛、腦血管收縮病變、腦血管機能不全、腦 128231.doc -64· 200843778 血管痙攣、周邊循環病症、經皮冠狀動脈成形術（pTCA)或 冠狀動脈繞道移植術（CABG)之後冠狀動脈再狹窄、肥胖 症、非胰島素依賴型糖尿病、高胰島素血症、脂質代謝異 吊、冠狀動脈硬化心臟病或其類似疾病，只要其與抗胰島 素症相關即可。預期當向患有此等疾病之患者投與冊4 時，其可藉由活化NOS功能、提高N〇產生及抑制活性氧 物貝產生以改良血官内皮細胞病症來預防或治療此等疾 病。翻亦可減少例如視網膜病3戈腎病之糖尿病後續併發 症0

3U 由nNOS過量產生那與中風、偏頭痛、阿兹海默氏症 (Alzheimeris dlsease)及對嗎啡鹼之耐藥性及依賴性有關。 可投與刪衍生物用於此等病狀中之任-者。可投與BH4 衍生物之其他例示性神經精神異常包括帕金森氏症、阿兹 海默氏症、精神分裂症、類精神分裂症精神障礙、分裂情 感性精神障礙、暫時性精神錯亂、妄想症、共享型精神 病、由於-般醫學病狀之精神病、物質誘發精神病、盆他 精神病、遲發性運動不能、馬查多 '約瑟夫病(Μ—· J_Ph disease)、脊髓小腦變性症、小腦共濟失調、肌張 力障礙L f生疲勞症候群、急性或慢性抑蠻症、慢性應激 症候群、肌肉纖維疼痛、偏頭痛、注意力不；i過動症1 極性病症及自閉症。神經精神異常可能與㈣㈣化酶^ 能降低或色胺酸經化酶功能降低相關。本文之神經精神異 吊視情況不包括帕金森氏症、抑f症及阿兹海默氏症。 根據本發明之方法，刪衍生物可與一或多種其他神經 128231.doc -65- 200843778 精神病學活性劑共同投與，該等活性劑包括抗抑鬱劑；神 經傳遞素前軀物，諸如色胺酸、酪胺酸、血清素；活化去 甲腎上腺素系統之藥劑，諸如洛夫帕明（lofepramine)、地 昔帕明（desipramine)、瑞波西汀（reboxetine)、酷胺酸；優 先作用於血清素之藥劑；去甲腎上腺素與血清素吸收組合 抑制劑，諸如文拉法辛（venlafaxine)、度洛西、;丁 (duloxetine)或米那普侖（milnacipran);及為多巴胺與去甲 腎上腺素再吸收組合抑制劑之藥物，諸如安非他酮 (bupropion) 〇 在例示性實施例中，所投與之BH4或前軀物或衍生物之 量使BH4反應性患者中之酪胺酸羥化酶功能或色胺酸羥化 酶功能提高至少 5%、10%、15%、20%、25%、30%、 3 5%、40%、50%、75%或100%，或使BH4反應性患者中L-多巴或血清素之神經傳遞素含量增加至少5%、10%、 15%、20%、25%、30%、40%、50% ' 75%或 100% 〇 例示性代謝障礙包括高苯丙胺酸血症，例如輕度苯丙嗣 尿症、典型苯丙酮尿症、嚴重苯丙酮尿症、與BH4缺乏相 關之非常型或惡性苯丙酮尿症、肝病相關高苯丙胺酸血症 及瘧疾相關高苯丙胺酸血症。例示性患者群體包括嬰兒、 兒童、少年、成人、生育年齡之女性及懷孕女性。在一些 實施例中，在未以該類似物或前軀物或衍生物治療（例如 預治療）的情況下個體血漿苯丙胺酸濃度大於1000 μΜ，且 以有效量投與該化合物可使個體之血漿苯丙胺酸濃度降低 至低於約1000 μΜ，或低於約800 μΜ，或低於約700 μΜ， 128231.doc -66- 200843778 或低於約600 μΜ，或低於約500 μΜ，或低於約45〇 μΜ ± 15 μΜ 〇 實例 提供以下實例說明本發明，但不欲限制其範轉。 ΒΗ4類似物之合成 實例1- ΒΗ4二-(十二烷酸酯） 此實例描述ΒΗ4類似物之合成。 將ΒΗ4溶解於適當溶劑中且與莫耳過量之十二烷酸氯化 物在咪嗤存在下反應。將反應物在室溫下攪拌隔夜且將所 得二醢基ΒΗ4類似物分離且再結晶。 實例2 -乙酸2·乙醯氧基-1-(5-乙醯基-2·胺基-4-側氧基· 3,4,5,6,7,8 -六氮-嗓咬-6 -基）_丙酿 〇

# 使2·胺基·6-(1，2-二羥基-丙基）-5,6,7,8-四氫-1H-喋啶-4- 酮二鹽酸鹽（0·1 g，0.32 mmol)於乙酸（3 ml)中形成漿液。 > 添加乙酸酐（300 μ!>, 3.2 mmol)且將該混合物加熱至回流歷 9 . 時12 h。將反應物濃縮且藉由製備型RP-HPLC純化粗物質

， 以產生白色固體狀之最終產物（0.096 g，82%)。4 NMR (CD3OD) δ 5.15 (dd，J = 2.4 Hz，J = 10 Hz，1H)，4.95-4.90 (m，1H)，3.36 (d，J = 13·6 Hz，1H)，3.22 (dd，J = 4·4 Hz，J = 13.2 Hz，1H)，2·16 (s，3H)，2.09 (s，3H)，1.85 (s，3H)，1.26 128231.doc -67- 200843778 (d，J = 6·4 Hz，3H)· MS: ESI (正）·· 368 (M+H)。 實例3 -丙酸1-(2-胺基側氧基_5_丙醯基-3,4,5,6,7,8· 六氫-嗓咬-6-基）_2_丙醯基氧基-丙醋

η2ν 藉由實例2中所述之方法，使用胺基-6_(1，2-二羥基-丙

基）-5,6,7,8-四氫-1Η-喋啶-4-酮二鹽酸鹽（0.2 g，0.64 mmol)、丙酸酐（0·83 ml，6·4 mmol)及丙酸（6 ml)製備該標

題化合物以產生白色固體狀之產物（〇·20 g，75。/〇)。4 NMR (DMS〇-d6) δ 10.11 (s，1H)，6·99 (d，J = 5·0 Hz，1H)，6.23 (s，2H)，4.96 (dd，J = 2.5 Hz，J = 10.1 Hz，1H)，4.84-4.78 (m，1H)，4.70 (dd，J = 4.1 Hz，J = 10.1 Hz，1H)，3.15 (dd，J =5.3 Hz，J = 13 Hz，1H)，3.03 (dd5 J = 4.5 Hz，J = 13 Hz， 1H)，2.67-2.57 (m，1H)，2·40·2·35 (m，2H)，2·27-2·20 (m， 1H)，2.15-2.03 (m，2H)，1.17 (d，J = 6·6 Hz，3H)，1.05 (t，J =7.5 Hz，3H)，0.92 (dt，J = 1.8 Hz，J = 7·5 Hz，6H)· MS: ESI (正）·· 410 (M+H)。 實例4 · 丁酸1-(2-胺基-s-丁醯基_4_侧氧基_3,4,5,6,7,8-六氩·喋啶-6-基）-2-丁醯基氧基·丙酯

128231.doc -68- 200843778 藉由實例2中所述之方法，使用2_胺基_6_(1，2-二羥基_丙 基）-5,6,7,8-四氫喋啶-4_ 酮二鹽酸鹽（〇·2 g，〇·64 mm〇1)、丁酸酐（1.05 ml，6.4 mmol)及丁酸（6 ml)製備該標 題化合物以產生白色固體狀之產物（0.21 g，71%)。4 NMR (CD3OD) δ 5.18 (dd, J = 2.4 Hz, J = 10 Hz, 1H)? 4.98-4.93 (m，1H)，4.89-4.87 (m，1H)，3.34 (s，1H)，3.19 (dd，J = 4·4 Hz，J = 13·2 Hz，1H)，2.62-2.54 (m，1H)，2.45-2.39 (m，lH)， 2.36 (t，J = 7·2 Hz，2H)，2·1〇 (t，J = 7·5 Hz，2H)，1.70-1.47 (m，6H)，1·27 (d，J = 6.6 Hz，3H)，0.98 (t，J = 7·4 Hz，3H)， 0.90-0.85 (m，6H). MS: ESI (正）:452 (M+H)。 實例5 · 2-胺基_4_甲基·戊酸2_(2_胺基冰側氧基_ ^丸洛^儿六氩-喋啶+基以羥基小曱基-乙酯二鹽酸鹽

a·) 2-胺基-6-(l，2-二羥基·丙基側氧基-4,6,7,8•四氫_1Η· 喋咬_5·甲酸第三丁酯 在氮氣氛下向2-胺基-6-(1，2_二羥基_丙基）_5,6j，心四氫_ 1Η-喋啶-4-酮二鹽酸鹽（ΒΗ4, 5 g，15·9 mm〇1)於吡啶（75 ml)中之攪拌懸浮液中添加二碳酸二_第三丁酯（5·2 & a』 mmol)。攪拌該混合物，隨後再添加BH4(5 g，159 及一石反酸一 第三丁酯（5·2 g，23.8 mmol)。亦添加4-(二曱 基胺基）吡啶（催化用）且在室溫下氮氣氛中攪拌該混合物 h。在真空中蒸發溶劑，且將殘餘物置於高真空下μ七。 128231.doc -69- 200843778 將該殘餘物溶解於甲醇（150 ml)中且向該溶液中添加刈g MP-奴酸酯（B1〇tage，3.14 mmol/g)。在室溫下輕輕攪拌該 /m a物12 h經由秒藻土過濾該混合物，且在真空中蒸發 濾液以產生黃色固體，其無需進一步純化即可使用。ms: ESI (正）：342 (M+H)。 b·) 6-(1,2-二羥基·丙基）·2_(二甲基胺基-亞甲基胺基）4_侧 氧基-4,6,7,8-四氫-ιη_喋啶_5·甲酸第三丁酯 將步驟a)之產物溶解於75 mL DMF中且以队沭二甲基甲 醯胺一乙醇縮乙醛（13 mL，76.2 mmol)處理。在室溫下攪 拌該混合物2 h。在高真空（溫度低於5〇〇c)下蒸發溶劑。藉 由矽膠急驟層析（於DCM中之〇至20%甲醇梯度溶離）純化殘 餘物以產生淡黃色固體狀之產物（經兩步，5·7 g，45%產 率）。4 NMR (CD3〇D) δ 8·53 (s，1H)，4 12 ⑽，j = 4 2 Hz， J = 1〇·5 Hz，1H)，3.90 (m，1H)，3 77 (d，卜 12 6 Hz，1H)， 3.42 (d? 1=10.5 Hz, 1H)5 3.26-3.18 (m? 1H), 3.15 (s5 3H) 3.07 (s? 3H), 1.46 (s5 9H), 1.20 (d, J = 6.3 Hz5 3H). MS: ESI (正）：397 (M+H)。 c·) 6-[2-(2-第三丁氧基羰基胺基·3_甲基_丁醯基氧基•羥 基·丙基】-2-(二甲基胺基_亞？基胺基）_4_側氧基_4,6,7,8_四 氫-1Η-喋啶-5-甲酸第三丁輯 在0°C下向N-Boc-L-纈胺酸（19 12 g，88 mm〇i)於二氯甲 烧（DCM，4〇 mi)中之攪拌溶液中添加Dcc(9 ] g，44匪〇1) 於DCM(40 ml)中之溶液。攪拌所得溶液丨h之後形成白色 沈澱物。過濾該白色固體且將渡液添加至步驟b)之產物 128231.doc -70- 200843778 (4.4 g，11 mmol)溶解於吡啶（200 mL)中之攪拌溶液中。在 室溫下氮氣鼠中攪拌該混合物12 h。藉由添加甲醇（2〇 mj) 使反應混合物中止反應。在真空中蒸發溶劑且藉由急驟矽 膠層析（於DCM中之0至6%甲醇梯度溶離)純化殘餘物以產 生淡黃色固體狀之副標題產物（藉由HPLC，〜9:1區位異構 混合物，3·1 g，47%產率）。4 NMR (DMSO-d6) δ 10.61 (s，1Η)，8·38 (s，1Η)，7·04 (d，J = 8·7 Ηζ，1Η)，6.78 (d，J = 4·5 Hz，1H)，5·03 (d，J =3.6 Hz，1H)，4.77 (d，J =5.7 Hz， 1H)，4·04-3·92 (m，1H)，3·82·3·72 (m，1H)，3.66-3.54 (m， 1H)，3.09 (s，3H)，2.96 (s，3H)，2.06-1.80 (m，1H)，1.37 (s， 18 H)，1·20 (d，J = 6·6 Hz，3H)，0.92-0.82 (m，1H)，0.77 (d， J - 6·6 Hz，6H). MS: ESI (正）：596 (M+H)。 d·) 2-胺基·6-丨2-(2-第三丁氧基羰基胺基·3_甲基_丁醯基氧 基）-1-羥基-丙基]-4-側氧基·4,6,7,8-四氫·1Η·喋啶-5-甲酸 第三丁酯 將步驟C)之產物（3.1 g，5.15 mmol)溶解於乙腈（ACN，130 ml)中且以IN HC1(13 mL，I3 mmol)處理。在室溫下攪拌該 混合物直至原料不存在（〜18 h)。藉由添加碳酸氫鈉飽和溶 液中和反應混合物。隨後在真空（溫度低於4〇<t )中蒸發溶 劑以產生淡黃色固體。將該固體mDCM(5〇 中形成漿液 且過濾。蒸發濾液且藉由急驟矽膠層析（於DCM中之〇至 20 /。甲醇梯度溶離）純化殘餘物以產生副標題產物（〜工區 位異構此 口物，175 g，63%)。1h NMR (CD3〇D) δ 51〇_ 4.98 (m, 1H), 4.20-4.10 (m? 1H^ 4.02-3.90 (m5 1H)5 3.72 128231.doc -71- 200843778 (d，J = 12.3 Hz，1H)，3.59 (d，J = 9·6 Hz，1H)，3.20 (dd，J = 4.5 Hz，J = 12.9 Hz，1H)，2·16-1·96 (m，1H)，1.46 (s，9H)， 1_42 (s，9H)，1.30 (d，J = 6·6 Hz，3H)，0.88 (d，J = 6.6 Hz， 3H)，0.84 (d，J = 6.9 Hz，3H)· MS: ESI (正）：541 (M+H)。 e·) 2·胺基-3-甲基-丁酸2-(2-胺基-4-侧氧基_3,4,5,6,7,8-六 氫·喋啶-6-基）_2·羥基-1·甲基-乙酯二鹽酸鹽 將步驟d)之產物（ι·75 g，3.24 mmol)溶解於二噁烷（1〇 ml)中且以4 N HC1/二。惡烧（80 mL，320 mmol)處理。在室溫 下在氮氣氛中攪拌該反應混合物2 h。將產物藉由過濾分 離且於45 °c下在氮氣吹洗真空烘箱中乾燥以產生1.34 g(100%)白色固體狀之標題化合物。NMR (CD3OD) δ 5·11 (t，J = 6·6 Ηζ，1Η)，4.22 (dd，J = 2.4 Hz，J = 6·9 Ηζ， 1Η)，4·02 (d，J = 4·5 Ηζ，1Η)，3·73 (d，J = 11.4 Ηζ，1Η)， 3.66 (s，2H)，3.61-3.57 (m，2H)，2.4-2.3(m，1H)，1.43 (d，J =6.3 Hz，3H)，1.12-1.05 (dd，J = 7.0 Hz，J = 12 Hz，6H)· MS: ESI (正）：341 (M+H)。 f·) 2-胺基-3·甲基_ 丁酸2-(2•胺基側氧基_3,4,5,6,7,8·六 氫-喋啶-6_基）-2-羥基-1-甲基_乙酯二鹽酸鹽 替代方法e·)，將步驟c之產物（〇·5 g，〇 8 mmol)在氬氣氛 下〉谷解於二噁烷（5 mi)中且以4 n HC1/二噁烷（20 mL，80 mmol)處理。在室溫下攪拌15小時之後，形成白色固體。 將该物質分離且隨後乾燥以產生〇 24 g(73%)標題化合物。 實例6 - 2-胺基-3-甲基-戊酸2-(2·胺基-4_側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫-喋啶-6_基卜2_羥基_1-甲基_乙酯 128231.doc -72· 200843778

第三丁氧基幾基胺“甲基戊酿基 基-丙基Μ仁甲基胺基_亞甲基胺基)_4· 氫-1H-喋啶_S•甲酸第三丁醋 ，，7,8_四 除使用N-Boc-L_異白胺酴a 7Λ t 實例5牛驟、由… · §，16 mmoi)外，藉由與 :C戶斤述相同之方法處理實例5步驟…之產物以

於下一步驟中。MS: ESI (正）：610 (M+H)。 b·) 2-胺基-6-[2·(2-第三丁氧基幾基胺基_3·甲基戊醯基氧 基）-1-羥基-丙基】_4_侧氧基·4,6,7,8·四氫-1Η-喋啶曱酸 第三丁酯 產生淡黃色固體狀之副標題化合物（029 g, 48%)。層析之 後所獲得之產物仍含有雜質且在未進一步純化之情況下用 除藉由製備型RP-HPLC純化反應物殘餘物外，藉由實例 5步驟d)中所述之方法處理步驟a)之產物（〇 29 g，〇 48 mmol)以產生灰白色固體狀之副標題化合物（〇.1〇 g， 38%)。4 NMR (DMSO_d6) δ 9·83 (s，1H)，7.04 (d，J = 8.7 Hz，1H)，6·68 (d，J = 4·8 Hz，1H)，5.99 (s，2H)，5.05 (bs， 1H)，4.74 (d，J=6.0 Hz，1H)，4.04-3.90 (m，1H)，3.88-3.78 (m，1H)，3.56 (dd，J=4.8 Hz及 J=12.3 Hz，1H)，3.48-3.30 (m， 1H)，3.00 (dd，J=4.2 Hz及 J=12.3 Hz，1H)，1.78-1.60 (m，1

H)，1.37 (s，18H)，1·18 (d，J=6.3 Hz，3H)，1.16-1.00 (m，2H) 0.77 (d，J=5.4 Hz，3H)，0.75 (d，J=5.1 Hz，3H)· MS: ESI 128231.doc •73· 200843778 (正）：555 (M+H) 〇 e·) 2-胺基·3-甲基-戊酸2-(2-胺基^^侧氧基-3,4,5,6,7,8_六 氫-喋啶_6-基）-2-羥基·ι_甲基-乙酯二三氟乙酸鹽 以於2 ml DCM中之二氟乙酸（2 mi，27 mmol)處理步驟b) 之產物（0·1 g，0.18 mmol)。在室溫下氮氣氛中攪拌該混合 物1 h。藉由添加20 mi二乙醚使產物沈澱。將產物過濾且 於氮氣吹洗真空烘箱中乾燥以產生白色固體狀之標題化合

物（〇·1〇 g，100%)。4 NMR (CD3OD) δ 5.11 (t，J == 6.6 Hz 1H)，4·09-4·07 (m，1H)，4.05 (d，J = 3·8 Hz，1H)，3·6〇、3·54 (m，2H)，3.43-3.38 (m，1H)，2.07-2.00 (m，1H)，1·51-1·44 (m，1H)，1·42 (d，J = 6·3 Hz，3H)，1.37-1.29 (m5 1H)，1·06 (d，J = 7·0 Hz，3H)，0·96 (t，J = 7·4 Hz，3H). MS·· ESI (正）·· 355 (M+H) 〇 實例7 - 2,6-二胺基-己酸2-(2_胺基冰側氧基_ 3,4,5,6,7,8-六氫-喋啶-6-基>2-羥基_1_甲基_乙酯三_鹽酸鹽

H2N N N Η a·) 6-[2-(2,6-雙-第三丁氧基羰基胺基-己醯基氧基羥 基-丙基卜2·(二甲基胺基·亞甲基胺基）-4•侧氧基-4,6,7,8_四 氫·1Η_喋咬-5-甲酸第三丁酯 除使用 N-Boc-L-離胺酸-N-Boc(8.26 g，23·8 mmol)且在 真空中蒸發溶劑之後將粗物質溶解於乙酸乙酯中且依次以 1 N#'板g文（2 X )、飽和奴酸氧納（2 X)及鹽水洗滌外，藉由與 128231.doc -74« 200843778 貝例5步驟d)中所述相同之方法處理實例$步驟”之產物。 以硫酸納乾燥有機層且在真空中蒸發溶劑。藉由急驟矽膠 層析（於DCM中之〇至8%甲醇梯度溶離）純化粗產物以產生 淡黃色固體狀之副標題化合物（2·55 g，74%)。層析之後所 獲得之產物仍含有雜質且在未進一步純化之情況下用於下 一步驟中。1H NMR (CD3〇D) δ 8.53 (s，1H)，5.08-4.96 (m， 1H)，4·24-4·12 (m，1H)，4.10-3.90 (m，1H)，3.76 (d，J = 12.3 Hz，1H)，3·59 (d，J = ΐι·4 Hz，1H)，3.28-3.18 (m5 1H)，3.15 (s，3H)，3.08 (s，3H)，3·06-2·94 (m，2H)，1.56-1.36 (m， 33H)，1.31 (d，J = 6.6 Hz，3H). MS: ESI (正）：725 (M+H)。 b·) 2-胺基-6-[2-(2,6-雙-第三丁氧基羰基胺基-己醯基氧 基）-1-羥基-丙基]-4-侧氧基_4,6,7,8_四氫-1H·喋啶-5-甲酸 第三丁酯 除藉由製備型RP_HPLC純化反應物殘餘物外，藉由實例 5步驟d)中所述之方法處理步驟a)之產物（2.55 g，3.52 mmol)以產生灰白色固體狀之副標題化合物（1·3〇 g， 55%)。分析HPLC表明兩種區位異構物以8:2之比率存在。 NMR (CD3OD) ^ 5.08-4.96 (m5 1H)? 4.22-4.10 (m? 1H)5 4·10·3·96 (m，1H)，3.72 (d，J = 12·9 Hz，1H)，3.61 (d，J = 9·6Ηζ，1Η)，3·28-3·16(ιη，1Η)，3·08-2·94(ιη，2Η)，1·86-1·36 (m，33H)，1·3〇 (d，J = 6.6 Hz，3H)· MS: ESI (正）：670 (M+H)。 c·) 2,6-二胺基-己酸2-(2·胺基-4-侧氧基-3,4,5,6,7,8-六氩-喋啶-6-基）-2-羥基-l-甲基·乙酯三-鹽酸鹽 128231.doc -75- 200843778 藉由實例5步驟e)中所述之方法處理步驟b)之產物（1.30 g，1.94 mmol)以產生白色固體狀之標題化合物（ο.% g， 100%) 〇 ]H NMR (CD3OD) δ 5.09-5.04 (m, 1Η)5 4.24 (dd5 J = 2.7 Hz，J = 7·2 Hz，1H)，4.17 (t，J = 6.3 Hz，1H)，4.00 (t，J = 6.3 Hz，1H)，3.74-3.56 (m，3H)，2.96 (t，J = 7·7 Hz，3H)， 2.03-1.93 (m，3H)，1.76-1.68 (m，3H)，1.61-1.51 (m，3H)， 1·47 (d，J = 6·3 Hz，3H). MS: ESI (正）：370 (M+H)。

實例8 - 4-胺基-4-(1-叛基·乙基胺曱醯基）_ 丁酸2_(2·胺 基-4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫_喋啶-6-基）_2_羥基-1_甲基-乙酯二鹽酸鹽

a·) 6-{2-μ-第三丁氧基羰基胺基_4_(1-第三丁氧基羰基·乙 基胺甲醯基）-丁醯基氧基】經基-丙基卜2 _(二甲基胺基-亞 曱基胺基）-4_側氧基-4,6,7,8-四氫-1H-嗓咬-5-甲酸第三丁酯 向實例19步驟b)之產物（0.45 g，1.20 mmol)於σ比咬（1〇 ml)中之攪拌溶液中添加EDC(〇 23 g，12〇 mm〇1)及 DMAP(〇.15 g，1·20 mmol)。在室溫下氮氣氛中攪拌該混合 物2 h，繼而添加實例4步驟c)之產物（〇12 g，〇.3〇 。 再攪拌該混合物48 h。在真空中蒸發溶劑且藉由製備型 RP-HPLC純化殘餘物以產生淡黃色半固體狀之副標題化合 物（〇·12 g，55%)。層析之後所獲得之產物仍含有雜質且在 128231.doc -76- 200843778 未進一步純化之情況下用於下一步驟中。分析HPLC表明 區位異構比率為1〇:1。MS: ESI (正）：753 (M+H)。 b·) 2_胺基-6气2-丨4_第三丁氧基羰基胺基-4_(1-第三丁氧基 叛基-乙基胺甲醜基）_丁醯基氧基卜I羥基-丙基卜側氧基_ 4,6,7,8-四氫-1H-喋啶甲酸第三丁酯 除藉由製備型RP-HPLC純化反應物殘餘物外，藉由實例 5步驟d)中所述之方法處理步驟幻之產物（〇12 g，〇16 mmo1)以產生灰白色固體狀之副標題化合物（0.048 g， 44%)。4 NMR (CDC13) δ 9.89 (s，1H)，5.71 (bd，J = 6.0 Hz，2H)，5·08-4·90 (m，1H)，4·88·4·68 (m，1H)，4.66-4.54 (m，1H)，4.32-4.10 (m，1H)，4.08-3.96 (m，1H)，3.88-3.70 (m，2H)，3.36-3.26 (m，1H)，2.40-1.76 (m，6H)，1.74-1.58 (m，1H)，1.56-1.36 (m，27H)，1.31 (d，J = 6.6 Hz，3H). MS·· ESI (正）：698 (M+H)。 c·) 4_胺基-4·(1-羧基-乙基胺甲醯基卜丁酸2_(2-胺基冰側氧 基-3,4,5,6,7,8-六氫-喋啶基）_2·羥基-1-甲基-乙基酯二鹽 酸鹽 以於1 ml DCM中之三氟乙酸（1 ^1，27 mmol)處理步驟b) 之產物（0.048 g，0.07 mmol)。在室溫下氮氣氛中攪拌該混 合物2 h。藉由添加20 ml乙醚使產物沈澱。將產物過濾且 於氮氣吹洗真空烘箱中乾燥以產生白色固體狀之標題化合 物（0.051 g，98%)。4 NMR (CD3OD) δ 4.45-4.39 (m, 2H)， 4.23-4.20 (m，2H)，3·94 (t，J = 6·3 Hz，1H)，2·60-2·55 (m， 2H)，2·49-2·24 (m，2H)，2.17-2.12 (m，3H)，1·45 (dd，J = 7.4 -77- 128231.doc 200843778

Hz，J = 9·7 Hz，6H)· MS: ESI (正）：442 (M+H)。 實例9 -吡咯啶-2-甲酸2-(2-胺基_4_侧氧基-3,4,5,6,7,8· 六氫-喋啶-6-基）-2-羥基-1-甲基-乙酯二鹽酸鹽

a·)吡咯啶-I，2-二甲酸2-(2·[、第三丁氧基羰基-2_(二甲基 胺基-亞甲基胺基）-4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫-喋啶-6-基卜 2-羥基-1-甲基-乙基-第三丁酯 除使用N-Boc-L-脯胺酸（13.6 g，63.1 mmol)外，藉由與 實例5步驟c)中所述相同之方法處理實例5步驟b)之產物以 產生棕褐色固體狀之副標題化合物（52 g，69%)。MS: ESI (正）：594 (M+H)。 b·)吡咯啶·1，2·二甲酸2_[2_(2_胺基第三丁氧基羰基·4_ 侧氧基_3,4,5,6,7,8-六氫-嗓咬-6_基）-2-經基-1_甲基_乙基】 酯1-第三丁酯 除在室溫下攪拌反應物24 h，隨後藉由急驟矽膠層析（自 於DCM中之(M4%甲醇梯度溶離）純化反應物之殘餘物繼而 藉由製備型RP-HPLC分離區位異構混合物外，藉由與實例 5步驟d)中所述相同之方法處理步驟a)之產物（52 g，876 mmol)以產生淺黃色固體狀之副標題化合物（15 g，32%)。 MS: ESI (正）·· 539 (M+H)。另一區位異構物以白色固體狀 獲得（0.6 g，13%)。MS: ESI (正）·· 539 (M+H)。 c·)吡咯啶·2·甲酸2·(2_胺基·‘侧氧基-3,4,5,6,7,8_六氫_喋 128231.doc -78- 200843778 唆-6-基）-2-經基-1-甲基-乙酿二鹽酸鹽 除授拌反應物24 h外，藉由與實例5步驟e)中所述相同之 方法處理步驟b)之產物以產生淺黃色固體狀之標題化合物 (1.2 g, 90〇/〇) 〇 NMR (CD3OD) δ 5.10 (m, 1H), 4>48 (t?; = 7.9Hz，lH)，4.17(dd，I = 2.2HZ，：r = 72Hz,1H),3 73_ 3.66 (m, 1H), 3.57-3.55 (m, 2H), 3.44-3.36 (m, 3H), 2.51-2.43 (m，1H)，2.18-2.05 (m，3H)，1.43 (d，卜 6 4 Hz，3H) MS: ESI (正）：339 (M+H)。 實例K)-2-胺基I甲基-丁酸M2_胺基j甲基_丁醢基氧 基）_1-(2·胺基-4_側氧基-3,4,5,6,7,8·六氫·嗓啶冬基）_丙酯 三鹽酸鹽

a·) 6-[1，2-雙-(2-第三丁氧基羰基胺基-3_甲基-丁醯基氧 基）-丙基]-2-(二甲基胺基-亞甲基胺基广4-側氧基_4,6,7,8_ 四氫-1H-喋啶-5-甲酸第三丁酯 在 〇°C 下向 N-Boc-L-纈胺酸（9.08 g，41.8 mmol)於二氣甲 烧（DCM，20 ml)中之攪拌溶液中添加dcC(4.3 g，20.9g mmol)於DCM(20 ml)中之溶液。攪拌所得溶液1 h之後形成 白色沈澱物。將該白色固體過濾且將濾液添加至實例5步 驟b)之產物（1.8 g 4.54 mmol)溶解於ϋ比咬（75 ml)中之攪拌 128231.doc -79- 200843778 /合液中。添加4-(二甲基胺基）吡啶（催化用）且在室溫下氬 氣氛中攪拌该混合物12 h。藉由添加甲醇㈤丨）使反應混 合物中止反應且在真空中蒸發溶劑。將粗物質溶解於乙酸 乙酉曰中且依次以i N檸檬酸、飽和碳酸氫鈉及鹽水 洗滌。以硫酸鎂乾燥有機層，且在真空中蒸發溶劑。藉由 急驟矽膠層析（於DCM中之〇至5%曱醇梯度溶離）純化粗產 物以產生κ色固體狀之副標題化合物（i ·6 g，45〇/〇)。ms: ESI (正）·· 795 (M+H)。 b·) 2-胺基·6-[1，2-雙-(2-第三丁氧基羰基胺基·3_曱基-丁醯 基氧基）-丙基】-4-侧氧基-4,6,7,8-四氫-1Η-喋啶-5-甲酸第三 丁酯 將步驟a)之產物（ΐ·6 g，2·02 mmol)溶解於乙腈（ACN，50 ml)中且以1 n HC1(5 ml, 5 mmol)處理。在室溫下攪拌該混 合物直至原料不存在（〜2〇 h)。藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液 中和反應混合物。在真空（溫度低於4 〇 °C )中蒸發溶劑以產 生棕褐色固體。將該固體於甲醇中形成漿液且過濾。將濾 液蒸發且藉由急驟矽膠層析（於DCM中之0至12%甲醇梯度 溶離）純化殘餘物以產生棕褐色固體狀之副標題化合物 (〇·45 g，30%)。4 NMR (DMSO-d6) δ 9.92 (s，1H)，7.34 (d， J = 7·5 Hz，1H)，6.90 (d，J = 8·4 Hz，1H)，6·82 (s, 1H)，6·04 (s，2H)，4·92 (d，J = 7·8 Hz，2H)，4.17 (bs，1H)，3.84-3.72 (m，2H)，3.25 (bs，1H)，2.97 (d，J = 8·7 Hz，1H)，2·07-1·92 (m，2H)，1.41-1.28 (m，29Ή)，0.94 (d，J = 6·6 Hz，6H)，0·75 (d，J = 6·6 Hz，3H)，0·71 (d，J = 6·9 Hz，3H). MS: ESI (正）: 128231.doc -80 - 200843778 740 (M+H) 〇 c·) 2-胺基-3-甲基-丁酸2-(2-胺基-3·甲基-丁醢基氧基 胺基-4-側氧基-3,4,5,6,7,8_六氫-嗓唆-6-基）-丙醋二鹽酸鹽 將步驟c)之產物（1·〇 g，1.35 mmol)在氬氣氛下溶解於二 • 噁烷（10 ml)中且以 4 N HC1/二噁烷（20 ml，80 mmol)處理。 在室温下攪拌反應混合物2 h。將產物藉由過濾分離且在 ， 45°C下於氮氣吹洗真空烘箱中乾燥以產生0.78 g(100%)棕 褐色固體狀之標題化合物。4 NMR (CD3OD) δ 5·50-5·4ΐ • (m，2Η)，4.10 (d，J = 4·2 Ηζ，1Η)，4·00 (d5 J = 4·5 Ηζ，1Η)， 3.66 (s5 2H)5 3.61-3.55 (m, 1H)? 3.46-3.40 (m5 1H), 2.42- 2.32 (m，2H)，1.47 (d，J = 6·3 Hz，3H)，1.47 (d，J = 7.2 Hz， 3H)，1.09 (d，J = 6·9 Hz，6H)，1·〇5 (d，J = 6·9 Hz，3H)· MS: ESI (正）：440 (M+H)。 實例11 _ 2,6-二胺基-己酸2-(2-胺基-4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫-嗓咬-6-基）-2-(2,6-二胺基-己酿基氧基甲基-乙醋 五鹽酸鹽 〇

a·) 6-[1，2-雙-(2,6-雙-第三丁氧基羰基胺基-己醢基氧基）_丙 基】-2-(二甲基胺基··亞曱基胺基）-4-側氧基·4,6,7,8-四氫-1Η-喋啶-5-甲酸第三丁酯 除使用 N_Boc-L-離胺酸-N_Boc(28.9 g，83.5 mmol)外， 128231.doc -81 - 200843778 藉由與實例10步驟a)中所述相同之方法處理實例5步驟b)之 產物以產生淺黃色固體狀之副標題化合物（3 2 g，33%)。 NMR (CD3OD) δ 8.56 (s，1Η)，7·19 (d，J = 6.6 Hz, 1H)， 5.13-5.05 (m，2H)，4.40 (m，1H)，4.08 (m，1H)，3·94 (m， 2H)，3·43 (d，J = 13·5 Hz，1H)，3.17 (s，3H)，3.09 (s，3H)， 3.05-2.95 (m，4H)，1.82-1.70 (m，3H)，1·47·1·39 (m，48H)， 1.26 (m，2H)· MS: ESI (正）：1054 (M+H)。 b·) 2-胺基-6-[l，2-雙-(2,6-雙-第三丁氧基羰基胺基-己醯基 氧基）-丙基]-4-侧氧基·4,6,7,8-四氫-1H-嗓咬-5-甲酸第三丁醋 藉由實例10步驟b)中所述之方法處理步驟a)之產物（3 2 g，3.03 mmol)以產生棕褐色固體狀之副標題化合物（146 g， 48%)。NMR (DMSO-d6) δ 9.92 (s，1H)，7·36 (d，J = 6.0 Ηζ，1Η)，6.99 (d，J - 8·1 Ηζ，1Η)，6.77-6.73 (m，3Η)，6·04 (s，2Η)，4.91 (d，J = 8·7 Ηζ，2Η)，4·14 (bs，1Η)，3.87 (d，J = 6.9 Hz5 1H)? 3.72 (bs? 1H)? 3.19 (bs5 1H), 2.97-2.85 (m? 6H)，1.62 (bs，2H)，1.40-1.22 (m，58H)· MS: ESI (正）：999 (M+H) 〇 c·) 2,6-二胺基-己酸2-(2-胺基-4-侧氧基-3,4,5,6,7,8-六氩-嗓 咬-6-基）-2-(2，6 - —^胺基-己酿基氧基）-1-曱基-乙g旨五鹽酸鹽 藉由實例10步驟C)中所述之方法處理步驟|3)之產物（146 g，1.46 mmol)以產生棕褐色固體狀之標題化合物（〇99 g， 68%)〇1HNMR(CD3OD)5 5.52-5.48(m，lH)，5.42.5.39 (m，1H)，4.32 (t，J = 6·2 Hz, 1H)，4·14 (t，J = 6·4 Hz，1H)， 3.65 (s，1H)，3.57-3.50 (m，1H)，3.25-3.22 (m，1H)，2.98 (t， 128231.doc -82 - 200843778 J = 7·8 Hz，4H)，2.16-1.89 (m，4H)，1.79-1.71 (m，4H)， 1·61-1·56 (m，4H)，1·45 (d，J = 6·6 Hz，3H). MS: ESI (正）·· 498 (M+H)。 實例12 -吡咯啶-2-甲酸1·(2-胺基_4_側氧基·3,4,5,6,7,8-六氫-喋啶-6-基）-2-(吡咯啶-2-羰基氧基丙酯三鹽酸鹽

a·)吡咯啶-1，2_二甲酸2-[2-(2·胺基-5-第三丁氧基羰基-2-(二甲基胺基-亞甲基胺基）-4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫-喋 啶-6-基）-1•曱基-2-(1-第三丁氧基羰基-吡咯啶-2-羰基氧 基）-乙基】S旨1-第三丁酯 除使用N-Boc-L-脯胺酸（12.6 g，5.87 mmol)外，藉由與 實例10步驟a)中所述相同之方法處理實例5步驟b)之產物以 產生淺黃色固體狀之副標題化合物（3.0 g，60%)。MS: ESI (正）：791 (M+H)。 b·)吡咯啶·1，2_二甲酸2·[2·(2_胺基-5-第三丁氧基羰基-4-側氧基-3,4,5,6,7,8-六氫·喋啶_6_基）-1-甲基-2-(1-第三丁氧 基羰基-吡咯啶-2-羰基氧基）-乙基】酯1-第三丁酯 藉由實例10步驟b)中所述之方法處理步驟a)之產物（3 g， 3.79 mmol)以產生棕褐色固體狀之副標題化合物（L4 g， 50%)。4 NMR (CD3〇D) δ 5·19-5·14 (m，2H)，4·31 (dd，J = 4·4 Hz，J = 8·1 Hz，2H)，4·09_4·06 (m，1H)，3.49-3.44 (m5 128231.doc -83- 200843778 3H)，3·34 (m，1H)，3.14 (m，1Η)，2·30 (m，1H)，2.08-1 96 (m，4H)，1.89-1.80 (m，4H), 1.48 (s，27H)，ι·42 (m 3H) MS: ESI (正736 (M+H) 〇 c·)吡咯啶-2-甲酸l-(2-胺基-4-侧氧基-3,4，S，6,7,8_六氫·喋 唆-6-基）-2-(11比洛咬-2-幾基氧基）_丙醋三鹽酸鹽 藉由實例10步驟c)中所述之方法處理步驟|^之產物（1 4 g，mmol)以產生深棕褐色固體狀之標題化合物（〇 85 g 82%)。巾 NMR (CD3OD) δ 5.53-5.46 (m, 2H)，4·62 (t J = 8·4 Ηζ，1Η)，4.47 (t，J = 8·4 Ηζ，1Η)，3.82-3.79 (m，1Η)， 3.65-3.59 (m，1H)，3.54-3.32 (m，5H)，2·53-2·44 (m5 2H)， 2·31-2·25 (m，1H)，2·18-2·07 (m，5H)，1·47 (d，J = 6·6 Hz， 3H)· MS: ESI (正）：436 (M+H)。 實例13 -2-胺基-5-(2_胺基_3-甲基_ 丁醯基卜6-(1，2_二羥 基-丙基）·5,6,7,8-四氫-1H-喋啶-4-酮鹽酸鹽

a·) {1-[2-胺基·6_(1，2-二羥基_丙基）侧氧基_4,6,7,8_四氫-1H-嗓咬_5-羰基]_入甲基-丙基}•胺基甲酸第三丁酯 在 〇°C 下向 N-B〇C-L_纈胺酸（4.56 g，21 mmol)於 DCM(15 ml)中之攪;拌溶液中添加dcc(2· 17 g，1 0.5 mmol)於DCM( 10 ml)中之溶液。攪拌所得溶液1 h之後形成白色沈澱物。過 渡該白色固體且將濾液添加至2-胺基-6-(1，2-二羥基-丙基）- 128231.doc -84- 200843778 5.6.7.8- 四氫-1H-嗓。定·4·_ 二鹽酸鹽（3·〇 g，9·5 5 mm〇i)溶解 於比啶（80 mL)中之攪拌溶液中。在室溫下氮氣氛中攪拌 該此β物1 ·5 h。藉由添加甲醇（2〇 mi)使反應混合物中止反 應。在真空中蒸發溶劑且藉由製備型RP-HPLc純化殘餘物 以產生標褐色固體狀之副標題產物（3.2 g，76〇/〇。MS: ESI (正）·· 441 (M+H) 〇 *>·) 2-胺基-5-(2-胺基曱基-丁醯基）_6_(1，2_二羥基_丙基卜 5.6.7.8- 四氫_ijj-嗓咬_4·酮鹽酸鹽 將步驟a)之產物（3· 13 g，7·04 mmol)溶解於二嚼烧（1 〇 m!) 中且以4 N HC1/一噪烧（6〇 mi，240 mmol)處理。在室溫下 氮氣氛中攪拌反應混合物4 h。將產物藉由過遽、自異丙 醇再結晶分離且在45 °C下於真空烘箱中乾燥以產生丨· i 5 g(43 /〇)才不褐色固體狀之標題化合物。1H NMR (CD3〇D) δ 4.64 (dd，J = 4.2 Hz，J = 10.2 Ηζ，1Η)，3.99 (d，J = 6·9 Ηζ， 1H)，3.92 (d，J = 13·2 Ηζ，1Η)，3.71 (m，1H)，3·45 (dd，J = 2·4 Hz，卜 1() Hz，1H)，3·27 (m，1H)，2.17-2.10 (m，1H)， !-2〇 (d5 J = 6.3 Hz? 3H)5 0.95 (dd5 J = 4.8 Hz, J = 6.9 Hz5 6H). MS: ESI (正）：341 (M+H)。 實例14 - 2-胺基-5_(2_胺基_3·甲基_戊醯基）_6_(1，2-二羥 基·丙基）-5,6,7,8·四氫-1H-喋啶酮鹽酸鹽

Η 128231.doc -85 - 200843778 a·) {1-丨2-胺基·6-(1，2-二羥基-丙基）-4-侧氧基-4,6,7,8-四氫-1H-嗓啶-5-羰基]-2·甲基-丁基}-胺基曱酸第三丁酯 除使用N-Boc-L-異白胺酸（4.86 g，21 mmol)外，藉由實 例13步驟a)中所述之方法來製備副標題化合物。將粗物質 溶解於曱醇中且藉由製備型RP-HPLC純化以產生棕褐色固 體狀之副標題化合物（3.48 g，82%)。MS: ESI (正）·· 455 (M+H) 〇 b·) 2-胺基-5-(2-胺基-3-甲基-戊醯基）-6-(1,2·二羥基·丙基）-5,6,7,8-四氫-1H_喋啶-4-酮鹽酸鹽

藉由實例13步驟b)中所述之方法處理步驟a)之產物以產 生淺黃色固體狀之標題化合物（1.67 g，56%)。4 NMR (CD3OD) δ 4·65 (dd，J = 4·2 Hz，J = 10·2 Hz，1H)，4.04 (d， J = 6·6 Hz，1H)，3.94 (d，J = 12·6 Hz，1H)，3.70 (m，1H)， 3.45(dd，J = 2.4Hz，J=l〇Hz，lH)，3.27(m，lH)，h91-1.85 (m5 1H)，1.47-1.40 (m，1H)，1.21 (d，J = 6·3 Hz，3H)， 1.17-1.11 (m，1H)，0.93-0.87 (m，6H)· MS: ESI (正）：355 (M+H)。 實例15 · 2-胺基-5-(2,6-二胺基·己醢基）-6-(1,2-二羥基-丙基）-5,6,7,8·四氫-1H-嗓咬-4·酮二盥酸鹽

a·) {6-【2-胺基-6-(1，2·二羥基_丙基兴4-側氧基-4,6,7,8-四氫-128231.doc -86· 200843778 m-喋啶_5_基】-5-第三丁氧臬 基甲跋第三丁醋 氧基幾基胺基冬側氣基-己基卜胺 除使用N-Boc-L-離胺酸七 丄虫， B〇c(7.28 g5 21 mmol)外，μ 由實例13步驟a)中所述之方 精 來製備副標題化合物。將粗 物質溶解於甲醇中且藉由 稽田裊備型RP-HPLC純化以產生棕褐 色固體狀之副標題化合物(2.16 g，40%)。MS: ESI (正): 570 (M+H)。

b·) 2-胺基-5-(2,6_二胺基_己醯基）-6_(1，2·二羥基-丙基）_ 5,6,7,8 -四氮_1Η•嗓咬-4-嗣鹽酸鹽 除無需再結晶外，藉由實例13步驟b)中所述之方法處理 步驟a)之產物以產生白色固體狀之標題化合物（11 g，

48%) 〇 巾 NMR (CD3OD) δ 4·64 (dd，J = 4.2 Hz，J = ΐ〇·2 Hz，1H)，4·26 (t，卜 6,6 Hz，1H)，3·94 (d，J = 13 Hz，1H)， 3·72_3·66 (m，1H)，3.46 (dd，J = 2.6 Hz，J = 1〇·2 Hz，1H)， 2·90 (t，J = 7·5 Hz，2H)，1.86-1.75 (m，2H)，1.67-1.59 (m， 2H)，1·40-1·33 (m，2H)，1·20 (d，J = 6·6 Hz，3H)· MS: ESI (正）：370 (M+H) 〇 實例16 - 2-胺基-6-(1,2-二幾基-丙基）-5_(»比洛咬-2-幾 基）_5,6,7,8-四氫-1H-喋啶-4-酮二鹽酸鹽

a·) 2_[2_胺基-6_(1，2-二羥基-丙基）-4·側氧基-4,6,7,8-四氫-1H-喋啶-5-羰基]-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯 128231.doc -87 - 200843778 除使用N-Boc-L-脯胺酸（4·5 g，η mm〇1)外，藉由實例i3 步驟a)中所述之方法來製備副標題化合物。將粗物質溶解 於曱醇中且與MP_碳酸酯（Bi〇tage，314 g/mm〇1)一起攪 拌’隨後藉由製備型rP_HPLC純化以產生白色固體狀之產 物（2 g，48%)。4 NMR (DMSO-d6) δ 9.87 (s，1H)，7·〇〇 (d J = 5_4 Hz，1H)，6·26 (s，2H)，4.87 (dd，J = 3.3 Hz，J == 8·7 Hz，1H)，4.61 (d，J = 4.8 Hz，1H)，4·31 (dd，J = 4·5 Hz，J =： 10.2 Hz，1H)，4·11 (d，J = 5.7 Hz，1H)，3.62 (t，J = 6.0 Hz， 1H)，3.52 (dd，J = 5.7 Hz，J = 12·3 Hz，1H)，3.26-3.16 (m， 3H)，2.95 (dd，J = 4·8 Hz，J = 10 Hz，1H)，1.89-1.82 (m 1H)，1.65.1.54 (m，2H)，1.35 (s，10H)，0.97 (d，J = 6·3 Hz， 3H). MS: ESI (正）：439 (M+H)。 b·) 2-胺基-6-(l，2-二羥基-丙基）-5-(吡咯啶-2-羰基）-5,6,7,8-四氮-1H-喋啶_4_酮二鹽酸鹽 除無需再結晶外，藉由實例13步驟b)中所述之方法處理 步驟a)之產物以產生白色固體狀之標題化合物（163 g， 69%)。4 NMR (D20) δ 4.73 (t，J = 8.2 Hz，1H)，4·58 (dd， J = 4.0 Hz，J= 1〇·2 Hz，1H)，3.79 (d，J = 13 Hz，1H)，3·73 (dd，J = 2·5 Hz，J = 6.4 Hz，1H)，3·54 (dd，J = 2.5 Hz，J = 10.2 Hz, 1H), 3.43-3.35 (m, 3H)? 2.33-2.24 (m3 1H)? 2.03-1.96 (m，2H)，1·83-1·75 (m，1H)，1·17 (d，J = 6·5 Hz，3H). MS: ESI (正）：339 (M+H)。 實例17 - 2-胺基-5-丁醯基-6-(l，2-二羥基·丙基）-5,6,7,8· 四氫·1Η_嗓咬-4-酮 128231.doc -88- 200843778

羥基-丙基）-5,6,7,8-四氫-1H-喋 2-胺基·5-丁醯基 _6_(1，2 咬-4-酮 藉由實例5中所述 社万法使用2_胺基-6-(1,2-二羥基-丙 基）·5,6,7,8-四氫_1只_ D世 β系啶-4-酮二鹽酸鹽（0.5 g，1.59

m ^ TS文針（〇·31 m1，Ul mmol)、。比唆（7.5 ml)及催化 用4 (一甲基胺基）吨咬來製備標題化合物以產生黃色固體 狀之產物（0.27 g，55%)。ijj 細及（CD3〇D) δ 4 62 (dd，j = 4.0 Hz5 J = 10.4 Hz5 1H)5 3.78 (m5 1H), 3.74 (d, J = 12.4

Hz，1H)，3·44 (dd，J = 2·4 Hz，J = ι〇·4 Hz，ih)，3·18 (dd，J =4.8 Hz，J = 12·8 Hz，1H)，2.56-2.49 (m，1H)，1.42-1.34 (m，1H)，1·63-1·52 (m，2H)，1·15 ⑷ j =： 6.8 Hz，3H)，0.87 (t5 J = 7·4 Hz，3H). MS: ESI (正）：3i2 (m+H)。 實例l8 - 2·{2_胺基-5_[2-胺基-6_(1，2-二羥基·丙基）_4-側 氧基-4,6,7,8-四氫-1H-喋啶-5-基]-5-側氧基-戊醯基胺基}_ 丙酸三氟乙酸鹽

OH

a·) 2·{5-[2-胺基-6·(1，2-二羥基-丙基）-4•側氧基·4,6,7,8_四 128231.doc -89· 200843778 氫-1H_喋啶_5_基]-2-第三丁氧基羰基胺基-5-侧氧基-戊醯 基胺基}-丙酸 向2-胺基-6-(1，2-二羥基-丙基）-5,6,7,8-四氫-1Η-喋啶-4-酮二鹽酸鹽（0·55 g，1.76 mmol)及實例19步驟b)之產物 (0·66 g，1.76 mmol)於DMF中之擾拌懸浮液中添加H〇Bt水 合物（0.24 g，1.76 mmol)、EDC(0.51 g，2·64 mmol)及 DIPEA(1.1 ml，6.17 mmol)。接在室溫下氬氣氛中攪拌該混 合物16 h。在真空中蒸發溶劑且藉由RP-製備型hplc純化 粗残餘物以分離白色固體狀之副標題化合物（0.145 g 14%)。巾 NMR (DMSO-d6) δ 9.92 (S，1H)，7·99 (d，J = 6.6 Ηζ，1Η)，6·99 (s，1Η)，6.77 (d，J = 9·3 Ηζ，1Η)，6.23 (bs， 2H)，4.61 (d，J = 5·1 Hz，1H)，4·36 (d，J = 6.3 Hz，1H)， 4.11-4.06 (m，2H)，3·81 (m，1H)，3.50 (m，2H)，3.21 (m， 1H)，2.98 (m，1H)，2.65 (m，2H)，2.22 (m，1H)，1.82 (m， 1H)，1.68 (m，1H)，1.36 (s，18H)，1.22 (d，J = 6·3 Hz，3H)， 0.95 (d，J = 6·3 Hz，3H)· MS: ESI (正）：598 (M+H)。 b·) 2-{2-胺基-5-【2-胺基-6-(l，2-二羥基-丙基卜‘側氧基· 4,6,7,8·四氫_ih_喋啶-5-基]-5-侧氧基-戊醯基胺基卜丙酸 將步驟a)之產物溶解於1:1 TFA:Dcm中且在室溫下授拌 1 · 5 h。在真空中移除溶劑且將殘餘物溶解於少量乙醇中。 將乙酸乙酯添加至該溶液中直至固體開始沈澱。將溶液保 存於冷藏器中14 h且過濾以分離白色固體狀之標題化合物 (60 mg，56%)。4 NMR (CD3〇D) δ 4 61 ⑽，卜 4 2 Hz，）= 10.2 Hz, 1H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.84 (t, J = 6.3 Hz, 128231.doc -90- 200843778 1H)，3.77-3.71 (m，2H)，3.45 (dd，J = 2·4 Hz，J = 1〇·2 Hz， 1H)，3·25 (dd，J = 4.2 Hz，J = 12.6 Hz，1H)，3.01-2.93 (m， 1H)，2.68-2.59 (m，1H)，2·18-2·09 (m，2H)，1·43 (d，J = 7.2 Hz，3H)，1.16 (d，J = 6·3 Hz，3H)· MS: ESI (正）·· 442 (M+H) 〇 實例19 - 4-第三丁氧基羰基胺基-4-(1-第三丁氧基羰基-乙基胺甲醯基）-丁酸

a·) 4-第三丁氧基羰基胺基-4-(1-第三丁氧基羰基-乙基胺甲 醯基） 丁酸9H-苐-9-基甲酯 向 Boc-D-Glu(OFm)(2.5 g，5.88 mmol)與 HOBt 水合物 (0.79 g，5.88 mmol)於DMF(50 ml)中之攪拌溶液中添加 DIPEA(1.1 ml5 6_46 mmol)、H-Ala-OtBu HC1(1.07 g，5.88 mmol)及EDC( 1.69 g，8.81 mmol)。在室溫下氬氣氛中攪拌 該混合物16 h。在真空中蒸發溶劑且將粗殘餘物溶解於乙 酸乙酯中，依次以飽和碳酸氫鈉（3><)及5〇/〇乙酸水溶液（3χ) 洗滌。以硫酸鎂乾燥有機層，且在真空中蒸發溶劑。藉由 急驟矽膠層析（於己烷中之0-40%乙酸乙酯梯度溶離）純化 粗產物以產生白色固體狀之副標題化合物（2.3 g，71%)。巾 NMR (CDC13) δ 7.77 (d, J = 7.5 Hz, 2H)5 7.60 (d5 J = 6.9

Hz，2H)，7.41 (t，J = 7·5 Hz，2H)，7.30 (t，J = 7·5 Hz，2H)， 128231.doc -91- 200843778 6.69 (d，J = 7·2 Ηζ，1Η)，5·27 (d，J = 7·8 Ηζ，1Η)，4·46_4·37 (m，3H)，4.22(t，J = 7.2Hz，2H)，2.62-2.54(m，2H)，2.18-2.14 (m，1H)，1.96-1.91 (m，1H)，1.45 (d，J = 7_5 Hz，18H)， 1.38 (d，J = 7·2 Hz，3H)· MS: ESI (正）：553 (m+H)。 b·) 4-第三丁氧基羰基胺基第三丁氧基羰基=己基胺甲 醢基）-丁酸 將步驟a)之產物（2.3 g，4.16 mmol)溶解於DCM(17 ml)中 且以ΤΕΑ(2·9 ml，20.8 mmol)處理。將混合物在室溫下攪拌 16 h。將該混合物以DCM稀釋且以1 μ HCl(2x)洗滌。以硫 酸鎂乾燥有機層，且在真空中移除溶劑。將粗產物與乙醚 形成漿液且過濾以分離白色固體狀之標題化合物（0 72 g， 46%)。A NMR (CDC13) δ 6·95 (d，J = 9.2 Hz，1H)，5.40 (d， J- 7.5 Hz，1H)，4.42 (t，J = 6.6 Hz，1H)，4.30 (d，J = 6.6 Hz，1H)，2·52 (m，2H)，2.12 (m，ih)，1.93 (m，1H)，1_45 (d， J = 9.2 Hz，18H)，1.38 (d，J = 7·2 Hz，3H)· MS: ESI (正）·· 397 (M+Na)。 實例2〇 - 2-胺基-6-(l，2_二經基·丙基）冰側氧基_4,6,7,8· 四氮-1Η-喋啶-5·甲酸苯甲酯

將2-胺基-6·(1，2-二餐基-丙基）_5,6,7,8-四氫-1Η-嗓咬-4 128231.doc •92- 200843778 酮二鹽酸鹽（163 g，5.2 mmol)在氤氣氛下溶解於50 mL吡 咬中。向該溶液中添加氯甲酸苯甲酯（1.93 ml，13·5 mm〇l)。將該反應混合物在真空下脫氣且置於氮氣氛下。 在室溫下攪拌該混合物12 h。在真空中蒸發溶劑且藉由製 • 備型RP-HPLC純化殘餘物以產生白色固體狀之副標題化合 物（0.93 g，48%產率）。NMR (DMSO-d6) δ 10.02 (s，1H)， * 7·41_7·30 (m，5Η)，6·84 (s，1Η)，6.12 (s，2Η)，5.10-4.99 (m， 2H)，3.93 (d，J = 6.0 Hz，1H)，3.66 (dd，J = 2.4 Hz, J = 6.3 ^ Hz，1H)，3·56 (dd，J = 4.8 Hz，J = 12 Hz，1H)，3·25 (d，J = 10.5 Hz，1H)，3.03 (dd，J = 4·5 Hz，J = 12·4 Hz，1H)，1.26 (d，J = 6.3 Hz，1H). MS: ESI (正）：376 (M+H)。 人類、大鼠及模擬胃液中血漿穩定性研究 在人類及大鼠中及模擬胃液中對本文所揭示之各種化合 物之穩定性進行測試。對各化合物經丨小時各時間點剩餘 化合物濃度進行測試。實例2、3、4及2〇之化合物之結果 φ 係如圖3(人類血聚穩定性）、圖4(大鼠血衆穩定性）及圖 5(模擬胃液穩定性）所示。如圖3_5所示，所測試之化合物 中之各者在各種病狀下均展示高穩定性。 BH4類似物之代謝研究 《實例描述用於代謝穩定性之檢定且使BH4類似物之穩 定性與BH4之穩定性進行對比。 將測試化合物（10 μΜ)在37t下與於磷酸鹽緩衝液中之 小鼠、*鼠及人類肝微粒體mg/mL之蛋白漢度 mM NADPH'一起i立言。鲁仏去y、仏 (支口月實驗重複進行三次。培育係藉由添 128231.doc -93- 200843778 加微粒體開始且藉由添加等體積甲醇中止。在2至3個時間 點（通常在時間0點、30分鐘、60分鐘）下採集樣品用於分 析。執行適當陽性及陰性對照培育。測試化合物消失之量 或測試物循環百分比係使用LC-MS/MS測定。 BH4類似物之溶解性 該實例描述用於溶解性之檢定且使BH4類似物之溶解性 與BH4之溶解性進行對比。將測試物溶解於DMSO中且在 96孔平板中以pH 7.4之磷酸鹽緩衝生理食鹽水（PBS)連續稀 釋。經稀釋之化合物最終濃度範圍為1至1000 mg/mL且含 有幺1 %之DMSO。在室溫下培育30分鐘之後，藉由在Lab Systems濁度計上偵測光散射來量測沈積物。溶解性係藉 由對比四個相同之樣品濃度之NU(濁度計單位）與溶劑空白 孔之NU來測定。不溶性係定義為空白修正NU顯著大於溶 劑空白之濃度。藉由學生T檢驗計算之1%偏差認為係顯著 的。 BH4類似物之滲透率 該實例描述使用Caco-2細胞單層之滲透率篩檢 (permeability screen)且使BH4類似物之滲透率與BH4之滲 透率進行對比。適合於研究化合物滲透率之Caco-2細胞之 單層培養物係生長於24孔或96孔聚碳酸商膜插入物（insert) 上21至30日。將該等單層保持在37t：下5% C02氣氛中95% 相對濕度下直至緊密。藉由量測跨上皮細胞電阻（TEER)或 螢光標誌化合物螢光黃之表觀滲透率來證實單層之成熟及 膜完整性。 128231.doc -94- 200843778 /沿頂端至底端方向以1〇 mM之單一濃度兩次重複測定一 系列測试化合物及所選標誌化合物之表觀滲透率。藉由向 頂端區添加測試化合物開始轉運研究且在實驗過程^將; 板保持於培養條件下。收集暴露30分鐘及60分鐘之後的底 ，區及最終頂端區且藉由LC_MS/MS分析測試化合物含 1由該等數據計算各測試化合物之回收率及表觀滲透 率。包括適當對照來表徵該等單層。在存在及不存在諸如 異搏疋（verapamil)之p-gp抑制劑的情況下亦執行底端至頂 端之轉運實驗。 、 BH4類似物之生物可用性 該只例描述g以BH4類似物及BH4執行時生物可用性/藥 物代謝動力學概況之研究。藥物代謝動力學研究之目的係 提供關於藥物及任何代謝物之全身暴露之資訊。該等數據 可用於說明藥理學或毒物學問題且亦可輔助毒物動力學研 九，又计。亦測定諸如Auc、半衰期、清除率及分布體積之 藥物代謝動力學參數。 該研九之目的係評估測試類似化合物之潛在經口可用 性，經由統計近似值估算藥物代謝動力學參數及將該等值 與以未修飾之BH4所獲得之值對比。一種簡單、非GLp提 取及LC-MS/MS分析法得以開發以用於血漿分析。總結了 測試化合物之化學式及結構資訊且假定血漿穩定性。若測 試化合物在血漿中不穩定，則視需要修飾方法。每種測試 化合物之研究涉及3隻任一性別之健康大鼠。藉由測試化 a物於水、鹽水、吐溫、pEG或類似媒劑中之溶液或懸浮 128231.doc •95· 200843778 液來製備劑量調配物。對於各測試化合物而言，3隻大鼠 同時經由經口管飼法給藥且在4個時間點（1、2、4、8小時） 收集血液。使用LC_UV或LC_MS(/Ms)量測血漿中之藥物 濃度來界定血漿濃度-時間曲線。使用WinN〇nlin(pharsight

Corp.)估异諸如Cmax、Tmax及曲線下面積（auc)之藥物代 謝動力學參數。 右使用小鼠代替大鼠，則對於各測試化合物使用12隻小 ^各時間點自3隻小鼠採集樣品，且使用各時間點之平 均金漿濃度數據估算藥物代謝動力學。 隹使用活體外代謝數據，亦可估算主要代謝物之濃度。收 木研九期間之排泄物及對於該等樣品分析母體及代謝物產 生消去之估算。 βΗ4前藥之水解 該實例描述確定前藥（例如化合物υ是否可在活體内發生 水解，是否形成所需產物（包括ΒΗ4)及水解動力學是否合 理之檢定。 ° 將例如ΒΗ4之二酯的測試化合物（5〇 μΜ)溶解於緩衝液 (ΡΗ 6.8, 20 mM ―，15〇福他⑶中且稀釋至總體積 mL添加g曰酶（〇1單位，，羧基酯酶 3 ·1 ·1 · 1)。在5分鐘時間點，自反應溶液中取出5〇 pL 樣且以等體積氯仿提取。收集12個氣仿樣品之後，將各 樣品分別注入具有標準以管柱使用標準乙腈/水/三氟乙酸 弟度之HPLC中。||由與用於酯化之酸的純品標準曲線相 比计异用於酯化之酸的產生，使得計算用於酯化之酸為時 12823l.doc -96- 200843778 間之函數。該線之斜率為反應速率。或者，使和8管柱 上UHPLC法對水相進行檢定以偵測游離刪。已知麵 具有氧化傾向’則其可為齡彳土铁 ，、j ^叙么替代法，因為偵測用於酯化 之酸之存在與BH4之狀態無關。

注入自人類或動物獲得之血液組織樣品中的酯化形式之 腦之水解視組織之内職酶而定以使用商業上獲得之 醋酶。該方法有助於敎活體内較佳位置之醋水解之概 率。需要對反應產物進行溶劑提取繼而HpLc分析。 自人類或動物採集血清樣品且藉由以〇 5 M磷酸納（pH 6·8)將血π稀釋成總濃度為2〇 來控制值。將二酯化 BH4(50 μΜ)溶解於控制pH之企清中且添加醋酶（〇ι單 位）。在5分鐘時間點，自反應溶液中取出50卟樣品且以 等體積氯仿提取。收集氯仿相用於分析用於酯化之酸且/ 或收集水相用於分析BH4。收集12個樣品之後，將各樣品 /主入具有;^準C4管柱使用乙腈/水/三就乙酸梯度之hplc中 用於丁酸分析，或注入C18管柱中用於bH4分析。藉由與 純品標準相比計算用於酯化之酸或BH4的產生，使得計算 用於酯化之酸或BH4為時間之函數。該線之斜率為反應速 率 〇 向大鼠投與之BH4類似物的藥物代謝動力學 該實例使單次經口投藥後大鼠中類似物（化合物〇之藥物 代謝動力學與BH4之藥物代謝動力學進行對比。 向禁食條件下之第一組雄性Sprague Dawley大鼠（6週齡） 經口投與單次劑量之BH4(10 mg/kg及100 mg/kg)。向禁食 128231.doc -97- 200843778 條件下之第一組雄性Sprague Dawley大鼠（6週齡）經口投與 單次劑量化合物I。 對於投與BH4而言，給藥後2小時及i小時之血漿中最大 總生物喋呤濃度分別為1〇8 ng/ml(亦即約3倍内源含量）及 • 1227 ng/ml(亦即約30倍内源含量）。此後，生物喋呤具有 - 約丨·1小時之消去半衰期（tm)，對於1〇 mg/kg給藥，給藥後 • 9小時回復内源含量，且對於100 mg/kg給藥，給藥後24小 時回復内源含量。經口投與1〇mg/kg&1〇〇mg/k^4之生物 ⑩ 可用性（F)分別為6·8%及11.8%，其係以血漿濃度-時間曲 線（AUC)下面積計，藉由減去靜脈内投與1〇 mg/kg期間之 内源含量獲得。減少之生物喋呤與血漿中總生物喋呤之比 率（亦即減少型比率（reduced_f〇rm rati〇))相對穩定（73〇/〇_ 96%)。 BH4類似物係進行類似測試及評估。由於其增加之生物 可用性，AUC及峰值（cmax)比BH4多約50%。視類似物而 φ 疋，其生物可用性超出BH4至少15%、20%或30%或更高， 且超出高達500%。 向猴子投與之BH4類似物的藥物代謝動力學 • 藉由經口管飼法給予禁食獼猴BH4及BH4類似物（n=3)， • 使付所投類似物之量等效於80 mg BH4。經25小時在各時 間點量測BH4(若直接投與）或類似物之血漿濃度。所得 數據如圖6所示。PK數據亦如下表所示，其中括號中之數 字為標準差。 12823 l.doc -98- 200843778 表 化合物 AUC〇.t? ng hr/mL) Cmax，ng/mL Tmax，hr BH4 288 (15.5) 42.0(12.6) 3.0 (0) 實例5 2669 (552) 1016(228) 2(〇) 實例7 572 (148) 82.3 (27.2) 2.67 (0.58) 實例9 384(214) 61.9 (34.8) 2.0 (0) 實例10 625 (294) 138(123) 1.83 (1.26) 實例11 617 (336) 115(65.4) 1.5 (0.09) 實例12 438(211) 73.6 (42.9) 3.0(1.0) 實例13 13.7 2.2 6.0 實例14 63.2 (25.6) 5.23 (2.1) 12.1 (11.9) 實例15 36.8 (37.6) 5.7(1.7) 12.0 (10.4) 實例16 88.1 (31.5) 7.63 (2.7) 6.0 (0) BH4類似物在胃腸道中之吸收 在盲蔽交叉研究中評估人類之胃腸吸收。 除非另有說明，否則禁食10小時之後以1 mg/kg、5 mg/kg及10 mg/kg之劑量給予受檢者四氫生物嗓呤（BH4)或 BH4類似物。在該研究之fed leg中，向受檢者投與BH4或 BH4類似物。將血樣於給藥後0、0.5、1、2、3、4、6、 8、12、24、48、72、96、120、144 h收集於肝素化小瓶 中。對於單次給藥及相對生物可用性研究而言，亦在投藥 之後0.25、0.75及1.5小時收集血漿樣品且檢定總生物喋呤 以評估BH4或BH4類似物之胃腸吸收位點。 經口或靜脈内給予受檢者1 mg/kg、5 mg/kg及10 mg/kg 劑量之BH4或BH4類似物，繼而連續量測血漿總生物喋呤 濃度以由血漿總生物喋呤濃度增加（ACp)-時間曲線下面積 128231.doc •99· 200843778 (AAUC)測定胃腸道之BH4或BH4類似物吸收率。與經口投 與相比為達成相同程度之生物可用性預期當靜脈内投與時 需要較低劑量之BH4。舉例而言，為達成與靜脈内投與1 mg/kg BH4相同程度之生物可用性，可能需要經口給予10 . mg/kg BH4。由於BH4類似物可提高生物可用性，因此為 達成與1 mg/kg IV劑量之BH4相同程度的生物可用性，可 • 能僅需要2.5 mg/kg BH4類似物達成相同生物可用性百分 比。 • 投與BH4或BH4之後，使用下式由血漿總生物喋呤濃度 增加（Δ〇ρ)-時間曲線下面積（AAIJC)估算胃腸道之BH4或 BH4類似物吸收率： 吸收率（％)=(經口給藥後AAUC/靜脈内給藥後AAUC)

X (靜脈内給藥/經口給藥XI00)。 一些BH4類似物可能需要較長時間來釋放活性BH4。因 此，僅量測游離或釋放之BH4可能不能精確反映治療可用 0 之BH4總量。因此，需要量測類似物與BH4—起之總濃度 以精確或更精確測定血液中BH4含量以供評估生物可用性 及對比類似物與BH4之生物可用性之目的之用。 BH4代謝物量測 生物嗓呤檢定：基於Fukishima等人之方法（Anal. Biochem. 102:176 (1980))測定血漿、血液及其他組織中之 總生物蝶吟及經氧化之生物嗓吟之濃度。生物嗓呤具有四 種不同形式，包括兩種形式之經還原之生物喋呤，R-四氫 生物喋呤（BH4)及醌型R-二氫生物喋呤（q-BH2)，及兩種形 128231.doc -100 - 200843778 式之經氧化之生物喋呤，二氫生物喋呤（BH2)及生物喋呤 (BP)。該等四種形式中，僅還原形式之生物喋呤具有辅酶 活性。經還原之生物喋呤藉由酸性條件下之碘醯化轉化為 BP，而在驗性條件下其轉化為嗓呤。經氧化之生物蝶呤藉 由酸性及鹼性條件下之碘醯化轉化為BP。藉此特性，總生 物喋呤之量係在酸性條件下之碘醯化之後測定，且經氧化 之生物喋呤之量係在鹼性條件下之碘醯化之後測定，從而 由其數量之差值計算經還原之生物喋呤之量。當用作輔酶 時，BH4係轉化為q-BH2。q-BH2立即由二氫喋呤還原酶轉 化為BH4或所未經還原，則其氧化為BH2或DHPT。由於生 物喋呤難以以q-BH2之形式在活體内存在，故經還原之生 物喋呤很可能由BH4代替。 將所收集之血漿及全血樣品立即以酸性氧化溶液（含有 0.6%碘化鉀（KI)、0.3%碘（12)及0.6 N三氣乙酸（TCA)之0.6 N HC1水溶液）及鹼性氧化溶液（0·7 N氫氧化鈉（NaOH))進行 氧化。由HPLC執行BP測定且使用液體閃爍計數器量測放 射能。 使用與串聯質譜（LC/MS/MS)聯合之逆相HPLC(RP)量測 BH4 :組合使用逆相高效液相層析（RP)與串聯質譜 (LC/MS/MS)展示對於人類血漿中之BH4具有選擇性，對於 介於5-1000 ng/rnL範圍内之BH4敏感。該方法關聯有由於 收集及儲存期間之氧化作用的BH4之約50%轉化。使樣品 在乙二胺四乙酸二鉀（K2EDTA)血漿中穩定超過3個月。預 處理步驟之回收率為約75%。該方法之準確度及精密度經 128231.doc -101 - 200843778 测定具有低於15%之變異係數（CV)%(在定量下限（LLOQ)為 20%) ° 組合使用HPLC與串聯質譜測定BH4測試物展示優於僅 使用HPLC，此係由於：（1)其對於藥物-BH4之增加之選擇 性（而HPLC量測總生物喋呤），（2)較寬的定性範圍，（3)已 建立之轉化率，（4)人類受檢者中大量表徵及證明應用，及 (5)不同物質及基質中之新穎及有效量測。 經改良之方法包含以下步驟。將血液、血漿、組織勻聚 或尿液之樣品進行酸性或鹼性氧化。對於酸性氧化，（1)以 氯化鉀（KC1)、鹽酸（HC1)或TCA處理樣品1小時；（2)隨後 使經酸氧化之樣品進行碘滴定；（3)使樣品經過離子交換 柱；（4)使用HPLC與串聯質譜量測包含ΒΗ4、q-BH2(其在 活體内立即還原為BH4，因此所量測經還原之生物喋呤主 要係基於BH4)、BH2及BP之總生物喋呤。對於鹼性氧化， (1)以KI、12或NaOH處理樣品1小時；（2)隨後將經鹼性氧化 之樣品以HC1或TCA進行酸化；（3)進行碘滴定；（4)使樣品 經過離子交換柱；（5)量測包含BH2及BP之經氧化之生物喋 呤；（6)使用HPLC與串聯質譜量測不同物質；及（7)經還原 之生物喋呤（BH4 + q-BH2)之量經計算為總生物喋呤減去 氧化形式之間的差值。 生物蝶呤量測之流程圖及檢定驗證總結係如圖1及圖2所 提供。 經優化之檢定 使用電化學偵測（ECD)及螢光（FL)偵測之HPLC法係有利 128231.doc -102- 200843778 的，因為其使得可量測個別（discrete)生物喋呤化合物 (BH4、BH2及B)以及諸如前藥形式之類似物（例如Val-BH4、Val-BH2 及 Val-B)中之各者。 不同生物喋呤（BH4、BH2及B)及Val-生物喋呤之濃度係 藉由首先使用逆相HPLC分離，繼而ECD及FL偵測來測 定。BH4及Val-BH4係使用ECD量測，其中BH4及Val-BH4 由電極1氧化為醌型二氫生物喋呤形式（分別為qBH2或Val-qBH2)，一種短暫存在之二氫生物喋呤中間物，且隨後在 電極2還原回BH4或Val-BH4。該偵測器隨後使用該還原反 應產生之電流分別測定BH4或Val-BH4之濃度。BH2、Val-BH2、B及Val-B係藉由螢光偵測量測。使用最佳電位之調 節保護電池（conditioning guard cell)進行 BH2 及 Val-BH2 之 柱後氧化將BH2及Val-BH2分別氧化為B及Val-BH2。柱後 氧化為將BH2(及其他物質）氧化為生物喋呤（B)之步驟。其 為適宜的因為BH2不具有螢光活性或不易量測且必須轉化 為易於使用螢光量測之生物喋呤。該等方法總共可用於量 測 6種物質（BH4、BH2、B、Val-BH4、Val-BH2及 Val-B)。 諸如纈胺酸生物喋呤衍生物之生物喋呤類似物較佳使用含 10% MeOH之移動相量測，而生物喋呤較佳使用含2% MeOH之移動相量測。 因此，偵測生物喋呤類物質混合物中之生物喋呤之方法 可包括（a)藉由逆相HPLC分離混合物中之生物喋呤物質； 及在BH4及其類似物之情況下，（bl)藉由以下步驟執行電 化學偵測：藉由第一電極將BH4及所提供之其類似物氧化 128231.doc -103 - 200843778 為酉昆型二氫生物喋呤形式，繼而在第二電極處將該等酿型 形式還原成BH4及所提供之其類似物且量測該還原反應所 產生之電流來測定物質之濃度；及/或（吻在㈣、其類似 物、生物嗓呤或其類似物之情況下，藉由將㈣物質柱後 • 氧化為生物喋呤之後進行螢光偵測來量測該等物質。 • 實例5之化合物可於緩衝液中且藉由使用該檢定提取來 . 制。使用該檢定自以實例5之化合物給藥之獼猴初步量 測BH4、BH2及B表明生物可用性大大增加（參見圖12)。在 圖12中，約5分鐘之峰為BH4之特徵，且5分鐘之峰高較當 向猴子投與BH4時所觀察到之峰高高數倍。峰高及峰面積 表示濃度。使用該檢定自以實例5之化合物給藥後2小時之 猴子初步量測實例5之化合物表明吾人不能偵測到實例5之 化合物。偵測不到為指示性的而非必然的，而此次，給藥 後2小時之血漿中明確無實例5之化合物，因為若實例$之 化合物仍存在則進一步優化之檢定可使得可偵測到該化合 物0 BH4類似物對氧化氮產生之作用 將培養之人類臍靜脈内皮細胞（HUVEC)以3 mM墨嗓呤 ， 還原酶抑制劑N-乙醯血清素（NAS)預處理。抑制該路徑通 ， 系^致使内源eN〇S活性降低至遠低於正常之内源bh4損 失’且提供測試eNOS活性恢復之檢定。

因此，將生長中（subconfluent)HUVEC接種於24孔平板 中且在EGM2培養基（完全生長培養基）中生長隔夜。次曰 早晨’將新鮮培養基添加至細胞中（3〇〇 pL/孔），將3 mM 128231.doc •104- 200843778 NAS添加至該等細胞中以降低内源BH4含量。培育1·5小時 後，將50 mM、1〇〇 mM或200 mM ΒΗ4或實例5、實例6、 實例7或實例9之化合物添加至細胞中。使細胞與BH4或實 例5、實例7或實例9之化合物反應5-22小時。隨後藉由硝 酸鹽還原酶處理之後的格裏斯反應（Griess reaction)以總 (亞硝酸鹽+硝酸鹽）變化形式量測NO產生。使用BH4或實 例5、實例7或實例9之化合物的情況下亞硝酸鹽+硝酸鹽之 百分比係如圖7(5小時之後）；圖8(17小時之後）；及圖9(22 小時之後）所示。實例6之結果係如圖10(5小時之後）及圖 11(20小時之後）所示。 向NAS處理細胞添加實例5、6、7或9之化合物以給藥依 賴方式增加NO產生。另外，以實例5之化合物處理細胞產 生約60%-80%之BH4作用，表明該類似物於細胞内去酯化 產生活性BH4。實例6、7及9之化合物對NAS處理細胞具有 類似（略降低）作用。 實例5之化合物具有所需活體外藥理學活性（由内皮細胞 氧化氮合成酶刺激培養之内皮細胞中亞硝酸鹽產生），且 在該細胞培養系統中傳遞由游離BH4所提供之約60%至 80%反應。暴露5小時或22小時之後趨勢類似；22小時之 後類似物與游離BH4之間存在略多差異。該等結果表明内 皮細胞含有可有助於產生活性游離BH4之酯酶。 上文所引用之所有公開案，其相關部分以引用的方式併 入本文中。引用任何公開案不應理解為承認其構成所揭示 之發明的先前技術。 12823I.doc -105- 200843778 以上描述僅為明確理解而給出，且不應由此理解為不必 要之限制，因為在本發明範疇内之變化可對一般熟習此項 技術者顯而易見。 【圖式簡單說明】 • 圖1展示量測生物嗓呤之流程圖。 圖2展示驗證量測體液及組織中生物喋呤之檢定之結果 • 的總結。 圖3展示實例2、3、4及20之化合物在人類血漿中經6〇分 ® 鐘時段之穩定性。 圖4展示實例2、3、4及20之化合物在大鼠血漿中經6〇分 鐘時段之穩定性。 圖5展示實例2、3、4及20之化合物在模擬胃液中經60分 鐘時段之穩定性。 圖6展示向禁食之猴子經口投與各種BH4前藥後與投與 BH4後相比經25小時時段之BH4血漿含量。 鲁 圖7展示以各種濃度之BH4及實例5、7及9之化合物處理 5小時後亞硝酸鹽+硝酸鹽增加之百分比。 圖8展示以各種濃度之BH4及實例5、7及9之化合物處理 • 17小時後亞硝酸鹽+硝酸鹽增加之百分比。 • 圖9展示以各種濃度之BH4及實例5、7及9之化合物處理 22小時後亞硝酸鹽+硝酸鹽增加之百分比。 圖10展示以各種濃度之BH4及實例5及6之化合物處理5 小時後亞硝酸鹽+硝酸鹽增加之百分比（如由μΜ濃度所展 示）。 128231.doc •106- 200843778

圖Π展示以各種濃度之BH4及實例5及6之化合物處理20 小時後亞硝酸鹽+硝酸鹽增加之百分比（如由μΜ濃度所展 示）。 圖12展示投與實例5之化合物2小時後獼猴血漿之ΒΗ4層 析圖（2% MeOH移動相）。 128231.doc -107-

Claims (1)

1. 200843778 十、申請專利範圍： 1. 一種式I化合物或其醫藥學上可接受之 R6

   r7

   r4

   式I 其中 R3、R4、R5、尺6及尺7均為氫；且 _「起為-c(RC)Rd_且形成五員環，或_2獨 地為氫、CW衷院基、c3.4。烧基、Cl.4。經取代之燒基 C3-8雜環烧基、Cl_4〇伸院基c3_8環烧基、％伸烧基c 雜環烷基：芳基、雜芳基、伸烷基芳基、伸烷基雜 基、C3.8環烯基、c2 4G烯基、C2 4。經取代之稀基、〜 環烯基、c2.4G伸稀基C3 8mm2 4Q伸稀基心環 基、C2.40伸稀基c3_8雜環m2 4〇伸婦基一雜環 基、C2_4〇伸烯基芳基、^⑼伸烯基雜芳基、c(〇)H C(〇)C3.8環燒基、⑽^烧基、c⑼Ci|經取代之 基、C⑼c3.8雜環院基、c(0)Ci-4。伸燒基C3 8環垸基 CHCOCmo伸烷基c3_8雜環烷基、c(〇)芳基、c(⑺雜 基、c(0)伸烷基芳基、c(〇)伸烷基雜芳基、c(〇)c^ 烯基、c(o)C2·4。烯基、C(0)C2·4。經取代之烯基、c(〇)c 雜環烯基、c(o)c2_4G伸烯基c38環烷基、C(〇)C24〇伸 128231.doc 200843778 基^以衣稀基、C(o)c2.40伸烯基C3-8雜環烷基、c(O)C2_40 伸婦基C3-8雜環烯基、C(0)C2-4G伸烯基芳基、c(O)C2-40 伸烯基雜芳基、C(0)NRaRb、C(0)0Ra、c(0)SRa或胺基 ^何生物，其限制條件為Ri及R2不同時為氫、（：（0)!!、 葡糖基、胺基葡糖基、苯曱基氧基或相同c(〇)Ci_i〇烷 基； Ra及Rb獨立地為氣、C3 8環烧基、基、^經 取代之烷基、C3_8雜環烷基、Ci4G伸烷基Cw環烷基、 Cl-4c伸烷基雜環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳 基、伸烷基雜芳基、Cw環烯基、c2-4G烯基、c2-4G經取 代之烯基、Cw雜環烯基、伸烯基C3_8環烷基、 伸稀基C3_8環烯基、伸烯基Cs_8雜環烷基、C2⑷伸烯 基C3-8雜環稀基、伸烯基芳基、c2⑷伸烯基雜芳 土 C(0)H C(〇)c3-8環烷基、c(〇)ci 4〇烷基、c(〇)c]_4〇 ，取代之烧基、C(〇)Cw雜《基、C⑼Cl.4G伸縣c3-8 裱烷基、C(〇)Cl-4Q伸烷基C3-8雜環烷基、c(〇)芳基、 C(o)雜芳基、c(0)伸烷基芳基、c(0)伸烷基雜芳基、 C⑼c3.8環烯基、c(q)C2，縣、c⑼心。經取代之稀 基、C⑼c3-8雜環烯基、c(〇)C2 4G伸烯基C3 8環烷基、 ()2 4〇伸烯基C3_8%烯基、C(0)C2·4。伸烯基C38雜環烷 ^ ^ C(O)C2.40,t^^C3^Jt^ . ^ C(〇)C24〇 伸烯基芳基或c(〇K：2-4G伸烯基雜芳基；且 R與Rd-起為侧氧基，或RjRd獨立地為氫、心環 烧基、基、^經取代之縣、^雜環烧基、 128231.doc 200843778 Cl，伸烷基Cw環烷基、Cl姑岭甘η -4G伸燒基c3-8雜環燒基、芳 基、雜芳基、伸烷基芳基 β 装 甲況暴雜方基、C3-8^烯 土、^2·40烯基、C2.4〇經取代之、膝| 代之烯基、Cw雜環烯基、c2, 伸烯基(：3-8環烷基、C伸 01甲歸基C3·8%烯基、c2_4G伸烯基 c3··環烧基、c2-4。伸稀基C3 8雜環烯基、C24〇伸婦基芳 基、C2.40伸烯基雜芳基、c(〇)H、c⑼心環烧基、 €(〇)(：“成基、C(0)Ci 4。經取代之烧基、c⑼雜環 烷基、c(o)Cl.40伸烧基c3 8環烧基、c(〇)c】-4〇伸烧基 雜％烷基、c(o)芳基、c(0)雜芳基、c(0)伸烷基芳基、 c(0)伸烷基雜芳基、c(0)c3 8環烯基、C(〇)C24〇烯基、 C(0)C2_4G經取代之烯基、c(〇)c3_8雜環烯基、C(〇)C2 4〇 伸烯基C3-8環烧基、C(0)C2 4{)伸烯基c3 8環烯基、 C(0)C2-4G伸烯基c3.8雜環烷基、C(0)C2-4G伸烯基c38雜環 烯基、C(0)C2.4G伸烯基芳基或C(0)C2_4G#烯基雜芳基。 2·如請求項1之化合物，其中Rl&R2係獨立地選自胺基酸 衍生物或氫。 3 ·如請求項2之化合物，其中Ri係選自胺基酸衍生物且反2 為氮。 4 ·如請求項2之化合物，其中r2係選自胺基酸衍生物且& 為氫。 5.如請求項1至4中任一項之化合物，其中R!或R2包含異缬 草胺酿基胺基酸部分。 6· —種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽·· 128231.doc 200843778

   式I 其中 Ri 且 R2、R5、R6&R7均為氫 R3及R4係獨立地為氫、c 一 、 烷基、C2-40烷基、C!, 經取代之烧基、C 3 8雜環炫A 衣烷基、Cb40伸烷基(：3_8環烷基、 Cl·4。伸燒基C3.8雜環烧基、芳基、雜芳基、伸烧基芳 基、伸烧基雜芳基、c3.8環婦基、C2.4。稀基、CM。經取 代之歸基、k雜環烯基、C2，伸烯基一環烧基、C2, 伸稀基C3.8%烯基、C24()伸稀基雜環烧基、〜。伸婦 基C3-8雜環稀基、^伸稀基芳基、％伸稀基雜芳 基 ' c⑼Η、C(0)c3-8環烷基、c(〇)Ci 4。烷基、c(〇)c… 經取代之烧基、（:⑼〜雜㈣基、C(Q)CW中燒基b 環烷基、c(0)Cl-4〇伸烷基C3·8雜環烷基、c(〇)芳基、 c(0)雜芳基、c(0)伸烷基芳基、c(〇)伸烷基雜芳基、 c(〇)c3-8環烯基、C(0)C24G烯基、C(0)C2·你經取代之烯 基、C(0)c3_8雜環烯基、C(0)C24G伸烯基c38環烷基、 C(〇)C2.4()伸烯基(:^環烯基、C(0)C2_4Q伸烯基c38雜環烷 基、C(0)C2·4。伸烯基C38雜環烯基、C(0)C2切伸烯基芳 基、C(0)C2.4()伸烯基雜芳基、C(〇)NRaRb、c(〇)〇Ra、 128231.doc 200843778 C(0)SRa或胺基酸衍生物，其限制條件為若R3為氫，則 I不為氫或核糖，且若R4為氫，則I不為氫、c(〇)H、 乙酸根、羥基甲基或胺基烷基，且 RlRb獨立地為氫、C3_8環烷基、Ci 4。烷基、Ci 4。經 取代之烷基、Cs_8雜環烷基、Cl_4Q伸烷基c38環烷基、 Ci-4〇伸烷基C3·8雜環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳 基、伸烷基雜芳基、Cw環烯基、烯基、c2^經取

   代之烯基、C3.8雜環烯基、C2_4G伸烯基c38環烷基、 伸烯基C3.8環烯基、伸烯基C3·8雜環烷基、C2_4❽伸烯 基C3.8雜環烯基、c2，伸烯基芳基、c2 4。伸烯基雜芳 土 C(〇)H (：(〇)〇：3.8環院基、基、c(〇)Ci 4〇 ，取代之烧基、C⑼C3.8雜環炫基、c⑼C⑷伸院基〜 裒烧基C(〇)C1-4〇伸烧基C3_8雜環烧基、c(〇)芳基、 C(O)雜芳基、（:⑼伸烧基芳基' c⑼伸燒基雜芳基、 c(〇)C3.8«基、c⑼c2_4。烯基、c⑼〜。經取代之稀 基、C⑼c3_8雜環烯基、c⑼C24e伸稀基環烧基、 C⑼C2,伸烯基c3.8環稀基、C⑼c2 4e伸浠基〜雜環炫 基’c2_40伸烯基。3-8雜環烯基、聚乙二醇，c“。 伸烯基芳基或C(〇)C2-4〇伸烯基雜芳基。 一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 128231.doc 200843778

   Ri、R2、R3、raimuu # R6&R7獨立地為氫、（^-心烷基、c^G經取代之烷基、 C3·8雜裒烧▲ Cl，伸嫁基C3-8環烧基、Q，伸院基C3_8 雜環烧基、芳基、雜芳基、伸烧基芳基、伸烧基雜芳 基C3-8袞、稀基、C2,稀基、C2-40經取代之稀基、（：3.8雜 衣烯基C2-4G伸烯基Cm環烷基、（：2-4〇伸烯基（：3 8環烯 基C2_4G伸烯基Cm雜環烷基、C2^伸烯基C3 8雜環烯 基、（：2·4〇伸烯基芳基、c2-4G伸烯基雜芳基、c(〇)H、 c(〇)c3-8環烷基、c(0)Ci 4〇烷基、c(〇)Ci·你經取代之烷 _ 基、C(〇)C3-8雜環烷基、（:(0)(^40伸烷基（：3_8環烷基、 伸烷基c38雜環烷基、c(0)芳基、c(〇)雜芳 基、c(0)伸烷基芳基、c(〇)伸烷基雜芳基、c(〇)c^環 烯基、C(0)C2-4G烯基、c(〇)C2.4G經取代之烯基、c(〇)c3 8 雜環烯基、C(0)C2-4〇伸烯基〇3-8環烷基、c(〇)c2_4G伸烯 基匕^環烯基、c(0)c2.4()伸烯基c3-8雜環烷基、c(〇)c24〇 伸烯基C3-8雜環烯基、c(〇)C2_4◦伸稀基芳基、c(〇)c24〇 伸烯基雜芳基、C(0)NRaRb、C(〇)〇Ra* c(〇)SRa，其限 128231.doc 200843778 制條件為若&為氫， CH,CH - i 、j 7不為甲基、CH2(CH2)4C02H 或 方基，日尸 RkM 且右R7為鼠，則I不為氫，且 R及R獨立地為氫、c 取代之 3·8衣坑基、Cm。烷基、（:…經 土 3-8雜環烷基、Cwo伸烷基c3-8環烷基、 :°:燒基C3-8雜環烧基、芳基、雜芳基、伸烧基芳 基、伸烷基雜芳基、Γ 卢祕# X 3-8 衣土、C2.4〇烯基、C2-40 經取 =之細基、C3·8雜環烯基、％伸烯基C3.8我基、c2.4( 婦基C3·8環烯基、^伸稀基c3_w環縣、c2.4。伸缔 基C3.8雜環稀基、C2基芳基、c㈣伸烯基雜芳 基、C(〇)H、C(〇)C3.8環烧基、c(c〇Ci 4。烧基、c(〇)c_ ，取代之燒基、C⑼C3.8雜環炫基、c(〇)Ci 4G伸烧基 %<烷基、c(0)Cl·㈣伸烷基Cw雜環烷基、c(o)芳基、 c(0)雜芳基、c(0)伸烷基芳基、c(〇)伸烷基雜芳基、 c(〇)c3_yf、烯基、c(0)c24烯基、c(〇)C24G經取代之烯 基、c(0)c3_8雜環烯基、c(0)C2-4g伸烯基c38環烷基、 C(0)c2_4()伸烯基（：3-8環烯基、C(0)C2_4G伸烯基c3-8雜環提 基、C(〇)C2-40伸稀基C3-8雜環稀基、聚乙二醇、C(〇)C2 伸烯基芳基或c(o)c2-4G伸烯基雜芳基。 一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽：

   r3 8.

   128231.doc 200843778 其中 R1、R2、R3、r4、r6及化7均為氫；且 ^為匕.8環烷基、Ci-4G烷基、Ci，經取代之烷基、 參 雜衣烧基、C!,伸烧基C3-8環烧基、Ci，伸烧基^雜環 ^基、芳基、雜芳基、伸烧基芳基、伸燒基雜芳基、心 娘烯基、c2.4。烯基、C24。經取代之烯基、〜雜環烯 基C2_4G伸烯基C3.8環烷基、C2-4^伸烯基C3pt烯基、 2·4〇伸烯基C3_8雜環烷基、C2 4Q伸烯基C3_8雜環烯基、 C2-4()伸烯基芳基、C2-40伸烯基雜芳基、C(〇)H、c(〇)C3 8 f '元基C(〇)Cl,烧基、◦(Ο)。!,經取代之烧基、 c(0)c3.8雜環烷基、c(〇)Ci-4G伸烷基環烷基、 申烷基c3-8雜環烷基' c(〇)芳基、c(〇)雜芳 基、c(o)伸烷基芳基、c(〇)伸烷基雜芳基、c環 烯基、c(o)C2.4。烯基、c(〇)C2⑽經取代之烯基、c(〇)c^ 雜環稀基、c(0)c2.4G伸烯基。環院基、c(〇)c㈣伸烯 基心環烯基、C(0)C24〇伸稀基c3 8雜環烧基、c 伸烯基C3.8雜環烯基、C(〇)C24〇伸烯基芳基、c(〇)c2M 伸烯基雜芳基、C(0)NRaRb、c(〇)〇R%t c(〇)SRa，且 Rb獨立地為氫、C3-8環烧基、Ci.4。烧基、Cl.40經 取代之烷基、C3.8雜環烷基、Ci,伸烷基c38環烷基、 Cl-4❹伸烷基C3·8雜環烷基、芳基、雜芳基、伸烷基芳 基、伸烷基雜芳基、C3·8環烯基、C2-4G烯基、C2-4G經取 代之烯基、C：3·8雜環烯基、6·4()伸烯基c3_8環烷基、c2 4〇 伸烯基C3·8%烯基、伸烯基C3_8雜環烷基、C2⑼伸烯 128231.doc 200843778

   基C3_8雜環烯基、C2_4〇伸烯基芳基、C2-4〇伸烯基雜芳 基 ' C(〇)H、C(0)C3_8環烷基、¢:(0)(^-40烷基、C(0)CK4Q 經取代之烷基、c(o)c3-8雜環烷基、(:（0)(^40伸烷基c3 8 環燒基、CCCOC!·4。伸烷基C3-8雜環烷基、c(0)芳基、 C(O)雜芳基、c(o)伸烷基芳基、c(0)伸烷基雜芳基、 C(0)C3.8環烯基、C(0)C2-4G烯基、C(0)C2-4G經取代之浠 基、C(0)c3.8雜環烯基、c(0)C2_4G伸烯基c3-8環烷基、 c(0)c2_4()伸烯基c3_8環稀基、c(0)c24。伸烯基雜環烷 基、c(o)c2-40伸浠基c3-8雜環浠基、聚乙二醇、c(〇)c240 伸烯基芳基或c(o)c2_4G伸烯基雜芳基。 9· 一種化合物，其具有選自由以下各式組成之群之式：

   12823I.doc -9- 200843778

   或其醫藥學上可接受之鹽。 10 · —種組合物，其包含： (a)如請求項丨至9中任一項之化合物；及 ㈨用於其之可選醫藥學上可接受之稀釋劑或栽劑。 11. 一種治療有效量之如請求項⑴中任一項之化合物或仏 療有效量之如請求項1G之組合物之用途，其係用於製^ 治療患有BH4反應性病狀之個體的藥劑中。 12. 如請求川之用途，其中該治療有效量增加血管擴張。 13·如請求項11之用途，其中該治療有效量增加购金清或尿 液含量。 14·如請求項11之用途’其中該治療有效量使BH4反應性患 者之血壓降低平均至少約5 mm Hg。 15·如明求項11之用途，其中該治療有效量增加該個體之血 管擴張。 16·如明求項11之用途，其中該ΒίΙ4反應性病狀係選自由以 128231.doc -10- 200843778 Z狀組叙群之病狀：高域、周邊動脈疾病、間歇 灯嚴重肢體缺血、心臟衰竭、動脈粥樣硬化 皮細胞功能障礙、&势十产 吕疾病、I型糖尿病相關内皮細胞 能障礙、II型糖屁、戌 k p K病、糖尿病性視網膜病、代謝症候 及糖尿病性腎病。 17·如請求項11之用涂，甘 ’ /、中該ΒΗ4反應性病狀為血管疾 病0 、

   18.如明求項17之用途，其中該血管疾病為選自由以下疾病 組成之敎疾病：周邊血管疾病、間歇性跛行、冠狀動 脈疾病冋膽固醇血症相關企管疾病"及煙相關金管疾 病、Μ壓、頑固性高血壓或未控制之高血壓、肺部動 脈高金壓、特發性肺動脈高壓、新生兒肺動脈高壓 (ΡΡΗΝ)、動脈粥樣硬化、中風、中風後血管痙攣、心肌 梗塞缺血再灌注損傷、充金性心臟衰竭、移植後缺金 再灌庄損傷、移植後血管損傷、血管痙攣、血塊形成、 血栓形成、凝結及凝血。 19·如請求項11之用途，其中該ΒΗ4反應性病狀為溶血作用 相關溶血性貧血或鐮狀細胞貧血。 20·如請求項11之用途，其中該ΒΗ4反應性病狀為神經精神 異常。 21·如請求項20之用途，其中該神經精神異常為選自由以下 病症組成之群之病症··帕金森氏症（Parkins〇n，s Disease)、注意力不足過動症、雙極性病症、自閉症、 抑鬱症及肌張力障礙。 128231.doc -11 - 200843778 22·如請求項n之用途，其中該bh4反應性病狀為BH4缺乏 相關神經精神異常。 23·如睛求項11之用途’其中該bh4反應性病狀為酿胺酸經 化酶功能降低或色胺酸羥化酶功能降低相關神經精神異 常。 24·如睛求項23之用途，其中該治療有效量提高路胺酸經化 酶功能或色胺酸羥化酶功能。 25·如請求項11之用途，其中該治療有效量提高BH4反應性 患者中之L-多巴（L-Dopa)或血清素之神經傳遞素含量。 26·如請求項丨1之用途，其中該BH4反應性病狀為與高血 壓、鬲脂質血症、身體質量指數增加、抗胰島素症或其 組合相關之代謝症候群。 27·如請求項π之用途，其中該BH4反應性病狀為高苯丙胺 酸血症。 28.如請求項11之用途，其中該高苯丙胺酸血症係選自由以 下病症組成之群：輕度苯丙酮尿症、典型苯丙酮尿症、 嚴重苯丙酮尿症、非常型或惡性苯丙酮尿症、缺乏 相關高苯丙胺酸血症、肝病相關高苯丙胺酸也症及癌疾 相關高苯丙胺酸血症。 29·如請求項11之用途’其中該藥劑係用於經口投藥。 30. 如請求項29之用途，其中該藥劑係用於以約〇ι叫㈣至 約50 mg/kg該化合物之曰劑量經口投藥。 31. 如請求項29之用途，其中該藥劑係用於以單次日劑量經 口投藥。 128231.doc -12- 200843778 32·如請求項29之用途，其中該蘿南i在 /、Τ通柰劑係用於以每日為基礎之 多次劑量經口投藥。 3 3 ·如明求項11之用途，盆中續個辦 ^ ，、Τ忑個體在未投與該化合物的情 況下血漿苯丙胺酸濃度大於1〇〇〇 μΜ。 -34.如請求項33之用途，其中該藥劑將該個體之血襞苯丙胺 酸濃度降低至低於600 μΜ。 35· —種用於偵測生物喋呤類物質混合物中之生物喋呤的用 途，其包含： • 藉由逆相HPLC分離該混合物中之生物喋呤類物質；及 在ΒΗ4及其類似物之情況下，藉由以下步驟執行電化 學偵測··藉由第一電極將ΒΗ4及所提供之其類似物氧化 為醌型二氫生物喋呤形式，繼而在第二電極處將該等醌 型形式還原成ΒΗ4及所提供之其類似物，且量測該還原 反應所產生之電流來測定物質之濃度；及/或 在ΒΗ2、其類似物、生物喋呤或其類似物之情況下， 藉由將ΒΗ2物質柱後氧化為生物喋呤之後進行螢光偵測 來量測該等物質。 3 6·如請求項35之方法，其中生物喋呤類似物係使用含10〇/〇 • MeOH之移動相量測。 . 37.如請求項35或36之方法，其中該等生物喋呤係使用含2% MeOH之移動相於2% MeOH中量測。 128231.doc -13-