TW200539841A - Progenitor endothelial cell capturing with a drug eluting implantable medical device - Google Patents

Description

200539841 九、發明說明： [相關申請案之相互引用] 本申晴案為美國申請案序號10/442,669，申請日2〇〇3 年5月20日（其主張美國臨時申請案序號6〇/382,〇95，申 請日 2002 年 s日 οπη 、 年 月20日之權益）與美國申請案序號 :〇—申請曰2003年2月“（其主張美國臨時申 '案序號6〇/，申請曰2002年2月6曰之權益且為美國申

請案序號09/808,867，申請曰2〇〇1年3月15曰（其係主 張美國臨時申請案序號60/189,674,申請曰2000年3月15 日及美國臨時申請案序號6〇/2〇1，789,申請日2〇〇〇年5月 4曰之振幻4部份接續中請案）的部份接續中請案。本 發明亦主張美國臨時中請案序號60/55丨，978,中請日'2〇〇4 年3月10日之權益。所有此等申請案之揭示係完整地以 引用方式納入本文。 【發明所屬之技術領域】

丰發明係關於一種用於植 醫療裝置。更特別地，本發明係關於移植片固定膜與合 私植物，其經塗覆以一種受控釋放基質，該基質包含用 導引藥物遞送至周圍組織之醫藥物質及接附於其上用於 捉存在與該裝置表面接觸之血液中的祖内皮細胞而於損 部位形成成熟内皮之配體。尤其，經聚合物基質/藥物" 體塗覆之移植片固定膜係用於（例如）諸如再狹窄、動月 粥樣硬化等疾病治療及内腔重建療法。 5 200539841 ‘ 【先前技術】 動脈粥樣硬化為造成世界上死亡與殘疾的首要原因之 一。動脈粥樣硬化涉及脂肪斑塊沈積於動脈内腔表面上。 脂肪斑塊沈積於動脈内腔表面上造成動脈之截面積變狹 乍。隶後’此堆積會堵塞末梢血流而引起由該動脈供血之 組織的缺血損傷。 冠狀動脈供應心臟血液。冠狀動脈粥樣硬化疾病（Cad) 為美國最普遍、嚴重、威脅生命之疾病，影響超過一千一 百萬人。冠狀動脈粥樣硬化之社會與經濟成本遠遠超過其 他大多數疾病。冠狀動脈腔變窄會引發心肌毀壞，首先導 致心絞痛，接著造成心肌梗塞而最後死亡。在美國每年有 超過一百五十萬件心肌梗塞案例。該等病患中有六十萬（或 4〇°/〇 )罹患急性心肌梗塞，而其中超過三十萬名患者在送 達醫院前即已死亡。（哈里森内科醫學理論，第14版， 1998) 〇 _ CAD可用經皮經腔冠狀氣球血管成形術（PTcA)進行治 療。在美國每年完成400,000件以上PTCA程序。於PTCA 中’係將氣球導管插入周邊動脈中並經動脈系統穿入受堵 基之艰狀動脈中。然後將氣球充氣，使動脈撐開並壓平阻 塞之脂肪斑塊，藉此增加血液通過該受侵襲動脈之載面血 流量。然而’該項療法通常不會使已受侵襲之冠狀動脈永 久打開。有多達50%已接受PTCA治療之患者需要在六個 月内重複進行該程序以校正該冠狀動脈之再次狹窄。醫學 上’將此於PTCA治療後發生之動脈再次狹窄稱為再狹窄。 200539841

在急性上，再狹窄涉及血管退縮與緊縮。結果，接著 血官之退縮與緊縮後，中層平滑肌反應因PTCA造成之動 脈損傷而增生。在反應血管損傷方面，位於中膜之平滑肌 細胞與外膜層之成纖維細胞進行外表型變化而促使金屬蛋 白酶分泌至周圍基質中、内腔遷移、増生及蛋白質分泌。 各種其他發炎因子亦被釋放入受損區域中，包括凝也噁烷 A"血小板衍生之生長因子（PDGF)、及成纖維細胞生長因 子（FGF)。已有許多不同技術用於解決再狹窄問題，包括 以各種藥劑或以移植片固定膜機械性使動脈張開來治療患 者。(全·里森内科醫學原I，第14版，1998 )。最初對 於靶定在平滑肌細胞增生之預防性治療的嘗試經證明無 效。已明顯了解為有效須靶定再狹窄過程之較早事件，接 著將重點放在使用基因療法抑制細胞調節途徑上。不幸 地，此等療法皆無法防止再狹窄發生。此在分子技術上之 失敗使得再次對習知藥物治療提案產生興趣。 於各種用於解決再狹窄之程序中，移植片固定膜已 證明為最有效。移植片固定膜為放置在病變血管節段以 加正常血管内腔之金屬支架。在受侵襲動脈節段放置移 片固定膜可防止動脈退縮及後續之閉 能防止動脈沿著動脈中層之局部裂開。藉由維持較： 用pTCA所產生者更大之内腔，移植片固定膜使再狹窄 少高達鳩。儘管其具有成功性，移植片固定膜仍未完 錢再狹窄。（❹普料#人1998，於所選罹患急性, 肌梗塞患者隨機比較冠狀加移植片固定膜與氣球血管成子 7 200539841 術。: 2502-2502 )。 動脈變窄可能發生於冠狀動脈以外之血管中，包括主 =脈、下腹股溝動脈、末梢股深動脈、末梢臂動脈、脛側 骨動脈、鎖骨下動脈及腸繫膜動脈。周邊動μ樣硬“ 病（PAD)之流行係取決於受侵襲之特定解剖部位以及診斷 閉塞所使用之標準。傳統上，醫師已使用間歇性跋行試驗 來決定是否發生PAD。然而，此測量方式可能過於低估該 項疾病於族群中之正確發生率。PAD發生率似乎隨著年齡 而變化，在較年長個體PAD之發生率逐漸增加。來自國家 醫院執行調查之數據估計每年有55，_名男子與44侧 名女子經首列診斷罹患慢性PAD，而有6〇,〇〇〇名男子與 5〇,〇〇〇名女子經首列診斷罹患急性pAD。9ι%之急性pAD 案例包含下肢。罹患PAD之患者中併發cad之普遍性可 能超過50%。此外，羅患PAD之患者中腦血管疾病之普遍 性亦有增加趨勢。 AD可使用、從皮經月空氣球血管成形術(ρτΑ)進行治 療。使用移植片固定膜肖w吉合可減少再狹窄之發生 率。然而’以諸如移植片較膜等醫療裝置所獲得之術後 、:果無法與使用標準手術換血管術料（亦即，使用靜脈 以工繞道物料者）所得到的結果匹敵。(外科原理， Schwartz等人編著，第2〇章，舰底第7版，二^⑴ 健康專業部門，紐約1 9 9 9 )。 …較佳地係使用繞道程序治療PAD，其中受阻塞之動脈 即段係使用移植物進行繞道。（^ϋ极，Schwartz等人 2:00539841 ^ 第20早’食―脈裘農’第7版，McGraw-Hill健康專 業"卩門紐約1 999 )。移植物可由自身的動脈節段例如隱 月夢脈或由5成移植物，例如由聚酯類、聚四氟乙烯（PTFE) 夂伸長♦四氟乙烯（ePTFE)所製得者所組成。術後開放率取 。午夕不同因素，包括繞道移植物之内腔直徑、用於該 移植物之合成材料種類及流出部位。然而，甚至在使用繞 、、夕植物日守再狹乍與血栓形成仍是顯著的問題。例如， 方；3年使用ePTFE繞道移植物進行下腹股溝繞道程序對於 又胭動脈、％道之開放率為5，而對於股腔動脈繞道僅達 12% 〇 結果’顯然有需要改善移植片固定膜與合成繞道移植 物之效能以進一步減少CAD及PAD之罹病率與死亡率。 以移植片固定膜而言，已有將移植片固定膜塗覆以各 種抗-血栓形成或抗_再狹窄藥劑以降低血栓形成及再狹 窄。例如，將移植片固定膜以放射活性物質浸潤似乎可藉 由抑制成肌纖維細胞之移動與增生而抑制再狹窄。（美國 專利案號 5,059，166、5，199,939 及 5,302，168)。對受處理 血管進行照射對於醫師及患者可能產生安全性問題。此 外’照射無法均勻治療受影響之血管。 另供選擇地，亦已將移植片固定膜塗覆以化學藥劑例 如肝素或磷醯基膽鹼，該二者皆可減少血栓形成及再狹 窄。雖然肝素與磷醯基膽鹼在動物模式中似乎能於短期顯 著減少再狹窄，但以此等藥劑治療對於防止再狹窄似乎無 長程功效。此外，肝素可引發血小板減少症，造成嚴重血 9 200539841 栓栓塞性併發症例如中㉟。因此，使移植片固定膜裝載足 夠治療上有效量之肝素或鱗醯基膽驗而以此方式治療再狹 窄並不可行。 已將合成移植物以各種方式進行處理，以減低術後之 再狹窄及血栓形成發生。（Bgs等人，1998小直徑血管移 植物彳彡復術·現今狀況ijui^ives Phvsio. 106.100] 15 )。例如，含聚氨基甲酸乙酯之複合材料如網 絡水石反酸氨基曱酸乙酯業經報導可相較於epTFE移植物減 少再狹窄。移植物表面亦使用射頻輝光放電修飾而將聚對 苯二甲醯添加至eP丁FE移植物中。亦已將合成移植物浸潤 以生物分子例如膠原蛋白。 内皮細胞（EC)層為正常血管壁之重要組成，其提供血 ML與血g壁周圍組織間之界面。内皮細胞亦涉及包括血管 生成啦乂及防止血栓形成等生理事件（R〇(jgers GM. FASEB J 1988;2:116-123)。除了組成血管結構之内皮細 胞外，最近的研究已揭示EC與袓内皮細胞（pEC)在出生後 於周邊血液中進行循環（淺原T等人，科學1997; 275:964-7 ; Yin AH 等人，血液 1997; 9〇:5〇〇2-5〇12 ; Shi Q 專人，血液 1998;92:362-367; Gehling UM 等人，血液 2000; 95.3106-3112，林 Y 等人，j Clin Invest 2000; 105 :71-77 )。 PEC據相信係遷移至具有受損傷内皮細胞櫬層，包括創傷 及局部缺血損傷部位之循環系統區域（高橋τ等人，Nat Med 1999; 5:434-438 )。於正常成人中，存在周邊血液中Epc 之濃度為3-10細胞/mm3 (高橋τ等人，Nat Med 1999; ίο 200539841 5.434-438 ’ Kalka C 等人，Ann Thorac Surg. 2000; 70:829- 834 )。現已明瞭血管對損傷所產生之各相係受内皮細胞 衫¥ (右未受調控）。據相信功能性内皮層於已受損之加 移植片固定膜之血管節段上的快速重建，可藉由提供對循 壞性細胞因子之屏障、防止血栓之有害影響、及藉由内皮 細胞可製造使底下平滑肌細胞層不活性化之物質的能力而 助於預防此等可能之嚴重併發症。（Van Belle等人，1997 φ 私植片固疋膜内皮細胞化。循環作用95 ; 438_448 ; Bos等 人，1998·小直徑血管移植物修復術··現今狀況Archivpg Physio, Riochem,. 106:100] 15 ) 〇 已藉由於移植片固定膜植入後局部遞送血管内皮生長 口子（VEGF) 種内皮細胞促分裂劑，而激發内皮細胞生 長於移植片固定膜表面上。（Van Belle等人，1997移植 片固定膜内皮細胞化。避:438-448 )。將存在 食鹽水中之重組蛋白質生長因子（VEGF)施用於損傷部位會 _引發所希望的作用’ VEGF係於移植片固定膜植入後使用 LI氣球導g遞送至損傷部位。此項技術因為其經證明單 一劑量遞送之功效低且產生不一致的結果故不被希望使 用。因此，此程序無法每次正確再現。 已將合成移植物接種以内皮細胞，但是以内皮細胞接 種所得之臨床結果-般很差，亦即術後之張開率低（— 等人，1998,顯微血管移植之新概念與材料〔人工修復移 植物内皮細胞接種與基因療法。龜微外科學以；263-256 ) 似乎係由於事實上細胞並未適當地附著至移植物上，及/或 200539841 因活體外操作而喪失其EC功能。 入因=内皮細胞生長因子及原位環境條件為調節内皮細 胞於血管損傷部位之 、者、生長及分化所必須。於是，關 Λ乍及，、他血官疾病，有需要研發用於塗覆醫療裝置 括移植片固疋膜與合成移植物）之新穎方法及組成 物其可促進及加速功能性内皮細胞形成於所植入裝置之

表面上时U使⑨在標1巴血管節段或所移植内腔上形成鋪滿 之EC單層並抑制新内膜增生。 吴國專利案號 5,288,71 1 ; 5,563，146; 5,516,781 及 ’6:6，16()揭不-種以雷帕黴素單獨或與霉齡酸組合治療過 度增生血管疾病之方法。雷帕黴素係藉由各種包括口服、 凡—腸道血官内、鼻内、支氣管内、經皮、直腸等方法 才又藥予患者。该等專利進一步揭示雷帕黴素可經由其已浸 肩以單獨或與肝素或霉酚酸組合之雷帕黴素的血管移植片 口定膜提供予患者。關於該等專利案之已浸潤移植片固定 月吴所面臨的問題為該藥物在與組織接觸後即立刻被釋出而 無法持續至防止再狹窄所需要的時間。 歐洲專利申請案號EP 〇 95〇 386揭示一種具有局部雷 帕Μ素遞送之移植片固定膜，其中雷帕黴素從移植片固定 膜本體中之微探針直接遞送至組織，或係將雷帕黴素混合 或、、u &至塗布於移植片固定膜上之聚合物塗層。Ερ 〇 950 Ο Ο 杰 柔進一步揭示由全然非可吸收性聚合物例如聚二甲基 石夕氧燒、聚（乙烯-醋酸乙烯酯）、丙烯酸酯為主之聚合物或 共聚物等所組成的聚合物塗層。因為該聚合物為全然非可

(S 12 200539841 吸收性，故於藥物遞送至組織後，聚合物仍保持在植入部 位。 然而’大量殘留於、组、織附近之非可吸收性聚合物已知 會引發對其本身之發炎反應’並之後於植入部位復發再狹 窄。 此外，美國專利案號5,997,517揭示一種經塗覆以含 丙烯酸醋、環氧、_、乙烯共聚物、乙烯基聚合物及含 有活性基團之聚合物的厚相干鍵結塗層之醫療裝置。揭示 於該專利案之聚合物亦為非可吸收性，且當用於可植入醫 療裝置時可能引起與前述EP 〇 95〇 386所論述類似的副作 用。 前述提t Μ能在長期暴員著減低血栓形威_或再狹窄之 發生率。而且，先前技藝醫療裝置之塗層已顯示在裝置植 入％會破裂。因此’需要治療血管疾病之新穎治療裝置* 方法。 ^ 【發明内容】 [發明概述] 本發明提供一種用於植入血管内腔或具有内腔之器官 中的醫療裝置。該醫療裝置包含用於醫藥物質延長或受控 遞送至鄰近組織之受控釋出基質的塗層。該醫療裝置進: 步包含一或多種用於將袓内皮細胞捕捉於其内腔表面上以 恢復、增進或加速在由於血管損傷而植入該裝置處形成具 功能性内皮細胞之配體。於一項具體態樣中，該醫療裝置 包含—種其包含（例如）具有適應於導入患者體内之結構 13 200539841 的移植片固定膜或合成移植物。 人於一項具體態樣中，該醫療裝置包含一種塗層，其包 含由無毒、生物可相容、生物可侵姓且生物可分解性合成 才枓組成之基質；至少—種用於遞送至植人部 之醫藥物質或藥物組成物，及一 Λ 人观次或夕種用於將祖内皮細胞 :捉並固定於該醫療裝置之血液接觸表面上的配體，例如 肽類、小或大分子、與抗體。 • ⑨一項具體態樣中，該醫藥物質或組成物包含一或多 種能夠抑制於該植入部位之平滑肌細胞移動與增生、能夠 :制血栓形成、能夠促進内皮細胞生長與分化而藉此且"戈 能夠防止植入該醫療裝置後發生再狹窄之藥劑或物質。此 外1祖内皮細胞捕捉於該醫療裝置之内⑮表面上可加速 於損傷處形成具功能性之内皮細胞。 於一項具體態樣中，可植入之醫療裝置包含移植片固 定膜。該移植片固定膜可選自該項技藝可利用之未經塗覆 #移植片固定膜。根據一項具體態樣，該移植片固定膜係一 種包含如美國專利申請案序號09/094,4〇2(其完整地以引 用方式納入本文）中所述之管式元件的可伸展性腔内内義 體。於另-項具體態樣中，該移植片固定膜係由生物可分 解性材料製成。 受控釋出基質包含-或多種來自各種不同類型與來源 之聚合物及/或寡聚物，包括其為生物可相容、生物可分解、 生物可吸收且可用於醫藥品受控釋出之天然或合成型聚合 物。例如，合成型材料可包括聚酿，諸如聚乳酸、聚經基

(S 14 200539841 •.. 乙酸或其共聚物及或組合、聚酸酐、聚己内，、聚戍酸羥 基丁醋，及其他生物可分解聚合物，或其混合物或共聚物。 於另一項具體態樣中，丨然聚合材料可包括蛋白質例如膠 原蛋白、血纖維蛋白、彈性蛋白、及胞外基f組成，或其 他生物劑或其混合物。聚合物材料或其混合物可與醫藥物 質一起呈組成物塗布於醫療裝置之表面上且可能組成單 層。可塗布多層組成物而形成塗層。於另一項具體態樣中， 可將多層聚合材料或其混合物塗布於醫藥物質之各層間。 例如，各層可依序進行塗布，其第一層直接與未經塗覆之 裝置表面接觸，而第二層包含醫藥物質且其具有一面與第 一層接觸及反面與周圍組織接觸之聚合物第三層接觸。若 而要可增加額外聚合物材料層及藥物組成物層，改變各組 成伤或其組成份之混合物。 或者，可將醫藥物質呈多層組成物進行塗布，且各層 可包含一或多種由聚合物材料包圍之藥物。於此具體態樣 中’多層醫藥物質可包含其包含多層單一藥物，每層一或 多種藥物，及/或交互塗布層中存在不同藥物組成物。於一 項具體態樣中，該等包含醫藥物質之各層可藉由一層聚合 物材料而彼此分開。於另一項具體態樣中，該裝置可包含 一層供於植入後立即釋出醫藥物質之醫藥組成物。 於另一項具體態樣中，基質包含聚（丙交酯-共乙交酯） 做為供塗覆醫療裝置之基質聚合物。於本發明此具體態樣 中’該聚（丙交酯-共乙交酯）組成物包含至少一種聚_dl-共-乙交酯聚合物或其共聚物或混合物，且其與醫藥物質混 200539841 乂起破遞迗至組織。然後使用標準技術 潰及/或化學汽仆、丰脾泠a 又貧淋、反 飞化法將塗層組成物塗布於裝置表面。 可將聚（丙$ j7 A者 一式… 旨）（PGLA)溶液塗布成用以分開 或夕層邊藥物質之單層形式。 於另一項具體態樣中，塗層組成物進一步包含較 可：受之聚合物及/或醫藥上可接受之載體，例如非；吸收 11 “物’如乙烯醋酸乙烯酯(EVAC)及甲基丙烯酸甲酯 (MMA)。，亥非可吸收性聚合物（例如）可進一步藉由增加 、、且成物刀子1 ’藉此延遲或減緩醫藥物質之釋出速率而助 於控制釋出該物質。 —可供納入基質中之化合物或醫藥組成物包括（但不限 定於）免疫抑制劑例如雷帕黴素、抑制平滑肌細胞移動及/ 或乓生之藥物、抗血栓藥物例如凝血酶抑制劑、免疫調節 劑例如血小板因子4與cxc_趨化因子；消炎藥劑、類固 醇例如二氫表雄酮（DHEA)、睾酮、雌激素例如17卜雌二醇； 抑制素例如塞伐他丁與氟伐地汀；ppAR_加瑪促動劑例如 f〇sghtaz〇ne ;核因子例如Ν；ρ·κ/3、膠原蛋白合成抑制劑、 血官舒張劑、誘導内皮細胞生長與分化之生長因子例如鹼 性成纖維細胞生長因子（bFGF)、血小板_衍生之生長因子、 内皮細胞生長因子（EGF)、血管内皮細胞生長因子（VEGF)、 抑制成熟白血球細胞附著之肽類或抗體、抗生素/抗微生物 劑、及其他物質例如丁酸與丁酸衍生物葛根素、纖連蛋白、 及其類似物。 裝置上之塗層進一步包含一種配體例如抗體。配體可 ⑧ 16 200539841 包含結合至諸如袓内皮細胞等細胞之表面上結構的分子， 例如至少一類抗體、抗體片段或抗體與片段之組合物。於 本發明之此方面，抗體可為單株抗體、多株抗體、嵌合型 抗體或人源化抗體。該抗體或抗體片段辨識並結合至祖内 皮細胞（内皮細胞，具有可轉變為成熟、具功能性内皮細 胞之能力的祖或幹細胞）細胞表面抗原，且調節細胞附著 至醫療裝置之表面上。本發明之抗體或抗體片段可共價或 非共鉍地接附於基質表面，或藉由連接分子拴在覆蓋醫療 裝置之基質的最外層。於本發明之此方面，舉例而言單株 抗體可進一步包含Fab或F(ab，）2片段。本發明之抗體片段 包含任何片段大小，例如其仍保持如同抗體可辨識並結合 至標靶抗原之特徵的大與小分子。 抗體及/或抗體片段係以高親和性及專一性辨識並結合 至抗原或存在欲觉治療哺乳動物之循環細胞之細胞膜表面 上的分子，且彼等之專一性並非取決於細胞譜系。例如於 一項具體態樣中，抗體及/或抗體片段係專一於人類祖内皮 細胞表面抗原例如^133、^)34、〇〇〜90、〇〇117、111^- DR、VEGFR-1、VEGFR-2、Muc-18 (CD146)、CD130、幹 細胞抗原（Sca-Ι)、幹細胞因子i (SCF/c_Kit配體）、Tie-2 及 HAD-DR 〇 於另一項具體態樣中，醫療裝置之塗層包含至少一層 如上所述之生物可相容性基質，該基質包含用以接附治療 上有效ΐ之至少一類天然或合成來源之小分子的外表面。 4小为子可辨識並與諸如袓内皮細胞等細胞表面上之抗原 17 200539841 ) 诸如 體相同 相互作用’以將祖内皮細胞固定於該裝置 皮細胞。小分子可衍生自各種來源例如細胞：形成内 酸、肽類、蛋白質、核酸、糖類等，且可盘、、成物如月旨肪 祖内皮細胞表面抗片之& /、例如 的結果或功效。 而達到和抗 於另-項具體態樣中，係提供用 再狹窄及動脈粥樣硬化之方法 ：，疾病例如 :予需要此類物質之患者。該方二 :置植入患者的血管或中空器官中，其中塗層包含1:: :抑制平滑肌移動而藉此抑制再狹窄之藥物或物/，、二 物可相容、生物可分解、生物可侵敍性、無毒… 如聚（丙交酯，共-乙交酯）共聚物 '貝例 組成物，其中該醫藥組成物包含用以口物）的醫藥 延遲釋出該藥物之緩 ^ ,,, 商縻衣置上之塗層亦可包含一種配 月立，例如用於將諸如内古 “ 内皮細胞及或祖細料細胞捕捉於該

我置之内腔表面上使能飛# A 成力月b性内皮細胞的抗體。 於另一項具體態樣中，係提供用於製造經塗覆醫療裝 置或具有塗層之醫療裝置治療的方法，其包含將一種盆包 含生物可相容、生物可分解性、無毒之聚合物基質，例如 聚（丙交醋-共-乙交酿）共聚物，及—或多種醫藥物質的 醫藥組成物塗布於該醫療裝置，其中該基質與物質係於進 仃塗布至該醫療裝置前混合並接著將包含至少一種配體之 溶液塗布於該裝置之最外表面，或塗布於具有該藥物/基質 组成物之裝置的外表面上。或者該方法可包含將至少一層 18 200539841 其包含-或多種藥物與醫藥上可接受載劍之醫藥組成物， 及將至少—層聚合物基質塗布於該醫療裝置上之步驟。於 該方法中’可獨立地將含有或不含醫藥物質與配體之聚合 物基質藉由數種使用標準技術之方法，例如浸漬、喷淋或 蒸汽沈積塗布於該醫療裝置。於—項另供選擇之具體態樣 中’可將聚合物基質塗布於含有或不含醫藥物質之裝置 上。於本發明其中所塗布之基質不含藥物的方面，係將藥 物以單層塗布於各層基質之間。 於一項具體態樣中，該方法包含塗布多層醫藥組成物 而於醫療裳置之最外表面塗布配體以冑（例如）諸如抗體 等配體可接附於該裝置之内腔表面中。 於另-項具體態樣中，塗層係由多組成醫藥基質例如 用於延緩早期新内臈增生/平滑肌細胞移動之快速釋出醫藥 试劑’及釋出用於維持血管效能之長效型藥劑例如内皮氧 化氮合成酶（eNOS)、組織纖溶酶原活化劑、抑制素、類固 酵、及/或抗生素的第二生物安定性基質所組成。 【實施方式】 [發明詳細說明] 於本文所例舉說明之具體態樣中，係提供一種呈可楂 入結構之形式的醫療裝置，其經塗覆以一種包含經分布於 生物可分解、生物可相容、無毒、生物可侵姓、生物可吸 收性聚合物基質（如美國專利申請案序號10/442,669 (其完 :地以引用方式納入本文）中所述者）中之醫藥物質，與配 月且例如抗體或任何其他可接附至該基質而用以將諸如内皮 19 ••200539841 及袓内皮細胞等循環細胞捕捉並固定於該裝置之内腔表面 上之適宜分子的均勾基質。醫療裝置提供用以在該裝置植 入部位快速形成具功能性内皮細胞之機制，如美國專利申 請案序號09/808,867及10/360,5 67 (彼等完整地以引用方 式納入本文）中所述。 該醫療裝置之結構具有 糾W业巴3、一 / _ 夕種基底材料，且其係用於植入器官或血管之内腔中。基 底材料可為各種不同種類，例如不鏽鋼、Nitin〇卜ΜΡ35Ν、 金、鈕、鉑或鉑銥、或其他生物可相容性金屬及/或合金例 如碳或碳纖維、醋酸纖維素、硝酸纖維素、聚矽氧烷、交 %聚乙酸乙烯酯（PVA)水凝膠、交聯pVA水凝膠泡沫、聚 月女基甲酸乙酯、聚醯胺、苯乙烯異丁烯·苯乙烯嵌段共聚物 O^aton)、聚乙稀對苯二甲酸酉旨、聚胺基甲酸乙[聚酿 胺、聚酿、聚原酸酉旨、聚酸酐、聚喊楓、聚碳酸醋、聚丙 :、高分子量聚乙稀、聚四氟乙# '或其他生物可相容性 ♦口材料或其共聚物之混合物；％酯類例如聚乳酸、聚羥 基乙酸或其共聚物、聚酸酐、聚己内_、聚戊酸羥基丁酯 :厂他生物可分解性聚合物或其共聚物之混合物、胞外基 :二：f、膠原蛋白、血纖維蛋白或其他生物活性 醫療1置可為任㈣時或永久性導人哺乳動物中以預 :或蝴項醫學狀況之裳置。此等裝置包括任何經皮 下 經皮或手術導A & ¥ μ μ 而置於斋官、組織或器官内腔，例如 動脈、靜脈、心臟之、、〜々 之〜至或心房中的裝置。醫療裴置可包 20 .200539841 括移植片固定膜、移植片固定膜移植物；經包覆之移植片 固定膜例如該等經聚四氟乙烯（PTFE)、伸長聚四 (―)包覆者 '或合成型血管移植物、人工心臟瓣膜、人 二心臟及用於將人造輔助器官與金管循環系連結之固— 劑、靜脈瓣膜、腹部大動脈瘤（AAA)移植物夂 “、：久性藥物引流導管、栓塞螺旋、用於血管栓塞形 成之栓塞材料（例如交聯PVA水凝膠）、血管構造、血=

:合固定劑、經心肌換血管術移植片固定膜及/或其他二 裝置上之塗層組成物包含一或多種經併入聚合物基質 中以使該醫藥物質能以緩慢或受控_釋出之方式局部釋放至 鄰近或周圍組織中的醫藥物質。f藥物質以受控方式釋出 可使，小量藥物或活性劑能在長時間以零級溶析形式釋 出。樂物釋放動力學亦視藥物之厭水性而有所差異，亦即， 藥物之厭水性越大則該藥物從基質釋出之速率越緩慢。或 者親水〖生藥物從基質釋出的速率較快。因此，可根據欲 被藥物而改變基質組成物以維持該藥物於植入部位之 1而/辰度達一段較長時間。於是，可於所需部位提供一種 長/月力效，其可更有效預防再狹窄且可使所使用之釋 出醫藥物質的副作用減至最少。 基貝可包含各種聚合物基質。然而，該基質應為生物 ^ 、 生物可分解、生物可侵餘、無毒、生物可吸收性 且/、有、’友杈分解速率。可用於本發明之生物可相容基質包 括（4不限疋於）聚（丙交酯-共—乙交酯）、聚酯類例如 21 •200539841 聚乳酸1羥基乙酸或其共聚物、聚酸軒、聚己内醋、聚 戊酸經基丁_、及其他生物可分解聚合物、或混合物曰或: 聚物、及其類似物。於另一項具體態樣中，天然聚人材： 可選自蛋白質例如膠原蛋白、血纖維蛋白、彈性蛋白、及 胞外基質組成、或其他生物藥劑或其混合物。

可用於塗層之聚合物材料可包括聚合物例如聚（丙交 醋-共-乙交自旨），·聚_DL·丙交醋、聚_L_丙交g旨及/或其混合 物，且可具有各種不同黏性與分子量。例#，於一項具體 態樣中，可使用聚（DL丙交醋·共_乙交酯）（_=， Birmingham聚合物股份有限公司）。聚（dl丙交酯共-乙 交醋)為-種生物可相容、生物可分解、生物可侵蝕、盔毒、 生物可吸收性材料，其為含乙烯基之單體且可作為聚合物 月爹悲藥物載體。聚-DL-丙交酯材料可呈均勻組成物形式且 田經洛解及乾燥時，其可形成能夠將醫藥物質包陷於其中 以遞送至該等組織之通道晶格。 亦可依據被使用作為基質之聚合物或共聚物的特性黏 度、及組成物中的藥物含量而調控該裝置上塗層之藥物釋 放動力學。聚合物或共聚物特徵可能視聚合物或共聚物之 特II黏度而有所改變。例如，於一項其中使用聚（DL_丙交 s曰-共-乙交酯）之具體態樣中，特性黏度範圍可為約0·55至 、、勺〇·75 (dL/g)。添加至塗層組合物之聚（DL_丙交酯-共·乙 又S曰）畺可為该聚合物組成物之約5〇至約(w/w)。圖] 例舉浼明一種經部份塗覆以包含聚（Dl•丙交酯·共-乙交酯） 來合物基質之塗層的移植片固定膜。聚（DL-丙交酯_共-乙 22 200539841 交酯）聚合物在（例士 、、生塗覆之醫療裝置遭受拉夺盥/弋 拉伸及進行塑性鱼/ 也又狃長與/或 此，以倉匕勸灸為、…無變形時會變形而不會斷裂。因 …匕”又塑性與及彈性變形之聚合物例如聚(DL丙 交酯·共-乙交酯）酸為本沾灸 來（DL-丙 優點。而且可- ' 、主層具有超越習知技藝聚合物之 所’可猎由使用具有各種分子量之聚合物控職 物應具有較高分^量。^慢醫藥物質釋出速率，聚合 合，可達到對特定藥物之 飞八、·且 一戸> 1人私^女 佳，奋解速率。或者，可藉由將 層艰合物塗布於醫藥 接著再塗上一…… 金布"'或多層藥物， 此外，可將聚合物層塗布於藥物層之 二 塗層釋出之速率。 减低面樂物質從 你了稭由改變共聚物中丙交酯對乙交酯之比例而進-牛 知正塗層組成物之延展性 乂 例以掣俨街^ j 永合物之組成比 之機^ 之塗層’並增加該塗層對醫療裝置表面 、升附著性及有助於塗層組成物之釋出風 體態樣中，聚合物可依所希望之举物予。於此具 不旦 叩心+籾擇出迷率而改變1分 =;ΓΓ中丙交酯對乙交醋之比例範 。至/ 50携。亦可藉由調整（例如 T之存在量而控制藥物從塗層釋出之速率。 因:’聚合物之特徵性生物分解可決定藥物從塗層釋 >之逮率。關於聚合物生物分解之資料可得自製造商資 讯，例如關於丙交酯係得自Birmingham聚合物公司。。貝 例如，對於丙交醋與乙交s旨聚合物及共聚物7基本八

(S 23 •200539841 ==解。分解程序首先係水擴散入材料中接著進行 謝之更卢、乏I材枓裂解及最後伴隨細胞吞嗟、擴散與代 。射之更廣泛水解作用。材料之水解受特定聚合物之

親水二二聚合物之結晶度及環境之PH值與溫度影響/、 水性二I具體態樣中，例如對於低分子量聚合物、較親 上I::門較兩性聚合物及乙交醋含量較高之共聚物而 :刀“間可能較短。因此在相同條件下，dl_丙交醋 之低分子量共聚物，例如50/50 DL_PLG，相對上 ==解’而較高分子量同元聚合物例如L_PLA可能較 一 一旦聚合物經水解後，水解產物會被代謝或分泌出。 二由（例如）PLA纟解所產生之乳酸可轉而併人三幾酸循 衣中且可王一氧化石厌與水分泌出。亦可經由伴隨非專 一性酵素水解缝基乙冑（其可被分泌出或經酵素轉換成 其他代謝物）之隨機水解作用裂解。 方、另項具體恶樣中，塗層組成物包含非可吸收性聚 。物，例如乙烯醋酸乙烯酯（EVAC)、聚丁基_曱基丙烯酸 酯（PBMA)及曱基丙烯酸甲酯（MMA)，其量為約〇·5至約99% 之最終組成物。添加EVAC、ρΒΜΑ或曱基丙烯酸曱酯可 進 ν〜加基貝之延展性以使該裝置能更具塑性可變形 性。對塗層添加曱基丙烯酸甲酯可延遲塗層降解，並因此 亦可改善塗層之欠控釋放以使醫療物質能以甚至更緩慢之 速率被釋出。 可使用標準技術將醫療裝置之塗層塗布於該醫療裝置 24 •200539841 上以覆蓋該裝置之整個丰而，— 表面或部份塗布呈單一層藥物與 基質之均勻混合物，或？ 站紅味 ^ 飞王點狀矩陣形式之組成物。於其中 係將基質及/或基質/藥物έ日士仏 +物組成物塗布呈單一或多層之具體 態樣中，基質或組成物係以厚声 子又為約0 · 1 μπι至約1 5 0 μΐΉ ; 或約1 μπι至約100 μηι谁耔泠 進订塗布。或者，可將多層基質/藥 物以此厚度範圍塗布於步w 、、例如，可將多層各種不同 醫藥物質沉積於醫療裝f矣 “ 衣置表面上以使能一次釋出一種特定 樂物（每層含一種藥物，可由人 一 、 、 A &物基質分隔）。組成物 之活性成份或醫藥物質έ点 貝、，且成耗圍可介於該組成物之約1〇/〇 至約60% (w/w) 〇當塗厣组 ^ 9、、、成物與所植入處之鄰近組織接 觸後，塗層會開始以受 J乃式分解。於塗層分解時，藥 物緩慢地釋放入鄰近組織 条 ,,& ^ 士 Λ中且条物從該裝置溶析出以使藥 物此在局部具有其功效。 ^ Ψ ^ '1 a ^ “ ，因為該裝置所用之聚合物 月匕升y成通暹日日秸，樂物可 #山l ό 、植入该裝置後緩慢地從通道釋 放出。經塗覆之醫療裝 年 ,^ ^ ^ 疋仏一種用於將藥物遞送至周圍 ^ 制而不會全身性影響患者。可達成藥 物經由塗層基質中通道 ’、 %喋ώ b 析及基質之裂解以致一旦植入 後樂物便能自醫療裝之# 々 表面/谷析出持續達約一星里 年的時間。當藥物澧库把士—寸戶U生期至約一 又氏日寸藥物可藉由 出。若藥物赛度高，則鏟^ - 田U及擴政，合析 出。 、；、可經由塗層基質中之通道溶析 本發明之醫藥物質包 粥樣硬化及再狹窄之雄表治療血管疾病’例如動脈 抗生素/抗微生物劑、；：;：’醫藥物質包括但不限於 仏增殖劑、抗腫瘤劑、抗氧化劑、内 25 •200539841 皮細胞生長因子、凝血酶抑制劑、免疫抑制劑、抗·血小板 聚集劑、膠原蛋白合成抑制劑、治療性抗體、氧化氮供體、 反義募核苷酸、損傷癒合劑、治療性基因轉殖構體、肽類、 蛋白質、胞外基質組成、血管擴張劑、血栓溶解劑、抗代 謝物、生長因子促動劑、抗有絲分裂劑、抑制素、類固醇、 固醇類與非固醇類消炎藥、血管緊張肽轉化酵素(ACE)抑 制劑、自由基清除劑、PPAR-加瑪促動劑、抗癌化學治療

φ劑。例如，某些以下所提及之醫藥物質包括環孢菌素A (CS A)、雷帕黴素、雷帕黴素衍生物、霉酚酸（Mpa)、視黃 •义Ώ 丁酉夂丁酉文讨生物、維生素E、probucol、L-精胺酸 •L-榖胺酸、everolimus、sir〇limus、bi〇Hmus、α· 9、紫杉醇、葛根素、血小板因子4、鹼性成纖維細胞生長 口子（bFGF)、纖連蛋白、塞伐他丁、氟伐地汀、二氫表雄 酮（DHEA)、及 17/3-雌二醇。 圖1-10列示本發明醫療裝置之塗層的各種實施態樣示 φ 意圖。醫療裝置上之塗層包含用以促進功能性内皮細胞於 5亥裝置之内腔表面上形成鋪滿層之生物可相容性基質與抑 制過度内膜平滑肌細胞增生之醫藥物質，而藉此預防再狹 窄及血栓形成。於一項具體態樣中，基質包含合成或天然 材料，其中有治療上有效量之至少一種促進内皮、祖細胞 或幹細胞附著之分子例如抗體，及至少一種被遞送至鄰近 組織之化合物例如雷帕黴素、雷帕黴素衍生物、及/或雌二 醇。於植入裝置後，附著至該裝置表面上之細胞在該醫療 震置的内腔表面上轉形成為一層成熟、鋪滿、具功能性之 26 ⑧ •200539841 内'皮細:包。於醫療裝置上呈現一層鋪滿之内皮細胞可減低 於植入部位發生再狹窄及血栓形成。 -

用於本文，“醫療裝置，，意指暫時或永久導入内腔中 以預Γ或治療醫學病況之裝置。此等裝置包括任何經皮 下、牙皮或手術導入而置於器官、組織或器官内腔，例如 =、靜脈、心臟之心室或心房中的裝置。醫療裝置可包 移植片m定膜、移植片@定臈移植物；經包覆之移植片 固定膜例如該等經聚四氟乙烯（PTFE)、伸長聚四氣乙稀 (ePTFE)包覆者、或合成型血管移植物、人工心臟瓣膜、人 工心臟及用於將人造輔助器官與血管循環系連結之固定 劑、靜脈瓣膜、腹部A動脈瘤（AAA)移植物、下腔靜脈過 濾器、永久性藥物引流導f、栓塞螺旋、用於血管检塞形 ，之栓塞材料（例如，交聯pVA水凝膠）、血管縫合、血 e勿σ固定劑、經心肌換血管術移植片固定膜及/或其他導 管。於一項具體態樣中，移植片固定膜可由生物可分解性 材料製成。 將醫療裝置以該等組成物及方法進行塗覆可刺激於該 醫療裝置表面鋪滿的内皮細胞單層之發展，並且能調節局 邛k性發炎反應及其他因於植入該醫療裝置時之血管損傷 造成的血栓栓塞併發症。 用於本文，術語“抗體”意指一種諸如單株抗體、多 株抗體、人源化抗體或嵌合型抗體等抗體或其組合，且其 中違單株抗體、多株抗體、人源化抗體或嵌合型抗體具有 用以結合至位於標靶細胞表面上之抗原或該抗原之功能相 ⑧ 27 200539841 等物的高親合性及專-性。術語抗體片段涵括抗體之任何 片段例如Fab或F(ab’）2,且可具有任何大小，亦即例如其 具有與該抗體相同之結果或效能的大或小分子。（抗體、、函 括多數相當於每莫耳抗體含6·〇22χ，分子之個^體^ 子）。 於本發明之一方面，係將本發明之移植片固定膜或合 成移植物塗覆以一種包含調節循環袓内皮細胞附著至醫療 裝置之抗體的生物可相容性、受控釋出基質。本發明之抗 體以高親合性及專一性辨識並結合至循環血液中之祖内皮 細胞表面抗原以使該等細胞固定於裝置表面上。於一項具 體態樣中，抗體包含對袓内皮細胞表面抗原、，或祖或幹: 胞表面抗原例如血管内皮生長因子受體_丨、_2與d (VEGFR]、VEGFR-2 與 VEGFR.3 及 vegfr 受體家族異 構物）、Tie]、Tie-2、CD34、ThyUhy_2、Mu(M8(CD146)、 CD30、幹細胞抗原（Sca-丨）、幹細胞因子（scf或c_Kit配 體）、CD133抗原、VE-鈣依黏連蛋白、piH12、TEK、CD3i、

Ang]、Ang-2或表現於袓内皮細胞表面上之抗原具反應性 (辨識及結合）之單株抗體。於一項具體態樣中，可使用 單一型與一種抗原反應之抗體。或者，可將多數不同型對 抗不同祖μ細胞表面抗原《抗體混合m添加至基 質中。於另-項具體態樣中，係使用單株抗體混合物以藉 由靶疋特疋細胞表面抗原而增加上皮細胞形成之速率。於 本發明之此一方面’例如，係使用抗與抗cD-133之 組合並將其接附至移植片固定膜或移植物上之基質表面。

(S 28 /200539841 用於本女，“、a # 1《 療上有效1之抗體，，意指抗體含量可 纟、袓或幹細胞附著至醫療裝置。用於實施本發明 而要之抗體總量隨所使用之抗體特性而變化。例如 使用抗體量取決於該抗體與其反應之抗原間的結數斤 ^ 食人士已熟知如何測定一抗體欲用於針對特定 抗原之治療上有效量。 及二：：文’ “内膜增生”為血管壁内平滑肌細胞增殖

生=不希望增加。用於本文“再狹窄”意指再發 =内腔變窄。血管可能因為再狹窄而受堵塞。於RTCA 後’來自A管巾層及外膜之平滑肌細胞（其 2子在内膜中）增殖且移動至内膜並分泌蛋白質，形成平 π肌細胞與基質蛋白質累中 腔變窄_中此累積造成動脈内 窄向狹窄之末梢。用於本文，“抑制再狹 …巾料滑肌細胞移動及增殖並㈣防止蛋 泌，以致能預防再狹窄及由彼等引發之併發症。 可使用本發明之醫療步、 患者為哺乳動物，且包括人類〆 物進行治療之 狼子等類。 且匕括人類、馬、狗、描、豬、餐齒類、 胞，二夹細胞意指處於任何發育階段之内皮細 〃月髓、血液或局部組織來源且為非惡性之袓 或幹細胞至成熟、功能性上皮細胞。 對於經塗覆醫療梦w + t _ ι 戋靜财mu 外研究或用途，可從動脈 同_靜脈)分離出完全分化之内皮細胞， J寸《周邊血液或骨髄公 離出祖内皮細胞。藉由將内皮細 d 29 200539841 胞與塗覆以已併入抗體、峰異 \ Q子或其他黏附 試劑的基質之醫療裝置進扞拉六 7円皮細胞之 〇月而使内皮細胞έ士人較 療裝置上。於另一項具體態樣 、、、口。至该面 ' 内皮細胎可炎γ Ark 内皮細胞。經轉染之内皮細胞 〜、、坐轉形之 有表現抑制血拴生忐、单 滑肌細胞移動、再狹窄或逵釗 成十 飞違到任何其他治療目 子或蛋白質的載體。 生長因 本文所例舉血管疾病之户淼 ^ η療方法可施行於任何動脈戍 靜脈。包括於本發明此方面者 了力脈戈 囬耆為任何包括冠狀動脈、 股溝動脈、主動脈、鎖骨下動 壬 . 下動脈、腸繫膜動脈及腎動脈等 動脈之動脈粥樣硬化。本於明由 — 不^明中已涵括於其他類型血管阻 基例如導因於壁間動脈瘤者。 治療罹患血管疾病之哺# 瘆狀番抬λ · * 南礼動物的方法包含將經塗覆醫 療1置植入患者之器官或血管 甲例如，於經塗覆移植片 固夂膜之個案中係於血管成报 ^ S成形手術時植入。藉由袓細胞表 上之抗原被存在塗層上的抗體 、 仇^辨硪及結合，而於原位將 祖内皮細胞捕捉至經塗H夕紗社u 土復之移植片固定膜表面上。一旦袓 細胞黏附至基質後，存在泠 、 在土層上之生長因子促進新結合之 袓内皮細胞生長並分化而力 、 在矛夕植片固定膜之内腔表面上形 成一層鋪滿、成熟且呈功炸从 一功此的内皮細胞。或者，係於植入 醫療裝置前先使用分離自患者血液、骨ft或血管之袓細 I、幹細胞或成熟内皮細胞將醫療裝置於活體外覆蓋以内 皮細胞。於任-情況，醫療裝置内腔表面上存在内皮細胞 可抑制或防止過量内膜增生及血拴形成。

人類腾靜脈内皮細胞（HUVEC)係根據jaffe等人，L 30 .200539841

Clm. Invg^L ’ 52:2745-2757，1 973 (以引用方式納入本文) 之：法行自馭贡亚用於實驗中。簡言t，係藉由以膠原蛋 白酶處理而將細胞從血管壁剝離並置於經明夥塗覆之組織 培養燒瓶中，於含有低内毒素胎牛血清、90 Mg/ml無 防腐片J之豬肝素、2〇 #g/ml内皮細胞生長補充劑肌仍）與 谷胺醯胺之Ml 99培養基中進行培養。 祖内皮細胞（EPC)係根據淺原等人（供血管生成之推定 籲祖内皮細胞的分離。社275:964_967，1997 )之方法分 ㈣周邊血液°將包覆有抗CD34抗體之磁珠與經分 級之人類周邊血液共同培育。經培育後，將結合細胞溶析 出並了置於βΒΜ-2培養基（cionetics，聖地牙哥，CA) 中坧養 或者可將經富集之培養基分離物用於分離此等 =胞。簡言之，從健康男性自願者採集周邊靜脈血並藉由 密度梯度離心法分離得單核細胞部份，並將細胞平佈於經 纖連蛋白塗覆之培養玻片（Becton Dickinson)上於補充以 鲁5%胎牛血清、人類VEGF_A、人類成纖維細胞生長因子·2、 人類上皮生長因子、類胰島素生長因子_丨、與抗壞血酸之 EC基礎培養基_2 (EBM_2) (cl〇netics)中進行培養。將 生長7天，每48小時更換培養基。細胞以抗CDl33、cD45、 crm、CD31、VEGFR_2、Tie_2及E選擇蛋白之發光抗體 定特徵。 用於本文“配體，，意指與位於循環内皮及/或祖細胞上 。奢如X肢分子寺細胞膜結構結合的分子。例如，配體可為 抗體、抗體片段、小分子例如肽類、細胞黏著分子、基底

(S 31 .:200539841 膜組成例如基底膜蛋白質如彈性蛋白、血纖維蛋白、細胞 黏著分子、及纖連蛋白。於使用抗體之具體態樣中，該等 ^几體辨識並與專一性抗原決定位或結構，例如位於細胞膜 上之細胞表面受體結合。 於一項具體態樣中，抗體為單株抗體且可根據Kohler 與MUstein (分泌具有預定專一性之抗體的融合細胞之連 績培養。支·弟265:495-497，1975，以引用方式納入本文） 之標準技術製得’或可購自商業來源。内皮細胞可作為用 以製造抗内皮細胞表面抗原之單株抗體的免疫原。 於本發明此方面，抗内皮細胞之單株抗體可藉由將 HUVEC或經純化之袓内皮細胞注射入小鼠或大鼠中而製 備得。經一段足夠時間後，將小鼠犧牲並取得脾臟。脾臟 、、’田胞藉由將其與骨髓瘤細胞或與淋巴瘤細胞（一般係於非_ 離子性清潔劑例如聚乙二醇存在下）融合而無限增殖化。 令所成之細胞（包括已融合之融合瘤）生長於選擇培養基 (例如HAT-培養基）中，並將存活細胞使用有限稀釋條 件生長於此類培養基中。使細胞生長於適宜容器例如微量 滴定槽中，並篩檢上清液中含有具所希望專一性（亦即與 内皮細胞抗原之反應性）的單株抗體者。 已存在有各種增進單株抗體產量之技術，例如將融合瘤 細胞注射至接受該等細胞的哺乳動物宿主之腹腔中然後採收 腹水液。若於腹水液中無法收集到足夠量單株抗體，則自宿 主血液採收抗體。已有各種用於分離及純化單株抗體之習知 方法以將單株抗體與其他蛋白質及其他雜質分開。 ⑧ 32 •200539841 本發明之範圍亦包括h μ ^ y 匕祜抗-内皮細胞單株抗體之有用結合 片段例如此等單株抗髅沾r， 且的Fab、F(ab，）2。抗體片段係藉由 習知技術獲得。例如，丄 疋ώ脑、牡/以π 了精由將抗體使用木瓜蛋白酶或胃 虫白酗進行肽酶分解而製備得。 本發明之抗體係指源白α 原自乳類之IgG類抗體；然而，此 並非意味僅限定於該類。μ> μ 、上述抗體及該等具有與上述抗體 功能性相等之抗體，不从 、 不喝其源自乳類、包括人類之哺乳動 物或其他來源，或盆έ人

/、、、且a係包括於本發明範圍中，亦涵括 其他類例如IgM、IgA、TpP望 —Λ ^ gE荨’包括此專類中之同種型。 於抗體之個案中’術語“功能性相等，，意指兩種不同抗體 :。口至抗原上之相同抗原部位’換言之’該二抗體競 爭、5至抗原上。抗原可位於相同或不同分子上。 兔275:964-967 )。製造抗CD34單株抗體之融合瘤可得自 美國種類組織收集（洛克非勒，MD)。於另一項具體態樣 中，係使用對内皮細胞表面抗原例如vegfr^與vecjfr_ 2、CDU3或Tie-2具反應性之單株抗體。於一項使用基因 改造細胞之具體態樣中，係使用標準技術以如上所述之相 於一項具體態樣中，係使用與内皮細胞表面抗原 c 34丨/或CD1 33反應之單株抗體。接附至固體撐體之 抗_CD34 f株抗體已顯示可從人類周邊血液捕捉祖内皮細 胞^寺捕獲後’此等祖細胞能夠分化成為内皮細胞。（淺 原等人，1 997。供血官生成之推定祖内皮細胞的分離。也 同方法製得對抗該經遺傳工程操作之基因產物的抗體 後在塗覆基質後塗布於接觸血液之醫療裝置表面。 33 .200539841 T可使用分離自與接受該醫療裝置植入物者相同之物 種的抗内皮細胞反應性多株抗體。 術。口 #植片固定膜，，肖於本文意指任何當插入或植 入血管内腔時可擴張血管内腔截面之醫療裝置。術語“移 植片固定膜’、括（但不限定於）已經由本發明方法塗覆 =市口可待不鏽鋼移植片固定膜、生物可分解性移植片固 疋膜’經塗覆之移植片固定膜例如經PTFE或epTFE塗覆 者。於—項具體態樣中，此包括經皮遞送以治療冠狀缝 閉塞或用於封閉脾、頸動脈、藤及胭血管之解剖或動脈瘤 的移植片固定膜。&另-項具體態樣中，係將移植片固定 版遞达入月爭脈血官中。移植片固定膜可由聚合物或金屬結 構元件組成，其上塗布有包含醫藥物質與配體例如抗體之 基質生物可侵|虫、生物可分解、生物可相容性聚合物，或 移植片固定膜可為由基質與聚合物混合所成之複合材料。 例如，可使用一種可變形金屬線圈移植片固定膜，例如揭 π於頒予WiktGr之美國專利案，㈤（以引用方式納 入本文）中者。亦可使用由諸如揭示於已公開國際專利申 請案W091/12779 “内腔内藥物溶析修補物”（以引用方 式、、内入本文）之回彈性聚合材料製成的自我-擴張性移植片 固定膜。移植片固定膜亦可使用不鏽鋼、聚合物、鎳-鈦、 纽、金、始-銀、或Elgil0y與Mp35N及其他含鐵料製成。 移植片固定膜係經由導管上之本體内腔遞送至治療部位， 在此移植片固定膜從導管釋出以使移植片固定膜擴張而直 接與血管内腔壁接觸。於另一項具體態樣中，移植片固定 34 .200539841 膜包含生物可分角午性移植片固定膜（Η· Tamai，冠狀移植 片固定膜之手冊，第3版，PW Serniys與MJB Kutryk編 著，Martin Dimtiz (2000)之第297頁）。習於該項技藝人 士應顯而易知，其他自我-擴張性移植片固定膜設計（例如 回彈性金屬移植片固定膜設計）可與本發明之抗體、生長 因子及基質共用。 術語“合成移植物”意指任何具有生物可相容特徵之 人造修補物。於一項具體態樣中，合成移植物可由聚乙烯 對苯二甲酸酯（Dacron⑧，PET)或聚四氟乙烯聚四氟乙烯 (Teflon®，ePTFE)製得。於另一項具體態樣中，合成移植 物係由例如聚胺基甲酸乙酯、交聯pvA水凝膠、及/或生 物可相容性之水凝膠泡沫所組成。於又第三項具體態樣 中，合成移植物係由具篩網之聚碳酸酯胺基甲酸乙酯内層 與具篩網之聚乙烯對苯二甲酸8旨外層所組成。習於該項^ 藝人士應顯而易知，任何生物可相容性合成移植物可與本 _發明之基質 '醫藥物質及配體共用。（Bos等人1998，小 直徑血官修補物：Current Status. Ariihives_Phyiochrm 末端至末端、末端至側面、側面至末端、御】面至側面、或 内腔内及用於血管吻合術或病害血管節段繞道，例如作為 腹主動脈瘤裝置。 ”於-項具體態樣中，基質可進一步包含天然物質例如 膠原蛋白、纖連蛋白、玻璃體結合蛋白、彈性蛋白、層連 蛋白、肝素、血纖維蛋白、纖維素或碳或合成材料^該 35 .200539841 土貝之王要要求為其具有足夠彈性與柔性以在移植片固定 膜或合成移植物暴露至周圍組織之表面上不斷裂。 為能塗覆諸如移植片固定臈等醫療裝置，可將移植片 固定膜浸潤或喷淋以（例如）具有適度黏性之液體溶液。 待各層已被塗布後，將移植片固定膜於塗布下一層之前先 進仃乾蚝。方;-項具體態樣中’薄、類漆之基質塗層劑量 總厚度不超過約1〇〇微来。

左於-項具體態樣中，可首先將移植片固定膜功能化， 酼後再添加基質層。其後，將抗體與包含藥物之基質表面 =。於本發明此方®，移植片固定膜表面之技術產生具 B月b〖生之化學基團。然後將該等諸如胺類之化學基團用於 固定基質的中間層，其係作為諸如肽類及抗體等配體之擇 體。 於另一項具體態樣中，適宜之基質塗層溶液係藉由將 料0毫克（mg)藥物載劑，例如聚J，L_丙交酿（商品名R2〇3， I購自Boehringer股份有限公司，Ingelheim，德國）於無 菌操作條件下溶於3毫升（ml)氣仿中而製備。然而，理論 上可使用任何為血液及組織可相容性（生物可相容）且能 2溶解、分散或乳化之生物可分解（或非_生物可分解）基 質作為該基質’若| (在塗布後）進行相對上較快速乾燥 而於醫療裝置上形成自黏性類似漆或塗料之塗層。 以共價或非共價之方式將 $進袓内皮細胞附著之抗體併入基質中。抗體可藉由將該 等抗體與基备塗層溶液混合而併入基質中然後將基質塗布 36 .200539841 於裝置表面。-般’係將抗體接附至塗布於該裝置内腔表 面上之基質的最外表面，以使抗體可突出於與循環血液接 觸之表面上。例如，可使用標準技術將抗體與諸如狀類等 其他化合物包括生長因子塗布於表面基質。 於-項具體態樣中，係將抗體加至含有基質之溶液中。 例如’將抗-CD34單株抗體之Fab片段以濃度為5〇〇至_ mg/dl與含有人類蠱纖維蛋白的溶液培育。應了解，抗 Fab一之濃度會有所變化’且習於該項技藝人士無須經由過 度實驗即可決定其最適濃度。將移植片固定膜加入F —血 纖維蛋白混合物中，並藉由添加濃縮凝血酶（濃度為至少 l〇〇〇U/ml)將血纖維蛋白活化。將所成含有Fab片段直接 併入基質中之經聚合血纖維蛋白混合物在移植片固定膜或 合成移植物上加壓成為薄膜（小於1〇〇 μιη)。實際上可在 塗覆移植片固定膜或合成移植物之前，先將任意類型抗體 或抗體片段以此方法併入基質溶液中。 例如，於另一項具體態樣中，可將有或無抗體片段之 整體抗體共價地偶合至該基質。於一項具體態樣中，係將 抗體及例如諸如生長因子等肽類經由使用異型或同型雙官 能性連接分子共價地繫於基質上。用於本文術語“繫於，， 意指藉由連接分子將抗體與基質共價偶合。使用連接分子 與本發明結合基本上涉及在基質接附至移植片固定膜後將 連接分子與其共價地偶合。待共價偶合至基質後，該連接 分子提供該基質一定數量能夠用於與一或多類抗體共價偶 合之官能活性基團。圖1Α提供例舉說明一種經由交聯分 37 •200539841 子之偶合作用。内皮細胞（1·〇1)藉由細胞表面抗原（1〇2)結 合至抗體（1.03)。該抗體係藉由交聯分子（丨〇4)繫於基質 (1.〇5-1.〇6)上。基質（1.05-1.06)接附至移植片固定膜（1〇7)。 可將連接分子直接（亦即透過羧基）或經由已知偶合化學， 例如酯化、醯胺化及醯化作用偶合至基質。連接分子可為 經由直接形成醯胺鍵結而與基質偶合之二-或三-胺官能化 合物，且提供可用於與抗體反應之胺-官能基。例如，連接 分子可為一種聚胺官能性聚合物例如聚乙烯亞胺（ΡΕΙ)、聚 稀丙胺（PALLA)或聚乙二醇（PEG)。各種PEG衍生物，例 如mPEG-琥珀醯亞胺基丙酸酯或mPEG_N_羥基琥珀醯亞 胺’與供共價偶合之製程法可市售購自Shearwater公司， 柏明漢，阿拉巴馬。（亦參見，Weiner等人，聚_乙二醇 間隔物對於藉由固定化抗體之抗原捕捉的影響。

Bii^hys. 45 ; 211-21 9 (2000)，以引用方式納入本 文）。應了解，可視所使用之抗體類型選擇特定偶合劑， 且無須過度實驗即可做成此項選擇。亦可使用此等聚合物 之混合物。此等分子含有多數個可用於表面-固定化一或多 種抗體之側胺-官能基。 小分子可包含能被用於替代抗體或其片段，或與抗體 或抗體片段組合之合成或天然分子。例如，凝集素為一種 非免疫來源之天然糖類-結合肽。内皮細胞專一性凝集素抗 原（Ulex Europaeus Uae 1 ) ( Schatz 等人，2000 人類子宮 内膜内皮細胞：分離、特徵化及組織因子與第丨型血纖維 蛋白溶酶原活化劑抑制劑之炎症-介導的表現历 38 •200539841 62:69 1 -697 )可選擇性地與祖内皮細胞之細胞表面結合。 已製造出用於靶定各種細胞表面受體之合成型“小分 子”。此等分子選擇性地與特定受體結合且能靶定特定類 細胞例如祖内皮細胞。可合成小分子以辨識内皮細胞表面 標記物例如VEGF。舉例而言，sun248 ( Sugen股份有限 公司）（Mendel等人，2〇〇3，sm 1248，一種靶定血管内 皮生長因子及血小板衍生生長因子受體之酪胺酸激酶抑制 劑：藥物效力學/藥物動力學關係之測定。ciin r,nc^Res,

Jan; 9(1 ): 327-3 7 )、ΡΤΚ787/ZK2225 84( Drevs J·等人，2003， 叉體酪胺酸激酶：用於新穎抗癌療法之主要標靶物。Curr _ TargetS· Feb;4(2):U3-21)及 SU6668 (Laird，AD 等 人 2002 SU6668 於活體内抑制 Fik l/KDR 及 pDGFRbeta， 導致小鼠腫瘤血管系統快速凋亡及腫瘤消退。FASEB j. May; 16(7): 68 1-90 )為可與VEGFR-2結合的小分子。 另一次組靶定内皮細胞表面之合成型小分子為（例如） 阿伐（v)貝他（3)整連蛋白抑制劑，SM256及SD983 ( Keir Js· 寻人，1999，新穎小分子阿伐v整連蛋白拮抗劑：與已知 血官生成抑制劑相當之抗癌功效。抗癌研究Mar· APr;19(2A):959_68)。咖256 及 sd983 二者皆為靶定並與 存在内皮細胞表面上之阿伐（v)貝他（3)結合的合成型分子。 本發明亦關於治療罹患血管疾病（例如動脈粥樣硬化） 且有需要此類以本發明經塗覆醫療裝置治療之患者的方 法口亥方法包含將本發明之經塗覆醫療裝置植入需要治療 的患者體内。本發明之方法可於活體外或活體内實施。 39 /200539841 本發明之塗層可使用該項技藝中可利用的各種技術， 例如n噴淋、蒸汽沈積、注射等及/或類似點狀矩陣方 弋進行k布例如，圖1例舉說明一種簡單之細胞捕捉型 式及藥物遞送機制’其中移植片固定膜支帛⑽顯示具有 由塗布於支架表面之藥物/聚合物基質層11〇與位於該藥物 /聚合物組成物上部之配體層120所成的連續塗層。圖2例 舉說明本發明另一種具體態樣，其中藥物/聚合物層110為 不連項層1 30，然而藥物/聚合物基質組成物總量較（例如） 圖2中所列示者大。 ± 例示另-種具體態樣，其中該藥物/聚合物層為不 連續。於此具體態樣中，係將藥物/聚合物組成物塗布於該 f置:卜緣之約3/4 ’然而層U〇的中間三分之—140包含 取大里的藥物組成物，且配體層係塗布於藥物/聚合物層之 上部。^ 4歹,J示另一種關於塗層塗布之具體態樣。於:發

明之此項具體態樣中’係將藥物/聚合物基質組成物以類似 點狀矩陣形式15〇塗布於醫療裝S i⑼表面之—部份。如 圖4所示，配體層12〇係塗布於包括該藥物/聚合物組成物 110之醫療裝置整個外緣的周圍。 * 又另—項具體態樣中5歹1J示一種經塗覆以經濃 縮方、该裝置1〇〇表面i 10之一節段中的藥物/聚合物基質组 ，物之醫療裝i 100。於本發明此方面’配體& 12〇覆蓋 者包括該藥物/聚合物組成物11〇之醫療裝置的整個外 $狀6列示另一種具體態樣，其中係將配體層12〇塗布以覆 盒裝置100之表面，且於一節段配體層12〇之表面中係: •200539841 樂物/聚合物組成物1 5 〇塗布於該裝置上。圖7列示另一種 具體態樣，其中該裝置可塗覆以含藥物/聚合物基質組成物 1 10、150之多層以一種連續層丨1()塗布於裝置1〇〇的表面 上，隨後再塗布配體層12〇並於配體層上塗布一層額外的 壬類似點狀矩陣形式1 50之藥物/聚合物基質不連續層。

其他另供選擇之具體態樣經列示於圖8Α及8Β中。於 本發明此方面，係將醫療裝置（此個案中為移植片固定膜 支木）塗覆以配體層〗2〇，且呈類似點狀矩陣形式1之 樂物/聚合物基質層可部份塗布至裝置於該配體層之上（圖 8Α)或位於配體層之下（圖8Β)。 圖9及10列示本發明其他具體態樣之橫截面。如圖9 斤不配體（例如抗體）顯示係位於經塗覆醫療裝置表面 土之取外層’而塗層可包含額外中間層，其包含該藥物/聚 合物組成物與額外組成。圖10Α另外例舉一種塗覆該裝置 之基底獏與中間層。 稂门叫&朕&丹11懇樣中，可將包含 零件2合物基f之塗層組成物塗布於移植片固定膜之組成 : 移植片固定膜之突起或螺旋元件。於本發明此方 ’可將未塗覆藥物/聚合物基質之移植 於移植片固定膜表 /、餘表面 面上塗覆以配轉Μ “於移植片固疋《之整個剩餘表 中，係將 1〇Β^。於圖1〇Β之具體態樣 置表面上西=組份與經抗體修飾表面交互展露於該裝 植片固定膜之I更加乾定治療該血管節段（例如位於移 月J及後端之較健康組織和高度病害之移植片

41 /200539841 並使移植片固定膜表 内皮細胞間的交互作 固定膜中央部份，亦即損傷中心）， 面上醫藥組成抗體表面與剛附著上之 用減至最低。 ^八：中所7^ ’移植片固定膜兩端組成可包括例如 抗月且或小分子（EPC捕捉）表面。螺旋㈣⑽

底膜底層塗層，且節段17G代表可由其溶析出供: 效能之藥劑❹eN〇S、tPA、抑制素、及/或抗生素的非可月 分解性生物可相容聚合物基質組成之緩慢釋出醫藥組成。 圖湖亦顯示移植片固定膜之環組幻80可由快速釋出醫 樂試劑組成以延緩新内膜增生/平滑肌細胞移動，而因此整 個移植片以膜200在該裝置之各部份塗覆以不同塗層。 以下實施例係例舉說明本發明，而無意用以限

明之範圍。 X 實施例1 塗層組成物之製備 _ 所購得聚合物聚DL丙交酯-共-乙交酯（DLPLG， B^rm^gham $合物公司）呈丸劑形式。為製備供塗覆移植 片固定膜之聚合物基質組成4勿，遂科重丸劑並將其溶於嗣 或二氣甲烷溶劑中而形成溶液。將藥物溶解於相同溶劑中 並加至該聚合物溶液達所需要濃度，因此形成一均勾的塗 層溶液。為增進延展性及改變塗層基質之釋出動力學，可 改义丙又g日對乙父酯的比例。然後將此溶液用於塗覆移植 片固定膜而形成圖n所示之均一塗層。圖12列示通過本 發明經塗覆移植片固定膜之橫截面。可使用各種標準方法

CC 42 /200539841 將聚合物/藥物組成物沈積於移植片固定膜表面上。 實施例2 聚合物/藥物與濃度之評估 用於喷塗移植片固定膜之製程：將已溶解於溶劑中之 DLPLG ?炎合物丸劑與一或多種藥物混合。或者，可將一或 多種聚合物以溶劑溶解並且可將一或多種藥物加入及混 合。將所成之混合物使用標準方法均勻地塗布於移植片固 定膜。經塗覆及乾燥後，評估該等移植片固定膜。以下列 ® 表例舉各種塗層組合物實例，其係使用各種不同藥物且包 含DLPLG及/或其組合物進行研究。此外，該等調配物可 由 DLPLG之基底塗層與DLPLG或另一種聚合物例如 DLPLA或EVAC 25之上部塗層所組成。塗層中所使用藥 物及聚合物之縮寫定義如下：MPA為霉齡酸，RA為視黃 酸；CSA為環孢菌素A; LOV為洛伐地汀（lovastatin)TM.(美 維諾林（mevinolin)) ; PCT為紫杉醇；PBMA為聚甲基丙烯 酸丁酯，EVAC為乙烯醋酸乙烯酯共聚物；DLPLA為聚（DL 丙交酷），DLPLG為聚（DL丙交酯-共-乙交酯）。 可用於本發明之塗層組成份及含量（％)的實例包含： 1 . 50% MPA/5 0%聚 L 丙交酯 2. 50% MPA/50% 聚 DL 丙交酯 3. 50% MPA/5 0% (86:14聚DL丙交酯-共-己内酯） 4. 5 0% MPA/5 0% (85:15聚DL丙交酯-共-乙交酯） 5. 16% PCT/84%聚 DL 丙交酯 6. 8% PCT/92%聚 DL 丙交酯

(S -200539841

7. 4% PCT/92% 聚 DL 丙交醋 8· 2% PCT/92% 聚 DL 丙交 SI 9. 8% PCT/92% (80:20 聚 DL 丙交酯 /EVAC 40) 10. 8% PCT/92% (80··20 聚 DL 丙交酯 /EVAC 25) 1 1 · 4% PCT/96% (5 0:50 聚 DL 丙交酯 /EVAC 25) 12. 8% PCT/92% (85:15聚DL丙交酯-共-乙交酯） 13. 4% PCT/96% (5 0:50聚DL丙交酯-共-乙交酯） 14. 25% LOV/25% MPA/50% (EVAC 40/PBMA)

15. 50% MPA/50% (EVAC 40/PBMA) 16. 8% PCT/92% (EVAC 40/PBMA) 17. 8% PCT/92% EVAC 40 18. 8% PCT/92% EVAC 12

19. 16% PCT/84% PBMA

20. 50% CSA/50% PBMA

21. 32% CSA/68% PBMA

22. 16% CSA/84% PBMA 實施例3 以下實驗之進行係用於測量覆於藉由實施例2中所述 方法塗覆之移植片固定膜上之塗層的藥物溶析圖譜。移植 片固定膜上之塗層係由4%紫杉醇與96% 50:50聚（DL丙交 酯-共-己内酯）聚合物組成。將各移植片固定膜塗覆以 500.mu.g之塗層組成物並於3 ml牛血清中於37°C下培育21 天。於培育期間在不同天數使用標準技術測量釋放入血清 中之紫杉醇。實驗結果列示於圖1 3。如圖1 3所示，紫杉 44 (§ •200539841 醇釋出之溶析圖譜非常緩慢且受到控制，因為在21-天培 育期間僅約4 Mg紫杉醇從移植片固定膜釋出。 實施例4 以下實驗之進行係用於測量覆於藉由實施例2中所述 方法塗覆之移植片固定膜上之塗層的藥物溶析圖譜。移植 片固定膜上之塗層係由4%紫杉醇與92% 50:50聚（DL丙交 酉曰）與EVAC 25聚合物組成。將各移植片固定膜塗覆以5〇〇 Mg之塗層組成物並於3 ml牛血清中於37〇c下培育1〇天。 於培育期間在不同天數使用標準技術測量釋放入血清中之 紫杉醇。實驗結果列示於圖14。如圖14所示，紫杉醇釋 出之溶析圖譜非常緩慢且受到控制，因為在1〇_天培育期 間僅約6 紫杉醇從移植片固定膜釋出。 實施例5

、以下實驗之進行係用於測量覆於藉由實施例2中所述 去乂復之和植片固定膜上之塗層的藥物溶析圖譜。移植 ^疋膜上之塗層係由8%紫杉醇與92°/。80:20聚（DL·丙交 )人EVAC 25聚合物組成。將各移植片固定膜塗覆以5〇〇 ^主層、、且成物並於3 ml牛血清中於3 7°C下培育14天。 1:培育期間在不同天數使用標準技術測量釋放入血清中之 中、杉醇。實驗結果列示於圖15。如圖15所示，紫杉醇釋 之溶析圖譜非常緩慢且受到控制，因為纟14•天培育期 a僅約4 /Ig紫杉醇從移植片固定膜釋出。 實施例6 以下實驗之進行係用於測量 覆於藉由實施例 2中所述 45 (§： .200539841 方法塗覆之移植片固定膜上之塗層的藥物溶析圖譜。移植 上之塗層係由8%紫杉醇與92%聚(dl丙聚 ==成。將各移植片以膜塗覆以之塗層組成物 夭ml牛血清中於3rc下培育21天。於培育期間在不 。數使用標準技術測量釋放“清中之紫杉醇 ::示於叫如…示，紫杉醇釋出之溶析二

制，因為在21_天培育期間僅〜紫杉 人 固疋膜釋出。上述數據顯示經由改變塗層之聚 合物組成’可於所需要之時間控制藥物的釋出。 實施例7 衣此貫驗中，係測量如實施例2中所述塗覆以包含 PGLA與9%紫杉醇之組成物的移植片固定膜之溶析圖譜。 溶析測試係用以提供紫杉醇從該聚合物基質釋出之動力曰學 數據。使紫杉醇於37t下釋放入牛血清中係欲近似於活體 内條件。㈣血清與血液類Μ，此項模Μ並不必'然反映所 植入裝置之確實釋出動力學。此項模擬提供一種可重複、 =控之環境從其可評估相對釋放量。溶析數據係於各組包 =m 〇·2〇、〇·29、〇·3 8 /ig/mm2紫杉醇之經紫杉醇塗覆 矛夕植片固定膜收集得。於動物測試研究中進行評估〇· 13及 〇·26 /xg/mm2 單元。 溶析測試方法：將經塗覆之移植片固定膜置於牛血清 方、3 7 C下。於所設計之時間點，將移植片固定膜自血清 中私出。從塗層萃取殘餘的紫杉醇。藉由將原始載於移植 口疋膜上之备、杉醇總量減去殘留於移植片固定膜上之紫 46 /200539841 t %里#异传釋出的紫杉醇量。圖！ 7示^每平方毫米移 植片□疋膜表面釋出之紫杉醇量。表工列示於1、14及28 天之活體外釋出動力學範圍。如ffl 16及表1所示，塗層 之釋出動力學緩慢而為紫杉醇範圍從帛1天之G至〇 〇51 Mg/lW至第28天之0.046至0.272心腿2。 表1

貝她1列 以刀別經塗覆4%紫杉醇/96% PGLA及100% PGLA之 移植片固定膜完成另外的主^ _ 、，月/谷析數據達70天及48天。 猎由分析42天内所報導血 _ T之务杉醇含量以監測紫杉 醇之洛析。檢測移植片固$ ^ 、……“ 殘留之紫杉醇量的測試方 法係用於特被化TG033 1A於90天砗夕，+山 Λ、. 太日寸之溶出。於5個可用 方；測試之移植片固定膜上的殘餘 Μ ^ r $- F, 1 〇7 0 /、糸杉知Ϊ顯示平均為2.29 U克（乾圍1.87-2.86)最大值。 於3 7 C下進行血清中溶析 唑涂霜浐诘Η [51〜 功間之特疋時間點測量該等 、，工土復移植片固定膜的重量。 ^ 之單元（H8小時）證明重^ =理和經模擬滅菌 亦列示不含藥物之PGLA的重量心 f間具有差異。 里流失以供比較。圖18列 47 /200539841 ^ 示此等實驗之結果。如圖18所示，模擬滅菌使經塗覆之 移植片固定膜重量增加。 於實驗期間之各時間點，以顯微鏡檢視移植片固定膜 塗層並照相。下表2列示樣本# 1 -3之一些目測特徵。 表2

樣本 編號 敘述 時間點 觀察結果* 1 4%紫杉醇 模擬滅菌 63天 塗層不再具有平滑外觀 且有些區域無塗層存在 70天 與6 3天類似，更多塗層 流失，但流失度不似 TG 0 3 2 7之78天時多 84天 與48及62天時之樣本#3 類似 2 4%紫杉醇 21天 平滑塗層，白色外觀， 表面上有些許泡泡 (無模擬滅菌） 28天 塗層不再平滑，有些塗 層流失 78天 與TG 0 3 3 1 A類似有更多 塗層流失 90天 與6 2天時之樣本# 3類似 3 100% PGLA 48天 塗層不再平滑，有些塗 層流失 62天 移植片固定膜之顯著區 域具有塗層流失 90天 少量塗層殘餘 .200539841 圖19A_19D顯示實際上所有存在塗層中之藥物於90 天血清培育後皆已溶析ώ ’而有些聚合物基質仍附著於移 植片固定膜上。結合重量變化、藥物溶析與顯微鏡評估可 用+以良好地特徵化塗覆表面。樣本#2與#3未經㈣㈣ 囷條件而反應較為類似。經過模擬滅菌條件之樣本，樣本 #1顯示於血清中具有較低塗層分解速率。於顯微鏡下觀察 到此組塗層外觀有塗層殘留的趨勢。此係合㈣，因為模 擬減菌條件恰好低於聚合物t Tg且可能造成該材料有此 退火。 一 於90天之藥物溶析書登明實際上所有藥物冑已從塗層中 溶析出。測量得之藥物量為最大值，因為已分解聚合物亦 會於測試波長處產生些許吸練。考量於其他組之測試的 殘餘藥物量證明於血清中28天後有大約嶋藥物被溶析 出。 此等結果提供證據顯示聚合物仍然存在，但是藥物實 際上於90天從存在血清中加載4%紫杉醇之pGLA基質中 溶析出。 實施例9 人内皮細胞由經抗_CD34塗覆之不鏽鋼盤的捕捉··於實 驗進行期間係將人類臍靜脈内皮細胞(huvec)(美國種類 養收藏）生長於内皮細胞生長培養基中。將細胞與 及其表面上有或無結合抗體之明膠塗覆樣本或未經塗覆之 不鏽鋼（SST)樣本進行培育。經培育後，將生長培養基移除 ::將樣本方、PBS中漂洗兩次。將細胞置於2%多聚甲酸固

49 (S .-200539841 定！〇分鐘並於PBS中漂洗三二欠，每次漂洗ι〇分鐘，以確 保所有固定劑被去除。將各樣本與封阻溶液於室溫下培育 30分鐘以阻斷所有非_專一性結合。將樣本以pBs漂洗— j並暴露至VEGFE_2抗體之1:1⑻稀釋液並培育過夜。接 著將樣本卩PBS漂洗三次以確保所有初級抗體已被去除。 將溶於封阻溶液中稀釋度為1:1⑼之職_共輛次級抗體 加至個別樣本並於室溫下於Belly叫咖搖晃裝置上培育 45分鐘。經培育後，將樣本於pBS中漂洗三次以含有％

Tween 20之PBS漂洗一：欠，然後再於pBs中漂洗。將樣 本以碘化丙錠（PI)染色並於共焦顯微鏡下顯影。 圖20A-4E為經塗覆以CMDX與抗_CD34抗體（圖 2〇A)'明膠與抗_CD34抗體（圖2〇B)、未經塗覆sst (圖 20C) CMDx塗覆且無抗體（圖2〇d)及經明黎塗覆且無 抗體（圖20E)之SST樣本的顯微攝影照片。該等圖式顯示 僅有經才充^覆之樣本含有許多附著力樣本纟面上的細 胞，如經由PI染色所顯示者。未經塗覆之SST對照組盤 顯示有少數細胞附著於其表面。 圖21A-21C為對照組樣本經塗覆以CDMX而無抗體結 合至其表面之顯微攝影照片。圖21A顯示經由Η染色呈 像時有很少細胞附著於樣本表面。圖21B顯示附著^細胞 為VEGFR-2陽性’表示彼等為内皮細胞，而圖2ic顯示 出被染色核與VEGFR-2陽性綠色螢光之組合。圖2id_f 為經明膠塗覆且在表面上無抗體之樣本的顯微攝影照片。 圖21D顯示無細胞存在因為樣本中未呈現ρι染色，且無 200539841 由樣本發射出之綠色螢光（參見圖2丨E及2 1 ρ )。 圖22A-22C為其表面上具有抗-CD34抗體結合之緩 CDMX塗覆SST樣本的顯微攝影照片。該等圖式顯示樣本 含有許多附著細胞，其已建立幾近鋪滿之單層（圖22a) 且其如綠色螢光顯示為vegfr_2陽性（圖22b及22C)。 同樣，圖22D-22F為其表面上具有抗-CD34抗體結合之經 明膠塗覆樣本的顯微攝影照片。此等圖式亦顯示藉由許多 紅色-染色之核及來自VEGFR_2/FITC抗體之綠色螢光現示 HUVECs附著於樣本表面。 【圖式簡單說明】 圖1為一項其中移植片固定膜支架包含一包圍整個装 置且由酉己體（外）層、一包圍著該支架整個外緣之藥物/ 聚合物（内）層所組成之塗層的具體態樣示意圖。 圖2為一項其中移植片固定膜支架包含一配體（外） 層及一包圍著該支架四分之三外緣之藥物/聚合物層的具體 態樣示意圖。 圖3為一項其中移植片固定膜支架包含一配體（外） 層及一包圍著該支架四分之三外緣之藥物/聚合物層且藥物 /聚合物濃度於該支架包圍層中段面較大的具體態樣示意 圖。 圖4為一項其中移植片固定膜支架包含一配體（外） 層及-塗布於該支架-節段外緣而其斷面呈半圓形之藥物/ 聚合物層的具體態樣示意圖。 圖5為一項其中移植片固定膜支架包含一配體（外） 51 200539841 層及一塗布於該支架-節段外緣之藥物/聚合物層的具體態 樣不意圖。 圖6為一項其中移植片固定膜包支架含一塗布於該移 植月固定膜整個外緣之配體層及一以類似點狀矩陣形式塗 布於該支架一部份之藥物/聚合物層的具體態樣示意圖。 。 為項其中移植片固定膜支架包含一包圍著該支 架外緣之藥物/聚合物層且一配體層塗布於該藥物/聚合物 層上^、及一以類似點狀矩陣形式塗布於該支架一部份之 額外藥物/聚合物層的具體態樣示意圖。 圖8A及8B為其中移植片固定膜支架包含一配體層塗 布方、4支木之整個外緣且一藥物/聚合物層組成物係以類似 點狀矩陣形式塗布於一部份該支架表面於該配體層上方 (A )與一藥物/聚合物基質係以類似點狀矩陣形式塗 =於該裝置表面上、包圍著該支架整個外緣且覆蓋該 藥物/聚合物組成物之配體層（8B)的可選擇具體態樣示意 圖。 圖9為一項具體態樣示意圖，其中所示移植片固定膜 支架之橫切面顯示包括配體（抗體）與藥物/聚合物組成物 之多層塗層。 圖l〇A為一項具體態樣示意圖，其中所示移植片固定 橫切面顯示包括位於該支架表面上之中間與基底 層塗層。_應為-項其中移植片固定膜之組成 態樣示意圖。 …同塗層組成的具體 52 •200539841 圖1 1為用以顯示藥物溶析組成物及配體層之部份經塗 覆移植片固定膜的示意圖。 圖1 2為顯7F塗層各層之移植片固定膜橫切面的示意 圖0 圖1 3係列不藥物-塗覆移植片固定膜之溶析圖譜，於 牛血清白蛋白中培育21天，其中該塗層包含5〇〇 之4%

紫杉醇與96%聚合物。用於該塗層中之聚合物為5〇:5〇聚 (DL丙交S旨-共·乙交g旨）。 圖1 4係列不藥物-塗覆移植片固定膜之溶析圖譜，於 牛血清白蛋白中培育1〇天，其中該塗層包含5〇〇 Μ之8% 紫杉酵與92%聚合物。用於該塗層中之聚合物為5…5〇聚 (DL丙交酯-共-乙交酯）/EVAC 25。 圖1 5係列不藥物_塗覆移植片固定膜於牛血清白蛋白 中培月10天之藥物溶析圖譜，其中該塗層包含5〇〇 之 8。/。紫杉醇與92%聚合物。用於該塗層中之聚合物為:如 聚-DL丙交酯/EVAC 25。 圖16係列示藥物_塗覆移植片固定膜之藥物溶析圖 譜，於牛血清白蛋白中培育21天，其中該塗層包含5〇〇: 之8%紫杉醇與92%聚（DL-丙交酯）聚合物。 g 中

圖17係列示藥物-塗覆移植片固定膜於血清白蛋白 培育1、14及28天之溶析圖譜，其中該塗層包含紫杉 與 PGLA。 乂 圖18係列示經4%紫杉醇存於96% pGLA聚合物基質 及100% PGLA塗覆之移植片固定膜於血清白蛋白中培育 53 /200539841 多達7 0天之藥物溶析試驗結果。 圖19A-19D為藥物-塗覆移植片固定膜於培養在血清 白蛋白90天（圖19Α與19Β)及84天（圖19C與19D) 後之照片。 圖20Α-20Ε為羧甲基葡聚糖（C]ViDx)與抗-CD34抗體 (20A);明膠與抗-CD34抗體（20B);未經塗覆之不鏽鋼盤 (20C)，經CMDx塗覆及經明膠塗覆之不鏽鋼盤與huvec 細胞培育並以碘化丙錠染色後顯示HUVEC附著之顯微攝 影照片。 圖21A-21C為對照組不鏽鋼盤（塗覆以CDMx而無抗 體）之顯微攝影照片。圖 21D-21F為對照組不鏽鋼盤（塗

【主要元件符號說明】 100 :移植片固定膜支架 1 1 0 ·藥物/聚合物基質層 120 :配體層 130 :不連續藥物/聚合物基質層

基質層部分 質組成物 54 /200539841 170 :移植片固定膜節段 180 :移植片固定膜之環組成 200 :整個移植片固定膜

(s

Claims (1)

1. •200539841 十、申請專利範圍： 1 · 一種醫療裝置，其包含血液接觸表面及用以控制一 或多種醫藥物質釋出至鄰近組織之塗層，該塗層包=一種 生物可吸收或非可吸收、生物可相容性基質、一或多種醫 藥物質、及一或多種位於該醫療裝置之血液接觸表面上與 祖内皮細胞之細胞膜表面上特定分子結合的配體。 2·根據申請專利範圍第1項之醫療裝置，其中該裝置 之結構及形狀係用於植入患者體内，且其中該裝置之至少 一表面包含一或多種基底材料。 3·根據申請專利範圍第1項之醫療裝置，其中該裝置 為移植片固定膜、血管或其他合成移植物、或與合成移植 物組合之移植片固定膜。 4·根據申請專利範圍第i項之醫療裝置，其中該裝置 為血管移植片固定膜。 5·根據申請專利範圍第4項之血管移植片固定膜，其 /移植片固疋膜之結構包含生物可分解性材料。 6·根據申請專利範圍第2項之醫療裝置，其中該基底 材料為生物可相容性。 7·根據申請專利範圍第丨項之醫療裝置，其中該基底 材料係選自不鏽鋼、Nitino卜MP35N、金、鈕、鉑或鉑銥、 生物可相容性金屬及/或合金、碳纖維、醋酸纖維素、 纖維去^ 月@文 、平I、氧化矽、交聯聚乙酸乙烯酯（PVA)水凝膠、交聯pvA 水嘁膠泡沫、聚胺基甲酸乙酯、聚醯胺、苯乙烯異丁烯-笨 乙稀敗段共聚物（Krat〇n)、聚乙烯對苯二曱酸酯、聚胺美 56 200539841 曱酸乙酯、?《醯胺、聚、聚原酸醋、聚酸酐、聚醚碾、 聚碳酸酯、聚丙烯、高分子量聚乙烯、聚四氟乙烯、聚乳 酸之聚酯類、聚羥基乙酸、其共聚物、聚酸酐、聚己内酯、 聚戊酸羥基丁酯、胞外基質組成、蛋白質、彈性蛋白、膠 原蛋白、血纖維蛋白、及其混合物。 8·根據申請專利範圍第丨項之醫療裝置，其中該生物 可吸收性基負包含一或多種選自由聚（丙交酯-共-乙交 酉旨）、聚乳酸、聚經基乙酸、聚酸野、聚己内酉旨、聚戊酸 羥基丁酯、其共聚物及組合物所組成的群組之聚合物或寡 聚物。 9.根據申請專利範圍第丨項之醫療裝置，其中該塗層 包含聚（DL-丙父酯·共_乙交酯）及一或多種醫藥物質。 10·根據申請專利範圍第8項之醫療裝置，其中該生物 可吸收性基質包含聚（DL-丙交酯）。 1 1 ·根據申請專利範圍第8項之醫療裝置，其中該生物 可吸收性基質包含聚（DL_丙交酯）、聚（丙交酯_共·乙交 酯）且該醫藥物質為紫杉醇。 12·根據申請專利範圍第丨項之醫療裝置，其中該醫藥 物貝係述自由抗生素/抗微生物劑、抗增殖劑、抗腫瘤劑、 抗氧化劑、内皮細胞生長因子、平滑肌細胞生長及/或移動 抑制劑、凝血酶抑制劑、免疫抑制劑、抗·血小板聚集劑、 膠原蛋白合成抑制劑、治療性抗體、氧化氮供體、反義寡 核苷酸、損傷癒合劑、治療性基因轉殖構體、肽類、蛋白 質、胞外基質組成、血管擴張劑、血栓溶解劑、抗代謝物、 57 /200539841 生長因子促動劑、抗有絲分裂劑、類固醇、固醇類消炎藥、 赵化因子、增殖劑-活化受體-加瑪促動劑、非固醇類消炎 ^ 血k緊張狀轉化酵素（ACE)抑制劑、自由基清除劑、 及抗癌化學治療劑所組成的群組。 1 3 ·根據申請專利範圍第9項之醫療裝置，其中該醫藥 物貝係選自由環孢菌素A、霉酚酸、霉酚酸1:nofetn acid、 每帕徽素、雷帕黴素衍生物、azathioprene、他克利姆 (tacr〇hmus)、曲尼斯特（卜⑽丨“討）、地塞米松、皮質類固醇、 =羅利姆（eVer〇limus)、視黃酸、維生素 E、r〇sgHtaz〇ne、 戈他丁（simvastatin)、敦伐地；丁（fiuvastatin)、雌激素、1 7卢- 一 1、二氫表雄酮、睾酮、葛根素、血小板因子4、鹼 ^成纖維細胞生長因子、纖連蛋白、丁酸、丁酸衍生物、 务衫知、紫杉醇衍生物及pr〇buc〇1所組成的群組。 一 I4·根據申請專利範圍第12項之醫療裝置，其中該醫 樂物質為環孢菌素A及霉酚酸。 α根據申請專利範圍第12項之醫療裝置，其中該醫 ’、 貝為霉酉分酸及維生素E。 物乂6·根據申請專利範圍第1項之醫療裴置，其中該醫藥 貝成该組成物之約1至約50% (w/w)。 (C據申請專利範圍第9項之醫療裝置，其中該聚 丙父s旨）聚合物構成該組成物之約5〇至約9州。 含二.根據申請專利範圍第"員之醫療袭置，其進一步包 種非可吸收性聚合物。 19·根據申請專利範圍第16項之醫療裝置，其中該非 58 d .200539841 可吸收性聚合物為甲基丙烯酸甲醋。 根據申請專利範圍第1項之醫療裝置，其中該塗層 a含早一含平γ ητ π 一々 ' 父酯）聚合物或聚（丙交酯-共-乙交 s曰）與I藥物質之均勻層。 21·根據申請專利範圍第1項之醫療裝置，其中該塗層 匕各夕層聚（DL-丙交顆）聚合物、聚（丙交醋-共-乙交酉旨〕 共聚物、或其混合物。 22·根據申請專利範圍第丨項之醫療裝置，其中該塗層 包含多層醫藥物質。 ， 23·根據申請專利範圍第1項之醫療裝置，其中該配體 係接附至该醫療裝置之血液接觸表面。 24·根據申請專利範圍第1項之醫療裝置，其中該配體 為與袓細胞表面抗原結合之抗體或肽類。 2 5 .根據申請專利範圍第1項之醫療裝置，其中該聚合 物基質係比例為50:50具有分子量為75,000至1〇0,00〇之 聚（丙交酯-共-乙交酯）。 26· 一種用於塗覆根據申請專利範圍第1項之醫療裝置 的方法，其包含： 將至少一層包含受控釋出聚合物基質、至少一種醫藥 物質、及視需要一種基底膜組成之組成物塗布於該醫療裝 置表面上； 將一種包含至少一類用以結合並固定祖内皮細胞之配 體的溶液塗布於該至少一層覆於該醫療裝置之組成物上； 及 d 59 •200539841 將該移植片固定膜上之塗層於真空下於低溫下進行乾

   2 7. —種治療罹患動脈粥樣硬化之哺乳動物的方法， 其包含植入一種包含用於將一或多種醫藥物質受控釋放至 或多種醫藥物質、及 療裝置之' <血液接觸表 鄰近組織之塗層的醫療裝置， 基質、一 定於該醫 其中該塗層包含生物可吸收 用以捕捉並將袓内皮細胞固 面上的配體。

   十/、圖式： 如次頁。

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