TW200536559A

TW200536559A - Medicinal composition containing peptide improved in water solubility and metal labeling efficacy thereof and medicinal formulation containing metal labeled peptide

Info

Publication number: TW200536559A
Application number: TW094108251A
Authority: TW
Inventors: Takayoshi Kawaguchi; Ikuya Seki; Marino Maemura
Original assignee: Nihon Mediphysics Co Ltd
Priority date: 2004-03-25
Filing date: 2005-03-17
Publication date: 2005-11-16
Also published as: EP1741450A4; WO2005092396A1; EP1741450B1; CA2558233A1; JPWO2005092396A1; JP4759508B2; US20070160532A1; CA2558233C; TWI332404B; US7854918B2; EP1741450A1

Description

(1) 200536559 九、發明說明【發明所屬之技術領域】本發明係關於一種可金屬標識之肽的識效率經改善的含有可金屬標識之肽的醫有經金屬標識的該肽之醫療用製劑、及該法。更詳細而言，於水系溶劑中不溶或難之肽可同時與鹼性有機化合物溶解於水系療用組成物，室溫下該肽之金屬標識效率組成物、該醫療用組成物的該肽以金屬標製劑、以及該肽的金屬標識方法。【先前技術】分子內具有可金屬標識的基之肽爲，或順磁性金屬等之標識可使用作爲診斷劑成分。過去的可金屬標識之肽爲，該肽結構部份越多於水系溶劑的溶解性越低，如此溶劑時，必須使用預先溶解於二甲基亞5風甲基甲醯胺（DMF )等有機溶劑中，再與緩衝液、或任意水溶液混合之方法。例如甲醯基-M e t - L e u - P h e ( F M L P )難溶於中七將溶解經金屬標識的該化合物甲醯基-Met. 煙鹼酸（fMLFK-HYNIC)於水系溶劑中，溶解後再添加緩衝液或水系溶劑（參照非] 水溶性及金屬標療用組成物、含肽的金屬標識方溶的可金屬標識溶劑中所得之醫可提高之醫療用識所得之醫療用藉由放射性金屬或治療劑的有效內的烷基等疏水肽欲溶解於水系 (DMSO )或二必要量的水、或，已知肽之一的 £緩衝液中。欲 •Leu-Phe-Lys-餅必須使用DMSO _利文獻1 )。 - 5- 200536559 (2) 然而，使用上述方法溶解的情況，與水系溶劑混合時，若可溶解的有機溶劑於溶劑中所佔的比率減少時，或下降一定的有機溶劑濃度時，會產生白濁或析出等肽的不。溶化情況。 μ 如上述可金屬標識之肽爲，藉由進行以放射性金屬的標識，可使用作爲核醫學製劑，但使用DMSO等有機溶劑溶解該肽之先前應用例中，其標識中100°C，1〇分鐘以上 φ 的加熱反應條件或室溫下3 0分鐘以上的反應條件爲必須的。例如，fMLFK-HYNIC必須爲室溫30分鐘至60分鐘的反應條件（參照非專利文獻1 )。 FMLP的衍生物之肽群適用於發炎等白血球浸潤所引起的疾病顯像化，但對於完全水系溶劑且金屬標識爲室溫的可能條件則並未明朗化（參照非專利專利2 )。 [非專利文獻 l]van der Laken，CJ. Et al·，J. Nucl. • Med·，38，8, 1310-1315 ( 1997) [非專利文獻 2]Verbeke，K. et al. Nuclear Medicine & ^ Biology, 27 卷，769-7 79 ( 2000 ) 【發明內容】本發明有鑑於上述的問題點，以使不溶或難溶於水的肽容易溶解於水系溶劑中，且提供含有非加熱下可金屬標識的該肽之醫藥用組成物、含有經金屬標識的該肽之醫療用製劑、以及該肽的金屬標識法爲目的。 -6 - (3) (3)200536559 本發明者欲解決上述的課題經詳細重複硏究結果，發現過去未被發現的驚人結果，即藉由於鹼性有機化合物中添加肽’可於未使用有機溶劑或界面活性劑下可將該肽於室溫下容易溶解於水溶液中，且非加熱下可進行金屬標識’而完成本發明。即’本發明係關於一種醫療用組成物，其特徵爲含有作爲可金屬標識之肽及醫藥添加物可被容許鹼性有機化合物。本發明係關於一種經冷凍乾燥的醫療用組成物，其特徵爲冷凍乾燥上述醫療用組成物所得者。本發明係關於一種醫療用製劑，其特徵爲藉由以金屬標識上述醫藥用組成物中可金屬標識之肽所得者。本發明係關於一種金屬標識方法，其爲可金屬標識之肽上以金屬標識的方法，其特徵爲於鹼性有機化合物的水系溶劑中溶解該肽後，標識金屬者。本發明係關於一種含有經金屬標識的肽之醫療用製劑的製造方法，其特徵爲使用上述金屬標識方法。使用本發明的相關醫藥用組成物，可提高於水系溶劑中不溶或難溶的可金屬標識之肽的溶解性，且無須加溫可金屬標識該肽者。使用本發明的相關金屬標識方法，可使該肽於非加熱條件下標識金屬。且，本發明的相關醫療用組成物之以金屬標識的該肽所成的製劑，例如使用可作爲發炎標識用使用之肽時，肽對於發炎的聚集率與過去方法所調製的組成物相比較有提高效果之功效。本發明中，例 -7- 200536559 (4) 如使用白血球結合性化合物作爲肽使用時，可提供進行隨著個體的免疫反應的白血球浸潤較盛之部分的標識之PET 影像診斷、SPECT影像診斷、MRI影像診斷或放射線治療等有用之醫療用組成物及醫療用製劑。實施發明的最佳型態以下對於本發明的實施型態作說明。本發明所使用的 φ 胺基酸皆以一字或三字作記號，無特別說明下左側表示N 末端側，右側表示C末端側。於胺基酸上所接括號，無特別說明下表示於側鏈結合的肽及有機化合物。又，括號內的胺基酸序列欲能明瞭全體結構，右側表示N末端側，左側表示C末端側。且，本說明書中，D體的胺基酸記載爲D-胺基酸。本發明的相關醫療用組成物，具體而言爲以於水系溶劑不溶或難溶的可金屬標識之肽、與作爲醫藥品添加物可 φ 被容許的鹼性有機化合物作爲必須成分，藉由溶解於於水系溶劑而調製。作爲鹼性有機化合物，例如可舉出具有胺基酸或咪唑環的鹼性化合物。作爲鹼性胺基酸雖無特別限定，但例如可舉出精胺酸、離胺酸、組胺酸、羥基離灣酸等，較佳爲精胺酸、離胺酸、組胺酸，更佳爲使用精胺酸。作爲具有咪唑環的鹼性化合物雖無特別限定，但可舉出咪唑。鹼性胺酸或具有咪唑環的鹼性化合物可單獨使用或組合2種上使用。 -8- 200536559 (5) 將鹼性有機化合物與可金屬標識的肽同時溶解於水系溶劑時’鹼性有機化合物的醫療用組成物時的濃度爲，添加至組成物中爲0.1 mM至1M的範圍爲佳。若比0.1 mM 的濃度低時，無法得到標識促進效果而不佳，若比〗Μ的濃度高時，因會有浸透壓毒性問題故不佳。又，鹼性有機化合物的量會依據所使用的肽種類而變動，但對於可金屬標識的肽而言，莫耳濃度的1 0倍至1 0 0萬倍範圍皆可，以1 000倍至10萬倍的範圍較佳。對於可金屬標識之肽而言爲低於1 0倍以下的莫耳濃度時，無法得到藉由鹼性有機化合物之充分溶解促進效果及標識促進效果故不佳，若爲1 00萬倍以上的莫耳濃度時該鹼性有機化合物因過剩量而爲對標識有阻礙作用而不佳。上述濃度範圍中，作爲組成物的較佳溶液的酸鹼値爲 8〜1 2，較佳爲8 · 5〜1 2。ΡΗ若比8更酸時，由鹼性有機化合物的溶解促進效果會變差而不佳，若比1 2更鹼時，恐怕會於活體會有壞影響而不佳。本發明所使用的可金屬標識之肽，具體而言，係爲於水系溶劑中不溶或難溶的肽，以可作爲診斷藥劑或治療用醫藥品之有效成分利用之肽爲佳，胺基酸3 0殘基以下或分子量45 000以下之聚胺酸化合物爲較佳。其結構中可含有胺基及羰基。該肽僅爲可金屬標識之肽即可並無特別限定，使用發炎症狀等的診斷時，例如可使用白血球結合性化合物。作爲本發明所使用的肽爲，適用下述式（1 )所示化 -9- 200536559

物 (化1 ) Z-Y-Leu-Phe-(X)n-Lys(NH2)m-8(-(R)〇.(T)l-U) (1) 其中化學式（1)爲與白血球的甲醯基肽受體之結合部位Z-Y-Leu-Phe-、全白血球中的單球、提高對淋巴球結合率的結合部位-(R ) 〇-、放射性金屬、可標識常磁性金屬之結構-U-、及結合這些的間隔物·（ X ) n-、_Lys (NH2 ) m-及-(T ) 1-所成。化學式（1)中，Ζ表示胺基的保護基，Υ表示Met 或Nle，（ X ) η中，X表示1個或1個以上的胺基酸或可有機合成之化合物所成的間隔物，η表示1或0 ; (NH2 ) m中，ΝΗ2表示作爲Lys的α位羧基之保護基的醯胺基，m表示1或〇; ε (-(R) 〇-(T) 1-U)中，R 表示 Lys 的 ε-胺基上醯胺鍵結的Ser或Thr、〇表示1或〇，Τ表示1個或1個以上的胺基酸或可有機合成的化合物所成之間隔物，1表示1或〇，ϋ表示可金屬標識之基。但，X與T可爲相同或相異。. 化合物（1 )中，對於U雖無特別限定於可金屬標識者，但較佳爲選自由複數胺基酸所成的配位子、較具而言爲可舉出可金屬標識之的三肽、二肽氫硫基醯化物、碳數 8至20的含氮環狀化合物、碳數8至20的含氮環狀羧酸 -10- (7) 200536559 化合物、碳數8至20的含氮環狀羧酸化合物、碳數8至 2 0的含氮環狀羧酸化合物之衍生物及碳數4至1 0的伸烷基胺殘酸等。較具體可舉例出，_Gys-Gly-Asp、-Cys-Asp-Asp、- C y s - A s p - G1 y、· C y s - G 1 y - G1 u、- C y s - G1 u - G 1 u、-Cys-G1 u-G1y -Gys-Gly-Asn 、 -Cys-Asn-Asn 、 -Cys-Asn-

Gly、 -Cys-Glyl-Gln、 -Cys-Gln-Gln、 -Gys-Gln-GIy、-Cys-Gly-Lys 、 -Cys-Lys-Lys 、 -Cys-Lys-Gly 、 -Cys-Gly-Arg、-Cys-Arg-Arg、-Cys-Arg-Gly 等金屬可標識的三肽；-Asp-Asp-氫硫乙醯基、-Gly -Asp·氫硫乙醯基、-Gly-Gly-氫硫乙醯基等二肽氫硫乙醯化物；1，4,7，10-四氮雜環十二烷基（Cyclen) 、1，4,8，11-四氮雜環十四烷基 (Cyclam ) 、：I，4，8，1 2 -四氮雜環十五烷基、1，4，8，1 1 -四氮雜環十四院基_5,7_二酮I (Dioxocycam)等碳數8至20的含氮環狀化合物；1，4,8，1卜四氮雜環十四烷基-1，4,8，11· 四乙酸（ΤΕΤΑ ) 、 1，4,7，10-四氮雜環十二烷基- N5N’5N”5N’’’-四乙酸（DOTA) 、：I 5 4 5 8，1 1 -四雜氮環十四烷基-5,7-二酮-Ν，Ν’，Ν”，Ν”’-四乙酸、1，4,7，10-四雜氮環十二烷基-丁酸、1,4,8，10-四氮雜環十二烷基-丁酸等碳數8 至2 0的含氮環狀羧酸化合物；1，4,7,10-四氮雜環十二烷基-卜胺基乙基胺基甲醯基甲基-4,7，1〇-三〔R，S〕-甲基乙酸（D03MA) 、1，4,7，10 -四氮雜環十二烷基- ΐ，4,7，10-α，〇’，〇”，〇:”’-四甲基乙酸（〇0丁]\4六）等碳數8至20的含氮環狀羧酸化合物之衍生物；乙二胺四乙酸（EDTA )、乙三胺五乙酸（DTPA )、乙四胺六乙酸、乙二醇-(2-胺 -11 - 200536559 (8) 基乙基）-N，N，N，，N，·四乙酸（EGTA)等碳數4至10的伸烷基胺基羧酸等可金屬標識的基。作爲化學式（1 )所示的具體化合物，其中化學式 (1 )中以Z表示甲醯基爲佳，例如： N-甲酿基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) - s ( -Ser-

Cys-Gly-Asn)、 Ν·甲酿基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) - ε ( -Ser-

Cys-Gly-Asp )、 N-甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Ly s- ε ( - S e r - C y s - A s p-Asp)、 N-甲醯基->11卜1^11-?11€-1<116，丁71.-1^5(]^}1：2)-€(-361>-0-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp )、 N-甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser-D-Arg-二乙三胺五乙酸（DTPA))、 N-甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) - ε ( - S e r -二乙三胺五乙酸（DTPA ))、 N-甲醯基- Met_Leu-Phe-Lys - ε ( - Asp-Asp·氫硫乙醯）、 N-甲醯基- Met-Leu-Phe-Lys - ε ( -Gly-Asp-氫硫乙醯）、 N -甲醯基- Met-Leu-Phe-Lys-s ( -Gly-GIy-氫硫乙醯）、 N -甲醯基- Met-Leu-Phe-Lys-e (-Asp-Gly-氫硫乙醯）、 N-甲醯基-Met-Leu-Phe-Lys- ε (•二乙三胺五乙酸 (DTPA))、 N-甲醯基-Met-Leu-Phe-Lys-肼煙鹼酸等。更佳爲 -12- 200536559 (9) N-甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) - ε ( -Ser-

Cys-Gly-Asn)、 N -甲醯基-N 1 e - L e u - P h e - N 1 e - T y r · L y s ( N H 2 ) - 6 ( -Ser-

Cys-Gly-Asp)、 N -甲酸基-N1e-Leυ-Phe-N1e-Tyr - Lys - ε ( -Ser-Cys-Asp-Asp )、

N-甲酿基-Nle-Leu-Ph.e-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp ) 、 N-甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - 6 ( -Ser-D-

Arg-二乙三胺五乙酸（DTPA))、 N-甲醯基- Met-Leu-Phe-Lys - ε ( - Asp_Asp-氫硫乙醯）、 N-甲醯基-Met-Leu-Phe-Lys- £ ( -Gly-Asp-氫硫乙醯）、及 N-甲釀基-Met-Leu-Phe，Ly s- ε ( - G1 y _ G1 y-氫硫乙醯）等0 化學式（1 )所記載的化合物使用於本發明時，可使用將可金屬標識的基以適當保護基保護者。如上述白血球結合性化合物等可金屬標識的肽可由下述說明之方法合成。 (1)皆由胺基酸所構成時，Applied Biosystems公司製肽自動合成機等廣泛被使用的肽自動合成裝置之B〇c 法、或Fmoc法等合成。經合成的複合體爲，由結合於固相用樹脂載體的狀態下同時進行脫保護基與樹脂戰體切出’其後以使用逆相系管柱等高速液體層析法（以 Λ F稱爲 -13- 200536559 (10) HPLC法）進行純化。其他可藉由肽液相合成法調製出、或由動物等採集。 (2 )含有非胺基酸化合物的情況時大部分的情況由與上述相同方法進行合成。例如，固相用樹脂載體上結合 L y s殘基或其保護衍生物，其n末端上以X的胺基酸殘基或其保護衍生物、或作爲間隔物的具有功能之化合物或其保護衍生物、Phe或其保護衍生物、Leii或其保護衍生 g 物、Y的胺基酸或其保護衍生物的順序結合，繼續活化於固相用樹脂載體上結合的Lys之側鏈的ε胺基酸，結合R 的Ser或Thr體或其保護衍生物，於此間隔物Τ的胺基酸或其保護衍生物、作爲間隔物之具有功能的化合物或其保護衍生物、其次結合可成爲U的可金屬標識的基之化合物或其保護衍生物，其後藉由切除樹脂載體所合成之作爲目的的上述式（1)合成物而合成。其他可金屬標識之肽亦可採用上述方法而容易合成。 φ 本發明的醫療用組成物中可金屬標識之肽的使用量，一般取決於有益於目的診斷及治療之範圍。此範圍爲安全性上可被容許範圍之量爲佳，另外使用作用於受體的肽時，使用與目的受體相同或較少量爲佳。較具體的肽使用量較佳爲〇·1 nM至10 // Μ的濃度範圍。本發明的醫療用組成物爲，將上述可金屬標識之肽與鹼性有機化合物同時溶解於，水系溶劑，具體而言爲對應需要經滅菌，添加其他有機溶劑的溶劑中而調製出。若必要可再添加所望的添加物。作爲添加劑，例如可舉出界面 -14- 200536559 (11) 活性劑、親水性有機溶劑、還原劑、pH調整劑、安定化劑等。作爲界面活性劑雖無特別限定，但例如可舉出單月桂酸聚環氧乙烷山梨糖醇酐、聚環氧乙烷山梨糖醇酐、聚環氧乙烷山梨糖醇酐單棕櫚酸酯、聚環氧乙烷山梨糖醇酐單硬脂酸酯、聚環氧乙烷山梨糖醇酐三硬脂酸酯、聚環氧乙烷山梨糖醇單油脂酸酯、聚環氧乙烷山梨糖醇酐三油脂酸 • 酉曰、聚乙一醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇600、聚乙二醇1 000及聚乙二醇1 540等之非離子性界面活性劑，其中使用聚環氧乙烷山梨糖醇酐單油酸酯爲佳。界面活性劑的添加量較佳爲醫療用組成物中〇 · 〇〗〜1重量％，較佳爲 0.05〜0.5重量％。作爲親水性有機溶劑，雖無特別限定，例如可舉出乙醇、丙醇、丁醇、乙腈、丙酮、甲基乙基酮等極性有機溶劑。親水性有機溶劑的添加量，較佳爲醫療用組成物中 Φ 0.1〜10重量％，更佳爲0.2〜1重量％。還原劑爲預防經標識金屬被氧化而添加者。作爲還原劑雖無特別限定’例如可舉出氯化第一錫、抗壞血酸、氫氧化硼鈉等。添加還原劑時的濃度爲添加至醫療用組成物中O.OlniM〜ΙΟηιΜ爲佳，更佳爲〇〇5ηιΜ〜ImM的範圍。作爲pH調整劑雖無特別限定，但例如可舉出鹽酸、乙酸、三氟乙酸（以下稱爲r TFA」）、檸檬酸、磷酸、抗壞血酸、氫氧化鈉、氨等。作爲安定化劑雖無特別限定，但例如可舉出抗壞血 -15- (12) (12)

200536559 酸、抗壞血酸鈉、對胺基安息香酸、對月: 龍膽酸、龍膽酸鈉等。添加安定化劑時& 成物中O.lmM〜1M爲佳，更佳爲5mM〜有關本發明的醫療用組成物爲，水識之肽與鹼性有機化合物爲溶解之水系又可冷凍乾燥水系溶液型態之醫療用組燥的型態。藉由冷凍乾燥，可作爲套組藥或治療用醫藥品而易於使用，亦可作料而易於使用。冷凍乾燥時，以水系溶劑肽與鹼性有機化合物爲溶解之水系溶液型用組成物，可使用一般方法進行冷凍乾燥水系溶液型態或經冷凍乾燥之型態的成物，可同時與含金屬等標識用試藥等作用醫藥品使用。本發明的醫療用組成物中可金屬標識率下以金屬標識，藉由以金屬標識所調爲’例如作爲可金屬標識之肽，若使用可合性化合物等對發炎部位之造影的肽時，集於因免疫反應所引起的發炎部位，由經像化該部位。更具體而言，有關本發明的放射性診斷劑及MRI造影劑使用時，可部位。又，本發明不僅可使其影像化，因放射性金屬，可作爲放射性治療劑使用。作爲放射性診斷劑使用時，本發明的 ^基安息香酸鈉、丨濃度爲添加至組 5 0 0 m Μ的範圍。 :溶劑中可金屬標 :液型態下使用， :物，作爲冷凍乾 :其他型態的診斷注射劑的最終原中可金屬標識之態下使用之醫療〇本發明醫療用組爲診斷藥或治療之肽可於良好效製的醫療用製劑利用於白血球結藉由肽作用而聚標識的金屬可影醫療用製劑作爲影像化相關發炎適當選擇適當的醫療組成物中的 -16- 200536559 (13) 金屬標 δ戠狀以 Tc-99m、In-111、Ga-67、Sn-117m、Sm-153、Re-186等SPECT用放射性金屬或Cu-64、Ga-68等 PET用放射性金屬作標識的放射性金屬標識肽爲佳。作爲 MRI造影劑使用時，於該肽上配位Cu、Fe、Mn、Gd、Dy 等常磁性金屬作爲常磁性金屬標識化肽爲佳。作爲放射性治療劑使用時，該肽以Y-90、Re-1 86或Re-188等放射性金屬標識作爲放射性金屬標識肽爲佳。作爲該肽以金屬，例如放射性金屬或常磁性金屬標識之方法，可使用種種方法。例如以 Tc-99m、Re-1 86及 Re-188標識時，本發明的醫療用組成物中可添加作爲氯化第一錫等安定量的醫藥品添加物之經許可的還原劑，與過鍀酸鈉溶液或過銶酸鈉溶液混合之一般方法而調製出標識化合物。以 Cu、Cu-64、Fe、Mn、Gd、In-lll、Sn-117m、Sm-153、Dy標識時，本發明的醫療用組成物與含有 Cu、Cu-64、Fe、Μη、G d、In-111、Sn_117ni、Sm-φ 1 5 3、Dy離子的弱酸性水溶性溶液混合而調製。此時最終 pH調整至8以上爲佳。以Ga-67、Ga-68或 Y-90標識時，本發明的醫療用組成物與含有Ga-67、Ga-68或Y-90 離子之弱酸性或弱鹼性的水溶性溶液混合而進行。此時最終pH調整至8以上爲佳。作爲以金屬標識時條件，可使用室溫下進行5分鐘〜 2 4小時，較佳爲5〜6 0分鐘，更佳爲1 0〜3 0分鐘之攪拌或翻轉等條件。含有以放射性金屬或常磁性金屬作標識的肽之醫療用 -17- 200536559 (14) 製劑’若必要可再添加藥學上被許可的添加物，可成爲較佳之放射性診斷劑、放射性治療劑。作爲相關添加物，可舉出藥學上被許可的抗壞血酸、抗壞血酸鈉、對胺基安息香酸、對胺基安息香酸鈉、龍膽酸、龍膽酸鈉等安定化劑、水性緩衝液等pH調整劑、D-甘露糖醇等賦形劑、及改良放射化學性純度所需之檸檬酸、酒石酸、丙二酸、葡糖酸鈉、葡庚糖酸鈉等。 φ 將含有以放射性金屬或常磁性金屬標識的肽之本發明醫療用製劑，作爲放射性診斷劑、放射性治療劑或MRI 造影劑使用時，可藉由靜脈內投予等一般所使用的非經口方法進行投予，其投予量爲考慮到患者體重、年齡、適當的放射線造影裝置、MRI測定裝置及對性疾病狀態等各條件下決定。例如以人類作爲對象時，使用Tc-9 9m標識肽之診斷劑投予量，以T c - 9 9 m的放射量爲3 7 Μ B q〜1 1 1 0 Μ B q的範 φ 圍’較佳爲 1 85MBq〜1 1 1 OMBq。使用 R e - 1 8 6 或 R e -1 8 8 標識肽之治療劑時，放射能量爲3 7 Μ B q〜1 8 5 0 0 Μ B q的範圍，較佳爲37 OMBq〜7400 MBq。使用Y-90標識肽之治療劑時，放射能量爲37 MBq〜3 700 MBq，較佳爲37 MBq〜1 11 OMBq的範圍。以其他放射性金屬標識的標識肽之投予量幾乎相同。使用以Gd、Fe、Mn、Cu、Dy等常磁性金屬標識之標識肽的診斷劑投予量爲，配合MRI影像裝置的感度、標的組織、投予的特定式樣及所要達成的使用效果而作適當選擇。 -18- 200536559 (15) 例如，對人類作靜脈內投予時，所使用的金屬爲Gd 時，一般爲人類每1公斤體重下爲0·0 1〜0.3mmol/kg的範圍之投予量爲佳。以下表示本發明的實施例，雖具體說明本發明但本發明未被限定於這些實施例。實施例中所得之物質的測定方法、所使用的試藥等如下所示。 φ ( 1 ) r計量器：血液內分佈使用自動化7計量器 (阿羅卡股份有限公司）進行測定。體內分佈檢討爲使用 Nal單頻道測定器（應用光硏工業股份有限公司）進行測定。 (2 ) r照相機：使用GMS-5 5 0U (東芝美地可爾股份有限公司）、或M i 11 e η n i u m M G ( G E橫河數位系統股份有限公司）進行測定。 (3)逆相 HPLC:逆相管柱 Cosmosil 5CI8-AR-300 φ (那可來地斯克股份有限公司，4·6χ 15 0mm )。 (4 )所有肽化合物使用固相合成法製作。 (5 ) ”mTc〇4·:使用”M〇/99mTC發生器（商品名：美其地克、日本美其菲吉克斯股份有限公司），使用於生理食鹽液溶離者。 (6 )試藥皆使用特級試藥以上的製品。 (7 )所有的實驗動物皆於開始實驗前I M期間每_ 1 2小時進行明暗循環條件之飼養。此期間飼料及水自由攝取。 -19- 200536559 (16) (8 )使用於本發明的肽爲如下述的肽。 Ser-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp ) 肽 2 :甲醯基-川6-1^11-?11^川6-丁？1*-1^3(1^112)-£(-Ser-D-Arg-DTPA 氺）肽 3 :甲醯基·Met-Leu-Phe-Lys- ε ( -Gly-Asp-Ac-S-Bzl )

* : DTPA :二乙三胺五乙酸 (9 )肽1的合成將肽1以固相合成法製造，使用以下的實施例。使用阿布來德生化系統公司製作的肽合成機（模型 4 3 0 A )，使用 Boc 法的 MBHA 樹月旨（p-Methoxy-

Benzhydryl amine Re sin hydrochloride, l%Divinylbenzene-polystyrene copolymer)以〇.5mM刻度條件下合成。此時 C末端、Lys殘基的側鏈由Fmoc基保護。延伸肽鏈，甲醯化N末端胺基後，Lys殘基的側鏈Fmoc基以20%哌嗪 /DMF切斷，於側鏈側延伸肽鏈。肽的切出爲於無水氟化氫：對甲酚（8 0 : 2 0 )中，於-2°C至- 5°C下反應 1·〇小時。對於所合成的肽，使用HPLC法（管柱：YMC-Pack ODS-A SH-365-5 (商品名，YMC股份有限公司，30x 250mm)，管柱溫度：室溫，溶離速度：20mL/分鐘，檢測器：紫外線可視吸光光度計（吸收波長：220nm ) ’溶離液A : 0. 1 % TFA/純水，溶離液B : 0. 1 % TFA/乙腈， (A/B(80%/20%) — A/B(30%/7〇%) 90 分鐘））取 -20- 200536559 (17) 出主波峰部分再進行冷凍乾燥。對於所得之肽，使用 HPLC (管柱：Zorbax300SB-C18 (商品名，橫河阿納可耳系統股份有限公司，4.6 X 1 5 0 m m )，管柱溫度 °C，流速：l.OmL/分鐘，檢測器：紫外光可視吸光光 (吸收波長：220nm )、溶離液A : 0. 1 % TFAl^水，液 B: 0.1% TFA/乙腈（A/B(80%/2 0%) - A/B( /70% ) 25分鐘））進行分析。其結果，所得之肽純 93.2% (面積百分率）。且’取代MBHA樹脂使用A pre-road resin亦可相同的合成。對於上述經純化的肽，於6M鹽酸內進行1 l〇°C 小時的水解後分解成各胺基酸。使用L- 8 8 00形日立胺基酸分析計（商品名，日立高科技術股份有限公司以下式條件求得胺基酸組成，確認出與肽1相同的胺組成。又，進行質量分析（以下，ESI-MS)確認出與的理論値一致。胺基酸組成分析條件機種：L- 8 8 00形日立高速胺基酸分析計光譜條件管柱尺寸：4.6 mm I. D. x 6 0.0 m m 固定相：日立卡司達姆離子交換樹脂# 2 622 移動相：檸檬酸鈉系緩衝液（4種類及分析管柱用0.2N-NaOH試液）的階段式溶離法逆相力地：50 度計溶離 30% 度爲進行，22 高速 )，基酸肽1 再生 -21 - 200536559 (18) (1 ) L- 8 5 0 0-PH 1 : 0. 1 6N，pH3 .3 (2) L- 8 5 00-PH2 ： 0.2N，pH3.2 (3) L- 8 5 00-PH3 : 0.2N, pH4.0 (4 ) L- 8 5 0 0 -PH4 : 1 .2N? pH4.9 流速：0.40mL/分鐘管柱溫度：5 7 °C 檢測試藥：（1 )茚滿三酮試液（2 ) (Ninhydrin Re agent L-8500 Set) 反應試藥流速：〇.35mL/分鐘反應裝置：電子加熱反應管柱，震檢測波長·· 5 7 0 n m及4 4 0 n m 標準胺基酸試藥：味之素胺基酸校正混合物濃度：各50nm〇i/mL (惟’ Pro爲稀釋液：〇 · 2 Μ檸檬酸鈉緩衝液（注入量：40 " L (各胺基酸2nmo1 定量計算方法：由面積値作出1黑以下表示所得之肽1的胺基酸組月個數）及質量分析結果。且’括弧內5 組成的理論値° 肽 l=Asp: (3) 3.19、Sei·· (1)

茚滿三酮用緩衝液定溫度：1 3 5 °C 100nmol/mL) pH2.2 ) ，P ro 爲 4nm ο 1 ) 丨絕對校正曲線匕分析値（每分子的 E示目的肽之胺基酸 0.97、Tyr ： ( 1 ) -22- (19) 200536559 0.97、Phe: ( 1) 〇·98、Lys: ( 1) 1.00、NH3 ( 1) 1.20、Leu ( 1) + Nle (2) 2.80、Arg: ( 1) 1.06、Cys: (1 ) 0.92。又，表示所得之肽1的ESI-MS的分析値。括弧內表示目的肽的分子量理論値。 ESI-MS ： MW = 514.1 ( 1514.7) | 【實施方式】 [實施例1] 藉由精胺酸的肽溶解性 (1 )方法將各1 0 0 // g的肽1、肽2及肽3加入4 1 〇 m Μ的精胺酸彳谷液中（pHl.l) ’使全量爲700//L。此時的莫耳濃度爲’肽1爲94//M、肽2爲99#M、肽3爲161//M。由外觀觀察確認有白濁後，取出各20 0 // L的試料液以孔徑 φ 〇·22 # m，麥雷克斯（註冊商標）-GV (商品名，日本 minipore股份有限公司）的過濾器進行過濾，對各過濃前的試料液與過濾後的試料液進行逆相HPLC分析，由過_ 目IJ後的肽之吸收峰面積値求得吸收峰面積百分率，作爲溶離率。HPLC分析條件如下所示。作爲比較例將肽1、肽2及肽3各溶解於水、DMSO (一甲基亞硕）中，對於各肽濃度爲94//M、99//M、】6 1 // Μ之試料進行相同檢討。 -23- 200536559 (20) Η P L C條件管柱：Cosmosil 5C18-AR-300 (那卡來地司可股份有限公司，4.6x150mm) 溶離速度：lmL/分鐘檢測：紫外光可見光吸收光度計（檢測波長： 2 2 0 n m ) HPLC系統：Alliance (日本瓦特司股份有限公司） P 溶離液A:0.1%三氟乙酸（以下稱爲TFA) /純水溶離液B : 0· 1 % TFA/乙腈濃度梯度：0分鐘（溶離液B20% ) -> 25分鐘（溶離液 B70% ) (2 )結果所得結果如表1及圖1所示。溶解各肽後，觀察其外觀結果爲，3種肽於水中未見到白濁狀，而於精胺酸水溶 φ 液中3種肽皆顯示無色澄清的外觀。此顯示與D M S Ο的試料溶液相同外觀。對於使用逆相Η P L C的溶離率，精胺酸及DMSO的各試料溶液皆顯示約1〇〇%的溶離率。由這些結果得知，與DMSO同樣地精胺酸可提高肽的溶解性。 -24- (21) 200536559 [表1] 各試料溶液經外觀之觀察結果及溶離率媒肽\\ 外觀溶難 1率水精胺酸 DMSO 精胺酸 DMSO 肽1 白濁無色澄清無色澄清 10 0.8% 9 8.6% 肽2 白濁無色澄清無色澄清 10 2.8% 10 0.9% 肽3 白濁無色澄清無色澄清 10 1.3% 10 8.5% [實施例2] 精胺酸、離胺酸及組胺酸中肽1於各pH的溶解性 (1 )方法將精胺酸、離胺酸及組胺酸溶解於水中，調製成精胺酸溶液爲41 OmM、離胺酸溶液爲4 89mM、組胺酸溶液爲 9 OmM的濃度。這些溶液使用氫氧化鈉水溶液及鹽酸將離胺酸及組胺酸水溶液的p Η調整成8、9、1 0、1 1，將精胺 φ 酸水溶液的Ρ Η調整成8、8 · 5、9、9 · 5、1 0、1 1。繼續將肽加入這些水溶液中調整成 9 4 // Μ濃度，觀察外觀確認有無白濁現象。取出各2 0 0 // L的試料液以孔徑〇 . 2 2 # m，麥雷克斯（註冊商標）-GV (商品名，曰本minip〇re 股份有限公司）的過濾器進行過濾，對各過濾前的試料液與過濾後的試料液進行逆相Η P L C分析，由過濾前後的月太之吸收峰面積値求得吸收峰面積百分率，作爲溶離率。 Η P L C分析條件與實施例1所記載的條件相同下實施。 -25- 200536559 (22) (2 )結果所得結果如表2所示。精胺酸溶液於PH8時顯示明顯的白濁現象。精胺酸、離胺酸及組胺酸之各水溶液於 pH 8 · 5以下顯示弱白濁現象，但離胺酸及組胺酸溶液於 pH8時亦顯示20%強的溶離率，離胺酸及組胺酸於PH 8 時亦確認出溶解肽的效果。且對於精胺酸、離胺酸及組胺酸水溶液，pH 9以上時爲無色澄清溶液，肽溶離率亦爲 85%以上。因此，這些鹼性胺基酸於PH8以上時顯示良好的肽溶解性。 [表2] 精胺酸、離胺酸及組胺酸之肽1的各pH下溶離率 ρΗ8 ρΗ8·5 ΡΗ9 ΡΗ9.5 pHl 0 pHl 1 精胺酸無測定（#) 4 3.8% 9 3.8% 9 5.4 % 9 8.8 % 10 0.8% 離胺酸 2 1.0% 變 % 8 9 . 〇 % 8 3.6 8 5.9 % 組胺酸 2 6.8% - % 8 5.9 % 9 0.7 9 6.7 % *因由外觀觀察並無明顯的白濁現象，故未進行HPLC測定。 [實施例3] 藉由咪唑的肽1於各p H下之溶解性 (1)方法將咪唑溶解於水中’調製成1 m Μ的濃度。該溶液中加入適量的鹽酸將ρΗ調整成8、8.5、9。繼續將肽加入 •26- 200536559 (23) 這些味哩水溶液中調整成94#M濃度，觀察外觀確認有無白濁現象。取出纟20” L的試料液以孔# Ο””，麥雷克斯（註冊商標）-GV (商品名，日丨minipGre股份有限公司）的過據器進行過冑’對各過濾前的試料液與過據後的試料液進行逆相HPLC分析，由過濾前後的肽之吸收峰面積値求得吸收峰面積百分率，作爲溶離率。HpLc 分析條件與實施例1所記載的條件相同下實施。 (2 )結果所得結果如表3所示。於ρ η 8、8 · 5、9中任一溶液皆顯示無色透明’又pH 8 · 5、9以上時顯示8 〇 %以上的溶離率。因此，對於肽1咪唑顯示高溶解性。 [表3] 藉由咪唑的肽1之各pH下由外觀的觀察結果及溶離率外觀溶離率 pH8 無色澄清 6 4.9% pH8.5 無色澄清 8 0.8% pH9 無色澄清 9 9.2%

[實施例4] 於各種添加物之肽1溶解性 (1 )方法將磷酸氫二鈉、檸檬酸二氫鈉、抗壞血酸鈉、咪唑溶 -27- (24) (24)200536559 解於水中，pH9的各水溶液調製成表4所記載的濃度。pH 調整使用鹽酸及氫氧化鈉水溶液實施。稱取的肽1中加入前述水溶液，作成94 // Μ，由外觀觀察到是否有白濁現象。又同樣地，於實施例2所得之精胺酸、離胺酸及組胺酸、水溶液中溶解肽1之水溶液亦確認是否有白濁現象，與比較對照的磷酸氫二鈉、檸檬酸二氫鈉、抗壞血酸鈉的各水溶液所得之肽1試料溶液作比較。繼續取出各2 〇〇 # L的試料液以孔徑0.22 //m，麥雷克斯（註冊商標）-GV (商品名，日本minipore股份有限公司）的過濾器進行過濾，對各過濾前的試料液與過濾後的試料液進行逆相 HP LC分析，由過濾前後的肽之吸收峰面積値求得吸收峰面積百分率，作爲溶離率。HP LC分析條件與實施例1所記載的條件相同下實施。 [表4] 各添力 □劑之試料溶液的濃度溶劑添加劑莫耳濃度重量濃度 —-----! dH 精胺酸 4 1 OmM 7 1 . 4 m g / m L — γ A丄 9 組胺酸 9 0 m Μ 14 mg/mL 9 離胺酸 4 8 9 m Μ 5 0 mg/mL 9 水磷酸氫二鈉 1 0 0 m Μ 14 m g/m L 一—'—— 9 抗壞血酸鈉 4 0 1 m Μ ~-—— 7 1 . 4 m g / m L 9 檸檬酸二氫鈉 243 mM 7 1 . 4 m g / m L ------ 9 咪唑一 1 m M | ------- w - 0.0 7 m g / ni L —— 9 -28- 200536559 (25) (2 )結果所得結果如表5及圖2所示。溶解肽1的結果’ 3種鹼性胺基酸之精胺酸、離胺酸及組胺酸的PH 9水溶液顯示無色澄清外觀，又對—於咪唑而言使用相同的水溶液所得的肽1試料溶液亦顯示無色澄清的外觀。另一方面，比較對照的抗壞血酸鈉、檸檬酸二氫鈉的各水溶液於添加肽1後顯示白濁現象，又對於磷酸氫二鈉 g 的水溶液，添加肽1後顯示無色澄清外觀，但由HPLC分析所算出的溶離率爲5 3 · 8 %，比3種鹼性胺基酸及咪唑時低。因此確認出3種鹼性胺基酸或咪唑不僅具有可藉由 pH之溶解性Λ進作用，另外具有提高肽1的溶解性之作用。 [表5] 各種β <溶液的肽1之溶液外觀、溶離率及p Η眚涮値溶劑添加劑 pH 溶離率調製後pH 外觀水 L —" 精胺酸 9 9 3.8% 8.97 無色澄清組胺酸 9 % 8 5.9 9.00 無色澄清離胺酸 9 % 8 9.0 8.99 無色澄清磷酸氫二鈉 9 53.8 8.85 無色澄清抗壞血酸鈉 9 無測定（1) 9.10 白濁檸檬酸二氫鈉 9 無測定（1 ) 9.05 白濁咪唑 _9j % 9 9.2 % 9.10 無色澄清 -29- 1 因由外觀觀察並無明顯的白濁現象，故未進行HPLC測定。 200536559 (26) [實施例5] 實施例5 藉由精胺酸的T c 9 9 m標識促進效果 (1)方法於實施例2所得之pH 1 0的精胺酸水溶液中溶解肽 1，調製出9 · 4 // Μ的肽/精胺酸溶液。將2 5 // L的〇 . 〇 1 Μ 鹽酸10ml中加入5mg的氯化第一錫的溶液，加入700 // L g 的肽/精胺酸溶液中，快速加入Tc-99m-過鍀酸鈉（以下稱爲99mTc〇D溶液0.6〜l.OGBq，使全量成爲lmL。標識操作後的肽濃度稀釋爲6.6 // Μ。數秒間的翻轉後於室溫下反應。標識操作後10分鐘、90分鐘取出一部份，藉由 HPLC、TLC求得Tc-99m標識率。HPLC、TLC分析以下述條件實施。作爲比較對照，於DMSO中溶解肽1後，以pHIO的 100mM磷酸緩衝液（以下稱爲PB )稀釋10倍，作成肽的 φ 最終濃度爲9·4 // Μ之肽/DMSO/PB溶液、及於PB中溶解肽1，將肽的最終濃度爲9 · 4 // Μ之肽/Ρ Β溶液進行與肽/ 精胺酸溶液相同的標識，藉由HPLC、TLC求得Tc-99m 標識率。標識操作後的肽濃度稀釋爲6.6 Μ。 Η P L C條件管柱：Cosmo si 1 5C〗8-AR-300 (那卡來地司可股份有限公司，4 · 6 X 1 5 0 ni m ) 溶離速度：ImL/分鐘 -30- 200536559 (27) 檢測：紫外光可見光吸收光度計（檢測波長： 2 2 0 n m ) 放射能檢測器：STEFFI NaI閃爍器（Raytest公司）溶離液A : 〇· 1 % TFA/純水溶離液B: 〇」％TFA /乙腈濃度梯度：〇分鐘（溶離液B20% ) — 25分鐘（溶離液 B70% ) TLC條件平板：Silicagel 60F25 4 (美路克股份有限公司）展開溶劑：2 8 %氨水/乙腈=1 /2 放射能檢測器·· Gita Nal閃爍器（Raytest公司） (2 )結果由所得結果的吸收峰面積所算出的放射化學純度如表 φ 6所示。41 OmM的精胺酸水溶液於HPLC分析中經標識後 1 〇分鐘放射化學純度爲9 0 %以上，標識後至9 0分鐘其放射化學純度爲9 5 %以上。且於TLC分析中標識後1 〇分鐘及9 0分鐘下放射化學純度爲8 5 %以上’無須加熱下可得到高Tc99m標識率之高標識安定性。另一方面，比較對照爲肽/DMSO/PB溶液及肽/PB溶液之放射化學純度爲，肽/DMSO/PB溶液以HPLC分析下標識後]0分鐘爲7 2.0 %，標識後9 0分鐘爲7 5.4 % ’及 T L C分析下標識後1 〇分鐘爲4 5 · 7 %，標識後9 0分鐘爲 -31 - 200536559 (28) 75.4%，及TLC分析下標識後10分鐘爲45.7%、標識後 90分鐘爲41.9%，又，肽/PB溶液以HPLC分析下標識後 10分鐘爲55.3%，及TLC分析下標識後10分鐘爲28.0 %，標識後90分鐘爲33.6%。由上述結果得知，於任一時間點肽/精胺酸溶液比比較對照組具有更高的放射化學純度。因此，使用藉由精胺酸添加的溶解法，可達到非加熱下之高標識率，且所調製出的標識體的安定性亦提高。 [表6] 各溶劑（pH 10)中放射化學性純度（％)與其經時性變化精胺酸 DMSO/磷酸緩衝液憐酸緩衝液 HPLC TLC HPLC TLC HPLC TLC 1 0分 92.5 87.2 72.0 45.7 55.3 28.0 9 0分 96.5 88.6 75.4 41.9 一 33.6

[實施例6] 各種精胺酸濃度下的Tc9 9m標識與其安定性之確認 (1 )方法

秤取12.5、25及5 Omg的精胺酸，溶解於水中’以鹽酸調整成pH 1 0，使各全量成爲700 // L。此時的莫耳濃度分別爲l〇2,5niM、2 05mM、410mM。這些精胺酸水溶液中溶解肽]，調製出各9.4 // Μ的肽/精胺酸溶液。將2 5 # L -32- 200536559 (29) 的0 · 0 1 Μ鹽酸1 〇 m丨中加入5 m g的氯化第—錫的溶液，加入肽/精胺酸溶液中，快速加入9 9 m T c 0 4 -溶液0.6〜 l-OGBq ’使全量成爲imL。翻轉數秒後，於室溫下反應。標識操作後30分鐘、90分鐘、180分鐘、360分鐘、24 小時、3 0小時取出一部份，以實施例5所記載的條件進行T L C分析求得放射化學純度。

(2)結果由吸收峰面積所算出的放射化學純度如表7所示。標識後至30小時的所有結果皆顯示放射化學純度爲80%以上，且精胺酸濃度爲205mM以下，標識後30小時的放射化學純度爲8 5 %以上。因此使用精胺酸的溶解法，並未取決於精胺酸濃度，且無須加熱下提供一種高Tc99m標識率與高標識安定性之經Tc 9 9m標識之肽。 [表7] 各種精胺酸濃度中放射化學性純度（％)與其經時性變化經過時間各種精胺酸濃度中放射化1 1性純度（％) 1 02.5mM 2 05mM 4 1 OmM 30分 9 3.3% 9 2.0 % 9 1.6 % 90分 9 2.6% 9 0.8 % 8 9.5 % 1 80分 9 2.6% 8 9.7 % 8 7.1 % 3 60分 9 1.2% 8 9.7 % 8 5.7 % 24小時 8 8.9% 8 8.3 % 8 6.5 % 3 0小時 8 9.8% 8 7.3 % 8 4.9 % -33- (30) 200536559 [實施例7 ] 藉由精胺酸添加所調製的Tc99-肽1溶液之兔子感染症模型的影像 (1 )方法將約 108個活菌的黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus )懸浮於1 mLk的生理食鹽水中，將其1 〇〇 // L投予於兔子（新紐西蘭白色系，雄，體重約2kg )的右大腿部 p 肌肉內投予，經24小時後，對於明顯有發炎症狀的模型兔子施行戊巴比妥麻醉，耳靜脈內投予以實施例5所得之 Tc9 9m所標識之肽1 (精胺酸/非加熱）的37〜74MBq，投予後5分鐘，於1小時、2小時、3小時、4小時及5 小時進行r照相基的影像攝影。又對於作爲比較對照組之由肽/DMF/水所調製之經加熱的Tc99m標識肽1 ( DMF/加熱）作相同投予並檢討。比較對照組的調製法如下所示。含有300//L的134mM葡庚酸與50//L的2.6mM氯化第 ^ 一錫溶液之混合液的管瓶中，9 9 m T c 0〆溶液 1 . 1〜 3.0GBq，使全量成爲1.35mL。翻轉攪拌後於室溫下反應 3 0分鐘，取出一部份以纖維素乙酸酯膜電泳確.認出Tc-9 9m-葡庚糖酸之Tc-9 9m標識率爲95%以上。其此將肽1 溶解於DMF調製出943 // Μ，在使用水稀釋1〇倍調製出 94//Μ濃度。於該700//L溶液中各加入300#L的Tc-9 9 m葡庚糖酸溶液後混合攪拌，由1 0 0 °C加熱至1 2 0 °C後反應10分鐘。標識後取出一部份以HP LC求得各TC-99m 標識率。HPLC條件如下所示。 -34- 200536559 (31) Η P L C條件管柱：Puresil 5#m C18 (Millipore 公司，4·6χ 15 0mm) 溶離速度：ImL/分鐘檢酒I :紫外光可見光吸收光度計（檢測波長： 220nm ) 放射能檢測器：STEFFI Nal閃燦器（Ray test公司）溶離液A : 0.1 % TFA/純水溶離液B : 0.1% TFA/乙腈濃度梯度：〇分鐘（溶離液B20%) — 25分鐘（溶離液 B70% ) (2)結果所得的結果代表圖如圖3及圖4所示。設定影像上的主要區域，求得對於全身計量之各主要區域每1〇〇〇畫素之計量比率（％投予量/K pixel )之結果如表8及圖5所示。其結果，過去技術的Tc99m-肽1 ( DMF/加熱）及本發明的Tc-99m-肽1 (精胺酸/非加熱）皆可明瞭地描繪出感染部位，又兩者的描繪圖案一致。發炎的聚集於所有時間點下，本發明的處方，即添加精胺酸非加熱條件下所調製出的溶液，比過去方法的添加DMF且加熱100 °C下所調製的溶液更爲提高。由投予後1小時的1.59±0.32%投予量/K pixel，投予後5小時增加至2·62±0·55%投予量/K Pixel。因此，確認出本發明中將白血球結合性化合物使 -35- (32) 200536559 用精胺酸溶解，於非加熱下之Tc 99標識方法，其提供— 種比過去方法所得之標識體更高的發炎聚集性之標識體。 [表8] 兔子感染症模型的TC-9 9m標識肽]之發炎聚集（％投予量 /K pixel)(n = 3、平均値±標準偏差値）设予後經過時間標識方法 5分 1小時 2小時 3小時 4小時 5小時精胺酸/非加熱 1.74±0.22 1·59±0·32 1.77±0.25 2.0110.29 2.32±0.56 2.62±0.55 DMF/加熱 0.95±0.24 0·91±0.14 1.09±0.22 1·52±0·27 1.76±0.39 1.84±0.27 [產業上可利用性]

使用本發明的醫療用組成物時，可提高不溶或難溶於水系溶劑的可金屬標識之肽的溶解性，且無須加熱下可金屬標識該肽。使用本發明的金屬標識方法，該肽於非加熱 Φ 條件下可標識金屬。且本發明的醫療用組成物中該肽以金屬標識的製劑爲，例如可作爲使用於發炎影像用的肽時，肽對發炎的聚集率比過去方法所調製的組成物更可提高其效果。發明爲提供例如使用白血球結合性化合物作爲肽使用時’可提供進行隨著個體的免疫反應的白血球浸潤較盛之部分的標識之PET影像診斷、SpECT影像診斷、MRI 影像診斷或放射線治療等有用之醫療用組成物及醫療用製劑、以及其標識方法。 -36- 200536559 (33) 【圖式簡單說明】圖1表示肽1、肽2、及肽3的溶離率圖。圖2藉由pH9下添加各種添加劑所得之肽1的溶離率比較圖。圖3對於使用二甲基亞硕（DMF )進行加熱標識的 Tc 9 9m標識肽1之兔子感染模型之影像圖。圖4使用精胺酸的非經加熱標識Tc99m肽1的兔子感染模型之影像圖。圖5以相異的標識法標識的Tc 9 9m標識肽1的兔子感染模型之發炎聚集（％投與量/K pixel )圖。

-37- 200536559

W2267序列表 SEQUENCE LISTING <110> Nihon Medi-Physics Corporation Limited <120> Medical Composition Containing Metal Chelating Peptide which is improved in Water Solubility and Chelating Efficacy of the Peptide 〈130〉 W2267-00 <150〉 JP 2004-089620 〈151〉 2004-03-25 <160〉 12

<210〉 1 <211〉 10 <212〉 PRT <213〉人造序列〈220> <221> F0RMYLATI0N <222> 1 <200〉 <221> AM I DAT I ON 〈222〉 6 〈223>金屬標識肽 <400〉 1

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Cys 6ly Asn 1 5 10

<210〉 2 〈211〉 10 <212> PRT 〈213〉人造序列 <220> <221> F0RMYLATI0N <222> 1 <200〉 <221> AM I DAT I ON 〈222〉 6 〈223>金屬標識肽 <400> 2

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Cys Gly Asp 1 5 10 <210> 3 〈211〉 10 <212> PRT <213〉人造序列 200536559 W2267序列表 <220> <221> F0RMYLATI0N <222> 1 <200> <221> AM I DAT 10N 〈222〉 6 〈223>金屬標識肽 <400> 3

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Cys Asp Asp 1 5 10 〈210〉 4 <211> 12 <212> PRT 〈213〉人造序列

<220〉 <221> FORMYLATION 〈222〉 1 〈200〉 <221> AM I DAT I ON 〈222〉 6 〈223>金屬標識肽 <400〉 4

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Arg Asp Cys Asp Asp 1 5 10 〈210〉 5 <211〉 8 <212> PRT <213〉人造序列 <220> <221> FORMYLATION <222〉 1 <200〉 <221> AM I DAT I ON <222〉 6 <220〉 <221> ACETYLATION 〈222〉 8 <223〉金屬標識肽 <400> 5

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Arg

<210〉 6 <211> 7 <212〉 PRT 200536559 W2267序列表 <213〉人造序列 <220> <221> F0RMYLATI0N <222> 1 <200> <221> AM I DAT 10N 〈222> 6 <200> <221> ACETYLATION <222〉 7 <223〉金屬標識肽 <400> 6

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser

〈210〉 7 <211〉 6 <212〉 PRT <213〉人造序列 <220〉 <221> FORMLATION <222> 1 <200〉 <221> AM I DAT I ON <222〉 4 <200〉 <221> THIOLEST 〈222〉 6 <223〉金屬標識肽 φ <400> /

Met Leu Phe Lys Asp Asp

〈210〉 8 〈211〉 6 〈212〉 PRT 〈213〉人造序列 <220〉 <221> FORMYLATION <222> 1 <200〉 <221> AM I DAT I ON <222〉 4 <200〉

<221> THIOLEST 200536559 W2267序列表 <222〉 6 <223>金屬標識肽 <400〉 8

Met Leu Phe Lys 61y Asp 〈210〉 9 <211> 6 <212〉 PRT 〈2^3〉人造序列 <220〉 <221> F0RMYLATI0N <222> 1 〈200〉

<221> AM I DAT I ON <222〉 4 〈200〉 <221> THIOLEST 〈222〉 6 〈223>金屬標識肽 <400〉 9

Met Leu Phe Lys Gly Gly <210> 10 <211〉 6 <212〉 PRT <213〉人造序列 <220〉 <221> F0RMYLATI0N <222〉 1 〈200〉

<221> AM I DAT I ON <222〉 4 〈200〉 <221> THIOLEST 〈222〉 6 <223〉金屬標識肽 <400> 10

Met Leu Phe Lys Asp Gly <210〉 11 <211> 4 <212〉 PRT <213〉人造序列 200536559 W2267序列表 <220> <221> FORMYLATION <222> 1 <200〉 <221> ACETYLATION 〈222> 4 〈223>金屬標識肽 <400> 11

Met Leu Phe Lys <210〉 12 <211> 4 <212〉 PRT 〈213〉人造序列

<220> <221> FORMYLATION <222〉 1 〈200〉 <221> NICOTHYNATE 〈222〉 4 〈223>金屬標識肽 <400> 12 Met Leu Phe Lys

Claims

200536559 (1) 十、申請專利範圍 1 · 一種醫療用組成物，其特徵爲含有作爲可金屬標識之肽及醫藥添加物可被容許鹼性有機化合物。 2 ·如申請專利範圍第1項之醫療用組成物，其中將於水系溶劑中爲不溶或難溶的可金屬標識之肽，與作爲醫藥品添加物可被容許的鹼性有機化合物同時溶解於水系溶劑所得者。 _ 3 ·如申請專利範圍第1項或第2項之醫療用組成物，其中鹼性有機化合物爲具有鹼性胺基酸或咪唑環之鹼性化合物。 4 .如申請專利範圍第3項之醫療用組成物，其中鹼性胺基酸爲1種以上選自精胺酸、組胺锻及離胺酸。 5 ·如申請專利範圍第3項之醫療用組成物，其中具有咪唑環之鹼性化合物爲咪唑。 6 ·如申請專利範圍第1項至第5項中任一項之醫療用 φ 組成物，其中可金屬標識之肽可利用作爲診斷藥劑或治療用醫藥品之有效成分。 7 ·如申請專利範圍第1項至第6項中任一項之醫療用組成物，其中可金屬標識之肽爲胺基酸3 0殘基以下或# 子量4500以下者。 8 ·如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之醫療用組成物，其中可金屬標識之肽爲白血球結合性化合物。 9.如申g靑專利軔圍弟1項至弟8項中任一項之醫療用組成物，其中可金屬標識之肽爲，化學式（1 ) -38- 200536559 (2) Z-Y-Leu-Phe-(X)n-Lys(NH2)m-e(.(R)o-(T)l-U) (1) (式（1 )中， Z表示胺基的保護基； Y表示Met或Nle ; (X)n中，X表示1個或1個以上的胺基酸或可有機合成之化合物所成的間隔物，η表示1或0 ; (NH2 ) m中，ΝΗ2表示作爲Lys的α位羧基之保護基的醯胺基，m表示1或0; ε (-(R) 〇-(T) 1-U)中，R 表示 Lys 的 ε-胺基上醯胺鍵結的Ser或Thr、〇表示1或〇，Τ表示1個或1個以上的胺基酸或可有機合成的化合物所成之間隔物，1表示1或0，U表示可金屬標識之基；惟，X與T可爲相同或相異）所表示的化合物。 1 0 .如申請專利範圍第 9項之醫療用組成物，其中化學式（1)中，U爲選自可金屬標識之的三肽、二肽氫硫基醯化物、碳數8至20的含氮環狀化合物、碳數8至20 的含氮環狀羧酸化合物、碳數8至20的含氮環狀羧酸化合物之衍生物及碳數4至1 0的伸烷基胺羧酸之可金屬標識的基。 1 1 .如申請專利範圍第9項或第1 0項之醫療用組成物，其中化學式（1)中，U爲選自-Cys-Gly-Asp、-Cys- -39- 200536559 (3) Asp-Asp、-Cys-Asp-Gly、-Cys-Gly-Glu、-Cys-Glu-Glu、-Cys-Glu-Gly、-Cys-Gly，Asn、-Cys-Asn-Asn、-Cys-Asn-Gly、 ·Cys-G1 y1 - G1n、 -Cys·G1n-G1n、 -Cys-G1n-G1y、-Cys-Gly-Lys、 - C y s - L y s - L y s、 - C y s · L y s - G1 y、 - C y s - G1 y-

Arg 、 -Cys-Arg-Arg 、 -Cys-Arg-Gly 、 -Asp-Asp-氫硫乙醯基、-Gly -Asp-氫硫乙醯基、-Gly-Gly-氫硫乙醯基、 1，4,7，10 -四氮雜環十二院基（Cyclen) 、1，4,8，11-四氮雜環十四烷基（Cyclam) 、1，4,8,12-四氮雜環十五烷基、 1，4,8，11-四氮雜環十四烷基-5,7-二酮（Dioxocycam)、 1，4,8，11-四氮雜環十四烷基-1，4,8，1卜四乙酸（TETA)、 1，4,7，10-四氮雜環十二烷基-N，N’，N”，N”’-四乙酸 (DOTA) 、：1，4,8，11-四雜氮環十四烷基-5,7 -二酮· >1，>^，>^’，>1”’-四乙酸、1，457，10-四雜氮環十二烷基-丁酸、 1，4,8，10·四氮雜環十二烷基-丁酸、1，4,7，10-四氮雜環十二烷基-1-胺基乙基胺基甲醯基甲基-4,7,10-三〔R，S〕-甲基乙酸（D03MA ) 、1，4,7，10-四氮雜環十二烷基- 1，4,7,10-α，，，α，，，-四甲基乙酸（DOTMA)、乙二胺四乙酸（ED ΤΑ)、二乙三胺五乙酸（DTPA)、三乙四胺六乙酸及乙二醇-(2·胺基乙基）-N，N，N’，N’-四乙酸 (EGTA )之可金屬標識的基。 1 2 ·如申請專利範圍第9項至第1 1項中任一項之醫療用組成物，其中化學式（1)中，Z表示甲醯基。 1 3 .如申請專利範圍第1項至第1 2中任一項之醫療用組成物，其中可金屬標識之肽爲選自於 -40 - 200536559 (4) N -甲醢基-N 1 e - L e u - P h e - N1 e · T y r - L y s ( Ν Η 2 ) - ε ( Cys-Gly-Asn)、 N-甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) · ε ( Cys-Gly-Asp )、 N -甲醯基-N 1 e · L e u - P h e - N1 e - T y r - L y s - ε ( -Ser-Cys Asp)、 N-甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -S Arg_ Asp_Cy s-Asp_ Asp ) 、 N-甲醯基·Nle-Le·u-Phe-Nle-Tyr-Lys(NH2)-ε(-S Arg-二乙三胺五乙酸（DTPA))、 N-甲醯基- Met-Leu-Phe-Lys - ε ( - Asp-Asp-氫硫乙醯） N-甲醯基-Met-Leu-Phe-Lys- ε ( -Gly-Asp-氫硫乙醯及 Ν·甲醯基·Met-Leu-Phe-Lys· ε ( -Gly-Gly-氫硫乙醯） 1 4 .如申請專利範圍第1項至第1 3中任一項之醫組成物，其中含有1種以上選自還原劑、pH調整劑面活性劑、親水性有機溶劑及安定化劑之添加劑。 1 5 . —種經冷凍乾燥的醫療用組成物，其特徵爲乾燥如申請專利範圍第1項至第1 4項中任一項之醫組成物所得者。 1 6 . —種醫療用製劑，其特徵爲藉由以金屬標識請專利範圍第1項至第1 5項中任一項之醫藥用組成可金屬標識之肽所得者。 1 7 .如申請專利範圍第1 6項之醫療用製劑，其中 -Ser-• S e卜 _ A s p -er- D - er-D - 、 )' o 療用、界冷凍療用如申物中金屬 -41 - 200536559 (5) 爲放射性金屬或順磁性金屬。 1 8 ·如申請專利範圍第1 7項之醫療用製劑，其中放射性金屬爲選自 Tc-99m、In-1 1 1、Ga-67、Y-90、Sn-117m、Sm-153、Re-186 及 Re-188。 1 9.如申請專利範圍第1 7項之醫療用製劑，其中順磁性金屬爲選自Gd、Fe、Mn、Cu及Dy。 20·—種金屬標識方法，其爲可金屬標識之肽上以金 φ 屬標識的方法，其特徵爲於鹼性有機化合物的水系溶劑中溶解該肽後，標識金屬者。 2 1 ·如申請專利範圍第2 0項之金屬標識方法，其中可金屬標識之肽爲，於水系溶劑中不溶或難溶的肽。 22.如申請專利範圍第20項或第21項之金屬標識方法，鹼性有機化合物爲鹼性胺基酸或具有咪唑環的鹼性化合物。 2 3.如申請專利範圍第22項之金屬標識方法，其中鹼 φ 性胺基酸爲1種以上選自精胺酸、組胺酸及離胺酸。 24.如申請專利範圍第22項之金屬標識方法，其中具有咪唑環的鹼性化合物爲咪唑。 25·如申請專利範圍第20項至第24項中任一項之金屬標識方法，其中金屬爲放射性金屬或順磁性金屬。 26·如申請專利範圍第25項之金屬標識方法，其中放射性金屬爲選自丁(：-99111、111-111、〇3-67、丫-90、811-117m ' Sm-153、R e - 1 8 6 及 R e - 1 8 8。 2 7 ·如申請專利範圍第2 5項之金屬標識方法，其中順 -42- 200536559 (6) 磁性金屬爲選自Gd、Fe、Μη、Cvi及Dy。 2 8 . —種含有經金屬標識的肽之醫療用製劑的製造方法，其特徵爲使用如申請專利範圍第20項至第27項中任一項之金屬標識方法。

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