TW200524921A - Salts and polymorphs of a pyrrole-substituted indolinone compound - Google Patents

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200524921 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於適用於治療哺乳動物異常細胞生長（諸如 癌症）之5-[(Z)-(5 -氣-2 -氧代-1，2 -二氫-311-亞σ弓卜朵基）甲 基]-N-[(2S)_2-經基-3-嗎琳_4-基丙基]_2,4_二甲基比略 -3-叛S藍胺之鹽形式及多晶型物。本發明亦係關於包括該等 鹽之組合物及使用該等組合物治療哺乳動物（尤其是人類） 異常細胞生長之方法。 【先前技術】 結構式1_中所示之化合物5-[(Ζ)-(5 -氟-2-氧代_1，2-二氫 -3Η-亞π弓卜朵_3_基）甲基]_N_[(2S)_2_羥基_3_嗎啉_4基丙 基]-2,4-二甲基緩醯胺

併入本文中。 在其游離鹼形式，5- [(Z)_(5i_2-氧代-1，2-二氫-3Η-亞吲 96015.doc 200524921 嗓I基）甲基]-N-[(2S)七經基_3.嗎κ基丙基]_2,4二甲 基-1HH3-缓酸胺為化學及光學異構相當穩定及為相對 #吸濕性的結晶。然而，具有以下鹽形式是有利的：具有 經改良之特性（諸如經改良之結晶性及/或經降低之吸濕性） 同時保持化學及光學異構穩定特性之鹽形式。 【發明内容】 在一實施例中，本發明提供5_叫(5_氣_2_氧代Μ.二氣 -3Η-亞吲哚_3_基）甲基]_Ν_[(23)_2_羥基冬嗎啉I基丙 基]。二甲基.°比°各_3_叛醯胺之非吸濕性鹽。藉由使用 C服度下之經控制之大氣微平衡之動態吸濕重量測定 _SG)來測定吸濕性。以聯幅於相對濕度範圍跑辦。 間分析樣品。在移至下—舟Φ5夕巧 /士 Μ ^ M 田之刖，使得各步幅達到平衡， 其中所刀析之平衡作為在每12〇秒—點下連續五個點小於 mg(0.02%)之重量變化。使用該吸濕性之量測，本發 明之非吸濕性鹽類在80%相對濕度下展示水吸收量小於$ 重B、較佳小於4重量％、更佳小於3重量％、更佳小於2 重量％、更佳小於1重量〇/〇。 在該實施例之特定態樣中，該鹽為無水、結晶或無水與 結晶兩者。 在該實施例之-較態樣中，該鹽為順丁稀二酸鹽、較 佳為無水順丁烯二酸鹽或έ士曰丨吾 孤次、，、口日日順丁烯二酸鹽、更佳為結晶 無水順丁烯二酸鹽。 -，在該實施例之特定態樣中，該鹽為多晶型形式！或多晶型 形式2之結晶無水順丁烯二酸鹽。 96015.doc 200524921 多晶型形式!為在12.7及15.4。之繞射角(2θ)下具有特徵粉 末X射線繞射(PXRD)峰之結晶無水多晶型物。更特定言 之夕曰曰型物形式1具有包括以中所示之峰的圖譜。 ^2Θ(°) 10.85 12.68 14.48 15.35 17.06 18.14 19.04 15 20 13 41 17 100 58 20C Τ〇· 18 20.42 22.37 24.74 25.73 26.84 27.41 l/lrnax (%) 14 16 68 52 25 44 53 熟習此項技術者應瞭解峰位置（2幻顯示某些内部裝置之 變化性’其通常多達(M。。另外，熟f此項技術者應瞭解相 對峰強度顯示内部裝置變化性以及由於結晶程度、較佳定 向、所製備樣品之表面及熟習此項技術者所已知之其它因 素所導致之變化性，且應僅視其為定性量測。更特定言之， 多晶型物形式1具有與圖⑽示基本相同之pxRD圖譜，其中 ”基本相同”涵蓋如上所述之典型峰位置及強度變化性。 多晶型形式2係在繞射角⑽131及159。下具有特徵粉末 X射線繞射（PXRD)峰之結晶、無水多晶型物。更特定言之， 多晶型物形式2具有包括表2所示之峰的pxRD圖譜。 2Θ(°) 7.31 10.97 11.87 13.10 14.63 15.89 17.42 2θ〇 19.52 20.30 22.28 22.82 23.96 24.56 25.88

I2 ·色A型物形式2之PXRD

35 26 17 43 100 39 28 28 46 41 34 67 47 960i5.doc 200524921 18.14 87 18.98 _ 39 27.02 44 多晶型物形式2具有與圖2所示基本相同之 更特定言之 PXRD圖譜，其中”大體相同” J ’口现如上所述之典型峰位置及 強度變化性。 該鹽係多晶型形式1或多晶型 在該實施例之另一態樣中 形式2之結晶無水順丁歸二酸蹄 ^ 夂现具中该多晶型形式大體純 淨。多晶型形式1之”大體绅漆” 粒、，死宁之鹽包括小於10重量％、較 式2之"大體純淨"之鹽包括小於丨〇重量％、 %、較佳小於3重量％、較佳小於丨％之多晶 佳小於5重量％、較佳小於3重量％、較佳小於1重量％之多 晶型物形式2或任何其它多晶型物形式。類似地，多晶型形 較佳小於5童量 型物形式1或任 何其它多晶型形式。 在該實施狀另-態樣巾，該鹽係結晶無水順丁稀二酸 鹽’其為多晶型形式i與多晶型形式2之混合物。較佳地， 該混合物為大體純淨的混合物，其中多晶型形式丨及2之大 體純淨的混合物包括小於10重量％、車交佳小於5重量％、較 佳小於3重|%、較佳小於以量％之任何其它多晶型形式。 多晶型物形式丨與2之混合物具有兩種形式之繞射峰特 徵，特定言之，在繞射角⑽12 7、133、15乂及^ 9下之 峰，更特疋έ之，在如表丨及2所示位置處之峰；更特定古 之’為圖1及2之卷積之PXRD圖譜。 在另一實施例中，本發明提供5_[(2)_(5_氟_2_氧代_丨，2_二 氫-3Η_亞吲哚基）甲基]-N-[(2S)·2-羥基-3_嗎啉_4_基丙 基]-2,4-二甲基·1Η-吡咯羧醯胺之順丁烯二酸鹽。 96015.doc 200524921 在該貝、轭例之特定態樣中，順 t々仏 貝丁却一酸鹽係結晶型、盔 水型或結晶型與無水型。 主 … 在該實施例之特定態樣中丨f .^^ 丨負丁烯—酸鹽係多晶型物形 式U較佳為大體純淨之多晶型物形 1( ^ ^ )或夕日日型物形式 (車A為大體純淨之多晶型物形式2)或多晶型物形幻幻 之混合物（較佳為大體純淨之混合物）之結晶無水鹽，其中多 晶型物形式1及2係如上所述。 在另一實施例中，本發明提供5_[(z)n2_氧代_12-二 氫-3H-亞口弓卜朵_3_基）甲基]·Ν_⑽）_2_經基_3-嗎琳_4·基丙 基]-2,4-二甲基-1H-料-3-叛醯胺之結晶無水順丁稀二酸 鹽。在該實施例之特定態樣中，結晶無水順丁稀二酸鹽係 多晶型物形式1(較佳為大體純淨之多晶型物形式丨）或多晶 型物形式2(較佳為大體純淨之多晶型物形式2)或多晶型物 幵> 式1與2之混合物（較佳為基本純淨混合物）的鹽，其中多曰 型物形式1及2係如上所述。 在另一實施例中，本發明提供5-[(ZH5-氟-2-氧代—^-二 氫-3H-亞吲·。朵-3-基）曱基]-N-[(2S)_2-羥基_3_嗎啉_4•基丙 基]-2,4-二曱基-1Η-°比洛-3-羧醯胺之結晶無水順丁稀二酸 鹽’其具有包含在繞射角（20)下與圖1所示基本相同之峰的 粉末X射線繞射圖譜，其中”基本相同”係如上所定義。 在另一實施例中，本發明提供5-[(ZH5-氟-2-氧代_152_二 氫- 3H-亞吲哚-3-基）曱基]_N-[(2S)-2-經基-3-嗎琳_4-基丙 基]-2,4-二甲基-1H-吼咯-3 —羧醯胺之結晶無水順丁烯二酸 鹽，其具有包含在繞射角（20)下與圖2所示基本相同之峰的 96015.doc -10- 200524921 粉末χ射線繞射圖譜，其中”基本相同，，係如上所定義。 在另一實施例中，本發明提供具有粉末又射線繞射圖譜之 5-[(Z)-(5-氟-2-氧代_i，2-二氫_3Η-亞σ弓卜朵·3·基）甲基]_ N-[(2S)-2·經基-3·嗎 Κ基丙基]-2,4·二甲基 _1Hm 羧醯胺之結晶無水順丁烯二酸鹽，該圖譜係包含在繞射角 (2Θ)下與圖1及2所不基本相同之峰之繞射圖譜之卷積，其中 π基本相同”係如上所定義。 在另-實施财，本發明提供包含任何先前實施例之鹽 之醫藥組合物。 在另-實施例中，本發明提供包含任何本發明之醫藥組 合物之膠囊。在該實施例之特定態樣中，該膠囊包含％75 mg、較佳10-25mg5-[(ZH5-氟1氧代二氮卻亞巧哚_3· 基）甲基]-N-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉_4_基丙基]_2,4_二甲基· 1H-吨洛-3-叛醯胺鹽之游離驗等價物。 在另-實施例中，本發明提供—種治療哺乳動物（包括人 類）癌症的方法，該方法包含向該哺乳動物施以治療有效量 之任何本發明之醫藥組合物。 在另-實施例中，本發明提供一種治療哺乳動物癌症的 方法’該方法包含向該哺乳動物（包括人類）施以任何本發明 之膠囊。 在任何先前方法實施例之一特定態樣中，該方法進一步 包含施以-或多種抗腫瘤試劑、抗血管生成試劑、訊號轉 導抑制劑或抗增生性試劑。 本發明亦係關於-種治療哺乳動物（包括人類）異常細胞 96015.doc -11 - 200524921 生長之方法，其包含向該哺乳動物施以一定量的有效治療 異常細胞生長之式1化合物（如上文所定義）或其醫藥上可接 叉之鹽、溶劑合物或前藥。在該方法之一實施例中，異常 細胞生長係癌症，其包括（但不限於）肺癌、骨癌、胰腺癌、 皮膚癌、頭部或頸部癌症、皮膚或眼内黑素瘤、子宮癌、 印巢癌、直腸癌、肛門區域之癌症、胃癌、結腸癌、乳癌、 子宮癌、輸卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、陰道癌、女 陰癌、何傑金氏疾病（Hodgkin’s Disease)、食道癌、小腸癌、 内分泌系統癌症、曱狀腺癌、曱狀旁腺癌、腎上腺癌、軟 組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血 病、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞 癌、腎盂癌、中樞神經系統（CNS)贅瘤、原發性CNS淋巴瘤、 脊柱（spiral axis)腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤或一或 多種前述癌症之組合。在該方法之另一實施例中，該異常 細胞生長係一種良性增生性疾病，其包括（但不限於）牛皮 癖、良性前列腺肥大或再狹窄症（restinosis)。 本發明亦-係關於一種治療哺乳動物異常細胞生長之方 法，其包含向該哺乳動物施以一定量的式1化合物或其醫藥 上可接父之鹽、溶劑合物或前藥，其與選自由下列各物質 組成之群之抗腫瘤試劑組合用於有效治療異常細胞生長： 有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝物、嵌入抗生素、生長 因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酶、拓撲異構酶抑制劑、 生物反應調節劑、抗體、細胞毒素、抗荷爾蒙物及抗男性 荷爾蒙物。 96015.doc -12- 200524921 本發明亦係關於一種治療哺乳動物（包括人類）異常細胞 生長之w藥組合物，其包含一定量的有效治療異常細胞生 長之式1化合物（如上文所定義）或其醫藥上可接受之鹽、溶 劑合物或前藥及醫藥上可接受之載劑。在該組合物之一實 施例中’該異常細胞生長係癌症，其包括（但不限於）肺癌、 骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭部或頸部癌症、皮膚或眼内黑 素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域之癌症、胃癌、 結腸癌、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸 癌、陰道癌、女陰癌、何傑金氏疾病、食道癌、小腸癌、 内分泌系統癌症、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟 組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血 病、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞 癌、腎盂癌、中樞神經系統（CNS)贅瘤、原發性CNS淋巴瘤、 脊柱腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤或一或多種前述癌 症之組合。在該醫藥組合物之另一實施例中，該異常細胞 生長係良性增生性疾病，其包括（但不限於）牛皮癖、良性前 列腺肥大或再狹窄症。 本發明亦係關於一種治療哺乳動物（包括人類）異常細胞 生長之醫藥組合物，其包含一定量的式1化合物（如上所定 義）或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或前藥，其與醫藥上 可接受之載劑及選自由下列各物質組成之群之抗腫瘤試劑 組合用於有效治療異常細胞生長··有絲分裂抑制劑、烷化 劑、抗代謝物、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞週期 抑制d、陶：、拓撲異構轉抑制劑、生物反應調節劑、抗荷 96015.doc -13- 200524921 爾蒙物及抗男性荷爾蒙物。 本發明亦係關於一種治療哺乳動物（包括人類）與血管生 成相關之病症之方法，其包含對該哺乳動物施以一定量的 有效治療該病症之式1化合物（如上所定義）或其醫藥上可接 受之鹽、溶劑合物或前藥。該等病症包括癌腫瘤，諸如黑 素瘤；眼睛病症，諸如與年齡相關之黃斑退化、假定之眼 睛組織胞漿菌病徵候群及來自增生性糖尿病性視網膜病之 視網膜新血管形成；風濕性關節炎；骨損失病症，諸如骨 質疏鬆症、派傑氏疾病（Paget’ s disease)、惡性腫瘤之體液 血鈣過多、自腫瘤轉移至骨之血鈣過多及由糖皮質激素治 療而誘導之骨質疏鬆症；冠狀再狹窄症；及包括彼等與選 自下列各微生物之微生物病原體相關之特定微生物感染： 腺病毒（adenovirus)、漢他病毒（hantaviruses)、伯氏疏螺旋 菌（Borrelia burgdorferi)、耶爾森氏菌種（Yersinia Spp )、百 曰咳博德特氏菌（Bordetella pertussis)及A組鏈球菌（a Streptococcus) 〇 本發明亦係關於一種治療哺乳動物異常細胞生長之方法 (或醫藥組合物），其包含一定量的式1化合物或醫藥上可接 受之鹽、溶劑合物或前藥及一定量的一或多種選自抗血管 生成試劑、訊號轉導抑制劑及抗增生性試劑之物質，該等 量在治療該異常細胞生長時同時有效。 諸如MMP-2(基質金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9(基質金屬 蛋白酶9)抑制劑及C0X-II(環氧酶-；[1)抑制劑之抗血管生成 試劑可結合本文中所述之方法及醫藥組合物中之式1化合 96015.doc -14- 200524921 物來使用。適用之COX-ΙΙ抑制劑之實例包括 CELEBREXTM(阿勒可西保（alecoxib))、伐地可西保 (valdecoxib)及羅菲可西保（rofecoxib)。適用之基質金屬蛋 白酶抑制劑之實例描述於WO 96/3 3172(1996年10月24曰公 開）、WO 96/275 83(1996年3月7曰公開）、歐洲專利申請案第 97304971.1號（1997年7月8日申請）、歐洲專利申請案第 99308617.2 號（1999 年 10 月 29 日申請）、WO 98/07697(1998 年2月26日公開）、WO 98/035 16(1998年1月29日公開）、WO 98/34918(1998年 8 月 13 日公開）、WO 98/34915(1998年 8 月 13 日公開）、WO 98/33768(1998年8月6日公開）、WO 98/30566(1998年7月16日公開）、歐洲專利公開案第606,046 號（1994年7月13日公開）、歐洲專利公開案第931，788號 (1999 年 7 月 28 日公開）、WO 90/05719(1990 年 5 月 31 曰公 開）、WO 99/52910(1999 年 10 月 21 日公開）、WO 99/52889(1999年 10 月 21 日公開）、WO 99/29667(1999年 6月 17曰公開）、PCT國際申請案第PCT/IB98/01113號（1998年7 月21日申請）、歐洲專利申請案第99302232.1號（1999年3月 25曰申請）、英國專利申請案第9912961.1號（1999年6月3曰 申請）、美國臨時申請案第60/148,464號（1999年8月12曰申 請）、美國專利第5,863,949號（1999年1月26日頒予）、美國專 利第5,861，5 10號（1999年1月19日頒發）及歐洲專利公開案 第780,3 86號（1997年6月25日公開），所有該等案之全文均以 引用的方式倂入本文中。較佳之MMP-2及MMP-9抑制劑為 彼等在抑制MMP-1上具有很少活性或無活性之抑制劑。更 96015.doc -15- 200524921 佳為相對於其它基質金屬蛋白酶（意即MMP-l、MMP-3、 MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、 MMP_11、MMP-12及MMP-13)可選擇性地抑制MMP-2及/或 MMP-9之彼等。 適宜於與本發明化合物組合中所適用之MMP抑制劑的一 些特定實例為AG-3340、RO 32-3555、RS 13-0830及下列清 單中所述之化合物： 3-[[4-(4-氟-苯氧基）-苯磺醯基]-(1-羥基胺甲醯基-環戊 基）-胺基]-丙酸； 3-挂-3-[4-(4-氟-苯氧基）-苯磺醯基胺基]-8-氧雜-雙環 [3_2.1]辛烷-3-羧酸羥醯胺； (2R，3R) 1 -[4-(2 -氣-4 -氟-苄氧基）-苯績醯基]-3-經基-3-甲 基-六氫吡啶-2-羧酸羥醯胺； 4_[4-(4_氣-苯氧基）-苯磺醯基胺基]-四氫-α辰喃羧酸羥 醯胺； 3- [[4-(4-氟-苯氧基）-苯磺醯基]β1_(羥基胺甲醯基_環丁 基）-胺基]-丙酸， 4- [4-(4-氣-苯氧基）-苯磺醯基胺基四氫-哌喃_4_羧酸羥 醯胺； 3-[4-(4-氯-苯氧基）-苯磺醯基胺基]_四氫_哌喃羧酸羥 醯胺； (211，311)1-[4-(4-氟-2-甲基-苄氧基）_苯磺醯基]_3_羥基_3_ 甲基-六氫°比ϋ定-2 -魏酸經酿胺； 3-[[4-(4-氟-苯氧基）-苯磺醯基]“_(羥基胺曱醯基_丨_曱基 96015.doc -16- 200524921 -乙基）-胺基]-丙酸； 3-[[4-(4-氟-苯氧基）-苯橫酿基]-(4-經基胺曱醯基-四氫-哌喃-4-基）-胺基]丙酸； 3-挂-3-[4-(4-氯-苯氧基）-苯磺醯基胺基;|_8-氧雜-雙環 [3.2·1]辛烷-3-羧酸羥醯胺； 3 -内-3-[4-(4-氟-苯氧基）-苯磺醯基胺基]-氧雜-雙環 [3.2.1]辛烷-3-羧酸羥醯胺；及 3-[4-(4 -氟-苯氧基）·苯續醯基胺基]-四氫夫喃-3-羧酸經 醯胺； 及該等化合物之醫藥上可接受之鹽、溶劑合物及前藥。 式1之化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物及前藥亦 可與以下訊號轉導抑制劑組合來使用：諸如可抑制 EGFR(表皮生長因子受體）反應之試劑（如為EGFR抑制劑之 EGFR抗體、EGF抗體及分子）；VEGF(血管内皮生長因子） 抑制劑；及erbB2受體抑制劑，諸如鍵結至erbB2受體之有 機分子或抗體，例如HERCEPTINTM(Genentech，Inc.，South San Franciscio，California，USA) 〇 EGFR抑制劑（例如）描述於WO 95/19970(1995年7月27日 公開）、WO 98/14451(1998 年 4 月 9 日公開）、WO 98/ 02434(1998年1月22日公開）及美國專利第5,747,498號（1998 年5月5日頒發）中。EGFR抑制試劑包括（但不限於）單克隆抗 體 C225 及 抗 EGFR 之 22Mab(ImClone Systems Incorporated，New York，New York，USA)、化合物 ZD-1839(AstraZeneca)、BIBX-1382(Boehringer Ingelheim)、 96015.doc •17· 200524921 MDX-447(Medarex Inc·，Annandale，New Jersey，USA)及 OLX-103(Merck & Co·，Whitehouse Station，New Jersey， USA) > VRCTC-310(Ventech Research)及 EGF 融合毒素 (Seragen Inc.，Hopkinton，Massachusettes) 〇

VEGF抑制劑，例如 SU-5416 及 SU-6668(SugenInc.，South San Francisco，California, USA)亦可與式1之化合物組合。 VEGF抑制劑描述於（例如）WO 99/24440( 1999年5月20日公 開）、PCT國際申請案第PCT/IB99/00797號（1999年5月3曰申 請）、WO 95/21613(1995 年 8 月 17 日公開）、WO 99/61422(1999 年12月2日公開）、美國專利第5,834,504號（1998年11月10曰 頒發）、WO 98/5035 6(1998年11月12日公開）、美國專利第 5,883，113號（1999年3月16日頒發）、美國專利第5,886,020號 (1999年3月23日頒發）、美國專利第5,792,783號（1998年8月 11 曰頒發）、WO 99/10349(1999 年 3 月 4 日公開）、WO 97/32856(1997年 9 月 12 日公開）、WO 97/225 96(1 997年 6 月 26 曰公開）、WO 98/54093(1998年12月3日公開）、WO 98/02438(19-98年 1 月 22 日公開）、WO 99/1675 5(1999年 4月 8 曰公開）及WO 98/02437(1998年1月22曰公開），所有該等案 之全文均以引用的方式倂入本文中。一些特定VEGF抑制劑 之其它實例為 IM862(Cytran Inc·，Kirkland，Washington， US A);抗 VEGF 單克隆抗體（Genentech，Inc·，South San Francisco, California);及企管酶（angiozyme)，一 種來自 Ribozyme(Boulder，Colorado)及 Chiron(Emeryville，California) 之合成核糖酶。 96015.doc -18- 200524921 諸如 GW-282974(Glaxo Wellcome pic)及單克隆抗體 AR-209(Aronex Pharmaceuticals Inc. of The Woodlands， Texas，USA)及2B-l(Chiron)之erbB2受體抑制劑可與式1之 化合物組合來投予。該等erbB2抑制劑包括彼等描述於下列 案中之抑制劑：WO 98/02434(1998年1月22日公開）、WO 99/35 146(1999年 7月 15 日公開）、WO 99/35 132(1999年 7月 15 曰公開）、WO 98/02437(1998年1月22日公開）、WO 97/13760( 1997年 4月 17日公開）、WO 95/19970(1995年 7月 27 曰公開）、美國專利第5,587,458號（1996年12月24曰頒發）及 美國專利第5,877,305號（1999年3月2曰頒發）中，各案之全 文均以引用的方式倂入本文中。適用於本發明之ErbB2受體 抑制劑亦描述於1999年1月27日申請之美國臨時申請案第 6 0/117，341號及1999年1月27日申請之美國臨時申請案第 60/117,346號中，兩案之全文均以引用的方式倂入本文中。 可與本發明之化合物一起使用之其它抗增生性試劑包括 酶法呢基蛋白轉移酶之抑制劑及受體酪胺酸激酶PDGFr之 抑制劑，該-等抑制劑包括下列美國專利申請案中所揭示及 主張之化合物：09/221946(1998年12月28日申請）、 09/454058(1999年 12月 2 日申請）、09/501163(2000年 2 月 9 曰 申請）、09/539930(2000 年 3 月 31 日申請）、09/202796(1997 年5月22曰申請）、09/384339(1999年8月26曰申請）及 09/3 83755(1999年8月26日申請）；及下列美國臨時專利申請 案中所揭示及主張之化合物：60/168207(1999年11月30日申 請）、60/170119(1999年 12月 10 日申請）、60/1777 18(2000年 1 96015.doc -19- 200524921 月日申請）、60/168217(1999年11月3〇日申請）及 60/200834(2000年5月i日申請）。各個前述之專利申請案及 . 臨時專利申請案之全文均以引用的方式倂入本文中。 式1之化合物亦可與其它適用於治療異常細胞生長或癌 症之試劑一起使用，該等試劑包括（但不限於）可增強抗腫瘤 免疫反應之試劑，諸如CTLA4(細胞毒素淋巴細胞抗原4)抗 體及其它能阻斷CTLA4之試劑；及抗增生性試劑，諸如其 它法呢基蛋白轉移酶抑制劑，例如上述，，先前技術，，部分所 引用之參考中所述之法呢基蛋白轉移酶抑制劑。可用於本 發明之特疋CTLA4抗體包括描述於美國臨時申請案 60/113,647(1998年12月23日申請）之彼等，該案之全文以引 用的方式倂入本文中。 除非另外指出，否則本文中所使用之術語”治療”意謂逆 轉、緩和 '抑制疾病之進展，或預防該術語所適用之病症 或病況或一或多種該病症或病況之症狀。除非另外指出， 否則本文中所使用之術語”治療”係指如正上文所定義之 ff治療π的治療行為。 。【實施方式】 根據2003年5月15日公開之美國專利第6,573,293號及美 國專利申請公開案第2003/0092917號中所述之方法可製備 化合物5-[(Ζ)_(5-氟-2_氧代-1，2-二氫·3Η_亞吲哚-3-基）甲 - 基]_^[(2幻-2-羥基_3_嗎啉-4_基丙基]-2,4_二甲基_ιΗ·吡咯 魏酿胺’該等案之整個揭示内容均以引用的方式倂入本 文中。 96015.doc -20- 200524921 藉由以大體當量數之所選無機酸或有機酸於水溶劑介質 或於諸如甲醇或乙醇之合適有機溶劑中處理游離鹼化合物 不難I備5-[(Z)-(5_就-2 -氧代_1，2_二氫-311-亞。引。朵基）甲 基]-N-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2,4-二甲基-1Η_α比咯 -3-魏醯胺鹽。在小心蒸發溶劑後，不難獲得所要之固體鹽。 藉由向游離鹼於有機溶劑中之溶液添加適當的無機酸或有 機酸亦可使所要酸式鹽自該溶液沉澱出來。 使用（例如）於乙醇或乙腈/水（1 :丨）中之室溫蒸發、於甲 醇/乙酸乙酯中之加熱蒸發、浸沒於乙醇/己烷中、於異丙醇 中之室溫緩慢蒸發或於乙腈或異丙醇中之室溫漿料、指定 一些可接受之方法及溶劑系統，可使5-[(ΖΗ5-氟-2-氧代 -1，2-二氫-3Η-亞吲哚基）甲基]-Ν-[(23)冬羥基_3_嗎啉 基丙基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽產 生良好的結晶性。吾人觀察到使用於水、乙腈、異丙醇、 異丙醇/水（1: 1)及甲醇中之室溫蒸發、於乙腈及異丙醇申 之室溫漿料及浸沒於乙醇/己烷中產生結晶性相當好或差 的樣品。 _ 藉由自乙腈/乙醇/水蒸餾可產生具有良好結晶性之 5-[(Ζ)-(5-氟-2-氧代-1，2_ 二氫-3Η-亞口引。朵-3-基）曱基]_ N-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉_4_基丙基]_2,4_二曱基-1Η-吡略-3· 羧醯胺之鹽酸鹽。 吾人已識別及表徵5-[(Ζ)-(5-氟-2-氧代-1，2-二氫-3H_亞 °引哚-3-基）甲基]-N-[(2S)_2-羥基-3-嗎琳-4-基丙基]_2,4-二 曱基-ΙΗ-啦咯-3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽之七種多晶型物形 96015.doc -21 - 200524921 式。表示形式1至7之該等形式之PXRD圖譜顯示於圖1至7 中〇 藉由在環戊酮或硝基苯中自80°c冷卻至5°c可產生多晶 型物形式1。多晶型物形式1(峰表）之紅外光譜（600 cnT1至 4000 cnT1)顯示於表3中，且PXRD圖譜顯示於圖1中。DSC 及TGA分析顯示該形式以最高熔點220°C及初始熔點215°C 熔融；當樣品熔融時，同時發生TGA重量損失。完全分解 開始於315°C。 表3 :形式1之紅外峰 λ (cm-1) 透射率 (%) λ (cm.1) 透射率 (%) λ (cm'1) 透射率 (%) 3314.7 31 1479.4 6 1021.3 70 3158.4 42 1465.9 14 1002.0 79 3119.9 49 1454.3 10 979.8 57 3099.6 50 1445.6 8 956.7 83 3056.2 54 1412.9 54 935.5 76 3024.4 54 1387.8 43 922.9 69 2954.0 4 1377.2 37 917.1 70 2924.1 1 1359.8 25 902.7 83 2869.1 10 1323.2 6 887.3 74 2854.6 5 1302.9 36 878.6 73 2768.8 71 1294.2 47 866.0 23 2725.4 72 1280.7 27 808.2 35 2706.1 71 1261.4 18 800.5 42 2641.5 73 1235.4 30 780.2 53 2415.8 72 1213.2 43 773.5 53 1996.3 76 1196.8 11 759.0 70 1835.3 79 1169.8 38 731.0 67 1724.4 80 1154.4 20 725.2 72 1684.8 63 1135.1 31 698.2 76 1657.8 10 1112.9 53 668.3 23 1630.8 9 1099.4 39 650.0 62 1602.8 34 1077.2 51 626.9 61 1570.1 11 1065.7 52 605.6 57 1556.6 4 1058.0 38 1498.7 19 1037.7 37 96015.doc -22- 200524921 較佳於極性溶劑中自80°C冷卻至5 °C、較佳緩慢地冷卻 (例如，0.6 °C/min)、較佳使用長老化時間（例如，48小時） 可產生多晶型物形式2。多晶型物形式2(峰表）之紅外光譜 (600 cm-1至4000 criT1)顯示於表4中，且PXRD圖譜顯示於圖 2中。DSC及TGA分析顯示該形式以最高熔點224°C及初始 熔點221°C熔融。 表4 :形式2之紅外峰 λ (cm*1) 透射率 (%) λ (cm·1) 透射率 (%) λ (cm-1) 透射率 (%) 3313.7 34 1445.6 16 1021.3 63 3171.0 41 1428.3 40 979.8 54 3119.9 48 1412.9 52 955.7 79 3053.3 51 1386.8 43 935.5 72 3023.4 51 1377.2 40 925.8 71 2954.9 11 1359.8 32 921.0 70 2925.0 5 1322.2 14 913.3 65 2869.1 18 1302.9 39 902.7 80 2854.6 13 1294.2 46 887.3 72 2806.4 62 1278.8 33 877.6 71 2704.2 68 1260.5 24 865.1 28 2641.5 * 69 1234.4 35 813.0 43 2416.8 69 1213.2 45 807.2 43 1835.3 78 1196.8 20 780.2 55 1824.7 80 1168.9 40 773.5 55 1685.8 62 1157.3 31 749.3 70 1657.8 20 1135.1 34 731.0 64 1630.8 18 1112.0 51 724.3 68 1574.9 21 1098.5 40 698.2 74 1556.6 11 1095.6 41 668.3 31 1497.7 25 1077.2 48 651.0 62 96015.doc -23- 200524921 1480.4 15 1065.7 51 629.6 63 1464.0 19 1058.0 40 606.6 62 1454.3 16 1037.7 39 多晶型物形式1與2之混合物可於乙醇及THF/水溶劑中產 生。 藉由在水中自80°C冷卻至5°C可產生多晶型物形式3。產 生多晶型物形式3之嘗試導致具有形式2或5之混合物。圖3 A 顯示典型的PXRD圖譜，及圖3B顯示經反卷積（dec〇nv〇luti〇n) 以顯示經計算之純多晶型物形式3圖譜之圖。多晶型物形式 3可為水合物；然而，此並未經過確認。 在4-甲基嗎琳或二乙胺中自8〇 冷卻至5 可產生多晶 型物形式4。 較佳於極性溶劑中自80t冷卻至、較佳以快速冷卻速 率（例如，300 °C /min)及短老化時間（例如，i小時）可產生多 晶型物形式6。在包括酯類、酮類、醇類、烷烴類及胺類之 多種溶劑中自8(TC冷卻至、較佳使用快速冷卻速率（例 如，300。〇/min)及短老化時間（例如，i小時）可產生多晶型 物形式6。產生多晶型物形式6之嘗試導致具有形式2或5之 混合物。®6A顯示典型的PXRD圖譜，及圖防顯示經反卷 積以顯示經計算之純多晶型物形式6圖譜之圖。 於丙-U2-二醇中自80t：冷卻至代可產生多晶型物形式 7。多晶型物形式7可為溶劑合物；然而，此並未經過確諷。 多晶型物形式3-7不穩定，且經過一定時間轉化為多晶型 96015.doc •24- 200524921 本發明之醫藥組合物可為如錠劑、膠囊、 持續釋放之調配物、溶液、懸浮液之適於姑口卩政劑、 如無菌溶液、懸浮液或乳液之適於非經較式’ 軟貧或乳膏之適於局部投予之# + v工，如 腺w ^ 化式，或如栓劑之適於緩直 之Γ組合物可為適於單1予精確劑量 作：Ί。》醫樂組合物包括習知醫藥載劑或賦型劑及 作為活性成份之根據本發明之化合物m可！及 它醫藥用或醫藥試劑、載劑、佐劑等。 "匕括其 例示性非經腸投予形式包括無菌水溶液中之活性化合物 洛液或懸浮液’例如含水丙二醇或右旋糖溶液。若需要， 可合適地緩衝該等劑型。 合適之醫藥載劑包括惰性稀釋劑或填充劑、水及各種有 機溶劑。若需要，醫藥組合物可含有額外成份，諸如調味 2、黏合劑、賦❹I及其類似物。因此，對於經口投予而 =3有諸如檸杈5曼之各種賦型劑之錠劑可連同諸如殺 粉、褐藻酸及特定錯合石夕酸鹽之各種崩解劑及諸如薦糖、 明勝及阿拉伯膠之黏合劑來使用。此外，諸如硬脂酸鎂、 月桂基硫酸納及滑石之潤滑劑通常適用於麼片之目的。類 似類型之固體組合物亦可用於軟填充及硬填充明膠膠囊 中因此，較佳材料包括乳糖或奶糖及高分子量之聚乙二 醇*而要含水懸浮液或酏劑用於經口投予時，此處活性 化合物可組合各種甜味劑或調味劑、著色物質或染料及（若 需要)乳化劑或懸浮劑連同諸如水、乙醇、丙二醇、甘油之 稀釋劑或其組合物。 96015.doc -25- 200524921 調配本發明之醫藥組合物之較佳方法描述於2002年9月 10曰申請之美國臨時專利申請案第60/421，133號中，該案之 揭示内容之全文以引用的方式倂入本文中。 熟習此項技術者熟知或將明白以特定量之活性化合物製 備各種醫藥組合物之方法。對於實例而言，參看Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa·，第 15版（1975)。 實例 以下提供之實例及製備法進一步說明及例示本發明實施 例之特定態樣。應瞭解下列實例之範疇不以任何方式限制 本發明之範疇。 方法及材料 差示掃描熱量測定（DSC):藉由具有熱分析5000控制器之 TA儀器型號2920差示掃描熱量測定計進行DSC量測。樣品 介於0.4至2 mg重量之間。將樣品置放於捲曲之鋁盤中並以 l〇°C/min之速率加熱至高達320°C。將乾燥氮氣用作淨化氣 體。 - 粉末X射線繞射（PXRD):在下列實例中使用Scintag X2 或XI先進繞射系統收集圖1及2之PXRD數據。該系統使用維 持在 45 KV 及 40 mA 以提供 1·5406Α(0·15406 nm)之 CuKal 輻射之銅X射線源，及使用固態珀耳帖（peltier)冷卻偵測 器。使用管發散與抗分散狹縫2 mm及4 mm及偵測器抗分散 及接收狹縫0.5 mm及0.3 mm寬度來控制射束孔徑。通常使 用0·03°/點之步幅掃描及Is/點之計數時間自2。至4〇。（20)收 96015.doc -26- 200524921 集數據。將具有12 _或9 mm铭塔盤插入物或石英板之圓 頂裝載不銹鋼樣品杯用於容納樣品。必要時，分析之前以 研缽及槌將樣品進行手研磨。藉由每秒自各點減去近似本 底計數來校正表1及2中之強度數據用於本底。 使用呵產出之PXRD篩檢裝置收集圖3 — 9之數據。將 板安裝於配備有Hi_Star區域偵測器之Bruker GADDS繞射 儀上。在室溫下，使用在3。至42。之％區域之單色輻 射進行數據收集。在Μ範圍（第一圖框為3 及第二 圖框為19<20<42。）中以每圖框75秒曝露時間收集各井之繞 射圖瑨。在PXRD分析期間所使用之載劑物質對於X射線而 言為透明的且其對本底僅有少量貢獻。 使用具有熱分析5000控制器之ΤΑ儀器型號2950之高解析 度分析儀執行TGA量測。將樣品置放於配衡之鉑懸掛盤上 並以l〇°C/min之速率加熱至至少165。〇。將乾燥氮氣用作淨 化氣體。 HPLC之條件於個別實例中給出。 - 實例1 產生若干5-[(Ζ)-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-3H-亞吲哚-3-基） 甲基]-N-[(2S)-2_羥基-3-嗎啉_4_基丙基]-2,4-二甲基-1H-吡 17各-3-羧醯胺之鹽並分析吸濕性。藉由使用25。〇溫度下之經 控制之大氣微平衡之動態吸濕重量測定（DMSG)來測定吸 濕性。於〇%至90%之相對濕度範圍間以3%步幅在濕度分佈 3 6’ 〇’ 90— 0%中分析樣品，其中初始值36%反映了近似原 始平衡之相對濕度（未經特定量測）。在移至下一步幅之前， 96015.doc -27· 200524921 使各步幅達到平衡，其中所分析之平衡作為在每120秒一點 下連續五個點小於0.001 mg(0.01%)或 0.002 mg(0.02%)之 重量變化。選擇80%相對濕度（RH)下之水吸收用於在該等 鹽之間比較。各鹽之80% RH值顯示於表5中，且表之右欄 識別了顯示完全DMSG掃描之對應圖。對80%下之水吸收所 給出之值的範圍反映了 0— 90%及90— 0%掃描之滯後現象。 表5 鹽 80% RH下之水吸收量(重量％) 圖編號 鹽酸鹽，形式1 3-20 10A 鹽酸鹽，形式2 1.2 10B L-蘋果酸鹽 12-13 11. 順丁烯二酸鹽 0.8 12 L-酒石酸鹽 9 13 甲苯磺酸鹽 7 14 爲桃酸鹽 5-6 15 丙二酸鹽 12 16 對於鹽酸鹽而言，初始量測展示具有水明顯逐步增益/損 失之吸收，吸收分佈展示了顯著的滯後現象（參見圖10A)。 該鹽在表5中指定為’’形式Γ。按照PXRD所評估（未顯示）， 最終產物（形式2之鹽酸鹽）與起始物質並非為同一晶型。形 式2之鹽酸鹽之DSC及TGA量測表示具有約284°C熔點之一 水合物。TGA發現3.8%重量損失。形式2之鹽酸鹽亦藉由 DMSG來評估，但卻使用0—81 —0%之相對濕度分佈（圖 10B)。形式2之鹽為相對非吸濕性且不顯示顯著的滯後現 象。 L-蘋果酸鹽具有較差的結晶性（PXRD未顯示）。樣品在約 182°C下熔融，在約95°C下發生額外的熱事件。 96015.doc -28- 200524921 使用順丁烯二酸鹽所收集之初始數據被省略。初始順丁 晞文義僅具有相當好的結晶性，其展示獨特的PXRD圖譜 /、有、力1 8 1 C的溶點。該物質為吸濕性，其在go%相對濕 度下具有約9%的濕度吸收。該鹽據信為多晶型物形式5或 形式5與一或多種其它多晶型物之混合物，但此未經核實。

Ik後測试具有良好結晶性及特徵為多晶型物形式2之第二 順丁烯二酸鹽樣品，且來自該多晶型物形式2樣品之結果顯 示於表5中。 酒石酸鹽具有較差結晶性（PXrd未顯示）。該樣品於約 191°C下熔融。 甲苯磺酸鹽具有相當好的結晶性（PXRD未顯示）。該樣品 於約190°C下熔融。在約65%相對濕度下可觀測到約2·5%水 之吸收，且其隨後在約30%相對濕度下損失。該重量變化 約等於1莫耳水。 扁桃酸鹽具有較差結晶性（PXRD未顯示）。該樣品於約 224°C下熔融。 丙二酸鹽具有較差結晶性（PXRD未顯示）。該樣品於約 133°C下去溶劑化（desolvated)(DSC)且於約261°C下熔融。藉 由TGA測定約15%之溶劑含量。 實例2 對多晶型物形式1之兩種不同樣品5-[(Z)-(5-氟_2_氧代 -1，2-二氫-3H-亞吲哚-3-基）甲基；hN-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉-4· 基丙基]-2,4-二甲基_1H_吡咯-3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽進 行化學穩定性分析。於25°C及60%相對濕度（表7及8)或於40 96015.doc -29- 200524921 °C及75%相對濕度（表9及10)下將樣品維持於溫度及濕度經 控制之腔室中。在各種時間間隔下，移除物質並測試順丁 烯二酸鹽平衡離子含量檢定、雜質、水含量及光學構異純 度。 藉由離子交換層析（IEC)測定順丁烯二酸鹽平衡離子含 量檢定。典型條件如下：

離子層析：具導電偵測器之Dionex DX 600 分析管柱：陰離子性AS14，250x4.0 mm，Dionex 前導管柱：陰離子性AS14，100x4.0 mm，Dionex 管柱溫度：30°C

流動相：3.5 mM碳酸鈉加1 mM碳酸氫鈉 溶離模式：等度溶離 流率：1 ·2 mL/min 注射體積：25 /xL 使適量順丁烯二酸鹽溶解於水中（微量級）並藉由IEC來分 析，及與校正樣品相比較。在該等條件下，歸因於順丁烯 二酸之峰具有約11分鐘之滯留時間。樣品中之順丁烯二酸 之量計算如下： 含量檢定％=((^/\\〇\100 其中cs為樣品中含有之順丁烯二酸的濃度，且W為水溶液 中之理論樣品濃度。 藉由使用具有二極體陣列偵測器之Perkin Elmer LC200 系統的HPLC來測定雜質量及降解產物之量。分析管柱為 Waters Xterra RP(18.5 /xm，250x4.6 mm)，且前導管柱為 96015.doc -30- ooooooo 2 2 5 8 8 2 2 3 5 0 16 7 0 c 1 4 4 4 4 6 ooooooo 8 8 5 2 2 8 8 200524921

Waters Xterra RP(18.5 μιη，20x3.9 mm)。流動相 A 為 90% . 0.05M之乙酸銨緩衝劑（pH 5.5)與10%乙腈之混合物。流動 , 相B為10% 0.05M之乙酸銨緩衝劑（pH5.5)與90%乙腈之混合 物。溶劑梯度顯示於表6中。 表6

時間（分鐘） %A %~B 流率為1 mL/min，注射體積30 /xL，室溫，435 nm偵測波長。 在該等條件下，歸因於順丁烯二酸鹽之峰具有約24分鐘之 滯留時間。雜質之特徵在於其相對滯留時間（RRT)。 RRT=0.26時雜質為E異構體。其它雜質未經表徵。 藉由HPLC測定光學異構純度，該HPLC使用Chiralpak AD 分析管柱（10 /xm，250x2.6 mm)(Daicel Chemical Industries， Ltd.)、使用30°C烘烤溫度、2_丙醇/庚烷/二乙胺（50/50/0.1) 之流動相，等度溶離模式，0.5 mL/min之流率、50 /xL注射 體積、265 nm之偵測器波長、2-丙醇/庚烷（50/50)之稀釋溶 劑及0.3 mg/mL之樣品濃度。在該等條件下，S異構體具有 約15.5分鐘之滯留時間，且R異構體具有約22分鐘之滯留時 間。 根據USP 25，<921〉之方法Ic測定水含量。 結果顯示於表7-10中。

96015.doc -31 - 200524921 表7 : 25°C及60%相對濕度下g耳彳 初始 1個月 3個月 6個月 9個月 12個月 外觀 ua Ua Ua Ua 含量檢定(游離鹼等價 物％) 98.7 97.5 98.4 98.4 98.4 98.2 雜質(％) ^ RRT 0.26 0.09 0.28 0.05 0.07 0.15 0.06 RRT0.51 0.40 0.41 0.40 0.42 0.36 0.33 RRT0.71 0.05 0.06 ndb nd^~ ~nd^ ndb RRT1.53 0.10 0.11 0.12 0.12 *0.12 0.13 RRT1.74 0.09 0.10 0.09 0.09 0.07 0.07 RRT1.84 0.10 0.13 0.12 0.12 0.10 0.11 總雜質(％) 0.83 1.09 0.78 0.82 0.77 0.70 光學異構純度(％) >99.9 >99.9 >99.9 >99.9 >99.9 >99.9 水含量(％) 0.55 0.53 0.68 0.46 0.42 0.74 a未變化 b未彳貞測

表8 : 4(TC及75%相對濕度下之樣品A 初始 1個月 3個月 6個月 外觀 Ua Ua Ua 含量檢定(游離鹼等價物％) 98.7 97.9 98.5 98.0 雜質(％) RRT 0.26 0.09 0.29 0.05 0.07 RRT0.51 0.40 0.39 0.40 0.40 RRT0.71 0.05 ndb ndb ndb RRT1.53 0.10 0.11 0.14 0.15 RRT 1.74 0.09 0.08 0.08 0.07 RRT 1.84 0.10 0.13 0.12 0.12 總雜質(％) 0.83 LOO 0.80 0.81 光學異構純度(％) 100.0 100.0 100.0 100.0 水含量(％) 0.55 0.57 0.69 0.42 a未變化 b未偵測 96015.doc -32- 200524921 表9 : 25°C及60%相對濕度下之: 篆品B 初始 1個月 3個月 6個月 外觀 ua Ua Ua 含量檢定(游離鹼等價物％) 97.8 98.2 98.2 97.7 雜質(％) RRT 0.26 0.21 0.06 0.18 0.05 RRT0.51 0.68 0.62 0.61 0.56 RRT0.71 0.07 0.09 0.09 0.05 RRT1.53 0.11 0.09 0.08 0.08 RRT1.74 0.07 0.06 0.05 0.06 RRT1.84 0.10 0.08 0.09 0.09 總雜質(％) 1.24 1.00 1.10 0.90 光學異構純度(％) >99.9 nmb nmb nmb 水含量(％) 0.45 0.50 0.54 0.47 a未變化 b未量測

表10 : 40°C及75%相對濕度下之樣品B 初始 1個月 3個月 6個月 外觀 ua Ua Ua 含量檢定(游離鹼等價物％) 97.8 98.2 97.2 97.5 雜質(％) RRT 0.26 0.21 0.13 0.18 0.05 RRT0.51 0.68 0.61 0.58 0.54 RRT0.71 0.07 0.08 0.08 ndb RRT1.53 0.11 0.10 0.09 0.10 RRT1.74 0.07 0.06 0.05 0.05 RRT1.84 0.10 0.08 0.09 0.09 總雜質(％) 1.24 1.06 1.06 0.83 光學異構純度(％) > 99.95 nmc nmc >99.9 水含量(％) 0.45 0.49 0.49 0.47 a未變化 b未偵測 e未量測 實例3 96015.doc 33- 200524921 對多晶型物形式l、多晶型物形式2及多晶型物形式丨與多 晶型物形式2之混合物之樣品5_[(2：)_(5·氟_2_氧代二氫 -3H-亞弓卜朵-3-基）甲基羥基嗎啉_4_基丙 基]-2,4_二甲基-1H-吡咯·3_羧醯胺之順丁烯二酸鹽進行晶 型穩定性分析。在各情況下，於4〇ac及75%相對濕度下將 該物質之樣品置放於經控制之溫度及濕度穩定腔室内。在 測試持續期間拿取樣品若干次且在PXRD圖譜中分析該等 樣品之定性變化對於形式1而言，測試持續時間為163天， 且PXRD圖譜中未觀測到晶型變化。對於形式2而言，測試 持續時間為1 34天，且pxrd圖譜中未觀測到晶型變化。對 於混合形式1 /形式2，測試持續時間為6週，且pxrd圖譜中 未觀測到晶型變化。 實例4 條件 回收率(％) 總雜質(％) 5°C 土 3°C 98.00 1.67 25°C ±2°C，60〇/oRHa 97.52 1.85 40°C 土 2°C，76%RHa 97.63 1.86 對多晶型物形式1之樣品5-[(ZH5-氟_2-氧代β1，2-二氫 -3Η-亞α引哚-3 -基）甲基]_n_[(2S)-2-羥基冬嗎啉-4-基丙 基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽進行六 週之穩定性研究。在三種穩定性測試條件：5°C、25°C/60% 相對濕度及40 C /75%相對濕度，曝露該化合物六週，關閉 小瓶，並如實例2中所述（除HPLC儀器為Agilent 1100系列外） 來分析化學及光學異構穩定性。HPLC結果顯示於表11中。 __ 表 11 96015.doc -34- 200524921 a相對濕度 基於自參考標準獲得之整個HPLC進程之平均反應因子 並視E異構體為所要化合物而非雜質來計算回收率百分 比。該類中之化合物展示可逆之E-Z異構化作用，其中通 常較佳為Z異構體。異構化作用通常為樣品製備及分析之人 為產物。熱解重量分析（TGA)顯示最小水含量，且其在回收 率百分比計算中忽略不計。表中所示之值係若干次注射之 平均值。 為測定熱穩定性及殘留溶劑含量，藉由DSC及TGA來分 析同樣的樣品。結果顯示於表12中。 表12 樣品 條件 TGA DSC 重量損失(％)， 25〇C-125〇C 重量損失(％)， 25〇C-275〇C 峰 lfc) 焓 (J/g) 順丁烯二酸鹽 5°C 1.44 23.15 206.5 224.0 順丁烯二酸鹽 25〇C/60% RHa 1.36 24.36 209.1 253.7 順丁烯二酸鹽 40〇C/75% RHa 1.66 20.61 208.3 243.3 &相對濕度 5-[(Z)-(5-Jl -2-氧代-1，2-二氫-3H_ 亞吲哚-3-基）甲基]-N-[(2S)-2 -罗里基-3 -嗎琳· 4 -基丙基]-2，4 -二甲基-1Η - °比洛-3 - 羧醯胺之順丁烯二酸鹽在所有經研究之穩定性條件下均是 穩定的。6週穩定性樣品之含量檢定為97.1 %-98.5%，其中 總雜質含量為1.67-1.85%。在所有經研究之條件下，與初始 分佈相比較含量檢定及雜質分佈未顯示顯著變化。順丁稀 二酸之HPLC定量分析與游離鹼與游離酸之化學計量比1 : 1 (數據未顯示）一致。同樣的，在任何樣品中未觀測到對掌 96015.doc -35- 200524921 性轉型作用。亦在80°C下保持兩週之樣品中由觀測到R異構 體量未增加來確認光學異構穩定性。 6週樣品之DSC分析顯示在207-208 °C下之單一的吸熱溶 融/分解尖峰。TGA分析顯示在25-125°C之間之最小重量損 失（小於2%)。對應於由DSC所觀測之218°C下之吸熱峰，在 2〇7°C發生顯著重量損失（約21_23%)。 與對照樣品相比較，維持於4〇°c /75% RH之6週樣品之 PXRD分析顯示無結晶變化。 實例6 在臨床前物種（活體内及活體外）及人類肝細胞與微粒體 中’ 5_[(Z)-(5-氟-2-氧代_1，2_二氫-3H_亞吲哚-3-基）甲 基]_N-[(2S)-2-羥基-3-嗎琳-4-基丙基]-2,4-二甲基-1H-吡咯 -3-魏酿胺之代謝作用主要藉由肝細胞色素p45〇介導之氧 化路徑來進行。主要代謝處為嗎啉基。在對長尾猴進行單 一經口投予（100 mg/kg)之後，吾人在其活體内識別了三種 代謝物（圖8)。在猴子血漿親本< 16%相對豐度下偵測之該等 三種代謝物亦係人類微粒體及肝細胞中所觀測到的主要產 物。在單一服用5-[(ZH5-氟_2_氧代_1，2_二氫_3H_亞吲哚-3-基）甲基]-N-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉基丙基]_2，扣二甲基 -1H-吡咯-3-羧醯胺（100 mg/kg)之後及基於（AUCgi2r謝物 /AUCow親本）χ100自猴子血漿測定相對豐度，並自44〇nM 下之特徵吲哚UV吸收估計相對豐度。經由核磁共振（nmr) 確< N,〇-脫烧基作用代谢物。該代謝物具有生物化學（但非 細胞）活性，暗示其缺乏進入細胞的足夠滲透性。嗎啉基内 960l5.doc -36- 200524921 _代謝物係氧化作用.脫氫作用之產物且亦已經由職 也貝馬琳基半越胺代謝物係經由亞胺離子捕獲實驗識 別之不穩定代謝物。在翠—服用12 5叫之後，在人展中亦 測疋出代謝物；該等代謝物顯示於圖9中。藉由428nm下之 UV反應測定相對豐度。 雖然本發明e參考特定及較佳實施例進行了說明，但孰 習此項技術者應認識到藉由本發明之常規試驗及實踐可: 出變化及修改。因此，太恭 b本發明亚非意欲限制於前文描述， 且本發明由附加中請專利範圍及其等價物來界定。 【圖式簡單說明】 圖1顯示多晶型物形式1之5·[(ΖΗ5·氟-2-氧代]，2•二氯 3Η-亞t朵·3·基）甲基經基_3_嗎琳_4_基里丙 基]-2,4-二甲基_1H_m缓醯胺之順丁稀：酸鹽之粉土 射線繞射圖譜。 圖2顯不多晶型物形式2之5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-丨2二^ 3H_亞t朵_3-基）甲基]-N-[(2S)-2·經基_3_嗎琳，_4^丙 基]-2,4n1H_m龍胺之順丁烯：酸鹽之粉 射線繞射圖譜。 圖3A顯示多晶型物混合物中包括多 叩氧代-U-二氫抓亞二之 基^叫2，基_3_嗎^基丙基]_2,4_:甲基_1Η^各甲 3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽之粉末χ射線繞射圖譜。 圖3Β顯示多晶型物形式3之5_[(2>(5_氟_2•氧代_1，^二氕 3Η-亞吲哚_3_基）曱基]|[(2外2-羥基|嗎啉冰^丙 -37- 96015.doc 200524921 基]-2,4-二甲基比咯-3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽之反卷 積粉末X射線繞射圖譜。 圖4顯示多晶型物形式4之5-[(Z)-(5-氟氧代山〕·二氮_ 3H-亞t朵-3-基）甲基]例(2扑2_羥基嗎啉·4_基丙 基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽之粉末又 射線繞射圖譜。 圖5顯示多晶型物形式5之5_[(ΖΗ5_氟_2_氧代_i，2_二氫_ 3H-亞t朵-3-基）甲基]_Ν-[(28)_2-羥基|嗎啉基丙 基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽之粉末χ 射線繞射圖譜。 圖6Α顯示多晶型物混合物中包括多晶型物形式6之 5-[(Ζ)-(5-氟-2-氧代_ι，2-二氫_3Η_亞吲哚基）甲 基]-N_[(2S)-2’基|嗎啉_4_基丙基]_2,4_二甲基u匕洛_ 3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽之粉末义射線繞射圖譜。 圖6B顯示多晶型物形式6之5-[(2：)_(5•氟氧代_丨，2_二氫_ 3H-亞t朵小基）甲基]_N_[(2S)_2_經基嗎啉_4_基丙 基]-2,4_二甲_基喜吡咯_3_羧醯胺之順丁烯二酸鹽之反卷 積粉末X射線繞射圖譜。 圖7顯示多晶型物形式7之5_[(z)_(5_氟_2_氧代_l，2_二氫· 3H-亞t朵-3-基）甲基l·N_[(2s)_2_經基_3_嗎啉_4_基丙 基]-2,4·二甲基-1Η·μ_3__胺之順丁稀二酸鹽之粉末χ 射線繞射圖譜。 圖8顯示5-[(ΖΗ5|2氧代^二氯_3η•亞十朵小基） 甲基]-N-[(2S)-2_經基_3_嗎琳_4_基丙基]_2,4_二甲基_ιη_口比 96015.doc -38- 200524921 咯-3-羧醯胺之結構式及猴子血漿中之三種代謝物之相對豐 度。 圖9顯不5-[(Z)_(5 -氣_2_氧代-1，2 -二氮-3H -亞°引π朵-基） 甲基]-N_[(2S)-2_羥基-3_嗎啉-4-基丙基]_2,4_二甲基]Η_σ比 σ各-3 -鲮g盘胺之結構式及人尿中之若干代謝物之相對豐度。 圖 10A顯示 5_[(Z)-(5_ 氟-2-氧代-1,2-二氫- 3H-亞,σ朵 _3_基） 甲基]_N-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2,4_二甲基-iH-吡 17各-3-羧醯胺之第一鹽酸鹽之動態吸濕重量測定（DMSG)掃 描。 圖10B顯示5-[(Z)-(5_氟-2-氧代·1，2_二氫-3H-亞吲哚-3-基） 甲基]-N-[(2S)-2-羥基_3_嗎啉-4-基丙基]-2,4-二甲基-1Η-吡 洛-3-羧醯胺之第二鹽酸鹽之動態吸濕重量測定（DMSG)掃 描。 圖11顯示5-[(2)_(5-氟_2-氧代-1，2-二氫-3H-亞吲哚-3-基） 甲基；hN-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2,4-二甲基-1H-吡 嘻-3-羧醯胺之L-蘋果酸鹽之動態吸濕重量測定（DMSG)掃 描。 _ 圖12顯示5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1,2-二氫-3H-亞吲哚-3-基） 曱基]-N-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]_2,4_二甲基-1H-吡 咯-3-羧醯胺之順丁烯二酸鹽之動態吸濕重量測定（DmSG) 掃描。 圖13顯示5-[(Z)-(5-氟-2_氧代-1，2-二氫-3H-亞吲哚-3-基） 甲基]-Ν·[(23)_2_羥基-3-嗎啉-4-基丙基]_2,4·二甲基-1H-。比 σ各-3-敌酿胺之L-酒石酸鹽之動態吸濕重量測定（DMSG)掃 96015.doc -39- 200524921 描。 圖14顯示5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1，2-二氫-3H-亞吲哚-3-基） 甲基]-N-[(2S)_2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2,4-二甲基_1H-吡 咯-3-羧醯胺之甲苯磺酸鹽之動態吸濕重量測定（DMSG)掃 描。 圖15顯示5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1，2-二氫-3H-亞吲哚-3-基） 甲基]_N-[(2S)-2-羥基-3_嗎啉-4-基丙基]-2,4-二甲基-lH-α比 咯-3-羧醯胺之扁桃酸鹽之動態吸濕重量測定（DMSG)掃描。 圖16顯示5-[(ΖΗ5-氟-2-氧代-1，2-二氫-3Η-亞吲哚-3-基） 甲基]-N-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2,4_二甲基-1Η-。比 咯-3-羧醯胺之丙二酸鹽之動態吸濕重量測定（DMSG)掃描。 96015.doc -40-

Claims (1)

1. 200524921 十、申請專利範圍： 1·種5 [(Z)-(5_氟氧代-1，2_二氫-3H-亞吲哚-3-基）甲 基]-Ν-[(23)·2-羥基嗎啉_4_基丙基]_2,4_二甲基I。比 咯-3-羧醯胺之非吸濕性鹽。 2·如請求項丨之鹽，其中該鹽為形式丨、形式2或形式丨與形 式2之混合物之結晶無水順丁烯二酸鹽。 3·如睛求項2之鹽，其中該鹽具有粉末χ射線繞射圖譜，其 包含繞射角（20)為12·7及15·4之峰。 4·如印求項2之鹽，其中該鹽具有粉末χ射線繞射圖譜，其 包含繞射角（20)為13.1及15.9之峰。 5· —種 5_[(Ζ)-(5-氟-2-氧代-ΐ，2-二氫 n ,哚 |基）甲 基]-N-[(2S)-2-經基-3-嗎琳_4_基丙基]·2,4_二甲基“比 洛-3-羧醯胺之結晶無水順丁烯二酸鹽。 6.如請求項5之順丁烯二酸鹽，其中該鹽為形式丨、形式2或 形式1與形式2之混合物的多晶型物。 7· —種 5-[(Ζ)-(5_ 氟-2-氧代 _1，2_二氫 υ 〇引哚 _3_基）甲 基]-N-[(2S)-2-羥基-3-嗎啉_4_基丙基]·2,4_二甲基_ιη吡 咯-3-叛酿胺之結晶無水順丁婦二酸鹽，其具有粉末χ射線 繞射圖譜，該圖譜包含與圖i中所示大體相同的繞射角⑽ 峰。 8. -種5-[(ZH5-氟-2-氧代十2_二氫_3H_亞十朵_3_基）甲 基]-N-[(2S)-2-經基-3-嗎琳_4_基丙基]_2,4_二甲基·ΐΗ‘ 咯-3-羧醯胺之結晶無水順丁烯二酸鹽，其具有粉末X射線 繞射圖譜’該圖譜包含與圖2中所示大體相同的繞射角(2〜 96015.doc 200524921 之峰。 9. 10. 11. 12. 13. 14. 種包含如請求項U中任一項之鹽的醫藥組合物。 一種包含如請求項9之醫藥組合物的膠囊。 如請求項10之膠囊，其包含5至75mg之5-[(ZH5-氟氧 代-1，2-二氳_3H_亞吲哚一^基）甲基]_n_[(2s)_2_羥基·3_嗎 啉-4_基丙基]_2,4_二甲基_1H-吡咯_3_羧醯胺鹽之游離鹼 等價物。 如請求項11之膠囊，其包含1〇至25 之5_[(ZH5•氟 氧代-1，2-二氫_3H-亞吲哚_3_基）甲基]-N-[(2S)-2_羥基-3· 嗎琳-4-基丙基]-2,4-二甲基_1H•吡咯_3_羧醯胺鹽之游離 鹼等價物。 一種治療哺乳動物癌症的方法，該方法包含對該哺乳動 物施以治療有效量之如請求項9之醫藥組合物。 一種治療哺乳動物癌症的方法，該方法包含對該哺乳動 物施以如請求項10之膠囊。 96015.doc