TWI809330B - Cdk9抑制劑的多晶型物及其製法和用途 - Google Patents

Cdk9抑制劑的多晶型物及其製法和用途 Download PDF

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趙金柱
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Abstract

本發明提供一種CDK9抑制劑的多晶型物及其製法和用途。具體地，本發明公開4-(((4-(5-氯-2-(((1R,4r)-4-(((R)-1-甲氧基丙基-2-基)氨基)環己基)氨基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基)甲基)四氫-2H-吡喃-4-甲腈的馬來酸鹽或富馬酸鹽或它們的多晶型物及其應用。此外本發明還公開含有上述物質的藥物組合物及其應用。

Description

CDK9抑制劑的多晶型物及其製法和用途
本發明屬於醫藥技術領域，具體地，涉及一種CDK9抑制劑的多晶型物及其製法和用途。
真核細胞的增殖分裂是一個精確而複雜的調控過程。增殖過程是通過細胞週期來完成的，細胞週期的有序進行是通過其嚴格的分子調控機制。目前已發現主要有三大類分子參與細胞週期調控：細胞週期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependent kinases，CDK)、細胞週期蛋白(cyclins)、細胞週期蛋白依賴性激酶抑制劑(cyclin-dependent kinase inhibitors，CKI)，其中CDK處於中心地位。CDK家族已發現13個成員(CDK1-CDK13)，按其胞內功能不同分為兩類：控制細胞週期的CDK和控制細胞轉錄的CDK。CDK9屬於絲氨酸類激酶，它與對應細胞週期蛋白(cyclin)結合形成的複合物稱為正性轉錄延長因數b(P-TEFb)，該複合物能夠磷酸化RNA聚合酶Ⅱ(RNApolymerase Ⅱ)和一些負性轉錄延長因數(NELF和N-TEF)從而使轉錄從起始部位得以延伸，是轉錄得以延長的核心分子(Sims RJ 3rd等 Genes Dev, 2004, 18：2437-68；Yamaguchi Y等 Mol Cell Biol, 2002, 22：2918-27)。研究發現CDK9的表達水準或/和激酶活性的異常會引起細胞內多種蛋白表達或/和其mRNA水準異常。已經證實與腫瘤密切相關的就有抗凋亡蛋白(如Bcl-2)、細胞週期相關調節蛋白(如cyclin D1)、p53途徑相關蛋白、NF-κB途徑的某些蛋白和以及與腫瘤微環境有關的蛋白(如VEGF)等。可見CDK9是腫瘤發生發展過程中最關鍵分子之一。
因此，開發用於調節CDK9的藥物對於預防和治療與CDK9相關的疾病至關重要。
本發明的目的在於提供一類更穩定、更適合成藥的CDK9抑制劑。具體地，本發明的目的是提供化合物4-(((4-(5-氯-2-(((1R,4r)-4-(((R)-1-甲氧基丙基-2-基)氨基)環己基)氨基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基)甲基)四氫-2H-吡喃-4-甲腈的鹽及其一系列穩定的多晶型物，並提供上述多晶型物的製備方法和用途。
第一方面中，本發明提供式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物； (I) 所述藥學上可接受鹽為馬來酸鹽或富馬酸鹽。
在另一優選例中，所述式(I)化合物的藥學上可接受鹽為式(I)化合物馬來酸鹽。
在另一優選例中，所述式(I)化合物的藥學上可接受鹽為式(I)化合物富馬酸鹽。
在另一優選例中，式(I)化合物馬來酸鹽中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：2。
在另一優選例中，式(I)化合物富馬酸鹽中，式(I)化合物和富馬酸的莫耳比為2：1。
在另一優選例中，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1，所述晶型1的X射線粉末衍射圖包含選自下組的衍射角2θ(°)值：5.48±0.2°、14.26±0.2°、19.68±0.2°、22.44±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自下組一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個或全部)的衍射角2θ(°)值：5.02±0.2°、9.86±0.2°、10.88±0.2°、11.22±0.2°、15.06±0.2°、16.82±0.2°、17.48±0.2°、18.18±0.2°、20.50±0.2°、23.24±0.2°、24.90±0.2°、26.76±0.2°、27.16±0.2°、28.48±0.2°、30.86±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：9.86±0.2°、11.22±0.2°、15.06±0.2°、23.24±0.2°、24.90±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：5.02±0.2°、16.82±0.2°、26.76±0.2°、27.16±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：18.18±0.2°、20.50±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自表2中的一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、更多個或全部)的衍射角2θ(°)值。
在另一優選例中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖基本如圖1所示。
在另一優選例中，所述晶型1的差示掃描量熱法分析譜圖在162.45±5℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型1的差示掃描量熱法分析譜圖在162.45±2℃(或162.45±1℃)處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型1的差示掃描量熱法分析譜圖基本如圖2所示。
在另一優選例中，所述晶型1的熱重分析譜圖在179.19±5℃和366.44±5℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型1的熱重分析譜圖在179.19±2℃和366.44±2℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型1的熱重分析譜圖基本如圖3所示。
在另一優選例中，所述晶型1的紅外譜圖在以下位置具有特徵峰：3423.90±5 cm -1、2956.16±5 cm -1、2854.93±5 cm -1、1647.45±5 cm -1、1565.70±5 cm -1、1491.36±5 cm -1、1384.83±5 cm -1、1365.96±5 cm -1、1179.36±5 cm -1、1105.37±5 cm -1、1013.09±5 cm -1、875.53±5 cm -1、865.08±5 cm -1、177.45±5 cm -1、568.10±5 cm -1。
在另一優選例中，所述晶型1的紅外譜圖基本如圖4所示。
在另一優選例中，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型2，所述晶型2的X射線粉末衍射圖包含選自下組的衍射角2θ(°)值：5.02±0.2°、5.36±0.2°、14.04±0.2°、20.96±0.2°、21.42±0.2°、23.00±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型2的X射線粉末衍射圖還包含選自下組一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個或全部)的衍射角2θ(°)值：8.56±0.2°、9.00±0.2°、15.16±0.2°、17.40±0.2°、18.10±0.2°、19.22±0.2°、21.96±0.2°、24.46±0.2°、26.90±0.2°、27.34±0.2°、28.02±0.2°、31.40±0.2°、32.08±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型2的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：8.56±0.2°、9.00±0.2°、17.40±0.2°、19.22±0.2°、24.46±0.2°、27.34±0.2°、28.02±0.2°、32.08±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型2的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：15.16±0.2°、18.10±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型2的X射線粉末衍射圖還包含選自表3中的一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、更多個或全部)的衍射角2θ(°)值。
在另一優選例中，所述晶型2的X射線粉末衍射圖基本如圖5所示。
在另一優選例中，所述晶型2的差示掃描量熱法分析譜圖在159.25±5℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型2的差示掃描量熱法分析譜圖在159.25±2℃(或159.25±1℃)處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型2的差示掃描量熱法分析譜圖基本如圖6所示。
在另一優選例中，所述晶型2的熱重分析譜圖在174.38±5℃和366.44±5℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型2的熱重分析譜圖在174.38±2℃和366.44±2℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型2的紅外譜圖在以下位置具有特徵峰：3382.52±5 cm -1、2960.69±5 cm -1、2850.44±5 cm -1、1647.70±5 cm -1、1560.25±5 cm -1、1474.41±5 cm -1、1354.95±5 cm -1、1202.41±5 cm -1、1178.29±5 cm -1、1106.85±5 cm -1、1012.71±5 cm -1、867.82±5 cm -1、712.49±5 cm -1、663.08±5 cm -1、570.85±5 cm -1。
在另一優選例中，所述晶型2的熱重分析譜圖基本如圖7所示。
在另一優選例中，所述晶型2的紅外譜圖基本如圖8所示。
在另一優選例中，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型3，所述晶型3的X射線粉末衍射圖包含選自下組的衍射角2θ(°)值：5.64±0.2°、11.28±0.2°、16.96±0.2°、24.92±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型3的X射線粉末衍射圖還包含選自下組一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個或全部)的衍射角2θ(°)值：8.26±0.2°、12.21±0.2°、16.22±0.2°、18.52±0.2°、19.18±0.2°、21.28±0.2°、22.40±0.2°、22.98±0.2°、23.54±0.2°、24.50±0.2°、26.62±0.2°、29.42±0.2°、37.48±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型3的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：19.18±0.2°、26.62±0.2°、29.42±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型3的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：8.26±0.2°、16.22±0.2°、18.52±0.2°、23.54±0.2°、24.50±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型3的X射線粉末衍射圖包含選自表4的一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、更多個或全部)的衍射角2θ(°)值。
在另一優選例中，所述晶型3的X射線粉末衍射圖基本如圖9所示。
在另一優選例中，所述晶型3的差示掃描量熱法分析譜圖在114.72±5℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型3的差示掃描量熱法分析譜圖在114.72±2℃(或114.72±1℃)處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型3的差示掃描量熱法分析譜圖基本如圖10所示。
在另一優選例中，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型4，所述晶型4的X射線粉末衍射圖包含選自下組的衍射角2θ(°)值：5.08±0.2°、5.62±0.2°、13.98±0.2°、22.72±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型4的X射線粉末衍射圖還包含選自下組一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個或全部)的衍射角2θ(°)值：8.54±0.2°、11.32±0.2°、15.78±0.2°、17.08±0.2°、18.10±0.2°、20.66±0.2°、21.56±0.2°、23.50±0.2°、25.76±0.2°、27.08±0.2°、28.02±0.2°、28.45±0.2°、28.55±0.2°、32.16±0.2°、34.48±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型4的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：8.54±0.2°、11.32±0.2°、17.08±0.2°、18.10±0.2°、20.66±0.2°、25.76±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型4的X射線粉末衍射圖包含選自表5的一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、更多個或全部)的衍射角2θ(°)值。
在另一優選例中，所述晶型4的X射線粉末衍射圖基本如圖11所示。
在另一優選例中，所述晶型4的差示掃描量熱法分析譜圖在175.74±5℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型4的差示掃描量熱法分析譜圖在175.74±2℃(或175.74±1℃)處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型4的差示掃描量熱法分析譜圖基本如圖12所示。
在另一優選例中，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I，所述晶型I的X射線粉末衍射圖包含選自下組的衍射角2θ(°)值：5.00±0.2°、5.40±0.2°、14.23±0.2°、22.40±0.2°、23.28±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型I的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：8.64±0.2°、9.80±0.2°、15.04±0.2°、16.60±0.2°、17.40±0.2°、18.13±0.2°、19.64±0.2°、20.41±0.2°、24.72±0.2°、27.09±0.2°、28.40±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型I的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：11.16±0.2°、31.00±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型I的X射線粉末衍射圖包含選自表1的一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、更多個或全部)的衍射角2θ(°)值。
在另一優選例中，所述晶型I的X射線粉末衍射圖基本如圖17所示。
在另一優選例中，所述晶型I的差示掃描量熱法分析譜圖在159.91±5℃處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型I的差示掃描量熱法分析譜圖在159.91±2℃(或159.91±1℃)處有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型I的差示掃描量熱法分析譜圖基本如圖18所示。
在另一優選例中，式(I)化合物富馬酸鹽中，式(I)化合物和富馬酸的莫耳比為2：1。
在另一優選例中，所述多晶型物為式(I)化合物富馬酸鹽的晶型A，所述晶型A的X射線粉末衍射圖包含選自下組的衍射角2θ(°)值：14.24±0.2°、19.44±0.2°、21.24±0.2°、23.77±0.2°、24.57±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型A的X射線粉末衍射圖還包含選自下組一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個或全部)的衍射角2θ(°)值：10.60±0.2°、12.95±0.2°、14.72±0.2°、15.88±0.2°、16.79±0.2°、17.93±0.2°、18.41±0.2°、18.93±0.2°、20.67±0.2°、22.16±0.2°、22.80±0.2°、24.88±0.2°、25.32±0.2°、26.13±0.2°、27.24±0.2°、27.64±0.2°、28.15±0.2°、28.64±0.2°、29.33±0.2°、29.64±0.2°、32.08±0.2°、32.73±0.2°、33.36±0.2°、35.36±0.2°、35.96±0.2°、38.28±0.2°、38.64±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型A的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：10.60±0.2°、12.95±0.2°、15.88±0.2°、16.79±0.2°、17.93±0.2°、18.41±0.2°、20.67±0.2°、22.80±0.2°、29.64±0.2°、33.36±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型A的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：14.72±0.2°、22.16±0.2°、24.88±0.2°、28.15±0.2°、28.64±0.2°、29.33±0.2°、32.08±0.2°、35.36±0.2°。
在另一優選例中，所述晶型A的X射線粉末衍射圖包含選自表6的一個或多個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、更多個或全部)的衍射角2θ(°)值。
在另一優選例中，所述晶型A的X射線粉末衍射圖基本如圖13所示。
在另一優選例中，所述晶型A的差示掃描量熱法分析譜圖在218.67±5℃有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型A的差示掃描量熱法分析譜圖在218.67±2℃(或218.67±1℃)有特徵峰。
在另一優選例中，所述晶型A的差示掃描量熱法分析譜圖基本如圖14所示。
第二方面中，本發明提供一種藥物組合物，包含本發明第一方面所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物和藥學上可接受的載體。
協力廠商面中，本發明提供第一方面所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物或第二方面所述的藥物組合物的用途，用於製備預防或治療CDK19相關疾病的藥物。
在另一優選例中，所述CDK19相關疾病為癌症。
在另一優選例中，所述癌症選自下組的一種或多種：非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、肝癌、皮膚癌、神經膠質瘤、乳腺癌、黑色素瘤、惡性膠質瘤、橫紋肌肉瘤、卵巢癌、星形細胞瘤、尤因氏肉瘤、成視網膜細胞瘤、上皮細胞癌、結腸癌、腎癌、胃腸間質瘤、白血病、組織細胞性淋巴癌和鼻咽癌。
第四方面中，本發明提供第一方面所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物的製備方法，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I，所述方法包括步驟： (1) 將式(I)化合物與馬來酸在有機溶劑中攪拌，從而形成式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I；其中，式(I)化合物和馬來酸鹽的莫耳比為1：2。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述攪拌為：先在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述有機溶劑為乙腈、乙醇、或它們的組合。
在另一優選例中，步驟(1)包括步驟： (1-1) 將式(I)化合物溶解在有機溶劑中，得到式(I)化合物的溶液1； (1-2) 將馬來酸溶解在有機溶劑中，得到馬來酸的溶液2； (1-3) 在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下，將式(I)化合物的溶液1滴加入馬來酸的溶液2中並攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)；過濾，收集固體，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：(1.5至3)。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：(2至3)，優選1：(2.1至2.2)。
在另一優選例中，步驟(1-3)中，過濾後收集的固體用乙腈淋洗並乾燥，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
第五方面中，本發明提供了第一方面所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物的製備方法，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1，所述方法包括步驟： (1) 將式(I)化合物與馬來酸在有機溶劑中攪拌，從而形成式(I)化合物馬來酸鹽；其中，式(I)化合物和馬來酸鹽的莫耳比為1：2； (2a) 將步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽溶解在第一結晶溶劑中，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的溶液； (3a) 將步驟(2a)得到的溶液析晶；析晶後過濾，收集固體，從而得到式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1。
在另一優選例中，步驟(3a)為：將步驟(2a)得到的溶液在0至25℃析晶；析晶後過濾，收集固體，從而得到式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1。
在另一優選例中，步驟(3a)為：將步驟(2a)得到的溶液在70至80℃(優選75℃)析晶；析晶後，將混合物降溫並過濾，收集固體，從而得到式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1。
在另一優選例中，步驟(3a)為：將步驟(2a)得到的溶液在70至80℃(優選75℃)析晶；析晶後，將混合物降溫到0至30℃ (優選0至15℃或2至10℃)並過濾，收集固體，從而得到式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1。
在另一優選例中，步驟(3a)中，過濾後收集的固體在55至65℃(優選60℃)下乾燥，從而得到式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1。
在另一優選例中，步驟(3a)中，過濾後收集的固體還可以通過一次或兩次重結晶，從而得到所述的晶型1。所述重結晶過程中可以任選地添加晶型1的晶種。
在另一優選例中，步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽為步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述攪拌為：先在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述有機溶劑為乙腈、乙醇、或它們的組合。
在另一優選例中，所述第一結晶溶劑為乙腈或乙腈和水的混合溶劑。
在另一優選例中，所述第一結晶溶劑為乙腈和水的混合溶劑。
在另一優選例中，所述第一結晶溶劑為乙腈和水的混合溶劑；其中，乙腈和水的體積比為50：1~1：1(較佳地為50：1~10：1)；較佳地，40：1~1：1(較佳地為40：1~10：1)；更佳地，30：1~1：1(較佳地為30：1~10：1)或25：1~1：1(較佳地為25：1~4：1或25：1~15：1)。
在另一優選例中，步驟(2a)包括步驟：在氮氣保護下，將式(I)化合物馬來酸鹽與第一結晶溶劑混合後在回流溫度下溶清，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的溶液。
在另一優選例中，步驟(3a)在氮氣保護下進行。
在另一優選例中，步驟(1)包括步驟： (1-1) 將式(I)化合物溶解在有機溶劑中，得到式(I)化合物的溶液1； (1-2) 將馬來酸溶解在有機溶劑中，得到馬來酸的溶液2； (1-3) 先在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下，將式(I)化合物的溶液1滴加入馬來酸的溶液2中並攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)；過濾，收集固體，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1： (1.5至3)。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1： (2至3)，優選1：(2.1至2.2)。
在另一優選例中，步驟(1-3)中，過濾後收集的固體用乙腈淋洗並乾燥，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
第六方面中，本發明提供了第一方面所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物的製備方法，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型2；所述方法包括步驟： (1) 將式(I)化合物與馬來酸在有機溶劑中攪拌，從而形成式(I)化合物馬來酸鹽；其中，式(I)化合物和馬來酸鹽的莫耳比為1：2； (2b) 在0至50℃(優選10至30或20至25℃)下，將步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽在第二結晶溶劑中攪拌(例如6至36小時或8至24小時)；然後過濾，收集固體，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的晶型2。
在另一優選例中，步驟(2b)中，過濾後收集的固體在35至55℃(優選40至50℃)下乾燥，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的晶型2。
在另一優選例中，步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽為步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述攪拌為：先在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10-25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述有機溶劑為乙腈、乙醇、或它們的組合。
在另一優選例中，所述第二結晶溶劑為甲基第三丁基醚、乙酸乙酯或其組合。
在另一優選例中，步驟(1)包括步驟： (1-1) 將式(I)化合物溶解在有機溶劑中，得到式(I)化合物的溶液1； (1-2) 將馬來酸溶解在有機溶劑中，得到馬來酸的溶液2； (1-3) 先在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下，將式(I)化合物的溶液1滴加入馬來酸的溶液2中並攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)；過濾，收集固體，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：(1.5至3)。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：(2至3)，優選1：(2.1至2.2)。
在另一優選例中，步驟(1-3)中，過濾後收集的固體用乙腈淋洗並乾燥，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
第七方面中，本發明提供了第一方面所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物的製備方法，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型3，所述方法包括步驟： (1) 將式(I)化合物與馬來酸在有機溶劑中攪拌，從而形成式(I)化合物馬來酸鹽；其中，式(I)化合物和馬來酸鹽的莫耳比為1：2； (2c) 在45至55℃(優選50℃)下，將步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽在第三結晶溶劑中攪拌(例如6至48小時或12至36小時)；然後過濾，收集固體，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的晶型3。
在另一優選例中，步驟(2c)中，過濾後收集的固體經乾燥，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的晶型3。
在另一優選例中，步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽為步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述攪拌為：先在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10-25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述有機溶劑為乙腈、乙醇、或它們的組合。
在另一優選例中，所述第三結晶溶劑為丙酮和水的混合溶劑。
在另一優選例中，所述第三結晶溶劑為丙酮和水的混合溶劑；其中，丙酮和水的體積比為20：1~5：1；較佳地，15：1~10：1。
在另一優選例中，步驟(1)包括步驟： (1-1) 將式(I)化合物溶解在有機溶劑中，得到式(I)化合物的溶液1； (1-2) 將馬來酸溶解在有機溶劑中，得到馬來酸的溶液2； (1-3) 在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下，將式(I)化合物的溶液1滴加入馬來酸的溶液2中並攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)；過濾，收集固體，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：(1.5至3)。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：(2至3)，優選1：(2.1至2.2)。
在另一優選例中，步驟(1-3)中，過濾後收集的固體用乙腈淋洗並乾燥，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
第八方面中，本發明提供了第一方面所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物的製備方法，所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型4，所述方法包括步驟： (1) 將式(I)化合物與馬來酸在有機溶劑中攪拌，從而形成式(I)化合物馬來酸鹽；其中，式(I)化合物和馬來酸鹽的莫耳比為1：2； (2d) 在20至60℃(優選25至50℃)下，將步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽在第四結晶溶劑中攪拌(例如6至48小時或12至36小時)；然後過濾，收集固體，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的晶型4。
在另一優選例中，步驟(2d)中，過濾後收集的固體經乾燥，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的晶型4。
在另一優選例中，步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽為步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述攪拌為：先在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)。
在另一優選例中，步驟(1)中，所述有機溶劑為乙腈、乙醇、或它們的組合。
在另一優選例中，所述第四結晶溶劑為乙醇、異丙醇、乙醇和水的混合溶劑、或異丙醇和水的混合溶劑。
在另一優選例中，所述第四結晶溶劑為乙醇和水的混合溶劑；其中，乙醇和水的體積比為20：1~5：1；較佳地，15：1~10：1。
在另一優選例中，所述第四結晶溶劑為異丙醇和水的混合溶劑；其中，異丙醇和水的體積比為20：1~5：1；較佳地，15：1~10：1。
在另一優選例中，步驟(1)包括步驟： (1-1) 將式(I)化合物溶解在有機溶劑中，得到式(I)化合物的溶液1； (1-2) 將馬來酸溶解在有機溶劑中，得到馬來酸的溶液2； (1-3) 在50至85℃(優選70至85℃或75至80℃)下，將式(I)化合物的溶液1滴加入馬來酸的溶液2中並攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到0至35℃(優選10至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)；過濾，收集固體，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：(1.5至3)。
在另一優選例中，步驟(1)中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：(2至3)，優選1：(2.1至2.2)。
在另一優選例中，步驟(1-3)中，過濾後收集的固體用乙腈淋洗並乾燥，從而得到所述式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I。
第九方面中，本發明提供了第一方面所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物的製備方法，所述多晶型物為式(I)化合物富馬酸鹽的晶型A，所述方法包括步驟： (a) 在40至60℃(優選45至55℃)下，將式(I)化合物與富馬酸在有機溶劑中攪拌(例如0.1至2小時或0.5至1小時)； (b) 然後將混合體系降溫到10至30℃(優選20至25℃)並攪拌(例如0.5至3小時或1至2小時)；然後過濾，收集固體，從而得到式(I)化合物富馬酸鹽的晶型A。
在另一優選例中，所述方法包括步驟： (i) 將式(I)化合物溶解在有機溶劑(例如乙腈)中，得到式(I)化合物的溶液1’； (ii) 將富馬酸溶解在有機溶劑(例如乙醇)中，得到富馬酸的溶液2’； (iii) 在40至60℃(優選45至55℃)下，將式(I)化合物的溶液1’滴加入富馬酸的溶液2’中並攪拌(例如1至4小時或1至2小時)；然後將混合體系降溫到10至30℃(優選20至25℃)並繼續攪拌(例如1至4小時或2至3小時)；過濾，收集固體，從而得到所述式(I)化合物富馬酸鹽的晶型A。
在另一優選例中，各個步驟中，所述有機溶劑各自獨立地為乙腈、乙醇、或它們的組合。
在另一優選例中，式(I)化合物和富馬酸的用量莫耳比為1：(0.5至0.7)，優選1：(0.5至0.6)。
在另一優選例中，過濾後收集的固體用乙腈淋洗並乾燥(例如在45至55℃或50℃下)，得到所述式(I)化合物富馬酸鹽的晶型A。
本發明的主要優點包括：發明人經過長期且深入地研究，意外地從眾多種鹽中發現了式(I)化合物的馬來酸鹽或富馬酸鹽具有良好的物化性能。據此，本發明提供式(I)化合物的馬來酸鹽或富馬酸鹽的多種多晶型物，分別是式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I、晶型1、晶型2、晶型3和晶型4以及式(I)化合物馬酸鹽的晶型A。本發明的多晶型物穩定性好、溶解性好且不易吸濕，解決游離鹼化合物溶解性差、吸濕性強、穩定性差的缺陷，同時本發明的多晶型物保持對CDK9良好的抑制活性，可進一步開發成為藥物，用於預防和治療CDK9相關的疾病。
應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在此不再一一累述。
本發明的式 (I) 化合物
本發明所述的式(I)化合物如下式所示， (I)
該化合物名稱為4-(((4-(5-氯-2-(((1R,4r)-4-(((R)-1-甲氧基丙基-2-基)氨基)環己基)氨基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基)甲基)四氫-2H-吡喃-4-甲腈，其名稱也可以為4-[[[4-[5-氯-2-[[反式-4-[[(1R)- 2-甲氧基-1-甲基乙基]氨基]環己基]氨基]-4-吡啶基]-2-噻唑基]氨基]甲基]-四氫-2H-吡喃-4-氰基。該化合物的具體製備方法可參照CN108727363A中實施例1的製備方法，其可以用於抑制細胞週期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependentkinases，CDK)、細胞週期蛋白(cyclins)的活性，尤其是CDK9的活性。
本發明中，「 式(I)化合物 」與「 式(I)化合物游離鹼」可互換使用。
本發明的多晶型物
固體不是以無定形的形式就是以結晶的形式存在。在結晶形式的情況下，分子定位於三維晶格格位內。當化合物從溶液或漿液中結晶出來時，它可以不同的空間點陣排列結晶(這種性質被稱作「 多晶型現象」)，形成具有不同的結晶形式的晶體，這各種結晶形式被稱作“多晶型物”。給定物質的不同多晶型物可在一個或多個物理屬性方面(如溶解度和溶解速率、真比重、晶形、堆積方式、流動性和/或固態穩定性)彼此不同。
所述的「 結晶」可以通過操作溶液，使得感興趣化合物的溶解度極限被超過，從而完成生產規模的結晶。這可以通過多種方法來完成，例如，在相對高的溫度下溶解化合物，然後通過冷卻溶液至飽和極限以下，或者通過沸騰、常壓蒸發、真空乾燥或其它的一些方法來減小液體體積，或者通過加入抗溶劑或化合物在其中具有低的溶解度的溶劑或這樣的溶劑的混合物來降低感興趣化合物的溶解度。另一種可選方法是調節pH值以降低溶解度。有關結晶方面的詳細描述請參見「Crystallization, 第三版, J W Mullens, Butterworth-Heineman Ltd.，1993, ISBN 0750611294」。
所述的「 結晶」可通過將式(I)化合物和相應的酸或相應酸的溶液在合適的溶劑中混合形成渾濁液，或者將式(I)化合物與合適的溶劑混合形成渾濁液後攪拌得到晶體的一種方法。合適的溶劑可以為水或有機溶劑。
所述的「 結晶」可通過將式(I)化合物的溶液或含式(I)化合物和相應酸的溶液置於一定溫度下緩慢揮發掉溶劑來得到晶體。
本發明所述的「 加入抗溶劑」或「 加入反溶劑」是指向式(I)化合物的一種溶液中加入另一種合適溶劑後析出得到晶體的一種方法。
假如期望鹽的形成與結晶同時發生，如果鹽在反應介質中比原料溶解度小，那麼加入適當的酸或鹼可導致所需鹽的直接結晶。同樣，在最終想要的形式比反應物溶解度小的介質中，合成反應的完成可使最終產物直接結晶。
結晶的優化可包括用所需形式的晶體作為晶種接種於結晶介質中。另外，許多結晶方法使用上述策略的組合。一個實施例是在高溫下將感興趣的化合物溶解在溶劑中，隨後通過受控方式加入適當體積的抗溶劑，以使體系正好在飽和水準之下。此時，可加入所需形式的晶種(並保持晶種的完整性)，將體系冷卻以完成結晶。
如本文所用，「 本發明的晶體」、「 本發明的晶型」、「 本發明的多晶型物」等可互換使用。
如本文所用，術語「 本發明的多晶型物」包括式(I)化合物或其藥學上可接受鹽(如馬來酸鹽、富馬酸鹽)的多晶型物，還包括相同鹽的不同多晶型物。
優選地，本發明的多晶型物包括(但並不限於)：式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I、晶型1、晶型2、晶型3或晶型4；式(I)化合物富馬酸鹽的晶型A。
在本發明中，某些晶型可以相互轉化，因此本發明還提供了部分晶型相互轉化的方法。
多晶型物的鑒定和性質
本發明在製備式(I)化合物的多晶型物後，採用如下多種方式和儀器對其性質進行了研究，例如，X射線粉末衍射(XRD)、差示量熱掃描分析(DSC)、TGA、IR等等。
X射線粉末衍射：測定晶型的X射線粉末衍射的方法在本領域中是已知的。例如使X射線粉末衍射儀，以2°每分鐘的掃描速度，採用銅輻射靶獲取圖譜。
本發明的式(I)化合物的鹽的多晶型物，具有特定的晶型形態，在X-射線粉末衍射(XRPD)圖中具有特定的特徵峰。
示差掃描量熱分析：又稱「 差示量熱掃描分析 (DSC) 」，是在加熱過程中，測量被測物質與參比物之間的能量差與溫度之間關係的一種技術。DSC圖譜上的峰位置、形狀和峰數目與物質的性質有關，故可以定性地用來鑒定物質。本領域常用該方法來檢測物質的相變溫度、玻璃化轉變溫度、反應熱等多種參數。
藥物組合物及其應用
本發明的活性成分為本發明的多晶型物，例如式(I)化合物馬來酸鹽或其多晶型物或式(I)化合物富馬酸鹽或其多晶型物。
本發明的活性成分可以用於抑制細胞週期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependentkinases，CDK)、細胞週期蛋白(cyclins)的活性，尤其是CDK9的活性。因此，本發明的活性成分和包含本發明活性成分的藥物組合物可用於治療或者預防CDK9相關疾病，例如癌症，包括(但不限於)選自下組的一種或多種疾病：非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、肝癌、皮膚癌、神經膠質瘤、乳腺癌、黑色素瘤、惡性膠質瘤、橫紋肌肉瘤、卵巢癌、星形細胞瘤、尤因氏肉瘤、成視網膜細胞瘤、上皮細胞癌、結腸癌、腎癌、胃腸間質瘤、白血病、組織細胞性淋巴癌和鼻咽癌。
本發明的藥物組合物包含本發明的活性成分和藥學上可接受的載體。本發明的藥物組合物還可以含有任選的其它治療劑。
如本文所用，「 藥學可接受的載體」是指無毒、惰性、固態、半固態的物質或液體灌裝機、稀釋劑、封裝材料或輔助製劑或任何類型輔料，其與患者相相容，最好為哺乳動物，更優選為人，其適合將活性試劑輸送到目標靶點而不終止試劑的活性。
在治療過程中，可以根據情況，單獨使用本發明的藥物或將本發明的藥物與一種或多種其它治療劑組合使用。所述組合使用可以是在使用本發明的藥物的同時一起給予一種或多種其它治療劑，也可以是在使用本發明的藥物之前給予一種或多種其它治療劑或在使用本發明的藥物之後再給予一種或多種其它治療劑。
通常，本發明的活性成分可以與一種或多種藥用載體形成適合的劑型施用。這些劑型適用於口服、直腸給藥、局部給藥、口內給藥以及其他非胃腸道施用(例如，皮下、肌肉、靜脈等)。上述劑型可由本發明的活性成分與一種或多種載體或輔料經由通用的藥劑學方法製成。上述的載體需要與本發明的活性成分或其他輔料相容。對於固體製劑，常用的無毒載體包括但不限於甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、纖維素、葡萄糖、蔗糖等。用於液體製劑的載體包括水(優選注射用無菌水)、生理鹽水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚乙二醇等。本發明的活性成分可與上述載體形成溶液或是混懸液。
本發明的藥物組合物以符合醫學實踐規範的方式配製，定量和給藥。給予本發明的活性成分的「 治療有效量」由要治療的具體病症、治療的個體、病症的起因、藥物的靶點以及給藥方式等因素決定。
如本文所用，「 治療有效量」是指可對患者(例如人和/或動物)產生功能或活性的且可被人和/或動物所接受的量。
本發明的藥物組合物或所述藥用組合物中含有的活性成分的治療有效量優選為0.1mg/kg(體重)至 5 g/kg(體重)。通常，就成人治療使用的劑量而言，施用劑量通常在0.02至5000 mg/天，例如約1至1500 mg/天的範圍內。該劑量可以為一劑、或同時給藥的劑量、或適當間隔的分劑量，例如每天二、三、四劑或更多分劑。本領域技術人員可以理解的是，儘管給出了上述劑量範圍，但具體的有效量可根據患者的情況並結合醫師診斷而適當調節。
如本文所用，「 患者」是指一種動物，最好為哺乳動物，更好的為人。術語「 哺乳動物」是指溫血脊椎類哺乳動物，包括如貓、狗、兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠、豬和人類。
如本文所用，「 治療」是指減輕、延緩進展、衰減、預防或維持現有疾病或病症(例如癌症)。「 治療」還包括將疾病或病症的一個或多個症狀治癒、預防其發展或減輕到某種程度。
本發明的活性成分可以通過本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數按重量計算。
除非另行定義，本文所用的術語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。
除非另行定義，本文所用的任何試劑或儀器均市售可得。
任何與所記載內容相似或同等的方法及材料皆可應用于本發明中。
如本文所用，術語「 室溫」一般指4至30℃，較佳地指25±5℃。
縮寫說明：ACN表示乙腈。
參照CN108727363A中實施例1的製備方法製備式(I)化合物游離鹼，獲得純度99.99%的式(I)化合物游離鹼。送檢XRPD，結果發現式(I)化合物游離鹼為無定形物。XRPD如圖19所示。
實施例 1 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽
將34.4g式(I)化合物游離鹼用150mL乙腈溶清，作為游離鹼溶液，備用。向反應瓶中加入乙腈300mL，反應瓶中加入馬來酸16.9g(2.2eq)，升溫至75~80℃溶清後，逐滴加入上述游離鹼溶液，加完後攪拌1~2h，冷卻至室溫，繼續攪拌2h，抽濾，濾餅用300mL乙腈淋洗，乾燥得到44g 式(I)化合物馬來酸鹽的晶型I，其中，式(I)化合物和馬來酸鹽的莫耳比為1：2。送檢XRPD、DSC。晶型I的XRPD如圖17和表1所示。晶型I的DSC如圖18所示。
表1
峰號 2θ[°] d[埃] 相對強度%
1 5.00 17.6641 70.4
2 5.40 16.3505 100.0
3 6.72 13.1432 11.5
4 8.64 10.2211 24.5
5 9.80 9.0189 21.6
6 10.73 8.2394 12.6
7 11.16 7.9191 16.8
8 13.61 6.5019 9.6
9 14.23 6.2192 39.1
10 15.04 5.8860 26.0
11 16.60 5.3358 19.6
12 17.40 5.0919 25.7
13 18.13 4.8898 17.0
14 18.72 4.7372 9.1
15 19.64 4.5170 32.5
16 20.41 4.3486 34.9
17 22.40 3.9658 89.7
18 23.28 3.8186 65.2
19 24.72 3.5983 14.0
20 27.09 3.2892 30.9
21 28.40 3.1398 13.1
22 31.00 2.8826 12.9
實施例 1.1 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽
稱取200mg 式(I)化合物游離鹼於反應瓶中，加入10mL乙腈溶清。然後加熱至50℃，邊攪拌邊滴加0.33M馬來酸(2.1eq)的乙腈溶液，攪拌1小時後，自然冷卻至室溫，繼續攪拌1小時，過濾，濾餅用少量乙腈沖洗，乾燥後得到255mg類白色固體，產率88.2%。產品送檢XRPD和DSC。確定為式(I)化合物馬來酸鹽晶型I；其中，式(I)化合物和馬來酸鹽的莫耳比為1：2。其XRPD基本如圖17和表1所示。DSC基本如圖18所示。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8.35 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.12 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.77 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.15 (s, 4H), 3.92 (m, 2H), 3.67 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.60 (s, 1H), 3.57 ~3.41 (m, 5H), 3.35 (s, 3H), 3.13 (s, 1H), 2.05 (d, J = 10.9 Hz, 4H), 1.87 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 1.73 ~ 1.66 (m, 2H), 1.50~1.37 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.21(d, J = 6.4 Hz , 3H).
實施例 2 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 1
將34g 實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入反應瓶中，向反應瓶中加入乙腈和水(體積比為20：1)的混合溶劑340ml，反應體系在氮氣保護下，升溫至回流溶清(80至85℃)；將反應體系降溫至75℃並養晶1至2h；然後，將體系自然降溫到2至10℃，抽濾，固體在60℃下真空乾燥，得到產品式(I)化合物馬來酸鹽晶型1，產率80%。熔點在156至160℃。純度99.91%。送檢XRPD、DSC、TGA和IR。晶型1的XRPD如圖1和表2所示。晶型1的DSC如圖2所示。晶型1的TGA如圖3所示。晶型1的IR如圖4所示。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d6) δ 8.38 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.12 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), f7.37 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.16 (s, 4H), 3.92 (m, 2H), 3.67 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 3.62 (s, 1H), 3.56 ~ 3.42 (m, 5H), 3.35 (s, 3H), 3.14 (s, 1H), 2.05 (m, 4H), 1.87 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 1.73~1.68 (m, 2H), 1.53~1.39 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.22 (d, J = 6.5 Hz , 3H).
表2
峰號 2θ[°] d[埃] 相對強度%
1 5.02 17.5866 13.1
2 5.48 16.1183 48.9
3 8.78 10.0656 4.6
4 9.12 9.6905 1.6
5 9.86 8.9624 16.9
6 10.88 8.1283 5.6
7 11.22 7.8797 13.7
8 13.66 6.4772 2.5
9 14.26 6.2063 28.1
10 15.06 5.8778 19.4
11 16.28 5.4411 3.4
12 16.82 5.2672 10.8
13 17.48 5.0701 5.5
14 18.18 4.8759 9.0
15 18.72 4.7362 1.1
16 19.68 4.5073 27.9
17 20.10 4.4141 3.7
18 20.50 4.3289 7.9
19 21.40 4.1487 1.4
20 22.44 3.9590 100.0
21 22.82 3.8941 7.4
22 23.24 3.8244 18.2
23 24.90 3.5733 20.0
24 26.07 3.4159 4.0
25 26.76 3.3287 11.5
26 27.16 3.2805 10.9
27 28.10 3.1727 1.5
28 28.48 3.1315 5.1
29 29.84 2.9915 2.7
30 30.30 2.9475 3.4
31 30.86 2.8950 5.9
32 31.42 2.8447 4.6
33 31.72 2.8186 2.7
34 32.66 2.7396 1.0
35 34.94 2.5657 2.3
36 35.24 2.5447 2.0
37 35.92 2.4980 2.0
38 36.44 2.4636 2.8
實施例 2.1 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 1
將200 mg 實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入反應瓶中，向反應瓶中加入乙腈和水(體積比為4：1)的混合溶劑10ml，反應體系在氮氣保護下，升溫至回流溶清(80至85℃)；將反應體系降溫至75℃並養晶1至2h；然後，將體系自然降溫至室溫，抽濾，異丙醇淋洗濾餅。濾餅在45℃下真空乾燥，得到產品，產率81%。產品送檢XRPD和DSC。確定為式(I)化合物馬來酸鹽晶型1。其XRPD基本如圖1和表2所示。DSC基本如圖2所示。
實施例 2.2 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 1
將100mg 實施例1.1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入到1至2ml乙腈中，溫度控制在0℃攪拌24小時後，過濾反應液，收集固體，乾燥得到產品。純度99.99%。產品送檢XRPD和DSC。確定為式(I)化合物馬來酸鹽晶型1。其XRPD基本如圖1和表2所示。DSC基本如圖2所示。
實施例 2.3 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 1
將100mg 實施例1.1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入到1至2ml乙腈中，溫度控制在25℃攪拌24小時後，過濾反應液，收集固體，乾燥得到產品。純度99.99%。產品送檢XRPD和DSC。確定為式(I)化合物馬來酸鹽晶型1。其XRPD基本如圖1和表2所示。DSC基本如圖2所示。
實施例 2.4 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 1
將100mg 實施例1.1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入到1至2ml乙腈和水(體積比為10：1)的混合溶劑中，溫度控制在0℃攪拌24小時後，過濾反應液，收集固體，乾燥得到產品。純度99.91%。產品送檢XRPD和DSC。確定為式(I)化合物馬來酸鹽晶型1。其XRPD基本如圖1和表2所示。DSC基本如圖2所示。
實施例 3 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 2
將10g 實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入到100ml甲基第三丁基醚中，在氮氣保護下，溫度控制在25℃，反應過夜後，過濾反應液，收集固體40至50℃旋幹，得到產品式(I)化合物馬來酸鹽晶型2，產率70%。熔點在152至156℃。純度99.13%。送檢XRPD、DSC、TGA和IR。晶型2的XRPD如圖5和表3所示。晶型2的DSC如圖6所示。晶型2的TGA如圖7所示。晶型2的IR如圖8所示。
表3
峰號 2θ[°] d[埃] 相對強度%
1 5.02 17.5879 100.0
2 5.36 16.4713 54.5
3 8.56 10.3219 15.7
4 9.00 9.8162 15.7
5 14.04 6.3028 53.6
6 15.16 5.8396 8.5
7 16.36 5.4132 5.3
8 17.40 5.0929 11.8
9 18.10 4.8974 6.9
10 19.22 4.6141 11.8
11 20.96 4.2348 53.4
12 21.42 4.1451 67.1
13 21.96 4.0436 5.3
14 23.00 3.8637 49.1
15 24.46 3.6364 19.9
16 25.68 3.4662 3.8
17 26.05 3.4184 3.7
18 26.90 3.3118 10.7
19 27.34 3.2594 15.5
20 28.02 3.1818 18.7
21 31.40 2.8465 7.3
22 32.08 2.7879 15.6
23 35.24 2.5449 3.3
24 38.95 2.3107 3.0
實施例 3.1 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 2
將100 mg 實施例1.1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入到1至2 ml甲基第三丁基醚中，溫度控制在0 ℃攪拌24小時後，過濾反應液，收集固體，乾燥得到產品。純度99.99%。產品送檢XRPD和DSC。確定為式(I)化合物馬來酸鹽晶型2。其XRPD基本如圖5和表3所示。DSC基本如圖6所示。
實施例 3.2 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 2
將100 mg 實施例1.1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入到1至2 ml甲基第三丁基醚中，溫度控制在50 ℃攪拌24小時後，過濾反應液，收集固體，乾燥得到產品。純度99.88%。產品送檢XRPD和DSC。確定為式(I)化合物馬來酸鹽晶型2。其XRPD基本如圖5和表3所示。DSC基本如圖6所示。
實施例 3.3 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 2
將100 mg 實施例1.1製備的式(I)化合物馬來酸鹽加入到1至2 ml乙酸乙酯中，溫度控制在50 ℃攪拌24小時後，過濾反應液，收集固體，乾燥得到產品。純度99.81%。產品送檢XRPD和DSC。確定為式(I)化合物馬來酸鹽晶型2。其XRPD基本如圖5和表3所示。DSC基本如圖6所示。
實施例 4 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 3
將100mg 實施例1.1製備的式(I)化合物馬來酸鹽置於1至2ml丙酮和水的混合溶劑(丙酮和水的體積比為10： 1)中，在50℃下攪拌24小時，然後過濾，收集固體並乾燥，得到產品式(I)化合物馬來酸鹽晶型3，產率50%，純度99.99%。送檢XRPD和DSC。晶型3的XRPD如圖9和表4所示。晶型3的DSC如圖10所示。
表4
峰號 2θ[°] d[埃] 相對強度%
1 5.64 15.6566 100.0
2 8.26 10.6970 9.6
3 11.28 7.8370 35.4
4 12.21 7.2452 5.8
5 12.50 7.0732 4.4
6 14.56 6.0785 4.6
7 16.22 5.4603 12.1
8 16.96 5.2234 35.5
9 18.52 4.7869 10.1
10 19.18 4.6234 22.5
11 21.28 4.1720 5.7
12 22.40 3.9662 5.5
13 22.98 3.8676 8.8
14 23.54 3.7763 10.5
15 24.50 3.6306 9.9
16 24.92 3.5704 38.4
17 25.93 3.4327 3.4
18 26.62 3.3459 28.9
19 28.79 3.0981 3.6
20 29.42 3.0336 14.0
21 30.02 2.9743 3.2
22 31.56 2.8325 2.4
23 32.38 2.7629 3.1
24 33.32 2.6867 3.9
25 34.96 2.5645 2.3
26 35.58 2.5214 3.4
27 35.88 2.5010 2.3
28 37.48 2.3976 5.0
實施例 5 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 4
將100mg 實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽置於1至2ml乙醇和水的混合溶劑(乙醇和水的體積比為10：：1)中，在25℃下攪拌24小時，然後過濾，收集固體並乾燥，得到產品式(I)化合物馬來酸鹽晶型4，產率45%，純度99.99%。熔點在171-176℃。送檢XRPD和DSC。晶型4的XRPD如圖11和表5所示。晶型4的DSC如圖12所示。
表5
峰號 2θ[°] d[埃] 相對強度%
1 5.08 17.3812 95.4
2 5.62 15.7139 100.0
3 8.54 10.3433 18.8
4 11.32 7.8119 17.2
5 13.98 6.3303 39.4
6 15.78 5.6122 6.5
7 17.08 5.1874 29.7
8 18.10 4.8967 19.8
9 19.01 4.6635 7.2
10 20.66 4.2963 18.6
11 21.56 4.1193 6.5
12 22.72 3.9108 87.3
13 23.50 3.7827 12.0
14 25.76 3.4560 14.7
15 27.08 3.2898 9.0
16 28.02 3.1822 9.2
17 28.45 3.1352 7.5
18 28.55 3.1237 9.9
19 32.16 2.7810 7.9
20 34.48 2.5988 7.0
21 34.76 2.5791 4.9
22 38.14 2.3574 4.4
實施例 6 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 4
將100mg 實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽置於1至2ml異丙醇和水的混合溶劑(異丙醇和水的體積比為10：：1)中，在25℃下攪拌24小時，然後過濾，收集固體並乾燥，得到產品式(I)化合物馬來酸鹽晶型4，產率38%，純度99.92%。送檢XRPD和DSC。結果XRPD基本如圖11所示，DSC基本如圖12所示。
實施例 7 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 4
將100mg 實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽置於1至2ml乙醇中，在50℃下攪拌24小時，然後過濾，收集固體並乾燥，得到產品式(I)化合物馬來酸鹽晶型4，產率42%，純度99.97%。送檢XRPD和DSC。結果XRPD基本如圖11所示，DSC基本如圖12所示。
實施例 8 製備式 (I) 化合物馬來酸鹽晶型 4
將100mg 實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽置於1至2ml異丙醇中，在50℃下攪拌24小時，然後過濾，收集固體並乾燥，得到產品式(I)化合物馬來酸鹽晶型4，產率35%，純度99.99%。送檢XRPD和DSC。結果XRPD基本如圖11所示，DSC基本如圖12所示。
實施例 9 製備式 (I) 化合物富馬酸鹽晶型 A
將2g 式(I)化合物游離鹼溶於30mL乙腈中，得游離鹼的乙腈澄清溶液；置於50℃水浴中，攪拌下逐滴加入9.236mL 0.25M富馬酸(268mg，0.6eq)的乙醇溶液；逐漸有固體析出；50℃下保溫攪拌0.5小時，停止加熱，自然冷卻至室溫並攪拌1小時；過濾，用40mL乙腈沖洗濾餅；50℃真空乾燥，得產品式(I)化合物富馬酸鹽晶型A，其中，式(I)化合物和富馬酸的莫耳比為1：0.5，產率94.0%。熔點為217至218℃。純度99.38%。送檢XRPD和DSC。晶型A的XRPD如圖13和表6所示。晶型A的DSC如圖14所示。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8.10 (t, J = 6.4 Hz 1H), 7.95 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.65 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.39 (s, 1H), 3.90 (m, 2H), 3.62(d, J = 6.1 Hz, 2H) ,3.55 (s, 1H), 3.47~3.39(m, 2H), 3.31~3.25 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 3.13 (m, 1H), 2.70 (s, 1H), 1.95~1.82 (m, 6H), 1.66~1.62 (m, 2H), 1.26~1.17 (m, 4H), 1.00 (d, J = 6.4 Hz , 3H).
表6
峰號 2θ[°] d[埃] 相對強度%
1 10.60 8.3414 34.7
2 12.95 6.8297 20.4
3 14.24 6.2160 100.0
4 14.72 6.0142 14.5
5 15.88 5.5764 19.4
6 16.79 5.2766 41.4
7 17.54 5.0536 6.1
8 17.93 4.9444 30.5
9 18.41 4.8157 19.5
10 18.93 4.6831 7.9
11 19.44 4.5633 78.7
12 20.67 4.2927 6.5
13 21.24 4.1800 57.0
14 22.16 4.0091 13.3
15 22.80 3.8970 44.7
16 23.77 3.7400 46.9
17 24.57 3.6208 45.6
18 24.88 3.5754 12.9
19 25.32 3.5150 5.3
20 26.13 3.4081 7.7
21 27.24 3.2714 8.6
22 27.64 3.2246 5.5
23 28.15 3.1673 11.7
24 28.64 3.1138 11.6
25 29.33 3.0428 11.9
26 29.64 3.0116 27.1
27 30.16 2.9608 2.8
28 30.52 2.9265 3.0
29 31.48 2.8397 3.6
30 32.08 2.7879 9.5
31 32.73 2.7341 5.4
32 33.36 2.6837 29.7
33 34.36 2.6076 3.4
34 35.36 2.5366 12.6
35 35.96 2.4953 7.3
36 36.24 2.4767 3.9
37 37.28 2.4097 3.9
38 38.28 2.3496 7.1
39 38.64 2.3283 6.4
實施例 10 穩定性試驗
將實施例9製備的式(I)化合物富馬酸鹽晶型A和實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1置於60℃乾燥箱中，不同天數(0天、7天、21天)取樣、檢測，以考察晶型的穩定性。結果如下表7所示。
表7
樣品 實驗條件 總雜% 含量%
實施例9製備的式(I)化合物富馬酸鹽晶型A 0天 0.62 99.38
7天 0.69 99.31
21天 0.78 99.22
實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1 0天 0.09 99.91
7天 0.12 99.88
21天 0.14 99.86
式(I)化合物游離鹼 0天 0.50 99.50
7天 1.58 98.42
14天 2.56 97.44
結果顯示：式(I)化合物富馬酸鹽晶型A和式(I)化合物馬來酸鹽晶型1在高溫下經過21天，含量基本無變化，XRPD圖譜特徵峰基本無變化，晶型十分穩定。
而將式(I)化合物游離鹼無定形物同樣地進行上述穩定性的研究。結果發現：式(I)化合物游離鹼無定型物穩定性差，在第7天和第14天時，無定型物性狀發生明顯變化，由黃色固體變成類似硬膠狀物，雜質種類增多，雜質含量增大。
實施例 11 溶解性試驗
每個瓶中稱量約50 mg實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1；配製不同pH值PBS緩衝液；室溫下，向不同瓶中加入不同溶劑，少量多次，直到剛好溶解，記錄溶劑用量，計算溶解度。結果如下表8所示。
表8
樣品 實驗條件 溶解度 (S, mg/mL)
式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1 PBS 6.0 41
PBS 6.5 45
PBS 7.0 57
PBS7.5 62
水 31
生理鹽水 50
將式(I)化合物游離鹼無定形物同樣地進行上述溶解性的研究。結果發現：式(I)化合物游離鹼在相同試驗條件下，其溶解度明顯低很多；尤其是在水中的溶解度非常低。如表9所示。
表9
樣品 實驗條件 溶解度 (S，mg/ml)
式(I)化合物游離鹼 PBS pH=6.5 約15.10
PBS pH=7.0 約12.5
PBS pH=7.2 約10.10
PBS pH=7.5 約0.44
水 約0.1
結果顯示：式(I)化合物的馬來酸鹽晶型1，在上述溶劑中的溶解度明顯提高，溶解度可達30至60 mg/mL，大大地改善式(I)化合物的溶解度。
實施例 12 吸濕性試驗
實驗方法：通過動態水分吸附儀來檢測，稱取10mg固體樣品放置到天平上，程式控制樣品室內濕度，在同一溫度不同濕度的條件下放置7天，測定受試樣品隨相對濕度的品質變化。檢測程式：濕度變化依序為0%-95%-0%；測試溫度25℃。
實驗結果如圖15(實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1)和圖16(實施例9製備的式(I)化合物富馬酸鹽晶型A)所示。結果顯示：兩種鹽型吸濕性相當，在環境濕度RH=60%下，吸濕增重約1%，吸濕性弱，明顯優於游離態。
而將式(I)化合物游離鹼無定形物同樣地進行上述吸濕性的研究。結果發現：式(I)化合物游離鹼無定型物穩定性差，在環境濕度RH高於60%，表現出較強的吸濕性，且吸濕後的樣品性狀明顯改變(有團聚現象)。送DVS檢測，其結果如圖20所示。可見，式(I)化合物游離鹼無定形物具有較強的吸濕性，會隨著環境濕度的增大，持續吸濕。在相對濕度95%時，吸濕增重可達9.5%，且吸濕後的樣品不易脫附。
實施例 13 穩定性研究
將實施例3製備的式(I)化合物馬來酸鹽的晶型2置於60℃乾燥箱中，不同天數(0天、7天、14天和30天)取樣、檢測，以考察晶型的穩定性。如表10所示。
表10
樣品 實驗條件 總雜% 含量%
晶型2 0天 0.87 99.13
7天 1.44 98.56
14天 2.27 97.73
結果顯示：晶型2在高溫下經過14天，XRPD圖譜特徵峰基本無變化，晶型十分穩定，為原先晶型。
實施例 14 生物實驗
稱取5.61 mg實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型1，將其溶於74.7μL的DMSO中，配製濃度為100 mM，在-20℃冰箱中保存。
配置1000×化合物儲存板(或稱為1000×儲存藥板)，將100mM的化合物儲存液用DMSO進行稀釋，起始濃度10 mM，9個濃度梯度(儲液濃度分別為10 mM、3 mM、1 mM、0.3 mM、0.1 mM、0.03 mM、0.01 mM、0.001 mM和0.0001 mM)。化合物儲存板用封板膠帶密封，放入-20℃冰箱保存備用。
選擇急性髓系白血病細胞MV-4-11(購自ATCC)，按照5000/孔的密度接種到96孔板中(每孔體積為140 μL)，放入37℃，5% CO 2培養箱中培養過夜。
取出1000×儲存藥板，室溫避光融化，然後配製15×中間藥板(78.8 μL培養基加1.2 μL 含藥DMSO儲存液)，充分混勻。轉移10 μL 含藥培養基(15×)到96孔細胞板中(終濃度為10 μM、3 μM、1 μM、0.3 μM、0.1 μM、0.03 μM、0.01 μM、0.001 μM和0.0001 μM，DMSO終濃度為0.01%)，輕拍混勻，然後放入37℃，5% CO 2培養箱中，繼續培養24小時。
然後用CellTiter-Glo方法檢測各個藥物濃度條件下的細胞活力，並計算相應條件下的細胞增殖抑制率。
在MV-4-11細胞上，式(I)化合物馬來酸鹽晶型1在0.0001 μM到0.01 μM濃度範圍內，細胞生長無明顯變化，在0.03μM到10 μM濃度範圍內，對細胞生長有顯著的抑制作用；式(I)化合物馬來酸鹽晶型1對MV-4-11細胞的絕對半數抑制濃度(ABsIC50)為0.032 μM。
對比例 1
同樣採用實施例1或實施例9描述的方法，用檸檬酸、L-酒石酸、硫酸或磷酸替換馬來酸或富馬酸，來與式(I)化合物成鹽。結果發現，用檸檬酸、酒石酸、硫酸或磷酸與式(I)化合物成鹽後根本無法獲得晶體形態的固體。
對比例 2
同樣採用實施例1或實施例9描述的方法，用鹽酸替換馬來酸或富馬酸，來與式(I)化合物成鹽。結果發現，雖然鹽酸與式(I)化合物成鹽後可以獲得晶體形態的固體，但是，式(I)化合物鹽酸鹽的吸濕性非常強，無法進行後續應用。
對比例 3
經過揮發、冷卻、溶析等方法對式(I)化合物游離鹼無定形物進行結晶，結果都無法得到良好的晶體形態。
揮發：將利用表11所示溶劑完全溶解式(I)化合物游離鹼後的溶液置於25℃真空烘箱中在真空(0.1MPa)揮發7天。結果發現所得物質均為油膠狀物。再往這些油膠狀物中加入相應等量的同種溶劑重新溶解，放置室溫(T=20±2℃)下自然揮發。結果發現均未得到良好的固態樣品。
表11
溶劑 首次揮幹後 實驗操作 實驗現象(23天)
甲醇 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
乙醇 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
異丙醇 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
丙酮 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
2-丁酮 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
四氫呋喃 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
乙酸乙酯 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
乙酸異丙酯 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
二氯甲烷 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
二甲亞碸 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 液體狀
N,N-二甲基甲醯胺 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 液體狀
N-甲基吡咯烷酮 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 液體狀
乙腈 呈油膠狀物 重新溶解，室溫自然揮發 油膠狀
冷卻：每個瓶中稱量約50mg式(I)化合物游離鹼，分別添加表12的不同溶劑1mL，室溫(T=20℃)溶解，置於0℃2h，記錄是否析出，繼續降溫到-20℃過夜，記錄是否析出。結果如表12所示。結果發現冷卻後無法獲得良好的固態樣品。
表12
溶劑 0℃是否析出 -20℃是否析出
甲醇 否 否
乙醇 否 否
異丙醇 否 否
丙酮 否 否
2-丁酮 否 否
四氫呋喃 否 否
乙酸乙酯 否 析出極少量
乙酸異丙酯 否 否
二氯甲烷 否 否
二甲亞碸 否 否
N,N-二甲基甲醯胺 否 否
N-甲基吡咯烷酮 否 否
乙腈 否 析出極少量
溶析：每個瓶中稱量約50mg式(I)化合物游離鹼，分別添加表12的不同溶劑1mL，室溫(T=20℃)溶解，向其中加一定量的反溶劑(緩慢滴加)，觀察是否有固體析出。結果如表13所示。結果發現添加反溶劑後無法獲得良好的固態樣品。
表13
溶劑 反溶劑種類 溶劑量(ml) 是否析出
甲醇 MTBE(與環己烷不互溶) 3 否
乙醇 環己烷 3 否
異丙醇 環己烷 3 否
丙酮 水 2 油析
2-丁酮 水(與環己烷不互溶) 3 否
四氫呋喃 環己烷 3 否
乙酸乙酯 環己烷 3 否
乙酸異丙酯 環己烷 3 否
二氯甲烷 環己烷 2 油析
二甲亞碸 水 2 油析
N,N-二甲基甲醯胺 水 2.7 油析
N-甲基吡咯烷酮 水 3 油析
乙腈 水 2.5 油析
可見發明人通過大量實驗研究後發現了式(I)化合物相關的幾種各項性能均非常穩定和良好的晶型，分別是其馬來酸鹽的晶型I、晶型1、晶型2、晶型3、晶型4以及其富馬酸鹽的晶型A。
實施例 15 藥物組合物
由以下組分製備晶型1的片劑：
 實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型1 20g
澱粉 20g
乳糖 20g
PVPP 3g
PVP 3g
滑石粉 1.6 g
十二烷基硫酸鈉 5g
按照常規方法，將式(I)化合物馬來酸鹽晶型1與澱粉混合過篩後再與其他組分混合均勻，直接壓片。
實施例 16 藥物組合物
由以下組分製備晶型A的片劑：
實施例9製備的式(I)化合物富馬酸鹽晶型A 20g
澱粉 20g
乳糖 20g
PVPP 3g
PVP 3g
滑石粉 1.6 g
十二烷基硫酸鈉 5g
按照常規方法，將式(I)化合物富馬酸鹽晶型A與澱粉混合過篩後再與其他組分混合均勻，直接壓片。
本發明的其他的特徵及功效，將於參照圖式的實施方式中清楚地呈現，其中： 圖1為實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型1的XRPD圖； 圖2為實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型1的DSC圖； 圖3為實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型1的TGA圖； 圖4為實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型1的IR圖； 圖5為實施例3製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型2的XRPD圖； 圖6為實施例3製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型2的DSC圖； 圖7為實施例3製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型2的TGA圖； 圖8為實施例3製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型2的IR圖； 圖9為實施例4製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型3的XRPD圖； 圖10為實施例4製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型3的DSC圖； 圖11為實施例5製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型4的XRPD圖； 圖12為實施例5製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型4的DSC圖； 圖13為實施例9製備的式(I)化合物富馬酸鹽晶型A的XRPD圖； 圖14為實施例9製備的式(I)化合物富馬酸鹽晶型A的DSC圖； 圖15為實施例2製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型1的DVS圖； 圖16為實施例9製備的式(I)化合物富馬酸鹽晶型A的DVS圖； 圖17為實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型I的XRPD圖； 圖18為實施例1製備的式(I)化合物馬來酸鹽晶型I的DSC圖； 圖19為式(I)化合物游離鹼的XRPD圖；及 圖20為式(I)化合物游離鹼的DVS圖。

Claims (24)

  1. 一種式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物；
    Figure 109140784-A0305-02-0056-1
     其中，所述藥學上可接受鹽為馬來酸鹽；其中，式(I)化合物和馬來酸的莫耳比為1：2；所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1，所述晶型1的X射線粉末衍射圖包含選自下組的衍射角2θ(°)值：5.48±0.2°、14.26±0.2°、19.68±0.2°、22.44±0.2°；所述多晶型物為式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1，所述方法包括步驟：(1)將式(I)化合物與馬來酸在有機溶劑中攪拌，從而形成式(I)化合物馬來酸鹽，其中，式(I)化合物和馬來酸鹽的莫耳比為1：2；(2a)將步驟(1)得到的式(I)化合物馬來酸鹽溶解在第一結晶溶劑中，從而得到含有式(I)化合物馬來酸鹽的溶液；(3a)將步驟(2a)得到的溶液析晶，析晶後過濾，收集固體，從而得到式(I)化合物馬來酸鹽的晶型1；所述第一結晶溶劑為乙腈或乙腈和水的混合溶劑。
  2. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自下組一個或多個的衍射角2θ(°)值：5.02±0.2°、9.86 ±0.2°、10.88±0.2°、11.22±0.2°、15.06±0.2°、16.82±0.2°、17.48±0.2°、18.18±0.2°、20.50±0.2°、23.24±0.2°、24.90±0.2°、26.76±0.2°、27.16±0.2°、28.48±0.2°、30.86±0.2°。
  3. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：9.86±0.2°、11.22±0.2°、15.06±0.2°、23.24±0.2°、24.90±0.2°。
  4. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的差示掃描量熱法分析譜圖在162.45±5℃處有特徵峰。
  5. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：5.02±0.2°、16.82±0.2°、26.76±0.2°、27.16±0.2°。
  6. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自下組的衍射角2θ(°)值：18.18±0.2°、20.50±0.2°。
  7. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖還包含選自表2中的一個或多個的衍射角2θ(°)值。
  8. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的X射線粉末衍射圖為圖1所示。
  9. 如請求項4所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的差示掃描量熱法分析譜圖在162.45±2℃處有特徵峰。
  10. 如請求項4所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的差示掃描量熱法分析譜圖在162.45±1℃處有特徵峰。
  11. 如請求項4所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的差示掃描量熱法分析譜圖為圖2所示。
  12. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的熱重分析譜圖在179.19±5℃和366.44±5℃處有特徵峰。
  13. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的熱重分析譜圖在179.19±2℃和366.44±2℃處有特徵峰。
  14. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的熱重分析譜圖為圖3所示。
  15. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述晶型1的紅外譜圖在以下位置具有特徵峰：3423.90±5cm-1、2956.16±5cm-1、2854.93±5cm-1、1647.45±5cm-1、1565.70±5cm-1、1491.36±5cm-1、1384.83±5cm-1、1365.96±5cm-1、1179.36±5cm-1、1105.37±5cm-1、1013.09±5cm-1、875.53±5cm-1、865.08±5cm-1、177.45±5cm-1、568.10± 5cm-1。
  16. 一種藥物組合物，包含請求項1至15中任一項所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，和藥學上可接受的載體。
  17. 一種如請求項1至15中任一項所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物或請求項16所述的藥物組合物的用途，用於製備預防或治療CDK9相關疾病的藥物。
  18. 如請求項17所述的用途，其中，所述CDK9相關疾病為癌症。
  19. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述第一結晶溶劑為乙腈和水的混合溶劑；其中，乙腈和水的體積比為50：1~1：1。
  20. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述第一結晶溶劑為乙腈和水的混合溶劑；其中，乙腈和水的體積比為50：1~10：1。
  21. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述第一結晶溶劑為乙腈和水的混合溶劑；其中，乙腈和水的體積比為40：1~1：1。
  22. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述第一結晶溶劑為乙腈和水的混合溶劑；其中，乙 腈和水的體積比為40：1~10：1。
  23. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述第一結晶溶劑為乙腈和水的混合溶劑；其中，乙腈和水的體積比為30：1~1：1。
  24. 如請求項1所述的式(I)化合物的藥學上可接受鹽或其多晶型物，其中，所述第一結晶溶劑為乙腈和水的混合溶劑；其中，乙腈和水的體積比為30：1~10：1。
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