TW200418992A - Diagnosis of sepsis or sirs using biomarker profiles - Google Patents

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200418992 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明申請書係訴請2002年11月12日申請之美國先前專 利申請案序號60/425,322及2003年10月17日申請之美國先 前專利申請案序號60/511，644之優先權，該二者均整體併列 為本發明之參考。 本發明係關於診斷或預測個體之敗血症或其進展階段之 方法。本發明亦關於診斷個體之系統性炎症反應之方法。 【先前技術】 疾病狀態之早期偵測典型可提供具有相關之較佳臨床結 果之較有效治療。然而，在許多病例中，疾病徵狀之早期 偵測疋困難的，因此，疾病在可診斷之前會有相當之進展 。系統性發炎病症即為此類疾病之一種。此等病症，特別 是敗血症，典型係因致病微生物與宿主防禦系統間之交互 作用而產生，其可引發出宿主體内過度且受不正常調節之 炎症反應。宿主於系統性炎症反應期間之複雜反應已引起 針對朝向了解疾病發病之努力。（回顧於Healy，Annul Pharmacother· 36: 648-54 (2002))。對於疾病發病之不完整理 解使診斷性標記之發現有其困難度。然而，由於敗血症會 明顯地快速進展成致命病症，故早期且可信賴之診斷是有 必要的。 敗血症會遵循一種已被詳細說明之時間進程，由系統性 炎症反應徵候群（“SIRS，，）-SIRS陰性-敗血症陽性，其可再進 減嚴重敗血症、敗血性休克、多重器官功能障礙 89293 200418992 9且最終會死亡。敗血症可發生於受感染個體，若該個體 隨後發展成SIRS。若有二或多種下列參數存在時則普遍認 定為“SIRS” ：體溫高於38°C或低於36°C ;心跳速率大於每 分鐘90下；呼吸速率大於每分鐘20次；Pco2低於32毫米汞柱 :及白血球數目低於4·〇χ109個/公升或高於12·〇χ109個/公升 $或有多於10%之未成熟帶產生。“敗血症”被普遍界定為具 有經確認感染程序之SIRS。“嚴重敗血症”係關聯於MOD、 高血壓、散佈性血管内凝集（“DIC”）或灌流不足異常，包括 :乳酸中毒、寡尿和心智狀態改變。“敗血性休克”普遍界 定為敗血症誘發之低血壓症，其抗體液復甦且另外存在灌 流不足異常。 很難證明致病微生物之存在對敗血症具有臨床重要性。 肇始微生物之偵測典型係藉由將患者之血液、唾液、尿液 、傷口分泌物、留置導尿管表面等之培養。然而，肇始微 生物可能僅可居住於某些身體之微觀環境中，使得被培養 之特定物質不含污染微生物。偵測可能因感染處之低微生 物數量而更困難。血液中之低量病原菌使得藉由血液培養 診斷敗血症有特定之問題。舉例言之，在一項研究中，經 臨床證實有敗血症之患者中僅有17%可表現出培養陽性。 (Rangel-Frausto等人，JAMA 273 : 117-23 (1995))。診斷可 能因樣本被非致病微生物感染而更困難。例如：在一項研 究中，707位具敗血症之患者中，僅有12.4%之受測微生物 具有臨床重要性。（Weinstein 等人，Clinical Infectious Diseases 24 : 584-602 (1997))。 89293 200418992 敗血症早期診斷之困難度反映於與該疾病有關之高發病 率及叱亡率。敗血症目前是美國之第十大死因且特別盛行 於非心臟病加護病房（ICUs)之住院患者，在此處其為最普遍 之夕匕因。其總體死亡率高達35%，據估計單單美國每年就有 750,000個病例發生。單於美國治療敗血症之年度成本就達 十"ί思美金之規模。 因此，需要有方法可足夠早期診斷出敗血症以便有效干 預或預防。大部分已存在之敗血症計分系統或預測模型僅 可預測已被認為敗血之患者之末期併發症，包括：死亡之 風險率。然而，此等系統及模型無法預測敗血症本身之發 展。特另需要-種可將彼等具黯3之患者分類成會或不會 發展成敗血症之方法。目前，研究者已典型界定一種單一 標記，其相對於正常（即：非敗血）患者對照組而言，可於敗 血患者组表現出不同量。於2003年3月26曰申請之美國專利 弟10/400,275號揭示一種藉由分析各種生物標記之表現量 隨時間之變化而指明早期敗血症之方法，其整體併列為: 文之參考。據此，目前最適於診斷早期敗血症之方法需要 測定多種生物標記並監測此等生物標記段時期内:表 此項技藝中持續迫切需要以具專—性和敏銳性，不 患者監測一段時間之方法來診斷敗血症。理想上，梦：靡 :由-種精確、快速且同時可於單一時間點測定多種生： 標記之技術’藉此’使診斷所需時期内之疾病進展降至最 89293 -9- 200418992 【發明内容】 本發明藉由測定單一時間點採集之生物樣本中之一個以 、生物心兄而可正確、快速並靈敏地預測及診斷敗血症 。其達成係藉由取得個體，特別是具發展敗血症風險、具 有敗血症，或疑具有敗血症之個體之生物標記輪廓，並將 此個體生物標記輪廓與參照生物標記輪廓相比較。參照生 物標記輪廓可得自個體族群（“參照族群”），例如··為敗血症 所苦者或有敗血症發生或於敗血症進展之特定階段者。倘 若個體之生物標記輪廓包含參照族群之適當生物標記輪廓 特徵，則將該個體診斷為如參照族群一般具有較高機會變 成敗血、為敗血症所苦或處於敗血症進展之特定階段。參 知生物標記輪廓亦可得自各種個體族群，包括彼等患有 SIRS或彼等受感染但未患SIRS者。據此，本發明可使臨床 醫師判定，尤其是彼等不具有SIRS、具有SIRS但不太可能 於调查之時間框架内發展敗血症、具有敗血症或有最後會 變成敗血症之風險之患者。 雖然本發明之方法特別可使用以偵測或預測SIRS患者之 敗血症發生，但熟習此項技藝者了解本發明方法可用於任 意患者，包括但不限於：疑具有SIRS或處於敗血症之任意 階段之患者。舉例言之，可從患者取得生物樣本，並將該 樣本内之生物標記輪廓與數種不同之參照生物標記輪磨 (各個輪廓係自例如：彼等具有SIRS或處於敗血症之特定階 段之患者）相比較。若患者之生物標記輪廓符合特定參照族 群之輪廓，則預測該患者落於該參照族群中。根據本發明 89293 -10- 200418992 万法《珍斷結果，可開始進行恰當之治療計畫。 、現有之診斷或預測SiRS、敗血症或敗血症之進展階段之 、&係根據非特定之臨床症兆及徵狀；因此，做成之診斷 ^床應用性常受限制。由於本發明方法可正確偵測敗血 症《各種階段，故其可用以制彼等可以被恰當地進行治 ^研死之個體。因為敗血症可由單—時間點採集之生物樣 中〈生物‘ §己表現“速寫”(snapshGt)加以預測或診斷，故 此治療研究可於嚴重之臨床徵狀發生前開始。由於僅分析 生物樣本之生物標記輪廓，故不需鑑別特定生物標記。然 而’本發明提供鑑別具敗血症或敗血症進展之特定階段之 :徵之特定生物標記之方法。此等生物標記本身為預測或 哆斷敗血症之有用工具。 據此，本發明尤其提供預測個體之敗血症發生之生體外 方法。該方法包括從個體取得單—時間點之生物標記^ 並將個體之生物標記輪廓與參照生物標記輪廓相比較。生 物標記輪廓之比較可預測個體之敗血症發生，其準確率至 少為約6G%。此方法可於敗血症發生前之任意時間重複進 行0 本發明亦提供一種生體外診斷具敗血症或疑具敗血症之 個體之敗血症之方法，其包含從個體採集單一時間點之生 物標記輪輕將該難之生物標記與參照生物標記輪廊相 比較。生物標記輪廓之比較可診斷個體之敗血症，其準確 率至少為約60%。此方法可於任意時間對個體重複進 本發明進一步提供一種生體外測定具有或疑具有敗血症 89293 • 11 - 200418992 <個體之敗血症進展（即：其階段）之方法。此方法包含從個 版採集單一時間點之生物標記輪廓並將該個體之生物標記 人 > 恥生物;^圮輪廓相比較。生物標記輪廓之比較可測定 敗血症之進展，其準確率至少為約6〇%。此方法可於任意時 間對個體重複進行。 另外，本發明提供一種生體外診斷具有或疑具有sirs之 個體之SIRS之方法。此方法包含從個體採集單一時間點之 生物標記輪廓並將該個體之生物標記與參照生物標記輪廓 相比較。生物標記輪廓之比較可診斷個體之SIRS，其準確 率至少為約60%。此方法可於任意時間對個體重複進行。 於另一具體實施例中，本發明尤其提供一種生體外測定 個體之敗血症狀態或診斷其聰之方法，其包含應用一種 判定原則。該判定原則包含比較⑴一種從單一時間點採集 之個to生物樣本產生之生物標記輪廓和⑴）參照族群產生 之生物標記輪廓。應用該判定原則測定個體之敗血症狀態 或診斷其sms。該方法可於一或多次分開之單一時間點對 個體重複進行。 本發明進-步提供，尤其是—種生體外測定個體之敗血 ^狀態或㈣其刪之方法，其包諸個體之生物樣本取 仵生物標記輪廓並將個體之生物標記輪廓與參照生物標記 輪，相比較。單次之此等比較可將個體歸類為參照鱗之 成員。生物標記輪靡之比較可測定個體之敗血症狀態或診 斷其SIRS。 乂 本發明尤其提供-種生體外測定個體之敗血症狀態或診 89293 -12 - 200418992 斷其SIRS之方法，其包含從個體之生物樣本取得生物標記 輪廓並將個體之生物標記輪廓與從參照族群之生物樣本取 得之參照生物標記輪廓相比較。該參照族群可選自由正常 參照族群、SIRS-陽性參照族群、受感染/SIRS-陰性參照族 群、敗血症-陽性參照族群、處於敗血症進展之特定階段之 參照族群、藉由傳統技術於約0-36小時後確認具有敗血症 之SIRS-陽性參照族群、藉由傳統技術於約36-60時後確認具 有敗血症之SIRS-陽性參照族群和藉由傳統技術於約60-84 小時後確認具有敗血症之SIRS-陽性參照族群所組成之群 組。單次之此等比較可將個體歸類為參照族群之成員且該 比較可測定個體之敗血症狀態或診斷其SIRS。 於另一具體實施例中，本發明尤其提供一種生體外測定 個體之敗血症狀態或診斷其SIRS之方法。該方法包含比較 從個體之生物樣本取得之生物標記輪廓與從參照族群之生 物樣本取得之生物標記輪廓間之至少一種可測得之生物標 記特徵。根據此等比較，可將個體歸類為屬於或不屬於參 照族群。因此，此等比較可測定個體之敗血症狀態或診斷 其SIRS。於一具體實施例中，生物標記係選自顯示於表 15-23及26-50之群組中之任一生物標記。 於進一步具體實施例中，本發明尤其提供一種生體外測 定個體之敗血症狀態或診斷其SIRS之方法，其包含從個體 取得之生物樣本產生之輪廓中之一組生物標記，篩選至少 兩種特性。將此等特性與從參照族群取得之生物樣本產生 之輪廓中之同一組生物標記相比較。單次之此等比較可將 89293 -13- 200418992 個體歸類為參照族群之成員9其準確率至少為約6〇%，且此 等比較可測定個體之敗血症狀態或診斷其SIRS。 本發明亦尤其提供一種生體外測定個體之敗血症狀態或 診斷其SIRS之方法，其包含測定個體之生物樣本内所包含 之至少兩種生物標記之含量變化並將個體樣本内之此等生 物心记έ量與彳疋參照族群取得之生物樣本内之此等生物標 記之含量相比較。此等比較可將個體歸類為參照族群之成 員，且此等比較可測定個體之敗血症狀態或診斷其sirs。 於另一具體實施例中，本發明尤其提供一種生體外測定 個體之敗血症狀態，其包含測定個體之生物樣本内所包含 惑至少一、二、三、四、五、十或二十種生物標記之含量 變化並與從患有敗血症及未患敗血症之後參照族群取得之 生物樣本内之至少一…三、四、五、十或二十種生物 標記之含量變化相比較。該生物標記係選自由表15_23及 26 50中所列之任一生物標記所組成之群組。或者，至少一 、一、三、四、五、十或二十種生物標記之含量可與至少 一、二、三、四、五、十或二十種生物標記之含量相比 較。 本發明尤其進一步提供一種生體外分離生物標記之方法 ’該生物標記存在#生物樣本中則診斷或預測為敗血病。 此方法包含自個體族群取得參照生物標記輪廓並確認可預 測或診斷敗血症或敗血症發展之—階段之參照生物標記之 特性。此方法進一步包含確認出—種與該特性相符合之生 89293 -14- 200418992 物標記並再分離該生物標記。 於另一具體實施例中，本發明提供一種套組，其包含至 少―、二、三、四、五、十種或所有選自由表15-23及26-50 中所列之任一項所組成之群組之生物標記。 於另一具體實施例中，參照生物標記輪廓可包含至少雨 種，較佳為五、十或二十或更多種特性之組合，其中該特 性係為樣本中之生物標記之特徵。於此具體實施例中，該 特性可用以預測個體是否被包含於特定之參照族群中。該 等特性在預測包含性上之相對貢獻之測定可藉由數據分析 演算法，其可預測分類包含性，且準確率至少為約6〇%、至 少為約70%、至少為約8〇0/。、至少為約9〇%、約、約％% 、約97%、約燃、約99%或約！ GG%。於—具體實施例中， 以傳統技術測定時，特性之组合可於敗血症實際發生之約 24小時、約48小時或約72小時之前預測敗血症之^生。 於再另一具體實施例中，參照生物標記輪廓可包含至少 兩種特性’其中土少一種係為相對應生物標記之特徵且該 特性可預測個體於敗血症_陽性或SIRS_陽性内之包含性。 於此具體實施例中，該特性具有―卿值，其係由非參數

Test)所取得，其可直接相關於信賴關，該特性可藉此將 個體歸類為是否屬於敗血症陽性或SIRS_陽性族群。於另 -具體實施例中，該特性可將個體歸類為是否屬於敗血症· 陽性或SIRS-陽性族群，且其準確率至少約6()%、約腦、 約祕或約娜。於再另—具體實施例中，該特性可於以傳 89293 -15- 200418992 統技術測定時，在敗血症實際發生之約24小時、約48小時 或約72小時之前預測敗血症之發生。 於再另一具體實施例中，本發明提供—種顆粒陣列，其 中之捕捉分子連接於可專一性結合至少一、-一 / — % 二、四、 五、十種或所有選自由表15_23及26_5〇中所列之任一項所组 成之群組之生物標記之顆粒表面。 【貫施方式】 本發明使用於單-時間點（“速窝”)或於疾病進展時程間 從個體取得之-或多個生物樣本而快$、靈敏並準確診斷 或預測敗血症。其有助於在臨床徵狀發生之前先診斷或預 測敗血症，藉此可採去更有效之治療性干預。 “系統性炎症反應徵候群，，或“SIRS”係指對於各種嚴重之 臨床侵害之反應，其可藉由在24小時期間出現下列二或多 種症狀加以證實： •嬰兒體溫高於38艽（1〇〇.4卞）或低於36。(：（96.8卞）； •心跳速率（HR)大於90次/分鐘； 呼吸速率（RR)大於20次/分鐘，或pc〇2低於32毫米汞柱 或需要機械呼吸；及 •白血球數目（WBC)高於12·〇χ1〇9個/公升或低於4〇χ1〇9 個/公升或有多於10%之未成熟型式（帶狀）。 此等SIRS之徵狀與SIRS之定義一致，其可由將來之改良 性走義再予以修正或取代。本定義可用以釐清現行之臨床 實施且不代表本發明之臨床面向。 如上述定義，患有具臨床表現之SIRS則歸類為SIRS，但 89293 -16- 200418992 非臨床視為敗血症。有發展敗血症風險之個體包括肌中之 患者及彼等另外患有生理性外傷，例如：灼傷或其他創傷 者。“敗血症”係㈣經確認之感染進程有關之sirs_陽性病 症。SIRS患者從疑SIRS_陽性病症提升為臨床疑敗血症係為 感染進程之結果。本文所使用之“敗血症，，包括敗血症之所 有階段’包括但不限於敗血症之發生、嚴重敗血症及與敗 血症末期有關之MOD。 敗血症之發生係指敗血症之早期，即··臨床證據足以 支持臨床疑敗血症之前。因本發明之方法可於使用傳統技 術疑為敗血症之前偵測敗血症，倘若敗血症之證據較具臨 床明顯性，患者於敗血症早期之疾病狀態僅能回顧性地確 認。患者演變成敗血症之確切機制並非本發明之重點面向 。本發明之方法可無涉於感染程序之起源偵測生物標記輪 廓之變化。與敗血症如何產生無關，本發明之方法可測定 具有或疑具有敗血症或SIRS之患者之狀態，並以之前使用 之準則將之歸類。 嚴重敗血症”係指與器官功能障礙、低灌流異常或敗血 症身發性低血壓症有關之敗血症。低灌流異常包括，但不 限於：乳酸中毒、寡尿或急性心智狀態變化。“敗血性休 克係指敗血症誘發性低血壓症，其無法反應產生足夠之靜 脈輻液並有周圍低血壓之證據。“轉化患者，，係指SIRS_陽性 之患者於該患者受監測期間，典型係於ICU停留期間進展成 臨床疑敗血症。“非轉化患者，，係指SIRS-陽性之患者，於該患 者雙監測期間，典型係於ICU停留期間無進展成臨床疑敗血 89293 •17- 200418992 症。 生物標記”實際上可為任意生物性化合物，例如：蛋白 二及其片段、胜肽、蛋白多醣、醣蛋白、脂蛋白、碳水化 合物、脂肪、核酸、有機或無機化學物質、天然聚合物和 :在万;生物樣本中之小分子，且其可從該生物樣本中分離 :測定。再者’生物標記可為完整之分子或可為其具有部 刀功能或可被例如：抗體或其它專一性結合之蛋白質辨識 <邵分。倘若生物標記可測得之性質與患者之已知狀態， 例如：敗血症之特定階段有關聯，則視該生物標記為有用 者。此等可測得之性質可包括例如：生物標記於個體之生 物樣本發明之存在、不存在或濃度及/或其為生物標記輪廓 (一邵分。料生物標記之可測得之㈣於本文中定義為 “特性”。特性亦可為二或多種可測得之性質之比例，該生 物標記之本體可為例如：已知或未知。“生物標記輪廓，，包 含至少兩種此等特性，其中該特性可對應於相同或不同類 之生物標記’例如：核酸及碳水化合物。生物標記輪靡亦 可包含至少三、四、五、十、二十、三十或更多種特性。 方、”Bs只施例中，生物標記輪廓包含數百種或甚至數千 種之特性。於另-具體實施例中，生物標記輪廓包含至少 一種内標準之至少一種可測得性質。 “表型改變”係為—種與患者之已知狀態有關之可測得之 參數改變。例如··表型改變可包括體液中之生物標記之增 加或減少，其中該改變係與敗血症或敗血症之發生有關。 表型改變可進一步包括已知狀態之患者之可測得性質之改 89293 18 200418992 變，其並非生物標記之可測得性質之改變。舉例言之，表 型之改變可包括可測得之體溫、呼吸速率、脈搏、血壓或 其他生理參數之改變。此等改變之測定可藉由臨床觀察及 使用熟習此項技藝者所熟知之傳統技術測定之。本文所使 用之“傳統技術”係為彼等非根據本發明取得生物標記輪廓 而根據表型改變將個體歸類之技術。 “判定原則”係為用以將患者分類之方法。此原則可採用 此項技藝中已知之一或多種輪廓，如Hastie等人示例於“The Elements of Statistical Learning’’，Springer-Verlag (Springer， 紐約（2001))中者，其整體併列為本文之參考。樣本中之複 雜分子混合物内之生物標記分析會產生數據組之特性。判 定原則可用以對照數據組之特性以尤其是預測敗血症之發 生，以測定敗血症之進展，以診斷敗血症或診斷SIRS。 判定原則之應用並不需完美分類。於一具體實施例中， 分類確定性至少為約90%，或甚至更高。於另一具體實施例 中，該確定性為至少約80%、至少約70%或至少約60%。可 用之確定性程度視本發明之特定方法而有所不同。“確定 性”係定義為被正確分類之個體總數除以被分類之個體總 數。本文所使用之“確定性”意指“準確性”。分類亦可以“靈 敏度”為其特徵。分類之“靈敏度”係指被正確鑑別出具有敗 血症之敗血症患者百分比。此項技藝中定義之“靈敏度”係 為真陽性數目除以真陽性及假陰性之和。反之，方法之“專 一性”係定義為被正確鑑別出不具有敗血症之患者百分比 。即：“專一性”係關於真陰性數目除以真陰性及假陽性之 89293 -19- 200418992 和。於一具體實施例中，靈敏度及/或專一性係為至少9〇% 、至少80%、至少70%或至少60%。使個體之分類具有適當 確定性所使用之特性數目典型為約四個。然而，視所欲之 確定性程度可將特性之數目增加或減少，但於所有案例中 均至少為一個。於一具體實施例中，用於個體分類之特性 數目係最適於使個體之分類具高確定性者。 患者之敗血症或SIRS之“狀態判定，，意指將患者之生物標 記輪廓分類以（1)偵測患者之敗血症或SIRS之存在，（2)預測 患者之敗血症或SIRS之發生，或（3)測定患者之敗血症進展 。“診斷”敗血症或SIRS意指確定或偵測患者之敗血症或 SIRS。因為本發明可於明顯可觀察到之臨床證據之前具較 南靈敏度地偵測敗血症，故敗血症之確定或偵測包括偵測 敗血症之發生，如上述定義。“預測敗血症之發生，，意指對 將患者之生物標記應於來自從SIRS之特定階段進展至敗血 症或從被感狀態進展至敗血症（即：從感染進展至具SIRS之 感染）之患者加以分類。敗血症或SIRSi “偵測進展”或“測 疋進展’’意指將已診斷出具有敗血症或81118之患者之生物 標？己輪廓分類。譬如說，將已診斷出具有敗血症之患者之 生物標記輪廓分類意指偵測或測定患者之從敗血症至嚴重 敗血症或至具有mod之敗血症之進展。 根據本發明’敗血症之診斷或預測可藉由從個體取得之 樣本中取得生物標記輪廓。本文所使用之“取得，，意指“變成 擁有”。本發明係特別可用以預測及診斷已被感染，或甚至 有敗血症但尚未被診斷出有敗血症、疑具有敗血症或具發 89293 -20- 200418992 展敗血症風險之個體之敗血症。以、 用以偵測及診斷個體之SIRS ，本發明可 之臨床疑似病症。本發明亦可用二== 種階段，例如：咸染、如苗 各 敗血症休克及同二囷症、敗血症、嚴重敗血症、 將：個體取得之生物標記輪靡，即：測拭生物標記輪廓 生物標記輪廓相比較。族群可例如包含三、四、 五、十、十五、二十、三+、本 一十四十、五十或更多個個體。 再者，以本發明之方法比較之參照生物標記輪廓及個體（測 試生物標記輪廓可由相同個體產生，但測試與參照輪廊 係由不同時間點採得之生物樣本所攙產生並將之互相比較 例如·可於研究時期一開始時從個體取得樣本。將從該 樣本仔到又參照生物標記輪廓再與從同樣個體之隨後樣本 中產生之生物標記輪廓比較。此等比可用以，例如··藉由 於一段時期内之重複分類來測定個體之敗血症狀態。 參照族群可選自不具有SIRS(“SIRS-陰性，，）之個體、不具 有SIRS但受感染之個體、有81尺3但無敗血症存在 性）之個體、有敗血症發生之個體、敗血症-陽性並處於敗 血症進展之某一階段之個體或有使敗血症發展風險提高之 生理性外傷之個體。再者，參照族群可為SIRS-陽性且隨後 以傳統技術診斷出具敗血症者。例如：用以產生參照輪廓 之SIRS-陽性個體可於採集其生物樣本產生參照輪廓之約 24 48 72、96或更多小時後被診斷為具有敗血症。於一 具體實施例中，SIRS-陽性個體之族群係於採得生物樣本發 89293 -21 - 200418992 明之後約〇_36小時、約36_60時、約6n “ t t 、、々6〇·84小時或約84-108小 時使用傳統技術診斷出具有敗血症。 、 保右生物標記輪廓指 出敗血症或其進展之某一階段，目丨丨龄—$ 、 自仅則^床醫師可於敗血症之 臨床徵狀證貫之前開始治療。血刑 、 八土又治燎涉及檢查患者以 測定感染源…但確認其來源，臨床醫師典型會從感染處 取得培養物，較佳於㈣恰當之經錄㈣生物療法之前 且或許會衡量額外之輔助性治療，例 、.〃 你例如·排膿或移除受感 染之導管。敗血症之療法回顧於前述（Heaiy)。 本發明之方法包含比較個體之生物標記輪廓與參照生物 標記輪廓。本文所使用之之“比較”包括以任何方式辨明個 體與參照生物標記輪廓間之至少—種差異。因&，比較可 包括色析圖譜之視覺觀察且比較可包括與輪廓之特性有關 之數值之算數性或統計性比較。此等統計性比較包括但不 限於應用判定原則。倘若生物標記輪廓包含至少_個_ 準，則生物標記輪廓中之差異比較亦可包括此等内標準: 特性，使得生物標記之特性可與内標準之特性相關聯：該 比較可尤其制得到敗血症或_之機會；或者該比較可 確認敗血症或SIRS是否存在；或者該比較可指出個體可能 所處之敗血症階段。 本發明因此可排除於-段監測期間内之時間密集性分析 之必要及鑑別各個生物標記之必要。雖然本發明不需—段 監測期間來將個體分類，咸知其可於一段時間内重複將個 體分類，^重複速寫直至該個體不再具有罹病風險為止 。或者’ Μ固體取得之生物#記輪廓可與一或多個於不同 89293 -22- 200418992 時間點自相同個體取得之生物標記輪廓相比較。熟習此項 技藝者明白在重複分類過程中之各次比較均可將個體分類 成參照族群之成員。 具有對應於敗血症進展之各階段，自無敗血症至m〇d， 之各種生理狀況之個體可藉由生物標記輪廓特徵加以區分 。本文所使用之“個體”係為動物，較佳為哺乳動物，更佳 為人類或非人類之靈長類動物。本文中之“個體，，、“對象，， 及“患者，，可交換使用。個體可為正常、疑具有§11^或敗血 症、具SIRS或敗血症發展之風險或確認具有SIRS*敗血症 者。雖然有許多已知之生物標記與敗血症之進展有關，但 並非所有此等標記均於初期、臨床前階段出現。事實上， 敗血症早自階段之生物標記特徵之子集僅可藉由從最後證 明有敗血症之臨床徵狀之個體取得之樣本之㈣性分析加

現卻減少，則其特徵為生物標記輪廓之改變。 記輪廓之改變可反映出參照族群對於例如：咸 之生理反應之進展確立。 •改變。此等生物標 如··感染及/或發炎 热白此項技藝者明瞭參照族群之 89293 «23- 200418992 生物標記輪廓亦可於生理反應消退時改變。如上述者，本 發明之優點之一係為其可自單一樣本取得之生物標記輪廓 將個體分類為特定族群之成員。然而，熟習此項技蓺者明 瞭測定一特定生理反應是否已確立或消退可有助於隨後之 個體分類。因此，本發明提供多種生物標記，其可因對於 敗血症或SIRS之生理反應之確立或消退而表現量升高或降 低。例如，研究者可選擇一種當對於敗血症之生理反應確 立時強度會改變之個體之生物標記輪廓之特性。比較從隨 後採集之個體生物樣本所取得之輪廓之相同特性，可確2 該個體是否朝更嚴重之敗血症進展或朝正常化進展。二 本發明不需生物標記之分子本體。實際上，本發明並不 於已被確w之生物標記（參見例如：年3月％日申請 之美國專利申請案序號10/彻，275)。因此，預料會有為^ 個寧族群，特別是敗血症之早期階段中之一族群之特徵之 新頭生物標i己被鑑別出來。於本發明之—具體實施例中， j標記被鑑別且分離出來。其可應用以生產一種專一性 抗體，其可於各種診斷分析中輔助生物標記偵測。 任音任何免疫分析可使用可結合於生物標記分子之 抗體片段或衍生物（例如或咖片段） 係為-種蛋白質已热知者。倘若生物標記 選殖其編碼基因/、，工 藉由已完整建立之技術 其用鳴，例如:被送入— 89293 木集其生物樣本’例如：血液。將血液内之 -24- 200418992 複雜蛋白質混合物及其他分子解析成生物標記輪廓。其達 成可藉由使用具區別此等分子之一些物理或化學特性之再 現性之任何技術或技術之組合。於一具體實施例中，=分 :係固定於一種基質上並再藉由雷射脫附/游離飛行::； 質譖法將之分離並區別。藉由可反映各分子或其片段之所 碕比之特徵脫附輪廓產生光譜。於另一具體實施例中，>生 物標記係選自從細胞萃取物取得之各種mRNA種系，且其衿 廓之取得係藉由將個體之mRNA種系雜交至〇〇1^八陣列上二 eDNA之診斷用途以為此項技藝所熟知（參見例如：等人 ，Oncogene 21 ·· 4855-4862 (2()()2))。於再另—具體實施例中 ，輪廓之取得可藉由使用蛋白質和核酸分離方法之組合。 性結合於至少二 本發明可用以測定個體之敗血症狀態或診斷81汉8之套組 。孩套組包含至少一種生物標記。可用於本發明之特定生 物標記於本文中提出。該套組之生物標記可用以根據本發 月產生生物標記輪廓。該套組之化合物種類可包括，传 限於：蛋白質及其片段、胜肽、多肤、蛋白多醋、醋蛋: 二脂蛋白、碳水化合物、脂肪、核酸、有機和無機化學物 貝，和天然及合成聚合物。生物標記可為陣列之一部分， 或生物標記可分開及/或個別包裝。套組亦可包含至少一種 可用以產生本發明之生物標記輪廓之内標準。同樣地，内 標準可為上述任何種類之化合物。本發明之套組亦可包本 可用將内含於產生生物標記輪廓之生物樣本中之生物標記 進行可偵測性標示之試劑。為此，該套組可包含一組可專 四、五、十 二 十或更多種列於 89293 -25- 200418992 下列任-表中之生物標記㈣之抗體或其功能性片段。抗 體本身可經可侧性標示。該套組亦可包含—種特定之生 物標記結合成份，例如：適合體（apta叫。倘若生物標記 包含-種核酸，則該套組可提供—種可與生物標記或生物 標記之互補股形成雙股之寡核苷酸探針。該可偵測性標示 可經可偵測性標示。 本發明之套組亦可包括醫藥賦形劑，稀釋劑及/或佐劑， 倘若該生物標記係用以產生一種抗體。醫藥佐劑之實例包 括，但不限於：防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑。可加 入各種抗細菌及抗真菌劑，例如：巴拉本（paraben)、氯化 丁醇、酚、己二烯酸和同類者以確實避免微生物之作用。 其亦可包含等張劑，例如：糖、氯化鈉和同類者。可藉由 加入可延遲吸收之試劑，例如：單硬脂破鋁和明膠以延長 可注射醫藥型式之吸收。 生物標記輪廊之產峰 根據一具體實施例，本發明之方法包含從個體採集之生 物樣本取得生物標記輪廓。該生物樣本可為血液、血漿、 血/目、唾液、痰、尿液、腦脊髓液、細胞、細胞萃取物、 組織樣本、組織切片、糞便樣本及同類者。參照生物標記 輪廓可取得自，例如：選自由SIRS-陰性個體、SIRS_陽性 個體、有敗血症發生之個體及已具敗血症之個體所組成之 群組之個體族群。來自已具敗血症之個體之參照生物標記 輪廓可取得自敗血症進展之任一階段，例如：感染、細菌 血症、嚴重敗血症、敗血性休克或MOD。 89293 -26- 200418992 於一具體實施例中9可使用一種分離方法以產生生物標 記輪靡，使得樣本中僅有-子集之生物標記可被分析。舉 例§ 樣本中被分析之生物標記可由來自細胞萃取物之 mRNA種系所組成，其已.經區分以只取得樣本中之核酸生物 標記，或者生物標記可由樣本中之所有蛋白質成份所組成 ，其已藉由層析技術加以區分。或者，生物標記輪廓可不 使用分離方法產生。舉例言之，可測定生物樣本中可與樣 本内之生物標§己开;？成特定複合物之經標示化合物其中該 特足複θ物之‘示強度係為生物標記之可測得特徵。適於 形成此等特定複合物之化合物係為經標示之抗體。於一具 體實施例中，利用以可增幅之核酸作為標示之抗體來測定 生物私圮。於另一具體實施例中，當各連接於核酸標示之 :股之兩種抗體，與生物標記交互作用，使得兩條核酸股 形成一種可增幅之核酸時，該核酸標示變成具有可增幅性。 於另一具體實施例中，生物標記輪廓衍生自一種核酸分 析，例如一種陣列，其中該生物標記係為核酸或其互補體 :例如：該生物標記可為核糖核酸。生物標記輪廓之取得 亦可使用選自由核磁共振、核酸陣列、點墨潰咖bi⑽㈣ 、，沙漏墨潰（slot blotting)、逆轉錄増幅及北方分析所組成之 群組之方法。於另一具體實施例中，生物標記輪廓可以免 疫陡偵测，其係藉由使抗體或其功能性片段專一性與生物 枯记反應。抗體之功能性片段係為抗體之一部分，其保留 至少一些結合於完整抗體可結合之抗原之能力。該片段可 包括但不限於：scFv片段、Fab片段及F(ab)2片段，其可經 89293 -27- 200418992 重組性生產或酵素性生產。於另一具體實施例中，專一性 結合於非抗體之其他分子，例如：適合體者，可用以結合 生物標記。於再另一具體實施例中，生物標記輪廓可包含 一種傳染劑或其成份之可測定性質。於再另一具體實施例 中，生物標記輪廓可包含小分子，包括蛋白質或核酸之片 段，或可包括代謝物之可測定性質。

生物標記輪廓之產生可利用一或多種分離方法。例如： 適合之分離法可包括質譜法，例如：電噴灑游離質譜法 (ESI-MS)、ESI-MS/MS、ESI-MS/(MS)n(n為大於零之整數） 、基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜法（MALDI-TOF-MS) 、表面增強雷射脫附/游離飛行時間質譜法（SELDI-TOF-MS) 、矽氧烷上脫附/游離法（DIOS)、二次離子質譜法（SIMS)、 四極柱飛行時間法（Q-TOF)、大氣壓化學游離質譜法 (APCI-MS)、APCI-MS/MS、APCI-(MS)n、大氣壓光游離質 譜法（APPI-MS)、APPI-MS/MS 及 APPI-(MS)n。其他質譜法 可尤其包括：四極柱、傅立葉轉換質譜法（FTMS)和電子陷 阱法。其他適合之分離法可包括化學萃取分配、管柱層析 、離子交換層析、疏水性（逆相）液態層析、電聚焦、一維聚 丙烯醯胺膠體電泳（PAGE)、二維聚丙烯醯胺膠體電泳 (2D-PAGE)或其它層析法，例如：薄層、氣相或液相層析， 或其任意組合。於一具體實施例中，生物樣品可於分離方 法施行之前先經區分。 生物標記輪廓之產生亦可藉由不需將生物標記本身物理 性分離之方法。例如：核磁共振（NMR)光譜儀可用以解折 89293 -28- 200418992 複雜分子混合物中之生物標記輪廓。使用NMR將腫瘤分類 之類似用法揭示於例如：Hagberg，NMR Biomed. 11: 148-56 (1998)。其他步騾，包括：核酸增幅技術，可用以不需將個 別生物標記分物理性分離而產生生物標記輪廓（參見例如 :Stordeur等人 5 J· Immunol· Methods 259: 55-64 (2002)和 Tan 等人，Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 99: 11387-11392 (2002))。

於一具體實施例中，使用雷射脫附/游離飛行時間質譜法 產生生物標記輪廓，其中之生物標記為已藉由隨附之雷射 光從固定單體上游離並蒸發之蛋白質或蛋白質片段。再將 各個蛋白質藉由根據質荷比（“m/z”）之飛行時間特徵產生輪 廓。各種雷射脫附/游離技術係為此項技藝中已知者。（參見 例如：Guttman等人，Anal· Chem. 73: 1252-62 (2001)和 Wei 等人，Nature 399: 243-46 (1999)) °

雷射脫附/游離飛行時間質譜法可於相對較短時間内產 生大量資料。將生物樣本加至數種可結合樣本中所有生物 標記或其子集之單體之一内。將經或不經事先純化或區分 之細胞溶解物或樣本直接以小至0.5微升之體積直接加至其 表面上。溶解液或樣本可於施加於單體表面之前先經濃縮 或稀釋。再使用雷射脫附/游離於短短3小時内產生樣本之 質譜。 於另一具體實施例中，分析個體之細胞萃取物之總mRN A ，並使用自生物樣本中取得之各種mRNA種系作為生物標記 。輪廓之取得可藉由例如使用此技藝中已知之標準方法將 89293 -29- 200418992 此等mRNA與探針陣列（其可包含寡核甘酸或cDNA)雜交。 或者，可將該mRNA進行膠體電泳或墨潰法，例如：點墨潰 、沙漏墨潰或北方分析9其均為此項技藝中已知者。（參見 例如：Sambrook 等人，於 “Molecular Cloning，第三版” Cold

Spring Harbor Laboratory Press，冷泉灣，紐約（2001))。mRNA 輪廓之取得亦可藉由逆轉錄，再將所得之cDNA加以增幅或 刪除’例如：前述Stordeur等人揭示者。於另一具體實施例 中，輪廓之取得可藉由使用方法之組合，例如：核酸陣列 合併質譜儀。 i料分折飧糞法之#用 於一具體實施例中，個體之生物標記輪廓與參照生物標 記輪廓之比較包含施用一種判定原則。該判定原則可包含 一種資料分析演算法，例如：電腦模組樣式辨認演算法。 其他適合之演算法包括但不限於：羅吉斯迴歸或可測定特 f生值之刀佈差異性之非參數迴歸法（例如：魏可遜符號等級 檢定）。該判定原則可立基於一、二、二、 一 以、五、十、- 十或更多種特性。於一具體實施例中，判定原則係立基: 數百或更多種特性。狀原則之施用可包括使用分類樹衍 算法。例如：參照生物標記輪廓可包含至少三種特性，其 中孩特性為分類樹衍算法中之預測器。資料分析演算法可 預測族群（或種類）中之成員，其準確度為+ 約70%、至少約80%及至少約9〇%。 夕 89293 適當之演算法為此項技藝中已知 當中有一些回顧於前 - 30 - 200418992 述之Hastie等人中。此等演算法可將生物物質，例如血液樣 本之複雜光譜分類，以將個體區別為正常或具有特定疾病 狀態之特徵之生物標記表現量。雖然此等演算法可用以提 高施用判定原則之速度及效率並避免研究者之偏見，但一 般熟習此項技藝者可瞭解本發明之方法並不需電腦基礎性 演算法。 演算法可應用於生物標記輪廓之比較，不論已何種方法 產生生物標記輪廓。例如：適當之演算法可應用於使用氣 相層析產生之生物標記輪廓，如討論於Harper，“Pyrolysis and GC in Polymer Analysis，’’ Dekker，New York (1985)中者 。再者，Wagner等人，Anal· Chem· 74: 1824_35 (2002)揭示 一種演算法，其可根據由靜態飛行時間二次離子質譜 (TOF-SIMS)所得之光譜改善將個體分類之能力。此外， Bright等人，J· Microbiol. Methods 48: 127-38 (2002)揭示一 種藉由MALDI-TOF-MS光譜之分析區別細菌菌株之方法， 其具有高準確率（79_89%正確分類率）。0&111^6，卩^361^1^1· Anal, Chem· 366: 701-11 (2000)討論使用 MALDI-TOF-MS和 液相層析電噴灑游離質譜法（LC/ESI-MS)於複雜之生物樣 本中將生物標記輪廓分類。 生物標記 本發明之方法之實施可藉由產生一種診斷或預測敗血症 或SIRS之生物標記輪廓。因為生物標記輪廓即足以實施本 發明，故不需知道或進一步鑑別出構成該輪廓之生物標記。 -31 - 89293 200418992 可用以產生本發明之生物標記輪廓之生物標記可包括彼 等對於因感染而反應之免疫系統狀態具資訊性者；然而， 此等生物標記並非具有相等之資訊性。此等生物標記可包 括荷爾蒙、自體抗體、可溶性及不溶性受體、生長因子、 轉錄因子、細胞表面標記和來自宿主本身或致病原本身之 可溶性標記，例如：殼蛋白、脂聚醣（内毒素）、脂壁酸等。 其他標示包括但不限於：細胞表面蛋白質，例如·· CD64蛋 白質；CDllb蛋白質；第二類HLA分子，包括：HLA-DR蛋 白質及HLA-DQ蛋白質；CD54蛋白質：CD71蛋白質；CD86 蛋白質；表面結合性腫瘤壞死因子受體（TNF-R);模式識別 受體，例如：類鐸受體；可溶性標記，例如：間白素IL-1 、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13及 IL-18 ;甲種腫瘤壞死因子（TNF-α);新喋呤、C-反應蛋白 (CRP)、降鈣素原（PCT)、6-酮Fhx ;血栓素B2 ;白三烯B4 、C3、C4、C5、D4和E4;干擾素γ(ΙΡΝγ)、干擾素a/p(IFN α/β) ;淋巴毒素a(LTa):補體成份（C，）；血小板活化因子（PAF); 緩動素·，一氧化氮（NO);粒細胞巨噬細胞集落刺激因子 (GM-CSF);巨噬細胞抑制因子（MIF);間白素-1受體拮抗劑 (IL-lra);可溶性腫瘤壞死因子受體（sTNFr);可溶性間白素 受體sIL-li*和sIL-2r ;轉形生長因子p(TGFp);前列腺素 E2(PGE2);粒細胞集落刺激因子（G-CSF);和其他炎症調節 劑。（回顧於 Oberholzer等人，Shock 16:83-96 (2001)和 Vincent 等人於 Carlet 等人編著之“The Sepsis Text” 中（Kluwer -32- 89293 200418992

Academic Publishers，2002)。普遍且臨床上與細菌血症有關 的生物標記亦為可用於本發明之候選生物標記，該等生物 標記於生物樣本中普遍且經常出現。生物標記可包括低分 子量化合物，其可為蛋白質或核酸之片段，或其可包括代 謝物。低分子量化合物，例如：代謝物之存在或濃度可反 映與敗血症及/或SIRS有關之表型改變。特定言之，小分子 生物標記之濃度改變可關聯於對SIRS及/或敗血症反應而 產生之任何生理變化，例如··低溫或高溫，升高之心跳或 呼吸速率、組織缺氧、代謝性酸中毒或MOD所導致之細胞 代謝物改變。生物標記亦可包括編碼蛋白質生物標記之 RNA和DNA分子。 生物標記亦包括至少一種涉及白血球調節例如：嗜中性 白血球活化或單核球去活化之分子。CD64與CD lib之表現 提高被認定為嗜中性白血球及單核球活化記號。（回顧於 Oberholzer等人，前述及Vincent等人，前述。）於彼等生物 標記中，可用於本發明者係為彼等與巨噬細胞溶解產物有 關者，及於細胞激素代謝中改變之標記。（參見Gagnon等人 ，Cell 110: 119-31 (2002); Oberholzer等人，前述及Vincent 等人，前述。） 生物標記亦可包括已知涉及或被發現涉及發炎程序之信 號因子。信號因子可啟動細胞内之活動級聯，包括受體結 合、受體活化、胞内激酶活化、轉錄因子活化、基因轉錄 及/或轉譯量改變，及代謝程序改變等。針對本發明之目的 89293 -33- 200418992 將^號刀子及被此等分子正確活化之程序定義為“涉及敗 血症途徑之生物標記，，。恰當之預測性生物標記可包括涉及 敗血症途徑之生物標記。 據此雖然本發明方法可使用公正之方式鑑別預測性生 物“心但熟習此项技藝者知道與生理反應或各種傳訊途 徑有關之特定生物標記群組可為料之注意料。特定之 案例為自生物樣本取得之生物標記，其連接於可透過與生 物標記直接JL專-性之交互作用而測定各種生物標記含量 之陣列（例如··抗f重陣列或核酸陣列）上。於此例中，陣列成 伤之迖擇可根據可恰當測定個體之敗血症或狀態之特 走途彳工之建議。具有可預測或診斷敗血症或之特性之 特疋生物分子（指示可產生一種其他以相同方式經生理性 凋節之生物分子亦可提供一種預測或診斷特性之預期。然 而’熟習此項技藝者明白該等預期可能因為生物系統之複 雜性而不真實。舉例言之，倘若特定imRNA生物標記含量 為一種預測特性，則另一種生物標記之同樣mRN A表現改變 可能無法測得，倘若其他生物標記之表現係於轉譯後層次 調節。再者，生物標記之mRNA表現量可受多重集合途徑之 影響’其可能涉及或不涉及敗血症之生理反應。 生物標記可自任何生物樣本取得，其可為例如，但不限 於·朵主或患者之血液、血漿、唾液、血清、尿液、腦脊 髓液、痰、糞便、細胞及細胞萃取物，或其它生物液樣本 、組織樣本或組織切片。自個體取得之正確生物樣本可多 89293 -34- 200418992 樣化 施行 但取樣較佳可使侵入性最 少且可藉由傳統技術簡 易 表型改變之測定可藉由任何傳統技術實行。體溫、呼吸 速率:脈搏、血壓或其他生理參數之測定可藉由臨床觀察 及測I。生物標記分子之測定可包括例如：可表示血生# 標記分子之存在、濃度、表現量或其他任何有關者之測定 。生物標記分子之制形式典型係取決於用以從生物樣本 產生此等標記之輪廓之方法。譬如，由扣顧分離之生 物標記可藉由此項技藝中已完整建立之考馬斯藍染色或銀 染色法偵測之。 物標記々合離 預期〈可用生物標記包括尚未經鑑別或關聯於相關生理 狀態之生物標記。於本發明之—方面，可用之生物標記係 經鑑定為來自生物樣本之生物標記輪廓之成份。此等鑑定 可藉由此項技藝中已熟知之步驟實行，包括：免疫分析或 自動化微量定序。 可用之生物標記-旦被鑑別出來，即可藉由許多已被熟 知之步驟將該生物標記分離。據此，本發明提供—種分離 衫斷或預測敗血症之生物標記之方法，其包含從個體族群 取得一種參照生物標記輪廓，鑑別參照生物標記輪廓中可 預測或診斷敗血症或敗血症進展之某一階段之特性，鑑定 出與該特性相關之生物標記，並分離該生物標記。一經分 離，該生物標記即可用以產生可結合該標記之抗體，倘若 89293 -35- 200418992 其種蛋白質，或者可用以發展特定之寡核替酸探針， 媽若其為例如：一種核酸。 熟習此項技藝者明瞭該有用特性可進—步描繪其特徵以 測疋生物標記之分子構造。以此等方式描緣生物分子特徵 《万法為此項技藝中熟知者並包括高解析質譜、遠紅外線 光譜、紫外線光譜及核磁共振法。用以測定核酸生物標記 之核誓酸序列、多肽生物標記之胺基酸序列及碳水化合物 生物標記之组成及序列之方法亦為此項技藝中熟知者。 支登明於SIRS患者之蹲巧 於-具體實施例中’本發明說明之方法係用以篩選特別 具有發展敗血症之風險之SIRS患者。從SIRs_陽性 生物樣本，並將樣本内之生物標記輪廓與得自實際進展： 敗血症之sms·陽性個體之參照輪廓相比較。將患者之生物 標記輪廓對應於進展成敗血症之s聯陽性族群之參照輪 廓分類，診斷紐RS·陽性患者是否同樣進展成敗血症。再 開始治療计畫以阻止或預防敗血症之進展。 於另-具體實施例中，本發明說明之方法係用以確認患 者具有SIRS之臨床疑慮。於此例中，樣本内之生物標記輪 廓係與具有sms或不具有SIRS之個體之參照族群相：較： 將患者之生物標記輪廓對應於其中一族群或另一族群^分 類，可診斷個體為具有SIRS或不具有81118。 施例且不以任 下列貫例係為本發明涵蓋之代表性具體實 89293 36- 何方式限制本發明涵蓋之主題。 复^·丄：使用定量液態層析/電喷灑游離質譜（LC/ESI-MS)鑑 定小分子生物標記 本之拉♦和今竹 建立兩種患者族群之參照生物標記輪廓。第一族群 (“SIRS組”）代表2〇名患者，其發展81118且於“第1天，，進入本 研究’但其停留於醫院期間未進展至敗血症。第二族群 (“敗血症組”）代表20名患者，其同樣發展SIRS且於第1天進 入本研究，但其於進入研究之後至少數天進展至敗血症。 大約每隔24小時從各研究組別採集血液樣本。以傳統技術 測定時’敗血症組之臨床疑為敗血症發·生於“〇時，，。“ _24小 時”及“-48小時”分別代表於敗血症組中被臨床疑為敗血症 發生前之約24小時及約48小時所採之樣本。此即：從敗血 症組取得之樣本包括彼等於進入研究當天（第1天）、臨床疑 為敗血症之前約48小時（-48小時）、臨床疑為敗血症之前約 24小時（-24小時）及臨床疑為敗血症發生當天（〇時）之所採集 之樣本。總共分析16 0個血液樣本：8 0個來自敗血症組之2 〇 名患者及80個來自SIRS組之2〇名患者。 1.2樣本製備 於血漿中，顯著數量之小分子可能結合於蛋白質，其可 能減少藉由模式產生法偵測之小分子數量。據此，將可、妹 合於蛋白質之小分子釋出後，將大部分蛋白質從血漿中去 除。去除蛋白質之適當方法包括但不限於：將血漿以冰冷 89293 -37- 200418992

之甲醇、乙腈（ACN)、丁醇萃取，或以三氯醋酸（TCA)或熱 變性及酸水解。於此實例中，以冰冷甲醇萃取血漿。甲醇 萃取較佳5因其結果可偵測到最高量之小分子。將50微升 之各血漿樣本與100微升冰冷之100%甲醇混合，使甲醇之最 終體積百分率為67%。將該溶液振盪60秒。再將該樣本於 4°C下置放20分鐘，並以12,000 rpm離心10分鐘將蛋白質沉 澱。移去上澄液，乾燥，並再懸浮於50微升之水中。於LC/MS 分析之前，將兩種低分子量分子，績胺氯噠嗪和十八胺， 加至經萃取之血漿樣本中。此等分子可作為將離子強度及 滯留時間正規化之内標準。以MS測定時，磺胺氯噠嗪之m/z 為285·0 Da，且以LC測定時，·於44% ACN時溶離；十八胺 之m/z為270.3 Da且於89% ACN時溶離。 1.3 LC/ESI-MS 分折

將10微升之再懸浮上澄液注入一支2_ lx 100毫米 C18 Waters Symmetry LC管柱（粒子大小=3.5微米，内徑=100 A) 中。再將該管柱於25°C下以300微升/分鐘溶於0.1%甲酸之 ACN以三階段線性梯度溶離。於t=0-0.5分鐘，ACN濃度由 9.75%至 24% ;於t=0.5_20分鐘，ACN濃度由 24%至 90.5% ; 於t=20-27分鐘，ACN濃度由90.5%至92·4%。上述之實驗條 件於本文中稱之為“LC實驗條件”。於LC實驗條件下，磺胺 氯噠嗪於44% ACN時溶離，其滯留時間為6.4分鐘，且十八 胺於89% ACN時溶離，其滯留時間為14.5分鐘。將經LC區 分之樣本再使用串聯於LC管柱之Agilent MSD 1100四極柱 89293 -38- 200418992 質譜儀（LC/ESI-MS)進行ESI-MS。於正離子模式及4000伏特 之毛細電壓下，取得之離子質譜數據之質/荷比（m/z)範圍為 100或150-1000 0&。各樣本之1^化81-]\48分析均進行三次。 各離子之數據以m/z表示，以道耳頓為單位且滯留時間之單 位為分鐘（以“m/z，滯留時間”表示），其中離子之滯留時間 係以線性ACN梯度從逆相管柱中將離子溶離出來所需之時 間。然而，要考量每回合間之滯留時間之輕微變化，故數 據亦可表示成m/z及離子從Ci8管柱中溶離出來時之ACN百 分率，其代表不受實驗變數影響之離子固有特性。滯留時 間和溶離時之ACN百分率之關係可由下列方程式表示： % ACN=28.5t+9.75 若 0<t<0.5 ; % ACN=3.4103(t-0.5)+24 若 0.5<t<20 ;及 % ACN=0.27143(t-20)+90.5 若 20<t<27。 然而，咸知此等參數之值係為近似值且可能在各次實驗 間有輕微變動；但離子可再現性辨認，特別是當樣本製備 時加入一或多種内標準者。於下面顯示之數據中，m/z值之 測定誤差為土0.4 m/z之内，而離子溶離出來時之ACN百分 率之測定誤差為±10%之内。 1.4 數據分析和結旲 從各血漿樣本分析出數百種光譜特性。於各光譜間比對 相似之特性。比對演算法之選擇並非本發明之重點，且熟 習此項技藝者知道可使用各種比對演算法以達此目的。總 共有4930個光譜特性被分析。針對此實例之目的，“特性” -39- 89293 與對應於某一特定離子之“

<波峰可互相替代使用。從五個 不同個體取得之樣本發 1U <代表性波峰顯示於表1。第一欄 以圓括弧分別列出m/z及各離子溶離出來時之剔百分率 。其他欄為來自各患者之相對應離子之正規化強度，其測 定係藉由將強度針對其中之兩種内標準品加以正規化。超 過400個波峰之平均正規化強度高於0.1。 表1 存在於各患者$代表性離子 離子 (m/z, %ACN) 患者1 患者2 患者3 患者4 患者5 (293.2, 26.8) 43.39 42.44 53.81 45.86 23.24 (496.5, 39.0) 37.43 39.88 33.74 36.32 31.81 (520.5, 37.8) 9.067 9.309 7.512 6.086 6.241 (522.5, 37.8) 8.568 8.601 -------- 7.234 5.520 5.228 (524.5, 42.2) 11.60 12.73. 8.941 7.309 6.810 (275.3, 32.0) 6.966 7.000 8.911 5.896 5.590 (544.5, 37.8) 3.545 3.915 3.182 2.365 2.342 (393.3, 26·4) 1.517 2.092 2.418 2.439 2.498 (132.3, 24.3) 2.317 2.417 3.953 4.786 2.982 (437.4, 27.4) 1.769 1.997 2.418 2.706 2.166 (518.5, 39.0) 3.731 3.792 6.758 3.058 2.605 (349.3, 25.6) 1.249 1.663 1.910 1.806 1.660 89293 -40- 200418992

具有可區別sms與敗血症之已知判定原則之各種方法均 可用以鑑別離子。於此實例中，選用之方法為⑴比較兩组 間之離子強度，及⑺使用數據分㈣算法產生分類樹。' _乎均籬子強；t々比_ 平均離子強度之比較可有效地突顯SIRS&敗血症患者間 之個別離子強度差異。從敗血症組與81118組中平均分離出 超過1800種正規化離子強度。於敗血症組與81尺§組中，將 平均正規化強度低於O.i之離子與兩組之輪廓中之正規化強 度高於〇.1之離子分開分析。測定敗血症組與811^組之大約 4〇〇個正規化強度高於〇.!之離子之平均正規化強度比。此等 離子之相對強度比之分佈顯示於圖3中。 利用此方法，從列於表2之23個離子觀察到來自敗血症患 者之樣本中之強度比來自SIRS患者之強度高出至少三倍 (參見圖3,其中離子強度比之自然對數大於約M)且其存在 於至少一半之敗血症患者及通常約三分之一或四分之一之 SIRS患者。於本段中，生物標記之“存在，，意指該生物標記 於特定患者中之平均正規化強度為所有患者平均正規化強 度之至少25%。雖然此等離子，或其子集可用以實施本發明 之方法’但其他離子或其他離子組亦可使用。 89293 •41 - 200418992 表2 含所列離子之患者樣品百分比 離子 # (m/z[Da]， 滯留時間 [分鐘]) 溶離時 之 ％ ACN 離子存在於 敗血症患者 之百分比 離子存在於 SIRS患者之 百分比 1 (520.4,512) 39.75 94 35 2 (490.3,5.12) 39.75 76 35 3 (407.2, 4.72) 38.39 76 25 4 (564.4, 5.28) 40.30 71 35 5 (608.4, 5.39) 40.68 71 30 6 (564.3, 2.14) 29.59 71 25 7 (476.4, 4.96) 39.21 65 30 8 (476.3, 1.86) 28.64 65 35 9 (377.2, 4.61) 38.02 65 15 10 (547.4, 5.28) 40.30 65 20 11 (657-4, 5.53) 41.15 65 30 12 (481.3,4.96) 39.21 59 25 13 (432.2, 4.80) 38.66 59 30 14 (481.2, 1.86) 28.64 59 20 15 (388.3,4.58) 37.91 59 20 16 (363.2, 4.40) 37.30 59 20 17 (261.2, 1.26) 26.59 59 40 89293 -42- 200418992 18 (377.2, 932) 54.08 ---—--- 59 ------- 15 19 (5343, 530) 40.37 --—---—. 59 ---~---- 1——-— 30 20 (446.3, 4·94) 39.14, 59 " ——_ 25 ------ 21 (437·2, L42) 27.13 ------ 53 -~__ ~~~---- 25 22 (4513,494) 39〇14 — 53^ ' —---—- 15 23 (652.5,5.51) 41.08 --—~~.— 53 ~~~------— —20 在大部份敗血症-陽性族群中，所出現之這些生物標記亞 組為三倍高的強度。特定言之，發魂超過—半敗血症-陽性 狹群至少有12個生物標記提高含量’且在85%之敗血症-陽 性族群有至少七個生物標記出現：此說明這些標記的組合 將提供敗血症開始之有用預測。有·關SIRS_陽性族群中提高 含量之所有生物標記列於表3。 .表3 症組與SIRS組之離子強度比 離子 敗血症組 之強度 SIRS 組 之強度 強度比： (敗血症/SIRS) (437.2, 1.42) 4.13 0.77 5.36 (520.4,5.12) 3.65 0.69 5.29 (476.4, 4.96) 3.34 0.78 3.56 (481.3, 4.96) 2.42 0.68 3.56 (564.4, 5.28) 2.39 0.43 5.56 (432.3, 4.80) 2.29 0.59 3.88 89293 -43- 200418992 (4763, L86) 2Λ2 0.52 4.08 (48L25 L86) L88 0.42 4.48 (3883,4.58) L83 0.51 3.59 (608Λ 539) L41 0.24 5。88 (363。2,4。40) 1〇35 0.27 5〇00 (490.3,5.12) 1.27 0.25 5.08 (261.2, 1.26) 1.24 0.24 5.17 (407.2, 4.72) 1.05 0.17 6.18 (377.2, 9.32) 1.04 0.27 3.85 (534.3, 5.30) 0.88 0.16 5.50 (446.3, 4.94) 0.88 0.22 4.00 (547.4, 5.28) 0.86 0.16 5.38 (451.3, 4.94) 0.86 0.17 5.06 (377.2, 4.61) 0.84 0.22 3.82 (564.3, 2.14) 0.62 0.14 4.43 (652.5,5.51) 0.62 0.10 6.20 (657.4, 5.53) 0.39 0.11 3.55 經觀察列於表4之兩種離子於SIRS族群之平均正規化強 度為敗血症族群之3倍以上。（參見圖3，其中離子強度比之 自然對數低於約-1.1)。 89293 -44- 200418992 表4

(205.0,0.01)(205.2,3.27) SIRS組之離子強度

有32種平均正規化強度大於0el且於敗血症組之強度為 SIRS組之3倍以上之離子被鑑別出來。此等離子列於表5a 中。同樣地，有48種平均正規化強度低於〇1且於敗血症組 <強度為SIRS組之3倍以上之離子被鑑別出來。此等離子列 於表5B中。（負滯留時間係反映滯留時間經内標準正規化之 事實）。 89293 45- 200418992

表5A 平均正規化強度>0。1之離子 離子 敗血症組 之強度 SIRS 組 之強度 強度比·· (敗血症/SIRS) Ln (比率） (365.2, 2.69) 1.031828095 0.135995335 7.587231542 2.026467 (305.2, 1.87) 3.070957223 0.481494549 6.377968828 1.85285 (407.2, 4.72) 0.913022768 0.166525859 5.482768698 1.70161 (459.1, 0.83) 0.58484531 0.106723807 5.479989222 1.701103 (652.5, 5.51) 0.528195058 0.102545088 5.150856731 1.639163 (608.4, 5.39) 1.205608851 0.236066662 5.107069514 1.630626 (415.3, 4.80) 2.321268423 0.46651355 4.975779207 1.604582 (319.0, 0.69) 1.034850099 0.209420422 4.941495631 1.597668 (534.3, 5.30) 0.756349296 0.158850924 4.761378001 1.560537 (564.4, 5.28) 2.037002742 0.432651771 4.708180752 1.549302 (437.2, 1.42) 3.536425702 0.770241153 4.591322718 1.524168 (520.4, 5.12) 3.115934457 0.685511116 4.545417838 1.51412 (261.2, 1.26) 1.078475479 0.239640228 4.500394154 1.504165 (363.2, 4.40) 1.159043471 0.265797517 4.360625655 1.472616 (451.3, 4.94) 0.738875795 0.170611107 4.330760214 1.465743 (490.3, 5.12) 1.084054201 0.25339878 4.278056119 1.453499 (409.3, 2.79) 1.172523824 0.281931606 4.158894565 1.425249 (497.3, 4.98) 0.409558491 0.100673382 4.068190437 1.403198 (453.2, 2.97) 0.738638127 0.184100346 4.012149581 1.389327 (481.2, 1.86) 1.609705934 0.418739646 3.844168924 1.346557 (564.3, 2.14) 0.531918507 0.139341563 3.817371482 1.339562 (476.4, 4.96) 2.847539378 0.784495859 3.629769802 1.289169 (446.3, 4.94) 0.752613738 0.216182996 3.481373426 1.247427 (476.3, 1.86) 1.811980008 0.521460142 3.474819762 1.245543 (377.2, 4.61) 0.75347133 0.217838186 3.458857892 1.240938 (344.3, 4.21) 0.560262239 0.164687938 3.401962791 1.224353

89293 -46- 200418992 (377.2, 9.32) 0.902933137 0.267048623 3.381156311 1.218218 (432.3, 4.80) 1.957941965 0.588612075 3.326370706 1.201882 (595.4, 6.36) 0.41462875 0.125522805 3.303214496 1.194896 (358.3, 4.40) 0.351038883 0.106282278 3.302891964 1.194798 (657.4, 5.53) 0.336357992 0.105101129 3.200327108 1.163253 (388.3, 4.58) 1.561368263 0.510848809 3.056419503 1.117244 表5B 平均正規化強度<0·1之離子 離子 敗血症組 之強度 SIRS 組 之強度 強度比。 (敗血症/SIRS) Ln (比率） (282.2, 0.91) 0.16624 0.00024 693.08684 6.54116 (289.2, 6.44) 0.13088 0.00143 91.27187 4.51384 (821.9, 2.49) 0.13670 0.00996 13.72695 2.61936 (385.3, 1.24) 0.32177 0.03201 10.05211 2.30778 (843.9, 2.47) 0.11866 0.01206 9.83497 2.28594 (407.2, 1.17) 0.75611 0.08227 9.19041 2.21816 (350.1, 0.86) 0.10369 0.01174 8.83532 2.17876 (385.3, 4.72) 0.32430 0.03725 8.70689 2.16411 (399.2, 2.99) 0.15303 0.02091 7.31838 1.99039 (152.1, 1.51) 0.28888 0.04167 6.93310 1.93631 (341.0, 0.36) 0.26310 0.03828 6.87289 1.92759 (451.2, 1.42) 0.45398 0.06645 6.83232 1.92166 (231.0, -0.41) 0.19637 0.03362 5.84078 1.76486 (534.2, 2.20) 0.45796 0.08650 5.29427 1.66663 (820.5, 7.02) 0.12838 0.02439 5.26324 1.66075 (578.4, 5.46) 0.45661 0.08861 5.15298 1.63957 (355.1，2.85) 0.16920 0.03334 5.07491 1.62431 (358.0, 2.13) 0.27655 0.05565 4.96946 1.60331 (696.5, 5.65) 0.20458 0.04223 4.84500 1.57795 (622.4, 5.61) 0.20034 0.04179 4.79410 1.56739 (460.3, 4.02) 0.18099 0.03950 4.58160 1.52205 89293 -47- 200418992 (718.0, 7.02) 0.11733 0.02564 4.57688 1.52102 (305.3, 6.11) 0.10194 0.02324 4.38703 1.47865 (283.2, 1.85) 0.41312 0.09709 4.25497 1.44809 (701.4, 5.63) 0.18369 0.04321 4.25111 1.44718 (541.2, 1.71) 0.11482 0.02739 4.19217 1.43322 (657.3, 2.49) 0.17904 0.04280 4.18327 1.43109 (239.2, 1.04) 0.10637 0.02553 4.16574 1.42689 (608.3, 2.35) 0.39410 0.09670 4.07556 1.40501 (465.0, 1.19) 0.10817 0.02718 3.98030 1.38136 (333.1, 2.00) 0.35105 0.08919 3.93582 1.37012 (497.3, 0.88) 0.36172 0.09212 3.92666 1.36779 (541.3, 5.12) 0.13883 0.03559 3.90124 1.36129 (627.3, 5.75) 0.16498 0.04259 3.87347 1.35415 (652.1, 5.87) 0.17554 0.04558 3.85130 1.34841 (402.2, 1.19) 0.25423 0.06860 3.70596 1.30994 (553.3, 5.38) 0.16633 0.04578 3.63335 1.29016 (635.4, 5.53) 0.11925 0.03383 3.52512 1.25992 (319.2, 6.34) 0.17736 0.05035 3.52259 1.25920 (231.1，2.62) 0.20535 0.05906 3.47671 1.24609 (283.1, 4.96) 0.17190 0.04984 3.44919 1.23814 (766.0, 6.77) 0.13671 0.04032 3.39069 1.22103 (358.0, 6.00) 0.20857 0.06194 3.36714 1.21406 (179.0, 10.16) 0.16841 0.05106 3.29838 1.19343 (209.1, 10.98) 0.13267 0.04090 3.24363 1.17669 (509.3, 5.28) 0.26857 0.08291 3.23925 1.17534 (337.2, 9.32) 0.18169 0.05691 3.19236 1.16076 (423.2, 2.88) 0.16242 0.05097 3.18669 1.15898 因此，本發明之參照生物標記輪廓可包括特性之組合， 其中該特性可為以電噴霧游離質譜於正模式下測得之m/z 約為100或150 Da至約1000 Da之離子強度，且其中該特性之 平均正規化強度於敗血症-陽性參照族群與SIRS-陽性參照 » -48 89293 200418992 族群之比例約為3:1或更高。或者，該特性之平均正規化強 度於敗血症-陽性參照族群與SIR S -陽性參照族群之比例約 ^或更低因為此等生物標記出現於以傳統技術測定時 之敗血症發生前約48小時從生物樣品取得之生物標記輪廊 中故預期其可作為敗血症發生之預測劑。 特性辞麼鸱呤間之縿化 被檢查 < 生物標記輪廓可展示出可隨個體朝敗血症之發 生進展而表現出較高量或較低量之特性。對應於此等特性 之生物彳;^ 0己預期為個體對感染及/或發炎之生理反應特徵 。由於上述原因，此等生物標記預期可提供用以測定個體 之敗血症或SIRS狀態之特定有用預測劑。亦即：比較從不 同個體 < 生物樣本取得之輪廓中之此等特性預期可得知個 體是否朝向嚴重敗血症·進展或是否81118朝向正常進展。 於表2列出之23個離子中，有14個於-48小時組中之強度 最大，八個於-24小時組中之強度最大，且一個於〇時組中 之強度最大。代表性之來自敗血症組之生物樣本内之生物 標記強度隨時間之.變化顯示於圖4Α中，而代表性之來自 SIRS組之生物樣本内之相同生物標記強度隨時間之變化顯 不於圖4B中。此等定離子，其m/z為437.2 Da且滯留時間為 1.42分鐘’其強度係於敗血症組以傳統技術診斷此等患者轉 變成敗血症之前48小時達高峰。故生物樣本中此離子之相對 強度之突出可作為裀體於約48小時内發生敗血症之預測器。 1_.4.3 交叉驗漭 倘若判定原則係建立於由相對少量生物標記輪廓取得之 89293 -49- 200418992 大量特性時，選擇偏頗可影響判定原則中之特性認定。（參 見 Ambroise等人，ProCe Nari Acad Sci USA 99:6562-66 (2002))。選擇偏頗可發生於用以選擇特性之數據，再於不 考慮選擇過程之變數下，根據所選擇之特性來判斷結果。 其結果為分類準確度之高估。若不彌補選擇偏頗，準確度 可達100/❹，甚至當判定原則係基於隨機輸入參數（〗d.)時。 選擇偏頗之避免可藉由在結果判斷過程中包含特性選擇， 不論該結果判斷過程為10次交叉驗證或一種型式之引導程 序。（參見例如：Hastie等人，前述，於71〇-7 u，其併列 為本文之參考）。 於本發明之具體實施例中，藉由十次交叉驗證測定模擬 結果。十次交又驗證之進行係隨機將數據分成十個獨立组 。將各組依序排除，並將剩餘九組進行模擬。將符合之模 式套用於孩排除組，可產生預測:之分類或然率。藉由簡單 ，生之預測類群，將該預測之分類或然率與實際之分類成 員相比較。舉例言之，縣敗血症之或然率大於例 ’則所預測之類群為敗血症。 將或然率與實際結果比較，測定偏差。本 差，，定n 偏 一 2 ^ In (P (sepsis)) + \n(P(SIRS)) sepsis cases SIRS cases 於實際 進杆IS1

八中，p為特定類群之分類或然率。當分類或炊 類君羊睡 ’ …个N v f ’偏差為最小。可使用兩種模式對所得數據 89293 -50- 200418992 樣之預測9但較佳之模式有較小之預測偏差。對於十次交 又驗證之各次重複中，計算於該重複期間未被模擬組之預 測偏差。結果產生10個無偏頗之偏差。典型上，將此1〇個 偏差相加以產生總數據組之模擬結果總結（即：準確度）。因 為灵際上進行1 〇次不同之模擬，故交叉驗證並不證明某一 特定模擬之結果。更確切地說，該10次举擬係藉由一般模 擬程序產生，且交叉驗證證明此程序之結果。由此程序產 生之第十一次模擬會同樣具有與前十次類似之預測結果。 典型上，使用十次交叉驗證之模擬結果會低於1〇〇%，但從 十次交又驗證之後，將之應用於從試驗組以外之樣本取得 之生物標記輪廓時，得到之結果預期可反映出更接近判定 原則之具生物意義性預測準確度。 類樹分折 一種分析此數據之方法係使用分類樹演算法，其可於大 型數據組中搜尋模組和相關性。“分類樹，，係一種遞歸式切 割，使用一系列經設計可將患者正確置於其中一類群之問 題將特定患者歸類為特定類群（例如：敗血症或SIRS)。各 問喊均問患者之狀況是否符合一已知之預測器，而各個定 案均可用以引導使用者進入分類樹之下一層，直至可確定 該患者落於某一類中。本文所使用之“預測器，，係為特性之 數值範園-於此實例中為具有特徵性m/z及以ACN從C18管柱 溶離之廓形之離子之離子強度。“狀況，，係為於個體之生物 標1己輪廓中測得之單一、特定特性之數值。於此實例中， “類別名稱，，為敗血症及SIRS。因此，分類樹使用者首先會 89293 -51 · 200418992 導使用者進-步進人分_之下__層直到最後將患㈣類 為止。 問是否於個體4生物標記輪廓中測得之第—個離子強度荩 在已給予之第一個離子之預測範圍内。第—個問題之 可用以確定患者是否具有SIRS或敗血症。另—方面，;二 個問題之答案可料❹者詢問是否於個體之生物標= 廓中測得之第二個離子強度落在已給予之第二個離子之預 測範圍内。再-次，第二個問題之答案可用以確定或可引 以分類樹演算法分析〇時收集之敗血症和81尺§族群之代 表性離子組強度，其結果顯示於圖5。於此例中，所分析之 離子組包括彼等正規化強度低於01者。分類樹中之第一個 判定點為是否該離子之rn/z為約448·5道耳頓且溶離ACN百 分率為約32.4%者之正規化強度低於約〇 〇414。倘若該問題 (答案為“是”，則進入左分枝之另一問題或至分類名稱。 於此例中’倘若正規化強度低於約〇 〇414，則進入“ 之分類名稱，且將個體歸類為SIRS_陽性，但敗血症-陰性 。倘若答案為“否”，則進入右分枝之下一個判定點，如此 直到抵達分類名稱為止。於此實例中，使用三個判定點以 預測個體之分類名稱。雖然可使用單一判定點將患者歸類 為SIRS-或敗血症-陽性，但使用其他離子之額外判定點可 大體上改善分類之準確度。熟習此項枝藝者知道大型數據 組可能有許多不同之分類樹。亦即：許·多可能之生物標記 組合可用以將個體歸類成，例如：SIRS族群或敗血症族 群。 89293 -52 - 200418992 1^4。5多童附加迪Μ樹 應用一種使用多重附加迴歸樹（MART)之自動化、彈性模 擬技術將特性組歸屬於兩族群之一。式使用一種初 始補償，其具體指明一個適用於所有預測之常數，再跟隨 一係列之迴歸樹。其符合度係取決於各樹中之判定點數目 欲符0之树之數目及具體指明特定之樹可如何徹底影響 MART模式之“粒度常數”。於各次重複操作中，使其適合於 迴歸樹以估計適合準則之最陡降方向。於該方向中取用具 有藉由粒度常數具體指明之長度之步驟。MART模式因此係 由初始補償加上由迴歸樹所提供之步驟所組成。將觀察和 預測值間之差異再計算，並重複該循環，使預測有進一步 之精確度。持續將該過程進行預設之循環數或直至一些終 止原則出現為止。 各樹中之分叉數係為一種具特別意義之適合參數。倘若 各樹僅有一分叉，模式可提供特性間之雙向交互作用。若 有二個樹，則模式可提供三向交互作用，以此類推。 ，於j定之類群狀態中，測定具有特性之數據組和已知類 群狀態（例如：敗血症或SIRS)之特性組之數值。MART提供 一種個別特性其對分類判定原則之貢獻和重要性之測定。 特定言之，可測定於特定樹之分又處選用之單一特性對判 疋原則 < 員獻程度以藉由其於最終判定原則之重要性提供 特性<列等。於一些數據組上重複mart分析可產生有輕微 爰異之特性列等，特別是對於彼等於判定原則之建立上較 不重要〈特性。因此，可用於本發明之預測特性組及其對 89293 -53- 200418992 應之生物標記可由本文所述及者稍加變動。 MART技術之一種實踐可見於一種用於R統計程式編列 環境之模組或“套裝軟體”（參見Venables等人，於Modern Applied Statistics with S，第四版（Springer，2002)； www.r-project.org)。本文件中之結果係使用R 1.7.0和1.7.1 版計算。由Greg Ridgeway博士所寫之實踐MART之模組稱 為“gbm”且亦可免費下載（參見www.r_project.org)。MART演 算法可符合十次交叉驗證法。將粒度參數設定為0.05，且 gbm套裝軟體之内建終止規則係設定為脫離各次有效操作 之數據之20%。交互作用度設定為1，故·不考慮特性間之交 互作用。gbm套裝軟體可估算各特性之重要度百分比，所有 生物標記輪廓之總和等於100%。具最大重要度之特性，其 總和為總重要度之至少90%，則指明為潛在具有預測價值。 需注意於每次MART契合中之終止規則可提供模組契合及 特性選擇之推測性構件。結果，多重MART模擬之進行可根 據相同數據，其可從稍微，或可能完全不同之特性組中選 擇。此等不同組合可傳遞相同預測資訊’；因此，所有組合 均可用於本發明中。足夠次數之MART模擬契合預期可於一 生物標記輪廓中產生所有預測特性之可能組合。據此，預 測者揭示之組合僅為彼等可用以將個體歸類之特性之代表。 1.4.6 羅吉斯迴歸分析 羅吉斯迴歸提供另一種分析從上述LC/MS分析取得之數 據之方式。“波峰強度”之係量測出現於光譜内待測m/z位置 中之波峰高度。若待測m/z位置中無波峰，則其波峰強度為 89293 -54- 200418992 “0”。待測m/z位置个之波峰強度之標準差（sd)可再由合併 之腦及敗血症麟之光譜取得。若應與敗血症族群間 之波峰強度無差異（即：SD=G) ’則不再進—步考慮波學強度 。於迴歸分析之前’使用此项技藝中已熟知之方法將波峰 強度分級。分級演算法大體上說明於前述Hastie等人第u 章中。 此特〖生選擇私序鑪別20個得自〇時生物標記輪廓之輸入 參數（即；生物標記），其列於表6。雖然輸人參數係依統計 重要度之等級排列，但較低等級之輸入參數仍可具臨床證 月仏值且可用於本發明中。再者，熟習此項技藝者了解所 丁輸入參數之重要度等級可改變，倘若參照族群有任何 方式之改變。 •表6 〇時樣品之輸入參數

89293 -55- 200418992 8 820〇6 9 399,4 10 244.2 11 593.5 12 300.4 13 285.3 :.如表7所列者。 表7 輸入參數 之重要性 等級 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 89293

^ -—--~~UHZ. 利用相同之羅吉斯迴歸分析，可使用_48小時取得之樣本 依預測敗血症發生之重要性順床刻笔 ,,M • 生順序列等。特性-選擇程序產生 37個用於-48小時樣本之輸入表數， m/z (Da) 162.2 716.2 980 136·2 908.9 150.2 948.7 298.4 293:3 188.2 輪入I鼓 溶離時之 0/〇 ACN 之重要性 溶離時之 % ACN 28.57 46.41 24.65 57.83 25.13 52.54 25.52 30.45 30.65

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在又另一方法中，使用盎參數 等級試驗…… 例如；魏可遜符號 ^以备別受試個體之生物標記。· 特性指令 7 生物‘記輪廓中之 才曰疋一個‘> 值’，，該值代表可用以 照旄海、， 町1固胆％類為特足參 、、秩群义生物標記之確定度。一 於約Ογκ〜 隹疋度 &而吕，P-值之預測值低 ·05。具有低p-值之生物桿記本I g 。戎去 如尤尽身即可用以將個體歸類 /、’可組合：或多個生物標記將個體歸類，其中該組 1^擇係根據生物標記之相對卜值。大體上，生物標記 組合較佳為彼等具有低Ρ-值之生物標記者。亦可組合至少 、、 Ν十一十或二十或更多個生物標記以此 万式將個體歸類。熟習此項技藝者了解所提供之任何生物 標記之相對Ρ-值可能不同，視參照族群之大小而定。 利用魏可遜符號等級試驗，指定從〇時、-24小時及_48小 時之生物樣本取得之生物標記輪廓特性之Ρ-值。其ρ-值分別 列於表8、9和10。 89293 •57- 200418992 表8 0時樣品之p-值 離子編號 m/z(Da)， 滞留時間(分鐘） P-值 1 (179.0, 10.16) 7.701965e-05 2 (512.4, 10.44) 1.112196e-04 3 (371.3,4.58) 2.957102e-04 4 (592.4, 15.69) 3.790754e-04 5 (363.2, 4.40) 4.630887e-04 6 (679.4, 5.92) 1.261515e-03 7 (835.0, 7.09) 1.358581e-03 8 (377.2, 4.61) 1.641317e-03 9 (490.3,5.12) 1.959479e-03 10 (265.2, 4.72) 3.138371e-03 11 (627.3, 5.75) 3.438053e-03 12 (266.7, 14.83) 3.470672e-03 13 (774.9, 7.39) 3.470672e-03 14 (142.2,3.38) 4.41073 5e-03 15 (142.0, -0.44) 4.443662e-03 16 (231.0, -0.41) 5.080720e-03 17 (451.3,4.94) 5.096689e-03 18 (753.8, 9.34) 5.097550e-03 19 (399,2, 2.99) 5.217724e-03 20 (534.4, 10.53) 5.87722 le-03 21 (978.8, 6.72) 6.448607e-03 22 (539.3, 5.30) 6.651592e-03 23 (492.2, 1.36) 6.697313e-03 24 (730.4, 6.54) 6.724428e-03 89293 58- 200418992 25 (842.6, 10.11) 6.724428e-03 26 (622.4,5.61) 7.249023e-03 27 (331.7, 19.61) 8.137318e-03 28 (564.3, 14.16) 8.419814e-03 29 (415.3,4.80) 8.475773e-03 30 (229.2, 2.39) 8.604155e-03 31 (118.2,5.26) 8.664167e-03 32 (410.7, 0.77) 8.664167e-03 33 (733.5, 4.55) 9.271924e-03 34 (503.3,5.12) 9.413344e-03 35 (453.2,2.97) 9.802539e-03 36 (534.3, 5.30) 1.089928e-02 37 (459.3, 4.96) l_100198e-02 38 (337.8,5.51) L136183e-02 39 (525.4, 15.11) 1.136183e-02 40 (495.3, 18.52) 1.282615e-02 41 (763.4, 19.81) 1.282615e-02 42 (256.2, 6.03) 1.286693e-02 43 (319.1, 15.67) 1.286693e-02 44 (548.3, 5.24) 1.286693e-02 45 (858.8, 7.79) 1.287945e-02 46 (671.4,5.77) 1.310484e-02 47 (353.2, 7.38) 1.323194e-02 48 (844.1,9.68) 1.333814e-02 49 (421.2,4.89) 1.365072e-02 50 (506.4, 19.65) 1.438363e-02 51 (393.3,4.58) 1.45941 le-02 52 (473.3,5.12) 1.518887e-02 53 (189.1,2.87) 1.6023 8 le-02 54 (528.1, 16.18) 1.603446e-02 55 (137.2, 9.60) 1.706970e-02 56 (163.1, 10.98) 1.706970e-02 57 (176.1，10.29) 1.706970e-02 58 (179.1,6.23) 1.706970e-02 59 (271.5,5.01) 1.706970e-02 60 (272.2, 6.49) 1.706970e-02 61 (399.3, 27.26) 1.706970e-02 62 (467.5, 5.95) 1.706970e-02 63 (478.0, 2.36) 1.706970e-02 64 (481.3,26.85) 1.706970e-02 65 (931.9, 6.72) 1.706970e-02 66 (970.5, 7.00) 1.706970e-02 -59- 89293 200418992 67 (763.2, 16.60) 1.730862e-02 68 (544.4, 15.56) 1.732997e-02 69 (666.4, 5.77) 1.750379e-02 70 (337.2, 9.32) 1.812839e-02 71 (407.2, 1.17) 1.852695e-02 72 (597.2, 5.32) 1.895944e-02 73 (333.1,2.00) 1.930165e-02 74 (490.3, 13.78) 1.989224e-02 75 (139.1，16.05) 2.026959e-02 76 (991.7, 16.60) 2.046716e-02 77 (814.2, 6.66) 2.121091e-02 78 (665.4, 15.46) 2.127247e-02 79 .(875.9, 10.08) 2.127247e-02 80 (144.0, 0.25) 2.137456e-02 81 (622.7, 4.14) 2.178625e-02 82 (377.2, 12.32) 2.240973e-02 83 (509.3, 5.28) 2.243384e-02 84 (349.2, 2.69) 2.252208e-02 85 (302.0, 19.54) 2.266635e-02 86 (411.0, 2.20) 2.30375 le-02 87 (296.2, 16.48) 2.373348e-02 88 (299.6, 15.62) 2.440816e-02 89 (162.1，0.49) 2.441678e-02 90 (372.0, 0.62) 2.472854e-02 91 (377.2, 9.32) 2.514306e-02 92 (979.6, 10.14) 2.530689e-02 93 (417.3, 15.61) 2.550843e-02 94 (281.7, 19.54) 2.563580e-02 95 (276.2, 5.27) 2.598704e-02 96 (229.2, -0·79) 2.62697 le-02 97 (346.1,7.46) 2.654063e-02 98 (356.2, 9.88) 2.654063e-02 99 (616.4, 8.05) 2.683578e-02 100 (850.4, 7.65) 2.69793 le-02 101 (495.3, 5.12) 2.712924e-02 102 (446.3, 4.94) 2.739049e-02 103 (476.3, 1.86) 2.770535e-02 104 (520.4,5.12) 2.774232e-02 105 (428.3, 6.20) 2.808469e-02 106 (536.3, 17.97) 2.863714e-02 107 (860.3, 6.94) 2.894386e-02 108 (762.9, 16.65) 2.958886e-02 -60- 89293 200418992 109 (788.9, 6.43) 2.967800e-02 110 (970.1，6.47) 2.967800e-02 111 (853.8, 5.77) 3.039550e-02 112 (913.6, 9.50) 3.039550e-02 113 (407.2, 4.72) 3.041346e-02 114 (335.2, 16.10) 3.047982e-02 115 (331.2, 12.93) 3.075216e-02 116 (512.3, 13.80) 3.075216e-02 117 (895.8, 6.80) 3.084773e-02 118 (120.2, 8.37) 3.110972e-02 119 (238.2, 9.32) 3.110972e-02 120 (506.3,8.10) 3.110972e-02 121 (949.9, 6.66) 3.115272e-02 122 (176.1,6.96) 3.161957e-02 123 (664.9,2.41) 3.275550e-02 124 (551.4, 18.56) 3.290912e-02 125 (459.0, 5.98) 3.389516e-02 126 (811.5, 7.73) 3.389516e-02 127 (919.9, 10.01) 3.414450e-02 128 (547.4, 5.28) 3.444290e-02 129 (895.4, 6.62) 3.460947e-02 130 (132.2, 0.79) 3.549773e-02 131 (944.8, 9.65) 3.567313e-02 132 (730.7, 6.46) 3.581882e-02 133 (529.5, 16.70) 3.666990e-02 134 (449.3, 24.40) 3.687266e-02 135 (465.3, 5.08) 3.725633e-02 136 (481.3,4.96) 3.956117e-02 137 (250.1, 14.23) 3.98213 le-02 138 (565.3, 16.05) 3.98213 le-02 139 (559.0, 15.30) 3.994530e-02 140 (555.3,4.18) 4.078620e-02 141 (568.4, 15.49) 4.118355e-02 142 (120.0, 11.52) 4.145499e-02 143 (120.2, 14.91) 4.145499e-02 144 (167.0, 5.00) 4.145499e-02 145 (173,0, 19.96) 4.145499e-02 146 (324.9, 2.27) 4.145499e-02 147 (328.8, 19.98) 4.145499e-02 148 (345.7, 16.95) 4.145499e-02 149 (407.2, 12.07) 4.145499e-02 150 (478.3,3.69) 4.145499e-02 -61 - 89293 200418992 151 (484.2, 8.40) 4.145499e-02 152 (502.2, 4.55) 4.145499e-02 153 (597.4, 11.40) 4.145499e-02 154 (612.3,6.40) 4.145499e-02 155 (700.3, 9.40) 4.145499e-02 156 (730.5, 11.63) 4.145499e-02 157 (771.4, 6.02) 4.145499e-02 158 (811.9, 10.99) 4.145499e-02 159 (859.9, 2.47) 4.145499e-02 160 (450.3, 11.99) 4.145499e-02 161 (619.3, 11.42) 4.165835e-02 162 (102.1,6.16) 4.238028e-02 163 (717.5,9.11) 4.238028e-02 164 (606.0, 7.63) 4.317929e-02 165 (627.2, 2.48) 4.317929e-02 166 (252.1,6.62) 4.318649e-02 167 (657.4, 5.53) 4.332436e-02 168 (635.7, 7.94) 4.399442e-02 169 (167.2, 14.42) 4.452609e-02 170 (812.5, 10.24) 4.528236e-02 171 (575.4, 10.00) 4.533566e-02 172 (379.3, 15.55) 4.644328e-02 173 (468.3, 13.44) 4.644328e-02 174 (295.3, 16.10) 4.721618e-02 175 (715.8, 7.68) 4.736932e-02 176 (810.6, 19.21) 4.759452e-02 177 (159.1, 13.02) 4.795773e-02 178 (435.2, 0.83) 4.795773e-02 179 (443.0, 11.99) 4.795773e-02 180 (468.4, 19.65) 4.795773e-02 181 (909.8, 9.52) 4.795773e-02 182 (647.2, 2.45) 4.838671e-02 183 (564.4, 5.28) 4.958429e-02 62- 89293 200418992 表9 -24小時樣品之p_值 離子編號 m/z(Da)， 滯留時間(分鐘） P-值 1 (265.2, 4.72) 0.0003368072 2 (785.5, 9.30) 0.00G6770673 3 (685.1,6.85) 0.0010222902 4 (608.4, 5.39) 0.0014633974 5 (141.1,5.13) 0.0018265874 6 (652.5,5.51) 0.0022097623 7 (228.0, 3.12) 0.0029411592 8 (660.1，3.90) 0.0032802432 9 (235.1,4.04) 0.0038917632 10 Γ (287.1,4.72) 0.0045802571 11 Γ (141.2, 1.46) 0.0049063026 12 (553.3, 5.38) 0.0053961549 13 (114.2,2.49) 0.0060009121 14 (490.3,5.12) 0.0064288387 15 (142.0, -0.44) 0.0064784467 16 (428.3, 6.20) 0.0064784467 17 (564.4, 5.28) 0.0081876219 18 (678.8, 2.37) 0.0089256763 19 (155.1,2.87) 0.0091072246 20 (377.2,4.61) 0.0098626515 21 (221.0, 1.92) 0.0102589726 22 (463.2, 1.88) 0.0102589726 23 (142.2, 3.38) 0.0106568532 24 (231.0, -0.41) 0.0106568532 25 (256.2, 6.03) 0.0106568532 26 (597.2, 2.05) 0.0106568532 27 (638.8, 2.35) 0.0112041041 28 (800.6, 1.53) 0.0112041041 29 (385.3, 24.07) 0.0113535538 30 (578.4, 5.46) 0.0114707005 31 (352.3, 11.76) 0.0115864528 32 (858.2, 10.41) 0.0115864528 33 (889.7, 16.16) 0.0115864528 34 (190.1，3.99) 0.0120870451 35 (493.3, 26.36) 0.0120870451 36 (608.3,2.35) 0.0122930750 37 (958.8, 6.36) 0.0127655270 38 (235.0, 0.51) 0.0128665507 39 (739.5, 9.45) 0.0139994021 40 (525.2, 1.92) 0.0141261152 41 (372.4, 11.66) 0.0148592431 42 (415.3, 4.80) 0.0154439839 89293 -63- 200418992 43 (439.2, 9.40) 0.0154583510 44 (819.0,2.11) 0.0156979793 45 (459.3, 20.83) 0.0161386158 46 (372.2,5.10) 0.0169489151 47 (875.4, 19.37) 0.0170124705 48 (989.2, 10.14) 0.0184799654 49 (179.0, 10.16) 0.0190685234 50 (231.0, 6.41) 0.0191486950 51 (460.9, 1.77) 0.0194721634 52 (813.5,9.83) 0.0194721634 53 (274.2, 4.67) 0.0194863889 54 (158.2, 10.93) 0.0203661514 55 (676.7, 1.07) 0.0208642732 56 (171.2, 25.87) 0.0213201435 57 (520.4^5.12) 0.0214439678 58 (523.3,22.32) 0.0216203784 59 (329.0, 1·27) 0.0222231947 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0.019031437 39 (541.3,5.12) 0.019316716 40 (470.3, 10.72) 0.019821985 41 (281.3, 16.88) 0.020436455 42 (407.2, 4.72) 0.021104001 43 (627.2, 2.48) 0.021491454 一 44 (313.2, 6.31) 0.022912878 45 (173.2, 15.68) 0.023189016 46 (675.6, 5.75) 0.023820433 47 (137.2, 9.60) 0.023895386 48 (357.2, 5.65) 0.023895386 49 (372.0, 0.62) 0.023895386 50 (635.3,2.38) 0.023895386 51 (743.8, 4.55) 0.023895386 52 (185.2, 6.29) 0.024742907 53 (930.4, 7.60) 0.024770578 54 (564.4, 5.28) 0.024811749 55 (415.2, 9.09) 0.025574438 56 (697.3, 16.10) 0.025714289 57 (657.3, 2.49) 0.025825394 58 (996.1，9.94) 0.026026402 59 (185.0, 0.10) 0.027530406 60 (333.1,2.00) 0.027840095 61 (611.3,6.59) 0.028096875 62 (283.3, 18.53) 0.028392609 63 (506.3,8.10) 0.028392609 64 (726.4, 5.67) 0.028392609 65 (397.3,20.91) 0.029361285 66 (311.9,2.10) 0.029433328 67 (473.3,8.15) 0.029433328 68 (490.2, 8.85) 0.029433328 69 (493.3, 22.99) 0.029433328 70 (577.2, 3.56) 0.029433328 71 (653.7, 6.16) 0.029433328 72 (757.5, 16.28) 0.029433328 73 (819.0,2.11) 0.029433328 74 (853.5, 13.13) 0.029433328 75 (889.2, 6.42) 0.029433328 76 (929.6, 10.60) 0.029433328 89293 -67- 200418992 77 (963.3, 9.70) 0.029433328 78 (982.1，9.39) 0.029433328 79 (446.3, 4.94) 0.030176399 80 (959.5, 10.86) 0.030176399 81 (169.1，5.03) 0.030177290 82 (906.7, 9.75) 0.030212739 83 (772.1,7.79) 0.030482971 84 (857.0, 9.70) 0.030966151 85 (861.8, 9.74) 0.030966151 86 (377.2, 12.32) 0.031285164 87 (229.2, -0·79) 0.031539774 88 (229.2, 2.39) 0.031539774 89 (740.4, 9.58) 0.031759640 90 (958.3, 9.66) 0.031759640 91 (739.5, 18.01) 一. 0.032714845 92 (377.2, 4.61) 0.032818612 93 (144.0, 0.25) 0.032941894 94 (459.3, 4.96) 0.033735985 95 (715.8, 4.37) 0.034116302 96 ν (649.0, 2.13) 0.034332004 97 (776.3, 6.78) 0.034520017 98 (827.1,9.58) 0.034662245 99 (439.2, 9.40) 0.035385909 100 (376.0, 2.11) 0.038036916 101 (734.6, 7.21) 0.038036916 102 (402.2, 1.19) 0.038177664 103 (740.5, 6.02) 0.038356830 104 (502.5,4.01) 0.038481929 105 (694.4, 6.02) 0.039047025 106 (331.0, 0.74) 0.039943461 107 (302.1,4.44) 0.040965049 108 (836.1,8.31) 0.041276236 109 (909.4, 9.75) 0.041642229 110 (358.0,2.13) 0.041676687 111 (502.2, 4.55) 0.042049098 112 (302.2, 0.79) 0.042062826 113 (936.9,9.51) 0.042143408 114 (492.2, 1.36) 0.042286848 115 (204.2, 5.03) 0.043172669 116 (701.4,5.63) 0.044132315 117 (373.3, 24.05) 0.045041891 118 (657.4, 5.53) 0.045102516 119 (357.3, 15.86) 0.045170280 120 (670.9, 6.71) 0.045249625 121 (850.0, 7.56) 0.046346695 122 (576.4, 16.02) 0.046573286 123 (670.4, 9.09) 0.046609659 124 (578.4, 5.46) 0.047297957 89293 -68 -

200418992 125 (525.3,5.12) 0.047503607 126 (926.0, 6.12) 0.047503607 127 (987.3,9.56) 0.047882538 128 (231.0, -0.41) 0.048437237 129 (608.3,2.35) 0.048607203 130 (966.7, 10.60) 0.048825822 或者可使用一種無參數試驗（例如，魏可遜符號等級試 驗）找出特性之P-值，其可根據朝敗血症進展之族群之進展 性外觀或特性之消失。於此型試驗中，首先從敗血症和SIRS 組之進入研究當天（第一天樣本）之數據測定特定特性之基 值。再將敗血症和SIRS樣本之特性強度與例如：-48小時樣 本相比較，以判定該特性強度是否由其基·值上升或下降。 最後，針對敗血症族群和SIRS族群之特性強度與基值之差 異分配其P-值。列於表11-13之p-值係由剜定此等與基值差 異而得。 表11 與基線有差異之特性之P-值：0時樣品 離子編號 m/z(Da)， 滯留時間(分鐘） p_值 1 (991.7, 16.6) 0.000225214 2 (592.4, 15.69) 0.001008201 3 (733.5,4.55) 0.001363728 4 (173.1,23.44) 0.001696095 5 (763.2, 16.6) 0.001851633 6 (932.2, 6.72) 0.002380877 7 (842.6, 10.11) 0.002575890 8 (295.9, 15.78) 0.002799236 9 (512.4, 10.44) 0.004198319 10 (551.4, 24.89) 0.005132229 11 (167.1, 10.99) 0.005168091 12 (857.8, 8.21) 0.005209485 13 (763.4, 19.81) 0.005541078 14 (931.9,6.72) 0.006142506 15 (167.2, 14.42) 0.006349154 16 (510.4, 17.91) 0.006427070 17 (295.3, 16.1) 0.007165849 18 (353.2,7.38) 0.007255100 89293 -69- 200418992 19 (653,6.71) 0.007848203 20 (730.4, 6.54) 0.008402925 21 (142,0.44) 0.008578959 22 (331.7, 19.61) 0.008807931 23 (386.3, 9.47) 0.009227968 24 (524.4, 19.33) 0.010256841 25 (741.5,23.22) 0.010329009 26 (272.2, 6.49) 0.010345274 27 (448.3, 9.24) 0.010666648 28 (713.5,21.99) 0.011150954 29 (353.3, 22.38) 0.011224096 30 (457.2, 0.88) 0.011653586 31 (708.9, 0.37) 0.012197946 32 (256.2, 6.03) 0.013251532 33 (721.4, 23.49) 0.014040014 34 (496.4, 16.6) 0.014612622 35 (634.9, 27.04) 0.015093015 36 (663.3,2.06) 0.015093015 37 (679.4, 5.92) 0.015176669 38 (521.4, 23.84) 0.015526731 39 (358.3, 4.4) 0.015795031 40 (409.2, 6.95) 0.015875221 41 (537.3, 23) 0.016202704 42 (875.4, 19.37) 0.016372468 43 (875.9, 10.08) 0.016391836 44 (265.2,9.37) 0.016924737 45 (450.3, 11.99) 0.017293769 46 (329, 1.27) 0.017732659 47 (534.4, 10.53) 0.018580510 48 (616.2, 11.9) 0.018703298 49 (177, 0.93) 0.018855039 50 (772.1, 16.51) 0.018991142 51 (424.2, 6.12) 0.019195215 52 (277.3,21.72) 0.020633230 53 (333.2, 7.39) 0.020898404 54 (742.8, 4.02) 0.021093249 55 (428.3, 6.2) 0.021697014 56 (946, 10.49) 0.021935440 57 (970.5, 7) 0.021999796 58 (281.7, 19.54) 0.022055564 59 (568.4, 15.49) 0.022208535 60 (700.3, 9.4) 0.022500138 61 (118.2,5.26) 0.022773904 62 (601.3, 5.46) 0.023578505 63 (818.3,7.18) 0.023788872 64 (799.4, 9.64) 0.023906673 65 (244.1，2.22) 0.024125162 66 (145.1,3.99) 0.024385288 89293 -70- 200418992 67 (328.8, 19.98) 0.024385288 68 (342.4, 13.41) 0.025034251 69 (356.2, 5.6) 0.025034251 70 (321.3, 19.96) 0.025128604 71 (523.3, 13.8) 0.025164665 72 (504.3, 15.49) 0.025894254 73 (842.3, 10.76) 0.026070176 74 (585.3,25.35) 0.026196933 75 (176.1，10.29) 0.027193290 76 (399.3, 27.26) 0.027193290 77 (761.8, 7.89) 0.027193290 78 (909.8, 9.52) 0.027193290 79 (291.2, 12.57) 0.029135281 80 (715.8, 7.68) 0.030440991 81 (546.4, 19.33) 0.030479818 82 (795.5, 20.72) 0.030479818 83 (321, 19.53) 0.030693238 84 (746.8, 10.2) 0.030888031 85 (831.5,20.87) 0.030888031 86 (872.9, 11.6) 0.030888031 87 (598, 8.58) 0.031026286 88 (407.2, 12.07) 0.031941032 89 (645.3, 13.42) 0.031941032 90 (662.1,8.16) 0.031941032 91 (179, 10.16) 0.032126841 92 (779.5, 19.79) 0.032301988 93 (171.2, 25.87) 0.032868402 94 (979.6, 10.14) 0.033098647 95 (245.2, 22.24) 0.033117202 96 (370.3, 2.3) 0.033696034 97 (433.3, 5.29) 0.033696034 98 (771.4, 10.01) 0.033696034 99 (876.3, 9.94) 0.033696034 100 (893, 7.09) 0.033919037 101 (669.2,2.13) 0.034234876 102 (643.3, 5.67) 0.034557232 103 (991.3,9.72) 0.035680492 104 (577.5, 16.48) 0.036136938 105 (820, 6.38) 0.036179853 106 (856.6, 10.29) 0.036179853 107 (453.2, 6.62) 0.036689053 108 (652.1,5.87) 0.037082670 109 (944.8, 9.65) 0.037337126 110 (494.4, 14.75) 0.037526457 111 (185, 11.17) 0.037568360 112 (229.2, 0.79) 0.037574432 113 (245.1, 11.44) 0.038031041 114 (279.3, 20.72) 0.038253242 89293 -71 - 200418992 115 (781.5,20.04) 0.038253242 116 (409.4, 22.56) 0.038673618 117 (315.2, 14.29) 0.039895232 118 (759.5, 9.33) 0.040499878 119 (995.1,9.94) 0.040516802 120 (848.3, 9.66) 0.040554157 121 (263.3, 22.26) 0.041183545 122 (267.7, 16.55) 0.041183545 123 (544.4, 15.56) 0.041183545 124 (617.5, 17.71) 0.041406719 125 (411.5, 1.06) 0.041454989 126 (597.4, 11.4) 0.041454989 127 (771.4, 6.02) 0.041454989 128 (901.9, 1.03) 0.041454989 129 (415.2, 9.09) 一 0.041542794 130 (430.3,9.1) 0.041922297 131 (414.3,4.29) 0.043298568 132 (414.9, 5.86) 0.043427801 133 (444.2, 6) 0.043665836 134 (505.3, 12.78) 0.043665836 135 (231,0.41) 0.043722631 136 (370.3, 10.79) 0.044296546 137 (653.5, 19.99) 0.044296546 138 (291.7, 15.37) 0.044815129 139 (531.3, 21.48) 0.044870846 140 (715.4,5.89) 0.044985107 141 (327.3, 16.98) 0.045218533 142 (499.4, 15.11) 0.046077647 143 (766.2, 15.77) 0.046332971 144 (664.2, 11.84) 0.047191074 145 (567.4, 20.79) 0.047549465 146 (809.6,21.33) 0.047600425 147 (393.3,21.08) 0.048014243 148 (754.6,7.21) 0.048520560 149 (298.3, 24.36) 0.049732041 150 (883.3,6.69) 0.049768492 151 (468.3, 13.44) 0.049813626 152 (665.4, 15.46) 0.049918030 72- 89293 200418992 表12 與基線有差異之特性之p-值：-24小時樣品 離子編號 m/z(Da)， 滯留時間(分鐘） P-值 1 (875.4, 19.37) 0.0006856941 2 (256.2, 6.03) 0.0009911606 3 (228,3.12) 0.0014153532 4 (227.9, 0.44) 0.0015547019 5 (879.8, 4.42) 0.0025072593 6 (858.2, 10.41) 0.0029384997 7 (159,2.37) 0.0038991631 8 (186.9, 2.44) 0.0045074080 9 - (609.1，1.44) 0.0047227895 10 (996.1,9.94) 0.0058177265 11 (430.7, 4.21) 0.0063024974 12 (141.1,5.13) 0.0068343584 13 (839.6, 20.85) 0.0072422001 14 (956.1，10.62) 0.0080620376 15 (113.2, 0.44) 0.0081626136 16 (428.3, 6.2) 0.0081962770 17 (802.9, 0.39) 0.0081962770 18 (819,2.11) 0.0081968739 19 (366.1，0.86) 0.0084072673 20 (993.5, 9.39) 0.0084773116 21 (919.5, 9.63) 0.0098988701 22 (680.6, 7.39) 0.0105489986 23 (523.3,22.32) 0.0105995251 24 (668.3, 8.45) 0.0112292667 25 (463.2, 1.88) 0.0113722034 26 (259, 11.71) 0.0115252694 27 (889.7, 16.16) 0.0115864528 28 (810.4,7.42) 0.0119405153 29 (300,21.9) 0.0123871653 30 (141.2, 1.46) 0.0124718161 31 (785.5, 9.3) 0.0126735996 32 (660.1,3.9) 0.0131662199 33 (575.4, 10) 0.0133539242 34 (398.2, 8.89) 0.0133977345 35 (678.8, 2.37) 0.0134811753 36 (779.5, 19.79) 0.0152076628 37 (190.1,3.99) 0.0153485356 38 (746.8, 2.42) 0.0153591871 39 (407.2,7.81) 0.0154972293 40 (265.2,9.37) 0.0163877868 41 (447.8, 6.29) 0.0163877868 42 (472.5, 11.18) 0.0166589145 89293 -73- 200418992 43 (951.9, 10.21) 0.0169717792 44 (138.2, 10.13) 0.0170020893 45 (739.5, 9.45) 0.0171771560 46 (999,7.71) 0.0177981470 47 (472.2, 11.12) 0.0178902225 48 (138.1, 1.89) 0.0180631050 49 (842.9, 6.93) 0.0189332371 50 (717.3, 17.96) 0.0193107546 51 (245.2, 5.23) 0.0201247940 52 (666.4, 9.29) 0.0211733529 53 (820, 6.38) 0.0216512533 54 (991.7, 9.21) 0.0219613529 55 (177, 0.93) 0.0223857280 56 (488.3, 9.68) 0.0224061094 57 (119.1,9.19) 0.0224206599 58 (278· 1,5.24) 0.0240107773 59 (409.2, 6.95) 0.0256235918 60 (369.2, 3.37) 0.0259379108 61 (482.4, 19.26) 0.0261591305 62 (806.6,21.29) 0.0269790713 63 (637.9, 7.43) 0.0273533420 64 (373.3, 11.45) 0.0277220597 65 (264.2, 8.83) 0.0282234106 66 (909.7, 6.36) 0.0282234106 67 (747.4, 9.38) 0.0287012166 68 (832.9, 6.21) 0.0289271134 69 (155.1,2.87) 0.0289347031 70 (977.7, 9.56) 0.0298654782 71 (610.9,2.44) 0.0303741714 72 (235.1,4.04) 0.0303830303 73 (685.1，6.85) 0.0303830303 74 (670.4, 9.09) 0.0307328580 75 (346.1，12.11) 0.0308972074 76 (217.2, 8.66) 0.0309517132 77 (770.9, 16.6) 0.0310937661 78 (163.2, 6.31) 0.0313614024 79 (392.3, 10) 0.0317350792 80 (469.7, 5.98) 0.0317350792 81 (470, 6.32) 0.0317350792 82 (794.9, 9.76) 0.0317350792 83 (357.3, 18.91) 0.0318983292 84 (303.7, 15.73) 0.0325397156 85 (221，1.92) 0.0328080364 86 (999.5, 7.28) 0.0330940901 87 (637.3, 18.59) 0.0335078063 88 (331,0.74) 0.0336148466 89 (978.8, 6.72) 0.0338444022 90 (271.1，15.08) 0.0347235687 89293 -74- 200418992 91 (801,2.11) 0.0348606916 92 (599.5,21.95) 0.0358839090 93 (769.4, 10.46) 0.0371510791 94 (914.1,6.94) 0.0375945952 95 (363,26.16) 0.0381998666 96 (235.1，8.53) 0.0382752828 97 (273.2, 6.31) 0.0390486612 98 (250.1, 14.23) 0.0401201887 99 (585.2, 15.27) 0.0406073368 100 (276.2, 5.27) 0.0414046782 101 (183.1,6.88) 0.0419461253 102 (430.3,9.1) 0.0421855472 103 (229.2, 0.79) 0.0424445226 104 (811.6, 19.44) 0.0438285232 105 (126.2, 4.02) 0.0439140255 106 (708.5, 15.79) 0.0439143789 107 (127,4.75) 0.0442108301 108 (338.2, 7.89) 0.0444291108 109 (391.3, 14.55) 0.0444291108 110 (714.6, 14.02) 0.0444291108 111 (665.3, 9.58) 0.0446481623 112 (875.7, 19.83) 0.0446481623 113 (676, 6.65) 0.0447614386 114 (695.1,2.71) 0.0448433123 115 (480.2, 8.03) 0.0451624233 116 (754.6,7.21) 0.0454753333 117 (494.9, 19.41) 0.0454916992 118 (785.1,9.29) 0.0455064285 119 (265.2, 4.72) 0.0456621220 120 (771.9, 24.52) 0.0460254955 121 (467.2, 8.55) 0.0464130076 122 (869.9, 10.55) 0.0464539626 123 (479.3, 24.87) 0.0473472790 124 (380.3,24.05) 0.0475242732 125 (194.1,6.48) 0.0475341652 126 (262.6, 5.7) 0.0475341652 127 (694.2, 11.76) 0.0475341652 128 (695.9, 4.32) 0.0475341652 129 (660.8, 2.32) 0.0475865516 130 (958.8, 6.36) 0.0482703924 131 (504.3, 15.49) 0.0484159645 89293 75- 200418992 表13 與基線有差異之特性之p-值：-48小時樣品 離子編號 m/z(Da)， 滯留時間(分鐘） P-值 1 (715.8, 7.68) 0.0005303918 2 (919.5, 9.63) 0.0012509535 3 (802.4, 8.16) 0.0016318638 4 (922.5, 7.27) 0.0023943584 5 (741.5,23.22) 0.0038457139 6 (875.4, 19.37) 0.0044466656 7 (878.9, 7.28) 0.0052374088 8 (996.1,9.94) 0.0060309508 9 (295.9, 15.78) 0.0070608315 10 (521.4, 23.84) 0.0075730074 11 (676, 6.65) 0.0075742521 12 (703.9, 4.35) 0.0075743621 13 (716.2, 6.62) 0.0078671775 14 (346.1，7.46) 0.0080100576 15 (551.4, 24.89) 0.0086803932 16 (415.2, 9.09) 0.0088869428 17 (182.1,2.44) 0.0114906565 18 (310.3, 19.13) 0.0121106698 19 (428.3, 6.2) 0.0124220037 20 (908.6, 10.83) 0.0127529218 21 (715.8,4.37) 0.0129735339 22 (444.3, 2.8) 0.0135088012 23 (753.3, 9.34) 0.0140485313 24 (779.5, 19.79) 0.0149169860 25 (211.1, 13.48) 0.0149614082 26 (285.2, 19.8) 0.0155513781 27 (441.4, 19.09) 0.0169697745 28 (483.3,6.17) 0.0171647510 29 (488.3, 6.38) 0.0172240677 30 (616.2, 11.9) 0.0176526391 31 (861.8,9.74) 0.0185440613 32 (485.3,23.17) 0.0186867970 33 (435.1,4.14) 0.0193706655 34 (612.3, 16.87) 0.0193706655 35 (362.3, 5.65) 0.0194196263 36 (227,23.11) 0.0204130271 37 (883.2, 9.76) 0.0204386696 38 (229.2, 0.79) 0.0205101165 39 (643.3, 5.67) 0.0210117164 40 (980.6, 7.44) 0.0215182605 41 (795.5,20.72) 0.0218437599 42 (577.2,3.56) 0.0224776501 89293 -76- 200418992 43 (152.1, 1.51) 0.0233549892 44 (525_4, 15.11) 0.0234730657 45 (435.3, 19.92) 0.0235646539 46 (299.2, 25.54) 0.0237259148 47 (612.9, 0.36) 0.0245420186 48 (505.3, 12.78) 0.0245629232 49 (986.7, 7.42) 0.0248142595 50 (719.2, 6.07) 0.0252229441 51 (562.3, 19.13) 0.0252471150 52 (552·4,22.8) 0.0254361708 53 (353.2, 19.3) 0.0266840298 54 (575.4, 16.74) 0.0275127383 55 (845.2, 6.33) 0.0291304640 56 (633.7, 6.14) 0.0301224895 57 (519.3, 13.32) 0.0301986537 58 (205.1，13.28) 0.0306513410 59 (317.9, 1.41) 0.0306513410 60 (388.3, 9.86) 0.0306513410 61 (471.3,26.3) 0.0306513410 62 (723.2, 6.69) 0.0320817369 63 (912.5, 10.13) 0.0320817369 64 (965.2, 2.77) 0.0320817369 65 (718.9,5.76) 0.0322905214 66 (363,26.16) 0.0330856794 67 (897.1,9.53) 0.0331382847 68 (227.3, 6.92) 0.0332507087 69 (778.2, 14.75) 0.0335555992 70 (321，2.35) 0.0337995708 71 (447.8, 6.29) 0.0343295019 72 (536.1,4.09) 0.0343295019 73 (653.5, 19.99) 0.0343565954 74 (667.4,21.32) 0.0343565954 75 (982.7, 9.73) 0.0352875093 76 (789.4, 6.11) 0.0364395580 77 (505.3, 18.48) 0.0369258233 78 (277, 0.2) 0.0369277075 79 (285.3, 12.09) 0.0382728484 80 (739.5, 18.01) 0.0382728484 81 (838.9, 0.39) 0.0382728484 82 (400.2, 5.79) 0.0384511838 83 (883.6, 7.04) 0.0384732436 84 (604.3, 19.85) 0.0411740329 85 (287.1,4.72) 0.0412206143 86 (549.9, 4.23) 0.0415068077 87 (879.8, 4.42) 0.0415426686 88 (721.7, 20.36) 0.0417134604 89 (711.4, 16.81) 0.0417360498 90 (982.1，9.39) 0.0419790105 89293 -77- 200418992 91 (971.4, 10.51) 0.0432043627 92 (112.7, 1.05) 0.0452851799 93 (503.3, 14.33) 0.0453240047 94 (173.1，23.44) 0.0466828436 95 (283.1，4.96) 0.0466865226 96 (637.4, 6.78) 0.0467959828 97 (597.4, 15.92) 0.0471002889 98 (813.5, 9.83) 0.0480402523 99 (444.2, 6) 0.0486844297 100 (448.3, 9.24) 0.0486916088 101 (502.5, 4.01) 0.0493775335 102 (854.2, 5.79) 0.0493775335 f例2 ：使用定量液態層析-質譜/質譜（LC-MS/MS)鑑別蛋白 質生物標記 2.1.樣本收集和分析 如上述，從第一個族群之15名代表性患者（“SIRS組”）和第 二個族群發展成SIRS並進展成敗血症之1 5名代表性患者 (“敗血症組”）取得參照生物標記輪廓。於第1天、0時和-48 小時抽取患者之血液。於本例中，從患者抽取50-75微升血 漿樣本，並分四批收集：兩批為五和十名SIRS-陽性個體及 兩批為五和十名敗血症-陽性個體。從每個匯集之批次中取 六個樣本進一步分析。 2.2樣本製備 首先將血漿樣本進行免疫破壞（immunodeplete)以去除大 部份蛋白質，特別是：白蛋白、轉鐵蛋白、結合球蛋白、抗 胰蛋白酶、IgG和IgA，其共同構成樣本中約85%(重量％)之 蛋白質。免疫破壞之進行係以多重親和去除系統管柱 (Agilent Technologies，Palo Alto,加州），根據廠商之說明使 用。至少95%之前述蛋白質可利用此系統從血漿中去除。舉 89293 -78- 200418992 例言之，經破壞之樣本中僅剩約0·1 %之白蛋白。經估計僅 有8 %留在樣本中之蛋白質代表仍為大量之蛋白質，例如： IgM和α-2細球蛋白。再使用此項技藝中已熟知之步驟將經 區分之血漿樣本變性、還原、烷化及以胰蛋白酶分解。從 各個匯集樣本得到約2毫克之經分解蛋白質。

2。3 多錐 LC/MS 將經胰蛋白酶分解之胜肽混合物再經LC管柱區分並以安 裝順序為LC/MS/MS之Agilent MSD/捕捉ESI-離子捕捉質譜 儀分析。將1毫克之經分解蛋白質以10微升/分鐘之速度注 入微量C18逆相（RP1)管柱中。將RP1管柱串聯強陽離子交換 (SCX)區分管柱，再連接C18逆相捕捉管柱。將樣本注入RP1 管柱中，先以0-10% ACN梯度於RP1管柱中將胜肽區分。 ACN梯度之後，以10 mM鹽緩衝液溶離，其可進一步將胜肽 區分為結合於SCX管柱和可固定化於捕捉管柱内之溶離液 。再將捕捉管柱從與SCX管柱連接中移除並與另一 C18逆相 管柱（RP2)連接。以0-10% ACN梯度，以300奈升/分鐘之流 速將固定於捕捉管柱中之區分從捕捉管柱溶離至RP2管柱 上。將RP2連接於噴灑電壓為1000至1500伏特之Agilent MSD/捕捉ESI-離子捕捉質譜儀。再重複此循環（RP1-SCX-捕捉-RP2)，使用總ACN%範圍為0-80%及高達1 Μ之鹽濃度 以區分並分離剩餘之胜肽。其他適當之LC/MS/MS配置均可 用以產生本發明可用之生物標記輪廓。產生之質譜m/z範圍 為200-2200 Da。應用數據依賴性掃描及動態排除以達到較 高之動態範圍。圖6顯示以LC/MS和LC/MS/MS產生之代表 89293 -79- 200418992 性生物標記輪廓。 2。4數壚分析和結杲 對於以MS/MS模式分析之各個樣本，約150,000個光譜相 當於約1,5千兆位元組（gigabytes)之資料。總共約收集50千 兆位元組之資料。使用Spectrum Mm 2.7版軟體（©Copyright 2003 Agilent Technologies，Inc.)分析光譜。使用 MS-Tag資料 庫搜尋演算法（Millennium Pharmaceuticals)對照國立生物技 術資訊中心（NCBI)之人類非過剩蛋白質之資料庫比對 MS/MS光譜。使用相當於95%信賴度之門檻值確認符合之蛋 白質，再將之組合以鑑別存在於樣本中之蛋白質。使用本 方法可測得之蛋白質係以〜1奈克/毫升之濃度存在於血漿 中，其於血漿濃度中之動態範圍約涵蓋六個強度等級。 血漿中受測蛋白質含量之半定量性估計可藉由測定質譜 中“正”蛋白質之數目。若於光譜中之某m/z值之可測離子特 性強度大於雜訊值，則其為正。一般而言，血漿中表現量 較高之蛋白質可於較多光譜中測得正離子特性或離子特性 組。以此等蛋白質濃度之量測，可明顯看出多種蛋白質於 SIRS組和敗血症組内有區別性表現。各種經測定為“上升調 控”之蛋白質顯示於圖7A和7B中，其中該上升調控之蛋白質 於敗血症組中之表現量大於SIRS組。從圖7A中清楚看到蛋 白質隨時之表現可以與#21離子（437.2 Da，1.42分鐘）相同之 方式改變，其顯示於圖4。舉例言之，GenBank登錄號為 AAH15642和NP_000286之蛋白質，其構造均類似絲胺酸‘ (或半胱胺酸）蛋白酶抑制劑，於敗血症-陽性族群中隨時間 89293 -80- 200418992 而有進展性較大量之表現，然而，其於sirs_陽性族群中之 表現f則#目對平穩。此等蛋白質之大量表現，及特別是此 等蛋白質於個體中㈣間之進展性較大量表現，預期可作 為敗血症發生之預測器。各種於敗血症-陽性族群中可隨時 間下降凋控之蛋白質顯示於圖8入和8B中。某些此等蛋白質 之表現，如具有顯示於GenBank登錄號NP_079216之序列之 未命名蛋白質，其於SIRS患者顯示有進展性增加或維持於 «較高量’甚且僅管其於敗血症患者中之表現減少。此 等a白貝預期可為特別可用以診斷SIRS及預測敗血症發生 之生物標記。 皇使用抗體陣列鑑別生物標記 ^-1_樣本收集和命折 建立SIRS組和敗血症組之參照生物標記輪廓。每隔24小 時從各研究組群中採集血液樣本。來自敗血症組之樣本包 括彼等於進入研先當天（第1天）、於臨床凝為敗血症之前48 小時（-48小時）和臨床疑為敗血症，發生當天（〇時）採集者。於 此實例中，於0時分析之SIRS組和敗血症組分別由^和丨“固 個體所組成，而-48小時分析之SIRS組和敗血症組分別由1〇 和11個個體所組成。 .多工分挤 使用美國專利弟5，981，180號（“ ‘ 180專利”）中說明之方法 同時即時分析各樣本中之生物標記組，其全文併列為本文 之參考，並特別針對其全體方法論之技術、成珠技術、系 統硬體和抗體偵測。說明於‘180專利之免疫分析係為可用 89293 -81 - 200418992 於本發明方法令之代表性免疫分析型式。再者，使用於本 =中之生物標記並不限制可用於本發明方法中之生物標記 知圍。於此分析時’需合成微粒基臂，其中該基質係由不 同之微粒組所組成。各微粒組均具有數千個可區別之抗體 捕捉刎，其固足於微粒表面且藉由插入兩種不同量之螢光 木料而τ有色標。兩種螢光染料之比例可使各微粒組具有· 可區別之放射光譜，許可於匯集各微粒組之後，於組合中. 鑑刎倣粒。美國專利第6,268,222和6,599,331號亦整體併列’ 為本文之參考，且特別針·對其各種標示微粒之方法應用於· 多工分析之技術。 將經標示之珠組匯集並與本研究中所用個體之血漿樣本 合併。經標示株之鑑別係藉由將其以單一縱列通過流動裝 置/、八有了激發螢光標示之雷射光束可檢視各微粒。再 以光學偵測器測定各珠之放射光譜以將·其歸類至適當組別 。因為已知各微粒組之各;抗體捕捉劑之特性，故可將各抗 體專一性與通過該流動裝置之個別微粒比對。美國專利第 6,592,822號亦整體併列為本為之’參考，且特別針對其可應 9 用於此型式之多工分析之·多分析物診斷系統技術。 要測定結合於某微粒組之分析:物之量，需加入可與結合 - 於個別分析物之抗體形成複合物_.、之探針分子。於本實例中 - ，該探針分子係為一種經螢光標··示之二次抗體。以具有不 同激光波長之二次雷射將探針上:之螢光激發，使二次抗體 上之勞光標示可與微粒標示用之螢光區別。二次光學偵測 器測定二次抗體上之螢光標示之放射光以測定與捕捉抗體 89293 -82- 200418992 所結合之分析物複合之二次抗體量。以此方式，可快速且 即時以單一反應測定被珠狀物捕捉之多種分析物之量。 3.3數攄分析和結巢 測定各樣本中可結合162種不同抗體之分析物濃度。於此 實例中，各分析物係為生物標記，且其於樣本中之濃度可 為該生物標記之特性。以列於下面表14中之162種不同抗體 試劑分析生物標記，其可購自德州Rules Based Medicine of Austin 〇該抗體試劑·之分類係依其專一性結合於（1)血液循 環性蛋白質生物標記構件，（2)正常結合於與各種病原體有 關之分子之循環性抗體（指明經與各生物標記有關之病原 體確認），或（3)與各種疾病狀態有關之自體抗體生物標記。 表14 (1)循環性血清構件 甲胎蛋白 輔基蛋白A1 輔基蛋白cm 輔基蛋白Η · β - 2細球蛋白 腦源性神經營養因子 補體3 癌抗原125 癌胚抗原（CEA) 肌酸激酶-MB 親皮質素分泌因子‘ 89293 -83 - 200418992 c反應蛋白 上皮中性粒細胞激活胜肽-78 (ENA-78) 脂肪酸結合蛋白 第七因子 鐵蛋白 纖維蛋白原 生長荷爾蒙 粒細胞巨噬細胞-集落刺激因子 麩胱甘肽S-轉移酶 細胞間附著分子1 (ICAM 1) 免疫球蛋白A 免疫球蛋白E 免疫球蛋白Μ 間白素-10 間白素-12 ρ 40 間白素-12 ρ 70 間白素-13 間白素-15 間白素-16 間白素-18 間白素-1 α 間白素-1β 間白素-2 間白素-3 -84- 89293 200418992 間白素-4 間白素-5 間白素-6 間白素-7 間白素-8 胰島素 脂痩素（leptin) 脂蛋白（a) 淋巴細胞激活素 巨噬細胞趨化蛋白-1 (MCP-1) 巨噬細胞源性化學激活素（MDC) 巨噬細胞炎症蛋白-1β (ΜΙΡ_1β) 基質金屬蛋白酶-3 (ΜΜΡ-3) 基質金屬蛋白酶-9 (ΜΜΡ-9) 肌球素 前列腺酸性磷酯酶 前列腺特異抗原，游離 調節活化，正常Τ細胞表現和分泌（RANTES) 血清澱粉樣蛋白Ρ 幹細胞因子 血清麩胺酸草醋酸轉胺酶（SGOT) 甲狀腺結合球蛋白 組織金屬蛋白酶抑制劑1 (TIMP 1) 腫瘤新生因子-a (TNF-a) -85- 89293 200418992 腫瘤新生因子-β (TNF-β) 促血小板生成素 甲狀腺刺激荷爾蒙（TSH) 溫章伯氏因子（von Willebrand Factor) (2)可結合指定之病原體標記之抗體 腺病毒 百曰咳桿菌（Bordetella pertussis) 空腸彎曲菌（Campylobacter jejuni) 肺炎披衣菌（Chlamydia pneumoniae) 砂眼披衣菌（Chlamydia trachomatis) 霍亂毒素 霍亂毒素（次單元B) 細胞巨大病毒 白喉毒素 EB病毒（Epstein-Barr virus)-病毒殼蛋白抗原 EB病毒早期抗原 EB病毒核抗原 幽門螺旋菌（Helicobacter pylori) B型肝炎核心 B型肝炎封套 B型肝炎表面（Ad) B型肝炎表面（Ay) C型肝炎核心 C型肝炎非結構性蛋白3 -86- 89293 200418992 C型肝炎非結構性蛋白4 C型肝炎非結構性蛋白5 D型肝炎 A型肝炎 E型肝炎病毒（orf2 3KD) E型肝炎病毒（orf2 6KD) E型肝炎病毒（orf3 3KD) 人類免疫缺陷病毒-1 p24 人類免疫缺陷病毒-1 gp 120 人類免疫缺陷病毒-1 gp41 人類乳突狀病毒（Human Papilloma Virus) 單純皰奢病毒（Herpes Simplex Virus)-1/2

單純皰療病毒（Herpes Simplex Virus) -1 gD

單純皰參病毒（Herpes Simplex Virus)-2 gG 人類嗜T-細胞病毒1/2

流行性感冒A 流行性感冒A H3N2

流行性感冒B 利什曼原蟲（Leishmania donovani) 莱姆病（Lyme Disease)病毒 肺炎分枝桿菌（Mycobacteria pneumoniae) 結核分枝桿菌（Mycobacteria tuberculosis) 月思腺炎病毒（Mumps virus) 副流行性感冒1 -87- 89293 200418992 副流行性感冒2 副流行性感冒3 小兒麻痒病毒 呼吸道融合病毒 德國麻療病毒 麻療病毒 溶血素O (SLO) 枯西錐蟲（Trypanosoma cruzi) 梅毒螺旋體15KD 梅毒螺旋體p47 破傷風桿菌毒素 毒漿原蟲 水痘 (3)自體抗體 抗酵母菌（Saccharomyces cerevisiae)抗體（ASCA) 抗-β-2膽蛋白 抗-中心粒蛋白Β 抗膠原蛋白第1型 抗膠原蛋白第2型 抗膠原蛋白第4型 抗膠原蛋白第6型 抗補體Clq 抗細胞色素P450 抗雙股DNA(ds DNA) 88- 89293 200418992 抗組蛋白 抗組蛋白HI 抗組蛋白H2a 抗組蛋白H2b 抗組蛋白H3 抗組蛋白H4 抗熱休克同源蛋白質70 (HSC 70) 抗熱休克蛋白質32 (HO) 抗熱休克蛋白質65 抗熱休克蛋白質71 抗熱休克蛋白質90 α 抗熱休克蛋白質90 β 抗胰島素 抗組胺酸基-tRNA合成酶（JO-1) 抗粒腺體 柷髓過氧化酶（核周自體抗體對中性粒細胞胞漿抗原） 抗胰小島細胞（麩胺酸脫羧酶自體抗體） 抗增殖性細胞核抗原（PCNA) 多發性肌炎_1(PM-1) 抗蛋白酶3 (胞漿自體抗體對中性粒細胞胞漿抗原）

抗核醣體P 抗核醣核蛋白（RNP) 抗核醣核蛋白（a) 抗核醣核蛋白（b) 89293 -89- 200418992 抗拓撲異構酶I(Scl 70) 抗核醣核蛋白質史密斯Ag(Smith) 抗修格連氏徵候群A(Ro)(S S A) 抗修格連氏徵候群B(La)(SSB) 抗-T3 抗-T4 抗甲狀腺球蛋白 抗甲狀腺微粒體 抗-tTG(組織轉麩胺醯胺酶，乳糜瀉） 各種万法均可用以鑑別可產生用以將個體歸類為81汉§或 敗血症組之判定原則之特性。吾人選用之方法為羅吉斯迴 歸和魏可遜符號等級試驗。 斯遛齬之數攄合析 使用羅吉斯迴歸分析生物標記免疫分析之定量結果。將〇 時樣本之前26個包含可區別SIRS和敗血症之輪廓之生物標 己i於表1 5中。將-48小時族群之前14個包含可區別sirs和 敗血症之輪廓之生物標記列於表16中。表15和16中之數據 t貝彼等生物標1己包含可區別SIRS和敗血症組之輪廓。 表15 ---~包含一種格式之生物標記 :〇時檨兄 生物標記 ------------- _ 重要度_ 肌球蛋白 --—-- 0.1958 ——蛋白酶-9(ΜΜΡ-9) ^"" -----—---- 0.1951 ——炎症蛋白-1β(ΜΙΡ_1β) --------—-- 0.1759 89293 200418992 C反應蛋白 0.1618 間白素（IL)-16 0〇1362 單純癌疼病毒-1/2 0.1302 抗補體Clq抗體 0.1283 抗增殖性細胞核抗原（PCNA)抗體 0.1271 抗膠原蛋白第4型抗體 0.1103 組織基質金屬蛋白酶-1抑制劑（TIMP-1) 0.1103 麩胱甘肽S-轉移酶（GST) 0.1091 抗酵母菌（Saccharomyces cerevisiae)抗體 (ASCA) 0.1034 生長因子（GH) 0.1009 小兒麻痒病毒 0.0999 IL-18 0.0984 甲狀腺結合球蛋白 0.0978 抗-tTG(組織轉麩胺醯胺酶，乳糜瀉）抗體 0.0974 脂瘦素 0.0962 抗組蛋白H2a抗體 0.0940 B2-細球蛋白 0.0926 幽門螺旋菌（Helicobacter pylori) 0.0900 白喉毒素 0.0894 C型肝炎核心 0.0877 血清麩胺酸草醋酸轉胺酶 0.0854 C型肝炎非結構性蛋白3 0.0845 C型肝炎非結構性蛋白4 0.0819 89293 -91- 200418992 表16 包含一種格式之生物標記 -4 8 小* |

亦使用魏可遜符號等級 標記。藉由於特定時間 體之相蛋自質生物 14之生物標記指定P-值1 咖叫 23及25個患者所構成；、_2敗血症和咖族群（表⑺分別由 八別由25及 4小時义敗血症和SIRS族群（表1S) 89293 : 目患者所構成；且·48小時之敗血症和SIRS族 193 -92 200418992 群（表19)分別由25及19個患者所構成。 表17 _0時樣品之生物標記P-值 生物標記 p-值 IL - 6 2.1636e-06 C反應蛋白 1.9756e-05 TIMP-1 7.5344e-05 IL-10 8.0576e-04 甲狀腺刺激荷爾蒙 0.0014330 IL-8 0.0017458 MMP-3 0.0032573 MCP-1 0.0050354 麩胱甘肽S-轉移酶 0.0056200 MMP-9 0.0080336 β-2細球蛋白 0.014021 抗組蛋白H2a 0.023793 ΜΙΡ-1β 0.028897 Myoglobin 0.033023 補體Clq 0.033909 ICAM -1 0.036737 脂痩素 0.046272 輔基脂蛋白cm 0.047398 89293 -93 - 200418992 表18 -24小時樣品之生物標記p-值 生物標記 p-值 IL-6 0.00039041 TIMP-1 0.0082532 補體Clq 0.012980 甲狀腺刺激荷爾蒙 0.021773 HSC 70 0.03 1430 SSB 0.033397 MMP-3 0.035 187 降鈣素 0.038964 促血小板生成素 0.040210 第七因子 0.040383 組蛋白H2a 0.042508 脂肪酸結合蛋白 0.043334 表19 -48小時樣品之生物標記p_值 生物標記 Ρ-值 IL-8 0.0010572 C反應蛋白 0.0028340 IL-6 0.0036449 ICAM-1 0.0056714 ΜΙΡ-1β 0.016985 89293 -94- 200418992 甲狀腺結合球蛋白 0.025 183 前列腺特異抗原9游離 0,041397 輔基蛋白質A1 0.043747 此外，p-值係根據朝敗血症進展族群之特性之進展性出 現或消失，以與實例1.4.7，表11-13相同之方式。於此分析 時，族群大小與顯示於上者相同，除了於-48小時之敗血症 與SIRS族群分別為22及18個患者。 表20 與基線有差異之特性之P-值:〇時樣品 生物標記 P-值 C反應蛋白 0.0088484 MMP 9 0.022527 T3 0.043963 表21 . 與基線有差異之特性之P-值：-24小時樣品 生物標記 Ρ-值 溫章伯氏因子 0.0047043 HIV1 gp41 0.011768 胰小島細胞GAD 0.03073 1 肌酸激酶MB 0.043384 輔基蛋白質Η 0.046076 89293 -95- 200418992 表22 與基線有差異之特性之p _值：-4 8小時樣品 生物標記 p-值 胰小島細胞GAD 0.00023455 T3 0.0010195 HIV1 p24 * 0.031107 A型肝炎 0.045565 鐵蛋白 0.048698 Ι3·ϋ吏用多重I迴歸嶎（MART)夕激壚分般 如上述實例1·4·5中之說明，使用MART分析從0時樣本取 付之生物標纪輪廓。於此分析中，〇時之敗血症族群針對23 位患者且SIRS叙群針對25位患者。分析列於表14中之所有 164個生物標記之對應特性。經契合之模式包括24個樹，且 該模式許可特性間無交互作用。使用十次交又驗證，該模 式可將25個SIRS患者中之17個及23個敗血症患者中之口個 正確分類，其模式感度為74%且專—性為㈣。將生物標記 依此模式測得之重要性於表23中依序_。將所有重:性 為零之特性排除。有“ i，，記號之標記代麵敗血症喝 之敗血症進展時有較大量之進展，而 展量較低。 …1者表示其進 表23

200418992 甲狀腺刺激荷爾蒙 11,915463 -1 IL-6 11.284493 1 MCP-1 11.024095 1 β-2細球蛋白 7.295072 1 麩胱甘肽S-轉移酶 5.821976 1 血清澱粉樣蛋白Ρ 5.546475 1 IL-10 4.771469 1 ΤΙΜΡ-1 4.161010 1 ΜΙΡ-1β 3.040239 1 輔基蛋白質CIII 2.858158 -1 實例4 :使用SELDI-TOF-MS鑑別生物標記 4.1檨本製備和實驗設計 SELDI-TOF-MS(SELDI)再提供另一種根據本發明方法測 定個體之敗血症或SIRS狀態之方法。SELDI可以無偏頗方 式確認從生物樣本取得之生物標記輪廓之預測性特性。以 雷射光束將樣本離子化，並測定離子之m/z值。再以任何上 述演算法分析包含各種離子之生物標記輪廓。 此處說明使用WCX2樣本平台，或“晶片”之代表性SELDI 實驗。各型式之晶片均吸附特徵生物標記；因此，可從相 同樣本取得不同之生物標記輪廓，其視所使用之特定型式 晶片而定。從每次之慣用協定收集於PPTTM Vacutainer™ 管（紐澤西，法蘭克林湖，Becton，Dickinson and Company) 之血液製備血漿（500微升）。將血漿分裝成一份100微升並貯 89293 -97- 200418992 存於-80°C。根據廠商之建議書5使用Biomek 2000裝置 (Beckman Coulter)於Ciphergen生物資料處理器中製備 WCX-2晶片（加州，佛蒙特，Ciphergen Biosystems公司）。一 個WCX-2晶片有八個結合點。晶片上之點可連續兩次以50 微升之50%乙腈洗滌5分鐘，再以50微升之10 mM HC1洗10 分鐘，最後再以50微升之去離子水洗5分鐘。洗滌之後，於 注入血漿樣本之前，將晶片以兩次50微升之WCX2缓衝液調 整5分鐘。用於WCX2晶片，及其他晶片型式包括：H50、IMAC 和SAX2/Q10晶片之洗滌緩衝液列於表24中。 表24 晶片型式 SELDI洗滌緩衝液 IMAC3 經磷酸鹽緩衝之鹽水，pH 7.4, 0.5 M NaCl 和 0·1% Triton X-100 . WCX2 20 mM 崎酸銨，pH 6.0，含 0.1% Triton X-100 SAX2/Q10 100 mM 醋酸铵，pH 4.5 H50 0.1 M NaCl，10% ACN 和 0.1%三氟醋酸

對於經調整之WCX-2晶片上之各斑點，加入10微升之血 漿樣本和90微升之WCX-2結合緩衝液（20 mM醋酸銨和0.1 % Triton X-100，pH 6)。於室溫下培育30分鐘後，以100微升 之WCX-2結合緩衝液將其上之斑點洗滌兩次，再以100微升 之去離子水洗滌兩次。再將晶片乾燥並以0.75微升之基質材 料飽和溶液將斑點洗滌兩次·，例如：溶於50%乙腈，0.5% TFA -98- 89293 200418992 之α-氰羥基肉桂酸（99%)(CHCA)或芥子酸（SPA)水溶液。再 使用顯示於表25中之實驗條件以SELDI-TOF-MS讀取有血 漿蛋白質結合之晶片。 表25 SELDI讀取條件 實驗設定 基質：SPA 基質：CHCA 偵測器電壓 2850 V 2850 V 2850 V 偏折板質量 1000 Da 1000 Da 1000 Da 數位化轉換 器 500 MHz 500 MHz 500 MHz 高質量 75,000 Da 75,000 Da 75,000 Da 聚焦質量 6,000 Da 30,000 Da 30,000 Da 強度（低/高） 200/205 160/165 145/150 感度（低/高） 6/6 6/6 6/6 燃燒/維持斑 點 91/65 91/65 91/65 表26-49顯示於表25指定之條件下於血漿樣本上進行之 SELDI實驗之p-值。於各表中均顯示晶片型式，其為WCX-2 、H50、Q10或IMAC。對於各晶片，於高能量（參見表25) 下進行其與CHCA基質和SPA基質或於低能量下進行其與 SPA基質之實驗。再者，對於各基質，均分析來自0時、-24 小時、-48小時之樣本。使用無參數試驗測定所列離子之p- 89293 -99- 200418992 值5其於此例中為魏可― 了遜付號等級檢定。僅列出對應之p- 值小於〇»〇5之離予（下矣、 1卜表中爻空白方塊表示樣本中彼等p-值 不小於〇β〇5之離子）。最後，對於各樣本9針對敗血症族群 與SIRS族群之特性強度與基線之差異分配其^值，其於下 表中標明為“與基線有差異之特性”之p-值（如前述實例 1.4.7)。表中所列之m/z值之實驗誤差約為±2%。 89293 100- 200418992 表26 SELDI生物標記p-值：WCX-2晶片 基質 (能量） CHCA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 2290.1 0.000438 2579.4 0.001681 2004.6 0.000166 2 3163.9 0.000438 3357.4 0.001681 2004 0.000448 3 6470.6 0.000438 3340.9 0.001826 2005.5 0.000448 4 1773.1 0.000917 1394.6 0.00295 1935.7 0.000916 5 2623.8 0.001253 2195.7 0.003188 1909.1 0.001011 6 4581.4 0.002823 2818.6 0.004009 1892.3 0.001629 7 6474.2 0.00303 17107 0.005392 2003.5 0.001787 8 1645 0.003997 2220.2 0.005392 1939.1 0.002348 9 3065.5 0.004278 18688 0.006229 2035.4 0.002348 10 2775.1 0.004576 2613.3 0.007179 2011.7 0.002567 11 6435.5 0.004893 5827.3 0.007179 2042.4 0.003061 12 3195.9 0.006362 5894.2 0.007701 1916.1 0.003338 13 3781.7 0.006362 5892.8 0.01013 2041.5 0.003637 14 6780.5 0.006362 2813.9 0.011578 1848.6 0.003959 15 1657.1 0.007706 3728.9 0.011578 2041.8 0.004307 16 2579.4 0.007706 1401 0.012367 1722.7 0.005084 17 1628.9 0.008735 1726.1 0.012367 1877.1 0.005084 18 5901.2 0.008735 6673.1 0.013202 1911.2 0.005084 19 6667.5 0.008735 2806 0.014086 6676.7 0.005084 20 2438.8 0.010504 5897.8 0.014086 1878.3 0.005517 21 2793.8 0.010504 37828 0.01502 1879.2 0.005517 22 2811.5 0.010504 6674.5 0.01502 1692 0.005982 23 1627.8 0.01116 2705.9 0.016007 2003.1 0.005982 24 3085.5 0.01116 2793.8 0.016007 2039.2 0.005982 25 3218.6 0.01116 5885.2 0.017049 2042.1 0.005982 26 5885.2 0.01116 6474.2 0.017049 6674.5 0.005982 27 5894.2 0.01185 3331.5 0.018149 2101.2 0.007016 28 2798.3 0.012578 3718.9 0.018149 1879.5 0.00759 29 5897.8 0.012578 5891.2 0.018149 2008.4 0.00759 30 3336.2 0.013343 5901.2 0.020532 1687.5 0.008204 31 3974.5 0.013343 5902.2 0.02182 1689.9 0.008204 32 7483.6 0.013343 5889.9 0.023176 1878.8 0.008861 33 1379.4 0.014149 2039.2 0.026105 4858.8 0.008861 34 3235.8 0.014149 4560.7 0.026105 1855.2 0.009563 35 3238.3 0.014149 5850.4 0.026105 2432 0.009563 36 3761.8 0.014997 3769.5 0.027683 1888.2 0.010314 37 5892.8 0.014997 11639 0.029341 1657.1 0,011115 38 3319.9 0.015888 3346.9 0.029341 1719.7 0.01197 39 1394.6 0.016824 4574.2 0.029341 1879.7 0.01197

89293 101 200418992 40 3333.5 0.017807 6676.7 0.029341 1609.2 0.01288 41 1946.9 0.01884 4567.4 0.031082 2015.1 0.01288 42 2238.6 0.01884 2342.5 0.032909 3333.5 0.01288 43 3299.6 0.01884 2811.5 0.032909 2002.2 0.01385 44 5827.3 0.01884 2340.9 0.034824 2018.1 0.01385 45 3205.2 0.019923 2474.5 0.034824 6673.1 0.01385 46 2274.7 0.021059 2168.3 0.036832 1341.2 0.014882 47 2813.9 0.021059 2683 0.038936 1883.3 0.014882 48 3331.5 0.021059 3038.5 0.038936 3331.5 0.014882 49 3780.6 0.022249 3753.8 0.038936 1380.6 0.01598 50 1724.7 0.023497 2340.1 0.041138 1923.2 0.01598 51 2678.1 0.023497 3412.9 0.041138 3582 0.01598 52 5889.9 0.023497 6470.6 0.041138 1354.4 0.018385 53 2673.4 0.024804 6691.5 0.041138 1605.9 0.018385 54 6635.1 0.026171 1605.1 0.043443 1606.5 JX018385 55 1793.8 0.027603 34—50.1 0.043443 1371.1 0.019699 56 2976.7 0.027603 1399.5 0.045854 1940.2 0.019699 57 2359.7 0.029099 1402 0.045854 3085.5 0.019699 58 5891.2 0.029099 7637.9 0.045854 6470.6 0.019699 59 1627 0.030664 4871.3 0.048373 1384.2 0.021093 60 2654.3 0.030664 5810 0.048373 1913.7 0.021093 61 5030.1 0.030664 5867.2 0.048373 2045.1 0.021093 62 5748.8 0.030664 6667.5 0.048373 2051.4 0.021093 63 5962.8 0.030664 1125.7 0.022569 64 3315.7 0.032299 1781.2 0.022569 65 5564.3 0.034006 6780.5 0.022569 66 2538.5 0.035789 1779.1 0.024132 67 6561.5 0.035789 2469.2 0.024132 68 3094.3 0.037649 2775.1 0.025786 69 1827.7 0.039588 1777.8 0.027535 70 5837.7 0.039588 1836.1 0.027535 71 5514.7 0.041611 1420.4 0.031332 72 1472.3 0.043718 2059.5 0.031332 73 2208.4 0.043718 6474.2 0.031332 74 2660.4 0.043718 1694.9 0.03339 75 2951.7 0.043718 1917.4 0.03339 76 1273.2 0.045912 2768.8 0.03339 77 1625.3 0.045912 3126 0.03339 78 1630.7 0.045912 4862.4 0.03339 79 5528.5 0.045912 2029.5 0.035559 80 1626.1 0.048197 1175.8 0.037845 81 2195.7 0.048197 1875.7 0.037845 82 2818.6 0.048197 1880.7 0.037845 83 3758.9 0.048197 1688.3 0.040251 84 2033.4 0.040251 85 5058 0.040251 86 5129.9 0.040251 87 1602.6 0.042783 89293 -102- 200418992 88 4370.5 0.045445 89 10261 0.048242 90 1991.2 0.048242 91 2062.3 0.048242 92 3485.1 0.048242 表27 SELDI生物標記p-值：WCX-2晶片 基質 (能量） SPA基質(高能量） 樣品： 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P -m/z P m/z P 1 5308.9 0.001309 2802 0.004655 7300.2 0.01197 2 5302.8 0.001416 6777.8 0.005011 7642.6 0.01385 3 5357.6 0.00193 3386.7 0.008254 7651.1 0.01385 4 5335.1 0.002082 5302.8 0.008843 12194 0.014882 5 5324.4 0.002805 37933 0.01013 7653.8 0.014882 6 5316.6 0.003244 7603 0.01013 11591 0.017146 7 5379.4 0.004017 2834.7 0.010833 7624.5 0.018385 8 37933 0.00462 6838.2 0.01502 7658.6 0.019699 9 5312.5 0.006071 7132.1 0.01502 7469.1 0.022569 10 5388.9 0.006071 11676 0.016007 11628 0.027535 11 5222.9 0.008998 74907 0.016007 12385 0.027535 12 5372.2 0.008998 1138 0.018149 7665.2 0.031332 13 5232.4 0.009591 1893.8 0.019309 11635 0.035559 14 11591 0.010217 1005.9 0.023176 3669.3 0.040251 15 11880 0.011577 6819.8 0.023176 4200.7 0.042783 16 11272 0.012314 7126.6 0.024604 4214 0.045445 17 12385 0.014775 7711.6 0.026105 7862.1 0.045445 18 5343 0.014775 2893.6 0.027683 7496.4 0.048242 19 10509 0.015685 5286.1 0.027683 7682.9 0.048242 20 5349.2 0.020991 6604.5 0.027683 21 5878.5 0.020991 7140.1 0.027683 22 5295 0.023506 9281 0.027683 23 5894 0.023506 1009.6 0.029341 24 11773 0.026274 3588 0.029341 25 37131 0.026274 29435 0.031082 26 5260.6 0.027758 30235 0.031082 27 5902.3 0.027758 3360.7 0.031082 28 5910.4 0.029312 5277.2 0.031082 29 5906.8 0.034422 1069.6 0.032909 30 5254.8 0.036282 50968 0.032909 31 5277.2 0.036282 6591.3 0.032909 32 10631 0.044585 7582.4 0.032909 89293 -103- 200418992 33 11628 0.04689 1014 0.034824 34 5240 0.04689 7122.3 0.034824 35 9487.6 0.04689 5056.1 0.036832 36 12588 0.049292 7113.7 0.036832 37 15094 0.049292 73096 0.036832 38 5271.3 0.049292 3369.2 0.038936 39 5885.5 0.049292 5324.4 0.038936 40 6985.9 0.038936 41 6998.9 0.038936 42 7682.9 0.038936 43 1003.5 0.041138 44 11641 0.041138 45 3639.3 0.041138 46 3945.5 0.041138 47 3952.5 0.041138 48 7149.2 0.041138 49 5240 0.043443 50 6959.8 0.043443 51 77136 0.043443 52 11716 0.045854 53 14244 0.045854 54 4269.7 0.045854 55 9194.8 0.048373 表28 SELDI生物標記p-值：WCX-2晶片 基質 (能量） SPA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P nt/z P m/z P 1 3490.7 0.000339 1685.2 0.000848 1882.6 0.002804 2 5356.2 0.001655 6722.9 0.000926 2671.1 0.002804 3 3033.8 0.001788 4584.8 0.001201 2101 0.005084 4 37873 0.001788 12256 0.001423 62628 0.005517 5 5264 0.002606 1182.2 0.001981 2787.9 0.008204 6 7560.1 0.002805 1633.6 0.001981 9900.3 0.008861 7 19083 0.003017 1683.8 0.002148 3077.6 0.01598 8 3681.1 0.004309 1686.4 0.002328 2775.5 0.017146 9 2469.6 0.005302 6938.4 0.002328 5810.7 0.017146 10 2583.7 0.006071 4580 0.002521 2274.5 0.018385 11 2379.3 0.006936 4588.7 0.002521 2635.1 0.021093 12 9126.4 0.007408 6705.1 0.002521 2615.7 0.022569 13 11836 0.007909 9155 0.002521 1679.4 0.024132 14 3980,6 0.007909 1949.5 0.003717 2528.2 0.024132 15 2604.6 0.008998 2553.8 0.003717 1838.9 0.027535 89293 -104- 200418992 16 2573.3 0.010879 9687.7 0.004009 3410.6 0.027535 17 3084.4 0.010879 1593.2 0.004655 7560.1 0.027535 18 11578 0.013092 1946.2 0.004655 1821.2 0.031332 19 3986 0.013092 9605.1 0.004655 1253.9 0.03339 20 5903.8 0.013092 2799.9 0.005797 1823 0.03339 21 5907.6 0.013092 6750.5 0.006229 3599.6 0.03339 22 5909.7 0.013092 1477.6 0.00669 6697.9 0.03339 23 7554.1 0.013092 2196.2 0.00669 1388.9 0.037845 24 2683.7 0.013912 2735.6 0.00669 1818.3 0.037845 25 5268.7 0.013912 2960.8 0.00669 5268.7 0.037845 26 1627 0.014775 6702.5 0.00669 5903.8 0.040251 27 6969.7 0.014775 1925.8 0.007701 6694.6 0.040251 28 2663.3 0.015685 2811.2 0.007701 11472 0.042783 29 3017.9 0.016642 2193.3 0.008254 11489 0.042783 30 5250.5 0.016642 3042 0.008254 11532 0.042783 31 5906.1 0.016642 2809.6 0.008843 11578 0.042783 32 9129 0.017649 2170.5 0.009468 37873 0.042783 33 2600.8 0.018709 2831.5 0.009468 6699.7 0.042783 34 3977.8 0.018709 3364.2 0.009468 6701 0.042783 35 5321.3 0.018709 4573.6 0.009468 1253.1 0.045445 36 7636.7 0.018709 2809.3 0.01013 7622.6 0.045445 37 9108.6 0.019822 2809.8 0.01013 10098 0.048242 38 2697.6 0.020991 1471.6 0.010833 1863 0.048242 39 7564.6 0.020991 2064.9 0.010833 2055.5 0.048242 40 2815.7 0.022218 2791.7 0.010833 3104.4 0.048242 41 1829.3 0.023506 2801.3 0.010833 42 11797 0.024858 37873 0.010833 43 5991.8 0.024858 6508.4 0.010833 44 2281.6 0.026274 6701 0.010833 45 2996.8 0.026274 2171.9 0.011578 46 1898.4 0.029312 4595.5 0.011578 47 3991.5 0.029312 4865.3 0.011578 48 1987.2 0.030939 7170.7 0.011578 49 7244.8 0.030939 1688.5 0.012367 50 2320.5 0.032642 17749 0.012367 51 25044 0.032642 2806.4 0.012367 52 2505.3 0.032642 6699.7 0.012367 53 4564.4 0.032642 6951.3 0.012367 54 5900.8 0.032642 1701.2 0.013202 55 6977.4 0.032642 2795.9 0.013202 56 1666.5 0.034422 6509.3 0.013202 57 10098 0.036282 1877.3 0.014086 58 1995.7 0.038226 19083 0.014086 59 2582.4 0.038226 2173.6 0.014086 60 11766 0.040256 3017.9 0.014086 61 3575.5 0.040256 4600.9 0.014086 62 5911.6 0.040256 1567.6 0.01502 63 2546.6 0.042375 2808.7 0.01502 89293 -105- 200418992

64 3047.9 0.044585 6697.9 0.01502 65 8298.4 0.044585 1220.4 0.016007 66 11472 0.04689 1460.3 0.016007 67 11732 0.04689 1460.7 0.016007 68 2151.8 0.04689 2184.9 0.016007 69 2171.9 0.04689 3025.6 0.016007 70 2681.6 0.04689 3355.4 0.016007 71 3021.1 0.04689 3367.9 0.016007 72 3410.6 0.04689 3871.9 0.016007 73 3913 0.04689 4900.9 0.016007 74 4911 0.04689 6506.1 0.016007 75 9132.4 0.04689 1664 0.017049 76 4670.1 0.049292 6926.2 0.017049 77 7566.2 0.049292 3021.1 0.018149 78 3490.7 0.018149 79 4592.3 0.018149 80 9834.1 0.018149 81 2813.6 0.019309 82 3362 0.019309 83 9230.4 0.019309 84 10661 0.020532 85 1454.4 0.020532 86 1595.8 0.020532 87 2719 0.020532 88 3030.9 0.020532 89 5297.9 0.020532 90 6771.4 0.020532 91 7106.1 0.020532 92 97077 0.020532 93 1234.5 0.02182 94 1684.7 0.02182 95 1947.7 0.02182 96 2803.1 0.02182 97 6514.8 0.02182 98 7669.7 0.02182 99 2180 0.023176 100 2817.9 0.023176 101 2841 0.023176 102 3442.4 0.023176 103 6502.2 0.023176 104 2287.5 0.024604 105 3939.8 0.024604 106 5215.7 0.024604 107 1772.5 0.026105 108 2397.5 0.026105 109 2692.2 0.026105 110 3009.7 0.026105 111 3945.3 0.026105 89293 -106- 200418992 112 3973.5 0.026105 113 9900.3 0.026105 114 1478.3 0.027683 115 1690.2 0.027683 116 2443.3 0.027683 117 4002.7 0.027683 118 6192.3 0.027683 119 6527.3 0.027683 120 6694.6 0.027683 121 9639.8 0.027683 122 1416.4 0.029341 123 1476.4 0.029341 124 1699.9 0.029341 125 3748.9 0.029341 126 4734.4一 0.029341 127 6566 0.029341 128 11615 0.031082 129 1233.7 0.031082 130 1448.7 0.031082 131 1863.6 0.031082 132 2486.9 0.031082 133 2815.7 0.031082 134 2826.4 0.031082 135 11648 0.032909 136 1181.3 0.032909 137 1431.3 0.032909 138 1457.3 0.032909 139 1479.5 0.032909 140 2978.7 0.032909 141 74349 0.032909 142 8280.7 0.032909 143 9132.4 0.032909 144 9994.9 0.032909 145 2092.8 0.034824 146 2225 0.034824 147 1669.8 0.036832 148 3104.4 0.036832 149 3499.2 0.036832 150 6933.9 0.036832 151 10082 0.038936 152 1661.8 0.038936 153 6909.5 0.038936 154 6929.9 0.038936 155 11633 0.041138 156 1938.3 0.041138 157 2843.4 0.041138 158 1455.8 0.043443 159 2440.7 0.043443 89293 -107- 200418992 160 2683.7 0.043443 161 3917.6 0.043443 162 75273 0.043443 163 7655 0.043443 164 1189 0.045854 165 1432.9 0.045854 166 1844.6 0.045854 167 3461.1 0.045854 168 3465.6 0.045854 169 3991.5 0.045854 170 1496.5 0.048373 171 17459 0.048373 172 1861.2 0.048373 173 6543.1 0.048373 174 6917.4 0.048373 表29 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值：WCX-2晶片 基質 (能量） CHCA基質(低能量） 樣品。 0小時 -24小時 48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 1273.2 0.000218 2342.5 0.000306 3582.0 7.09E-05 2 1827.7 0.000917 2340.9 0.000648 1855.2 0.000281 3 1332.5 0.00325 1422.1 0.005797 5366.9 0.001064 4 1605.9 0.005962 1737.8 0.012367 1883.3 0.001659 5 1773.1 0.006362 3178.5 0.013202 1888.2 0.002055 6 1158.8 0.007706 3776.7 0.013202 2469.2 0.002533 7 4980.0 0.007706 1627.8 0.018149 1911.2 0.003436 8 4001.1 0.008207 1736.7 0.019309 2041.5 0.003436 9 1147.4 0.009294 4001.1 0.02182 2041.8 0.003436 10 1095.9 0.009883 1860.4 0.023176 2042.1 0.003436 11 6635.1 0.01116 1738.5 0.026105 1083.5 0.003795 12 1198.6 0.01185 1267.0 0.027683 1939.1 0.004187 13 4407.6 0.01185 1793.8 0.027683 2042.4 0.004187 14 4408.0 0.01185 14975. 0.032909 4937.3 0.004187 15 3582.0 0.012578 1523.5 0.032909 5399.9 0.004187 16 1606.5 0.013343 4796.8 0.032909 2011.7 0.004614 17 1173.8 0.014149 2340.1 0.034824 1994.2 0.005078 18 1731/7 0.014149 1628.9 0.038936 2051.4 0.005078 19 1213.0 0.014997 1875.7 0.041138 1371.1 0.006132 20 1605.1 0.014997 5347.5 0.043443 2045.1 0.006132 21 1162.1 0.015888 1627.0 0.045854 1081.3 0.008827 22 1276.6 0.016824 3927.7 0.045854 1625.3 0.008827 23 2109.1 0.016824 1155.3 0.009644 89293 -108- 200418992 24 2754.9 0.016824 1793.8 0.009644 25 1756.5 0.017807 2029.5 0.009644 26 1461.0 0.01884 1118.9 0.010525 27 1525.2 0.01884 2048.7 0.010525 28 5366.9 0.01884 1940.2 0.011475 29 1146.6 0.019923 1731.7 0.012498 30 1205.3 0.019923 1909.1 0.012498 31 1523.5 0.019923 2015.1 0.012498 32 3238.3 0.019923 2062.3 0.012498 33 1345.4 0.021059 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134 3362.0 0.045854 135 5770.5 0.045854 136 5830.6 0.045854 137 1938.3 0.048373 138 2196.2 0.048373 139 3095.6 0.048373 140 4336.2 0.048373 141 9132.4 0.048373 表32 SELDI生物標記ρ·值：H50晶片 基質 (能量） CHCA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 6694.1 0.000104 3892.3 0.000371 3683.8 0.014882 2 8934.6 0.00037 3458.7 0.000492 4288.3 0.014882 3 9141.2 0.000519 1057 0.00054 4290.5 0.014882 4 8223.8 0.000782 1015.1 0.000648 4471.7 0.014882 5 1298.9 0.001253 5836.1 0.000709 1690.8 0.01598 6 9297.4 0.001353 1315.8 0.000776 12872 0.017146 7 28047 0.002277 28768 0.000776 4289 0.018385 89293 -114- 200418992 8 4005.1 0.00325 9141.2 0.001102 6694.1 0.018385 9 6442.9 0.00325 5837.6 0.001201 6442.9 0.024132 10 6639.4 0.003483 1033.9 0.001308 3220 0.029382 11 1341.4 0.004278 6639.4 0.001308 6639.4 0.031332 12 1448.5 0.004278 1314.3 0.001423 1748.9 0.03339 13 4719.4 0.004278 5839.4 0.001547 1178.1 0.035559 14 1340.6 0.004893 4418.6 0.001681 9141.2 0.042783 15 28768 0.005229 1034.1 0.001826 8934.6 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0.043443 255 2104.6 0.043443 256 2679 0.043443 257 1011.8 0.045854 258 1085.8 0.045854 259 - 11537 0.045854 260 23420 0.045854 261 28070 0.045854 262 2826.3 0.045854 263 4603.1 0.045854 264 Γ100.3 0.048373 265 1115.1 0.048373 266 23251 0.048373 267 40679 0.048373 268 4371.1 0.048373 269 4526.6 0.048373 270 8743.7 0.048373 271 8937.9 0.048373 127- 89293 200418992 表35 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值·· H50晶片 基質 (能量） CHCA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 48小時 5 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 3888.9 3.46E-05 1706.1 2.58E-05 12872 2.81E-03 2 3883.4 3.84E-05 3892.3 4.12E-05 3798.2 4.61E-03 3 3889.9 4.71E-05 3942.2 6.46E-05 2910.2 6.13E-03 4 18741 7.03E-05 18741 8.04E-05 3801.5 6.73E-03 5 3886.3 1.25E-04 5836.1 8.96E-05 6898.8 6.73E-03 6 2875.9 1.38E-04 5813.3 9.97E-05 1706.1 8.83E-03 7 28047 1.51E-04 3889.9 1.37E-04 3810.5 8.83E-03 8 2925.5 3.39E-04 5837.6 1.52E-04 1070.8 9.64E-03 9 5709.8 3.39E-04 3888.9 2.06E-04 5696.5 9.64E-03 10 3899.5 4.03E-04 5839.4 2.28E-04 5709.8 1.15E-02 11 14049 5.64E-04 5830.2 3.37E-04 1286.1 1.61E-02 12 1289.7 7.21E-04 5844.8 4.48E-04 2288.7 1.61E-02 13 3867.5 7.21E-04 3840.3 4.92E-04 5557.5 1.61E-02 14 11125 8.47E-04 3458.7 5.40E-04 18741 1.89E-02 15 5666.2 8.47E-04 5840.9 5.92E-04 3805 2.21E-02 16 3849.3 9.17E-04 3883.4 6.48E-04 3847.4 2.39E-02 17 3892.3 9.17E-04 5759.1 6.48E-04 3879.9 2.58E-02 18 4675.5 9.17E-04 11594 7.76E-04 3883.4 2.58E-02 19 2922.9 9.92&04 11626 7.76E-04 4289 2.58E-02 20 3840.3 9.92E-04 12872 9.26E-04 2269.6 2.78E-02 21 5557.5 9.92E-04 5798.6 1.10E-03 2922.9 2.78E-02 22 5830.2 9.92E-04 11685 1.20E-03 1070.2 3.00E-02 23 1706.1 1.07E-03 11642 1.31E-03 3835.3 3.00E-02 24 3850.1 1.07E-03 14049 1.31E-03 3867.5 3.00E-02 25 3919.9 1.07E-03 5756.1 1.42E-03 3888.9 3.00E-02 26 8223.8 1.07E-03 5851.1 1.68E-03 4288.3 3.00E-02 27 28768 1.16E-03 15122 1.83E-03 4385.7 3.00E-02 28 3805 1.25E-03 3879.9 1.83E-03 3848.4 3.23E-02 29 3810.5 1.25E-03 5753.7 1.83E-03 3899.5 3.23E-02 30 3913.4 1.25E-03 1315.8 1.98E-03 5871.1 3.23E-02 31 6898.8 1.35E-03 3838.6 1.98E - 03 8223.8 3.23E-02 32 3848.4 1.46E-03 3886.3 2.15E-03 5813.3 3.48E-02 33 3816.4 1.57E-03 2907.4 2.33E-03 1223.9 3.74E-02 34 3942.2 1.57E-03 3905.9 2.33E-03 15122 3.74E-02 35 3798.2 1.70E-03 2910.2 2.52E-03 2729.8 3.74E-02 36 3830 1.70E-03 28047 2.73E-03 2929.8 3.74E-02 37 3905.9 1.70E-03 3810.5 2.95E-03 3901.4 3.74E-02 38 3879.9 1.83E-03 3835.3 2.95E-03 3849.3 4.31E-02 39 3903.5 1.97E-03 3896.1 2.95E-03 3861.3 4.31E-02 89293 -128- 200418992 40 3853 2.12E-03 3919.9 2.95E-03 4109.5 4.31E-02 41 25836 2.28E-03 5764.6 3.19E-03 5156.6 4.31E-02 42 3901.4 2.28E-03 5854.7 3.19E-03 5798.6 4.62E-02 43 4486.8 2.28E-03 11453 3.44E-03 14500 4.94E-02 44 3847.4 2.45E-03 14500 3.44E-03 2902.8 4.94E-02 45 3902.6 2.45E-03 11484 3.72E-03 2907.4 4.94E-02 46 3832.1 2.63E-03 1246.5 4.01E-03 3840.3 4.94E-02 47 5836.1 2.63E-03 2916.5 4.01E-03 3850.1 4.94E-02 48 . 5749.7 2.82E-03 3867.5 4.01E-03 3919.9 4.94E-02 49 6694.1 2.82E-03 9376.8 4.32E-03 4303.4 4.94E-02 50 3820.1 3.03E-03 5749.7 4.66E-03 51 5753.7 3.03E-03 9479.1 4.66E-03 52 4479.1 3.25E-03 2932.7 5.01E-03 53 5756.1 3.48E-03 1289.7 5.39E-03 54 5837.6 3.48E-03 3225 J· 5.39E-03 55 5744.9 3.73E-03 3232.1 5.39E-03 56 3838.6 4.00E-03 3899.5 5.39E-03 57 5724 4.00E-03 14300 5.80E-03 58 3225.5 4.28E-03 3844.1 5.80E-03 59 3823.1 4.28E-03 18184 6.23E-03 60 3835.3 4.28E-03 2875.9 6.23E-03 61 4005.1 4.28E-03 2883.5 6.69E-03 62 12872 4.58E-03 3801.5 7.18E-03 63 14300 4.58E-03 5724 7.18E-03 64 3826.2 4.58E-03 11508 7.70E-03 65 5773.1 4.58E-03 5744.9 7.70E-03 66 5851.1 4.58E-03 8934.6 7.70E-03 67 3801.5 4.89E-03 3798.2 8.25E-03 68 11484 5.23E-03 3901.4 8.25E-03 69 11642 5.23E-03 5770.7 8.25E-03 70 5813.3 5.23E-03 11402 8.84E-03 71 2927.5 5.58E-03 5857.1 8.84E-03 72 5733.6 5.58E-03 7846.5 9.47E-03 73 8934.6 5.58E-03 12184 1.01E-02 74 5730.9 5.96E-03 5696.5 1.01E-02 75 5774.3 5.96E-03 7141.1 1.01E-02 76 5798.6 5.96E-03 1142.4 1.08E-02 77 9376.8 5.96E-03 28768 1.08E-02 78 11453 6.36E-03 3902.6 1.08E-02 79 5770.7 6.36E-03 3903.5 1.16E-02 80 11626 6.78E-03 8223.8 1.16E-02 81 2959.1 6.78E-03 2929.8 1.24E-02 82 4719.4 6.78E-03 3329.6 1.24E-02 83 5728 6.78E-03 3805 1.24E-02 84 5844.8 6.78E-03 5709.8 1.24E-02 85 11685 7.23E-03 7035.6 1.32E-02 86 9479.1 7.23E-03 9684.3 1.32E-02 87 2864.2 7.71E-03 2109.6 1.41E-02 89293 -129- 200418992 88 2932.7 7.71E-03 4479.1 1.41E-02 89 5585.1 7.71E-03 5156.6 1.41E-02 . 90 5759.1 7.71E-03 3847.4 1.50E-02 91 1112.3 8.21E-03 5734.4 1.50E-02 92 15122 8.21E-03 5773.1 1.50E-02 93 3844.1 8.21E-03 5871.1 1.50E-02 94 5696.5 8.21E-03 1304.5 1.60E-02 95 5734.4 8.21E-03 3913.4 1.60E-02 96 5839.4 8.21E-03 5791.4 1.70E-02 97 5840.9 8.21E-03 6442.9 1.70E-02 98 11594 8.74E-03 7300.1 1.70E-02 99 2902.8 8.74E-03 9297.4 1.70E-02 100 5959.8 8.74E-03 2922.9 1.81E-02 101 3857.6 9.88E-03 3820.1 1.81E-02 102-· 5854.7 9.88E-03 5666.2 1.81E-02 103 4426.9 1.05E-02 1318 1.93E-02 104 5871.1 1.05E-02 3816.4 1.93E-02 105 1298.9 1.12E-02 3830 1.93E-02 106 3821.5 1.12E-02 3848.4 1.93E-02 107 9141.2 1.12E-02 3909.9 1.93E-02 108 2679.5 1.19E-02 5730.9 1.93E-02 109 11402 1.26E-02 1245 2.05E-02 110 1328 1.26E-02 2196 2.18E-02 111 2929.8 1.26E-02 3826.2 2.18E-02 112 5739.1 1.26E-02 4426.9 2.18E-02 113 1315.8 1.33E-02 5728 2.18E-02 114 14500 1.33E-02 5733.6 2.18E-02 115 3724.5 1.33E=02 11125 2.32E-02 116 5778.6 1.33E-02 3849.3 2.32E-02 117 3093.8 1.41E-02 4694.2 2.32E-02 118 3683.8 1.41E-02 5739.1 2.32E-02 119 3896.1 1.41E-02 5778.6 2.32E-02 120 6442.9 1.41E-02 2925.5 2.46E-02 121 18184 1.50E-02 5774.3 2.46E-02 122 2301 1.50E-02 1015.1 2.61E-02 123 2828.8 1.59E-02 1328 2.61E-02 124 5764.6 1.59E-02 2927.5 2.61E-02 125 1246.5 1.78E-02 3832.1 2.61E-02 126 1775.7 1.78E-02 5786.5 2.61E-02 127 11508 1.88E-02 5959.8 2.61E-02 128 5156.6 1.88E-02 3823.1 2.77E-02 129 3861.3 1.99E-02 17385 2.93E-02 130 1319.2 2.11E-02 19852 2.93E-02 131 1448.5 2.11E-02 2940.7 3.11E-02 132 2021.1 2.35E-02 6898.8 3.11E-02 133 8799.9 2.48E-02 1016.3 3.29E-02 134 3909.9 2.76E-02 17262 3.29E-02 135 4458 2.91E-02 2902.8 3.29E-02 89293 -130- 200418992 136 4467 2.91E-02 3322.1 3.29E-02 137 1342.1 3.07E-02 4303.4 3.29E-02 138 7035.6 3.07E-02 3093.8 3.48E-02 139 9341.7 3.07E-02 6090.8 3.48E-02 140 1343.1 3.23E-02 9141.2 3.48E-02 141 9297.4 3.23E-02 1104.4 3.68E-02 142 12184 3.40E-02 1263.6 3.68E-02 143 1278.3 3.40E-02 1301.8 3.68E-02 144 2883.5 3.40E-02 3821.5 3.68E-02 145 2916.5 3.40E-02 4471.7 3.68E-02 146 2794.8 3.58E-02 2864.2 3.89E-02 147 1954.9 3.76E-02 1314.3 4.34E-02 148 3458.7 3.76E-02 1319.2 4.34E-02 149 1286.1 3.96E-02 3683.8 4.34E-02 150 1812.9 3.96E-02 3850.1 4.34E-02 151 2940.7 3.96E-02 1250.5 4.59E-02 152 4303.4 3.96E-02 1313 4.59E-02 153 4471.7 4.16E-02 3853 4.59E-02 154 6639.4 4.16E-02 1007.9 4.84E-02 155 1292.2 4.37E-02 8644.4 4.84E-02 156 5857.1 4.37E-02 157 1314.3 4.59E-02 158 1318 4.59E-02 159 2851.1 4.59E-02 160 4109.5 4.59E-02 161 5786.5 4.59E-02 162 7009.7 4.59E-02 163 1312.1 4.82Έ-02 164 17385 4.82E-02 165 4580.6 4.82E-02 166 5791.4 4.82E-02 表36 與基線有差異之特性之SELDI生物標記P-值：H50晶片 基質 (能量） SPA基質(高能量） 樣品· 〇小N -24小時 -48小時 離子編號 m/z Ρ m/z Ρ m/z Ρ 1 6493.9 5.64Ε-04 3355.6 1.23Ε-04 12870 1.49E-03 2 14505 1.07Ε-03 6001.4 3.37Ε-04 6275.7 3.44E-03 3 3436.7 2.12Ε-03 5898.8 4.08Ε-04 5596.1 4.19E-03 4 12870 3.73Ε-03 5970.5 4.08Ε-04 6246.4 4.19E-03 5 6896.3 4.89Ε-03 5889.9 5.40Ε-04 19997 4.61E-03 89293 -131 - 200418992 6 14607 5.23E-03 5893.5 5.40E-04 6184.5 5.58E-03 7 6501.7 5.58E-03 5903.8 7.09E-04 5251.9 6.13E-03 8 14813 5.96E-03 11773 8.48E-04 14065 6.73E-03 9 7318.2 5.96E-03 5905.7 1.10E-03 7119.7 6.73E-03 10 14182 6.36E-03 6033.3 1.20E-03 13173 7.37E-03 11 6499.9 6.36E-03 8296 1.31E-03 14813 7.37E-03 12 6685.4 6.78E-03 6275.7 1.68E-03 39262 7.37E-03 13 11232 7.23E-03 1230.7 1.83E-03 5038.1 8.07E-03 14 37619 7.23E-03 5906.5 1.83E-03 11399 9.64E-03 15 11131 7.71E-03 8293 1.83E-03 14505 1.05E-02 16 28633 8.21E-03 11954 1.98E-03 5106.2 1.05E-02 17 28709 8.21E-03 15211 2.15E-03 11446 1.15E-02 18 6505.1 8.21E-03 5907.1 2.33E-03 20654 1.15E-02 19 8293 8.74E-03 5910 2.52E-03 39776 1.15E-02 20 14411 9.29E-03 6246.4 2.52E-03 1279.1 1.25E-02 21 2949.6 9.29E-03 6778 2.52E-03 1293.7 1.25E-02 22 6498.6 9.29E-03 8297.6 2.73E-03 14607 1.25E-02 23 5942.1 9.88E-03 11526 3.19E-03 5051.9 1.36E-02 24 37067 1.05E-02 6068.9 3.19E-03 7254.9 1.36E-02 25 5834.9 1.05E-02 5942.1 3.44E-03 11131 1.48E-02 26 6068.9 1.05E-02 8284 3.44E-03 5889.9 1.48E-02 27 6514.7 1.05E-02 9259.8 4.66E-03 6001.4 1.48E-02 28 5698.7 1.12E-02 8320.8 5.01E-03 6068.9 1.48E-02 29 9386.5 1.12E-02 11446 5.39E-03 5146.6 1.61E-02 30 1279.1 1.33E-02 11652 5.39E-03 6077.2 1.61E-02 31 5825.3 1.41E-02 11491 6.23E-03 1290.2 1.74E-02 32 6942.8 1.50E-02 13764 6.23E-03 8284 1.74E-02 33 5822.4 1.68E-02 6533.4 6.23E-03 5731.4 1.89E-02 34 5824.3 1.68E-02 40894 6.69E-03 8296 1.89E-02 35 8297.6 1.68E-02 9034.2 6.69E-03 5180.5 2.04E-02 36 5740.9 1.78E-02 14607 7.70E-03 6082.1 2.04E-02 37 5845.4 1.78E-02 5923 8.84E-03 6202.5 2.04E-02 38 6246.4 1.78E-02 1243 1.01E-02 8293 2.04E-02 39 8296 1.88E-02 1263.4 1.01E-02 5740.9 2.39E-02 40 28912 1.99E-02 14411 1.01E-02 7410.9 2.39E-02 41 5743.2 2.11E-02 9482 1.01E-02 14182 2.58E-02 42 6001.4 2.11E-02 23732 1.08E-02 40894 2.58E-02 43 6033.3 2.11E-02 6157.8 1.08E-02 5750.6 2.58E-02 44 29758 2.22E-02 11399 1.16E-02 5743.2 2.78E-02 45 8284 2.22E-02 6166.2 1.16E-02 6157.8 2.78E-02 46 28784 2.35E-02 6514.7 1.16E-02 7318.2 2.78E-02 47 29456 2.35E-02 7143.1 1.16E-02 11232 3.00E-02 48 4106.8 2.35E-02 11131 1.24E-02 8297.6 3.00E-02 49 5736.4 2.35E-02 33462 1.24E-02 12994 3.23E-02 50 5820.4 2.35E-02 3469.4 1.24E-02 24366 3.23E-02 51 6275.7 2.35E-02 6505.1 1.24E-02 5583 3.23E-02 52 1293.7 2.48E-02 1238.1 1.32E-02 6218.5 3.23E-02 53 4873 2.48E-02 14505 1.32E-02 6896.3 3.23E-02 89293 -132- 200418992 54 5906.5 2.48E-02 24366 1.32E-02 5268 3.48E-02 55 5923 2.48E-02 6493.9 1.32E-02 5161.5 3.74E-02 56 43045 2.62E-02 6501.7 1.32E-02 6338.3 3.74E-02 57 5893.5 2.62E-02 1270.7 1.41E-02 77760 3.74E-02 58 5905.7 2.62E-02 23553 1.41E-02 5970.5 4.01E-02 59 11399 2.76E-02 7254.9 1.41E-02 7358.7 4.01E-02 60 1243 2.76E-02 1287.6 1.50E-02 7453.6 4.01E-02 61 5898.8 2.76E-02 1222.2 1.60E-02 5604 4.31E-02 62 5910 2.76E-02 12499 1.60E-02 5758.1 4.31E-02 63 28460 2.91E-02 1290.2 1.60E-02 5893.5 4.31E-02 64 4680.3 2.91E-02 6150.3 1.60E-02 6499.9 4.31E-02 65 5750.6 2.91E-02 11232 1.70E-02 6505.1 4.31E-02 66 5818.7 3.07E-02 11575 1.70E-02 88472 4.31E-02 67 5907.1 3.07E-02 4516 1.70E-02 23071 4.62E-02 68 5970.5 3.07E-02 1252.7 1.81E-Q2 2817.9 4.62E-02 69 6394.6 3.07E-02 22915 1.81E-02 5226 4.62E-02 70 7049.2 3.07E-02 6499.9 1.81E-02 6166.2 4.62E-02 71 9158.7 3.07E-02 6942.8 1.81E-02 6493.9 4.62E-02 72 23553 3.23E-02 37619 1.93E-02 6501.7 4.62E-02 73 28063 3.23E-02 3951.8 1.93E-02 6685.4 4.62E-02 74 5903.8 3.23E-02 3509.1 2.05E-02 4299.1 4.94E-02 75 10297 3.40E-02 23071 2.18E-02 5868.8 4.94E-02 76 4825.6 3.40E-02 6498.6 2.18E-02 6096.4 4.94E-02 77 29295 3.58E-02 4508.5 2.32E-02 6109.4 4.94E-02 78 5687.3 3.58E-02 5226 2.32E-02 79 6077.2 3.58E-02 1293.7 2.46E-02 80 28264 3.76E-02 1304.5 2.46E-02 81 4508.5 3.76E-02 6077.2 2.46E-02 82 11954 3.96E-02 6202.5 2.46E-02 83 4633.2 3.96E-02 23110 2.61E-02 84 5765.9 3.96E-02 5868.8 2.61E-02 85 3552.8 4.16E-02 9669.7 2.61E-02 86 4112.5 4.16E-02 3934.7 2.77E-02 87 4001.5 4.37E-02 1211.1 2.93E-02 88 5849.4 4.37E-02 3826.7 2.93E-02 89 6807.4 4.37E-02 4655.1 3.11E-02 90 9259.8 4.37E-02 5797 3.11E-02 91 9482 4.37E-02 23153 3.29E-02 92 11773 4.59E-02 6184.5 3.29E-02 93 4547 4.59E-02 1279.1 3.48E-02 94 5657 4.59E-02 23235 3.48E-02 95 5778.8 4.59E-02 3383.3 3.48E-02 96 5816.4 4.59E-02 5845.4 3.48E-02 97 6533.4 4.59E-02 7119.7 3.48E-02 98 4104.6 4.82E-02 3813.5 3.68E-02 99 4836.6 4.82E-02 5849.4 3.68E-02 100 5673.2 4.82E-02 28709 3.89E-02 101 5731.4 4.82E-02 6807.4 3.89E-02 、- 89293 -133 - 200418992 102 5889.9 4.82E-02 12176 4.11E-02 103 6184.5 4.82E-02 23182 4.11E-02 104 14182 4.34E-02 105 3969.4 4.34E-02 106 6087 4.34E-02 107 5818.7 4.59E-02 108 9759.4 4.59E-02 109 5811.3 4.84E-02 110 95452 4.84E-02 表37 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值：H50晶片 基質 (能量) SPA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 ； 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 9420.3 5.22E-05 11932 5.71E-07 6563.9 5.93E-04 2 6462.8 1.51E-04 12175 2.58E-05 12901 8.46E-04 3 6660.6 1.51E-04 12386 3.27E-05 3580 1.66E-03 4 9170.7 7.82E-04 12508 7.21E-05 1965.4 1.85E-03 5 6563.9 8.47E-04 12031 9.97E-05 2943.8 2.53E-03 6 9764 8.47E-04 6889 1.68E-04 6462.8 2.81E-03 7 6889 9.17E-04 37418 2.77E-04 6889 2.81E-03 8 7366.2 9·17Ε=04 12088 3.06E-04 19918 3.44E-03 9 5423.5 9.92Ε-04 6251.8 3.06E-04 8982.8 3.80E-03 10 9636.5 9.92Ε-04 12271 3.37E-04 4499.6 4.19E-03 11 7109.4 1.07Ε-03 1283.2 7.76E-04 9474.9 4.19E-03 12 28070 1.16Ε-03 3336.5 7.76E-04 11932 4.61E-03 13 3705.5 1.16Ε-03 8982.8 9.26E-04 37418 5.08E-03 14 5317.3 1.83Ε-03 11779 1.31E-03 7109.4 5.08E-03 15 9474.9 1.97Ε-03 3335 1.31E-03 2186.4 6.13E-03 16 14314 2.28Ε-03 4499.6 1.31E-03 4968.8 6.13E-03 17 14194 2.45Ε-03 5171.3 1.31E-03 1000.5 6.73E-03 18 14780 2.63Ε-03 3335.8 1.42E-03 3488 6.73E-03 19 1710 2.63Ε-03 1227.8 1.68E-03 9170.7 6.73E-03 20 28307 2.82Ε-03 7109.4 1.68E-03 5872.9 8.83E-03 21 4886.7 3.03Ε-03 4628.7 1.83E-03 9764 8.83E-03 22 5658.7 3.48Ε-03 1284.5 1.98E-03 1868.3 9.64E - 03 23 3580 3.73Ε-03 3342 1.98E-03 2236 9.64E-03 24 7206.6 3.73Ε-03 11351 2.33E-03 2558.1 9.64E-03 25 28555 4.28Ε-03 9474.9 2.52E-03 2944.7 9.64E-03 26 28777 4.28Ε-03 1270.3 2.73E-03 6660.6 9.64E-03 27 6209.2 4.28Ε-03 1239.7 2.95E-03 1234 1.05E-02 28 9584.5 4.28Ε-03 1276.4 2.95E-03 3449.4 1.05E-02 89293 -134- 200418992 29 9706.4 4.28E-03 4846.2 2.95E-03 5960.9 1.05E-02 30 10130 4.58E-03 4994.4 2.95E-03 6852.6 1.15E-02 31 4446.4 4.58E-03 6187.5 2.95E-03 3387.8 1.36E-02 32 28759 4.89E-03 1265.3 3.19E-03 12386 1.48E-02 33 28825 4.89E-03 5990.8 3.19E-03 3465.1 1.61E-02 34 9371.9 5.23E-03 9764 3.19E-03 1001.8 1.74E-02 35 9930.7 5.23E-03 3449.4 3.44E-03 2862 1.74E-02 36 37418 5.58E-03 11626 3.72E-03 6945.7 1.74E-02 37 5890 5.58E-03 1272.6 3.72E-03 9636.5 1.74E-02 38 1943.8 5.96E-03 1241.2 4.01E-03 11351 1.89E-02 39 2840.2 5.96E-03 1225.5 4.32E-03 20513 1.89E-02 40 4580.7 5.96E-03 5872.9 4.32E-03 2212.3 1.89E-02 41 4968.8 5.96E-03 1269.2 4.66E-03 5867.8 1.89E-02 42 12508 6.36E-03 1289.2 4.66E-03 12271 2.04E-02 43 14045 6.36E-03 1258 5.01E-03 2561.9 2.04E-02 44 12088 6.78E-03 1274.1 5.01E-03 11687 2.21E-02 45 6852.6 6.78E-03 2615.5 5.01E-03 1229.1 2.21E-02 46 19918 7.23E-03 3420.4 5.01E-03 2088.9 2.21E-02 47 3688.2 7.71E-03 9170.7 5.01E-03 2228.3 2.21E-02 48 4320.3 7.71E-03 1275.4 5.39E-03 2668.7 2.21E-02 49 57792 7.71E-03 1285.4 5.80E-03 2942.9 2.21E-02 50 12031 8.74E-03 1286.2 5.80E-03 6251.8 2.21E-02 51 1823 8.74E-03 1290.8 5.80E-03 11053 2.39E-02 52 4499.6 8.74E-03 1301.2 5.80E-03 12088 2.39E-02 53 4873.9 8.74E-03 9930.7 5.80E-03 7442.3 2.39E-02 54 9300.5 8.74E-03 1271.3 6.23E-03 9075.3 2.39E-02 55 8937.9 9.29E-03 3915.8 6.23E-03 11090 2.58E-02 56 12386 9.88E-03 3921.8 6.23E-03 2736.5 2.58E-02 57 28955 1.05E-02 5906.9 6.23E-03 4628.7 2.58E-02 58 8982.8 1.05E-02 8865.2 6.23E-03 11421 2.78E-02 59 12901 1.12E-02 1332.2 6.69E-03 11445 2.78E-02 60 5104.1 1.12E-02 4593.6 6.69E-03 11476 2.78E-02 61 8865.2 1.12E-02 5943.2 6.69E-03 12175 2.78E-02 62 12271 1.19E-02 1287.5 7.18E-03 2605.3 2.78E-02 63 14111 1.19E-02 3919.4 7.18E-03 1003.1 3.00E-02 64 1794.4 1.19E-02 4613.5 7.18E-03 1005.6 3.00E-02 65 29575 1.19E-02 4744.2 7.18E-03 2220.2 3.00E-02 66 9334 1.19E-02 6096 7.18E-03 6209.2 3.00E-02 67 2067.7 1.33E-02 1229.1 7.70E-03 6835.6 3.00E-02 68 1542.1 1.41E-02 1299 7.70E-03 4198 3.23E-02 69 20513 1.41E-02 6209.2 7.70E-03 5658.7 3.23E-02 70 29140 1.41E-02 1261.7 8.25E-03 2174.5 3.48E-02 71 3922.6 1.50E-02 1262.5 8.25E-03 3567.8 3.48E-02 72 4628.7 1.50E-02 1317.2 8.25E-03 3571.3 3.48E-02 73 5872.9 1.50E-02 1333.8 8.25E-03 39141 3.48E-02 74 11932 1.59E-02 3332.4 8.25E-03 1159.5 3.74E-02 75 2186.4 1.59E-02 33454 8.25E-03 12031 3.74E-02 76 1821.3 1.68E-02 9075.3 8.25E-03 1331 3.74E-02 89293 -135 - 200418992 77 42896 1.68E-02 11421 8.84E-03 4744.2 3.74E-02 78 5990.8 1.78E-02 4968.8 8.84E-03 9334 3.74E-02 79 12175 1.88E-02 1241.9 9.47E-03 1217.7 4.01E-02 80 1159.5 1.99E-02 1281.9 9.47E-03 12508 4.01E-02 81 5825.1 1.99E-02 1302.6 9.47E-03 14045 4.01E-02 82 11132 2.11E-02 1245.3 1.01E-02 2227.1 4.01E-02 83 1985.3 2.11E-02 1292.6 1.01E-02 2772.9 4.01E-02 84 4603.1 2.11E-02 1330.1 1.01E-02 5825.1 4.01E-02 85 1530.2 2.22E-02 1259.3 1.08E-02 6187.5 4.01E-02 86 1543.2 2.22E-02 1281 1.08E-02 11132 4.31E-02 87 1796.1 2.22E-02 1314.3 1.08E-02 14780 4.31E-02 88 2287.8 2.22E-02 2082.2 1.08E-02 1671.3 4.31E-02 89 2944.7 2.22E-02 28555 1.08E-02 1945.6 4.31E-02 90 4721.4 2.22E-02 1243.4 1.16E-02 2130.5 4.31E-02 91 3024.3 2.35E-02 1256.6 1.16E-02 2132.5 4.31E-02 92 2634.8 2.48E-02 4141.7 1.16E-02 4185.9 4.31E-02 93 1877 2.62E-02 5731.5 1.16E-02 1000 4.62E-02 94 1176.7 2.76E-02 5825.1 1.16E-02 1152.8 4.62E-02 95 1528.2 2.76E-02 1236 1.24E-02 11626 4.62E-02 96 3799.4 2.76E-02 1281.4 1.24E-02 1233 4.62E-02 97 4198 2.76E-02 1737.1 1.24E-02 1330.1 4.62E-02 98 5906.9 2.76E-02 6168 1.24E-02 1372.8 4.62E-02 99 14510 2.91E-02 8233.8 1.24E-02 15908 4.62E-02 100 4430.3 2.91E-02 1295.1 1.32E-02 1890.3 4.62E-02 101 4433.9 2.91E-02 8497 1.32E-02 2680.7 4.62E-02 102 9075.3 2.91E-02 1258.6 1.41E-02 2945.5 4.62E-02 103 10714 3.07E-02 23075 1.41E-02 5943.2 4.62E-02 104 5761 3.07E-02 1159.5 1.50E-02 7562.2 4.62E-02 105 2491.6 3.23E-02 1315.6 1.50E-02 9420.3 4.62E-02 106 7282.6 3.23E-02 1331 1.50E-02 11570 4.94E-02 107 8497 3.23E-02 23767 1.50E-02 1190.6 4.94E-02 108 11490 3.40E-02 2833.4 1.50E-02 2193.3 4.94E-02 109 11594 3.40E-02 11519 1.60E-02 3099.5 4.94E-02 110 1688.6 3.40E-02 1267.2 1.60E-02 6096 4.94E-02 111 2544.6 3.40E-02 1298.5 1.60E-02 8937.9 4.94E-02 112 3930.3 3.40E-02 14111 1.60E-02 113 3944.1 3.40E-02 23420 1.60E-02 114 4335.1 3.40E-02 5658.7 1.60E-02 115 11742 3.58E-02 6087.5 1.60E-02 116 13942 3.58E-02 1219.8 1.70E-02 117 1755.8 3.58E-02 1234 1.70E-02 118 1965.4 3.58E-02 1294.7 1.70E-02 119 2833.4 3.58E-02 1296.9 1.70E-02 120 4185.9 3.58E-02 1733.2 1.70E-02 121 4924.6 3.58E-02 28070 1.70E-02 122 1281.9 3.76E-02 11132 1.81E-02 123 2630.7 3.76E-02 1237.5 1.81E-02 124 2788.9 3.76E-02 1321.8 1.81E-02 89293 -136- 200418992 125 3813.9 3.76E-02 3922.6 1.81E-02 126 3919.4 3.76E-02 5890 1.81E-02 127 1540.5 3.96E-02 1226.6 1.93E-02 128 1545.7 3.96E-02 1260.6 1.93E-02 129 1668.9 3.96E-02 3313.1 1.93E-02 130 3420.4 3.96E-02 11445 2.05E-02 131 4164.9 3.96E-02 11742 2.05E-02 132 5776.5 3.96E-02 1323.1 2.05E-02 133 11493 4.16E-02 1713.9 2.05E-02 134 11626 4.16E-02 1823 2.05E-02 135 4994.4 4.16E-02 23106 2.05E-02 136 5804.3 4.16E-02 4115.8 2.05E-02 137 6251.8 4.16E-02 1778.8 2.18E-02 138 3921.8 4.37E-02 23126 2.18E-02 139 4189.7 4.37E-02 1278 2.32E-02 140 11445 4.59E-02 1319.1 2.32E-02 141 11476 4.59E-02 14314 2.32E-02 142 11494 4.59E-02 1806.3 2.32E-02 143 11779 4.59E-02 3488 2.32E-02 144 6139.2 4.59E-02 11476 2.46E-02 145 6835.6 4.59E-02 1293.7 2.61E-02 146 8402.9 4.59E-02 1294.3 2.61E-02 147 1531.8 4.82E-02 1734.9 2.61E-02 148 1753.2 4.82E-02 23251 2.61E-02 149 2053.4 4.82E-02 4876 2.61E-02 150 2621.4 4.82E-02 1251.2 2.77E-02 151 2952.6 4.82E-02 1311.6 2.77E-02 152 4846.2 4.82E-02 15167 2.77E-02 153 1689.8 2.77E-02 154 2104.6 2.77E-02 155 23145 2.77E-02 156 5960.9 2.77E-02 157 11490 2.93E-02 158 11493 2.93E-02 159 11504 2.93E-02 160 1320.4 2.93E-02 161 1808.7 2.93E-02 162 3580 2.93E-02 163 40679 2.93E-02 164 6109.3 2.93E-02 165 6386.4 2.93E-02 166 8743.7 2.93E-02 167 11494 3.11E-02 168 1231.9 3.11E-02 169 1264.4 3.11E-02 170 1295.7 3.11E-02 171 1800.6 3.11E-02 172 4886.7 3.11E-02 89293 -137- 200418992 173 11495 3.29E-02 174 11570 3.29E-02 175 1255.5 3.29E-02 176 1304.8 3.29E-02 177 1335.3 3.29E-02 178 1337.3 3.29E-02 179 1762.8 3.29E-02 180 1782.7 3.29E-02 181 28307 3.29E-02 182 Ϊ1560 3.48E-02 183 1300 3.48E-02 184 1309.4 3.48E-02 185 1309.8 3.48E-02 186 1310 3.48E-02 187 5867.8 3.48E-02 188 6139.2 3.48E-02 189 11200 3.68E-02 190 11537 3.68E-02 191 11568 3.68E-02 192 1240.9 3.68E-02 193 4126.9 3.68E-02 194 6047.3 3.68E-02 195 11550 3.89E-02 196 1254.3 3.89E-02 197 1303.6 3.89E-02 198 2442.4 3.89E-02 199 3373.2 3.89E-02 200 5761 3.89E-02 201 1298 4.11E-02 202 1312.8 4.11E-02 203 1798.8 4.11E-02 204 2952.6 4.11E-02 205 3557.3 4.11E-02 206 45039 4.11E-02 207 4873.9 4.11E-02 208 14194 4.34E-02 209 1760.5 4.34E-02 210 2963.1 4.59E-02 211 1252.6 4.84E-02 212 1310.5 4.84E-02 213 1321 4.84E-02 214 1715.6 4.84E-02 215 1761.1 4.84E-02 216 2544.6 4.84E-02 217 2816.8 4.84E-02 218 3853.1 4.84E-02 219 4446.4 4.84E-02 220 5745.1 1 4.84E-02 89293 -138- 200418992 221 9300.5 4.84E-02 表38 SELDI生物標記p-值：Ql〇晶片 基質 (能量） CHCA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 9132 0.001073 1466 0.001011 1209 0.00083 2 7724.8 0.001828 3898.6 0.001011 1310 0.011115 3 一11488 0.002118 4675.2 0.001102 1348.4 0.01598 4 6964.3 0.00263 1167.3 0.001547 4962.1 0.018385 5 4962.1 0.004576 8918.2 0.001547 2152.4 0.021093 6 4572 0.004893 1335.4 0.001681 1080.1 0.024132 7 5828.2 0.005962 4512.1 0.001826 1233.1 0.025786 8 卜 13875 0.006785 4632.1 0.001826 2360.3 0.03339 9 10414 0.007706 1002.3 0.001981 1738.1 0.037845 10 5819 0.008207 6964.3 0.002148 1871.7 0.037845 11 8918.2 0.008207 1023.6 0.002328 1104.1 0.040251 12 2087.7 0.009883 1197.9 0.002328 2027.6 0.040251 13 2002.5 0.010504 4361.5 0.002521 1026 0.045445 14 9524.9 0.010504 8674.1 0.003444 1694.3 0.045445 15 1026.9 0.012578 4962.1 0.004321 11488 0.048242 16 1086.9 0.013343 1151.8 0.005011 1197.9 0.048242 17 11687 0.019923 1162.9 0.005392 18 2178.4 0.019923 1169.9 0.005392 19 5858.4 0.019923 5199 0.005797 20 1231.4 0.024804 1008.8 0.006229 21 1286.6 0.024804 1046.5 0.006229 22 1336.6 0.024804 2421.1 0.006229 23 2546.3 0.024804 1261.1 0.00669 24 5697.8 0.024804 1619.1 0.007179 25 1018.1 0.026171 4489.9 0.007179 26 1010 0.027603 5819 0.007701 27 1330 0.029099 1020.6 0.008254 28 1027.1 0.030664 1003.6 0.008843 29 3243.2 0.030664 1336.6 0.008843 30 1314.2 0.032299 1159.7 0.009468 31 1027.3 0.034006 9524.9 0.009468 32 1113.2 0.034006 1137.2 0.01013 33 1843 0.035789 5828.2 0.010833 34 1056.1 0.037649 1145.9 0.012367 35 1115.3 0.039588 1179.2 0.012367 36 1036.2 0.041611 1343.5 0.012367 89293 -139- 200418992 37 1271.3 0.041611 1014.5 0.014086 38 1652.3 0.041611 1029.5 0.014086 39 1784.6 0.043718 1324.7 0.014086 40 8202.5 0.043718 4203.8 0.014086 41 1791.8 0.045912 4424.1 0.014086 42 1297.7 0.048197 1101.3 0.01502 43 4720.4 0.048197 1337.3 0.01502 44 1001.1 0.018149 45 1834.9 0.018149 46 1465.5 0.019309 47 6894.9 0.019309 48 2014.2 0.020532 49 1059 0.02182 50 1302.2 0.02182 51 1447.4 0.023176 52 1016.1 0.024604 53 1026.9 0.024604 54 1038.1 0.024604 55 1157 0.024604 56 1262.8 0.024604 57 1466.8 0.024604 58 1018.8 0.026105 59 2918.8 0.026105 60 1005.3 0.027683 61 1031.8 0.027683 62 2300.1 0.027683 63 1042.6 0.029341 64 1126.4 0.029341 65 1142.5 0.029341 66 1164.9 0.031082 67 1049 0.032909 68 1318.1 0.034824 69 2016.4 0.034824 70 1010 0.036832 71 2315.8 0.036832 72 9132 0.036832 73 1036.2 0.038936 74 1092.5 0.038936 75 1134.3 0.038936 76 1159 0.038936 77 1261.7 0.038936 78 2456.3 0.038936 79 2107.7 0.041138 80 1017.1 0.043443 81 2247.9 0.043443 82 1007.2 0.045854 83 1803.2 0.045854 84 4455.8 0.045854 89293 -140- 200418992 85 4474.1 0.045854 86 1010.8 0.048373 表39 SELDI生物標記p-值：Q10晶片 基質 (能量） SPA基質(高能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 nt/z P m/z P m/z P 1 9487.7 2.52E-05 5309.4 0.00054 41779 0.001227 2 9242.4 3.84E-05 3340 0.002521 3357.6 0.006481 3 8981.3 7.03E-05 12354 0.004655 3803.3 0.01598 4 3424.7 9.42E-05 4997.2 0.006229 3289.9 0.018385 5 9527.9 0.000114 22360 0.007179 5518.9 0.019699 6 9386 0.000138 5650.4 0.008254 6768.8 0.035559 7 14058 0.000311 5299.5 0.008843 1454.1 0.045445 8 9078.4 0.000519 5325.1 0.009468 4775.5 0.048242 9 14777 0.000665 66640 0.013202 89344 0.048242 10 8869.3 0.000847 85778 0.013202 11 7041.3 0.000917 11759 0.014086 12 8258.7 0.000917 5006.7 0.014086 13 9019.6 0.000917 5230.5 0.014086 14 8276 0.00116 3245.2 0.01502 15 7014.2 0.00146 13423 0.016007 16 8281.8 0.00146 5246.4 0.017049 17 7076.4 0.001968 1454.1 0.018149 18 7060.3 0.002277 5066.1 0.018149 19 6505.7 0.002448 73372 0.018149 20 6986.9 0.002448 23190 0.019309 21 8885.9 0.002448 3743.5 0.019309 22 59238 0.00263 5278.1 0.019309 23 8293.1 0.00263 6049.8 0.02182 24 10017 0.002823 23390 0.023176 25 27849 0.002823 5020.5 0.023176 26 6489.6 0.00303 6929.1 0.024604 27 13015 0.00325 3900.8 0.029341 28 6975.9 0.003732 6972.8 0.029341 29 8302.9 0.003732 6973.4 0.029341 30 5472.3 0.003997 6974.1 0.029341 31 8288.1 0.003997 80860 0.029341 32 7089.7 0.004576 9242.4 0.029341 33 14246 0.005229 6965.9 0.031082 34 23190 0.005229 6975.9 0.031082 35 8327.5 0.005229 11634 0.032909 89293 • 141 - 200418992 36 13423 0.005585 1379.7 0.032909 37 6974.1 0.005585 3182.2 0.032909 38 6950.1 0.005962 4976.1 0.032909 39 6970.7 0.005962 5088.2 0.032909 40 6973.4 0.005962 6959.8 0.032909 41 7137.3 0.005962 8281.8 0.032909 42 10354 0.006362 6970.7 0.034824 43 21192 0.006362 5003.2 0.036832 44 6972.8 0.006362 7060.3 0.036832 45 8794.2 0.006362 7041.3 0.038936 46 11220 0.006785 71073 0.038936 47 13906 0.006785 44823 0.041138 48 6496 0.006785 5102.4 0.041138 49 23390 0.007233 5659.8 0.041138 50 80860 0.007233 5885.5 0.041138 51 7105 0.008207 6950.1 0.041138 52 6954.2 0.008735 6968 0.041138 53 7147.5 0.008735 5921.1 0.043443 54 9769 0.009294 5984.7 0.043443 55 3493.7 0.009883 7266.2 0.043443 56 6687.9 0.009883 13906 0.045854 57 6968 0.010504 6986.9 0.045854 58 8381.4 0.010504 7014.2 0.045854 59 6501.9 0.01116 8276 0.045854 60 8238.3 0.01185 3357.6 0.048373 61 1395.5 0.013343 4479.7 0.048373 62 6477.9 0.013343 7105 0.048373 63 6527.2 0.013343 8981.3 0.048373 64 6768.8 0.013343 65 6959.8 0.013343 66 7124.9 0.013343 67 6965.9 0.014149 68 6698.4 0.014997 69 6916.5 0.014997 70 6929.1 0.014997 71 6940.5 0.014997 72 12354 0.015888 73 28220 0.017807 74 6705 0.01884 75 6728.4 0.021059 76 6557.6 0.022249 77 1016.8 0.024804 78 28401 0.024804 79 41779 0.026171 80 1638.7 0.027603 81 3760.8 0.027603 82 73372 0.027603 83 5255.8 0.029099 89293 -142- 200418992 84 24106 0.030664 85 5261.4 0.030664 86 66640 0.030664 87 7169.9 0.030664 88 1403 0.032299 89 3563.1 0.032299 90 5033.3 0.032299 91 5054.2 0.032299 92 54069 0.034006 93 7222.4 0.034006 94 1017.3 0.035789 95 6484.5 0.035789 96 8425.2 0.035789 97 89344 0.035789 98 29193 ΰ.037649 99 5265.3 0.039588 100 6890.8 0.039588 101 1008.3 0.041611 102 1617.1 0.043718 103 5042.3 0.043718 104 7240.2 0.043718 表40 SELDI生物標記p-值：Ql〇晶片 基質 (能量） SPA基質(低能量)_ 樣品· 0小時 -24小時 -48 丨、時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 13932 8.33E-06 4651.2 0.000448 2622.4 7.07E-06 2 6983.2 1.47E-05 4652.9 0.000448 1854.3 0.000498 3 9540.9 3.12E-05 4653.8 0.000448 3220.1 0.000916 4 10319 3.84E-05 1646.7 0.00054 2180 0.001114 5 9184.1 3.84E-05 4652 0.00054 3338.8 0.001483 6 9468.2 0.000125 4650.5 0.000592 1209.5 0.002146 7 9652.8 0.000138 4649 0.000848 9103.4 0.003959 8 14136 0.000166 2968 0.001011 1908.8 0.004307 9 7084.9 0.000182 4976 0.001102 3224.6 0.004307 10 9365 0.000238 11669 0.001423 1637 0.004681 11 1820.9 0.000311 2960.6 0.001681 3834.7 0.007016 12 13810 0.00037 2773 0.002328 1671.2 0.00759 13 1714 0.000403 1651.1 0.002521 1891.2 0.008204 14 13917 0.000438 11691 0.003188 2232 0.008204 15 9919.6 0.000477 4658.3 0.003188 2968 0.008861 16 7060.1 0.000519 23273 0.003717 4100.8 0.009563 89293 -143 - 200418992 17 8853.5 0.000564 3389.5 0.003717 2743.2 0.010314 18 14018 0.000612 23751 0.004009 1596.6 0.01197 19 1712.5 0.000612 23066 0.004321 1702.9 0.01197 20 7203.3 0.000612 2558.9 0.004321 1909.7 0.01197 21 13894 0.000665 11565 0.004655 2236.9 0.01197 22 8807.4 0.000665 11516 0.005392 1620.3 0.01288 23 2191.1 0.000782 4647.3 0.006229 8853.5 0.01288 24 13947 0.000847 2904.6 0.00669 1621.9 0.01385 25 9103.4 0.000847 11433 0.007701 2409.2 0.01385 26 6919.9 0.000992 3117.3 0.007701 3793.5 0.01385 27 13959 0.00116 1184.5 0.008843 1597.8 0.014882 28 14281 0.00116 11862 0.008843 2752.2 0.014882 29 1706.2 0.00116 23471 0.009468 2861.3 0.014882 30 2176.1 0.00116 4140.8 0.009468 28959 0.014882 31 13985 0.00146 2766.3 0.01013 3110.8 0.014882 32 14081 0.00146 1633 0.010833 1866.1 0.01598 33 7319.5 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0.014149 2957.7 0.045854 8807.4 0.048242 94 1710.8 0.014149 1017.4 0.048373 95 1720.5 0.014149 1089.4 0.048373 96 1911.1 0.014149 13792 0.048373 97 5018.8 0.014149 1809.1 0.048373 98 1692 0.014997 2040.5 0.048373 99 4806.2 0.014997 5803.4 0.048373 100 5138.3 0.014997 8400.5 0.048373 101 6880.3 0.014997 102 8274.6 0.014997 103 1149.7 0.015888 104 13792 0.015888 105 3224.6 0.015888 106 13148 0.016824 107 1717.8 0.016824 108 1137.8 0.017807 109 1151.9 0.017807 110 1256.4 0.017807 111 13786 0.017807 112 13789 0.017807 89293 -145- 200418992 113 13796 0.017807 114 1901.4 0.017807 115 11466 0.01884 116 1696.9 0.01884 117 1700.2 0.01884 118 7121.4 0.01884 119 1146.3 0.019923 120 1685 0.019923 121 1724.3 0.019923 122 1983.3 0.019923 123 3343 0.019923 124 3766.6 0.019923 125 1679.4 0.021059 126 1690.3 0.021059 127 1718.6 0.021059 128 13790 0.022249 129 3014.2 0.022249 130 3201.4 0.022249 131 3456.1 0.022249 132 4728.1 0.022249 133 1154.1 0.023497 134 1167.6 0.023497 135 1727.1 0.023497 136 7429.4 0.023497 137 10682 0.024804 138 1765.3 0.024804 139 2519 0.024804 140 3110.8 0.024804 141 4129.4 0.024804 142 2749.6 0.026171 143 28290 0.026171 144 3209 0.026171 145 11433 0.027603 146 1627.9 0.027603 147 1705.2 0.027603 148 1762.9 0.027603 149 2631 0.027603 150 2766.3 0.027603 151 1356.5 0.029099 152 1629 0.029099 153 1717.3 0.029099 154 4140.8 0.029099 155 1016.6 0.030664 156 1133.1 0.030664 157 1148.4 0.030664 158 1420.8 0.030664 159 1702.9 0.030664 160 1014.3 0.032299 89293 200418992 161 1135.5 0.032299 162 1150.7 0.032299 163 1199.3 0.032299 164 1392.9 0.032299 165 2588.8 0.032299 166 28087 0.032299 167 3574.9 0.032299 168 4155.8 0.032299 169 6471.6 0.032299 170 1017.4 0.034006 171 1021.6 0.034006 172 11669 0.034006 173 1358.8 0.034006 174 1850.1 0.034006 175 12908 0.035789 176 1688.5 0.035789 177 2935 0.035789 178 2992.8 0.035789 179 1125.7 0.037649 180 1144.6 0.037649 181 1387.5 0.037649 182 1618 0.037649 183 4272.4 0.037649 184 1020.1 0.039588 185 1132.2 0.039588 186 1339.7 0.039588 187 2171.7 0.039588 188 2898.1 0.039588 189 3438.2 0.039588 190 4866.1 0.039588 191 77930 0.039588 192 1018.6 0.041611 193 1139.2 0.041611 194 1140 0.041611 195 1193.8 0.041611 196 1257.1 0.041611 197 1670.4 0.041611 198 1785.8 0.041611 199 1795.8 0.041611 200 1933.8 0.041611 201 3578.8 0.041611 202 1142.5 0.043718 203 1599.6 0.043718 204 1725.6 0.043718 205 2304.4 0.043718 206 23471 0.043718 207 2803.1 0.043718 208 1011.1 0.045912 89293 -147- 200418992 209 1118 0.045912 210 15376 0.045912 211 2326.1 0.045912 212 4280.3 0.045912 213 1161.5 0.048197 214 1304.8 0.048197 215 1340.8 0.048197 216 1595.5 0.048197 217 2147.1 0.048197 表41 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值：Qi〇晶片 基質 (能量) CHCA基質(低能量） 樣品〇 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 2546.3 0.000612 8918.2 0.001681 2477.9 0.001487 2 9132 0.000665 1445.3 0.001826 1209 0.004187 3 1778.9 0.00146 1466 0.003188 1197.9 0.008071 4 5858.4 0.002448 4424.1 0.004655 9132 0.008071 5 8918.2 0.00325 1465.5 0.00669 6784.5 0.011475 6 6784.5 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9524.9 0.031082 89293 -148 - 200418992 29 1286.6 0.027603 2663.7 0.032909 30 1500.9 0.027603 5858.4 0.032909 31 6964.3 0.027603 6964.3 0.034824 32 4572 0.030664 1135.4 0.038936 33 1996.5 0.032299 1067.8 0.045854 34 1274.2 0.037649 1453.4 0.045854 35 1488.9 0.037649 1343.5 0.048373 36 6636.1 0.037649 37 1446.1 0.039588 38 1806.3 0.039588 39 1440.1 0.041611 40 1500.5 0.041611 41 23326 0.041611 42 卜 5828.2 0.043718 43 - 1018.8 0.045912 44 1231.4 0.045912 45 4675.2 0.045912 46 9524.9 0.045912 47 16747 0.048197 48 1838.6 0.048197 表42 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值：Q10晶片 基質 (能量） SPA基質(高能量） 樣品： 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 12354 0.000114 5874.3 0.003444 5518.9 9.47E-05 2 1395.5 0.000917 3182.2 0.004009 1221.1 0.002533 3 11634 0.000992 12354 0.004321 41779 0.005583 4 8981.3 0.001968 5864 0.005011 3803.3 0.007373 5 23190 0.002823 11759 0.00669 12354 0.009644 6 10017 0.003483 5896.3 0.00669 1200.1 0.010525 7 5827.2 0.003483 5902.5 0.007179 5847.2 0.012498 8 23390 0.004576 11634 0.007701 1183.8 0.016052 9 46588 0.004893 5885.5 0.007701 11634 0.020437 10 5847.2 0.005585 5847.2 0.008843 1355.5 0.023895 11 5864 0.005962 5957.6 0.01013 3357.6 0.025801 12 6505.7 0.005962 5975.3 0.010833 4885.4 0.027834 13 23585 0.007233 3900.8 0.01502 51391 0.027834 14 11759 0.007706 3340 0.016007 29193 0.03 15 5902.5 0.007706 5891.5 0.016007 7997.9 0.03 16 9019.6 0.007706 1454.1 0.017049 8008 0.03 17 6640.1 0.008207 5937.8 0.017049 4890.3 0.03736 89293 -149- 200418992 18 6477.9 0.008735 6003.7 0.017049 1120.4 0.040123 19 9769 0.009294 5993.7 0.019309 11759 0.040123 20 5921.1 0.009883 5947.8 0.020532 1226.4 0.043054 21 5957.6 0.009883 5827.2 0.023176 5332.9 0.043054 22 3424.7 0.01116 5921.1 0.031082 1100.7 0.046158 23 6557.6 0.01116 5838.3 0.032909 7650.7 0.046158 24 41779 0.01185 5984.7 0.032909 1125.9 0.049444 25 24106 0.012578 1459.6 0.038936 5762.4 0.049444 26 6484.5 0.012578 3668.3 0.038936 5792.4 0.049444 27 6489.6 0.012578 5325.1 0.038936 28 6496 0.012578 5309.4 0.043443 29 6874.5 0.012578 6049.8 0.043443 30 9078.4 0.012578 5792.4 0.048373 31 1638.7 0.013343 32 1165.5 0.014149 33 6501.9 0.014149 34 6853.1 0.016824 35 1176.8 0.017807 36 6698.4 0.01884 37 1170.3 0.019923 38 14777 0.019923 39 5838.3 0.019923 40 5874.3 0.021059 41 8258.7 0.022249 42 5776.9 0.023497 43 13015 0.024804 44 6527.2 0.024804 45 6687.9 0.024804 46 1193.9 0.026171 47 29193 0.026171 48 6705 0.026171 49 8276 0.026171 50 1146.1 0.027603 51 1582.9 0.027603 52 1588.3 0.027603 53 1617.1 0.027603 54 8281.8 0.027603 55 11220 0.029099 56 1568 0.029099 57 6728.4 0.029099 58 1600.7 0.030664 59 7347.4 0.030664 60 8302.9 0.030664 61 1179.5 0.032299 62 1399.5 0.032299 63 5792.4 0.032299 64 5947.8 0.032299 65 8327.5 0.032299 89293 -150- 200418992 66 8885.9 0.032299 67 3743.5 0.035789 68 6890.8 0.035789 69 1575.8 0.037649 70 5885.5 0.037649 71 5891.5 0.037649 72 6003.7 0.037649 73 9386 0.037649 74 6916.5 0.041611 75 1348.6 0.043718 76 8293.1 0.043718 77 1167.6 0.045912 78 8288.1 0.045912 79 3650 0.048197 表43 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值：Qio晶片 基質 (能量） SPA基質(低能量） 樣品·· 0小時 -24小時 _48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 1714 6.37E-05 2968 0.000592 1877.7 0.000281 2 9919.6 8.56E-05 4332.7 0.000776 17425 0.000362 3 2665.9 0.000261 1749.1 0.001547 1671.2 0.000753 4 8965.1 0.000564 1117 0.002328 1733.1 0.000753 5 13932 0.000612 1208.5 0.00295 2180 0.001659 6 5138.3 0.00146 3081.9 0.004321 2968 0.001659 7 9540.9 0.001574 1766.2 0.006229 1714 0.001847 8 1190 0.00263 2291.4 0.006229 4759.9 0.003108 9 1727.1 0.00303 4111.7 0.006229 6551.3 0.005583 10 1706.2 0.003483 1102.3 0.00669 12908 0.006132 11 1766.2 0.003483 1103 0.00669 17293 0.007373 12 2588.8 0.003732 4649 0.007179 4956.9 0.008071 13 9184.1 0.003732 4650.5 0.007179 4242 0.008827 14 1147.4 0.003997 1118 0.007701 1908.8 0.009644 15 4293.1 0.003997 1123.3 0.007701 1919.3 0.009644 16 8733.3 0.003997 1344.7 0.007701 7429.4 0.009644 17 9468.2 0.004278 1102.7 0.008843 1701.6 0.012498 18 1148.4 0.004893 1101.3 0.009468 3449.9 0.013598 19 6551.3 0.004893 1314.9 0.009468 1380.4 0.016052 20 2176.1 0.005229 1475 0.009468 1756.9 0.016052 21 1913.3 0.005585 1660.4 0.009468 2601.6 0.016052 22 3343 0.005962 1964.9 0.01013 8904.5 0.016052 23 1159.4 0.006362 1470.9 0.010833 8965.1 0.016052 89293 -151 - 200418992 24 1883.9 0.006362 17293 0.010833 2181.9 0.017414 25 1117 0.006785 3402.1 0.010833 2420.6 0.017414 26 1142.5 0.006785 11275 0.012367 3076.7 0.017414 27 1155.4 0.006785 1656.9 0.012367 1241.1 0.018874 28 1795.8 0.006785 2119.8 0.012367 1949 0.020437 29 13947 0.007233 1099.2 0.013202 4100.8 0.020437 30 4759.9 0.007233 1479.7 0.013202 1792.5 0.023895 31 2147.1 0.007706 1761.4 0.013202 1986.8 0.023895 32 8274.6 0.007706 1482.7 0.014086 2547.9 0.023895 33 11862 0.008207 3779.3 0.014086 3343 0.023895 34 1707.4 0.008207 1100.2 0.016007 4806.2 0.023895 35 1149.7 0.008735 1327.7 0.016007 11466 0.025801 36 1720.5 0.008735 2432.6 0.016007 1905.1 0.025801 37 1737.9 0.008735 4651.2 0.016007 1847.5 0.027834 38 1709.1 0.009294 4652 0.016007 一 4621.6 0.027834 39 2539.2 0.009294 1103.6 0.017049 1225.5 0.032305 40 1132.2 0.009883 1344.2 0.017049 1247.8 0.032305 41 1785.8 0.009883 1346 0.017049 2086.6 0.032305 42 5018.8 0.009883 1527.4 0.017049 2208.7 0.032305 43 1118 0.010504 2656.8 0.017049 2261 0.032305 44 11466 0.010504 1097.8 0.018149 1199.3 0.03736 45 1153 0.010504 1104.7 0.018149 1720.5 0.03736 46 11565 0.010504 1316.1 0.018149 1973.9 0.03736 47 1712.5 0.010504 1326.7 0.018149 2253.9 0.03736 48 2012 0.010504 1334.6 0.018149 2889.4 0.03736 49 8853.5 0.010504 1529.3 0.018149 1208.5 0.040123 50 3081.9 0.01116 1751.3 0.018149 1222.9 0.040123 51 3197.3 0.01116 2355.6 0.018149 1254.5 0.040123 52 12908 0.01185 2765.4 0.018149 1255.6 0.040123 53 1156.1 0.012578 1116.6 0.019309 3233.6 0.040123 54 1166.2 0.012578 1349.2 0.019309 1352.2 0.043054 55 1167.6 0.012578 2558.9 0.019309 1660.4 0.043054 56 1391.1 0.012578 1083.6 0.020532 1820.9 0.043054 57 1742.4 0.012578 1307.1 0.020532 1981.8 0.043054 58 1814.9 0.012578 1526 0.020532 2056.9 0.043054 59 1820.9 0.012578 1119.6 0.02182 1209.5 0.046158 60 4806.2 0.012578 1499.4 0.02182 1727.1 0,046158 61 10319 0.013343 1533.4 0.02182 1780 0.046158 62 1725.6 0.013343 1087.7 0.023176 1891.2 0.046158 63 3220.1 0.013343 1116.2 0.023176 1931 0.046158 64 9752.3 0.013343 1313.7 0.023176 2658.9 0.046158 65 1116.6 0.014149 17425 0.023176 2861.3 0.046158 66 1160.1 0.014149 2181.9 0.023176 8733.3 0.046158 67 13810 0.014149 2553 0.023176 1239.8 0.049444 68 1701.6 0.014149 2766.3 0.023176 1270.8 0.049444 69 4886.6 0.014149 1330.4 0.024604 2319 0.049444 70 1151.9 0.014997 1343.7 0.024604 2409.2 0.049444 71 1160.9 0.014997 1399.1 0.024604 4122.7 0.049444 89293 -152- 200418992 72 23066 0.014997 1324.5 0.026105 4364.9 0.049444 73 1144.6 0.015888 1342.1 0.026105 74 1161.5 0.015888 1510.4 0.026105 75 1724.3 0.016824 4652.9 0.026105 76 2206.6 0.017807 1084.2 0.027683 77 1116.2 0.01884 1086.1 0.027683 78 1164.8 0.01884 1532.3 0.027683 79 2326.1 0.01884 1535.2 0.027683 80 3438.2 0.01884 2326.1 0.027683 81 4766.1 0.01884 2346 0.027683 82 1121 0.019923 2547.9 0.027683 83 3766.6 0.019923 3044.6 0.027683 84 11275 0.021059 1298.6 0.029341 85 2438.8 0.021059 1491.9 0.029341 86 2749.6u 0.021059 1733.1 0.029341 87 7429.4 0.021059 1743.8 0.029341 88 1146.3 0.022249 1767.2 0.029341 89 1710.8 0.022249 2353.6 0.029341 90 3014.2 0.022249 1297.3 0.031082 91 3313.7 0.022249 1299.7 0.031082 92 4270.6 0.022249 1325.9 0.031082 93 1756.9 0.023497 1487.9 0.031082 94 4866.1 0.023497 1526.6 0.031082 95 1387.5 0.024804 1122.3 0.032909 96 1735.7 0.024804 11565 0.032909 97 28290 0.024804 11669 0.032909 98 1157.7 0.026171 1256.4 0.032909 99 1163.7 0.026171 1341.8 0.032909 100 1980.4 0.026171 1481.5 0.032909 101 5803.4 0.026171 1492.8 0.032909 102 6471.6 0.026171 1501 0.032909 103 1705.6 0.027603 1086.8 0.034824 104 17425 0.027603 1115 0.034824 105 1749.1 0.027603 1312.7 0.034824 106 1765.3 0.027603 1496.2 0.034824 107 2968 0.027603 1531 0.034824 108 4973.7 0.027603 1553.8 0.034824 109 1327.7 0.029099 1755.5 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表44SELDI生物標記p-值：IMAC晶片 基質 (能量） CHCA基質(低能量） 樣品： 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 1978.3 0.000339 3240 0.00054 2141.5 0.001629 2 1176.8 0.001253 3301.3 0.001308 1109.8 0.004681 3 1870.5 0.00325 2330.7 0.001423 2977.4 0.005517 4 2707 0.00325 3233 0.003444 1526.1 0.006481 5 2483.7 0.004576 3835.3 0.003717 1514.8 0.007016 6 1997.7 0.006785 3341.9 0.004321 5073.2 0.007016 7 3082 0.008735 3239 0.004655 5806 0.007016 8 1218.9 0.01185 2111.8 0.005011 5673.6 0.008204 9 1319.2 0.012578 3338.3 0.005797 5883.4 0.008204 10 2977.4 0.013343 2356.3 0.00669 5760 0.009563 11 1530.1 0.015888 2797.6 0.007701 1110.3 0.01197 12 2691.7 0.015888 3332.7 0.008254 1112.3 0.01385 13 2572 0.016824 3339.8 0.008254 1124.7 0.01385 14 1768.9 0.017807 3349.5 0.008254 1137.2 0.01598 15 6959 0.017807 2125.9 0.009468 25550 0.01598 16 1581.5 0.01884 1659.2 0.01013 1111.4 0.017146 17 1767.5 0.01884 3844.2 0.01013 1965.7 0.017146 18 2111.8 0.01884 5858.7 0.011578 3028.3 0.017146 19 2675.9 0.01884 6460.1 0.011578 2386.8 0.018385 20 1483.4 0.019923 2682.3 0.012367 1193.9 0.024132 21 1702.9 0.021059 6676.8 0.012367 1526.8 0.024132 22 1995 0.023497 6699.1 0.014086 1839.7 0.027535 23 1494.1 0.024804 1628.4 0.01502 3144.5 0.027535 24 1528.1 0.024804 2572 0.01502 3286.3 0.027535 25 3338.3 0.024804 3361.1 0.016007 3658.8 0.027535 26 9534.5 0.026171 2818.4 0.017049 1095.6 0.029382 27 2038.6 0.027603 4145.4 0.019309 1485.5 0.029382 28 2890.3 0.027603 6440.7 0.019309 1541.6 0.029382 29 2676.3 0.029099 3222.9 0.020532 1110.8 0.031332 30 1173.6 0.030664 3241.1 0.020532 1816.4 0.031332 31 2350.6 0.030664 2086.5 0.02182 1072.1 0.03339 32 2785.1 0.030664 6636.9 0.02182 5899 0.03339 33 4650.5 0.030664 1487.5 0.023176 1108.2 0.035559 34 1159.7 0.032299 5673.6 0.023176 2147.1 0.035559 35 1485.5 0.032299 1470.9 0.024604 3460.8 0.035559 36 25550 0.032299 2036.4 0.024604 5312.5 0.035559 89293 -155- 200418992 37 3144.5 0.032299 3324.9 0.024604 1138.6 0.037845 38 1145.5 0.034006 6959 0.024604 1483.4 0.037845 39 1932.9 0.034006 6648.5 0.026105 1503.6 0.037845 40 1967.8 0.035789 1483.4 0.027683 1070.2 0.040251 41 4646.1 0.037649 2811.1 0.027683 1094.6 0.040251 42 1867.9 0.039588 1482.7 0.029341 1128.9 0.042783 43 3151 0.039588 1963.5 0.029341 1528.1 0.042783 44 3154.1 0.039588 2227.9 0.029341 1084.7 0.045445 45 5893.4 0.039588 6674.2 0.029341 1105.4 0.045445 46 1293.8 0.041611 1532.1 0.031082 1126 0.045445 47 1408.7 0.041611 2673.5 0.031082 1341 0.045445 48 1758.2 0.041611 3035.8 0.031082 2824.7 0.045445 49 1920.8 0.041611 3310.3 0.031082 50 2399.1 0.043718 4191.5 0.031082 51 2804 0.043718 1055 0.034824 52 2858.4 0.045912 3137.7 0.034824 53 2973.8 0.045912 1191 0.036832 54 2361.8 0.048197 1403.7 0.036832 55 5673.6 0.048197 5826.7 0.036832 56 5858.7 0.048197 2970.1 0.038936 57 3279.7 0.038936 58 1055.5 0.041138 59 2584.2 0.041138 60 3778.4 0.041138 61 4646.1 0.041138 62 5914.3 0.041138 63 2223.8 0.043443 64 3216.8 0.043443 65 4069.6 0.043443 66 4343.4 0.043443 67 2643.8 0.045854 68 3313.6 0.045854 69 1054.2 0.048373 70 2327.6 0.048373 71 2509.2 0.048373 72 2734.4 0.048373 73 3383.6 0.048373 89293 156- 200418992 表45 SELDI生物標記p-值：IMAC晶片 基質 乂能量） SPA基質(高能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 9585.6 0.000665 1020.8 0.001547 9248.4 0.001629 2 11505 0.001253 1018 0.007179 6727.5 0.004681 3 9248.4 0.001253 4032 0.020532 6726.6 0.005084 4 11634 0.002118 6707.7 0.023176 6722.9 0.005982 5 11530 0.003997 4028.8 0.024604 11287 0.010314 6 9387.3 0.003997 17506 0.027683 6732.5 0.010314 7 11758 0.005585 4132.2 0.031082 9268.9 0.010314 8 12083 0.005962 4022.3 0.036832 6741.1 0.01197 9 11611 0.007233 4142.1 0.036832 3184.4 0.01598 10 11652 0.007706 6903.1 0.036832 9601.6 0.01598 11 11779 0.009883 6688 0.038936 9284.5 0.017146 12 11568 0.010504 6501.1 0.041138 6737.8 0.019699 13 9284.5 0.010504 4019.9 0.043443 6715 0.024132 14 9384.2 0.01185 6699.1 0.043443 6748.3 0.025786 15 11437 0.012578 6737.8 0.043443 11342 0.027535 16 9626.4 0.014149 6715 0.045854 9078.3 0.027535 17 9470.5 0.014997 6741.1 0.045854 6558.5 0.03339 18 11197 0.015888 8950.8 0.045854 10465 0.035559 19 6189.1 0.015888 1022.7 0.048373 6538.5 0.035559 20 9268.9 0.016824 3740.9 0.048373 9626.4 0.035559 21 6193.1 0.01884 6756.7 0.040251 22 11040 0.019923 9048.9 0.042783 23 14017 0.021059 6545.8 0.048242 24 39807 0.024804 25 9302 0.026171 26 11255 0.029099 27 2605.4 0.029099 28 6040.4 0.029099 29 6274.8 0.029099 30 11845 0.030664 31 5944.5 0.030664 32 11287 0.032299 33 6067.8 0.032299 34 9516 0.032299 35 9735.7 0.032299 36 11702 0.034006 37 5860.6 0.034006 38 5920 0.034006 39 1225.6 0.037649 89293 -157- 200418992 40 5910.1 0.037649 41 74001 0.037649 42 5933.5 0.039588 43 12381 0.041611 44 7253.8 0.043718 45 9391.4 0.043718 46 7144.3 0.045912 47 6252 0.048197 48 7161.6 0.048197 49 7165.1 0.048197 表46 SELDI生物標記p-值：IMAC晶片 基質 (能量） SPA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 1850 0.001353 2570.6 2.91E-05 1229.6 0.009563 2 1191 0.00325 6608.7 0.000306 1001 0.027535 3 2255 0.003997 3353.8 0.000926 2399.2 0.040251 4 1675.2 0.006362 2115.1 0.003188 33884 0.040251 5 2203.7 0.007233 6485.2 0.003717 2411.1 0.042783 6 1190.6 0.014149 2079.5 0.00669 2470.1 0.045445 7 2395.8 0.014149 2622.8 0.007701 3171.9 0.045445 8 卜 2115.1 0.016824 2978.1 0.01013 9 2036.1 0.01884 6816.7 0.013202 10 3366.4 0.023497 2841 0.014086 11 13947 0.024804 2819.7 0.01502 12 2472.4 0.032299 1805.5 0.016007 13 39764 0.034006 1586.1 0.017049 14 3067.3 0.037649 6686.5 0.018149 15 1191.5 0.041611 2559.4 0.02182 16 1982.7 0.043718 2499.2 0.023176 17 2407.1 0.045912 2808.3 0.023176 18 2815.1 0.045912 1220 0.024604 19 1404.8 0.024604 20 1817.6 0.024604 21 6787.8 0.024604 22 6745.1 0.026105 23 5005.5 0.029341 24 2807.4 0.031082 25 2160.8 0.032909 26 3004.7 0.032909 27 6462.1 0.032909 89293 -158- 200418992 28 6910.5 0.032909 29 1600.9 0.034824 30 2685.8 0.034824 31 3429.6 0.034824 32 1900 0.036832 33 2770.8 0.036832 34 1611.3 0.038936 35 1911.5 0.038936 36 4563 0.038936 37 1242.4 0.041138 38 2157.4 0.041138 39 1217.6 0.043443 40 6575.1 0.043443 41 6850.8 0.043443 42 1406.7 0.045854 43 2826.7 0.045854 44 3740 0.045854 45 1568 0.048373 表47 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值：IMAC晶片 基質 (能量) < CHCA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 1978.3 8.56E-05 3301.3 0.000648 1137.2 0.000144 2 2111.8 0.000665 2111.8 0.001102 1116.5 0.002283 3 2086.5 0.00116 6648.5 0.001423 1575 0.002533 4 2858.4 0.001353 2673.5 0.002148 1978.3 0.002533 5 1352.9 0.008735 3233 0.002521 1118.3 0.004187 6 1319.2 0.01185 4145.4 0.002728 2600.9 0.004614 7 1222.8 0.013343 3240 0.00295 1557.5 0.005583 8 1792.9 0.013343 3008.3 0.004009 4377.2 0.006132 9 2483.7 0.014149 3239 0.004009 1514.8 0.007373 10 1242.9 0.014997 4726.3 0.004009 1115.3 0.008071 11 1284.5 0.014997 3259.4 0.004321 1126 0.008071 12 1310.1 0.014997 3213.6 0.008254 1342.1 0.008827 13 4478.1 0.017807 3835.3 0.008254 1629.8 0.009644 14 1670.7 0.01884 11198 0.008843 1880.2 0.009644 15 1494.1 0.019923 2223.8 0.01013 4094.2 0.009644 16 1711.1 0.019923 3339.8 0.01013 1642.5 0.010525 17 2633.5 0.019923 2670.4 0.010833 1102.9 0.011475 18 3082 0.019923 1479.3 0.013202 1117.3 0.012498 19 2179.4 0.021059 2970.1 0.013202 1128.9 0.012498 89293 -159- 200418992 20 1288.5 0.023497 2330.7 0.014086 2029.6 0.012498 21 1917.4 0.023497 3242.5 0.014086 1141.2 0.013598 22 2804 0.023497 3310.3 0.016007 1758.2 0.013598 23 1642.5 0.024804 6440.7 0.016007 4646.1 0.013598 24 1758.2 0.026171 3137.7 0.017049 1101.3 0.014781 25 4650.5 0.026171 3241.1 0.018149 2515 0.014781 26 1287.4 0.027603 6460.1 0.018149 1102.5 0.016052 27 3008.3 0.027603 2589.8 0.019309 1124.7 0.016052 28 1763.1 0.030664 1557.5 0.020532 5673.6 0.016052 29 1932.9 0.030664 3313.6 0.020532 1851.9 0.017414 30 1842.7 0.032299 1230.1 0.02182 1895.5 0.017414 31 3349.5 0.032299 13467 0.02182 3717 0.017414 32 1270.7 0.034006 1457 0.02182 1101.8 0.018874 33 1602.4 0.034006 3460.8 0.02182 1513.8 0.018874 34 1882.1 0.034006 3921.3 0.02182 4639.7 0.018874 35 1674.7 0.035789 6628.3 0.02182 4657.2 0.018874 36 1723.1 0.035789 1670.7 0.023176 1399.2 0.022109 37 2964.2 0.035789 1470.9 0.024604 1835.4 0.022109 38 3154.1 0.035789 1610.6 0.024604 1593.9 0.023895 39 3603.8 0.035789 3242 0.024604 1 5276.2 0.023895 40 1283.5 0.039588 3246.5 0.024604 2386.8 0.025801 41 1449.6 0.039588 3315.4 0.024604 1099.2 0.027834 42 2299.2 0.039588 3332.7 0.026105 1121.9 0.027834 43 1218.9 0.041611 3778.4 0.026105 1685.4 0.027834 44 1500 0.041611 2590.4 0.027683 4643.2 0.027834 45 1685.4 0.041611 3222.9 0.027683 5073.2 0.027834 46 2174.5 0.041611 3349.5 0.027683 1112.3 0.03 47 2563.4 0.041611 3844.2 0.027683 1127.4 0.03 48 3714 0.041611 6699.1 0.027683 1094.6 0.032305 49 4657.2 0.045912 3496.8 0.029341 1222.8 0.032305 50 1995 0.048197 3954.8 0.029341 1576.7 0.032305 51 5858.7 0.029341 1628.9 0.032305 52 2036.4 0.031082 1878.1 0.032305 53 4191.5 0.031082 1109.8 0.034756 54 5338.2 0.031082 1169.8 0.034756 55 5673.6 0.031082 1862.2 0.034756 56 6959 0.031082 1108.2 0.03736 57 1674.7 0.032909 1121.1 0.03736 58 2074.3 0.032909 1139.8 0.03736 59 4377.2 0.034824 1630.6 0.03736 60 1691.3 0.036832 1111.4 0.040123 61 2734.4 0.036832 1892.2 0.040123 62 3717 0.036832 2141.5 0.040123 63 4596.2 0.036832 2250.2 0.040123 64 6674.2 0.036832 4441 0.040123 65 1820.2 0.038936 1105.4 0.043054 66 2078 0.038936 1110.3 0.043054 67 3216.8 0.038936 1168.4 0.043054 89293 -160- 200418992 68 3338.3 0.038936 1541.6 0.043054 69 22302 0.041138 1573.5 0.043054 70 3724.9 0.041138 1503.6 0.046158 71 14006 0.045854 1518.2 0.046158 72 1844.8 0.045854 1572.3 0.046158 73 2572 0.045854 1826.2 0.046158 74 4646.1 0.045854 2107.2 0.046158 75 6636.9 0.045854 1457 0.049444 76 6663.7 0.045854 1459.2 0.049444 77 1503.6 0.048373 1573 0.049444 78 2682.3 0.048373 1932.9 0.049444 79 3595.6 0.048373 4072.9 0.049444 80 7008.2 0.048373 6631 0.049444 表48 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值：IMAC晶片 基質 (能量） SPA基質(高能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P m/z P 1 11505 0.000151 1020.8 0.006229 1002.4 0.018874 2 11530 0.001253 12247 0.007701 11040 0.022109 3 11634 0.001828 1250.2 0.016007 3184.4 0.023895 4 11568 0.001968 3925 0.019309 9339.7 0.025801 5 11779 0.002448 3920.5 0.031082 4118.5 0.043054 6 12083 0.002448 11530 0.038936 1000.7 0.046158 7 12247 0.002448 11758 0.038936 13170 0.046158 8 2605.4 0.00263 11779 0.038936 11568 0.049444 9 3103.1 0.003997 11505 0.041138 7765.9 0.049444 10 11652 0.004278 28285 0.041138 7772.9 0.049444 11 11702 0.004278 11702 0.043443 12 11758 0.004278 13 11611 0.004576 14 12381 0.005229 15 11845 0.005585 16 9104.1 0.01116 17 2800.5 0.022249 18 6826.1 0.022249 19 6827.9 0.022249 20 1182 0.029099 21 10246 0.039588 22 6377.8 0.043718 23 11437 0.045912 89293 -161 - 200418992 表49 與基線有差異之特性之SELDI生物標記p-值：IMAC晶片 基質 (能量） SPA基質(低能量） 樣品· 0小時 -24小時 -48小時 離子編號 m/z P m/z P rrt/z P 1 2646.6 0.001073 2622.8 0.001981 2880.4 0,000362 2 1675.2 0.00146 1198.6 0.003444 2523.9 0.003436 3 11571 0.001574 11571 0.004655 1920.1 0.011475 4 1850 0.002823 1217.9 0.005011 2244.9 0.012498 5 2871.7 0.004576 1242.4 0.006229 2808.3 0.017414 6 2036.1 0.006362 11751 0.007179 1881.6 0.020437 7 2448.2 0.007706 1361 0.011578 1024.6 0.022109 8 11751 0.009883 1217.6 0.012367 3171.9 0.025801 9 2034.2 0.014997 3165.4 0.013202 4108.7 0.025801 10 2472.4 0.016824 1543.9 0.014086 31457 0.034756 11 1235.7 0.017807 2363.5 0.016007 1141.4 0.043054 12 2160.8 0.017807 1287.6 0.017049 1642.2 0.046158 13 2221.3 0.019923 2978.1 0.018149 3004.7 0.046158 14 5993.7 0.021059 2559.4 0.019309 11571 0.049444 15 2407.1 0.023497 1920.1 0.020532 2214.6 0.049444 16 1817.6 0.024804 1560.6 0.02182 2434.1 0.049444 17 2484.8 0.024804 1003.8 0.023176 18 2203.7 0.026171 1220 0.024604 19 2255 0.026171 1292.4 0.024604 20 5866.1 0.030664 1360 0.024604 21 2053.3 0.032299 1318.4 0.027683 22 3345.6 0.032299 2841 0.029341 23 2214.6 0.034006 1288.9 0.031082 24 2028.6 0.037649 1379.4 0.032909 25 2062.1 0.037649 1261.6 0.034824 26 2719.1 0.037649 1270.4 0.034824 27 1230.7 0.045912 1301.7 0.034824 28 9645.7 0.045912 1586.1 0.034824 29 1805.5 0.034824 30 1005.7 0.038936 31 1244 0.038936 32 2118 0.038936 33 1832.1 0.041138 34 2059.5 0.041138 35 3212.4 0.041138 36 1260.7 0.043443 37 3572.4 0.043443 38 1257.3 0.045854 ^39_ 1259.5 0.045854 89293 -162- 200418992 40 2214.6 0.045854 41 2570.6 0.045854 42 2880.4 0.045854 43 1284.4 0.048373 如前述實例1·4·5之說明對前述表26-49之SELDI分析之數 據進行MART分析。表50顯示兩個0時樣本之SELDI實驗之 結果9其中分類之正確度等於或超過約60%。 表50 SELDI數據之MART分析 時間 (小時） 晶片 型式 基質 雷射 能量 感度 專一 性 準確 性 -1 標示(m/z) 0 H50 CHCA 低 67% 64% 65% 9297.4 0 Q10 SPA 低 88% 76% 82% 9540.9,6983.2， 9184.1，9468.2， 1928.7,3000

雖然以某些代表性具體實施例及細節作參考完整說明本 發明，但一般熟習此項技藝者知道其可改變或修飾而不脫 離本文所說明之發明之精神或範圍。 【圖式簡單說明】 圖1說明SIRS至敗血症之進展。敗血症之症狀由至少三個 階段所組成，其間敗血症患者由嚴重敗血症進展至敗血性 休克至多重器官功能障礙。 圖2顯示敗血症與SIRS間之關係。顯示於溫氏圖（Venn diagram)中之各組係對應於具有所指明症狀之個體族群。 圖3顯示敗血症-陽性族群對SIRS-陽性族群之約400種離 89293 -163 - 200418992 子之平均正規化尖峰強度自然對數比。 圖4顯示於ESI-質譜圖中之m/z為437.2道耳頓及於C18逆 相管柱之滯留時間為1。42分鐘之離子強度。圖4A顯示於發 展成敗血症之各種個體族群中之存在之離子之變化。以傳 統技術測定時，敗血症組之被臨床疑為敗血症係發生於“〇 時，’。“-24小時”和“-48小時”分別代表於敗血症組中，被臨 床疑為敗血症發生之前約24小時及約48小時所採得之樣本 。個體於“第1天”參與研究。圖4B顯示從未發展敗血症之個 體族群於〇時採得之樣本之相同離子之存在。 圖5係為符合10位敗血症患者及10位SIRS患者之0時數據 之分類樹，其顯示由電噴灑游離質譜法鑑別出之三種生物 標記可用以從SIRS中區別敗血症。 圖6顯示使用說明於實例中之配置（configuration)，從血漿 樣本獲得之代表性LC/MS和LC/MS/MS圖譜。 圖7A和7B顯示於轉化成敗血症之達48小時前，在血漿中 濃度升高之蛋白質。 圖8 A和8B顯示於轉化成敗血症之達48小時前，在血漿中 濃度降低之蛋白質。 164- 89293

Claims (1)

1. 拾、申請專利範園： L —料生體外·敎個體之敗血症狀態之方法，其包含： 、⑷攸個㈣集之第—個生物樣本取得第—個生物標 i己輪廓；及 〜（）將Θ個^之第—個生物標記輪廓與從參照族群取 得之參照生物標記輪廓相比較； 二中早'人芡此等比較可將個體歸類成是否屬於參照族 群’且其中該比較可敎個體之敗血症狀態。 2.—種於生f外測定個體之敗血症狀態之方法，其包含： )、、單時點;k個體取得第_個生物標記輪廓；及 ⑻將邊個體《第一個生物標記輪廓與參照生物標記 輪廓相比較； 其中生物標記輪廓之可測定個體之敗血症狀態，其準確 度至少為約60%。 3·-種於生體外㈣個體之敗血症狀態之方法，其包含： 將⑽單-時點從個體取得之第一個生物樣本所產生 <第一個生物標記輪廓與（ii)從參照族群產生之參照生 物標記輪廓相比較，其中該比較包含應用一種可測定個 骨豆之敗血症狀態之判定原則。 4. -料生體外測定個體之敗血症狀態之方法，其包含： ⑷仗個體採集之第―個樣本取得第_個生物標記輪 廓；及 ()知》個㈤之第-個生物標記輪廓與從參照族群之 生物樣本取得之參照生物標記輪廓相比較； 89293 200418992 /、中該參照族群係選自由當 ^ 田吊參知族群、SIRS-陽性參照 :'党感染/鮮陰性參照族群、敗血症爾照族 ;於敗血症進展之特定階段之參照族群、藉由傳統 咖於約G·36小時後確認具有敗血症之SIRS_陽性表昭 ㈣、藉由傳統技術㈣36⑽時後確認具有敗血症之 s_-陽性參照族群和藉由傳統技術於約㈣〇時後確 遇以敗血症之SIRS·陽性參照族群所組成之群組，單次 5. 《此寺比較可將個體歸類為是否屬於參照族群且其中 孩比較可測定個體之敗血症狀態。 ’、 一種於生體外測定個體之敗血症狀態之方法，並包冬· 比較⑴從個體之第-個生物樣本取得第一個生物^記 輪廓與（11)從參照族群之生物樣本取得之參照生物標吃 輪靡間之至少-種生物標記之可測特徵，其中該比較; 將個體歸類成是否屬於參照族群，且其中該比較可測定 個體之敗血症狀態。 6· -種於生f4外敎_之敗血症狀狀μ，其包含： U)從個體之第一個生物樣本產生之第一個生物標紀 輪廓中之生物標記組選擇至少兩種特性；及 (b)比車X彳< 參照族群之生物樣本產生之參照生物標記 輪廓中之相同生物標記組之特性， 其中單次之此等比較可將個體歸類成是否屬於參照族 群’其率確度為至少約6G%，且其中該比較可測定個體 之敗血症狀態。 a

   89293 一種於生體外測定個體之敗血症狀態之方 法，其包含： -2 - 200418992 (a) 測定從個體之第一個生物樣本取得之第一個生物 標記輪廓中之至少兩種生物標記之含量或含量變化，及 (b) 比較從個體之第一個生物樣本取得之第一個生物 己輪廓中之至少兩種生物標記之含量或含量變化與 從參照族群之生物樣本取得之參照生物標記輪廓之此 等生物標記之含量或含 量變化， 其中該比較可將個體歸類成是否屬於參照族群，且其中 該比較可測定個體之敗血症狀態。 8· —種於生體外測定個體之敗血症狀態之方法，其包含： 測足彳< 個m之第一個生物樣本取得之第一個生物標記 輪廓中之至少一種生物標記之含量或含量變化，與從⑴ 感染敗血症之SIRS_陽性參照族群和（π)未感染敗血症之 SIRS-陽性參照族群之生物樣本取得之參照生物標記輪 廓中之至少一種生物標記之含量或含量變化相比較，其 中忒生物標屺係選自由表15-23和26-50中所列之任一生 物標記所組成之群組。 9.如申清專利範圍第2項之方法，其中該個體之第一個生 物標記輪廓係來自個體之第一個生物樣本，且該參照生 物標記輪廓係來自從參照族取採集之生物樣本。 i〇·如申請專利範圍第1和3-9項中任一項之方法，其中該生 物樣本係選自由血液、唾液、血清、血漿、尿液、糞便 、腦脊髓液、細胞、細胞萃取物、組織樣本及組織切片 所組成之群組。 11 ·如申請專利範圍第1項之方法，其進一步包含： 89293 200418992 U)從個體採集之第二個生物樣本取得第二個生物標 記輪廓；及 (b)將該個體之第二個生物標記輪廓與參照生物標記 輪廓相比較； 其中孩第二次比較可將個體歸類成是否屬於參照族群 且其中該第二次比較可測定個體之敗血症狀態。 12·如申請專利範圍第1和3-9項中任一項之方法，其進一步 包含將該方法重複至少一次，其中從該方法每次重複時 採集之個體之個別（separate)生物樣本取得個別之生物 標記輪廓。 13·如申清專利範圍第12項之方法，其中個體之生物樣本約 隔24小時採集。 14·如申請專利範圍第項中任一項之方法，其中個體之敗 血症狀態之測定包含預測個體之敗血症發生。 15.=申請專利範圍第14項之方法，其中讀用傳統技術確 足個之敗血症之前至少約24小時預測敗血症之發生。 16·”請專利範圍第14項之方法，其中於使用傳統技術確 疋個體之敗血症之前至少約48小時預測敗血症之發生。 17·^申請專利範圍第14項之方法，其中於使用傳統技術確 疋個體之敗血症之前至少約96小時預測敗血症之發生。 18·如申請專利範圍第卜8項中任一項之方法，其中個體之敗 血症狀態之測定包含測定個體之敗血症進展。 19.如申請專利範圍第卜8項中任一項之方法，其中個體之敗 血症狀態之測定包含診斷個體之敗血症。 89293 200418992 20。如申請專利範圍第1-2和4-8項中任一項之方法，其中該 比較包含應用一種判定原則。 2 1。如申請專利範圍第1項之方法，其中應用判定原則包含 使用一種數據分析演算法。 22。如申請專利範圍第21項之方法，其中該數據分析演算法 包含分類樹之使用。 23·如申請專利範圍第21項之方法，其中該數據分析演算法 係無參數性。 24.如申請專利範圍第23項之方法，其中該數據分析演算法 可測定特性值分佈中之差異。 25·如申請專利範圍第24項之方法，其中該無參數演算法包 含使用魏可遜符號等級檢定。 26·如申請專利範圍第21項之方法，其中該數據分析演算法 包含使用多重附加迴歸樹。 27.如申請專利範圍第21項之方法，其中該數據分析演算法 係一種羅吉斯迴歸。 28·如申請專利範圍第21項之方法，其中該數據分析演算法 包含至少兩種輸入參數。 29.如申請專利範圍第28項之方法，其中該數據分析演算法 包含至少五種輸入參數。 30·如申請專利範圍第29項之方法，其中該數據分析演算法 包含至少十種輸入參數。 3 1，如申請專利範圍第30項之方法，其中該數據分析演算法 包含至少二十種輸入參數。 89293 200418992 •如申凊專利範圍第21項之方法，其中該數據分析演算法 使用至少兩種列於表15_23和26_5〇之任一特性作為輸入 參數。 3 3 β如申請專利範圍第20項之方法，其中該判定原則測定個 體之敗血症狀態之準確度至少為約6〇%。 y» •如申凊專利範圍第3 3項之方法，其中該判定原則測定個 體义敗血症狀態之準確度至少為約7〇%。 .如申凊專利範圍第34項之方法，其中該判定原則測定個 體之敗血症狀態之準確度至少為約8〇%。 6·如申睛專利範圍第35項之方法，纟中該爿定原則測定個 體之敗血症狀態之準確度至少為約9〇%。 7.=申請專利範圍第33項之方法，其中個體之敗血症狀態 以疋係施行於以傳統技術確定個體臨床上疑具敗血症 之前至少約48小時。 38.如申請專利範圍第33項 、、 ^ <万法’其中孩判定原則歸屬十 次交又驗證。 J9·如申請專利範圍第1β8項中任一項之々成 物標記輪廓係得自包含單—個體之族群。 4〇.如申請專利範圍第丨_8項中、 .^ 〒任項又万法，其中該參照 物^圮輪廓係得自包本至丨 41 ^9 ^ α 土 J兩個個體之族群。 • σ申請專利範圍第40項之方、、兵 ^ ^ ^ 去，其中該參照生物標記 蘇係仔自包含至少二十個個體之族群。 42.如申請專利範圍第丨_3和5_8項 參昭旄雜杨1 A丄 a ^任—項之方法，其中 >…祆群係選自由正常參 89293 “、、祆群、SIRS_陽性參照族群 200418992 受感染/SIRS-陰性參昭 、 、狹群、敗血症_陽性表睬 於敗血症進展之縣金 " 子、處 疋1%長之參照族群、藉由傳 约0-36小時後磕命s去 田得、，无技禽於 ,〃、有敗血症之SiRS-陽性參照族群、藉 由傳統技術於约36_60小時 ..後確濕具有敗血症之311^_陽 性參如、族群和藉由馇 精由傳，.死技術於約60-84小時後確認具有 敗血症之SIRS_陽性參照族群所組成之群组。 仏如令請專利範園第！和3_9项中任一项之方法，並進一牛 包含將從個體取得之第二個生物標記輪廓與參照生物 標記輪廓相比較，其令該第二個生物標記輪廓係從個體 採集之第二個生物樣本取得。 44·如申請專利範園第43項之方法，其中個體之第二個生物 樣本係於從個體採集第一個生物樣本後之⑽小時採 集0 45. 如中請專利範圍第43項之方法，其中該第二個生物標記 輪廓係與不同於第一個生物標記輪廓所使用之參照生 物標記輪廓相比較。 46. 如申請專利範圍第〖和3_9項中任一項之方法，其中該個 體之第一個生物標記輪廓和參照生物標記輪廓包含至 少一種核酸之可測性質。 47. 如申請專利範圍第46項之方法，其中該核酸係為mRNA 48·如申請專利範圍第ι_8項中任一項之方法，其中該個體之 第一個生物標記輪廓和參照生物標記輪麻包含至少一 種多肽之可測性質。 89293 200418992 49β如申請專利範圍第48項之方法，其中該可測性質之測定 包含以一種可專一性結合於至少一種多肽之抗體或其 功能性片段接觸至少一種多肽。 50·如申請專利範圍第49項之方法，其中該抗體或其功能性 片段係經可偵測性標示。 5 1 ·如申請專利範圍第5〇項之方法，其中該標示係為一種可 增幅之核酸。 52. 如申請專利範圍第49項之方法，其中至少一種多肽係存 在於血液中。 53. 如申請專利範圍第49項之方法，其中至少一種多肽係為 一種細胞表面蛋白質。 54. 如申請專利範圍第49項之方法，其中至少一種多肽係為 病原體之一種組成份。 5 5 ·如申明專利範圍第49項之方法，其中至少一種多肽係為 可結合病原體之一種組成份之抗體。 56·如申清專利範圍第49項之方法，其中至少一種多肽係為 一種自體抗體。 中任一項之方法，其包含以 57·如申請專利範圍第1和3-9項 一種抗體陣列接觸從個體取得之生物樣本得到之蛋白 質，其中該陣列之抗體係經固定化。 58.如申請專利範圍第㈣項中任一項之方法，其中該生 物樣本係於取得該個體之第一個生物標記輪廓之前先 經區分。 少 59·如申請專利範圍第1_8項 中任一項之方法，其中使用直 89293 200418992 一種獨立之方法以取得該個體之第一個生物標記輪廓。 60。 如申請專利範圍第59項之方旁，其中使用至少兩種獨立 之方法以取得該個體之第一個生物標記輪廓。 61。 如申請專利範圍第59項之方法，其中該至少一種獨立之 方法包括質譜法。 62. 如申請專利範圍第61項之方法，其中該光譜係選自由電 噴灑游離質譜法（ESI-MS)、ESI-MS/MS、ESI-MS/(MS)n 、基質辅助雷射脫附游離飛行時間質譜法 (MALDI-TOF_MS)、表面增強|·雷射脫附/游離飛行時間質 譜法（SELDI-TOF-MS)、矽氧烷上脫附/游離法（DIOS)、 二次離子質譜法（SIMS)、四極柱飛行時間法（Q-TOF)、 大氣壓化學游離質譜法（APCI-MS)、APCI-MS/MS、 APCI-(MS)n、大氣壓光游離質譜法（APPI-MS)、 APPI-MS/MS及APPI-(MS)n、四極柱質譜法、傅立葉轉換 質譜法（FTMS)和電子陷阱質譜法，其中，η為大於零之 整數。 63. 如申請專利範圍第62項之方法，其中至少一種分離法包 含 SELDI-TOF-MS。 64·如申請專利範圍第59項之方法，其中該至少一種分離方 法係選自由化學萃取分配、’管柱層析、離子交換層析、 疏水性（逆相）液態層析、電聚焦、一維聚丙晞醯胺膠體 電泳（PAGE)、二維聚丙烯醯胺膠體電泳（2D-PAGE)、薄 層層析、氣相層析、液相層析所組成之群組，及其任意 組合。 89293 200418992 65。 如申請專利範圍第59項之方法9其中s w、 .L 使用兩種分離 万法以取得個體之生物標記輪廓。 66。 如申請專利範園第ι-g項中任一項之 清’其中該個㈣士 第一個生物標記輪廓和參照生物標記輪靡包本且 染劑或其構件之可測性質。 ° ^ 67。 如申請專利範圍第66項之方法，並中兮Μ η、 ， ” ^茨構件係選自由病 母欲虫白、月日#醣和脂壁酸所組成之群組。 6S·如申請專利範圍第項中任一項 /、万去，其中該個體之 弟一個生物標記輪廓及該參照生物標 , # 0己輪廓包含對於 因感染而反應之免疫系統狀態具資訊性之生物、 可測性質。 π β炙 攸如申請專利範圍第w項中任一項之方法，其中該奸之 第-個生物標記輪廓及該參照生物標記輪廊包^自 由荷爾蒙、自體抗體、生長因子、轉錄因子、細胞表面 標記及自細胞產生之可溶性蛋白質所組成之群組之生 物標記之可測性質。 、 申請專利範圍第i领中任一項之方法，其中該個體之 第―-個生物標記輪廓及該參照生物標記輪廓包含與細 菌血症有關之生物標記之可測性質。 71·=申請專利範圍第W項中任一項之方法，其中該個體之 第一個生物標記輪廓及該參照生物標記輪廓包含與巨 噬細胞溶解有關之生物標記之可測性質。 口 ^ I如申請專利範園第丨领中任_項之方法，其中該個體之 第一個生物標記輪廓及該參照生物才票記輪康包含與敗 89293 -10- 200418992 血症途徑有關之生物標記之可測性質。 73。 如申請專利範圍第u項中任一項之方法，其中該個體之 第一個生物標^輪廓及該參照生物標記輪廓包含自體 抗體之可測性質。 74。 如申請專利範圍第1β8項中任一項之方法，其中該個體之 第一個生物標圮輪廓及該參照生物標記輪廓包含與選 自由組織缺氧、多重器官功能障礙和代謝性酸中毒所組 成之群組之病理狀況有關之生物標記之可測性質。 75· —種於生體外測定個體之敗血症狀態之方法，其包含： (a) 測足生物;^把輪廓中之至少兩種特性之可測性質 ，其中該生物標記係選自由表15_23和26_5〇中所列之任 一生物標記所組成之群組；且 (b) 將該至少兩種特性之可測性質與參照族群中相同 之至少兩種特性之相對應性質之值相比較， 其中單次之此等比較可將個體歸類為是否屬於參照族 群’且其中該比較可預測個體之敗血症發生。 76·如申請專利範圍第乃項之方法，其中該敗血症發生之預 測係於以傳統技術確定敗血症發生之前約12_36小時進 行。 77·如申請專利範圍第乃項之方法，其中該敗血症發生之預 "、J係元以傳統技術確定敗血症發生之前約3 6 _ 6 q小時進 行。 78.如申請專利範圍第乃項之方法，其中該敗血症發生之預 測係於以傳統技術確定敗血症發生之前約6〇_84小時進 89293 •11- 200418992 行。 79. 一種於生體外診斷個體之SIRS之方法，其包含： (a) 從個體採集之第一個生物樣本取得第一個生物標 吕己輪廊$及 (b) 將該個體之第一個生物標記輪廓與自參照族群取 得之參照生物標記輪廓相比較， 其中單次之此等比較可將個體歸類為是否屬於參照族 群，且其中該比較可診斷個體SIRS。 80. —種於生體外診斷個體之SIRS之方法，其包含： (a) 於單一時點從個體取得生物標記輪廓；及 (b) 將該個體之生物標記輪廓與參照生物標記輪廓相 比較， 其中該生物標記輪廓之比較可診斷個體之SIRS，其準確 度至少為約60%。 81. —種於生體外診斷個體之SIRS之方法，其包含··比較⑴ 單一時點從個體之第一個.生物樣本取得第一個生物標 記輪廓與（ii)從參照族群之生物樣本取得之參照生物標 記輪廓，其中該比較包含應用一種可測定個體之SIRS狀 態之判定原則。 82. —種於生體外診斷個體之SIRS之方法，其包含： (a) 從個體採集之第一個生物樣本取得第一個生物標 吾己輪廊，及 (b) 將該個體之第一個生物標記輪廓與自參照族群之 生物樣本取得之參照生物標記輪廓相比較， 89293 -12- 200418992 其中a參照族群係選自由正常參照族群、腿㈣性表解 ，群、及受感染/SIRS-陰性參照族群、敗血症-陽性= 狹群處於敗血症進展之特定階段之參照族群、藉由傳 統技術於約0-36小時後確認具有敗血症之圓_陽性參 照族群、藉由傳統技術於約3“〇時後確認具有敗血症之 SIRS-陽性參照族群和藉由傳統技術於約6㈣4小時後確 涊具有敗血症之SIRS_陽性參照族群所組成之群組，其中 早次《此等比較可將個體歸類為是否屬於參照族群，且 其中該比較可診斷個體之SIRS。 83, 一種於生體外診斷個體之SIRS之方法，其包含：比較⑴ 從個體採集之第一個生物樣本取得之第一個生物標記 輪廓與（ii)從參照族群之生物樣本取得之參照生物標^ 輪廓間之至少一種生物標記之可測特徵，其中該比較可 將個體歸類為是否屬於參照族群，且其中該比較可診斷 個體之SIRS。 84· —種於生體外診斷個體之SIRS之方法，其包各： (a) 從個體之第一個生物樣本產生之第一個生物標記 輪廓中之生物標記組選擇至少兩種特性；及 (b) 比較仗參知、叙群之生物樣本產生之參照生物標記 輪廓中之相同生物標記組之特性， 其中單次之此等比較可將個體歸類成是否屬於參照族 群’其準確度為至少約60% ’且其中該比較可診斷個體 之 SIRS。 85· —種於生體外診斷個體之SIRS之方法，其包本： 89293 -13- 200418992 典(a)測定從個體之第一個生物樣本取得之第〜個生物 標記輪廓中之至少兩種生物標記之含量或含量變化，及 (b)比較從個體之第一個生物樣本取得之第一個生 ^ 卩中义至少兩種生物標記之含量或含量變化與 枚參秩群之生物樣本取得之參照生物標記輪 等生物標記之含量或含量變化， 其中該比較可將個體歸類成是否屬於參照族群，且其中 該比較可診斷個體之SIRS。 ’、 86. -種於生體外診斷個體之嶋之方法，其包含測定個體 之生物樣本中之至少一種生物標記之含量或含量變化 與正常參照族群之生物樣本中之至少一種生物標記之 含量或含量變化相比較’其中該生物標記係選自由表 15-23和26_5〇中所列之任—生物標記所组成之群組。 87. -種於生體外分離生物標記之方法，其中該生物標記可 用以產生一種診斷或預測敗血症之生物標記輪廓，該方 法包含： (a) 取彳于一種參照生物標記輪廓，該參照生物標記輪 廓係自個體族群取得； (b) 釔別忒參照生物標記輪廓之一種特性，其中該特 性可預測或診斷敗血症或敗血症之某一階段； (c) 鑑別與該特性相關之生物標記；及 (d) 分離該生物標記。 88. -種生物標記輪廓，其包含至少兩種可將個體歸類為是 否屬於參照族群且與參照族群比較時準確度為至少約 89293 -14- 200418992 60%之特性，龙 SIRS-陽性參昭“、、秩群係選自由正常參照族群、 症-陽性#族、二、受感染陰性參照族群、敗血 群、藉由傳統技扩進展之特定階段之參照族 陽性參4: Γ6小時後確認具有 認具有敗血症之统技術於約3“°小時後確 參照族群和藉由傳統技術於 、’ ’、0、後確認具有敗血症之SIRS•陽性參照族群所 組成之群組。 89· —種套組，其包本5丨 〇土乂兩種遠自由表15-23和26-50中所 列炙任一生物標記所組成之群組之生物標記。 90·種套組，其包含可專一性結合於至少兩種選自由表 15-23和26_50中所狀任一生物標記所組成之群组之生 物標記之抗體或其功能性片段。 89293 15-