TW200306825A - New use - Google Patents

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200306825 玖、蟹明誕明 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前技術、內容、實施方式及圖式簡單說明) (一）發明所屬技術領域 本發明係關於一種使用下列式（I )或（II )化合物作爲 藥劑生產之新穎用途，其用來預防及/或治療在經移植器官 或組織中之慢性排斥。

(II)

(二）先前技術 技藝背景 肝臟、腎臟、肺臟及心臟之器官移植爲目前在治療末期 器官疾病時所通常使用者，由於在組織分型、手術技術及 更有效的免疫抑制治療上之精緻發展，使得移植結果已漸 進地改進。然而，因爲有慢性排斥的問題，器官移植迄今 仍然非爲不可逆器官疾病之臨床上可存活之解決方法。 顯示漸進及不可逆移植物失能之慢性排斥，爲臨床移植 中最近器官移植失敗之主要原因之一。 典型慢性排斥之預後爲類動脈粥狀硬化變化，如移植血 管病（transplant vasculopaty)、移植物血管疾病（graft vessel disease )、移植物動脈粥狀硬化、移植冠狀動脈疾 病、血管狹窄（a n g i 〇 s t e η 〇 s i s )、間質性纖維化等，此血管 傷害之特徵爲平滑肌細胞之移行及增生，即此導致內膜增 生及增厚，平滑肌細胞肥大修復，並最終逐步管腔消滅（血 200306825 管重建）。尤其是在腎臟之情形，慢性排斥可被稱爲同種異 體移植（allograft )腎病。 慢性排斥似乎看起來爲無情且無法控制的’因爲無已知 的有效治療或預防樣式，因此，在臨床器官移植上，持續 存有一種有效預防及/或治療慢性同種異體移植排斥之對 策之需求。 關於本發明中所使用之式（I )或（Π )化合物，在 USP 5,3 08,8 65號中式（I)或（II)化合物在治療類風濕關 節炎、免疫或非免疫來源之慢性炎症及癌症爲已知的，雖 然慢性炎症被揭示在此專利中，但其不同於特徵爲血管傷 害之經移植器官中之慢性排斥，因此，在經移植器官中之 慢性排斥係未被揭示的。 利弗邁德（Leflunomide )及相關化合物已知可減少平滑 肌細胞過度增生後之血管傷害，因此，在EP0665 0 1 3號中 揭示此等化合物在預防及治療血管狹窄及動脈粥狀硬化後 之血管傷害是有用的，然而，本發明之化合物（I )或（II ) 未被揭示於此專利申請案中。此外，發現在本發明之慢性 排斥爲經移植器官之全部血管爲受宿主免疫及非免疫反應 之結果，而描述於本案之疾病出現在受損恢復之傷害部 份’因此，此等疾病彼此之發生學完全不同。 於USP5,624,946號及USP5,688,824號中已知一般利弗 邁德化合物具有在經移植器官中控制或反轉慢性排斥之活 性’然而，本發明之化合物（I )或（11 )未被揭示於此等 專利申請案中。 200306825 因此，化合物（I)或（II)在被移植器官或組織中具有 預防及/或治療慢性排斥之活性並非完全已知。 (三）發明內容 發明揭示 本發明之發明者已發現化合物（I )或（11 )對於預防及 /或治療經移植器官或組織之哺乳類接受者之慢性排斥上 爲有效的。 因此，本發明提供一種在經移植器官或組織中預防及/ 或治療慢性排斥之新穎方法，其包含給予哺乳類接受者其 所需之治療上有效量之化合物（I )或（II )。 此外，本發明提供一種使用化合物（I )或（11 )作爲藥 劑生產之新穎用途，其用來預防或治療在器官或組織移植 之慢性排斥。 更進一步，本發明提供一種在經移除器官或組織中預防 及/或治療慢性排斥之新穎醫藥組成物，其包含治療上有效 量之化合物（I )或（II )混合醫藥上可接受載體或佐劑。 能夠預防慢性排斥之對策爲，在慢性排斥開始前，已開 始長期或短期給藥，以預防慢性排斥之功能上或組織學徵 候發生之療法。因此，在本發明中所使用之預防慢性排斥 係意指長期保護或維持經移植的器官。 在本發明中使用之「治療」意此此治療包含”控制，，及，’ 反轉”疾病，且能夠控制慢性排斥之治療爲，分別當慢性 排斥之功能性或組織學徵候之開始後，可觀察到緩慢此疾 病過程進展之治療。此外，能夠反轉慢性排斥之治療爲，（分 200306825 別）當已出現慢性排斥之功能性或組織學徵候之開始後’ 反轉疾病進展且重新回到較接近正常之功能性及組織學調 查之結果。 關於本發明之化合物（丨），即（2Z) -2-氰基羥基-N-[4 -(三氟甲基）苯基]-2 -庚烯-6 -基醯胺，或化合物（11 )，即 5-(3-丁炔）-N-[4-(三氟甲基）苯基]-4-異噚唑羰醯胺，其可如 U S P 5，3 0 8，8 6 5號之說明書中實例1 4或其相似方法而被生 產，且應瞭解可能有構形物（c ο n f 〇 i_ m e 1〇及立體異構物， 且此構形物及異構物亦被包括在此發明範疇中’且化合物 (I )可爲另一互變異構物型式。例如’化合物（I )可以其 烯醇（I)或酮（III)型式，即2-氰基-3-酮基- N-[4-(三氟 甲基）苯基]_ 6 _庚炔醯胺，如在下列圖解中所示，且此互變 異構物型式亦被包括在此發明之範疇中。 圖解

化合物（Ϊ )或（Π ) ΐ]在溶劑中，其被包括在本發明車E 疇，此溶劑較佳包括水合物及乙醇化物。 在本發明中之化合物（I )或（Ζ）可以醫藥製劑之形式， 例如以固體、半固體或液體形式，其包含化合物（I )或（II ) 作爲活性成分混合有機或無機載體或賦形劑，而適合於口 -9 - 200306825 服、腸胃外（如靜脈內、肌肉內、皮下或關節內）、外用（如 局部）、腸的、直腸內、經陰道、吸入、眼、鼻或舌下給藥。 活性成分可被調合配製，與通常無毒性、醫藥上可接受的 載體，用於錠劑、小九粒、膠囊、眼滴劑、栓劑、溶液（例 如食鹽水）、乳劑、懸浮液（例如橄欖油）、藥膏、液化氣 體噴霧劑、乳霜、皮膚貼藥、貼布及適合使用之其他型式。 可被使用之載體爲水、葡萄糖、乳糖、楊槐膠、明膠、甘 露糖醇、澱粉糊、三矽化鎂、玉米澱粉、角質素、膠體矽 石、馬鈴薯澱粉、尿素及其他適合於製造藥劑使用之載體， 以固體、半固體或液體形式，還可使用輔助劑、穩定劑、 增稠劑及增色劑及香料。活性目標化合物以足以預防及/或 治療經移植器官或組織之慢性排斥之有效量被包括在醫藥 組成物中。 在本發明中可被治療之哺乳類包括家畜動物如牛、馬 等’家庭動物如狗、貓、鼠等及人類，較佳爲人類。 器官或組織可由供給者被移植至接受者於相同個體（自 體移植（autograft ))、同族物種（同族移植（is〇graft))、 相同物種（同種異體移植（a 11 〇 g r a ft ))或不同種（異種移 植（xenograft ))。此等經移植器官或組織可爲肝臟、腎臟、 心臟、肺臟、同時兼具心-肺、氣管、脾臟、胰臟（完全或 部分，例如蘭氏小島）、皮膚、小腸、角膜、骨髓、四肢、 肌肉、神經、椎間盤、肌纖維母細胞或軟骨，或前述之任 —項合倂。 化口物（I )或（11 )於預防及/或治療慢性排斥之使用 -10- 200306825 上可被單獨給予或合倂一或多種其他免疫抑制劑，例如環 孢素 A (cyclosporin A)、大克羅列馬斯（tacrolimus)、雷 帕黴素（rapamycin )、甲基硝基咪唑基硫代嚷哈 (azathioprine )、腎上腺皮質類固醇、抗淋巴球球蛋白或 Ο K T 3 ;尤其是環孢素A或大克羅列馬斯，同時存在地、分 開地或連續地。此外，化合物.（I )或（11 )於此用途可以 於醫藥組成物中與一或多種上述其他免疫抑制劑之混合物 形式被給藥，此合劑或混合治療被包括在本發明之範疇 中〇 而且化合物（I)或（II)之治療上有效量之劑量會因各 種因素而變化且亦依據年齡及每一個別要被治療的病患之 情形而變化，一般被給予於預防及/或治療此病之每日劑量 約 lmg-10g/身體，較佳爲 5mg-5g/身體，且更較佳爲 1 Omg-2 g/身體之活性成分，且一般給予約on mg、5 mg、 10mg、50m g、100mg、250mg、500mg、lg、2g 及 3g 之平 均單一劑。在人類於預防及/或治療慢性排斥之給藥的每曰 劑量範圍約0.1-50mg/kg。在合劑或混合治療法中，例如， 大克羅列馬斯可在人類中以每日劑量約〇 . 〇 1 _ 5 m g / k g給 藥，較佳爲 0.05-0.5mg/kg。 給予化合物（I )或（II )以預防慢性排斥之期間之變化 會依據物種、要被預防情況之性質及嚴重性而變化，化合 物（I )或（II )通常可被給予人類一短時期或長期，即於 移植後1週至1年或更長之時間，除非慢性排斥開始。 在化合物（I )或（11 )中預防及治療慢性排斥之可能機 -11 - 200306825 制與抗腎小球基膜（anti - g 1 〇m eruli base membrane, GBM) 抗體之減少有關，隨著T G F /3之持續抑制。 下列實例進一步詳細說明本發明，應了解彼等實例不欲 限制本發明之範疇。 (四）實施方式 實例1慢性排斥之預防 (1 )方法 同族的雄性路易士（ Lewis )鼠（LEW ) ( RT11 )，重 2 5 0 - 3 0 0 g，被用來作爲腎臟移植接受鼠，近親交配的雄性 LEW 及 Fisher ( F344) ( RTllvI)，重 250-300g，被分別用 來作爲腎臟移植同族移植及同種異體移植供給鼠，使用 Fisher及Lee經修改技術來執行腎臟移植（Fisher et al.， Surgery，5 8 :904-9 I4, 1 9 6 5 )，以接受鼠存活時間測量腎臟移 植之存活，一週一次收集血液及24小時的尿液以測量血漿 肌胺酸酐（creatinine )、蛋白尿，並測量抗供給鼠腎小球基 膜蛋白質（GBM )抗體之抗體力價，在移植後地90天收取 腎臟移植物並進行組織學及反轉錄酶聚合酶鏈反應（RT-PCR)分析。化合物（I)以每日10mg/kg及20mg/kg之劑 量口服給與接受鼠，由移植後第〇天至第9天，對照之同 族移植及同種異體移植組接受鼠在移植後未接受藥劑。 自上述腎臟移植物接受者收集血液及尿液樣品，接受者 的腎臟功能經由9 0天內每週測量一次其血漿肌胺酸酐及蛋 白尿來決定，以Sigma肌胺酸酐套組測試血漿肌胺酸酐並 以Bio-Rad蛋白質試驗測試蛋白尿。 -12- 200306825 在第9 0天收取接受者之腎臟移植組織作組織學分析， 移植物樣品以 10%NBF固定並隨後立即進行包埋於 ParaPlastTM石鱲包埋介質中。將樣本以3 // m切片，預熱， 去石蠟、再水合，隨後以四種方法中之一種染色：蘇木紫及 伊紅（hematoxylin and Eosin)、許夫氏過碘酸（Per-Iodic Acid Schiff)、維氏合倂彈性三色（Verhoeff’s Combined Elastic Trichrome)及過碘酸銀六次甲基胺（Per-Iodic Acid S i 1 v e r M e t h e n a m i n e )。組織學切片被事先不知情之兩組組 織學家評估，且基於於移植病理學上經修改的班氏標準 (Banff’s cirteria)半定量地評分（Solez et al·，Kindey Int·, 44:411-422，1993) ° TGF Θ已被認爲對於引起慢性同種異體移植排斥上扮演 決定性角色，將在移植後9 0天自接受者收取之腎臟移植組 織進行TGF/3基因表現之TR-PCR，以TRIZOL自移植腎臟 組織提取總 RNA，所執行之實際 RT-PCR時間描述於 Overbergh 等人（Ο verbergh e t a 1. 5 Cytokine， 1 1:3 0 5, 1 9 9 9 )，使用 A B I P r i s m 7 7 0 0 序列偵測系統及 P E B i o s y s t e m s 之試劑，對嚼齒目GADPH爲標準化。用於鼠TGF /3之引子 及探針爲 5’-GCTGCTGACCCCCACTGAT-(正向）、5’-GCCACTGCCGGACAACTC- (反向 ） 及 CGCCTGAGTGGCTGTCTTTTGACGT-TAMRA ，齧齒 @ GAPDH弓i子及探針由PE Biosystem設計。 在移植後20、40及90天使用ELISA試驗，測量接受 F 3 44腎臟之LEW接受鼠之血漿中抗F3 44鼠腎小球基膜蛋 -13- 200306825 白質之專一性抗體，亦測量同族移植、未治療的同種異體 移植及以1 Omg/kg及20mg/kg劑量之化合物（I )治療之同 種異體移植中之抗體量。 (2 )結果 同族移植存活超過90天，相反地，僅40%之對照組同 種異體移植存活超過90天，彼等接受以化合物（I)l〇mg/kg 及2 Omg/kg劑量治療之同種異體移植於移植後存活超過90 天者分別爲80%及100%。（表1 ) 表1 組別 藥劑 途 徑 期間 η 存活天數 存活率 同種移植 - - - 6 >90 1 0 0 % 同種異體 移植 - - - 10 1 4,20,2 1,24,3 8 ，72, > 90 ( 4) 4 0% 化合物（I) 1 Omg/kg PO 0-9天 5 28, > 90 ( 4) 8 0% 化合物（I) 2 0 m g / k g PO 0-9天 5 >90(5) 1 0 0 % 在無化合物（I )治療下，接受鼠血漿肌胺酸酐在7週會 增加且蛋白尿在5週會偵測到，以1 〇mg/kg及20mg/kg劑 量之化合物（I )治療之接受者維持正常肌胺酸酐且未偵 測到蛋白尿如同未處理的鼠’且在這段期間我們亦追蹤同 族移植接受者。（第1 -4圖） 觀察未治療之同種異體移植對照組漸進組織學慢性排 斥之發展，由1〇111§/1^及20mg/kg2劑量之化合物（I)治 療接受者在腎臟移植物之班氏計分中估計累積減少羹分別 -14- 200306825

如下：間質發炎5 0 %及6 7 %，腎小管炎1 0 0 %及1 〇 〇 % ’血 管炎33%及50%，間血管炎（11163&1^丨〇13^丨5)83%及1〇〇°/。’ 腎小球炎7 5 %及3 8 %，管萎縮4 0 %及8 5 %，腎小球硬化8 3 % 及1 0 0 %，纖維-內膜增生6 3 %及4 4 %，及移植腎小球病7 9 % 及1 00%，當與未治療同種異體移植對照組比較時。且基於 腎臟移植病理學之斑氏標準，（-):分數0，正常，（ + ): 分數1，輕微，（ + + ):分數2，中度，（ + + + ):分數3, 嚴重’被用來診斷評估慢性排斥。（表2 ) 表2 組 另！J 1* 2* 3* 4* 5* 6* 7* 8* 9* 化合物（I) 10mg，自 第0-9天 + — + — + + — + + - 化合物（I) 10mg，自 第0-9天 + + — + + + + - + + — + 化合物⑴20mg，自 第0-9天 + - + + + - + + + - + + - 化合物（I) 20mg，自 第0-9天 + - + + + - + - - + + - 化合物（I)20mg，自 第0-9天 + 一 - — - 一 — + - 化合物（I) 20mg，自 第0-9天 + - - - + + - - + - 同種異體移植對照組 + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ 同種異體移植對照組 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ 同種異體移植對照組 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

-15 - 200306825 1 * :炎症，2 * :腎小管炎，3 * :血管炎，4 * :間血管 炎，5 * :腎小球炎，6 * :腎小管萎縮，7 * :腎小球硬 化，8 * :纖維-內膜增生，9 * :移植腎小球病 比較同族移植對照組，在未治療同種異體移植對照組中 T G F /3 ni RN A被顯著地經上游調節，化合物（I )治療抑制 TGF ^基因表現，以劑量-依賴方式在移植後90天，與未治 療同種異體移植對照組比較。（第5圖） 在同族移植對照組中，血漿抗G B Μ無法偵測到，在未 治療同種異體移植對照組中，移植後接近2 0天時可偵測 到，之後會增加。以劑量爲1 Omg/kg及20mg/kg之化合物 (I )治療之接受者兩者皆顯示傾向減少抗供給者G B Μ抗 體之產生。（第6-9圖） 實例2合倂大克羅列馬斯之慢性排斥預防 (1 )方法 使用如實例1中所述之鼠及腎臟移植之方法，將化合物 (I )以3mg/kg之劑量，大克羅列馬斯以lmg/kg之劑量， 於移植後9 0天每天口服給予接受鼠，同族移植、未治療同 種異體移植及單獨以大克羅列馬斯lmg/kg之組作爲對照 組。 於腎臟移植後90天收集血液及尿液樣本一週一次如實 例1所述，測量其血漿肌胺酸酐及蛋白尿，以S i gma肌胺 酸酐套組測試血漿肌胺酸酐並以Bio-Rad蛋白質試驗測試 蛋白尿。 使用如實例1中所述之方法，慢性同種異體移植排斥之 -16- 200306825 組織學改變被分析，組織學切片被事先不知情之兩組組織 學家評估，且基於移植病理學上經修改的班氏標準（Banfr s c i r t e r i a )半定量地評分。 在移植後2 0、4 0及9 0天使用如實例1所述之方法’測 量接受F 3 4 4腎臟之L E W接受鼠之血漿中抗F 3 4 4鼠腎小球 基膜蛋白質之專一性抗體，亦測量同族移植、未治療的同 種異體移植及以3 m g/k g劑量之化合物（I )合倂大克羅列 馬斯1 m g/k g劑量之治療的同種異體移植組。 (2 )結果 同族移植存活超過9 0天，相反地，僅4 0 %之對照組同 種異體移植存活超過 9 0天，彼等接受以大克羅列馬斯 1 m g / k g及化合物（I ) 3 m g / k g劑量合倂大克羅列馬斯1 m g / k g 劑量之同種異體移植於移植後存活過9 0天者，兩者皆爲 1 0 0 〇/〇。（表 3 ) 表3 組 別 藥齊J 途徑 期間 η 存 活 天 數 存活率 同種移植 - - - 6 >90 100% 同種異體移植 - - - 10 14,20,21，24,38,72，>90(4) 40% 大克羅列馬斯 lmg/kg P〇 0-90 天 4 >90 100% 化合物（I) 大克羅列馬斯 3mg/kg 1 mg/kg P〇 P〇 0-90 天 4 >90 1⑻％ 在未治療之同種異體移植中，接受鼠血漿肌胺酸酐在7 週會增加且蛋白尿在5週偵測爲陽性，以3mg/kg劑量之化 合物（I )合倂1 m g / k g之大克羅列馬斯治療之接受者顯示’ 200306825 與未治療同種幾體移植比較，在血漿肌胺酸酐及蛋白尿會 減少。（第1 0、1 1圖） ϋ胃未治療之同種異體移植對照組漸進組織學慢性排 斥之發展’由3mg/kg劑量之化合物（I)合倂lmg/kg之大 克羅列馬斯治療接受者在腎臟移植物之班氏計分中估計累 積減少量分別如下：間質發炎5〇%，腎小管炎85%，血管 炎92%，間血管炎75%，腎小球炎38%，小管萎縮55%， 腎小球硬化5 8 %，纖維-內膜增生6 3 %，及移植腎小球病 5 7% ’當與未治療同種異體移植對照組比較時。且基於腎臟 移植病理學之斑氏標準，（-)、（ + )、（ + + )及（+ + +、 相同於表2之定義。（表4) - 18- 200306825 表4 組別 1* 2* 3* 4* 5* 6* 7木 8* 9* 化合物（I) 3mg +大 克羅列馬斯lmg，於 0-90 天 + + + + — + + — 化合物（I) 3mg+大 克羅列馬斯lmg，於 0-90 天 + + + + + + + + — 化合物（I) 3mg +大 克羅列馬斯lmg，於 0-90 天 + + + + + + + 一 + + — 化合物（I) 3mg +大 克羅列馬斯lmg，於 0-90 天 + + + + + + + — 同種異體移植對照組 + + + + + + + 十+ + + + + + + + + + + 同種異體移植對照組 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 同種異體移植對照組 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 1* ··炎症，2* :腎小管炎，3* :血管炎，4* :間血管炎， 5 * :腎小球炎，6 * :腎小管萎縮，7 * :腎小球硬化，8 * : 纖維-內膜增生，9 * :移植腎小球病 在同族移植對照組中，血漿抗GBM無法偵測到，在未 治療同種異體移植對照組中，移植後接近20天時可偵測 到，之後會增加。以劑量爲3mg/kg之化合物（I )合倂計 量爲1 mg/kg之大克羅列馬斯治療之接受者無可偵測量之抗 -19 - 200306825 供給者G Β Μ抗體，如在同族移植對照組中。（第1 2圖） 實例3慢性排斥之治療 (1 )方法 使用如實例1中所述之鼠及腎臟移植之方法，將化合物 (I )以20mg/kg之劑量口服給予接受鼠3週，其給藥時間 開始於當顯示有增加的血漿肌胺酸酐或可偵測到蛋白尿 後，同族移植及未治療同種異體移植組作爲對照組。自腎 臟移植之接受者收集血液及尿液樣本一週一次如實例1所 述，測量其血漿肌胺酸酐及蛋白尿，以S i gma肌胺酸酐套 組測試血漿肌胺酸酐並以 Bio-Rad蛋白質試驗測試蛋白 尿。 使用如實例1中所述之方法，分析慢性同種異體移植排 斥在以化合物（I)搶救治療之組織學改變，組織學切片被 事先不知情之兩組組織學家評估，且基於移植病理學上經 修改的班氏標準（Banff’s cirteria)半定量地評分。 (2 )結果 在未治療之同種異體移植中，接受鼠血漿肌胺酸酐在7 週會增加且蛋白尿在5週偵測爲陽性，雖然以化合物（I ) 搶救治療，接受者之腎臟功能未顯示立即改進，藥物治療 後血漿肌胺酸酐及蛋白尿傾向爲正常量爲不連續。（第1 3、 1 4圖） 觀察未治療之同種異體移植對照組漸進組織學慢性排 斥之發展，在慢性排斥期間，給予20 m g/kg劑量之化合物 (I )在腎臟移植物之班氏計分中估計累積減少量分別如 -20- 200306825 下：間質發炎5 0 %，腎小管炎7 0 %，血管炎9 2 %，間血管 炎3 3%，腎小球炎38%，小管萎縮42%，纖維〜內膜增生53%， 及移植腎小球病8 9 %，當與未治療同種異體移植對照組比 較時。且基於腎臟移植病理學之斑氏標準，（-)、（ + )、（ + + )及（ + + + )相同於表2之定義。（表5) 表5 組 別 1* 2* 3* 4* 5* 6* 7* 8* 9* 自第40-70天以化 合物⑴搶救 + — + — + + — + + — 自第40-70天以化 合物（I)搶救 + + — + + + + — + + — + 自第40-70天以化 合物（I)搶救 + — + + + — + + + — + + — 自第40-70天以化 合物⑴搶救 + — + + + — + - — + + —

1 * ··炎症，2 * :腎小管炎，3 * :血管炎，4 * :間血管 炎，5 * :腎小球炎，6 * :腎小管萎縮，7 * :腎小球硬 化，8 * :纖維-內膜增生，9 * :移植腎小球病 實例4慢性排斥合倂短暫大克羅列馬斯治療之治療 (1 )方法 使用如實例1中所述之鼠及腎臟移植之方法，將大克羅 列馬斯以1 nig/kg之劑量於移植後0至9天，及化合物（I ) 以10mg/kg及15mg/kg之劑量自移植後28天至60天口服 給予接受鼠，在此硏究中，移植後1 〇天，LEW接受者短暫 -21 - 200306825 以口服lmg/kg/day之大克羅列馬斯治療以避免急性排斥， 並緩慢逐漸破壞F 3 4 4腎臟移植物之慢性排斥，造成功能上 及組織學上改變相似於人類之慢性排斥。同種移植、未治 療同種異體移植及單以大克羅列馬斯lmg/kg治療10天之 同種異體移植作爲對照組。自腎臟移植之接受者收集血液 及尿液樣本一週一次如實例1所述，測量其血漿肌胺酸酐 及蛋白尿，以S i gm a肌胺酸酐套組測試血漿肌胺酸酐並以 Bio-Rad蛋白質試驗測試蛋白尿。 (2 )結果 同族移植存活超過9 0天，相反地，僅4 0 %之對照組同 種異體移植存活超過90天，彼等接受者移植後單以大克羅 列馬斯1 mg/kg治療組顯示1 〇〇%之同種異體移植存活率’ 以短暫劑量之大克羅列馬斯治療及於移植後2 8天至6 0天 給與化合物（I) l〇mg/kg及15mg/kg各別同種異體移植存 活率將在增加動物範例數量後爲可得的。（表6 ) 表6 組 別 藥齊U 途徑 期間 η 存活天數 存活率 同種移植 - 6 >90 100% 同種異體移植 一 - - 10 14,20,21，24,38,72，>90 (4) 40% 大克羅列馬斯 lmg/kg PO 0-9天 5 >90 100% 大克羅列馬斯 lmg/kg PO 0-9天 2 >90 (2) Ν/Α 化合物（I) 1 Omg/kg PO 28-60 天 大克羅列馬斯 lmg/kg PO 0-9天 1 >90 Ν/Α 化合物（I) 15mg/kg PO 28-60 天 -22 - 200306825 接受者的腎臟功能經由9 0天內一週一次測量其血漿肌 胺酸酐及蛋白尿來決定，在同種異體移植對照組中，血漿 肌胺酸酐於移植後7週快速增加，且在同種異體移植以短 暫劑量之大克羅列馬斯治療組在8週後快速增加，反之， 同種移植對照組卻維持在正常正常範圍內。由2 8至6 0天 之化合物（I ) 1 〇mg/kg在整個硏究期間維持血漿肌胺酸酐 的量少於1 .5mg/dL之正常値。雖然接受者以化合物（I ) 15 mg/kg/day治療顯示由移植後3至9週開始增加血漿肌胺 酸酐，其之後會反轉而維持在正常値間（第1 5、1 6圖）。 同種異體移植對照組鼠之4 0 %及同種異體移植以短暫劑量 之大克羅列馬斯治療組之100%在移植後存活超過90天， 蛋白尿分別在移植後2及5週可偵測到，且之後戲劇性地 增加，當予同種移植對照組比較時。自28至60天以化合 物（I) 10mg/kg及15mg/kg治療在腎臟接受者中會減少蛋 白尿之進展。（第17、18圖） 在經移植器官或組織中，化合物（I )或（Π )被證明具 有預防及/或治療慢性排斥之活性，因此，本發明提供在經 移植器官或組織中有用的免疫抑制劑以預防及/或治療慢 性排斥。 (五）圖式簡單說明 第1圖 顯示以1 〇mg/kg劑量之化合物（I )治療後之血漿 肌胺酸酐濃度。（實例1 ) 第2圖 顯示以20mg/kg劑量之化合物（I )治療後之血漿 肌胺酸酐濃度。（實例1 ) -23 - 200306825 第3圖 顯示以10mg/kg劑量之化合物（I )治療後之蛋白 尿濃度。（實例1 ) 第4圖 顯示以20mg/kg劑量之化合物（I)治療後之蛋白 尿濃度。（實例1 ) 第5圖 顯示在以化合物（I )治療，TGF /3基因表現之抑 制。（實例1 ) 第6圖 顯示在同源移植中抗GBM抗體之產生。（實例1 ) 第7圖 顯示在同種異體移植中抗GBM抗體之產生。（實 例1 ) 第8圖 顯示在以l〇mg/kg劑量之化合物（I)治療之同種 異體移植中抗GBM抗體之產生。（實例1 ) 第9圖 顯示在以2 0 m g / k g劑量之化合物（I )治療之同種 異體移植中抗GBM抗體之產生。（實例1 ) 第10圖顯示於移植中以3mg/kg劑量之化合物（I)合倂 lmg/kg劑量之大克羅列馬斯治療後之血漿肌胺酸 酐濃度。（實例2 ) 第11圖顯示於移植中以3mg/kg劑量之化合物（I)合倂 lmg/kg劑量之大克羅列馬斯治療後之蛋白尿量。 (實例2 ) 第1 2圖顯示在同種異體移植以化合物（I )合倂大克羅列 馬斯治療後之抗GBM抗體之產生。（實例2 ) 第13圖顯示於移植中以2〇mg/kg劑量之化合物（I)搶救 治療後之血漿肌胺酸酐濃度。（實例3 ) 第14圖顯示於移植中以20mg/kg劑量之化合物（I)搶救 200306825 治療後之蛋白尿量。（實例3 ) 第15圖顯示於移植中以10m g/kg劑量之化合物（I)與短 暫大克羅列馬斯治療之血漿肌胺酸酐濃度。（實例 4) 第16圖顯示於移植中以15mg/kg劑量之化合物（I)與短 暫大克羅列馬斯治療之血漿肌胺酸酐濃度。（實例 4 ) 第17圖顯示於移植中以10m g/kg劑量之化合物（I)與短 暫大克羅列馬斯治療之蛋白尿量。（實例4 ) 第18圖顯示於移植中以15 mg/kg劑量之化合物（I)與短 暫大克羅列馬斯治療之蛋白尿量。（實例4 ) -25 -

Claims (1)

1. 200306825 拾、申請專利範圍 1·一種在經移植器官或組織中預防及/或治療慢性排斥之方 法’其包含給予治療上有效量之式（I )或（II)化合物 於需要之哺乳類接受者：

   2·如申請專利範圍第1項之方法，其中該方法係用來預防 慢性排斥。 3·如申請專利範圍第2項之方法，其中該移植爲同種異體 移植(allograft transplantaion ) ° 4·如申請專利範圍第1項之方法，進一步包含給予治療上 有效量之大克羅列馬斯（tacrolimus)。 5.如申請專利範圍第3項之方法，進一步包含給予治療上 有效量之大克羅列馬斯。 6·如申請專利範圍第1項之方法，其中該方法爲以口服方 式給藥。 7. —種式（I )或（II )化合物之用途：

   ，其用於在經移植器官或組織中預防及/或治療慢性排 斥之藥劑製造。 -26- 200306825 8.如申BF9專利車E El弟7項之用途，其中該藥劑係用來預防 慢性排斥。 认如申請專利範圍第8項之用途，其中移植爲同種異體移 植。 10.如申請專利範圍第7項之用途，其用來製造含大克羅列 馬斯之藥劑。 11·如申請專利範圍第9項之用途，其用來製造含大克羅列 馬斯之藥劑。 12·如申請專利範圍第7項之用途，其中該藥劑係以口服方 式給藥。 13· —種在經移植器官或組織中用來預防及或治療慢性排斥 之醫藥組成物，其包含治療上有效量之式（I )或（π ) 化合物：

   (II)

   ，混合醫樂上可接受:的載體或賦形劑。 14. 如申請專利範圍第1 3項之醫藥組成物，其中該組成物係 用來預防慢性排斥。 15. 如申I靑專利範圍第1 4項之醫藥組成物，其中該移植爲同 種異體移植。 16·如申請專利範圍第1 3項之醫藥組成物，其用來共同給予 治療上有效量之大克羅列馬斯。 -27- 200306825 17. 如申請專利範圍第1 5項之醫藥組成物，其用來共同給予 治療上有效量之大克羅列馬斯。 18. 如申請專利範圍第1 3項之醫藥組成物，其以口服方式給 藥。

   -28-