TR2021021022A2 - Karbon dna i̇zolasyon ki̇ti̇ ve yöntemi̇ - Google Patents

Karbon dna i̇zolasyon ki̇ti̇ ve yöntemi̇

Info

Publication number
TR2021021022A2
TR2021021022A2 TR2021/021022A TR2021021022A TR2021021022A2 TR 2021021022 A2 TR2021021022 A2 TR 2021021022A2 TR 2021/021022 A TR2021/021022 A TR 2021/021022A TR 2021021022 A TR2021021022 A TR 2021021022A TR 2021021022 A2 TR2021021022 A2 TR 2021021022A2
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
microliters
carbon
tissue
dna isolation
samples
Prior art date
Application number
TR2021/021022A
Other languages
English (en)
Inventor
Hadi̇ Mehemmed
Original Assignee
Mergen Scient Tibbi Ueruenler Imalat Sanayi Ve Ticaret Laboratuvar Limited Sirketi
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mergen Scient Tibbi Ueruenler Imalat Sanayi Ve Ticaret Laboratuvar Limited Sirketi filed Critical Mergen Scient Tibbi Ueruenler Imalat Sanayi Ve Ticaret Laboratuvar Limited Sirketi
Priority to TR2021/021022A priority Critical patent/TR2021021022A2/tr
Priority to PCT/TR2021/051590 priority patent/WO2023121585A1/en
Publication of TR2021021022A2 publication Critical patent/TR2021021022A2/tr

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06Separation; Purification
    • C07H1/08Separation; Purification from natural products
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Buluş, moleküler biyoloji, genetik, tıbbi genetik, mikrobiyal genetik, biyoteknoloji gibi alanlarda uygulanan ve araştırma ve teşhis koyma çalışmalarında biyolojik materyallerden (sürüntü, idrar, sperm,doku, tam kan, serum ve diğer vücut sıvıları veya doku örnekleri) viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini sağlayan karbon DNA izolasyon kiti ve yöntemi ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME KARBON DNA IZOLASYON KITI VE YÖNTEMI Teknik Alan Bulus, moleküler biyoloji, genetik, tbbi genetik, mikrobiyal genetik, biyoteknoloji gibi alanlarda uygulanan ve arastmma ve teshis koyma çallSmaIarlnda biyolojik materyallerden (sürüntü, idrar, sperm,doku, tam kan, serum ve diger vücut sivlar veya doku örnekleri)viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini saglayan karbon DNA izolasyon kiti ve yöntemi ile ilgilidir.
Teknigin Bilinen Durumu Mevcut teknikte moleküler biyoloji, genetik, ttbbi genetik, mikrobiyal genetik, biyoteknoloji gibi alanlardaarastîma ve teshis koyma çalismalarmida biyolojik materyallerdenviral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesi için silisyum bazIEkitIer vasîasýla genomik DNA elde edilmesi saglanmaktadI. Ancak mevcut uygulamalarda kullanttan DNA kitleri yüksek maliyetli olup, otomasyonu zordur.
Bununla birlikte özellike kolon yönteminde plastik atm sorunu mevcuttur. Bu nedenle teknigin bilinen durumunda yasanan zorluklarn ortadan kaldmllmaslni saglayan bir kit ve yönteme ihtiyaç dogmustur.
Literatürde yap lan arastlnmada teknigin bilinen durumuna örnek olarak EP0462100 numaralüdoküman gösterilebilir. Söz konusu doküman, proteinli malzemeleri nükleik asitlerden aymmak için bir yöntem ile ilgilidir. Bahsi geçen yöntem, proteinli materyalleri ve nükleik asitleri içeren bir solüsyonun, bagl: ve bagi: olmayan fraksiyonlar olusturmak üzere proteinleri baglayabilen bir kati: faz ekstraksiyon materyali ile temas ettirilmesini ve ardlidan nükleik asitleri içeren baglanmamß fraksiyonun izole edilmesini içermektedir. Bahsi geçen solüsyon, bir rehidrate silika Sonuç olarak yukaruilaki problemlerin varILgzve mevcut çözümlerin yetersizligi, ilgili teknik alanda bir gelistirme yapmayi lzorunlu k Im stln.
Bulusun Amacl l Mevcut bulus yukarîia bahsedilen dezavantajlar:ortadan kaIdIan ve ilgili teknik alana avantajlar getirenkarbon DNA izolasyon kiti ve yöntemiile ilgilidir.
Bulusun ana amac:arastîma ve teshis koyma çalßmalarlida biyolojik materyallerden (sürüntü, idrar, sperm,doku, tam kan, serum ve diger vücut smîar: veya doku örnekleri) karbon atomlarlidan olusan grafit tozu veya grafit kapi: yüzeyler kullan tarak viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini saglayan bir karbon DNA izolasyon kiti ve yöntemi ortaya koymakt r.
Bulusun amac ,yüksek maliyetli prob ve isik sistemlerine ihtiyaç duyulmadan viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini saglamaktln.
Bulusun bir diger amachüsük maliyetle kaliteli viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini saglamaktm.
Bulusun DetaylFJAçklamasFi Bu detaylDaçtRIamada, bulus konusukarbon DNA izolasyon kiti ve yönteminin tercih edilen alternatifleri, sadece konunun daha iyi anlastlrnasna yönelik olarak ve hiçbir s nmlayÇLietki olusturmayacak sekilde açmlanmaktad m.
Bulus,moleküler biyoloji, genetik, t`bbi genetik, mikrobiyal genetik, biyoteknoloji gibi alanlarda uygulanan ve arastmma ve teshis koyma çalßmalarmida biyolojik materyallerden (sürüntü, idrar, sperm tam kan, serum ve diger vücut s vllarl lveya doku örnekleri) viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini saglayan karbon DNA izolasyon kiti ile ilgilidir.
Bulusa konu karbon DNA izolasyon kiti en temel halinde; pH5 Iizis tampon A ve/veyapHS Iizis tampon B, pH8 yikama solüsyonu, izopropanol, %70'lik etanol, pH9 elüsyon solüsyonu, grafit tozu veya grafit kaplama yüzey içeren karbon DNA izolasyon kitidir. pH5 Lizis tampon A temel olarak sunlar,içermektedir;0,205 gram Sodyum Asetat (NaHC03), , 1,089 mililitre ml'ye tamamlanan ölçüde distile su içermektedir. pH 5 Lizis tampon B temel olarak sunlar:içermektedir; 1 gram deterjan içerikli solüsyon (SDS), 100 miIiIitre distile su içermektedir. pH8 yikama solüsyonu sunlarü içermektedir; 0,205 gram Sodyum Asetat (CZHSNaOZ), 50 miIiIitre %96`lLk etanol, 100 militreye kadar izopropanol ve 50 miIiIitre %96`Ilk etanolün ls tma ile tam çözülmesi saglanln.
Bulusa konu karbon DNA izolasyon kitinde %99,8 oraninda izopropanol kullanTmaktadm.
Elüsyon solüsyonunda distile suyun Ph`nIi NaOH ile 9 olmasEsagIanmaktadI. Uzun müddet saklama kosullar: için elüsyon solüsyonu EDTA tuzu ve Tris HCL içermektedir.
Grafit kaplama yüzey, plastik, metal veya cam olabilir.
Bulus ayn,zamanda,moleküler biyoloji, genetik, tümbi genetik, mikrobiyal genetik, biyoteknoloji gibi alanlarda uygulanan ve arastlnma ve teshis koyma çaliSmaIar nda biyolojik materyallerden (Sürüntü, idrar, sperm,doku, tam kan, serum ve diger vücut sîifiarH veya doku örnekleri) viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini saglayan karbon DNA izolasyon yöntemi ile ilgilidir.
Idrar, sürüntü, sperm örnekleri için ön hazmlk ve Iizis asamasüslem admnlarisu sekildedir; 1. 90-200 mikrolitre oran mida sperm veya idrar veya sürüntü örnegi temiz 2. 200-500 mikrolitre Iizis tampon A eklenir. (Lizis tampon A için önerilen miktar 300 mikrolitredir.) Kar slm 15 saniye vortekslenir. 300-500 mikrolitre yikama solüsyonu eklenir (Burada önerilen miktar 400 mikrolitredir.) 6. Karsmn 15 saniye vortekslenir.
Doku, tam kan ve serum örnekleri için ön hazîltk ve lizis asamasjslem adEhlarESu sekildedir; 0.2-2 gram doku ya da 90-200 mikrolitre serum veya tam kan örnegi direkt çalSmaya alîim. (Burada kan veya serum için önerilen miktar 100 mikrolitredir.) 200-500 mikrolitre Lizis Tampon A eklenilir. (Lizis tampon A için önerilen miktar 300 mikrolitredir) Kar Slm 15 saniye vortekslenir. 95°C de 10 dakika inkübe edilir. (Proteinaz K kullan lmasl durumunda bu 200-400 mikrolitre lizis tampon B veya 10 mikrolitre proteinaz k eklenir.
(Burada lizis tampon B için önerilen miktar 200 mikrolitredir.) de 10 dakikad I.) 12000rpm'de 2 dakikadl.) Süpernatant temiz bir tüpe aktarJE. 200-400 mikrolitre izopropanol eklenir (Burada önerilen miktar 300 mikrolitredir.) Sürüntü, idrar, sperm, doku, tam kan, serum örnekleri için haz rlik asamas ndan sonra DNA saflastinma asamasi su sekildedir; Idrar, sürüntü, sperm örnekleri için ön hazlnl I( ve lizis asamasl Veya Doku, tam kan ve serum örnekleri için ön hazmlk ve lizis asamasFIIe elde edilen karßîna 70 miligram grafit tozu eklenir.
Kargmn homojen olana kadar vortekslenir ve karßEn siyah renk aim.
Karsmn, oda sßaklglida 5 dakika inkübe edilir. ve süre 12000 rpm'de 1 dakikadl.) Süpernatant atTm ve sWîFsFm atTarak pellet kßmîkalr. 500 mikrolitre %70`lik etanol eklenir.
Kargmn homojen olana kadar vortekslenir. 12000 rpm'de 1 dakikad r.) Süpernatant atm vesmEkßEn atmarak pellet kîsmEkalI. (Burada kan ve serum örnekleri için 15.16.17 ve 18.islem ad EnlarEtekrar edilebilir.) 60-75 “C'de 5-10 dakika tüpün kapagEaçE sekilde kuruma saglanana kadar inkübe edilir.
Istenilen DNA miktarlia baglmlarak 90-200 mikrolitre elüsyonu solüsyonu eklenir.
Karsmn homojen olana kadar vortekslenir. 60-70 °C de 5 dakika inkübe edilir. 14000 rpm'de 2 dakikad r.) Süpernatant temiz bir tüpe aktar lln. Bu süpernant DNA içeren solüsyondur.
Aktarma yapmîken grafitin süpernatanta karFSmamasFBaglan T.

Claims (8)

  1. ISTEMLER Moleküler biyoloji, genetik, ttbbi genetik, mikrobiyal genetik, biyoteknoloji gibi alanlarda uygulanan ve arastIma ve teshis koyma çalismalarîida biyolojik materyallerden (sürüntü, idrar, sperm,doku, tam kan, serum ve diger vücut smîarîveya doku örnekleri) viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini saglayan karbon DNA izolasyon kiti olup, özelligi; - pH5 Iizis tampon A velveyapHS Iizis tampon B, pH8 ykama solüsyonu, izopropanol, %70'Iik etanol, pH9 elüsyon solüsyonu, grafit tozu veya grafit kaplama yüzey içermesidir.
  2. Istem 1'e uygun bir karbon DNA izolasyon kiti olup, özelligi; bahsedilen Iizis Klorit (NH4CI), 0,84 gram Sodyum Bikarbonat (NaHCog), 0,37 gram EDTA tamamlanan ölçüde distile su içermesidir.
  3. Istem 1'e uygun bir karbon DNA izolasyon kiti olup, özelligi; bahsedilen Iizis tampon B'nin1 gram deterjan içerikli solüsyon (SDS), 100 mililitre distile su içermesidir.
  4. Istem 1'e uygun bir karbon DNA izolasyon kiti olup, özelligi; agrlikça %99,8 oranlnda izopropanol içermesidir.
  5. Istem 1'e uygun bir karbon DNA izolasyon kiti olup, özelligi;bahsedilen elüsyon solüsyonunun EDTA tuzu ve Tris HCL içermesidir.
  6. Istem 1'e uygun bir karbon DNA izolasyon kiti olup, özelligi; bahsedilen grafit kaplama yüzeyin, plastik, metal veya cam olmasîil.
  7. Moleküler biyoloji, genetik, ttbbi genetik, mikrobiyal genetik, biyoteknoloji gibi alanlarda uygulanan ve arastmma ve teshis koyma çalîsmalarîida biyolojik materyallerden (sürüntü, idrar, sperm,doku, tam kan, serum ve diger vücut s vllarl lveya doku örnekleri) viral, bakteriyal ve genomik DNA elde edilmesini saglayan karbon DNA izolasyon yöntemi olup, özelligi; Idrar, sürüntü, sperm örnekleri veya doku, tam kan ve serum örnekleri için ön hazIIR ve Iizis asamasliîî yapÜInasü Idrar, sürüntü, sperm örnekleri için ön hazIIK ve Iizis asamas: veya doku, tam kan ve serum örnekleri için ön hazîltli ve Iizis asamasüle elde edilen karZSEna 70 miligram grafit tozu eklenmesi, Karîsmn homojen olana kadar vortekslenmesi ve karSEnIi siyah renk Kar slrlnlrli oda sldaklig nda 5 dakika inkübe edilmesi, Süpernatant atlmas ve 5 W klSmlrii atllarak pellet k smi kalmas, 500 mikrolitre %70`Iik etanol eklenmesi, Karsmnm homojen olana kadar vortekslenmesi, Süpernatant atji'nasîve sýEkßmmi attlilarak pellet kîsmEkalmas: 60-75 °C`de 5-10 dakika tüpün kapagüaçtß sekilde kuruma saglanana kadar inkübe edilmesi, Istenilen DNA miktarIia baglü olarak 90-200 mikrolitre elüsyonu solüsyonu eklenmesi, Karîsmnlihomojen olana kadar vortekslenmesi, 60-70 “C de 5 dakika inkübe edilmesi, Süpernatantlni temiz bir tüpe aktarilmasl i
  8. 8. Istem 7'ye uygun birkarbon DNA izolasyon yöntemi olup, özelligi; bahsedilen idrar, sürüntü, spermörnekleri için ön hazIIE ve Iizis asamasliîi; 0.2-2 gram doku ya da 90-200 mikrolitre serum veya tam kan örneginin direkt çal Ismaya alîimas: 200-500 mikrolitre Lizis Tampon A eklenmesi, Karîsmnli 15 saniye vortekslenmesi, (SO-75°C de 10 dakika inkübe edilmesi, 300-500 mikrolitre yikama solüsyonu eklenmesi, Karsmnmi 15 saniye vortekslenmesi istem T'ye uygun bir karbon DNA izolasyon yöntemi olup, özelligi; bahsedilen doku, tam kan ve serum örnekleri için ön hazIIK ve lizis asamasmiîi; - 0.2-2 gram doku ya da 90-200 mikrolitre serum veya tam kan örneginin direkt çalßmaya almimasm - 200-500 mikrolitre Lizis Tampon A eklenmesi, - KarßmnJ-:i 15 saniye vortekslenmesi, - 95°C de 10 dakika inkübe edilerek 10 mikrolitre proteinaz k eklenmesi veya 200-400 mikrolitre Iizis tampon B eklenmesi, - 60-75 °C de 10-20 dakika inkübe edilmesi, - Süpernatantlni temiz bir tüpe aktarilmasl,l - 200-400 mikrolitre izopropanol eklenmesi islem admnlarTtFiçermesidir.
TR2021/021022A 2021-12-26 2021-12-26 Karbon dna i̇zolasyon ki̇ti̇ ve yöntemi̇ TR2021021022A2 (tr)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TR2021/021022A TR2021021022A2 (tr) 2021-12-26 2021-12-26 Karbon dna i̇zolasyon ki̇ti̇ ve yöntemi̇
PCT/TR2021/051590 WO2023121585A1 (en) 2021-12-26 2021-12-29 Carbon dna isolation kit and method

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TR2021/021022A TR2021021022A2 (tr) 2021-12-26 2021-12-26 Karbon dna i̇zolasyon ki̇ti̇ ve yöntemi̇

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR2021021022A2 true TR2021021022A2 (tr) 2022-01-21

Family

ID=85117025

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2021/021022A TR2021021022A2 (tr) 2021-12-26 2021-12-26 Karbon dna i̇zolasyon ki̇ti̇ ve yöntemi̇

Country Status (2)

Country Link
TR (1) TR2021021022A2 (tr)
WO (1) WO2023121585A1 (tr)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2191012A1 (en) * 2007-09-21 2010-06-02 Streck, Inc. Nucleic acid isolation in preserved whole blood
US10233508B2 (en) * 2012-08-21 2019-03-19 Qiagen Gmbh Virus particle stabilisation and method for isolating viral nucleic acids

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023121585A1 (en) 2023-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2608081B2 (ja) 組換えタンパク質の精製方法及びその製品
JP6571544B2 (ja) 核酸の単離
JP4175670B2 (ja) 固体相核酸の単離
WO2014063651A1 (zh) 纯化核酸的方法及试剂盒
CN110283816A (zh) 一种磁珠法微生物基因组dna的提取试剂盒及提取方法
CN103255131A (zh) 采用固相支持物纯化dna的制剂和方法
AU2010289430B2 (en) Methods and compositions for direct chemical lysis
JP5867402B2 (ja) smallRNAの取得方法
CN103890176A (zh) 制备生物材料的方法
JP2024012495A (ja) 核酸を抽出するための方法
US8420801B2 (en) Recovery of nucleic acids from magnetic glass particles
ES2730711T3 (es) Materiales y métodos para inmovilizar, aislar y concentrar células usando superficies carboxiladas
TR2021021022A2 (tr) Karbon dna i̇zolasyon ki̇ti̇ ve yöntemi̇
EP3215620B1 (en) Chaotrope- and volatile-free method for purifying nucleic acids from plasma
Thatcher Nucleic acid isolation
ES2665280T3 (es) Métodos para la extracción y purificación de componentes de muestras biológicas
JPS61293400A (ja) ポリヌクレオチド配列の測定方法
CN113801915B (zh) 获取目标rna结合蛋白靶rna的方法
US11155805B2 (en) Target nucleic acid concentration and recovery method using antibody
WO2018119437A2 (en) Electrophoresis diagnostic methods and kits
CN117701555A (zh) 一种快速细菌基因组dna提取试剂盒、使用方法及应用
RU2628695C1 (ru) Способ выделения РНК и ДНК из сухих биологических образцов, хранившихся на бумажном носителе, и набор для его осуществления
CN114479129A (zh) 一种磁珠法快速提取核酸的试剂及核酸提取方法