TR201911272T4 - Paliperidon haptenleri. - Google Patents

Paliperidon haptenleri. Download PDF

Info

Publication number
TR201911272T4
TR201911272T4 TR2019/11272T TR201911272T TR201911272T4 TR 201911272 T4 TR201911272 T4 TR 201911272T4 TR 2019/11272 T TR2019/11272 T TR 2019/11272T TR 201911272 T TR201911272 T TR 201911272T TR 201911272 T4 TR201911272 T4 TR 201911272T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
variable
group
protein
compound
value
Prior art date
Application number
TR2019/11272T
Other languages
English (en)
Inventor
Rik Haspeslagh Pieter
Vliegen Maarten
Hryhorenko Eric
R Decory Thomas
Sankaran Banumathi
Original Assignee
Janssen Pharmaceutica Nv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Pharmaceutica Nv filed Critical Janssen Pharmaceutica Nv
Publication of TR201911272T4 publication Critical patent/TR201911272T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/77—Ovalbumin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

Buluş, paliperidondan türetilen yeni konjügatların ve immünojenlerin sentezi için faydalı olan Formül I bileşikleri ile ilgili olup, , burada L1, L2 ve L3 değişkenleri tarifnamede tanımlandığı gibidir. Buluş ayrıca bir paliperidon hapteni ile bir proteinin konjügatları ile ilgilidir.

Description

TARIENAME PALIPERIDON HAPTENLERI ILGILI BASVURULARA YÖNELIK ÇAPRAZ REFERANS Bu basvuru, 21 Agustos 2012 tarihinde dosyalanmis U.S. Geçici Basvuru Seri No. 6l/69l,459'un rüçhan hakkini talep eder.
Bulus Sahasi Bulus, insan kökenli biyolojik sivilarda paliperidonun varligini belirlemeye yönelik immün analizler ile ilgilidir.
Bulusun Altyapisi çözünmez hidrojeller ile ilgilidir. paliperidon tasiyici konjügat içeren öncül ilaçlar ile EP 2343296 Al, paliperidonun saflastirilmasina yönelik bir proses ile ilgilidir.
Sizofreni, dünya popülasyonunun yaklasik olarak %O.45-l'ini etkileyen kronik ve zayif düsürücü bir psikiyatrik bozukluktur 645). Tedavinin temel hedefleri, psikotik semptomlarin sürekli remisyonunu saglamak, relapsin risk ve sonuçlarini azaltmak ve hastanin fonksiyonlarini ve genel yasam kalitesini iyilestirmektir. Birçok sizofreni hastasinda mevcut antipsikotik ilaçlarla semptom stabilitesi saglanir, ancak ilaca yetersiz baglilik, günlük uygulanan oral ilaçlarda relapsin yaygin nedenlerinden biridir. Uyumsuzlugun sonuçlarini arastiran birtakim çalismalarda (Abdel-Baki, A.; Ouellet-Plamondon, C.; Malla, A. "Pharmacotherapy Challenges in Patients with First-Episode Psychosis" Journal of Affective sizofreni hastalarinin daha yüksek relaps, hastaneye basvuru ve intihar oranlarina ve ayrica artmis mortalite oranlarina sahip olduklari gösterilmistir. Sizofreni hastalarinin %40 ila 75'inin günlük oral tedavi rejimlerine bagli kalma konusunda zorlandigi kestirilmektedir (Lieberman, J. A.: Stroup, T. 5.; McEvoy, J. P.; Swartz, M. 8.; Rosenheck, R. A.; Perkins, D. 0.; Keefe, R. S. E.; Davis, S. M.; Davis, C. E.; Lebowitz, E.
D.: Severe, J.; Hsiao, J. K. "Effectiveness of Antipyschotic Drugs in Patients with Chronic Schizophrenia" New England izlemi (TDM), antipsikotik ilaçlar da dahil olmak üzere ilaçlarin serum veya plazma konsantrasyonlarinin tedavi izlemi ve optimizasyon için tayin edilmesidir. Bu tip izlemler örnegin ilaç rejimlerine bagli kalmayan, terapötik dozlara ulasamayan, terapötik dozlara yanit vermeyen, optimum düzeyin altinda tolerans gösteren, ilaçlar arasi farmakokinetik etkilesimler sergileyen ya da anormal metabolizma sonucunda uygunsuz plazma konsantrasyonlari sergileyen hastalarin belirlenmesini saglar. Antipsikotik ilaçlarin hastada emilim, dagitim, metabolizma ve vücuttan atilma kapasitesi anlamli düzeyde bireysel degiskenlik gösterir. Bu tip farkliliklar eslik. eden hastaliktan, yastan, eszamanli uygulanan ilaçtan veya genetik özelliklerden kaynaklanabilir. Farkli ilaç formülasyonlari da antipsikotik ilaçlarin netabolizmasini etkileyebilir. TDM, her hasta için doz optimizasyonu saglayarak terapötik ve fonksiyonel sonuçlari iyilestirir. TDM ilaveten reçete yazan hekimin reçete edilen dozajlara uyumu garanti etmesini ve etkili serum konsantrasyonlarinin elde edilmesini saglar.
Bugüne kadar, antipsikotik ilaçlarin serum veya plazma konsantrasyon düzeylerini belirlemeye yönelik yöntemler, UV veya kütle spektrometrisi tayini ile birlikte sivi kromatografisinin (LC) ve radyo immün analizlerin kullanimini içermistir (bkz. örnegin Woestenborghs Vd., 1990 "On the selectivity of some recently developed RIA's" in Methodological Surveys in Biochemistry and Analysis 20:241- 246. Analysis of Drugs and Metabolites, including Anti- infective Agents; Heykants Vd., 1994 'The Pharmacokinetics of Risperidone in Humans: A Summary", J Clin Psychiatry 55/5, supplzl3-17; Huang `Vd., 1993 "Pharmacokinetics of the novel anti-psychotic agent risperidone and the prolactin response in healthy subjects", Clin Pharmacol Ther 54:257-268). Radyo immün analizlerde risperidon ve/veya paliperidon saptanir.
Al'de), risperidonu ve paliperidonu saptayan, ancak farmakolojik olarak pasif metabolitleri saptamayan antikorlarin kullanildigi risperidona yönelik bir rekabetçi immün analizi açiklar. Rekabetçi immün analizde kullanilan antikorlar belirli bir immünojene karsi gelistirilir. Yine bir rekabetçi formatin kullanildigi, baska bir antipsikotik ilaç olan olanzapine yönelik bir ELISA analizi ID Labs Inc.
(London, Ontario, Kanada) tarafindan pazarlanmaktadir.
Kullanim Talimatlarinda analizin tarama amaciyla tasarlandigi ve adli kullanimi veya arastirma amaçli kullanimi hedefledigi ve spesifik olarak terapötik kullanima yönelik olmadigi belirtilir. Talimatlarda tüm pozitif numunelerin gaz kromatografisi/kütle spektrometrisi (GC-MS) ile dogrulanmasi gerektigi önerilir ve kullanilan antikorun olanzapin ve klozapini saptadigi belirtilir (bkz. ID Labs Inc., maliyetli ve emek yogun olabilir ve genelde sadece uygun ekipmanlara sahip büyük veya özellesmis laboratuarlarda uygulanir.
Antipsikotik ilaç düzeylerini belirlemeye yönelik baska yöntemlere, özellikle reçete yazan bir hekimin muayenehanesinde (dolayisiylar her hastanin› tedavisir çokr daha vakitlice ayarlanabilir) ve LC veya GC/MS ekipmanlarini içermeyen. veya hizli test sonuçlarina ihtiyaç duyulan diger tibbi ortamlarda uygulanabilecek yöntemlere ihtiyaç duyulmaktadir.
Paliperidon sudur: BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulus, antipsikotik paliperidon ilacinin düzeylerini belirlemeye yönelik böylesi bir iyilestirilmis yöntemi mümkün kilan bilesikler ve konjugatlar saglar.
Bulus, Formül I bilesiklerini kapsamakta olup, L3-L2-L1 Formül l Ll degiskeni OC(O)(CH2)n veya O(CHQn'dir; burada n degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir; degildir; L3 degiskeni O olmaktadir; burada ni degiskeni O, 1, 2 veya 3 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Bulus, ilaveten, Formül I bilesiklerini kapsamakta olup, L3_L2_L1 Formül I Ll degiskeni OC(O)(CH2)n veya O(CHQn'dir; burada n degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir; "" /_\ O 12 degiskeni NHC(O) veya olmaktadir; L3 degiskeni (CH2)MXMH veya 0 olmaktadir; burada m degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir.
Bulus, bulus konusu bilesiklerin proteinler gibi immünojenik tasiyicilarla konjügatlarini ve bulus konusu bilesikleri immünojenik tasiyicilara temas ettirme prosesiyle üretilen ürünleri kapsar.
SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekiller 1 ve 2, hibridoma 5-9 ile elde edilen Rekabetçi ELISA sonuçlarini gösterir.
Sekil 3, risperidon/paliperidon klonu 2A5 ile elde edilen Rekabetçi ELISA sonuçlarini gösterir.
Sekil 4, bir yanal akis analiz cihazinda kullanilan rekabetçi immün analiz formatini gösterir.
Sekil 5, risperidon/paliperidon klonu 5-9 ile elde edilen bir tipik doz yanit egrisini gösterir.
BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Mevcut bulus, antipsikotik ilaçlarin düzeylerinin belirlenmesini saglayan bilesikler ve konjügatlar saglar. Bu tip yöntemler klinisyenlerin bir randevuda bir hastanin semptomlarindaki kötülesmenin baglilik eksikliginden kaynaklanma ihtimalini nesnel sekilde degerlendirmesini saglayacaktir. Alternatif olarak, bagliligin mevcut olmasi halinde, bir klinisyen farkli bir tedavi seçenegini düsünebilir. Bu tip yöntemler ile saglanan terapötik ilaç izlemi, en etkili tedavi seçeneklerinin belirlenmesi açisindan önemlidir. Klinisyenler ayrica bu tip TDM'lerin hastalariyla çok farkli bir iliski kurmalarini saglayacagina inanmaktadir, yani tedaviye bagli kalmama konusunda bir varsayimsal tartismadan, hastalarin tedavi rejimlerinin optimizasyonunda aktif bir sekilde sorumluluk almalarini saglamak suretiyle daha isbirlikçi bir tartismaya geçis saglayacagina inanmaktadir.
Yöntemin gelistirilmesi ilk önce bir proteine bagli bir sentetik hapten içeren birtakim immünojenlerin sentezlenmesini gerektirir. Bir hapten, protein gibi büyük bir tasiyiciyla birlestiginde bir immün yaniti uyarabilen küçük bir moleküldür. Tek basina antikor olusumunu uyarma kapasitesine sahip olmayan, ancak antikorlar ile reaksiyona girebilen, çogunlukla düsük molekül agirligina sahip proteinsiz maddelerdir. Bir hapten-protein konjügati antikorlarin üretimini uyarabilir. Küçük moleküllere yönelik spesifik antikor üretimi, immün analiz gelistirme açisindan faydalidir 28(1):79-83).
Bulus, Formül 1 bilesiklerini kapsamakta olup, L3-L2-L1 Formül I L1 degiskeni OC(O)(CH2)n veya O(CH2)n'dir; burada n degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir; I? degiskeni NHC(O), O ` olmaktadir veya mevcut degildir; L3 degiskeni O olmaktadir; burada ni degiskeni O, 1, 2 veya 3 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Bulus, ilaveten, Formül I bilesiklerini kapsamakta olup, L3-L2-L1 Formül l L1 degiskeni OC(O)(CHnn veya O(CHnn'dir; burada n degiskeni 1, 2 veya 3 degerini alir; 13,44 /_\ O L? degiskeni NHC(O) veya olmaktadir; L3 degiskeni (CH2)mC02H veya 0 olmaktadir; burada m degiskeni 1, 2 veya 3 degerini alir.
Bulusun baska bir yapilanmasinda, 19 degiskeni OC(O)(CH2)n veya O(CHnn'dir; burada n degiskeni 2 veya 3 degerini alir; degildir; L3 degiskeni O olmaktadir; burada m degiskeni 0, 1 veya 2 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, asagidaki yapiya sahip bir l5 Formül 1 bilesigidir: Bulusun baska bir yapilanmasi, asagidaki yapiya sahip bir Formül 1 bilesigidir: Bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül I bilesigi ile bir immünojenik tasiyicinin veya bir proteinin bir konjügatidir, L1 degiskeni OC(O)(CHün veya O(CHnn'dir; burada n degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir; IE degiskeni NHC(O), O “-4 ` olmaktadir veya mevcut degildir; L3 degiskeni O olmaktadir; burada In degiskeni 0, J” 2 veya 13 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül I bilesigi ile bir immünojenik tasiyicinin bir konjügatidir, burada, L1 degiskeni OC(O)(CH2)n veya O(CHnn'dir; burada n degiskeni 2 veya 3 degerini alir; 9", /_\ 0 L2 degiskeni NHC(O), 0 \_j ` olmaktadir veya mevcut degildir; L3 degiskeni O olmaktadir; burada m degiskeni 0, 1 veya 2 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül I bilesigi ile bir immünojenik tasiyicinin veya bir proteinin bir konjügatidir, L1 degiskeni OC(O) (CH2)n veya O(CH2)n'dir; burada n degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir; L2 degiskeni NHC(O) veya 0 \-j ` olmaktadir; L3 degiskeni (CH2)mC02H veya 0 olmaktadir; burada m degiskeni O, 1, 2 veya 3 degerini alir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül I bilesigi ile bir proteinin bir konjügatidir, burada, Ll degiskeni OC(O) (CH2)n veya O(CH2)n'dir; burada n degiskeni 2 veya 3 degerini alir; degildir; L3 degiskeni O olmaktadir; burada m degiskeni 0, 1 veya 2 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül I bilesigi ile bir proteinin bir konjügatidir, burada protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir, burada, Ll degiskeni OC(O)(CH2)n'veya O(CH2)n'dir; burada n degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir; degildir; 19 degiskeni O olmaktadir; burada In degiskeni 0, J# 2 veya 3 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül 1 bilesigi ile bir proteinin bir konjügatidir, burada protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir, burada, L1 degiskeni OC(O)(CHnn veya O(CHnn'dir; burada n degiskeni 1, 2 veya 3 degerini alir; L3 degiskeni (CH2)mC02H veya 0 olmaktadir; olmaktadir; L2 degiskeni NHC(O) veya burada m degiskeni 0, l, 2 veya 3 degerini alir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir bilesik ile bir immünojenik tasiyicinin bir konjügatidir: Bulusun baska bir yapilanmasi, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir bilesik ile bir proteinin bir konjügatidir: Bulusun baska bir yapilanmasi, asagidakilerden olusan gruptan lO seçilen bir bilesik ile bir immünojenik tasiyicinin bir konjügatidir: Bulusun baska bir yapilanmasi, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir bilesik ile bir proteinin bir konjügatidir: Bulusun baska bir yapilanmasi, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir bilesik ile bir proteinin bir konjügatidir: burada bahsedilen protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir bilesik ile bir proteinin bir konjügatidir: burada bahsedilen protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir.
Bulus ayrica yukaridaki bilesikleri bir immünojenik tasiyiciya temas ettirme prosesiyle üretilen ürünler saglar.
Dolayisiyla bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül I bilesigini bir immünojenik tasiyiciya veya bir proteine temas ettirme prosesiyle üretilen bir üründür, L3-L2-L1 Formül I L1 degiskeni OC(O)(CHnn veya O(CHQn'dir; burada n degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir; degildir; L3 degiskeni O olmaktadir; burada. m degiskeni O, 14 2 veya. 3 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Dolayisiyla bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül I bilesiginin bir immünojenik tasiyiciya veya bir proteine temas ettirildigi yukaridaki prosesle üretilen bir üründür, L1 degiskeni OC(O)(CH2)n veya O(CH2)n'dir; burada n degiskeni l, 2 veya 3 degerini alir; L2 degiskeni NHC(O) veya 0 ` olmaktadir; Lß degiskeni (CHQHCO2H veya 0 olmaktadir; burada m degiskeni O, 1 veya 2 degerini alir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, bir Formül I bilesigini bir proteine temas ettirme prosesiyle üretilen bir üründür, burada protein. keyhole limpet hemosiyanin, sigir 'tiroglobülini veya ovalbümindir, Ll degiskeni OC(O)(CH2)n veya O(CH2)n'dir; burada n degiskeni 2 veya 3 degerini alir; 9& r-1 O degildir; lß degiskeni O olmaktadir; burada m degiskeni 0, 1 veya 2 degerini alir; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda m degiskeni sadece 0 degerini alabilir.
Bulusun baska bir yapilanmasi, proteine temas ettirme prosesiyle üretilen bir üründür, burada bahsedilen protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir. bilesigini bir proteine temas ettirme prosesiyle üretilen bir üründür, burada bahsedilen protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir. bilesigini bir proteine temas ettirme prosesiyle üretilen bir üründür, burada bahsedilen protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir. bilesigini bir proteine temas ettirme prosesiyle üretilen bir üründür, burada bahsedilen protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir. bilesigini bir` proteine temas ettirme prosesiyle üretilen bir üründür, burada bahsedilen protein keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümindir.
KISALTMALAR Burada ve basvuru boyunca asagidaki kisaltmalar kullanilabilir: AMAS N-(q-maleimidoasetoksi) süksinimid ester Boc veya BOC tert-bütoksikarbonil BTG sigir tiroglobulini Buýq tribütilamin DIEA diizopropiletilamin DCC disikloheksilkarbodiimid DMF N,N-dimetilformamid SATA N-süksinimidil S-asetiltioasetat THF tetrahidrofuran TFA trifloroasetik asit l8-Cr-6 l8-Taç-6 Et3N trietilamin TBDMS t-bütildimetilsilil DIC diizopropilkarbodiimid DMAP N,N-dimetil-4-aminopiridin EDC l-etil-3(3-dimetilaminopropil) karbodiimidhidroklorür NHS N-hidroksisüksinimid TFP Tetraflorofenil PNP p-nitrofenil TBTU O-(Benzotriazol-l-il)-N,N,N',N'- tetrametiluronyumtetrafloroborat HOBT N-Hidroksibenzotriazol DEPBT g;(dietoksifosforiloksi)-l,2,3-benzotrazi-4(3H)- BOP-Cl Bis(2-okso-3-oksazolidinil)fosfonik klorür DTT ditioeritritol TANIMLAR elde edilen herhangi bir maddeyi ifade eder. Mevcut bulus itibariyla örnek konjügatlar, bir küçük molekülün, örnegin Formül I bilesiklerinin büyük bir molekülle, örnegin bir tasiyici veya bir poliamin polimeri ve özellikle de bir proteinle birlestirilmesi yoluyla elde edilenleri kapsar.
Konjügatta küçük molekül, büyük molekül üzerinde bir veya daha fazla aktif bölgeyle birlestirilebilir. hapten, antikor olusumunu uyarma kapasitesine sahip olmayan, ancak antikorlarla reaksiyona girebilen bir proteinsiz maddedir. Antikorlar, bir haptenin yüksek molekül agirlikli bir immünojenik tasiyiciya kenetlenmesi ve akabinde bu kenetli ürünün, yani immünojenin bir insan veya hayvan bireye enjekte edilmesi yoluyla uyarilir. üretme veya olusturma kapasitesine sahip bir maddeyi ifade Burada kullanildigi haliyle bir "immünojenik tasiyici", haptenlerle bir veya daha fazla konumda birlesebilen ve böylece bu haptenlere spesifik olarak baglanabilen antikorlarin üretimini saglayabilen› bir immünojenik maddedir ve yaygin olarak bir proteindir. Immünojenik tasiyici maddelerin örnekleri, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, yabanci olarak algilanan ve dolayisiyla konakçida bir immünolojik yaniti uyaran proteinler, glikoproteinler, kompleks poliamino-polisakkaritler, partiküller ve nükleik asitleri kapsar. Poliamino-polisakkaritler, bu hazirlama için bilinen konvansiyonel yollarin herhangi biriyle polisakkaritlerden hazirlanabilir.
Immünojenik tasiyici olarak bunlarla sinirli olmamak kaydiyla albüminler, serum proteinleri, lipoproteinler ve benzerleri de dahil olmak üzere çesitli protein türleri kullanilabilir. Örnek proteinler sigir serum albümini, keyhole limpet hemosiyanin, yumurta ovalbümini, sigir tiroglobulini, fraksiyon V insan serum albümini, tavsan albümini, kabak çekirdegi globülini, difteri toksoidi, tetanos toksoidi, botulinus toksini, süksinillenmis proteinler ve polilizin gibi sentetik poli(aminoasitler)'i kapsar.
Immünojenik tasiyicilar ayrica monosakkaritlerin tekrarli kondenzasyonu üzerinden olusan yuksek molekül agirlikli bir polimer olan poli amino-polisakkaritleri kapsar.
Polisakkaritlerin örnekleri nisastalar, glikojen, selüloz, karbonhidrat zamklari, örnegin arap zamki, agar ve benzerleridir. Polisakkarit ayrica poli(amino asit) rezidüleri ve/veya lipit rezidüleri içerir.
Immünojenik tasiyici ayrica tek basina veya yukarida belirtilen poli(amino asitler) veya polisakkaritler ile konjüge edilmis halde bulunan bir poli(nükleik asit) olabilir.
Immünojenik tasiyici ayrica kati partiküller içerebilir.
Partiküller genel olarak en az yaklasik 0.02 mikron (pm) ve en fazla yaklasik 100 pm ve genellikle yaklasik 0.05 pm ila 10 pm Çapindadir. Partikül organik veya inorganik, sisebilen veya sismeyen, gözenekli veya gözeneksiz olabilir, optimal olarak suyunkine yakin bir yogunluga, genel olarak yaklasik 0.7 ila 1.5 g/mL'lik bir yogunluga sahip olabilir ve saydam, yari saydam veya opak bir materyalden olusabilir. Partiküller, sinirlandirici olmayan örnekler olarak eritrositler, lökositler, lenfositler, hibridomalar, Streptococcus, Staphylococcus aureus, E. coli ve Virüsler de dahil olmak üzere hücreler ve mikroorganizmalar gibi biyolojik materyaller olabilir.
Partiküller ayrica organik ve inorganik polimerler, lipozomlar, lateks, fosfolipit veziküller veya lipoproteinlerden olusabilir. sonucunda. bir ana. bilesikten üretilen bir kimyasal bilesigi veya molekülü ifade eder.
Bir kimyasal bilesigin "analogu", bir karbon atomlari zincirine ve bir referans bilesik ile ayni belirli fonksiyonel gruplara sahip olan bir kimyasal bilesigi ifade eder, ancak burada analogun karbon zinciri referans bilesige kiyasla daha uzun veya daha kisadir.
Bir "isaret", "saptayici molekül" veya "raportör", bir saptanabilir sinyal üreten veya bir saptanabilir sinyal üretmek üzere uyarilabilen herhangi bir moleküldür. Isaret bir analit, immünojen, antikor veya baska bir molekül, örnegin bir reseptör veya bir reseptöre baglanabilen bir molekül, örnegin bir ligand, özellikle bir hapten veya antikor ile konjüge edilebilir. isaretlerin sinirlandirici olmayan örnekleri radyoaktif izotoplar (örnegin 151), enzimler (örnegin ß- galaktosidaz, peroksidaz), enzim fragmanlari, enzim substratlari, enzim, inhibitörleri, koenzimler, katalizörler, floroforlar (örnegin rodamin, floresin izotiosiyanat veya FITC veya Dylight 649), boyalar, kemilüminesan maddeler ve lüminesan maddeler (örnegin dioksetanlar, lüsiferin) veya duyarlastiricilari kapsar.
Burada kullanildigi haliyle bir "ara grup", bir kimyasal yapida haptenler, tasiyicilar, immünojenler, isaretler veya baglanma partnerleri gibi iki veya daha fazla alt yapiyi bir fonksiyonel baglanti grubu üzerinden birlestiren bir kismi ifade eder. Bu ara gruplar organik bilesiklerde tipik olarak mevcut olan ve organik bilesiklerde tipik olarak gözlemlenen yollarla bir araya getirilen atomlardan olusur ve dolayisiyla araya getirmek için kullanilan kimyasal yapi bloklari bu basvurunun ilerleyen kisimlarinda tarif edilecektir. Tercih edilen ara gruplar arasinda düz Zincirli veya dallanmis, doymus veya doymamis karbon zincirleri bulunur. Bu karbon zincirleri ayrica zincirin içinde bir veya daha fazla heteroatom içerebilir, burada bir veya daha fazla heteroatom, zincirde veya zincirlerin terminuslarinda herhangi bir karbon atomuna ait bir veya daha fazla hidrojen atomunun yerini alabilir. "Heteroatomlar" teriminden kasit, oksijen, azot, fosfor` ve kükürtten. olusan gruptan seçilen karbon disindaki atomlardir, burada azot, fosfor` ve kükürt atomlari herhangi bir yükseltgenme durumunda bulunabilir ve kendilerine bagli karbon atomlarina veya baska heteroatomlara sahip olabilir.
Ara grup ayrica zincirin bir parçasi olarak veya zincirdeki atomlardan birinin üzerinde bir sübstitüsyon olarak siklik veya aromatik gruplar içerebilir.
Ara gruptaki atomlarin sayisi, hidrojen disindaki atomlarin sayilmasi yoluyla belirlenir. Bir ara grubun içindeki bir zincirde bulunan atomlarin sayisi, bagli alt yapilar arasinda en kisa yol üzerinde bulunan hidrojen disindaki atomlarin sayilmasi yoluyla belirlenir. Tercih edilen zincir uzunluklari 1 ila 20 atomdur.
Bir "fonksiyonel baglanti grubu", bir hapten üzerinde bulunan ve bir hapten ile baska bir grubun (örnegin bir isaret veya tasiyici) bir konjügatini üretmek üzere hapten kisminin. bir kovalent kimyasal bag olusumu üzerinden baska bir gruba kenetlenmesi için bir kullanilabilir reaktif bölge saglamak amaciyla kullanilabilen bir reaktif grubu ifade eder. Hapten bu yolla hapten için bir rekabetçi baglanma partneri olusturmak üzere biyotin gibi bir gruba baglanabilir.
Ara gruplar hapteni tasiyiciya baglamak için kullanilabilir.
Farkli uzunluktaki ara gruplar, antikor olusum sürecinin optimizasyonu için bagisiklanan hayvanin veya insanin immün sistemine sunulmak üzere haptenin tasiyiciya farkli mesafelerde eklenmesini saglar. Hapten molekülünde farkli konumlara ekleme, antikor tanimayi etkilemek üzere hapten üzerindeki spesifik bölgelerin immün sisteme sunulmasi firsatini saglar. Ara grup, hapten türevini sulu ortamlarda daha çözünür hale getirmek için hidrofilik çözündürücü gruplar içerebilir. Hidrofilik çözündürücü gruplarin örnekleri bunlarla sinirli olmamak kaydiyla polioksialkiloksi gruplarini, örnegin polietilen glikol Zincirlerini; hidroksil, karboksilat ve sülfonat gruplarini kapsar. bir kimyasal bag olusturmak üzere bir elektron çifti veren bir türü ifade eder. "Elektrofilik grup" veya "elektrofil" terimi, bir reaksiyonda bir kimyasal bag olusturmak üzere bir nükleofilden bir elektron çifti alan bir türü ifade eder. herhangi bir konumda bir karbon atomu üzerinde bir hidrojen atomu yerine bir atomun veya atomlar grubunun sübstitüsyonunu ifade eder. Sübstitüentlerin sinirlandirici olmayan örnekleri halojen atomlari, amino, hidroksi, karboksi, alkil, aril, heteroalkil, heteroaril, siyano, alkoksi, nitro, aldehit ve keton gruplarini kapsar. sahip düz Zincirli ve dallanmis radikalleri ifade eder ve bu terimin spesifik olarak herhangi bir doygunluk derecesine veya düzeyine sahip radikalleri kapsamasi amaçlanir. Alkil, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, metil, etil, propil, izopropil, bütil, izobütil, sek-bütil, tert-bütil, pentil, izopentil, heksil, izoheksil, heptil, oktil, 2,2,4- trimetilpentil, nonil, desil, undesil ve dodesili kapsar. atomuna sahip bir alkil grubunu ifade eder; örnekler, bunlarla Sinirli olmamak kaydiyla Vinil ve allili kapsar. doymus veya kismen doymamis monosiklik veya bisiklik hidrokarbon halka radikalini ifade eder. Halka üzerinde istege göre alkil sübstitüentleri bulunabilir. Örnekler siklopropil, l,l-dimetil siklobütil, l,2,3-trimetilsiklopentil, sikloheksil ve sikloheksenili kapsar. fosfor atomu veya bir kükürt atomunu ifade eder, burada azot, fosfor ve kükürt atomlari izin verilen herhangi bir yükseltgenme durumunda bulunabilir. heteroatom, zincirde veya zincirlerin terminuslarinda herhangi bir karbon atomundaki bir veya daha fazla hidrojen yerine bir veya daha fazla heteroatom içeren bir alkil grubunu ifade arasindan seçilen en az bir heteroatomdan olusan bir aromatik olmayan (yani doymus veya kismen doymamis) halkayi ifade eder.
Halka üzerinde istege göre alkil sübstitüentleri bulunabilir. Örnekler tetrahidrofuril, dihidropiranil, piperidil, 2,5- dimetilpiperidil, morfolinil, piperazinil, tiomorfolinil, imidazolidinil ve imidazolinili kapsar. bir karbon atomuna bagli olana en az bir hidroksil grubunu ifade eder. karbon atomuna bagli olan en az bir primer veya sekonder amino grubunu ifade eder. karbon atomuna bagli olan en az bir alkoksi grubunu ifade ifade eder ve ayrik veya es dagilimli boyutlara sahip polietilen glikolleri kapsar. karbon atomuna bagli olan en az bir kükürt grubunu ifade eder.
Kükürt grubu herhangi bir yükseltgenme durumunda olabilir ve sülfoksitler, sülfonlar ve sülfatlari kapsar. bir karbon atomuna bagli olan en az bir karboksilat grubunu ifade eder. "Karboksilat grubu" karboksilik asitleri ve alkil, sikloalkil, aril veya aralkil karboksilat esterlerini kapsar. bir karbon atomuna bagli olan bir karbonil grubuna sahip bir grubu ifade eder. üyeli bisiklik aromatik halka radikallerini ifade eder ve burada herhangi bir halka, N, 0 veya S arasindan seçilen bir ila dört heteroatomdan olusabilir ve azot ve kükürt atomlari izin verilen herhangi bir yükseltgenme durumunda bulunabilir. Örnekler benzimidazolil, benzotiazolil, benzotienil, benzoksazolil, furil, imidazolil, izotiazolil, izoksazolil, oksazolil, pirazinil, pirazolil, piridil, pirimidinil, pirrolil, kinolinil, tiazolil ve tienili kapsar. bir Crß alkil grubunu ifade eder. Örnekler furiletil ve 2- kinolinilpropili kapsar. bagli 12 kadar karbon atomuna sahip düz veya dallanmis zincirli radikalleri ifade eder. Örnekler metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi ve bütoksiyi kapsar. veya bisiklik aromatik halka radikallerini ifade eder. Halka üzerinde istege göre alkil sübstitüentleri bulunabilir. Örnekler fenil, bifenil ve naftalini kapsar. grubunu ifade eder. Örnekler benzil, feniletil ve 2- naftilmetili kapsar.
Crß alkil grubunu ifade eder. Örnekler furilmetil ve piridilpropili kapsar. oksijen atomunu ifade eder. Örnekler fenoksi ve benziloksiyi alkoksi grubunu ifade eder. Örnekler fenilmetil eteri kapsar. aril, aralkil, heteroaril ve heteroaralkildir. Bir "asilleme maddesi" bir moleküle -C(O)Ra grubunu ekler. hidrojen, alkil, sikloalkil, haloalkil, aril, aralkil, heteroaril veya heteroaralkildir. "Sülfonilleme maddesi" bir moleküle -S(=O)2-Ra grubunu ekler.
Haptenlerin tasiyici gruplara eklenmesi için reaktif fonksiyonel baglanti gruplari tasiyan ara gruplar çok çesitli yöntemlerle hazirlanabilir. Ara grup, hapten ve tasiyici ile seçici sirali reaksiyon saglamak için herhangi bir uçta gruplarla ayrimsal olarak fonksiyonellestirilmis veya aktiflestirilmis bir molekül kullanilarak elde edilebilir,10 ancak ayni reaktif grup her iki uçta da kullanilabilir.
Tasiyiciya baglanacak hapten ve fonksiyonel baglanti grubu ile reaksiyon için seçilen gruplar, hapten ve haptenin baglanacagi tasiyici üzerindeki fonksiyonellik türüne göre belirlenir. Ara gruplar ve haptenlere ve tasiyicilara baglanti yöntemleri, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, Brinkley, M., A., Bioconjugate Chem. 1992, 3:2-13, Hermanson, Greg T., Bioconjugate Techniques, Academic Press, London, Amsterdam, Burlington, MA, USA, 2008 ve Thermo Scientific Pierce Crosslinking Technical Handbook; çevrimiçi indirme veya basili kopya talebi için Thermo Scientific 3747 N Meridian Rd, http://www.piercenet.com/ ve içerdigi referanslarda tarif edilenleri kapsar. Ara gruplarin olusturulmasi için ayrimsal olarak aktiflestirilmis birçok molekül örnegin Thermo Scientific gibi firmalardan temin edilebilir.
Bir amino grubu tasiyan haptenler söz konusu oldugunda, ara grup ile hapten arasindaki baglanti modlari, hapten üzerindeki aminin bir asil halojenür~ veya aktif ester tasiyan bir ara grup yapi blogu ile reaksiyonunu içerir. "Aktif esterler", kararli bir baglanti olusturmak üzere hafif kosullar altinda bir nükleofilik grup, örnegin bir amino grubu ile reaksiyona giren esterler olarak tanimlanir. Kararli bir baglanti, ileriki kullanim kosullarinda, örnegin sonraki sentez adimlarinda, bir immünojen olarak kullanimda veya bir biyokimyasal analizde saglam kalan bir baglanti olarak tanimlanir. Kararli bir baglantinin tercihli bir örnegi bir amid Sbagidir. Aktif esterler` ve üretini yöntemleri Benoiton, N.L., Houben-Weyl, Methods of Organic Chemistry, Thieme Stuttgart, New York, vol E22 section 3.2:443 ve Benoiton, N.L., Chemistry of Peptide Synthesis, Taylor and Francis, NY, 2006 tarafindan tarif edilir. Tercih edilen aktif esterler p- nitrofenil ester (PNP), N-hidroksisüksinimid ester (NHS) ve tetraflorofenil esteri (TFP) kapsar. Asil halojenürler ilgili alanin uzmanlarinca bilinen birçok yöntemle, örnegin karboksilik asidin tionil klorür veya oksalil klorür ile reaksiyonu üzerinden hazirlanabilir, bkz. Fieser, L.F. ve Fieser, M. Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons, NY, l967 ve içerdigi referanslar. Bunlar p-nitrofenil esterler (PNP) gibi baska aktif esterlere dönüstürülebilir, bu tarafindan tarif edildigi üzere aktif bifonksiyonel ara gruplar olarak kullanilabilir. N-hidroksisüksinimid (NHS) disüksinimidil karbonat (CAS 74124-79-1) ile bir bilesigin karboksilik asidinin susuz kosullar altinda bir aprotik solvent içerisinde trietilamin veya diizopropiletilamin gibi bir organik baz varliginda reaksiyona sokulmasi yoluyla ya da susuz kosullar altinda N-hidroksisüksinimid ve disikloheksilkarbodiimid (DCC) veya baska bir dehidrasyon maddesi kullanilarak hazirlanabilir. Tetraflorofenil esterler (TFP), Wilbur Vd., Bioconjugate Chem., 2004, 15(l):203 tarafindan bildirildigi üzere karboksilik asitlerin susuz kosullar altinda bir aprotik solvent içerisinde trietilamin veya diizopropiletilamin gibi bir organik bazin varliginda 2,3,5,6-tetraflorofeniltrifloroasetat ile reaksiyona sokulmasi yoluyla hazirlanabilir. Ilgili alanin uzmanlari, digerlerini yani sira, Tablo 1'de gösterilen ara gruplarin bilinen yöntemlerle hazirlanabilecegini ve reaksiyon kosullarinin rutin optimizasyonu üzerinden amino tasiyan haptenlere baglanabilecegini takdir edecektir. Bu ara gruplar haptenin bir tasiyici üzerinde bir tiol grubuna baglanmasini saglar.
F N-O %“Ä ,ax /« \ m ve n için makul N7/û araligindadir Hapten üzerindeki amin ve ara grup yapi blogu üzerindeki bir karboksilik asit fonksiyonelliginin birbirine bir kenetleme maddesinin varliginda dogrudan kenetlenmesi de bir baglanti modu olarak kullanilabilir. Tercih edilen reaktifler, peptit sentezinde tipik olarak kullanilanlardir. Peptit kenetleme reaktifleri, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla su reaktifleri kapsar: O-(Benzotriazol-l-il)-N,N,N',N'- tetrametiluronyumtetrafloroborat (TBTU, CAS #125700-67-6), bkz. Pruhs, S., Org. Process. Res. Dev. 2006, 70:441; bir karbodiimid dehidrasyon maddesi, örnegin N-N- disikloheksilkarbodiimid (DCC), diizopropilkarbodiimid (DIG) veya 1-etil-3(3-dimetilaminopropil)karbodiimidhidroklorür (EDC) ile birlikte N-Hidroksibenzotriazol (HOBT, CAS #2592-95- (dietoksifosforiloksi)-1,2,3-benzotrazin-4(3H)-on (DEPBT, CAS#165534-43-O), bkz. Liu, H. Vd., Chinese Chemical Letters, (BOP-CI, CAS #68641-49-6), bkz. Diago-Meseguer, J Vd.
Synthesis, CRC Press, Boca Raton, FL, 2005, Chapter 2 ve Advanced Automated Peptide Protein Technologies (aapptec), tarafindan saglanan teknik bültende; www.aapptec.com ve içerdigi referanslarda ayrintili olarak tarif edilen digerleri. Bu yöntemler, hapteni ara gruba baglayan kararli bir amid baglantisi saglar. Bilinen yöntemlerle elde edilebilen ve yukarida açiklanan ve belirtilen yöntemlerle reaksiyon kosullarinin rutin optimizasyonu araciligiyla amino tasiyan haptenlere baglanabilen ara gruplarin örnekleri Tablo 2'de gösterilir, ancak bunlarla sinirli degildir. Bu ara gruplar haptenin bir tasiyici üzerinde bir tiol grubuna baglanmasini saglar. *14 Ha` "I /““"\ '7 fx BW( CO?” ' \......Ii"pogH ES ._.._ COZH n için makul aralik 1- Ara gruplar ayrica tasiyiciya baglanma kapasitesine sahip fonksiyonel baglanti grubunun olusturulmasi adimi da dahil olmak üzere uygun kimyasal gruplarin haptene adimlar halinde sirali olarak baglanmasi yoluyla üretilebilir. Bkz. Genel Reaksiyon Semalari altinda verilen temsili örnekler.
Ilaveten, ara grubun baglanti noktasi olarak haptenin bir nükleofilik gruba, örnegin bir tiol grubu, bir amino grubu veya bir hidroksil grubuna sahip oldugu durumlarda, ara grup ayrica tiol, amin veya hidroksil grubunun alkillenmesi yoluyla da olusturulabilir. Ara grubu baglamak için bir sübstitüsyon reaksiyonuna ugrama kapasitesine sahip bir grup, örnegin bir alkil halojenür veya sülfonik asit ester, mesela p- Tolüensülfonat ile uygun sekilde sübstitüe edilmis herhangi bir alkil grubu kullanilabilir. Alkilleme reaksiyonlari ile ilgili birçok örnek ilgili alanin uzmanlarinca bilinir ve spesifik örnekler genel kimya literatüründe bulunabilir ve rutin deneyler üzerinden optimize edilebilir. Alkilleme reaksiyonlari ile ilgili birçok referans içeren bir tartisma March's Advanced Organic Chemistry, Smith, M.B. ve March, J., John Wiley & sons, Inc. NY, 2001, Bölüm 10'da bulunabilir.
Hapten üzerindeki nükleofilik grubun, örnegin bir aminin bir üre olusturmak üzere bir izosiyanat ile reaksiyonu veya bir tioüre baglantisi olusturmak üzere bir izotiosiyanat ile reaksiyonu gibi baska baglantilar da kullanilabilir, bkz. Li, Z. vd., Phosphorus, Sulfur and Silicon and the Related üretan baglantilari olusturmak üzere izosiyanat gruplari ile reaksiyona sokularak hidroksil gruplari tasiyan haptenlere baglanabilir. Ara grup bir uçta izosiyanat fonksiyonel grubuyla ve tasiyici ile reaksiyona girme kapasitesine sahip bir fonksiyonel baglanti grubuyla ayrimsal olarak aktiflestirilebilir, bkz. Annunziato, M.E., Patel, U.S., Ranade, M. ve Palumbo, P.S., Bioconjugate Chem., 1993, 4:212- Bir karboksilik asit grubu tasiyan haptenler söz konusu oldugunda, bir ara grup kisminin haptene baglanma modlari, örnekleri Tablo 3'te gösterildigi ve hazirlanisi yukarida tarif edildigi üzere karboksilik asit grubunun bir asil halojenür veya aktif ester olarak aktiflestirilmesi, akabinde bir amid, hidrazit, diasilhidrazin veya ester baglantisi olusturmak üzere ara grup kismi üzerinde bir* amino (-NH2-), hidrazino (-NH-NH2-), hidrazido (-C(O)-NH-NH2-) veya hidroksil (-OH) grubu ile reaksiyona sokulmasi ya da karboksilik asit grubunun dogrudan ara grup kismi üzerinde bir amino grubuna kenetlenmesi veya yukarida tarif edildigi üzere örnekleri Tablolar 4 've 5'te gösterilen bir peptit kenetleme reaktifi ve/Veya karbodiimid dehidrasyon reaktifi ile dogrudan tasiyiciya kenetlenmesini içerir; Aktiflestirilmis esterlerin yapimina ve peptit kenetleme maddelerinin kullanimina yönelik olarak yukarida atif yapilan referanslarda bulunan prosedürler, reaksiyon kosullarinin rutin optimizasyonu üzerinden, karboksilik asit tasiyan haptenlerin, amino gruplari içeren ara grup yapi bloklarina ve protein tasiyicilara baglanmasi için kullanilabilir. r~ K` n g CCD& X W Q ' \ ,J Asil klorür Sülfo NHS ve NHS TFP s r L! .A 1.../ i w 212 HOBT DEPT BOP-Cl Mim-?ah >~NCN< g::: NCN (x Sis .. diizopropilkarbodi Disikloheksilkarbod ”/ NC” dimetilaminopr opil)karbodiim id.HCl (EDC) Hapten üzerinde ara grubu baglamak için baska elektrofilik gruplar bulunabilir, örnegin bir sulfonil halojenür veya elektrofilik fosfor grubu, örnegin Bkz. Malachowski, Williani P., Coward, James K., Journal of burada RC degiskeni alkil, sikloalkil, aril, sübstitüe edilmis aril, aralkildir.
Aldehit veya keton gruplari tasiyan haptenler, bununla sinirli olmamak kaydiyla bir asilhidrazon olusturmak 'üzere ara grup üzerinde HzN-NH-C(O)- ile gösterilen bir hidrazit grubuyla reaksiyon da dahil olmak üzere birtakim yöntemlerle ara gruplara baglanabilir, bkz. Chamow, 8 .ML, Kogan, T.P., Peers, D.H., Hastings, R.C., Byrn, R.A. ve Askenaszi, A., J. Biol. grubuna baglanti saglayan bifonksiyonel hidrazit ara gruplarinin örnekleri Tablo 6'da gösterilir.
Haptenler ayrica tasiyicinin tiol ile reaksiyona girebilen bir grup saglayacak sekilde degistirilmis olmasi kaydiyla tasiyici ile reaksiyona girebilen tiol gruplari içerebilir. Tasiyici gruplar, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, haptenin tasiyiciya baglanmasini saglayan bir reaksiyona girebilen bir grubun katilimi için, tasiyici üzerinde bulunan bir amino grubunun NFSüksinimidil maleimidoasetat (AMAS, CAS# 55750-61- 1'de gösterilen bifonksiyonel ara gruplardan herhangi biriyle reaksiyona sokulmasi suretiyle bir fonksiyonel maleimid grubu içeren bir grubun baglanmasi gibi yöntemlerle degistirilebilir.
Tasiyici ile bir bag olusturma kapasitesine sahip fonksiyonel baglanti grubu, kararli bir baglanti olusturma kapasitesine sahip olan ve tasiyici üzerinde bulunan birtakim farkli gruplara karsi reaktif olabilen herhangi bir grup olabilir.
Fonksiyonel baglanti grubu tercihen tasiyici veya türevi üzerinde bulunan bir amino grubu, bir karboksilik asit grubu veya bir tiol grubu ile reaksiyona girer. Fonksiyonel baglanti grubunun sinirlandirici olmayan örnekleri bir karboksilik asit grubu, asil halojenür, aktif ester (yukarida tarif edilmistir), izosiyanat, izotiosiyanat, alkil halojenür, amino grubu, tiol grubu, maleimid grubu, akrilat grubu (H2C=CH-C(O)-) veya Vinil sülfon grubudur (H2C=CH-SO2-), bkz. Park, J.W. Vd., grubu, hapten ile kademeli olarak reaksiyona girebilen diferansiyel olarak aktiflestirilmis bir ara grup yapi blogunun bir parçasi olarak bulunabilir ve elde edilen hapten türevi akabinde tasiyici ile reaksiyona sokulabilir.
Alternatif olarak hapten, sonraki bir reaksiyon ile fonksiyonel baglanti grubuna dönüstürülebilen bir öncül grup tasiyan bir ara grup ile türevlendirilebilir. Ara grup üzerinde bulunan fonksiyonel baglanti grubunun bir amin veya bir karboksilik asit grubu olmasi halinde, tasiyici üzerinde bulunan karboksilik asit grubu veya amin ile kenetlenme reaksiyonu, peptit kenetleme reaktiflerinin yukarida bu reaktifler için atif yapilan referanslarda verilen prosedürlere göre kullanilmasi yoluyla dogrudan gerçeklestirilebilir.
Bir karisik disülfit baglantisi olusturmak üzere tasiyici üzerinde bir tiol grubu ile etkilesime girebilen ara grup üzerindeki fonksiyonel baglanti grubu olarak belirli disülfit gruplari, örnegin piridildisülfitler kullanilabilir, bkz.
Ghetie, V. Vd., Bioconjugate Chem., 1990, 1:24-31. Bu ara gruplar, örnekleri bunlarla sinirli olmamak kaydiyla Tablo 7'de gösterilenleri içerdigi üzere, amin tasiyan haptenin, piridildisülfit grubunu tasiyan bir ara gruba bagli bir aktif ester ile reaksiyonu üzerinden baglanabilir.
+Na"033“/ î Y SNHH/ \ (kâgiox `x i` 0 \ Ä\./\ 3 N q /fgîB <$`kß `n/^\ , x/w\g `V 's' *H:;Qî (ny,O\î/”\V/S\S %N Tasiyici çogu kez bir proteindir ve baglanti için lizin rezidülerinin s-amino gruplari kullanilabilir, burada dogrudan bir amin-reaktif fonksiyonel baglanti grubu ile reaksiyon gerçeklestirilir ya da N-Süksinimidil S-Asetiltioasetat (SATA, CAS 76931-93-6) veya bir analogu da dahil olmak üzere tiol içeren bir grup ile türevlendirmeden sonra, hapten üzerindeki fonksiyonel baglanti grubu ile reaksiyon için tiol grubunu açiga çikarmak üzere asetat grubu hidroksilamin ile kesime ugratilir. Tiol gruplari ayrica bunlarla sinirli olmamak kaydiyla 2-merkaptoetilamin (bkz. Bilah, M. Vd., Bioelectrochemistry, 2010, 80(l):49), fosfin reaktifleri (bkz. ditioeritritol (DTT, CAS 3483-12-3) (bkz. Cleland, W., indirgen reaktifler kullanilarakr disülfit baglarinin› protein tasiyicilar ile indirgenmesi yoluyla tasiyiciya dahil edilebilir.
GENEL REAKSIYON SEMALARI Mevcut bulusun örnek bilesikleri asagida açiklanan genel sentez yöntemlerine göre sentezlenebilir. Formül (I) bilesikleri ilgili alanin uzmanlarinca bilinen yöntemlerle hazirlanabilir. Asagidaki reaksiyon semalarinin sadece bulusun örneklerini temsil etmesi ve bulusu herhangi bir sekilde sinirlandirmamasi amaçlanir.
PdWaMon N'0 0 Burada tarif edildigi üzere Ll degiskeni OC(O)(CHnn olan, L2 degiskenir mevcut olmayan ve IE degiskeni COýi olan› Formül I bilesikleri Sema l'e göre hazirlanabilir. Paliperidon hapteni yaklasik 48 saat boyunca piridin gibi bir solvent içinde oda sicakligi ila 60°C araliginda degisen sicakliklarda süksinik anhidrür veya glutarik anhidrür gibi bir siklik anhidrür bilesigi ile reaksiyona sokulur.
Pahpundon /2i`Tfjiâvfg`1jH ( N41 1. 0 E L 1`- I; ":1" 2 ' FA Ll degiskeni OC(O)(CHnn olan, L2 degiskeni NHC(O) olan ve L3 2 ßâmc degiskeni U olan Formül I bilesikleri Sema Z'ye göre hazirlanabilir. Glisin gibi uygun bir boc korumali amino asidin paliperidon ile kondenzasyonu, disikloheksilkarbodiimid gibi bir dehidrasyon maddesi ile gerçeklestirilir. Reaksiyon oda sicakliginda diklorometan gibi bir aprotik solvent içinde N,N-dimetil-4-piridinamin gibi bir baz ile gerçeklestirilir.
Amin grubu trifloroasetik asit ile korumadan çikarilir ve akabinde maleimid fonksiyonelligi eklenir. Maleimid ilgili alanda bilinen herhangi bir yöntemle dahil edilebilir. Örnegin diklorometan gibi bir solvent içinde diizopropiletilamin ve dietil siyanofosfonat gibi kenetleme reaktiflerinin varliginda N-maleoil ile sübstitüe edilmis alkil amino asitle reaksiyon (sema 2'de gösterildigi gibi), hapten üzerinde maleimid fonksiyonlu baglanti kismini verir. Alternatif olarak, DMF gibi bir solvent ve tribütilamin gibi bir baz içerisinde 2,5- dioksopirrolidin-l-il 2-(2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-pirrol-l- il)asetat gibi baska maleimid fonksiyonellestirici gruplar kullanilabilir.
Sema 2'deki prosedürler, Li degiskeni O(CH2)n olan Formül I bilesikleri için de kullanilabilir. Burada paliperidon yaklasik 6 saat boyunca THF gibi bir solvent içinde yaklasik olarak oda sicakliginda uygun bir boc korumali amino alkil bromür (örnegin boc-aminopropil bromür), 18-Taç-6 ve sodyum hidrür ile reaksiyona sokulur. Akabinde koruyucu boc grubunun uzaklastirilmasi ve maleimid fonksiyonelligini kazandirilmasi Sema 2'de gösterildigi gibi gerçeklestirilir.
Paüpendon Burada tarif edildigi üzere L1 degiskeni O(CH2M1 olan, L2 degiskeni mevcut olmayan ve L3 degiskeni (CthJKhH olan Formül yaklasik 18 sa boyunca THF gibi bir solvent içinde l8-Taç-6 ve sodyum hidrür varliginda con& ile sübstitüe edilmis bir alkil HC) tv?, kut?" `fm 3 ` -Uîsm DIE/x x 5 : `__\`_ [- 9 T T\ ` 44`: i \ ,N Ll degiskeni O(CH2)n olan, L2 degiskeni 53 ““ J` olan ve L3 degiskeni (CH2)mCO2H olan Formül. I bilesikleri Sema 4'e göre hazirlanabilir. Sema 3'te tarif edildigi gibi hazirlanan bir baglanti kismi ve COzH ile fonksiyonellestirilmis paliperidon, N-t-bütoksikarbonilpiperazin, dietil siyanofosfonat ve bir baz, örnegin diisopropiletilamin ile muamele edilir. Reaksiyon yaklasik 2 saat boyunca oda sicakliginda diklorometan içinde gerçeklestirilir. Piperazinil grubu Sema 2'de tarif edildigi üzere trifloroasetik anhidrür ile korumadan çikarilir ve akabinde diizopropiletilamin gibi uygun bir baz varliginda süksinik anhidrür veya maleik anhidrür gibi uygun bir anhidrür ile reaksiyon gerçeklestirilir. Alternatif olarak, korumadan çikarilmis piperazinil grubuna Sema 2'de tarif edildigi gibi bir maleimid fonksiyonelligi kazandirilabilecegi ilgili alanin uzmanlarinca takdir edilecektir. 8, N 11 .5 CH; . Ö' "1 F) II? PROTEiNwNn, i PROTEM” `, 2 Hßi~0H l ,2: .A (3 :(1 Ti/ "Ç" \\ //,\N,/LL //^`\/ N`xr'J k/ F PROTEIN'WNH 1 L \ 1 f) `J' \N,.N{\_Âe.- l' Maleimid fonksiyonlu haptenler Sema 5'te gösterilen yönteme göre proteinler ile konjüge edilebilir. Epsilon-azotun N- süksinimidil S-asetiltioasetat (SATA) ile asillenmesi yoluyla protein lizin rezidülerinin aktivasyonu. ve akabinde S-asetil grubunun hidroksilamin ile hidrolizi sonucunda bir nükleofilik sülfhidril grubu üretilir. Sülfhidril aktivasyonlu proteinin, maleimid türevli hapten (genel Sema 2'de açiklandigi gibi hazirlanir) ile konjügasyonu, bir` Michael katilma reaksiyonu üzerinden ilerler. Uygun proteinler ilgili alanin uzmanlarinca bilinir ve keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobulini ve ovalbümini kapsar. 1.1' 2% ,(3 i 4 * / "F E 'NmOH C› ,/\Yv x`i( HA" î 21` / " ,Fi N O `Y ` __î'îîîîi'î_l:îî:_, O "1/LÄ`N' PROTEM` J& _ gam!.
Karboksilik asit fonksiyonlu haptenler Sema 6'da gösterilen yönteme göre proteinlerle konjüge edilebilir. Yaklasik 18 sa boyunca yaklasik 20°C'lik bir sicaklikta DMF gibi bir solvent içerisinde N-hidroksisüksinimid ve disikloheksilkarbodiimid gibi uygun bir kenetleme maddesi ve tribütil amin gibi bir baz ile reaksiyon, ayrilan gruplu karboksilik asidi aktiflestirir.
Aktiflestirilen baglanti kismi ve hapten akabinde fosfat tamponu (pH 7.5) gibi bir solvent içerisinde yaklasik 20°C'de yaklasik 2.5 saat boyunca bir protein ile konjüge edilebilir.
Uygun proteinler ilgili alanin uzmanlarinca bilinir ve keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobulini ve ovalbümini kapsar.
ANTIKOR ÜRETIMI Yukaridaki konjügatlar, kendisine yönelik olarak üretilen antipsikotik ilaca (paliperidon) baglanan antikorlarin üretimi için faydalidir. Bu antikorlar analizlerde antipsikotik ilacin hasta numunelerinde varligini ve/veya miktarini belirlemek için kullanilabilir. Böylesi bir tayin, terapötik ilaç izlemi saglayarak. bunun tüm faydalarini mümkün kilar. Antipsikotik ilaçlarin düzeylerinin tayini, sunlar da dahil olmak üzere birçok amaç için kullanilabilir: risperidon, paliperidon, ketiapin, olanzapin ve bunlarin metabolitlerinden olusan gruptan seçilenler de dahil olmak üzere diger antipsikotik ilaçlar ile kombinasyon halinde tayin (bu tip bir tayin, bu antipsikotik ilaçlarin eszamanli ölçümünü saglar); hastanin reçete edilen tedaviye bagliligini veya uyumunu belirleme; bir hastanin bir oral antipsikotik rejimden bir uzun etkili enjekte edilebilir antipsikotik rejime geçmesi gerekip gerekmedigini belirlemek için bir karar araci olarak kullanim; etkili veya güvenilir ilaç düzeylerini elde etmek veya idame ettirmek amaciyla oral veya enjekte edilebilir antipsikotiklerin doz düzeyinin veya doz uygulama araliginin artirilmasi veya azaltilmasinin gerekip gerekmedigini belirlemek için bir karar araci olarak kullanim; antipsikotik ilaç tedavisinin baslangicinda minimum, pK düzeylerinin elde edildigine dair kanit saglamak suretiyle bir yardimci olarak kullanim; çok sayida formülasyonda bulunan veya çok sayida kaynaga ait olan antipsikotik ilacin biyoesdegerligini belirlemeye yönelik kullanim; polifarmasi ve potansiyel ilaç- ilaç etkilesimlerinin etkisini degerlendirmeye yönelik kullanim ve bir hastanin bir klinik deneye dahil edilip edilmeyecegine dair bir gösterge olarak ve akabinde klinik deney ilaç gerekliliklerine bagliligin izlenmesi için bir yardimci olarak kullanim.
Buradaki bilesikler ile birlikte bir immünojenik tasiyici içeren bulus konusu konjügatlarin saglanmasi halinde, antipsikotik ilaca baglanan antikorlar, örnegin poliklonal, monoklonal, kimerik ve hümanize antikorlar üretilebilir. Özellikle öngörülen bu tip antikorlar, monoklonal ve poliklonal antikorlari ve ayrica bu antikorlarin antijen baglanma domenini ve/Veya bir veya daha fazla komplementerlik belirleyici bölgesini içeren fragmanlarini, örnegin rekombinant proteinleri kapsar. Antikor tercihen ilaca ve arzu edilen farmakolojik olarak aktif herhangi bir metabolite baglanacaktir. Bir ilaç konjügatinda bir immünojenik tasiyicinin baglanma yerinin degistirilmesi yoluyla antikorlara seçicilik ve metabolitlerle ve/veya ilgili ilaçlarla çapraz reaktivite kazandirilabilir. Paliperidon (9- hidroksirisperidon) için, risperidonla ya da 7- hidroksirisperidon ve N-dealkilrisperidon gibi diger risperidon metabolitleriyle çapraz reaktivite arzu edilebilir veya edilmeyebilir. Risperidon ve paliperidon ile çapraz reaksiyona giren ve 7-hidroksirisperidon veya N- dealkilrisperidon ile reaksiyona girmeyen, dolayisiyla risperidonu ve bunun farmakolojik olarak aktif majör metaboliti paliperidonu saptayan bir antikor arzu edilebilir.
Alternatif olarak, farmakolojik olarak aktif metabolitlerin (risperidon ve paliperidon) ayri olarak saptanmasi ve pasif metabolitlerin saptanmamasi (7-hidroksirisperidon ve N- dealkilrisperidon) arzu edilebilir. Bu ilaçlarin ve/veya metabolitlerin birçogunu saptayan antikorlar ya da her birini ayri olarak saptayan antikorlar üretilebilir (dolayisiyla antikorun "spesifik baglanma" özellikleri tanimlanabilir). Bir antikor, bir veya daha fazla bilesige baglanimi esmolar veya büyük ölçüde esmolar oldugunda bir veya daha fazla bilesige spesifik olarak baglanir.
Bu tip antikorlarin üretim yöntemleri, bir konakçinin mevcut bulusun özelliklerine sahip konjügat (bir immünojen olarak bilesik ve immünojenik tasiyici) ile asilanmasini içerir.
Uygun konakçilar, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla fareler, siçanlar, hamsterler, kobaylar, tavsanlar, tavuklar, esekler, atlar, maymunlar, sempanzeler, orangutanlar, goriller, insanlar ve bir olgun immün yanit olusturma kapasitesine sahip türleri kapsar. Bagisiklama prosedürleri ilgili alanda layikiyla bilinir ve "The Immunoassay Handbook", 2nd Edition, ed.: David Wild (Nature Publishing Group, 2000) ve içerdigi referanslar gibi çok sayida bilimsel eserde ve yayinda Tercihen, mevcut bulusun özelliklerine sahip bir immünojen bir konakçi bireye, örnegin bir hayvana veya insana bir adjuvan ile birlikte verilir. Uygun adjuvanlar, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, Freund adjuvani, toz alüminyum hidroksit (alum), Bordetella pertussis ile birlikte alüminyum hidroksit ve monofosforil lipit A-sentetik trehaloz dikorinomikolati (MPL-TDM) kapsar.
Poliklonal antikorlar bir memeli konakçida istege bagli olarak bir adjuvan ile birlikte uygulanabilen bir immünojenin bir veya daha fazla enjeksiyonu ile uyarilabilir. Tipik olarak, bir immünojen ya da bir immünojenin ve bir adjuvanin bir kombinasyonu bir memeli konakçiya bir veya daha fazla subkütanöz veya intraperitoneal enjeksiyon ile uygulanabilir.
Bagisiklama programi tercihen en az bir hafta ve daha cok tercih edildigi haliyle iki veya daha fazla hafta boyunca uygulanir. Bu sekilde üretilen poliklonal antikorlar ilgili alanda iyi bilinen yöntemlerle izole edilebilir ve saflastirilabilir.
Monoklonal antikorlar örnegin Kohler ve Milstein, Nature bilinen hibridoma yöntemleriyle üretilebilir. Hibridoma yöntemleri tipik olarak bir konakçinin veya bir konakçidan alinan lenfositlerin bagisiklanmasini, monoklonal antikoru salgilayan veya salgilama potansiyeline sahip olan lenfositlerin toplanmasini, lenfositlerin ölümsüzlestirilmis hücrelerle kaynastirilmasini ve arzu edilen monoklonal antikoru salgilayan hücrelerin seleksiyona ugratilmasini Bir konakçi, bir immünojene spesifik antikorlari üreten veya üretme kapasitesine sahip olan lenfositleri uyaracak. sekilde bagisiklanabilir. Alternatif olarak lenfositler in vitro olarak bagisiklanabilir. Insan hücreleri arzu edildiginde, periferik kan lenfositleri kullanilabilir, ancak dalak hücreleri veya diger memeli kaynaklara ait lenfositler tercih Lenfositler örnegin polietilen glikol gibi bir füzyon maddesinin kullanimiyla kolaylastirilabilen bir proses olarak hibridoma hücrelerini olusturmak üzere bir ölümsüzlestirilmis hücre dizisiyle kaynastirilabilir. Örnek olarak, transformasyon yoluyla ölümsüzlestirilmis mutant kemirgen, sigir veya insan miyelom hücreleri kullanilabilir.
Kaynastirilmis olmayan ölümsüzlestirilmis hücrelere kiyasla, hibridoma hücrelerinin büyük ölçüde saf popülasyonlari tercih edilir. Bu nedenle füzyondan sonra hücreler, örnegin hipoksantin guanin fosforibosil transferaz (HGPRT) enziminden yoksun mutant miyeloni hücreleri kullanilarak, kaynastirilmis olmayan ölümsüzlestirilmis hücrelerin büyümesini veya sagkalimini inhibe eden uygun bir ortamda büyütülebilir.
Böylesi bir durumda HGPRT'den yoksun hücrelerin büyümesini engellemek ve ayni zamanda hibridomalarin büyümesini saglamak için ortama (HAT ortami) hipoksantin, aminopterin ve timidin ilave edilebilir. Ölümsüzlestirilmis hücreler tercihen etkili bir sekilde kaynasir, HAT gibi bir ortamda seleksiyon yoluyla karisik popülasyonlardan izole edilebilir ve füzyondan sonra antikorun stabil ve yüksek düzeyli ekspresyonunu destekler. Tercih edilen ölümsüzlestirilmis hücre dizileri, Amerikan Tip Kültür Koleksiyonundan (Manassas, VA) temin edilebilen miyelom hücre dizilerini kapsar.
Hibridoma hücreleri antikoru genelde hücre disina salgiladigindan, kültür ortamlari, antipsikotik ilaca spesifik monoklonal antikorlarin varligi için analiz edilebilir.
Monoklonal antikorlarin baglanma spesifikligini ölçmek için radyo immün analiz (RIA) veya enzime bagli immünsorban analizi (ELISA) gibi in vitro baglanma analizlerinin immün presipitasyonu kullanilabilir.
Monoklonal antikor salgilayici hibridoma hücreleri sinirli seyreltme prosedürleriyle tekli klonlar halinde izole edilebilir ve alt kültürlenebilir. Uygun kültür ortamlari, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla Dulbecco'nun Degistirilmis Eagle Ortami, RPMI-l640 ve polipeptit içermeyen, polipeptidi azaltilmis veya serum içermeyen ortamlar, örnegin Ultra DOMA PF veya HL-l'i (Biowhittaker, Walkersville, MD) kapsar.
Alternatif olarak hibridoma hücreleri in vivo olarak assit halinde büyütülebilir.
Monoklonal antikorlar, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla polipeptit A-SEPHAROSE, hidroksilapatit kromatografisi, jel elektroforezi, diyaliz, amonyum sülfat presipitasyonu ve afinite kromatografisi de dahil olmak üzere konvansiyonel immünglobülin (lg) saflastirma prosedürleriyle bir kültür ortamindan veya assit sivisindan izole edilebilir ve/veya saflastirilabilir.
Monoklonal antikorlar ayrica rekombinasyon yöntemleriyle, örnegin U.S. Patent No. 4,166,452'de açiklanan yöntemlerle üretilebilir. Monoklonal antikorlari kodlayan DNA konvansiyonel prosedürlerle, örnegin murin agir ve hafif antikor zincir genlerine, tercihen antipsikotik ilaçlara spesifik antikorlari salgilayan monoklonal antikor hibridoma hücre dizilerinden izole edilmis prob DNA'ya spesifik olarak baglanan oligonükleotit problari kullanilarak izole edilebilir ve sekanslanabilir.
IMMÜN ANALIZLER Bu sekilde üretilen antikorlar immün analizlerde antipsikotik ilaci tanima/antipsikotik ilaca baglanma için kullanilabilir, böylece ilacin bir hasta numunesinde varligi ve/veya miktari saptanabilir. Analiz formati tercihen bir rekabetçi immün analiz formatidir. Bu tip bir analiz formati ve baska analizler, diger yerlerin yani sira, Hampton vd. (Serological Methods, A Laboratory Manual, APS Press, St. Paul, MN 1990) ve açiklanir.
Yukarida tarif edilen bir antikoru içeren bir reaktif kiti de saglanabilir. Bir örnek reaktif kiti, antipsikotik ilaca (paliperidon) baglanan bir antikor, bir antipsikotik ilacin veya bir türevinin bir analogunu bir isaretleme grubuna kenetli halde içeren bir kompleks ihtiva edebilir ve istege bagli olarak ayricar bir antipsikotik ilaci veya ilgili bir standardi bilinen bir miktarda içeren bir veya daha fazla kalibratör ihtiva edebilir.
Yukarida belirtildigi üzere reaktif kitleri, ölçülecek analiti bilinen bir miktarda içeren kalibratörler ve/veya kontrol materyalleri içerebilir. Analit konsantrasyonu, bir numune için elde edilen sonuçlarin, bir standart için elde edilen sonuçlarla karsilastirilmasi yoluyla hesaplanabilir. Bir kalibrasyon egrisi olusturulabilir ve sonuç kümelerini iliskilendirmek ve bir numunede bir analitin konsantrasyonunu belirlemek için kullanilabilir.
Bir analit, örnegin bir antipsikotik ilaç içerdigi düsünülen herhangi bir numune, tercih edilen mevcut yapilanmalarin yöntemlerine göre analiz edilebilir. Numune arzu edildiginde ön isleme tabi tutulabilir ve analize müdahale etmeyen uygun herhangi bir ortamda hazirlanabilir. Numune tercihen bir sulu ortam, Örnegin bir konakçiya ait bir Vücut sivisi ve en çok tercih edildigi haliyle plazma veya serum içerir.
Birlikte askida bekleyen "Haptens of Aripiprazole" (Vekil Dosya No. PRD3265USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Remmerie), "Haptens of Olanzapine" (Vekil Dosya No.
PRD, "Haptens of Paliperidone" (Vekil Dosya No. PRD3267USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Remmerie), "Haptens of Quetiapine" (Vekil Dosya Dosya No. CD85128USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko), "Antibodies to Olanzapine Haptens and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD85132USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko), “Antibodies to Paliperidone Haptens and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD85126USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko), "Antibodies to Quetiapine Haptens and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD85134USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko), "Antibodies to Risperidone Haptens and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD8513OUSPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko), "Antibodies to Aripiprazole and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD85129USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko), "Antibodies to Olanzapine and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD85133USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko), "Antibodies to Paliperidone and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD85127USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko), "Antibodies to Quetiapine and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD85135USPSP, ilk belirtilen bulus10 sahibi: Hryhorenko), "Antibodies to Risperidone and Use Thereof" (Vekil Dosya No. CD85131USPSP, ilk belirtilen bulus sahibi: Hryhorenko) baslikli basvurular. ÖRNEKLER Mevcut bulusun örnek bilesikleri asagida açiklanan genel sentez yöntemlerine göre sentezlenebilir. Formül (I) bilesikleri ilgili alanin uzmanlarinca bilinen yöntemlerle hazirlanabilir. Asagidaki örneklerin sadece bulusun örneklerini temsil etmesi ve bulusu herhangi bir sekilde sinirlandirmamasi amaçlanir.
Referans Örnegi 1 4-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)-4-oksobütanoik asit Paliperidon (10 93 23.45 nmml) ile N)N-dimetil-4-piridinamin piridin ( içinde çözülmüstür. Karisim bir argon atmosferi altinda 60°C'de 4 sa ve oda sicakliginda 48 sa karistirilmistir. Reaksiyon karisimi buharlastirilmistir ve diklorometan/metanol ( içinde çözülmüstür. Sulu faz, diklorometan/metanol ( ile bes kere özütlenmistir. Organik katmanlar birlestirilmistir, Na2804 uzerinde kurutulmustur ve vakum altinda buharlastirilmistir. Kalinti silika jel kromatografisiyle (kloroform/etanol (80/20 ila 70/30) gradyani ile ayristirma) saflastirilmistir. Ürün izopropanol (50 mL) içinde çözülmüstür ve meydana gelen çökelti filtrelenmistir` ve izopropanol (10 mL) ile yikanmistir. Çökeltinin vakum altinda kurutulmasi baslik bilesigini bir beyaz kati olarak vermistir. ESI-MS J=8.78, 5.12 Hz, 1H). 3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l-il)etil)-2- metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-9-il 3-pivalamidopropanoat Diklorometan (20 mL) içindeki paliperidon (1.0 g, 2.34 mmol) solüsyonu. Boc-b-Ala-OH (443.65 mg, 2.34 mmol), disikloheksil karbodiimid (483.79 mg, 2.34 mmol) ve N,N-dimetil-4- piridinamin (14.32 mg, 0.117 mmol) ile muamele edilmistir.
Reaksiyon oda sicakliginda argon atmosferi altinda karistirilmistir. 18 sa sonra reaksiyon karisimi bir sulu doymus sodyum bikarbonat solüsyonu (20 mL) içerisine bosaltilmistirt ve sulu katman diklorometan (20 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Birlestirilen organik katmanlar MgSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve konsantre edilmistir. Kalintinin silika jel kromatografisiyle (diklorometan/metanol (95/5) ile ayristirma) saflastirilmasi baslik bilesigini vermistir. ESI-MS (M+1) 598. 3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l-il)etil)-2- metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-9-il 3-(3-(2,5-diokso-2,5-dihidro-lH-pirrol-1- il)propanamido)propanoat Adim A'da tarif edildigi gibi hazirlanan 3-(2-(4-(6- florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l-il)etil)-2-metil-4- okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-9-il 3- pivalamidopropanoat (901.5 mg, 1.15 mmol) bilesiginin diklorometan (20 mL) ve trifloroasetik asit ( içindeki solüsyonu oda sicakliginda 1 sa karistirilmistir. Bu karisima dikkatlice N-maleoil-3-aminopropionik asit solüsyonu (233.8 mg, 1.38 mmol), diizopropiletilamin (, dietil siyanofosfonat ( ilave edilmistir. Reaksiyon karisimi oda sicakliginda argon atmosferi altinda 1 sa karistirilmistir. Reaksiyon karisimi su (20 mL) içerisine bosaltilmistir ve sulu katman diklorometan (20 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Birlestirilen organik katmanlar NazSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve konsantre edilmistir. Ham karisimin HPLC ile saflastirilmasi baslik bilesigini vermistir. ESI-MS (M+1) 649.
N-(3-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)propil)pivalamid solüsyonu 3-(Boc-amino)propil bromür (500 mg, 2.10 mmol), 18- 139.97 mg, 3.5 mmol) ile muamele edilmistir. Karisim oda sicakliginda 6 sa karistirilmistir. Solvent vakum altinda uzaklastirilmistir, diklorometan/su (50 mL/50 mL) içinde çözülmüstür ve sulu katman diklorometan (50 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Birlestirilen organik katmanlarin NazSO4 üzerinde kurutulmasi, filtrelenmesi ve konsantre edilmesi sonucunda elde edilen baslik bilesigi bir sonraki adimda tekrar saflastirilmadan kullanilmistir. 9-(3-aminopropoksi)-3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3- il)piperidin-1-il)etil)-2-metil-6,7,8,9-tetrahidro-4H- pirido[1,2-a]pirimidin-4-on (7/9: .- Adini A'da tarif edildigi gibi hazirlanan N-(3-((3-(2-(4-(6- florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidm-l-il)etil)-2-metil-4- okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-9- il)oksi)propil)pivalamid (1.482 g, 2.54 mmol) bilesiginin diklorometan (10 nü& ve trifloroasetik. asit (5 nün içindeki solüsyonu oda sicakliginda 1 sa karistirilmistir. Reaksiyon karisiminin bir Porapak CX kolonunda saflastirilmasi sonucunda elde edilen baslik bilesigi bir sonraki adimda tekrar saflastirilmadan kullanilmistir. florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l-il)etil)-2-metil-4- okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2-a1pirimidin-9- il)oksi)propil)propanamid Adim B'de tarif edildigi gibi hazirlanan 9-(3-aminopropoksi)- 3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l-il)etil)-2- g, 0.627 mmol) bilesiginin diklorometan (5 mL) içindeki solüsyonu argon altinda diizopropiletilamin (218.54 uL, 1,25 ve dietil siyanofosfonat ( ile muamele edilmistir. 18 sa sonra reaksiyon karisimi bir sulu doymus sodyuni bikarbonat solüsyonu (20 mL) içerisine bosaltilmistir ve sulu katman diklorometan (20 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Birlestirilen organik katmanlar Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve konsantre edilmistir. Ham karisimin HPLC ile saflastirilmasi baslik bilesigini vermistir. ESI-MS (M+1) 635.
Referans Örnegi 4 6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoik asit THF (15 mL) içindeki paliperidon (1.0 g, 2.34 mmol) solüsyonu bromoheksanoat ( ve sodyuni hidrür (%60 sonra reaksiyon karisimi bir sulu doymus sodyum bikarbonat solüsyonu (20 mL) içerisine bosaltilmistir ve sulu katman etil asetat (20 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Sulu katman asetik asit ile asitlestirilmistir ve 2-meti1 THF (20 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Birlestirilen organik 2-metil THF katmanlari NazSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve konsantre edilmistir. Kalintinin HPLC ile saflastirilmasi baslik bilesigini vermistir. ESI-MS (M+1) 541. 1H NMR: (CDClL tert-bütil 4-(6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3- il)piperidin-l-il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H- pirido[1,2-a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoil)piperazin-l- karboksilat Diklorometan (10 mL) içindeki Örnek 4 (200 mg, 0.37 mmol) solüsyonu argon altinda N-t-bütoksikarbonilpiperazin (89.57 mg, 0.48 mmol) ve diizopropiletilamin ( ile muamele edilmistir. Karistirilan solüsyona dietil siyanofosfonat ( ilave edilmistir. Oda sicakliginda iki saat karistirildiktan sonra reaksiyon karisimi su (20 mL) içerisine bosaltilmistir ve sulu katman diklorometan (20 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Birlestirilen organik katmanlar Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve konsantre edilmistir. Ham karisim bir sonraki adimda tekrar saflastirilmadan kullanilmistir. (408 mg, ESI-MS (M+1) 709) 3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-B-il)piperidin-l-il)etil)-2- metil-9-((6-okso-6-(piperazin-l-il)heksil)oksi)-6,7,8,9- tetrahidro-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-on Adim A'da tarif edildigi gibi hazirlanan tert-bütil 4-(6-((3- (2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l-il)etil)-2- metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[l,2-a]pirimidin-9- il)oksi)heksanoil)piperazin-l-karboksilat (408 Kg) 0.58 mmol) bilesiginin diklorometan (5 mL) içindeki solüsyonu argon altinda trifloroasetik asit ( ile muamele edilmistir. Oda sicakliginda 72 sa karistirildiktan sonra reaksiyon karisimi bir sulu doymus sodyum bikarbonat solüsyonu (5 mL) içerisine bosaltilmistir ve sulu katman diklorometan (5 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Birlestirilen organik katmanlar NaQSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve konsantre edilmistir. Ham ürün bir sonraki adimda tekrar saflastirilmadan kullanilmistir. (ESI-MS (M+1) 609) 4-(4-(6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoil)piperazin-l-il)-4-oksobütanoik Adim B'de tarif edildigi gibi hazirlanan 3-(2-(4-(6- florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l-il)etil)-2-metil-9- ((6-okso-6-(piperazin-l-il)heksil)oksi)-6,7,8,9-tetrahidro-4H- pirido[1,2-a]pirimidin-4-on (239 mg, 0.39 mmol) bilesiginin diklorometan (5 mL) içindeki solüsyonu argon altinda süksinik anhidrür (43.15 mg, 0.43 mmol) ve diizopropiletilamin ( ile muamele edilmistir. Oda sicakliginda 2 sa karistirildikta sonra reaksiyon karisimi su HS mL) içerisine bosaltilmistir* ve sulu katman diklorometan/metanol (95/5, 5 mL, üç kere) ile özütlenmistir. Birlestirilen organik katmanlar NazSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve konsantre edilmistir. Kalintinin HPLC ile saflastirilmasi ve diizopropileter ile tritüre edilmesi baslik bilesigini vermistir. (ESI-MS (M+1) : 6 ppm florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l-il)etil)-2-metil-4- okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-9- il)oksi)propil)propanamid - keyhole limpet hemosiyanin konjügati Keyhole limpet hemosiyaninin (KLH, 18.0 mg, 0.18 umol) 100 mM fosfat tamponu, 0.46 M sodyum klorür (pH 7.4) içindeki 4.22 mL'lik solüsyonuna DMF içindeki 83.2 uL'lik N-süksinimidil-S- asetiltioasetat (SATA, 25 mg/mL, 2.1 mg, 9.0 umol) solüsyonu ilave edilmistir. Meydana gelen solüsyon bir silindirli karistirici üzerinde 20°C'de 1 saat inkübe edilmistir.
Reaksiyon bir Sephadex G-25 kolonunda 100 mM fosfat tamponu, saflastirilmistir. 10 edilmistir. Meydana gelen solüsyon bir silindirli karistirici üzerinde 20°C'de 40 dakika inkübe edilmistir. Reaksiyon, maleimid ile aktiflestirilmis hapten ile konjügasyon reaksiyonunda oldugu gibi kullanilmistir.
Adim 1'de elde edilen KLH-SH'ye (, DMF içindeki - N-(3-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)propil)propanamid (Örnek 3'te tarif edildigi gibi hazirlanmistir, lO mg/mL, 12.1 umol) solüsyonu ilave edilmistir. Meydana gelen bulanik karisim bir silindirli karistirici üzerinde 20°C'de 4 saat inkübe edilmistir.
Reaksiyon 0.2 um'lik bir siringa filtresinden filtrelenmistir ve akabinde bir Sephadex G-25 kolonunda 100 mM fosfat tamponu, 0.46 M sodyum klorür (pH 7.4) ile saflastirilmistir.
Referans Örnegi 7 6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoik asit - - sigir tiroglobülini konjügati 6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoik asit (Referans Örnegi 4'te tarif edildigi gibi hazirlanmistir, 5.0 mg, 9.3 umol), N- hidroksisüksinimid (NHS, 3.9 mg, 34.2 umol) ve N,N- disikloheksilkarbodiimid (DCC, 7.1 mg, 34.2 umol) bilesiklerinin 300 uL DMF ve 3 uL tribütilamin içindeki solüsyonu 20°C'de 18 saat karismaya birakilmistir. Meydana tiroglobülini (BTG, 7.6 mg, 0.011 umol) solüsyonuna ilave edilmistir. Meydana gelen bulanik karisim bir silindirli karistirici üzerinde 20°C'de 3 saat inkübe edilmistir.
Reaksiyon 0.45 um'lik bir siringa filtresinden filtrelenmistir ve akabinde bir Sephadex G-25 kolonunda 100 mM fosfat tamponu, 0.14 M sodyum klorür (pH 7.4) ile saflastirilmistir. 4-(4-(6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoil)piperazin-l-il)-4-oksobütanoik asit - keyhole limpet hemosiyanin konjügati 4-(4-(6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-B-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoil)piperazin-l-il)-4-oksobütanoik asit (örnek 5'te tarif edildigi gibi hazirlanmistir, 10.6 mg, N,N-disikloheksilkarbodiimid (DCC, 11.5 mg, 55.5 umol) bilesiklerinin 400 uL DMF ve 4 uL tribütilamin içindeki solüsyonu 20°C'de 18 saat karismaya birakilmistir. Meydana gelen solüsyonun 81 uL'lik bir örnegi (3.0 umol), 100 mM fosfat tamponu, 0.46 M sodyum klorür (pH 7.4) içindeki solüsyonuna ilave edilmistir. Meydana gelen bulanik karisim bir silindirli karistirici üzerinde 20°C'de 2.5 saat inkübe edilmistir. Reaksiyon 0.45 um'lik bir siringa filtresinden filtrelenmistir ve akabinde bir Sephadex G-25 kolonunda 100 mM fosfat tamponu, 0.46 M sodyum klorür (pH 7.4) ile saflastirilmistir. 4-(4-(6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoil)piperazin-l-il)-4-oksobutanoik asit - sigir tiroglobülini konjügati 4-(4-(6-((3-(2-(4-(6-florobenzo[d]izoksazol-3-il)piperidin-l- il)etil)-2-metil-4-okso-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-9-il)oksi)heksanoil)piperazin-l-il)-4-oksobütanoik asit (örnek 5'te tarif edildigi gibi hazirlanmistir, 17.1 mg, N,N-disikloheksilkarbodiimid (DCC, 18.4 mg, 89.3 umol) bilesiklerinin 600 uL DMF ve 6 uL tribütilamin içindeki solüsyonu 20°C'de 18 saat karismaya birakilmistir. Meydana gelen solüsyonun , lOO mM fosfat tamponu (pH 7.5) içindeki 3.0 mL'lik sigir tiroglobülini (BTG 15.0 mg, 0.023 pmol) solüsyonuna ilave edilmistir. Meydana gelen bulanik karisim bir silindirli karistirici üzerinde 20°C'de 2.5 saat inkübe edilmistir.
Reaksiyon 0.45 um'lik bir siringa filtresinden filtrelenmistir ve akabinde bir Sephadex G-25 kolonunda 100 mM fosfat tamponu, 0.14 M sodyum klorür (pH 7.4) ile saflastirilmistir.
Paliperidon için Rekabetçi immün Analiz Paliperidon/risperidon immünojenleri ile bir dizi bagisiklamadan sonra fare kuyrugundan alinan kan numuneleri bir ELISA analizinde reaktivite için test edilmistir.
Hibridoma süpernatanlari da test edilmistir ve asagidaki Tablolar 1 ve 2'de gösterilen ELISA verileri birkaç hibridomanin reaktivitesini gösterir (füzyon partneri olarak NSO hücreleri kullanilmistir). Tablo 2'de gösterildigi üzere, 2A5 ve 5Gll hibridomalarinin reaktivitesi gözlemlenmistir.
Seyrelti 1 2 3 katkisiz 1C4 6E6 katkisiz 2A5 7A7 katkisiz 2G10 katkisiz 3B7 katkisiz Taslak 4D8 katkisiz 5A12 BOS katkisiz 5G11 katkisiz 6C1 Seyrelti 1 2 3 Klonlar ELISA reaktivitesi üzerinden belirlendikten sonra, afiniteyi ve çapraz reaktiviteyi benzer bilesiklerle karsilastirmak için rekabetçi ELISA'lar çalisilmistir.
Sekiller 1 ve 2, hibridoma alt klonu 5_9 ile elde edilen ELISA çapraz reaktivite sonuçlarini gösterir. Veriler risperidona ve ayrica bunun metabolitleri olan paliperidon ve 7- hidroksirisperidona karsi reaktiviteyi gösterir. Sinyallerin risperidona veya paliperidona spesifik olup olmadigini belirlemek için süpernatanlar da rekabetçi ELISA ile test edilmistir. Sekil 3, hibridoma alt klonu 2A5 ile elde edilen sonuçlari gösterir. Veriler hem risperidona hem de paliperidona karsi reaktiviteyi gösterir.
Sekil 4, bir yanal akis analiz cihazinda kullanilan rekabetçi immün analiz formatini gösterir, burada yakalama antikoru, yani risperidon/paliperidon klonu 5-9, bir florofor ile konjüge risperidondan olusan bir tayin konjügati ile birlikte bir çipin üzerine uygulanmistir. Sekil 4'te gösterilen bu rekabet formatinda, düsük bir analit (paliperidon) düzeyi yüksek sinyal ile sonuçlanir, yüksek bir analit (paliperidon) düzeyi ise düsük sinyal ile sonuçlanir. Numunedeki paliperidon miktari, herhangi bir ilaç içermeyen. bir kontrol numunesine kiyasla floresans kaybindan hesaplanabilir.
Risperidon/paliperidon klonu 5-9 ile olusturulan bir tipik doz yanit egrisi Sekil 5'te gösterilir.

Claims (1)

  1. ISTEMLER 1. Formül I bilesikleri olup, Ü-ß-U Fmmmi 5 Özelligi; burada n degiskeninin 1, 2 veya 3 degerini almasi; L2 degiskeninin NHC(O), O \4j ` olmasi veya mevcut olmamasi; 10 lß degiskeninin 0 olmasi; burada m degiskeninin O, 1, 2 veya 3 degerini almasi; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda ni degiskeninin sadece C) degerini alabilmesidir. l5 2. Formül 1 bilesikleri olup, L3-L2-L1 Formül l Özelligi; L1 degiskeninin OC(O)(CHMn veya o burada n degiskeninin l, 2 veya 3 degerini almasi; 20 L2 degiskeninin NHC(O) veya olmasi; L3 degiskeninin (CHnnßozH veya 0 olmasi; burada m degiskeninin 1, 2 veya 3 degerini almasidir. Istem 1'de tanimlanan bilesik olup, özelligi; Ll degiskeninin OC(O)(CHün veya O(CHûn Olmasi; burada n degiskeninin 1, 2 veya 3 degerini almasi; L2 degiskeninin NHC(O), 0 \-j ”f L3 degiskeninin 0 olmasi; olmasi veya mevcut olmamasi; burada m degiskeninin 0, 1 veya 2 degerini almasi; ancak burada kosul olarak L2 degiskeninin mevcut olmadigi durumlarda rn degiskeninin sadece (3 degerini alabilmesidir. Istem 2'de tanimlanan bilesik olup, özelligi; Ll degiskeninin OC(O)(CHwn veya O(CHnn olmasi; burada n degiskeninin l, 2 veya 3 degerini almasi; L2 degiskeninin NHC(O) veya 0 olmasi; L3 degiskeninin (CH2)mC02H veya 0 olmasi; burada m degiskeninin 1 veya 2 degerini almasidir. Istem 1 veya Istem 2'de tanimlanan bilesik olup, özelligi; asagidaki yapiya sahip olmasidir: l* Ü '5 veya Asagidaki yapiya sahip bir bilesik: Istemler 1-6'nin herhangi birinde tanimlanan bilesik ile bir immünojenik tasiyicinin bir konjügati. Istem 7'de tanimlanan konjügat olup, özelligi; immünojenik tasiyicinin bir protein olmasidir. Isteni 8'de tanimlanan konjügat olup, özelligi; proteinin keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobulini veya ovalbümin olmasidir. Istem 1 veya istem 2'de tanimlanan bilesigi bir immünojenik tasiyiciya temas ettirme prosesiyle üretilen bir ürün. Istem. lO'da tanimlanan ürün olup, özelligi; immünojenik tasiyicinin bir protein olmasidir. Istem ll'de tanimlanan ürün olup, özelligi; bahsedilen proteinin keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobulini veya ovalbümin olmasidir. Asagidaki bilesigi bir proteine temas ettirme prosesiyle üretilen bir ürün: 14. Asagidaki üretilen bir ürün: 5 15. Asagidaki bilesigi üretilen bir ürün: 16. Asagidaki bilesigi üretilen bir ürün: 17. Asagidaki bilesigi üretilen bir ürün: bilesigi bir proteine proteine proteine proteine temas ettirme prosesiyle temas ettirme prosesiyle temas ettirme prosesiyle temas ettirme prosesiyle 18. Istemler 13-17'nin herhangi birinde tanimlanan ürün olup, özelligi; proteinin keyhole limpet hemosiyanin, sigir tiroglobülini veya ovalbümin olmasidir.
TR2019/11272T 2012-08-21 2013-08-20 Paliperidon haptenleri. TR201911272T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261691459P 2012-08-21 2012-08-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201911272T4 true TR201911272T4 (tr) 2019-08-21

Family

ID=49081008

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2019/11272T TR201911272T4 (tr) 2012-08-21 2013-08-20 Paliperidon haptenleri.

Country Status (12)

Country Link
US (1) US9394354B2 (tr)
EP (2) EP3556759B1 (tr)
JP (2) JP6286429B2 (tr)
CN (2) CN110003201A (tr)
AU (2) AU2013305930B2 (tr)
CA (1) CA2882555C (tr)
ES (2) ES2971506T3 (tr)
HK (1) HK1211934A1 (tr)
PL (1) PL2888258T3 (tr)
PT (1) PT2888258T (tr)
TR (1) TR201911272T4 (tr)
WO (1) WO2014031595A1 (tr)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TR201816416T4 (tr) 2012-08-21 2018-11-21 Janssen Pharmaceutica Nv Risperidona yönelik antikorlar ve bunların kullanımı.
WO2014031665A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc Antibodies to quetiapine haptens and use thereof
EP3556759B1 (en) * 2012-08-21 2023-11-29 Janssen Pharmaceutica NV Haptens of paliperidone
ES2762105T3 (es) 2012-08-21 2020-05-22 Janssen Pharmaceutica Nv Anticuerpos para aripiprazol y uso de los mismos
CN104736567B (zh) 2012-08-21 2019-09-03 詹森药业有限公司 阿立哌唑半抗原的抗体及其用途
JP6374387B2 (ja) 2012-08-21 2018-08-15 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． リスペリドンハプテンへの抗体及びその使用
CN104755928B (zh) 2012-08-21 2017-05-10 詹森药业有限公司 奥氮平的抗体及其用途
JP2015529199A (ja) 2012-08-21 2015-10-05 オルソ−クリニカル ダイアグノスティクス，インコーポレイティド パリペリドンハプテンに対する抗体及びその使用
CA2882615C (en) 2012-08-21 2019-07-09 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Antibodies to quetiapine and use thereof
US20140057303A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 Janssen Pharmaceutica Nv Antibodies to Olanzapine Haptens and Use Thereof
PT2888234T (pt) 2012-08-21 2018-02-22 Janssen Pharmaceutica Nv Haptenos de aripiprazol e seu uso em imunoensaios
CA2882490A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Antibodies to paliperidone and use thereof
CA3008809A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Janssen Pharmaceutica Nv Antibodies to risperidone and use thereof
WO2017106508A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Janssen Pharmaceutica Nv Antibodies to quetiapine and use thereof
CN111751535B (zh) * 2020-07-02 2023-07-11 北京勤邦科技股份有限公司 一种检测硫丹的试纸条及其应用
CN116003404A (zh) * 2022-12-14 2023-04-25 杭州同舟生物技术有限公司 一种利培酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4166452A (en) 1976-05-03 1979-09-04 Generales Constantine D J Jr Apparatus for testing human responses to stimuli
US5284948A (en) * 1991-06-07 1994-02-08 Eastman Kodak Company Drug hapten analogues for immunoassays
US6034078A (en) 1992-05-29 2000-03-07 Eli Lilly And Company Limited Thienobenzodiazepine compounds
NZ247703A (en) 1992-05-29 1995-07-26 Lilly Industries Ltd Thienobenzdiazepine derivatives and medicaments thereof
US5395933A (en) 1992-08-07 1995-03-07 Eastman Kodak Company Carbamazepine hapten analogues
US6958156B2 (en) 2000-12-15 2005-10-25 Vyrex Corporation Isoflavone derivatives
US7193065B2 (en) * 2001-07-13 2007-03-20 Roche Diagnostics Operations, Inc. Protease inhibitor conjugates and antibodies useful in immunoassay
ATE492565T1 (de) * 2002-01-31 2011-01-15 Randox Lab Ltd Immunogene, antikörper und konjugate für ketamin und dessen metaboliten
CA2479932A1 (en) 2002-03-28 2003-10-09 Eli Lilly And Company Piperazine substituted aryl benzodiazepines and their use as dopamine receptor antagonists for the treatment of psychotic disorders
AU2003264915A1 (en) 2002-08-05 2004-02-25 Eli Lilly And Company Piperazine substituted aryl benzodiazepines
JP2007505864A (ja) 2003-09-23 2007-03-15 フェルミオン オサケ ユキチュア クエチアピンの製造
TW200616604A (en) 2004-08-26 2006-06-01 Nicholas Piramal India Ltd Nitric oxide releasing prodrugs containing bio-cleavable linker
FR2878850B1 (fr) * 2004-12-02 2008-10-31 Cis Bio Internat Sa Derives de l'inositol-1-phosphate
AU2008303540B2 (en) 2007-09-27 2012-04-26 Novartis Ag Drug monitoring assay
US20100069356A1 (en) 2008-09-17 2010-03-18 Auspex Pharmaceuticals, Inc. Dibenzothiazepine modulators of dopamine, alpha adrenergic, and serotonin receptors
EP2350077B1 (en) 2008-10-14 2016-01-27 Entasis Therapeutics Limited Fused, spirocyclic heteroaromatic compounds for the treatment of bacterial infections
EP2194048A1 (en) 2008-12-02 2010-06-09 Dirk Sartor Nitrate esters for the treatment of vascular and metabolic diseases
CA2769162C (en) * 2009-07-31 2017-12-05 Ascendis Pharma As Biodegradable polyethylene glycol based water-insoluble hydrogels
US20130053405A1 (en) 2009-10-06 2013-02-28 Ulrich Hersel Carrier linked paliperidone prodrugs
EP2343296A1 (en) 2009-12-01 2011-07-13 Chemo Ibérica, S.A. A process for the purification of paliperidone
CN102781236B (zh) 2009-12-31 2015-01-07 凯姆制药公司 喹硫平的氨基酸缀合物、其制备和使用方法
DK2544536T3 (en) 2010-03-11 2019-02-04 Kempharm Inc FAT ACID CONJUGATES OF QUETIAPIN, METHOD OF PREPARING IT AND USING IT
US8088594B2 (en) * 2010-03-16 2012-01-03 Saladax Biomedical Inc. Risperidone immunoassay
US8530413B2 (en) 2010-06-21 2013-09-10 Sanofi Heterocyclically substituted methoxyphenyl derivatives with an oxo group, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
US8623324B2 (en) 2010-07-21 2014-01-07 Aat Bioquest Inc. Luminescent dyes with a water-soluble intramolecular bridge and their biological conjugates
JP5757497B2 (ja) * 2010-10-06 2015-07-29 公立大学法人大阪府立大学 シガトキシン類ｃｔｘ１ｂおよび５４−デオキシ−ｃｔｘ１ｂを認識するモノクローナル抗体およびそれを用いるシガトキシン類検出キット
CA2843503C (en) * 2011-08-12 2020-12-22 Ulrich Hersel Polymeric hyperbranched carrier-linked prodrugs
WO2013024047A1 (en) * 2011-08-12 2013-02-21 Ascendis Pharma A/S High-loading water-soluble carrier-linked prodrugs
CA2858787C (en) 2011-12-15 2017-11-21 Alkermes Pharma Ireland Limited Prodrugs of tertiary amine compounds
TR201816416T4 (tr) 2012-08-21 2018-11-21 Janssen Pharmaceutica Nv Risperidona yönelik antikorlar ve bunların kullanımı.
JP6374387B2 (ja) 2012-08-21 2018-08-15 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． リスペリドンハプテンへの抗体及びその使用
EP3556759B1 (en) * 2012-08-21 2023-11-29 Janssen Pharmaceutica NV Haptens of paliperidone
CA2882615C (en) 2012-08-21 2019-07-09 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Antibodies to quetiapine and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017264978B2 (en) 2019-09-12
JP2015529197A (ja) 2015-10-05
ES2739383T3 (es) 2020-01-30
EP2888258A1 (en) 2015-07-01
EP3556759A1 (en) 2019-10-23
EP3556759B1 (en) 2023-11-29
JP2018095655A (ja) 2018-06-21
CN104837838A (zh) 2015-08-12
AU2017264978A1 (en) 2017-12-07
US20140213767A1 (en) 2014-07-31
CN110003201A (zh) 2019-07-12
HK1211934A1 (en) 2016-06-03
CA2882555C (en) 2018-11-06
AU2013305930A1 (en) 2015-03-05
AU2013305930B2 (en) 2017-08-24
JP6491371B2 (ja) 2019-03-27
US9394354B2 (en) 2016-07-19
JP6286429B2 (ja) 2018-02-28
PL2888258T3 (pl) 2019-10-31
EP2888258B1 (en) 2019-06-05
ES2971506T3 (es) 2024-06-05
CA2882555A1 (en) 2014-02-27
PT2888258T (pt) 2019-08-21
WO2014031595A1 (en) 2014-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018200435B2 (en) Antibodies to olanzapine haptens and use thereof
JP6423490B2 (ja) オランザピン（Ｏｌａｎｚｉｐｉｎｅ）のハプテン
JP6667472B2 (ja) リスペリドン及びパリペリドンのハプテン
JP6491371B2 (ja) パリペリドンのハプテン
AU2017261585B2 (en) Antibodies to paliperidone haptens and use thereof
EP2888285B1 (en) Antibodies to aripiprazole haptens and use thereof
EP3321254B1 (en) Haptens of aripiprazole and their use in immunoassays
WO2014031645A1 (en) Antibodies to risperidone haptens and use thereof