ES2762105T3 - Anticuerpos para aripiprazol y uso de los mismos - Google Patents

Anticuerpos para aripiprazol y uso de los mismos Download PDF

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Banumathi Sankaran
Thomas R Decory
Theresa Tubbs
Linda Colt
Bart M Remmerie
Rhys Salter
Ronghui Lin
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Abstract

Un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une al aripiprazol que comprende: a) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 46 a 55 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 71 a 77 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 110 a 118 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 44; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 44; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 125 de la SEQ ID NO: 44; b) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 48; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 48; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 126 de la SEQ ID NO: 48; c) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 58 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 52; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 52; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 130 de la SEQ ID NO: 52; o d) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 56; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 56; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 56.

Description

DESCRIPCION
Anticuerpos para aripiprazol y uso de los mismos
Campo de la invención
La presente invención se refiere al campo de los inmunoensayos, y en particular a anticuerpos que enlazan con aripiprazol que se pueden usar en inmunoensayos para la detección del aripiprazol.
Antecedentes
La esquizofrenia es un trastorno psiquiátrico crónico y debilitante que afecta aproximadamente al 0,45-1% de la población mundial (van Os, J.; Kapur, S. "Schizophrenia" Lancet 2009, 374, 635-645). Los principales objetivos del tratamiento son lograr la remisión sostenida de los síntomas psicóticos, reducir el riesgo y las consecuencias de la recaída y mejorar el funcionamiento del paciente y la calidad de vida en general. Aunque muchos pacientes con esquizofrenia pueden lograr la estabilidad de los síntomas con los medicamentos antipsicóticos disponibles, el mal cumplimiento con la medicación es una razón común de recaída con los medicamentos orales administrados diariamente. Varios estudios (Abdel-Baki, A.; Ouellet-Plamondon, C.; Malla, A. "Pharmacotherapy Challenges in Patients with First-Episode Psychosis" Journal of Affective Disorders 2012, 138, S3-S14) que investiga los resultados del incumplimiento han demostrado que los pacientes con esquizofrenia que no toman su medicación según lo prescrito tienen mayores tasas de recaída, ingreso hospitalario y suicidio, así como un aumento de la mortalidad. Se estima que del 40 al 75% de los pacientes con esquizofrenia tienen dificultades para cumplir con un régimen de tratamiento oral diario (Lieberman, J. A.; Stroup, T. S.; McEvoy, J. P.; Swartz, M. S.; Rosenheck, R. A.; Perkins, D. O.; Keefe, R. S. E.; Davis, S. M.; Davis, C. E.; Lebowitz, B. D.; Severe, J.; Hsiao, J. K. "Effectiveness of Antipyschotic Drugs in Patients with Chronic Schizophrenia" New England Journal of Medicine 2005, 353(12), 1209-1223).
La monitorización terapéutica de fármacos (TDM) es la cuantificación de las concentraciones en suero o en plasma de fármacos, incluidos los fármacos antipsicóticos, para la monitorización y optimización del tratamiento. Dicha monitorización permite, por ejemplo, la identificación de pacientes que no están cumpliendo con su régimen de medicación, que no están alcanzando dosis terapéuticas, que no responden a dosis terapéuticas, que tienen una tolerabilidad subóptima, que tienen interacciones fármaco-fármaco farmacocinéticas, o que tienen un metabolismo anormal que resulta en concentraciones en plasma inapropiadas. Existe una considerable variabilidad individual en la capacidad del paciente para absorber, distribuir, metabolizar y excretar fármacos antipsicóticos. Tales diferencias pueden estar provocadas por enfermedad concurrente, edad, medicación concomitante o peculiaridades genéticas. Las diferentes formulaciones de fármacos pueden también influir en el metabolismo de los fármacos antipsicóticos. La TDM permite la optimización de dosis para pacientes individuales, mejorando los resultados terapéuticos y funcionales. La TDM permite además a un médico que prescribe asegurar el cumplimiento con las dosis prescritas y el logro de concentraciones en suero efectivas.
Hasta la fecha, los métodos para determinar los niveles de concentraciones en suero o en plasma de fármacos antipsicóticos implican el uso de cromatografía líquida (LC) con detección de UV o espectrometría de masas y radioinmunoensayos (ver, por ejemplo Woestenborghs et al., 1990 "On the selectivity of some recently developed RIA’s" in Methodological Surveys in Biochemistry and Analysis 20:241-246. Analysis of Drugs and Metabolites, Including Anti-infective Agents; Heykants et al., 1994 "The Pharmacokinetics of Risperidone in Humans: A Summary", J Clin Psychiatry 55/5, suppl:13-17; Huang et al., 1993 "Pharmacokinetics of the novel anti-psychotic agent risperidone and the prolactin response in healthy subjects", Clin Pharmacol Ther 54:257-268). Los radioinmunoensayos detectan una o ambas de risperidona y paliperidona. Salamone et al. en la Patente US N° 8.088.594 divulgan un inmunoensayo competitivo para risperidona usando anticuerpos que detectan tanto risperidona como paliperidona, pero no metabolitos farmacológicamente inactivos. Los anticuerpos usados en el inmunoensayo competitivo se desarrollan contra un inmunógeno particular. ID Labs Inc. (Londres, Ontario, Canadá) comercializa un ELISA para la olanzapina, otro medicamento antipsicótico, que también utiliza un formato competitivo. Las Instrucciones de uso indican que el ensayo está diseñado con propósitos de selección y está destinado a uso forense o de investigación, y no está destinado específicamente para uso terapéutico. Las instrucciones recomiendan que todas las muestras positivas se confirmen con cromatografía de gases/espectrometría de masas (GC-MS) e indican que el anticuerpo utilizado detecta olanzapina y clozapina (ver ID Labs Inc., "Instructions For Use Data Sheet IDEL-F083", Rev. Fecha 8 de agosto de 2011). Algunos de estos métodos, concretamente HPLC y GC/MS, pueden ser costosos y laboriosos, y generalmente sólo se realizan en laboratorios grandes o especializado que tienen el equipamiento apropiado.
Existe una necesidad de otros métodos para determinar los niveles de fármacos antipsicóticos, particularmente métodos que puedan realizarse en un consultorio médico del que prescribe (donde el tratamiento para un paciente individual se puede ajustar en consecuencia de una manera mucho más oportuna) y en otros entornos médicos que carecen de equipos de LC o GC/MS o que requieren resultados de pruebas rápidos.
Sumario de la invención
La presente invención está dirigida a un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une con el aripiprazol y que comprende:
a) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 46 a 55 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 71 a 77 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 110 a 118 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 44; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 44; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 125 de la SEQ ID NO: 44;
b) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 48; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 48; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 126 de la SEQ ID NO: 48;
c) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 58 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR2 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 52; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 52; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 130 de la SEQ ID NO: 52; o
d) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 56; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 56; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 56.
Los anticuerpos de la presente invención pueden proporcionarse en kits de ensayo y dispositivos de ensayo, siendo un dispositivo actualmente preferido un dispositivo de ensayo de flujo lateral que proporciona un análisis en el punto de atención.
La invención proporciona además un método para detectar aripiprazol en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención que está marcado con un marcador detectable, en donde el anticuerpo marcado y el aripiprazol presentes en la muestra forman un complejo marcado; y (ii) detectar el complejo marcado para detectar aripiprazol en la muestra.
Se proporciona además un método de inmunoensayo competitivo para detectar aripiprazol en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención, y con aripiprazol o un compañero de enlace competitivo de aripiprazol, en donde uno del anticuerpo y el aripiprazol o compañero de enlace competitivo del mismo está marcado con un marcador detectable, y en donde el aripiprazol de la muestra compite con el aripiprazol o el compañero de enlace competitivo del mismo por el enlace con el anticuerpo; y (ii) detectar el marcador para detectar el aripiprazol de la muestra.
Objetos, características y ventajas adicionales de la presente invención serán evidentes para los expertos en la técnica a partir de la consideración detallada de las realizaciones preferidas que siguen.
Breve Descripción de los Dibujos
La Fig. 1 muestra los resultados de ELISA competitivos generados con el hibridoma 3C1;
La Fig. 2 muestra resultados de ELISA competitivos generados con el hibridoma 3D7;
La Fig. 3 muestra el formato de inmunoensayo competitivo usado en un dispositivo de ensayo de flujo lateral; La Fig. 4 muestra el diseño del chip de un dispositivo de ensayo de flujo lateral de acuerdo con la presente invención.
La Fig. 5 muestra una curva de respuesta a dosis típica para un control positivo de aripiprazol generado con el anticuerpo 5C7 y un compañero de enlace competitivo de aripiprazol marcado;
La Fig. 6 muestra una curva de respuesta a dosis típica para un control positivo de olanzapina generado con el anticuerpo 4G9-1 y un compañero de enlace competitivo de olanzapina marcado;
La Fig. 7 muestra una curva de respuesta a dosis típica para un control positivo de quetiapina generado con el anticuerpo 11 y un compañero de enlace competitivo de quetiapina marcado;
La Fig. 8 muestra una curva de respuesta a dosis típica para un control positivo de risperidona generado con el anticuerpo 5-9 y un compañero de enlace competitivo de risperidona marcado;
La Fig. 9 muestra una curva de respuesta a dosis típica para una muestra que contiene aripiprazol generado con el anticuerpo de aripiprazol 5C7 en presencia de un compañero de enlace competitivo de aripiprazol marcado, sin curva de respuesta a dosis para olanzapina, quetiapina o risperidona en presencia de un compañero de enlace competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 10 muestra una curva de respuesta a dosis típica para una muestra que contiene olanzapina generada con el anticuerpo de olanzapina 4G9-1 en presencia de un compañero de enlace competitivo de olanzapina marcado, sin curva de respuesta a dosis para aripiprazol, quetiapina o risperidona en presencia de un compañero de enlace competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 11 muestra una curva de respuesta a dosis típica para una muestra que contiene quetiapina generada con el anticuerpo de quetiapina 11 en presencia de un compañero de enlace competitivo de quetiapina marcado, sin curva de respuesta a dosis para aripiprazol, olanzapina o risperidona en presencia de un compañero de enlace competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 12 muestra una curva típica de respuesta a dosis para una muestra que contiene risperidona generada con anticuerpo de risperidona 5-9 en presencia de un compañero de enlace competitivo de risperidona marcado, sin curva de respuesta a dosis para aripiprazol, olanzapina o quetiapina en presencia de un compañero de enlace competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 13 muestra una curva de respuesta a dosis típica para una muestra que contiene aripiprazol generado con el anticuerpo de aripiprazol 5C7 en presencia de un compañero de enlace competitivo de aripiprazol marcado, sin curva de respuesta a dosis para olanzapina, quetiapina o risperidona en presencia de anticuerpo y un compañero de enlace competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 14 muestra una curva de respuesta a dosis típica para una muestra que contiene olanzapina generada con el anticuerpo de olanzapina 4G9-1 en presencia de un compañero de enlace competitivo de olanzapina marcado, sin curva de respuesta a dosis para aripiprazol, quetiapina o risperidona en presencia de anticuerpo y compañero de enlace competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 15 muestra una curva de respuesta a dosis típica para una muestra que contiene quetiapina generada con el anticuerpo de quetiapina 11 en presencia de un compañero de enlace competitivo de quetiapina marcado, sin curva de respuesta a dosis para aripiprazol, olanzapina o risperidona en presencia de anticuerpo y compañero de enlace competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 16 muestra una curva de respuesta a dosis típica para una muestra que contiene risperidona generada con el anticuerpo risperidona 5-9 en presencia de un compañero de enlace competitivo de risperidona marcado, sin curva de respuesta a dosis para aripiprazol, olanzapina o quetiapina en presencia de anticuerpo y compañero de enlace competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 17 muestra una comparación de la curva de respuesta a dosis de aripiprazol generada como un control positivo con la curva de respuesta a dosis de aripiprazol generada en el formato múltiplex;
La Fig. 18 muestra una comparación de la curva de respuesta a dosis de olanzapina generada como un control positivo con la curva de respuesta a la dosis de olanzapina generada en el formato múltiplex;
La Fig. 19 muestra una comparación de la curva de respuesta a dosis de quetiapina generada como un control positivo con la curva de respuesta a la dosis de quetiapina generada en el formato múltiplex; y La Fig. 20 muestra una comparación de la curva de respuesta a dosis de risperidona generada como un control positivo con la curva de respuesta a la dosis de risperidona generada en el formato múltiplex.
Descripción Detallada de las Realizaciones Preferidas
Los siguientes términos se usan para describir las relaciones de secuencia entre dos o más secuencias de polinucleótidos o aminoácidos: "secuencia de referencia", "ventana de comparación", "identidad de secuencia", "porcentaje de identidad de secuencia", "identidad sustancial", "similitud" y "homólogo". Una "secuencia de referencia" es una secuencia definida usada como base para una comparación de secuencia; una secuencia de referencia puede ser un subconjunto de una secuencia mayor, por ejemplo, un segmento de una secuencia de ADNc o gen de longitud completa dada en un listado de secuencias o puede comprender una secuencia de ADNc o gen completa; una secuencia de referencia puede comprender un segmento de una secuencia de aminoácidos completa que codifica una proteína como se proporciona en un listado de secuencias o puede comprender una secuencia de aminoácidos completa que codifica una proteína. Generalmente, una secuencia de referencia es de por lo menos 18 nucleótidos o 6 aminoácidos de longitud, frecuentemente de por lo menos 24 nucleótidos u 8 aminoácidos de longitud, y a menudo de por lo menos 48 nucleótidos o 16 aminoácidos de longitud. Dado que dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos pueden cada uno (1) comprender una secuencia (es decir, una porción de una secuencia de nucleótidos o aminoácidos completa) que es similar entre las dos moléculas, y (2) puede comprender además una secuencia que es divergente entre las dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos, las comparaciones de secuencias entre dos (o más) moléculas se realizan típicamente comparando secuencias de las dos moléculas sobre una "ventana de comparación" para identificar y comparar regiones locales de similitud de secuencia. Una "ventana de comparación", como se usa en la presente, se refiere a un segmento conceptual de por lo menos 18 posiciones de nucleótidos contiguas o 6 aminoácidos en donde la secuencia de polinucleótidos o secuencia de aminoácidos se puede comparar con una secuencia de referencia de por lo menos 18 nucleótidos contiguos o 6 aminoácidos y en donde la porción de la secuencia de polinucleótidos o la secuencia de aminoácidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones, deleciones, sustituciones y similares (es decir, huecos) del 20 por ciento o menos en comparación con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o deleciones) para la alineación óptima de las dos secuencias . La alineación óptima de las secuencias para alinear una ventana de comparación puede llevarse a cabo mediante el algoritmo de homología local de Smith y Waterman, Adv. Appl. Math 2:482 (1981), mediante el algoritmo de alineación de homología de Needlemen y Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), mediante la búsqueda del método de similitud de Pearson y Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444 (1988), mediante implementaciones computerizadas de estos algoritmos (GAP, BE-STFIT, FASTA y TFASTA en el Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0 (Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI), paquetes de software Geneworks o MacVector), o mediante inspección, y se selecciona la mejor alineación (es decir, la que da como resultado el mayor porcentaje de identidad sobre la ventana de comparación) generada por los diversos métodos.
El término "identidad de secuencia" significa que dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos son idénticas (es decir, en una base de nucleótido por nucleótido o residuo por residuo de aminoácidos) sobre la ventana de comparación. El término "porcentaje de identidad de secuencia" se calcula comparando dos secuencias óptimamente alineadas sobre la ventana de comparación, determinando el número de posiciones en las que se produce la base de ácidos nucleicos idénticos (por ejemplo, A, T, C, G o U) o residuo de aminoácidos en ambas secuencias para producir el número de posiciones coincidentes, dividiendo el número de posiciones coincidentes por el número total de posiciones en la ventana de comparación (es decir, el tamaño de la ventana) y multiplicando el resultado por 100 para obtener el porcentaje de identidad de secuencia. El término "identidad sustancial" como se usa en la presente denota una característica de una secuencia de polinucleótidos o de aminoácidos, en donde la secuencia de polinucleótidos o de aminoácidos comprende una secuencia que tiene por lo menos un 85 por ciento de identidad de secuencia, preferiblemente por lo menos del 90 al 95 por ciento de identidad de secuencia, más habitualmente de por lo menos el 99 por ciento de identidad de secuencia en comparación con una secuencia de referencia sobre una ventana de comparación de por lo menos 18 posiciones de nucleótidos (6 aminoácidos), frecuentemente sobre una ventana de por lo menos 24-48 posiciones de nucleótidos (8-16 aminoácidos), en donde el porcentaje de identidad de secuencia se calcula comparando la secuencia de referencia con la secuencia que puede incluir deleciones o adiciones que totalizan el 20 por ciento o menos de la secuencia de referencia sobre la ventana de comparación. La secuencia de referencia puede ser un subconjunto de una secuencia mayor. El término "similitud", cuando se usa para describir un polipéptido, se determina comparando la secuencia de aminoácidos y las sustituciones de aminoácidos conservadas de un polipéptido con la secuencia de un segundo polipéptido. El término "homólogo", cuando se usa para describir un polinucleótido, indica que dos polinucleótidos, o secuencias designadas de los mismos, cuando se alinean y se comparan de manera óptima, son idénticos, con inserciones o deleciones de nucleótidos apropiadas, en por lo menos el 70% de los nucleótidos, habitualmente de aproximadamente el 75% al 99%, y más preferiblemente de por lo menos aproximadamente el 98% al 99% de los nucleótidos.
Un "marcador", "molécula detectora", "informador" o "marcador detectable" como se usa en la presente es cualquier molécula que produce, o se puede inducir que produzca, una señal detectable. El marcador puede conjugarse con un analito, inmunógeno, anticuerpo o con otra molécula como un receptor o una molécula que puede enlazar con un receptor como un ligando, particularmente un hapteno o anticuerpo. Un marcador puede unirse directa o indirectamente por medio de una fracción de enlace o puente. Ejemplos no limitativos de marcadores incluyen isótopos radiactivos (por ejemplo, 125I), enzimas (por ejemplo, p-gatactosidasa, peroxidasa), fragmentos de enzimas, sustratos de enzimas, inhibidores de enzimas, coenzimas, catalizadores, fluoróforos (por ejemplo, rodamina, isotiocianato de fluoresceína o FITC, o Dylight 649), colorantes, quimioluminiscentes y luminiscentes (p. ej., dioxetanos, luciferina), o sensibilizadores.
La invención proporciona un anticuerpo aislado que enlaza con aripiprazol. La invención proporciona además un kit de ensayo y un dispositivo de ensayo que comprende el anticuerpo. Se proporciona además un método para detectar aripiprazol en una muestra, que incluye un método de inmunoensayo competitivo.
En una realización, la presente invención está dirigida a un anticuerpo aislado o a un fragmento de enlace del mismo, que enlaza con aripiprazol y que es un anticuerpo aislado o a un fragmento de enlace del mismo seleccionado del grupo que consiste de: a) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 43 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 44; b) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 47 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 48; c) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 51 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 52; d) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 55 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56.
En una realización adicional, la presente divulgación está dirigida a un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une al aripiprazol y que comprende una región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos un 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:43 , SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:51 o SEQ ID NO: 55.
En una realización adicional, la presente divulgación está dirigida a un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une al aripiprazol y que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos un 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:44 , SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:52 o SEQ ID NO:56.
Las realizaciones actualmente preferidas del anticuerpo de la presente invención son: un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 43 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 44 ; un anticuerpo que comprende una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 47 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 48; un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 51 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 52; un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 55 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56.
La presente invención es un anticuerpo o fragmento de unión del mismo que se une a aripiprazol que comprende: a) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 46 a 55 de la SEQ ID NO: 43, una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende residuos de aminoácidos 71 a 77 de la SEQ ID NO: 43, una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácido 110 a 118 de la SEQ ID NO: 43, una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácido 45 a 54 de la SEQ ID NO: 44, una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 44, y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 125 de la s Eq ID NO: 44; b) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 47, una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 47, una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 47, una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 48, una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 48, y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 126 de la SEQ ID NO: 48; c) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 58 de la SEQ ID NO: 51, una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de la SEQ ID NO: 51, una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de la SEQ ID NO: 51, una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 52, una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 52 , y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 130 de la SEQ ID NO: 52; y d) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 55, una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 55, una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 55, una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 56, una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 56, y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 56.
Detalles adicionales de los anticuerpos de la presente invención se proporcionan en la sección siguiente titulada "Anticuerpos".
La presente invención proporciona además un kit de ensayo que comprende el anticuerpo, así como un dispositivo de ensayo que comprende el anticuerpo. Preferiblemente, el dispositivo de ensayo es un dispositivo de ensayo de flujo lateral. Detalles adicionales de los kits de ensayo y dispositivos de ensayo se proporcionan a continuación en la sección titulada "Kits y Dispositivos de Ensayo".
La invención proporciona además un método para detectar aripiprazol en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención que está marcado con un marcador detectable, en donde el anticuerpo marcado y el aripiprazol presentes en la muestra forman un complejo marcado; y (ii) detectar el complejo marcado para detectar aripiprazol en la muestra. Detalles adicionales del método de detectar aripiprazol de acuerdo con la presente invención se proporcionan en la sección siguiente titulada "Inmunoensayos".
Se proporciona además un método de inmunoensayo competitivo para detectar aripiprazol en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención, y con aripiprazol o un compañero de enlace competitivo de aripiprazol, en donde uno del anticuerpo y el aripiprazol o compañero de enlace competitivo del mismo está marcado con un marcador detectable, y en donde el aripiprazol de la muestra compite con el aripiprazol o el compañero de enlace competitivo del mismo por el enlace con el anticuerpo; y (ii) detectar el marcador para detectar el aripiprazol de la muestra. Detalles adicionales del método de inmunoensayo competitivo para detectar aripiprazol de acuerdo con la presente invención se proporcionan en la sección siguiente titulada "Inmunoensayos".
En una realización preferida de la presente invención, la detección de aripiprazol se acompaña por la detección de uno o más analitos además del aripiprazol. Preferiblemente, el uno o más analitos son fármacos antipsicóticos distintos de aripiprazol, y más preferiblemente los fármacos antipsicóticos distintos de aripiprazol se seleccionan del grupo que consiste de: risperidona, paliperidona, quetiapina, olanzapina y metabolitos de los mismos.
Como se ha tratado con anterioridad, los anticuerpos de la presente invención pueden usarse en ensayos para detectar la presencia y/o cantidad del fármaco antipsicótico en muestras de pacientes. Dicha detección permite la monitorización de fármacos terapéutica permitiendo todos los beneficios de la misma. La detección de niveles de fármacos antipsicóticos puede ser útil para muchos propósitos, cada uno de los cuales representa otra realización de la presente invención, incluyendo: determinación del cumplimiento del paciente o cumplimiento con la terapia prescrita; uso como una herramienta de decisión para determinar si un paciente debe convertirse de un régimen antipsicótico oral a un régimen antipsicótico inyectable de acción prolongada; uso como una herramienta de decisión para determinar si el nivel de dosis o intervalo de dosificación de antipsicóticos orales o inyectables debe aumentarse o disminuirse para garantizar la consecución o mantenimiento de niveles de fármacos eficaces o seguros; uso como una ayuda en el inicio de la terapia con fármacos antipsicóticos proporcionando evidencias de la consecución de niveles de pK mínimos; uso para determinar la bioequivalencia del fármaco antipsicótico en formulaciones múltiples o de múltiples fuentes; uso para evaluar el impacto de la polifarmacia y las interacciones fármaco-fármaco potenciales; y uso como una indicación de que un paciente debe ser excluido o incluido en un ensayo clínico y como una ayuda en la monitorización posterior del cumplimiento de los requisitos de medicación del ensayo clínico.
ANTICUERPOS
La presente invención proporciona un anticuerpo aislado que enlaza con aripiprazol. El término "anticuerpo" se refiere a una proteína específica capaz de enlazar con un antígeno o una porción del mismo (de acuerdo con esta invención, capaz de enlazar con un fármaco antipsicótico o metabolito del mismo). Un anticuerpo se produce en respuesta a un inmunógeno que puede haberse introducido en un huésped, por ejemplo, un animal o un humano, mediante inyección. El término genérico "anticuerpo" incluye anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales y fragmentos de anticuerpos.
"Anticuerpo" o "fragmento de anticuerpo que enlaza con un antígeno" se refiere a un anticuerpo intacto, o un fragmento del mismo, que compite con el anticuerpo intacto por el enlace. En términos generales, se dice que un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que enlaza con un antígeno enlaza específicamente con un antígeno cuando la constante de disociación es menor que o igual a 1 pM, preferiblemente menor que o igual a 100 nM y lo más preferible menor que o igual a 10 nM. El enlace puede medirse mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica, un ejemplo siendo el uso de un instrumento BIAcore™.
Los anticuerpos se componen de dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras. Cada cadena pesada tiene un dominio o región variable (Vh) seguido de un dominio o región constante (Ch1), una región de bisagra y dos dominios o regiones constantes más (Ch2 y Ch3). Cada cadena ligera tiene un dominio o región variable (Vl) y un dominio o región constante (Cl) Los dominios o regiones variables de las cadenas pesada y ligera forman el paratopo del anticuerpo (una estructura análoga a una cerradura), que es específica para un epítopo particular (análogamente similar a una llave), permitiendo que el paratopo y el epítopo enlacen entre sí con precisión. Dentro del dominio variable, los giros variables de las cadenas p, tres cada en las cadenas ligera y pesada, son responsables del enlace con el antígeno. Estos giros se denominan regiones determinantes de complementariedad (c Dr , concretamente, CDR1, CDR2 y CDR3).
Los fragmentos de anticuerpos comprenden una porción de un anticuerpo intacto, preferiblemente la región de enlace con el antígeno o variable del anticuerpo intacto. Los fragmentos de enlace incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv; diacuerpos; minicuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpos de cadena sencilla (por ejemplo, scFV); y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. Se entiende que un anticuerpo distinto de un anticuerpo "biespecífico" o "bifuncional" tiene cada uno de sus sitios de enlace idénticos.
Como se usa en la presente, "epítopo" incluye cualquier determinante de proteínas capaz de enlazar específicamente con una inmunoglobulina o receptor de células T. Los determinantes epitópicos consisten habitualmente de agrupaciones superficiales químicamente activas de moléculas como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar y habitualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Se dice que dos anticuerpos "enlazan con el mismo epítopo" ("compiten") si se muestra que un anticuerpo compite con el segundo anticuerpo en un ensayo de enlace competitivo, por cualquiera de los métodos bien conocidos por los expertos en la técnica (como el método BIAcore™ referido anteriormente). En referencia a un hapteno (como aripiprazol u otro fármaco antipsicótico), se puede generar un anticuerpo contra la molécula de hapteno no antigénica conjugando el hapteno con un portador inmunogénico. Luego se genera un anticuerpo que reconoce un "epítopo" definido por el hapteno.
"Aislado" cuando se usa en el contexto de un anticuerpo significa alterado "por la mano del hombre" de cualquier estado natural; es decir, que, si es de origen natural, ha sido cambiado o eliminado de su entorno original, o ambos. Por ejemplo, un anticuerpo de origen natural presente de manera natural en un animal vivo en su estado natural no está "aislado", pero el mismo anticuerpo separado de los materiales coexistentes de su estado natural está "aislado", como se emplea el término en la presente. Los anticuerpos pueden aparecer en una composición, como un reactivo de inmunoensayo, que no son composiciones de origen natural, y en la misma permanecen anticuerpos aislados dentro del significado del término tal como se emplea en la presente.
"Reactividad cruzada" se refiere a la reacción de un anticuerpo con un antígeno que no se usó para inducir ese anticuerpo.
Preferiblemente, el anticuerpo de la presente invención enlazará con el fármaco y con cualquier metabolito farmacológicamente activo deseado. Alterando la localización de la unión de un portador inmunogénico en un conjugado de fármacos, pueden diseñarse en los anticuerpos la selectividad y la reactividad cruzada con metabolitos. Para el aripiprazol, puede ser deseable la reactividad cruzada con deshidroaripiprazol. Se pueden generar anticuerpos que detectan tanto aripiprazol como deshidroaripiprazol, o pueden generarse anticuerpos que detectan cada uno por separado (definiendo de este modo las propiedades de "enlace específico" del anticuerpo). Un anticuerpo enlaza específicamente con uno o más compuestos cuando su enlace con el uno o más compuestos es equimolar o sustancialmente equimolar.
Los anticuerpos de la presente se describen mediante las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de sus dominios variables. Cada uno se generó inoculando un huésped con un conjugado que comprendía un fármaco antipsicótico conjugado con un portador inmunogénico. Habiendo proporcionado ahora las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de los mismos, los anticuerpos pueden producirse por métodos recombinantes como los descritos en la Patente U.S. N° 4.166.452.
Se pueden generar también fragmentos de anticuerpos que contienen sitios de enlace específicos para el fármaco antipsicótico. Dichos fragmentos incluyen, pero no están limitados a, los fragmentos F(ab')2 que pueden producirse mediante digestión con pepsina de la molécula de anticuerpo y los fragmentos Fab que pueden generarse reduciendo los puentes disulfuro de los fragmentos F(ab')2 . Alternativamente, pueden construirse bibliotecas de expresión Fab para permitir la identificación rápida y fácil de fragmentos Fab monoclonales con la especificidad deseada (Huse et al., Science 256:1270-1281 (1989)). Los fragmentos de anticuerpos Fab, Fv y ScFv pueden todos expresarse en y secretarse de Escherichia coli, lo que permite la producción de grandes cantidades de estos fragmentos. Alternativamente, los fragmentos Fab'-SH pueden recuperarse directamente de E. coli y acoplarse químicamente para formar fragmentos F(ab')2 (Carter et al., BioTechnology 10:163 - 167 (1992)). Los expertos en la técnica conocen otras técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpos. También se prevén fragmentos Fv de cadena sencilla (scFv) (ver las Patentes U.S. N° 5.761.894 y N° 5.587.458). Los fragmentos Fv y sFv son las únicas especies con sitios de combinación intactos que están desprovistos de regiones constantes; por tanto, es probable que muestren un enlace no específico reducido. El fragmento de anticuerpo también puede ser un "anticuerpo lineal", por ejemplo, como se describe en la Patente U.S. N° 5.642.870, por ejemplo. Tales fragmentos de anticuerpos lineales pueden ser monoespecíficos o biespecíficos.
KITS Y DISPOSITIVOS DE ENSAYO
También se puede proporcionar un kit de ensayo (también referido como kit reactivo) que comprende un anticuerpo como se ha descrito con anterioridad. Un kit de reactivo representativo puede comprender un anticuerpo que enlaza con el fármaco antipsicótico, aripiprazol, un complejo que comprende un análogo de un fármaco antipsicótico o un derivado de los mismos acoplado a una fracción de marcador, y opcionalmente también puede comprender uno o más calibradores que comprenden una cantidad conocida de un fármaco antipsicótico o un estándar relacionado.
La frase "kit de ensayo" se refiere a un conjunto de materiales y reactivos que se usa para realizar un ensayo. Los reactivos pueden proporcionarse en combinación empaquetada en el mismo recipiente o en recipientes separados, dependiendo de sus reactividades cruzadas y estabilidades, y en forma líquida o liofilizada. Las cantidades y proporciones de reactivos proporcionados en el kit pueden seleccionarse para proporcionar resultados óptimos para una aplicación particular. Un kit de ensayo que incorpora características de la presente invención comprende anticuerpos que enlazan con aripiprazol. El kit puede comprender además compañeros de enlace competitivos de aripiprazol y materiales de calibración y control.
La frase "material de calibración y control" se refiere a cualquier material estándar o de referencia que contiene una cantidad conocida de un analito. Una muestra que se sospecha contiene un analito y el material de calibración correspondiente se ensayan bajo condiciones similares. La concentración de analito se calcula comparando los resultados obtenidos para el espécimen desconocido con los resultados obtenidos para el estándar. Esto se hace comúnmente construyendo una curva de calibración.
Los anticuerpos que incorporan las características de la presente invención pueden incluirse en un kit, recipiente, paquete o dispensador junto con instrucciones para su utilización. Cuando los anticuerpos se suministran en un kit, los diferentes componentes del inmunoensayo pueden envasarse en recipientes separados y mezclarse antes del uso. Dicho envasado de los componentes por separado puede permitir el almacenamiento a largo plazo sin disminuir sustancialmente el funcionamiento de los componentes activos. Además, los reactivos pueden envasarse en entornos inertes, por ejemplo, bajo una presión positiva de gas nitrógeno, gas argón o similar, que se prefiere especialmente para reactivos que son sensibles al aire y/o a la humedad.
Los reactivos incluidos en kits que incorporan características de la presente invención pueden suministrarse en todo tipo de recipientes de manera que las actividades de los diferentes componentes se conserven sustancialmente mientras que los componentes mismos no se adsorben o alteran sustancialmente por los materiales del recipiente. Los recipientes adecuados incluyen, pero no están limitados a, ampollas, botellas, tubos de ensayo, viales, matraces, jeringuillas, sobres, por ejemplo, forrados con papel de aluminio, y similares. Los recipientes pueden estar compuestos de cualquier material adecuado incluyendo, pero no limitado a, vidrio, polímeros orgánicos, por ejemplo, policarbonato, poliestireno, polietileno, etc., cerámica, metal, por ejemplo, aluminio, aleaciones de metales, por ejemplo, acero, corcho y similares. Adicionalmente, los recipientes pueden comprender uno o más puertos de acceso estériles, por ejemplo, para acceder a través de una aguja, como puede proporcionarse mediante un tabique. Los materiales preferidos para los tabiques incluyen caucho y politetrafluoroetileno del tipo vendido con el nombre comercial TEFLON por DuPont (Wilmington, DE). Adicionalmente, los recipientes pueden comprender dos o más compartimentos separados por divisiones o membranas que pueden retirarse para permitir el mezclado de los componentes.
Los kits de reactivos que incorporan las características de la presente invención también pueden suministrarse con materiales de instrucción. Las instrucciones pueden estar impresas, por ejemplo, en papel y/o pueden suministrarse en un medio de lectura electrónica. Alternativamente, las instrucciones se pueden proporcionar dirigiendo a un usuario a una página web de Internet, por ejemplo, especificada por el fabricante o distribuidor del kit y/o por correo electrónico.
El anticuerpo también puede proporcionarse como parte de un dispositivo de ensayo. Tales dispositivos de ensayo incluyen dispositivos de ensayo de flujo lateral. Un tipo común de dispositivo de ensayo de flujo lateral desechable incluye una zona o área para recibir la muestra líquida, una zona conjugada y una zona de reacción. Estos dispositivos de ensayo se conocen comúnmente como tiras de prueba de flujo lateral. Emplean un material poroso, por ejemplo, nitrocelulosa, que define una trayectoria para el flujo de fluido capaz de soportar el flujo capilar. Los ejemplos incluyen los mostrados en las Patentes U.S. N° 5.559.041,5.714.389, 5.120.643, y 6.228.660.
Otro tipo de dispositivo de ensayo es un dispositivo de ensayo no poroso que tiene proyecciones para inducir el flujo capilar. Ejemplos de tales dispositivos de ensayo incluyen el dispositivo de flujo lateral abierto como se divulga en las Publicaciones Internacionales de PCT N° WO 2003/103835, WO 2005/089082, WO 2005/118139, y WO 2006/137785.
En un dispositivo de ensayo no poroso, el dispositivo de ensayo generalmente tiene por lo menos una zona de adición de muestras, por lo menos una zona conjugada, por lo menos una zona de reacción y por lo menos una zona de drenaje. Las zonas forman una trayectoria de flujo por la cual fluye la muestra desde la zona de adición de muestras a la zona de drenaje. También se incluyen elementos de captura, como anticuerpos, en la zona de reacción, capaces de enlazar con el analito, opcionalmente depositados en el dispositivo (como por recubrimiento); y un material conjugado marcado capaz también de participar en reacciones que permitirán la determinación de la concentración del analito, depositado en el dispositivo en la zona conjugada, en donde el material conjugado marcado lleva un marcador para su detección en la zona de reacción. El material conjugado se disuelve a medida que la muestra fluye a través de la zona conjugada formando un penacho conjugado de material conjugado marcado disuelto y muestra que fluye corriente abajo a la zona de reacción. A medida que el penacho conjugado fluye a la zona de reacción, el material conjugado será capturado por los elementos de captura, como a través de un complejo de material conjugado y analito (como en un ensayo "sándwich") o directamente (como en un ensayo "competitivo"). El material conjugado disuelto no enlazado se barrerá pasada la zona de reacción en la por lo menos una zona de drenaje. Dichos dispositivos pueden incluir proyecciones o micropilares en la trayectoria del flujo.
Un instrumento como el divulgado en las Publicaciones de Patente US N° US20060289787A1 y US 20070231883A1 y la Patentes US N° 7.416.700 y 6.139.800, es capaz de detectar el material conjugado enlazado en la zona de reacción. Los marcadores comunes incluyen colorantes fluorescentes que pueden detectarse mediante instrumentos que excitan los colorantes fluorescentes e incorporan un detector capaz de detectar los colorantes fluorescentes.
INMUNOENSAYOS
Los anticuerpos así producidos pueden usarse en inmunoensayos para reconocer/enlazar con el fármaco antipsicótico, detectando de este modo la presencia y/o cantidad del fármaco en una muestra del paciente. Preferiblemente, el formato de ensayo es un formato de inmunoensayo competitivo. Dicho formato de ensayo y otros ensayos se describen, entre otros sitios, en Hampton et al. (Serological Methods, A Laboratory Manual, APS Press, St. Paul, MN 1990) y Maddox et al. (J. Exp. Med. 158:12111, 1983).
El término "analito" se refiere a cualquier sustancia o grupo de sustancias, cuya presencia o cantidad se debe determinar. Los analitos de fármacos antipsicóticos representativos incluyen, pero no están limitados a, risperidona, paliperidona, olanzapina, aripiprazol y quetiapina.
El término "compañero de enlace competitivo" se refiere a una sustancia o grupo de sustancias, como las que se pueden emplear en un inmunoensayo competitivo, que se comportan de manera similar a un analito con respecto a la afinidad de enlace con un anticuerpo. Los compañeros de enlace competitivos representativos incluyen, pero no están limitados a, derivados de fármacos antipsicóticos y similares.
El término "detectar" cuando se usa con un analito se refiere a cualquier método cuantitativo, semicuantitativo o cualitativo, así como a todos los demás métodos para determinar un analito en general, y un fármaco antipsicótico en particular. Por ejemplo, un método que simplemente detecta la presencia o ausencia de un fármaco antipsicótico en una muestra se encuentra dentro del alcance de la presente invención, al igual que los métodos que proporcionan datos sobre la cantidad o concentración del fármaco antipsicótico en la muestra. Los términos "detectar", "determinar", "identificar" y similares se usan como sinónimos en la presente, y todos se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
Una realización preferida de la presente invención es un inmunoensayo competitivo en donde los anticuerpos que enlazan con el fármaco antipsicótico, o el fármaco o compañero de enlace competitivo del mismo, se unen a un soporte sólido (como la zona de reacción en un dispositivo de ensayo de flujo lateral) y el fármaco marcado o el compañero de enlace competitivo del mismo, o el anticuerpo marcado, respectivamente, y una muestra derivada del huésped no humano se pasan sobre el soporte sólido y la cantidad de marcador detectada unida al soporte sólido puede correlacionarse con una cantidad de fármaco en la muestra.
Puede analizarse cualquier muestra que sea sospechosa de contener un analito, por ejemplo, un fármaco antipsicótico, de acuerdo con los métodos de las realizaciones actualmente preferidas. La muestra puede pretratarse si se desea y puede prepararse en cualquier medio conveniente que no interfiera con el ensayo. Preferiblemente, la muestra comprende un medio acuoso como un fluido corporal de un huésped no humano, más preferiblemente plasma o suero.
Debe entenderse que se contemplan todas las maneras de inmunoensayos que emplean anticuerpos para su uso de acuerdo con las realizaciones actualmente preferidas, incluyendo ensayos en los que los anticuerpos están enlazados con fases sólidas y ensayos en los que los anticuerpos están en medios líquidos. Los métodos de inmunoensayos que pueden usarse para detectar analitos usando anticuerpos producidos por el método de la invención incluyen, pero no están limitados a, ensayos competitivos (reactivos limitados) en donde el analito marcado (analito análogo) y el analito en una muestra compiten por anticuerpos y ensayos inmunométricos de sitios individuales en donde el anticuerpo está marcado; y similares.
Todos los ejemplos se llevaron a cabo usando técnicas estándar, que son bien conocidas y rutinarias para los expertos en la técnica, excepto donde se describe lo contrario en detalle. Las técnicas de biología molecular rutinarias de los siguientes ejemplos pueden llevarse a cabo como se describe en manuales de laboratorio estándar, como Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a Edición, Cold Spring Habor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989).
EJEMPLO 1
Anticuerpos para Aripiprazol
Anticuerpo 17.3 clon 3D7
El hibridoma designado 17.3 clon 3D7 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se designa 17.3 clon 3D7. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 17.3 clon 3D7 se designa SEQ ID NO:41 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:42. Dentro de la Vl de mAb 17.3 clon de 3D7, los nucleótidos 136-165 de la SEQ ID NO: 41 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 211-231 de la SEQ ID NO:41 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 328-354 de la SEQ ID NO:41 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 17.3 clon 3D7, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:42 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:42 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-375 de la SEQ ID NO:42 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 17.3 clon 3D7, y se designaron SEQ ID NO:43 (cadena ligera) y SEQ ID NO:44 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 17.3 clon 3D7, los residuos de aminoácidos 46-55 de la SEQ ID NO:43 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 71-77 de la SEQ ID NO:43 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 110-118 de la SEQ ID NO: 43 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 17.3 clon 3D7, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 44 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:44 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-125 de la SEQ ID NO: 44 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (primero)
El hibridoma designado 17.3 clon 5C7 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se designa 17.3 clon 5C7 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 17.3 clon 5C7 (primera) se designa SEQ ID NO:45 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:46. Dentro de la Vl de mAb 17.3 clon 5C7 (primero) , los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO:45 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208­ 228 de la SEQ ID NO:45 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO:45 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 46 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 46 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-378 de la SEQ ID NO:46 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 17.3 clon 5C7 (primero), y se designaron SEQ ID NO:47 (cadena ligera) y SEQ ID NO:48 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO:47 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO:47 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 47 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 48 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:48 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-126 de la SEQ ID NO: 48 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (segundo)
El hibridoma designado 17.3 clon 5C7 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se designa 17.3 clon 5C7 (segundo). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 17.3 clon 5C7 (segundo) se designa SEQ ID NO: 49 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:50. Dentro de la Vl de mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los nucleótidos 130-174 de la SEQ ID NO:49 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de la SEQ ID NO:49 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de la SEQ ID NO:49 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:50 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:50 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-390 de la SEQ ID NO:50 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), y se designaron SEQ ID NO:51 (cadena ligera) y SEQ ID NO:52 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los residuos de aminoácidos 44-58 de la SEQ ID NO:51 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de la SEQ ID NO:51 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de la SEQ ID NO: 51 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH de mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 52 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:52 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-130 de la SEQ ID NO: 52 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (tercero)
El hibridoma designado 17.3 clon 5C7 (tercero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se designa con 17.3 clon 5C7 (tercero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (VL) de mAb 17.3 clon 5C7 (tercero) se designa SEQ ID NO:53 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:54. Dentro de la Vl mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los nucleótidos 130­ 162 de la SEQ ID NO:53 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 53 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO:53 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:54 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 54 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO:54 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), y se designaron SEQ ID NO:55 (cadena ligera) y SEQ ID NO:56 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO:55 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO:55 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 55 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 56 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:56 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de la SEQ ID NO: 56 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
EJEMPLO 2
Anticuerpos para Olanzapina
Anticuerpo 11.1 clon 35
El hibridoma designado 11.1 clon 35 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa 11.1 clon 35. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 11.1 clon 35 se designa SEQ ID NO:9 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:10. Dentro de la Vl de mAb 11.1 clon 35, los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO:9 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO:9 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO:9 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro la VH de mAb 11.1 clon 35, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:10 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:10 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO:10 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 11.1 clon 35, y se designaron SEQ ID NO:11 (cadena ligera) y SEQ ID NO:12 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 11.1 clon 35), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO:11 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO:11 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 11 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 11.1 clon 35, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 12 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:12 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118­ 122 de la SEQ ID NO: 12 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 11.1 clon 61
El hibridoma designado 11.1 clon 61 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa 11.1 clon 61. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 11.1 clon 61 se designa SEQ ID NO:13 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:14. Dentro de la Vl de mAb 11.1 clon 61 , los nucleótidos 130-162 de la SEQ iD NO:13 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO:13 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO:13 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 11.1 clon 61 los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:14 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:14 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO: 14 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 11.1 clon 61, y se designaron SEQ ID NO:15 (cadena ligera) y SEQ ID NO:16 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 11.1 clon 61), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO:15 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO:15 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO:15 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 11.1 clon 61, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 16 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:16 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118­ 122 de la SEQ ID NO: 16 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 15.5 clon 3F11 (primero)
El hibridoma designado 15.5 clon 3F11 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa con 15.5 clon 3F11 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 15.5 clon 3F11 (primero) se designa SEQ ID NO: 29 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:30. Dentro de la Vl de mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO:29 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 29 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO: 29 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO:30 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-252 de la SEQ ID NO:30 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 355-381 de la SEQ ID NO:30 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 15.5 clon 3F11 (primero), y se designaron SEQ ID NO:31 (cadena ligera) y SEQ ID NO:32 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO:31 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO:31 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO:31 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 32 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-84 de la SEQ ID NO:32 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 119-127 de la SEQ ID NO:32 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 15.5 clon 3F11 (segundo)
El hibridoma designado 15.5 clon 3F11 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa 15.5 clon 3F11 (segundo). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 15.5 clon 3F11 (segundo) se designa SEQ ID NO:33 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:34. Dentro de la Vl de mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO:33 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO:33 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO:33 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:34 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-261 de la SEQ ID NO:34 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 358-381 de la SEQ ID NO:34 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), y se designaron SEQ ID NO:35 (cadena ligera) y SEQ ID NO:36 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO:35 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO:35 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO:35 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los residuos de aminoácidos 45­ 54 de la SEQ ID NO:36 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-87 de la SEQ ID NO:36 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 120-127 de la SEQ ID NO:36 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 15.5 sub-clon 4G9-1
El hibridoma designado 15.5 sub-clon 4G9-1 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa 15.5 sub-clon 4G9-1. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 15.5 sub-clon 4G9-1 se designa SEQ ID NO:37 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:38. Dentro de la Vl de mAb 15.5 sub-clon 4G9-1, los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO:37 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208­ 228 de la SEQ ID NO:37 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO:37 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 15.5 sub-clon 4G9-1, los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO:38 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-252 de la SEQ ID NO:38 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 358-381 de la SEQ ID NO:38 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 15.5 sub-clon 4G9-1, y se designaron SEQ ID NO:39 (cadena ligera) y SEQ ID NO:40 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 15.5 sub-clon 4G9-1, los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO:39 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO:39 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO:39 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 15.5 sub-clon 4G9-1, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO:40 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-84 de la SEQ ID NO:40 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 120-127 de la SEQ ID NO:40 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
EJEMPLO 3
Anticuerpos para Quetiapina
Anticuerpo 13.2 sub-clon 89-3 (primero)
El hibridoma designado 13.2 sub-clon 89-3 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se designa 13.2 sub-clon 89-3 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (primero) se designa SEQ ID NO:17 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:18. Dentro de la Vl mAb 13.2 sub-clon 89-3 (primero), los nucleótidos 127-174 de la SEQ ID NO:17 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de la SEQ ID NO:17 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de la SEQ ID NO: 17 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (primero), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:18 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:18 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-387 de la SEQ ID NO:18 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (primero), y se designaron SEQ ID NO:19 (cadena ligera) y SEQ ID NO:20 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb13.2 sub-clon 89-3 (primero), los residuos de aminoácidos 43-58 de la SEQ ID NO:19 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de la SEQ ID NO:19 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de la SEQ ID NO:19 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (primero), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO:20 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:20 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-129 de la SEQ ID NO:20 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 13.2 sub-clon 89-3 (segundo)
El hibridoma designado como 13.2 sub-clon 89-3 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se designa 13.2 sub-clon 89-3 (segundo). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (segundo) se designa SEQ ID NO:21 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:22. Dentro de la Vl de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (segundo), los nucleótidos 127-174 de la SEQ ID NO:21 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de la SEQ ID NO:21 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de la SEQ ID NO:21 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vl de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (segundo) , los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:22 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:22 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 367-387 de la SEQ ID NO: 22 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (segundo), y se designaron SEQ ID NO:23 (cadena ligera) y SEQ ID NO:24 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb13.2 sub-clon 89-3 (segundo), los residuos de aminoácidos 43-58 de la SEQ ID NO:23 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de la SEQ ID NO:23 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de la SEQ ID NO:23 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 13.2 sub-clon 89-3 (segundo), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO:24 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:24 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 123-129 de la SEQ ID NO:24 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 13.2 sub-clon 89-5
El hibridoma designado como 13.2 sub-clon 89-5 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se designa 13.2 sub-clon 89-5. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) de mAb 13.2 sub-clon 89-5 se designa SEQ ID NO: 25 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:26. Dentro de la Vl de mAb 13.2 sub-clon de 89-5 , los nucleótidos 127-174 de la SEQ ID NO:25 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220­ 240 de la SEQ ID NO:25 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de la SEQ ID NO:25 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 13.2 sub-clon 89-5, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:26 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:26 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 367-387 de la SEQ ID NO:26 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 13.2 sub-clon 89-5, y se designaron SEQ ID NO:27 (cadena ligera) y SEQ ID NO:28 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb13.2 sub-clon 89-5, los residuos de aminoácidos 43-58 de la SEQ ID NO:27 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de la SEQ ID NO:27 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de la SEQ ID NO:27 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 13.2 sub-clon 89-5, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO:28 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:28 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 123-129 de la SEQ ID NO:28 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
EJEMPLO 4
Anticuerpos para Risperidona/Paliperidona
Anticuerpo 5_9
El hibridoma designado 5_9 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la risperidona (y su metabolito paliperidona). El anticuerpo se designa 5-9. La secuencia de nucleótidos de la cadena ligera de la región variable (Vl) de mAb 5-9 se designa SEQ ID NO:1 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:2. Dentro de la Vl de mAb 5-9, los nucleótidos 130-180 de la SEQ ID NO:1 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 226-246 de la SEQ ID NO:1 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 343-369 de la SEQ ID NO:1 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 5-9, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:2 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:2 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO: 2 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 5-9, y se designaron SEQ ID NO:3 (cadena ligera) y SEQ ID NO:4 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb5-9, los residuos de aminoácidos 44-60 de la SEQ ID NO:3 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 76-82 de la SEQ ID NO:3 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 115-123 de la SEQ ID NO:3 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 5-9, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO:4 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:4 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de la SEQ ID NO:4 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 5_5
El hibridoma designado 5_5 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la risperidona (y su metabolito paliperidona). El anticuerpo se designa 5-5. La secuencia de nucleótidos de la cadena ligera de la región variable (Vl) de mAb 5-5 se designa SEQ ID NO:5 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO:6. Dentro de la Vl de mAb 5-5, los nucleótidos 130-180 de la SEQ ID NO:5 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 226-246 de la SEQ ID NO:5 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 343-369 de la SEQ ID NO:5 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 5-9, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO:6 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO:6 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO: 6 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos previstas correspondientes de las regiones de la cadena variable de mAb 5-5, y se designaron SEQ ID NO:7 (cadena ligera) y SEQ ID NO:8 (cadena pesada). Dentro de la Vl de mAb 5-5, los residuos de aminoácidos 44-60 de la SEQ ID NO:7 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 76-82 de la SEQ ID NO:7 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 115-123 de la SEQ ID NO:7 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh de mAb 5-5, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO:8 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO:8 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de la SEQ ID NO:8 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
EJEMPLO 5
Inmunoensayos Competitivos para Aripiprazol e Inmunoensayo Competitivo Multiplex para Aripiprazol, Olanzapina, Quetiapina y Risperidona/Paliperidona
Después de una serie de inmunizaciones con un inmunógeno de aripiprazol, se probaron las extracciones de sangre de cola de ratón para reactividad usando ELISA. También se probaron los sobrenadantes de hibridoma, y los datos de ELISA mostrados en la Tabla 1 siguiente muestran la reactividad de varios hibridomas (el compañero de fusión eran células NSO).
Tabla 1
Figure imgf000017_0001
El sobrenadante se analizó luego mediante ELISA de competición para determinar si la señal era específica para o el aripiprazol o el dehidroaripiprazol. Las Figs. 1 y 2 muestran los resultados de dos hibridomas representativos, 3C1 y 3D7. Los datos muestran reactividad para tanto el aripiprazol como el dehidroaripiprazol.
La Fig. 3 muestra el formato de inmunoensayo competitivo usado en un dispositivo de ensayo de flujo lateral en el que el anticuerpo de captura, el clon de aripiprazol 5C7, se depositó en un chip junto con un conjugado de detección que consiste de aripiprazol conjugado con un fluoróforo. En este formato competitivo como se muestra en la Fig. 3, un nivel bajo de analito (aripiprazol) da como resultado una señal alta, mientras que un nivel alto de analito (aripiprazol) da como resultado una señal baja.
La Fig. 4 muestra el diseño de chip de un dispositivo de ensayo de flujo lateral de acuerdo con una realización de la presente invención. El dispositivo incluye una zona o área para recibir la muestra, una zona conjugada (que contiene compañero(s) de enlace competitivo deseado) y una zona de reacción (se indican ocho áreas dentro de la zona de reacción, cada área puede contener un anticuerpo deseado separado). La muestra fluye desde la zona de muestra a través de la zona conjugada y a la zona de reacción.
Las Figs. 5-8 muestran curvas de respuesta a dosis típicas para un control positivo de aripiprazol (muestra que contiene aripiprazol) generado con el anticuerpo 5C7 depositado en la zona de reacción 2 y un compañero de enlace competitivo de aripiprazol marcado en la zona conjugada (Fig. 5), un control positivo de olanzapina (muestra que contiene olanzapina) generado con el anticuerpo 4G9-1 depositado en la zona de reacción 4 y un compañero de enlace competitivo marcado con olanzapina en la zona conjugada (Fig. 6), un control positivo de quetiapina (muestra que contiene quetiapina) generado con el anticuerpo 11 depositado en la zona de reacción 6 y un compañero de enlace competitivo de quetiapina marcado en la zona conjugada (Fig. 7) y un control positivo de risperidona (muestra que contiene risperidona) generado con el anticuerpo 5-9 depositado en la zona de reacción 8 y un compañero de enlace competitivo de risperidona marcado en la zona conjugada (Fig. 8). Los compañeros de enlace competitivos marcados en la zona conjugada compiten con los fármacos presentes en las muestras por el enlace con los anticuerpos.
Para confirmar que los conjugados de los compañeros de enlace competitivos marcados no enlazan con los anticuerpos depositados en las zonas de reacción, se realizaron controles negativos usando muestras que no contienen fármacos. Con referencia a la Tabla 2, una muestra que no contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada, pero no aripiprazol marcado) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2. La Tabla 2 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a las dosis y los conjugados de olanzapina, quetiapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no enlazan con el anticuerpo de aripiprazol.
Tabla 2
Aripiprazol-Clon 5C7-Modelo Matemático 1 (0 ng/ml Conc.)
Zona de Posición Area Pico Altura Pico Fondo
Ensa o-MM n Reacción Leida Media Media Medio
Figure imgf000018_0002
En referencia a la Tabla 3, se deposita una muestra que no contiene olanzapina en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, quetiapina marcada, y risperidona marcada, pero no olanzapina marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4. La Tabla 3 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis y los conjugados de aripiprazol, quetiapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no enlazan con el anticuerpo de olanzapina.
Tabla 3
OLAN-Clon 4G9-1-Modelo Matemático 1 (Ong/ml Conc )
Zona de Posición Area Pico Altura Pico Fondo
Ensa o-MM Con Reacción Leida Media Media Medio
Figure imgf000018_0003
ros on ju ga os no enazan c,on anzapna
En referencia a la Tabla 4, se deposita una muestra que no contiene quetiapina en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, y risperidona marcada, pero no quetiapina marcada) y al zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6. La Tabla 4 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis y los conjugados de aripiprazol, olanzapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no enlazan con el anticuerpo de quetiapina.
Tabla 4
Quetiapina-Clon 11-Mocelo Matemático 1 (0 ng/ml Conc )
Zona de Posición Area Pico Altura Pico Fondo
En -MM n R i n L i M i Media Medio
Figure imgf000018_0001
Otros Conjugados no enlazan con Quetiapina ¡
En referencia a la Tabla 5, se deposita una muestra que no contiene risperidona en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, y quetiapina marcada, pero no risperidona marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 5 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis y los conjugados de aripiprazol, olanzapina y quetiapina que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no enlazan con el anticuerpo de risperidona.
Tabla 5
Risperidona-Clon 5-9-Modelo Matemático 1 (0 ng/ml Conc.)
Zona de Posición Area Pico Altura Pico Fondo
En -MM R i n Leida M i M i M i
Figure imgf000019_0004
Otros Conjugados no enlazan con Risperidona ||§
Para confirmar que los conjugados de los compañeros de enlace competitivo marcados enlazan sólo con sus anticuerpos respectivos depositados en las zonas de reacción, se llevaron a cabo controles negativos adicionales usando de nuevo muestras que no contienen fármacos. En referencia a la Tabla 6, una muestra que no contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo aripiprazol marcado) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 6 siguiente muestra los resultados, confirmando que no existe una respuesta a la dosis, excepto para el anticuerpo 5C7 de aripiprazol (en la zona de reacción 2).
Tabla 6
Aripiprazol-Clon 5C7-Modelo Matemático 1 (0 ng/ml Conc.)
Area Altura
Ensayo- Zona de Posición Pico Pico Fondo
MM Con Reacción Leida Media Media Medio
Figure imgf000019_0002
Soló enlaza la Zona de Reacción de Aripiprazol
En referencia a la Tabla 7, una muestra que no contiene olanzapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona del conjugado (esta vez conteniendo olanzapina marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en reacción zona 8. La tabla 7 siguiente muestra los resultados, confirmando que no existe una respuesta a la dosis, excepto para el anticuerpo de olanzapina 4G9-1 (en la zona de reacción 4).
Tabla 7
OLAN-Clon 4G9-1 -Modelo Matemático 1 (0 ng/ml Conc.)
Area Altura
Ensayo- Zona de Posición Pico Pico Fondo
MM Reacción L i M i Media Medio
Figure imgf000019_0003
Sólo enlaza la Zona de Reacción de Olanzapi
Figure imgf000019_0001
En referencia a la Tabla 8, se deposita una muestra que no contiene quetiapina en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo quetiapina marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en reacción zona 8. La Tabla 8 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis excepto para el anticuerpo de quetiapina 11 (en la zona de reacción 6).
Tabla 8
Quetiapina-Clon 11-Modelo Matemático 1 (0 ng/ml Cono.)
Area Altura
Ensayo- Zona de Posición Pico Pico Fondo
MM n Reacción Leida M i Media Medio
Figure imgf000020_0002
o enaza a ona e eacc n e ue apna
Figure imgf000020_0001
En referencia a la Tabla 9, se deposita una muestra que no contiene risperidona en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo risperidona marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 9 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis excepto para el anticuerpo de risperidona 5-9 (en la zona de reacción 8).
Tabla 9
Risperidona-Clon 5-9-Modelo Matemático 1 (0 ng/ml Cono.)
Area Altura
Ensayo- Zona de Posición Pico Pico Fondo
MM Con Reacción Leida Media Media Medio
Figure imgf000020_0003
Los resultados mostrados con anterioridad confirman que los conjugados de los compañeros de enlace competitivos marcados enlazan solamente con sus anticuerpos respectivos en la zona de reacción.
Las Figs. 9-12 muestran curvas de respuesta a dosis típicas en las zonas de reacción de anticuerpos específicos, y prueban la concentración baja/alta de respuesta a dosis para cada ensayo específico en presencia de otros conjugados. En la Fig. 9, una muestra que contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona del conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada, y risperidona marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2. Se generó una curva de respuesta a dosis típica como se muestra en la Fig. 9 solo para aripiprazol, y no para olanzapina, quetiapina o risperidona.
En la Fig. 10, una muestra que contiene olanzapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4. Se generó una curva de respuesta a dosis típica como se muestra en la Fig. 10 solo para olanzapina, y no para aripiprazol, quetiapina o risperidona.
En la Fig. 11, una muestra que contiene quetiapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona del conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6. Se generó una curva típica de respuesta a dosis como se muestra en la Fig. 10 solo para quetiapina, y no para aripiprazol, olanzapina o risperidona.
En la Fig. 12, una muestra que contiene risperidona se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona conjugada (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada, y risperidona marcada) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. Se generó una curva de respuesta a dosis típica como se muestra en la Fig. 12 solo para risperidona, y no para aripiprazol, olanzapina o quetiapina.
Las Figs. 13-16 muestran las curvas de respuesta a dosis típicas para cada ensayo en presencia de otros conjugados y anticuerpos. En la Fig. 13, una muestra que contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestra y

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une al aripiprazol que comprende:
a) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 46 a 55 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 71 a 77 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 110 a 118 de la SEQ ID NO: 43; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 44; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 44; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 125 de la SEQ ID NO: 44;
b) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 47; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 48; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 48; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 126 de la SEQ ID NO: 48;
c) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 58 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de la SEQ ID NO: 51; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 52; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 52; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 130 de la SEQ ID NO: 52; o
d) una secuencia de CDR1 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR2 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR3 de la cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 55; una secuencia de CDR1 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 56; una secuencia de CDR2 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 56; y una secuencia de CDR3 de la cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 56.
2. El anticuerpo o fragmento de unión del mismo de la reivindicación 1, en el que la secuencia de CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 46 a 55 de la SEQ ID NO: 43; la secuencia de CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 71 a 77 de la SEQ ID NO: 43; la secuencia de CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 110 a 118 de la SEQ ID NO: 43; la secuencia de CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 44; la secuencia de CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 44; y la secuencia de CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 125 de la SEQ ID NO: 44.
3. El anticuerpo o fragmento de unión del mismo de la reivindicación 1, en el que la secuencia de CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 47; la secuencia de CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 47; la secuencia de CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 47; la secuencia de CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 48; la secuencia de CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 48; y la secuencia de CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 126 de la SEQ ID NO: 48.
4. El anticuerpo o fragmento de unión del mismo de la reivindicación 1, en el que la secuencia de CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 58 de la SEQ ID NO: 51; la secuencia de CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de la SEQ ID NO: 51; la secuencia de CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de la SEQ ID NO: 51; la secuencia de CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 52; la secuencia de CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 52; y la secuencia de CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 130 de la SEQ ID NO: 52.
5. El anticuerpo o fragmento de unión del mismo de la reivindicación 1, en donde la secuencia de CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 55; la secuencia de CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 55; la secuencia de CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 55; la secuencia de CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO 56; la secuencia de CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 56; y la secuencia de CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 56.
6. El anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el fragmento de unión del anticuerpo se selecciona del grupo de fragmentos que consiste de los fragmentos Fv, F(ab'), F(ab')2, scFv, minicuerpo y diacuerpo.
7. El anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
8. Un kit de ensayo que comprende el anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
9. Un dispositivo de ensayo que comprende el anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, opcionalmente en donde el dispositivo es un dispositivo de ensayo de flujo lateral.
10. Un método para detectar aripiprazol en una muestra, el método comprendiendo:
(i) poner en contacto una muestra con el anticuerpo o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 marcado con un marcador detectable, en donde el anticuerpo marcado o fragmento de unión del mismo y el aripiprazol presente en la muestra forman un complejo marcado; y
(ii) detectar el complejo marcado, detectando de este modo el aripiprazol en la muestra.
11. Un método de inmunoensayo competitivo para detectar aripiprazol en una muestra, el método comprendiendo:
(i) poner en contacto una muestra con el anticuerpo o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y con aripiprazol o un compañero de unión competitivo del aripiprazol, en donde uno del anticuerpo o del fragmento de unión del mismo y el aripiprazol o compañero de unión competitivo del mismo está marcado con un marcador detectable, y en donde la muestra de aripiprazol compite con el aripiprazol o el compañero de unión competitivo del mismo para unirse al anticuerpo o fragmento de unión del mismo para formar un complejo; y
(ii) detectar la cantidad de marcador para detectar la muestra de aripiprazol.
12. El método de la reivindicación 11, en donde
(i) el aripiprazol o el compañero de unión competitivo del mismo está marcado con el marcador detectable; o (ii) el anticuerpo o fragmento de unión del mismo está marcado con un marcador detectable.
13. El método de la reivindicación 11, en donde el inmunoensayo se realiza en un dispositivo de ensayo de flujo lateral y la muestra se aplica al dispositivo.
14. El método de la reivindicación 10 u 11, que comprende además detectar la presencia de uno o más analitos además del aripiprazol, opcionalmente en donde el uno o más analitos son fármacos antipsicóticos distintos del aripiprazol, además opcionalmente en donde los fármacos antipsicóticos distintos del aripiprazol se seleccionan del grupo que consiste de: risperidona, paliperidona, quetiapina, olanzapina y metabolitos de los mismos.
15. El método de la reivindicación 10 o la reivindicación 11, que comprende además un paso de:
(i) usar la detección de aripiprazol para indicar la adherencia del paciente a la terapia de aripiprazol prescrita; (ii) usar la detección de aripiprazol para determinar si un paciente debe convertirse de un régimen de aripiprazol oral a un régimen antipsicótico inyectable;
(iii) usar la detección de aripiprazol para determinar si el nivel de dosis o el intervalo de dosificación de aripiprazol oral o inyectable debe aumentarse o disminuirse para asegurar la consecución o el mantenimiento de niveles de fármaco eficaces o seguros;
(iv) usar la detección de aripiprazol como ayuda en el inicio de la terapia con aripiprazol proporcionando evidencia de la consecución de niveles mínimos de pK;
(v) usar la detección de aripiprazol para determinar la bioequivalencia de aripiprazol en múltiples formulaciones o de múltiples fuentes;
(vi) usar la detección de aripiprazol para evaluar el impacto de la polifarmacia y las potenciales interacciones fármaco-fármaco; o
(vii) usar la detección de aripiprazol para indicar que un paciente debe ser excluido o incluido en un ensayo clínico y es una ayuda en la monitorización posterior de la adherencia a los requisitos de medicación del ensayo clínico.
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