TR201810285T4 - Yağın enzimatik zamksı maddelerinin giderilmesi için metot. - Google Patents

Abstract

Buluş, ham bitkisel yağın sulu faz içerisinde zamksı maddelerinin giderilmesine yönelik bir metot ile ilgilidir. Ayrıca ham bitkisel yağın bir fosfolipit ayıran enzimi ve bir &#945#&-Amilazı içeren bir bileşim ile temas ettirilmesi ve zamksı maddelerin ayrılması adımlarını içermekte olup, içerisinde ham bitkisel yağ bileşim ile temas ettirilmeden önce su ve/ veya asit ile temas ettirilmekte olup, fakat bileşim ile temas ettirilmeden önce sulu fazın ayrılması meydana gelmemektedir.

Description

TARIFNAME YAGIN ENZIMATIK ZAMKSI MADDELERININ GIDERILMESI içiN METOT Mevcut bulus, ham bitkisel yagin sulu faz içerisinde zamksi maddelerinin giderilmesine yönelik bir metot ile ilgili olup, ham bitkisel yagin bir fosfolipit ayiran enzimi ve bir d-Amilazi içeren bir bilesim ile temas ettirilmesi ve zamksi maddelerin ayrilmasi adimlarini içermekte olup, içerisinde ham bitkisel yag bilesim ile temas ettirilmeden önce su ve/ veya asit ile temas ettirilmekte olup, fakat bilesim ile temas ettirilmeden önce sulu fazin ayrilmasi meydana gelmemektedir.

Ham yaglar fosfatitleri, albümin ve karbon hidrat içerikli maddeleri, bitkisel zamksi maddeleri ve, yagin dayanikliligini önemli ölçüde düsüren kolloidal bilesikleri içerirler.

Bu maddelerin bu nedenle uzaklastirilmalari gerekir.

Zamksi faz - zamksi maddeler olarak burada asagidaki metinde, bir asit içerikli ve/ veya sulu çözelti ile islemden sonra yagdan agir faz olarak çökelen bu maddelerin tüm grubu anlasilir (Bokisch, M, Nahrungsfette und -öle, Handbuch der Lebensmittel- Technologie, Ulmer Verlag, 342-433).

Bitkisel yaglarin rafinasyonu olarak istenmeyen birlesik maddelerinin uzaklastirilmasi anlasilir. Kimyasal ve fiziksel rafinasyon ayrilmaktadir. Kimyasal rafinasyon 1.

Zamksi maddelerin giderilmesi, 2. Nötralizasyon, 3. Agartma, 4. Koru giderme proseslerinden meydana gelir. Zamksi maddelerin giderilmesinde fosfolipitler ve metal iyonlari yagdan uzaklastirilir. Nötralizasyon yag asitlerinin ekstraksiyonuna hizmet eder. Agartmada boya maddeleri, diger metal iyonlari ve kalan zamksi maddeler uzaklastirilir. Koku gidermede, yagin kokusunu ve tadini etkileyen diger bilesiklerin uzaklastirildigi bir su buhari damitmasi söz konusu olur. Fiziksel rafinasyonda asit giderme islemi koku giderme islemi ile birlikte rafinasyon prosesinin sonunda uygulanir.

Yaglarin rafinasyonunun giderilmesi fosfolipitlerin su ile ya da Ca2+- ve Mg”- iyonlarini kompleksleyen, örn. sitrik asit ya da fosfor asit gibi bir asidin bir sulu çözeltisi ile ekstraksiyonu vasitasi ile meydana gelebilir. Burada önce, suluda çözünür fosfolipitlerin uzaklastirildigi bir sulu ön zamksi maddelerin giderilmesi uygulanir.

Birada hidratlanmis fosfolipitlerden söz edilir. Hidratlanabilir ve hidratlanamaz fosfolipitlerin konusu örnegin Nielsen, K., Composition of difficultly extractable soy tarif edilmistir. Burada özellikle Fosfatidil - Kolin ve Fosfatidil - Inositol söz konusudur.

Inceltilmis sulu Kalsiyum - ve Magnezyum - kompleksleyen asitler, örn. Sitrik asit ya da Fosfor asit, teknigin bilinen durumunda hidratlanamayan fosfolipitlerin hidratlanabilir fosfolipitlere dönüstürülmesine neden olur. Bu reaksiyonun mekanizmasinin, örnegin fosfatit asitler gibi degisik fosfolipit moleküllerini köprüleyen ve stabilize eden kalsiyum iyonlarinin yagdan uzaklastirilmasina dayanir. Bu da bu fosfolipitlerin su ile iyilestirilmis ekstraksiyonuna neden olur. 8qu ön zamksi maddelerin giderilmesi ve sulu asitlerin bazi yaglarda, örn. palm yaginda islenmesi suretiyle yeterli derecede bir zamksi maddelerin giderilmesine ulasilsa da, Örnegin kanola yagi, kolza yagi ya da soya yagi gibi diger bitkisel yag tiplerinde bu iki ekstraksiyon adimi çogunlukla zamksi maddelerin bir yetersiz redüksiyonuna neden olur. Normal olarak burada gida maddesi uygulamalari için yag içerisinde fosfor içeriginin 10 ya da daha az ppm fosfora bir düsürülmesi arzu edilmektedir (teknigin bilinen durumuna göre yagin ICP/ AS analizi vasitasi ile tespit edilmistir). Yagin fosfor içerigine yönelik daha kuvvetli gereklilikler yagin örnegin biyodizel üretiminde kullanilacaksa talep edilir. Orada AB standardina göre biyodizelin fosfor içerigi 5 ppm ile sinirlandirilmistir ve fosfor redüksiyonunun yag tarafinda uygulanmasi amaca uygundur. Ayrica özelikle düsük bir fosfor içerigi, yani mümkün oldugunca düsük olan ve mümkünse 0 olan bir fosfor içerigi, yaglar sonraki islem adimlarinda ya gida maddesi kullanimi için hidratlandiginda, yani doymamis yag asitlerinin doymus yag asitlerine dönüstürüldügünde, ya da Neste firmasinin NExBTL- prosesine göre, nihai ürün olarak alkanlarin, yani fakat bitkisel yagdan üretilmis olan bir konvansiyonel biyodizel yakit maddesinin elde edilecegi sekilde bir hidratlama uygulandiginda gerekli olur. Bu prosesler, yukarida da belirtildigi gibi yag içerisinde bir düsük fosfor içerigine yönelik çok yüksek sartlari gerektirirler ve bu tip proseslerin kullanimi ham maddeler olarak bitkisel yaglar gibi kimyasal endüstrilerde artan sekilde kullanilirlar.

Bir diger varyanti da "caustic refining" (“kostik rafinasyon”) olusturmaktadir. Bu metot mümkün oldugunca tüm fosfolipitlerin serbest yag asitleri ile birlikte yagdan uzaklastirilmasi için kullanilir. Bu proses örnegin Bunge firmasinin WO 08/094847 sayili belgesinde tarif edilmistir. Bu metot ham ya da suyla önceden zamki giderilmis yag önce düsük miktarlarda Sitrik asit ya da Fosfor asit ile karistirilir ve yogun bir sekilde karistirilir. Burada, daha 'önce da zaten açiklanmis oldugu gibi, hidratlanamayan fosfolipitlerin tuzlari daha kuvvetli bir sekilde hidratlanabilir hale getirilir. Sonra inoeltilmis sodyum Iavgasi ilave edilmekte olup, içerisinde miktar.

Serbest yag asitlerinin nbtralizasyonunda gerekli olan miktara karsin daha az bir fazlaligin elde edilecegi sekilde hesaplanir. Bu sekilde yag asit tuzlari olusturulur. Ç'okeltme ve sonraki santrifüjleme suretiyle karisim sonra ayrilir ve artik olarak bir sulu yag asit çözeltisi elde edilir, bunun içerisinde de fosfolipitler bulunur. Yag sonra tekrar sertlestirilmis su ile yikanir. NaOH- isleminin dezavantaji kismen yagin sabunlasmasinin da ortaya çikmasi, bu sekilde de bunun veriminin düsmesidir.

Teknigin bilinen durumuna göre yag içerisinde fosfor içeriginin daha da azaltilmasi, ya bir agartma topragi ile ya da bir özel silika jeli ile bir adzorbsiyon isleminin uygulanmasi ya da bitkisel yaglarin enzimatik olarak zamksi maddelerin giderilmesi suretiyle elde edilir. Adzorbsiyon isleminin dezavantaji da, adzorbens isleminden sonra bitkisel yagin adzorbanda kalmasi, bunun da toplam rafinasyon prosesinin yag verimini azaltmasidir. Ayrica kullanilmis agartma topragi “atik” olusturur, bunun için de bertaraf etme olanaklarinin bulunmasi gerekir.

Konvansiyonel yagdan zamksi maddelerin giderilmesi prosesinin bir diger dezavantaji da, hem sulu ön zamksi maddelerin giderilmesi hem de sulu asitler ile islemenin yag kayiplarina neden olmasidir, bu da, su içine aktarilmis olan fosfolilipitlerin emülgatörleri olusturmasi, bunlarin da gerçi düsük fakat yine de bitkisel yagin önemli bir kismini sulu faz içinde em'ulge etmeleri, bu sekilde de bitkisel yagin kaybolmasi suretiyle ortaya çikar. Bu kayiplar, orijinal kullanilan ham yaga göre daha az yüzdelik alanda bulunabilirler. Basit kural olarak ikiser molekül fosfolipit ile yaklasik olarak bir trigliserit molekül'un'ün emülge edilmesi geçerlidir (WO 08/094847 sayili belgede tarif edilmistir.

Enzimatik zamksi maddelerin giderilmesi, mevcut metotlarin çok sayida dezavantajini 'önler ya da ekstraksiyon metotlarini daha da iyilestirir. Boylece adzorbanlarin kullanimindaki gibi ilave atik ortaya çikmaz, ve enzimatik zamksi maddelerin giderilmesinde yag kayiplarinin daha da azaltilabildigi gösterilmistir.

Enzimatik zamksi maddelerin giderilmesi teknigin bilinen durumunda, fosfolipazlarin, özellikle fosfolipaz A1 ve A2'nin ya da fosfolipaz C'nin ya da fosfolipazlarin bir kombinasyonu suretiyle ortaya çikartilir.

Fosfolipazlar, fosfolipitlerin ester olusumunu hidrolizleyen hidrolazlar grubuna ait olan enzimlerdir. Fosfolipazlar fosfolipitlerde rejioselektivitelerine göre 5 gruba ayrilirlar: 2- Iizofosfolipitler olusumu altinda sn-1 pozisyonunda yag asitlerini ayiran Fosfolipazlar A1 (PLA1), 1- lizofosfolipit olusumu altinda sn2- pozisyonunda yag asitlerini ayiran Fosfolipazlar A2 (PLA2), Bir Fosfor asit monoesteri ayiran Fosfolipazlar C (PLC), Bas grubunu ayiran ya da degistiren Fosfolipazlar D (PLD).

Bir 1,2- lizofosfolipit olusumu altinda yag asitlerini hem sn1- pozisyonunda hem de sn2- pozisyonunda ayiran fosfolipazlar B (PLB), Bu reaksiyonlar her zaman sinif yüzeyinde toplayan substratlarda meydana gelir.

Fosfolipazlarin, 'Özellikle de Fosfolipaz A'nin ham yaglarin zamksi maddelerinin giderilmesinde kullanimi örnegin EP 0513709 B1 (Lurgi, Frankfurt firmasinin Enzymax-Prozess) sayili belgede koruma altina alinmistir. Bir yag asidinin ayrismasinin bir lizolesitine neden olmasindan yola çikilir, bu da esas olarak yag için bir düsük emülgasyon kapasitesine sahiptir ve esas olarak daha yüksek suda Çözünürlüge sahiptir. Bu sekilde hem yag verimi yükseltilir hem de zor hidratlanabilen fosfolipitlerin suda çözünürlügü iyilestirilir. Clausen, Enzymatic oil-degumming by fosfolipazin A1'in gelisimini ve enzimatik zamksi maddelerin giderilmesi için kullanimini tarif eder ve fosfoliyaz A1”in kullanimi ile fosfolipatz A2'nin kullanimini karsilastirir.

Enzimatik olarak yagdan zamksi maddelerin giderilmesine yönelik güncel teknigin bilinen durumu A.J. Dijkstra, Recent developments in edible oil processing, Eur. J. enzimatik yagdan zamksi maddelerin giderilmesi için tek tek fosfolipazlarin avantajlari ve dezavantajlari tartisilmakta ve farkli asitler ile 'ön isleme metotlari da belirtilmektedir. steril glikositlerin ham yagdan ya da zamksi maddeleri giderilmis hayvansal ya da bitkisel menseli yaglardan enzimatik ayristirilmasina yönelik bir metodu tarif etmekte olup, içerisinde fosfolipazlarin ve glukosidazlarin ilave edilmesi bir adim içerisinde uygulanir.

Yagin zamksi maddelerinin giderilmesi için bir alternatif konsepti de, Danisco firmasinin sistemleri olusturmakta olup, bunlarda da bir lipidasil tranferazi kullanilir.

Bu enzim bir fosfolipitten yine bir Iizofosfolipit olusturmakta olup, fakat yag asit asit artigini bir sterolde yag fazina dönüstürur. Uygun enzimler ve bu enzimlerin kullanimi Yag verimi açisindan enzimatik zamksi maddelerin giderilmesi için en uygun olani, ürün olarak yag içinde çözünür olan bir digliseriti veren bir yüksek etkili fosfolipazin C kullanilmasi, ve örnegin Fosfatidil - Kolin gibi, çok iyi bir sekilde suda çözünür olan bir fosfatil artiginin (lesitinden yola çikilarak) kullanilmasidir. Bu tip enzimleri Verenium firmasi US 7,226,771 sayili belgede tarif etmistir. "Enzymatic degumming" (“enzimatik zamksi maddelerin giderilmesi”) konusu ile ilgili olarak Dijkstra,nin derleme makalesinde bu sistemin dezavantaji olarak, tüm fosfolipitleri dönüstürmemesi. bunun yerine yalnizca Iesitinleri, yani Fosfatidil - Kolin ve Fosfatidil - Inositoli dönüstürmesi, bu sirada da zor hidratlanabilen etanolaminlerin ve fosfatit asitlerin dokunulmadan kalmalarini tarif etmistir. Bu dezavantaj, netice gelisimlerinde fosfolipazin C ya Fosfolipazlar A ile ya da Iipidazsil transferazlar ile kombine edilmelerine neden olmustur. Fosfolipazlarin A fosfolipazlar C ile yagin zamksi maddelerinin giderilmesi için bir kombinasyonu WO 08/094847 sayili belgede tarif edilmistir. Bu patent belgesinde, fosfolipazlarin A ve fosfolipazlarin C karisimin bir taraftan yag veriminde bir sinerjik etkiye neden oldugu, diger taraftan da bu sekilde kabul edilebilir reaksiyon süreleri ile yag içinde çok düsük fosfor içeriklerinin birakildigi belirtilmistir. belgede tariiC edilmistir. Burada da, asiltransferazlarin fosfolipazlar C ile kombinasyonunun yag veriminin bir yükselmesine neden oldugu belirtilmektedir.

Enzimatik yagdan zamksi maddelerin giderilmesi için bir diger varyanti da ayrilmis zamksi fazin enzimatik islenmesi olup, buna göre yagin konvansiyonel metotlara göre, örnegin su ve/ veya sitrik asit ile zamksi maddeleri giderilir. Bu islem vasitasi ile, zamksi faz içerisinde emülge edilmis bitkisel yagin bir kisminin tekrar kazanilmasi mümkün olur. Bu proses örnegin A.J. Dijkstra, Enzymatic degumming, Eur. J. Lipid Uygun metotlar asagidaki patent belgelerinde de tarif edilmistir: EP 01 624 047 sayili belge, fosfolipolitik maddelerin kullanimi suretiyle zamksi maddelerden yagin tekrar kazanilmasini tarif etmekte olup. içerisinde fosfolipolitik yukarida belirtilmis olan bakis açilarinin yaninda ayrilmis zamksi fazin asil transferazlar ve asil transferazlar ve fosfolipazlardan C olusan karisimlar ile enzimatik islenmesini de tarif eder. bir enzimatik islenmesini tarif eder.

Diger zamksi maddeleri giderme metotlarina karsin fosfolipazlarin kullaniminin devamliliginin bakis açisi nihayet L. De Maria & J. Vind & K. M. Oxenboll & A.

Svendsen & S. Patkar, Phosfoliphaz and their industrial applications, Appl Microbiol konvansiyonel zamksi madde giderimi prosesinden fosfolipaz A ile bir prosese dönüstürülm'üs olan ve yilda 266 000 ton soya yaginin temizlendigi yag degirmeni edilebildigi gösterilmistir. Tasarruf edilen CO2- es degerleri ortalama 1600 kisinin emisyonuna esittir.

Yemeklik yagin dünya çapinda büyük bir sekilde artisi ve kimya endüstrisi için ham maddeler olarak bitkisel yaglarin gittikçe artan kullanimi ve yakit olarak kullanimi nedeniyle sürekli olarak, bitkisel yaglarin zamksi maddelerinin giderilmesi ve özellikle bitkisel yaglarin enzimatik zamksi maddelerinin giderilmesinin daha da iyilestirilmesi ihtiyaci bulunmaktadir. Mevcut basvurunun bulus sahiplerinin bu nedenle amaci, zamksi maddelerinden ayrilacak olan yagin fosfor içeriginin daha da azaltilacagi, yag kayiplarinin düsürülecegi ve/ veya enzimatik zamksi madde giderimin reaksiyon hizlarinin yükseltilecegi sekilde enzimatik zamksi maddelerin giderilmesi için bilesimlerin gelistirilmesidir. Ayni zamanda da bu bilesikler ayrica büyük teknik ölçekte bir ekonomik metot idaresini de mümkün kilmalidirlar.

Bu amaca sulu faz içerisinde bitkisel yaglarin emülge edilebilirliginin azaltilmasi için bir metot ile ulasilmakta olup, bu da asagidaki adimlari içerir: a) Ham bitkisel yagin en azindan bir fosfolipit ayiran enzimi içeren bir birinci enzim komponentini ve en azindan bir fosfolipit ayirici olmayan enzimi içeren bir ikinci enzim komponentini içeren bir bilesik ile temas ettirilmesi olup, içerisinde ikinci enzim komponentinde bir 0( -amilaz söz konusu olup; b) bitkisel yagdan zamksi maddelerin ayrilmasi olup, içerisinde a) adiminda temas etmeden 'önce ham bitkisel yagin su ve/ veya asit ile temas ettirilmesi, fakat a) adimindan önce sulu fazin bir ayrilmasi meydana gelmemekte, bunun yerine onceden kondisyonlanmis ham yag dogrudan a) adiminda kullanilir. azindan bir fosfolipit ayiran enzimi içermesi ya da bundan olusmasi anlasilir. baslik grubunu bir fosfolipitten ayirabilecek durumda olan bir fosfolipaz soz konusu olabilir. Ayrica yag asit esterinin ayrilmasinin bu artigin bir dönüstürülmesi ile, bir ester olusumu takip ederek, yag fazi içerisinde bir serbest sterol ile baglanmis oldugu bir asil transferaz söz konusu olabilir.

Tercih edilen bir uygulama seklinde birinci enzim komponentinin, Fosfolipaz A1, Fosfolipaz A2, Fosfolipaz C, Fosfolipaz B, fosfolipaz D ve Asil transferaz'dan olusan gruptan seçilmis oldugu bir bilesik kullanilir. Bu gruptan pazarda bulunan tipik enzimler Novozymes® 'in Lecitase®UItra'si, bir Fosfolipaz A1, Novozymestin Lecitinase®,i, bir Fosfolipaz A2, Rohalase® MPL, AB Enzymes, Darmstadt(D) firmasinin bir Fosfolipaz A2!si, Purifine®, Elementis, San Diego USA firmasinin bir Fosfolipazi C, Lysomax®i Danisco firmasinin asil transferazi. Burada birinci enzim komponenti içerisinde yukarida bahsedilmis olan fosfolipit ayiran enzimlerden ikisinin ya da daha fazlasinin bir kombinasyonu da kullanilabilir. Enzimler burada herhangi bir organizmadan (Örn. bir termofil organizmadan izole edilmis de olabilir) ya da bir sentetik kaynaktan gelebilir. Mevcut bulus çerçevesi içerisinde, birinci enzim komponentlerinin içerisinde ayni türden enzimlerin kullanilmasi, fakat bunlarin farkli kaynaklardan ya da türlerden gelmesi de mümkündür. Ayni sekilde, enzim aktivitesine sahip olan iki ya da daha fazla degisik türden rekombinant üretilmis, çimer füzyon proteinleri de içerilmistir. anlasilir. oi -Amilaz burada herhangi bir organizmadan (cm. bir termofil organizmadan izole edilmis de olabilir) ya da bir sentetik kaynaktan da gelebilir. Mevcut bulus çerçevesi içerisinde, ikinci enzim komponentinin içerisinde, farkli kaynaklardan ya da türlerden gelen o -Amilazlarin kullanimi da mümkündür. Ayni sekilde, enzimatik aktiviteye sahip olan iki ya da daha fazla degisik türden rekombinant üretilmis, çimer füzyon proteinleri de içerilmistir.

Metot bitkisel yaglardan zamksi maddelerin giderilmesi için ya da sulu faz içerisinde bitkisel yaglarin emülge edilebilirliginin azaltilmasi için kullanilir. çözünür fosfolipitlerin genis ölçüde yagdan uzaklastirilmasi için, ham yagin su ile ya da bir sulu asit çözeltisi ile islenmesi anlasilir. Bir ön ya da islak zamksi madde giderimi çerçevesi içerisinde de asit ilavesinden sonra, asidin nötralize edilmesi için gerektigi takdirde alkali ilavesi meydana gelebilir. Enzim ilavesinden önce sulu fazin ayrilmasi meydana gelir. Bir ön zamksi madde gideriminden sonra ham yag içerisindeki fosfor içerigi yaklasik olarak 500 - 1500 ppm*e düsürülür, örnegin soya ve kolza için ön zamksi maddeden arindirilmis yag içinde 200 ppm'in altina düsürülür. On zamksi madde giderimi vasitasi ile örnegin lesitin olusan zamksi madde fazindan elde edilebilir ya da zamksi madde fazi yem maddesi olarak hazirlanabilir. Sulu fazin ayrilmasinin ya da fosfor içeriginin indirilmesinin dezavantaji ise yag açisindan bir verim kaybidir. Sulu faza geçen fosfatitler emülge edici olarak etkilidirler ve yagin bir kisminin sulu faz içinde emülge edilmelerine ve bununla ayrilmalarina nedne olurlar. Sonra yag enzimatik olarak islenmeye devam edilebilir (içerisinde enzimler bir sonraki adim içinde ayrilmalari Yagin “ön kondisyonlanmasi” kavrami ile asagidaki basvuruda suyun ya da bir sulu asit çözeltisinin islenen ham yaga ilave edilmesi anlasilir. Sonra alkali, örnegin sodyum Iavgasinin ilavesi suretiyle, asagidaki reaksiyonun meydana geldigi bir pH degeri ayarlanir. Ideal sekilde enzim reaksiyonu için optimal pH degeri ayarlanir. Bu da fosfolilit ayiran enzimler için 4 - 5 arasindaki bir pH degeridir. Sonra ise sulu fazin ayrilmasi meydana gelmez, bunun yerine dogrudan enzimin ilavesi meydana gelir.

Mevcut zamksi maddeler yani önce yag ya da emülsiyon içinde kalirlar. Sulu fazin ve bununla birlikte enzimlerin ayrilmasi ancak enzimlerin (gerektigi takdirde ön kondisyonlanmis) ham yag üzerinde etkisinden sonra meydana gelir.

Suyun ya da bir sulu asit çözeltisinin ve gerektigi takdirde alkalinin asitlerin notralizasyonu için ham yaga ilave edilmesi bir ön kondisyonlama kapsaminda meydana gelir, fakat enzimlerin ilave edilmesinden önce sulu fazin ayrilmasi kalir (bir islak ön zamksi madde giderimi kapsami dahilinde). Enzimlerin ilave edilmesinden önce ayirma kademesinden vazgeçme suretiyle yag veriminin bir yükseltilmesi mümkün olur. Bir yüzde noktasi kadar yag veriminin bir yükselmesinin onemli ekonomik anlami bulunmaktadir, çünkü bu yüzde, soya yaginin yillik üretimine göre yaklasik olarak 400.000 ton yaga esittir. Bulusa uygun metot böylece soya yagindan ya da kolzadan 500 ila 1.500 ppm fosfor içerigine sahip olan ham yaglarin kullanimina izin verir. Bunun disinda da metodun bir basitlestirilmesi meydana gelir, çünkü enzim ilavesinden önce ayirma adimi iptal olur.

Suyun ilave edilmesi sirasinda asagidakilere dikkat edilmesi gerekir: Fosfatitleri yagdan uzaklastirmak için, yaklasik olarak 400 ppm fosforun uzaklastirilmasi için yag hacmine göre yaklasik olarak hacmen % 1 su gereklidir. Bu düsünceye göre, yag hacmine göre yaklasik olarak hacmen % 5 suyun ilavesi, yüksek fosfor içerigine sahip olan yagin da tamamen fosfordan arindirilmasi için yeterli olur. Elbette bu tip bir islem sekli, metodun ekonomik olmamasina neden olur, çünkü büyük miktarlarda reaksiyon hacminin depolanmasi gerekir. Bunun disinda büyük bir ilave edilmis su hacmi pahali bir ayirma maliyetine ve az yag verimine neden olur; az ilave edilmis su böylece daha yüksek yag verimi anlamini da tasir. Genel olarak bu nedenle, yag hacmine göre, hacimce % 4'den fazla suyun, tercihen hacimce % 3Yden fazla suyun yaga ilave edilmemesi gerekir.

Bir diger tercih edilen uygulama seklinde rafinasyon adiminda - örnegin Iesitin gibi yag içinde zaten mevcut olan emülgatörlerin disinda - örnegin sodyum dosesil sülfat (SDS) gibi baska ilave emülgatörler ilave edilmez. Ayni sekilde bulusa uygun metotta Örnegin kalsiyum klorit (CaCIz) gibi tuzlarin ilavesi olmadan da yeterli olur.

Tercih edilen bir uygulama seklinde birinci enzim komponentinin enziminin/ enzimlerinin enzim aktivitesi 0,01 ila 6 unit/g yag yag olarak seçilir, tercihen 0,1 ile 3 unit/g yag yag, özellikle tercihen 0,2 ila 2,5 unit/g yag ve en çok tercihen 0,3 ila 1 unit/g yagdir. Tercih edilen bir uygulama seklinde ikinci enzim komponentinin enzim aktivitesi 0,01 ila 6 unit/g yag, tercihen 0,1 ila 3 unit/g yag ve özellikle tercihen 0,2 ila 2,5 units/g yagdir, ve en çok tercihen 0,3 ila 1 unit/g yag olarak seçilir. (Unit: enzim aktivitesi için uluslararasi birim; 1 birim 1 mmoI/min'lik substrat dönüsümüne esittir) Mevcut bulus çerçevesi içerisinde, birinci enzim komponentinin enzim aktivitesinin ikinci enzim komponentinin enzim aktivitesine olan oraninin 0,01 : 6 units/g yag ila 6 : 0,01 units/g yag arasinda bulundugu, tercihen 0,1 : 3 units/g yag ila 3 : 0,1 units/g yag arasinda bulundugu bilesiklerin kullanilmasi özellikle tercih edilir. Burada birinci enzim komponentinin oraninin ve ikinci enzim komponentinin oraninin esit olmasi da, örnegin iki oranin 0,1 ila 0,5 units/g yag, tercihen 0,2 ila 0,3 units/g yag arasinda seçilmesi de tercih edilir.

Fosfolipit ayiran enzimin oi -Amilaza oran bulusa uygun oraninin korunmasi ile birlikte zamksi madde fazinin hacmi de azalir. Bunun anlami da yag veriminin bir yükselmesidir.

Birinci ve/ veya ikinci enzim komponentlerinin enzimleri bu sirada örnegin dondurularak kurutulmus ve uygun enzim tamponu içinde (her enzim için standart tampon literatürde tarif edilmistir) çözülmüs olarak kullanilabilir, örnegin sitrat tamponu 0,1 M, pH 5 ya da asetat tamponu 0,1 M, pH 5. Tercih edilen bir uygulama seklinde enzimler enzim tamponu içine alinirlar ve ham yaga ilave edilirler. enzimlerin - özellikle fosfolipitlerin içinde içerilmis olan karisimlarin - daha iyi bir çözünürlügünü elde etmek için, organik çözücü maddelerin ilavesi de mümkündür. Bunlar örnegin fosfolipitlerin ayrilmasi içerisinde kullanilirlar ve literatürde tarif edilmislerdir. Polar olmayan organik çözücü maddeler, örnegin hekzan ya da aseton ya da karisimlar tercihen agirlikça % 1 ila 30 miktarlarinda tercihen kullanilirlar (mümkün olan çözücü maddelerin örnekleri EP 1531182 A2 sayili belgede tarif edilmistir).

Bir diger tercih edilen uygulama seklinde birinci ve/ veya ikinci enzim komponenti tasiyici formda kullanilir. Ozellikle fosfolipit ayiran enzimler, fiyati, dökme enzimlere göre, örnegin karbon hidrat ayristiran enzimlere (amilazlara, glukosidazlara) göre fiyati göreli olarak yüksek olan özel enzimler olmalari nedeniyle, mevcut bulus çerçevesi içerisinde, en azindan fosfolipit ayiran enzim(ler)in bilesime tasiyici formda ilave edilmesi tercih edilir. Mevcut bulus çerçevesi içerisinde tercih edilen tasiyici materyaller anorganik tasiyici materyaller, örnegin silika jelleri, çökeltme silisilik asitler, silikatlar ya da alumo silikatlar, ve organik tasiyici materyaller, örnegin metakrilatlar ya da iyon degistirici reçinelerdir. Tasiyici materyaller (göreli olarak pahali) enzimlerin yag - su emülsiyonundan asagidaki adimlarda tekrar degerlendirilebilirligini kolaylastirirlar ve metodun ekonomik olusuna yardimci olurlar.

Yine tercih edilen bir uygulama seklinde birinci ve/ veya ikinci enzim komponenti, özellikle tercihen sitrat tamponu ya da asesat tamponundan olusan gruptan seçilmis olan bir ya da daha çok diger bilesenleri içerir.

Mevcut bulusun çerçevesini hiçbir sekilde kisitlamayan özellikle tercih edilen uygulama sekillerinde birinci enzim komponenti, Fosfolipaz A1, Fosfolipaz A2 ve Fosfolipaz Ciden olusan gruptan seçilmis olan en azindan bir enzimi içerir, ve ikinci enzim komponentinde alfa amilaz söz konusu olup, içerisinde özellikle tercihen, sitrat tamponu ya da asetat tamponundan olusan gruptan seçilmis olan bir tampon içerisinde mevcut olan dondurularak kurutulmus olan enzimler söz konusudur. Birinci enzim komponentinin en azindan enziminin adzorbtif ya da kovalent olarak, örnegin silika jeli, çökeltme silisik asitler, silikatlar ya da alumo silikatlar gibi anorganik tasiyici materyallerden ve örnegin metakrilatlar ya da iyon degistirme reçineleri gibi organik tasiyici maddelerden olusan gruptan seçilmis olan bir tasiyici 'üzerinde baglanmis olarak bulundugunda bu en çok tercih edilir. Ayni sekilde bu özellikle tercih edilen uygulama seklinde birinci enzim komponentinin enzim aktivitesinin ikinci enzim komponentinin enzim aktivitesine olan oraninin 0,01 : 6 units/g yag ila 6 : 0,01 units/g yag arasinda olmasi, tercihen 0,1 : 3 units/g yag ila 3 : 0,1 units/g yag arasinda olmasi özellikle tercih edilir. burada birinci enzim komponentinin kisminin ve ikinci enzim komponentinin kisminin esit olmasi tercih edilir, örnegin iki oran da 0,1 ila 0,5 units/g yag, tercihen 0,2 ila 0,3 units/g arasinda seçilir.

Mevcut bulusun sahipleri, yukarida tanimlanmis olan enzim komponentlerinin (birinci ve ikinci enzim komponentleri) bir kombinasyonunun özelikle etkili ve etkin bir sekilde bitkisel yaglarin sulu faz içerisinde em'ulge edilebilirligini azalttiklari sasirtici bir sekilde bulunmustur. Burada bulusa uygun metot özellikle avantajli olarak ham bitkisel yaglarin zamksi maddelerinin giderilmesi için ya da bitkisel yag zamksi maddelerinin hazirlanmasi için kullanilabilir. Zamksi madde fazi bu sirada örnegin bilinen bir zamksi madde giderme metodu (basvuru çerçevesinde yine tarif edildigi gibi) vasitasi ile ya da bulusa uygun metot vasitasi ile, ham bitkisel yagin zamksi maddelerinin giderilmesi için kullanildiginda elde edilebilir.

Mevcut bulus sulu faz içerisinde bitkisel yaglarin em'ulge edilebilirliginin azaltilmasi için bir metot ile ilgilidir.

Burada, birinci enzim komponentinin fosfolipit ayiran enzim(ler)in ikinci enzim komponentinin oi -Amilazi ile kombinasyonu vasitasi ile ham yagin fosfolipit içeriginin fosfolipit ayiran enzimin sag kullanimina karsin daha da düsürülmesi, yag veriminin artirilmasi enzimatik zamksi madde gideriminde reaksiyon hizinin yükseltilmesi, zamksi madde hacminin düsürülmesi ve/ veya olusan zamksi madde fazinin ayrilabilirliginin iyilestirilmesinin mümkün oldugu sasirtici bir sekilde bulunmustur.

Mevcut bulusun metodu burada özelikle avantajlidir, çünkü bir diger enzim komponentinin (ikinci enzim komponenti) kullanimi suretiyle, burada oi - Amilaz söz konusu olup, zamksi madde fazi içinde mevcut olan diger komponentlerin ayrilmasinin meydana gelebilmesi ve böylece fosfolipit ayiran enzimin etkinliginin iyilestirilmesi mümkün olur. Ikinci enzim komponentinin kullanimi vasitasi ile örnegin yag zamksi madde fazinin viskozitesinin bir düsürülmesi, ariza komponentlerinin ayrilmasi neticesinde fosfolititlerin hareketliginin bir yükselmesi ya da fosfolipitlere daha iyi bir ulasilabilirligi elde edilebilir. Sinir yüzeyi zamksi madde fazil yagda bulunan fosfolipit ayiran enzim için bu tip fosfolipit moleküllerine ulasilabilirlik de yükseltilir.

Ornegin glikosidazlarin kullanimi suretiyle glikolipitler ayrilabilir. Glikolipitler sinifi çok sayida bilesikleri içerir. Literatüre göre ise zamksi faz içerisinde ya da bitkisel fosfolilipitlerde öncelikle Steril glikositler, Serebrositler ve Galaktosil Iipitler içerilmistir (Selmair, P.L., Koehler, P. in Molecular Structure and Baking Performance of 5609). Böylece örnegin yagi giderilmis soya lesitinin % 10'a kadar glikolipitleri içerdigi görülmüstür. Bu da diger Iiteratürlerde, ve hatta Bueschelberger, H.G., Lecithins, Emulsifiers in Food Technology, Whitehurst, R.J., Ed.; Blackwell Publishing: Oxford, U.K., 2004; pp 1-10, ve de Clayton, T.A., Identification of wheat rour lipids by thin- ikinci yerde Pardun, H., Eigenschaften der Pflanzenlecithine, in Pflanzenlecithine, Pardun, H., Ed.; Verlag für chemische Industrie H. Ziolkowsky KG: Augsburg, moleküllerin bir polar artiga ve gerektigi takdirde tekrar yag içinde çözünebilen bir suda çözünür baslik grubuna ayrilmasinin, fosfolipitlerin konsantre edilmis formda zamksi madde fazi içerisinde misellerin içinde mevcut olmasi ve bu nedenle de daha hizli bir sekilde fosfolipazlardan dönüstürülebilmeleri umulur. Ayni gözlem yag/ zamksi madde sinir yüzeyindeki fosfolipitler için de geçerlidir.

Zamksi madde fazinin Iipitlerinin azaltilmis emülge etme kapasitesi ayrica, yag veriminin daha da yükseltilebilmesine yardimci olur. Polisakkarit ve hücre duvari bilesenlerini ayiran enzimlerin etkisi, fosfolilipitlerin fosfolipazlar için daha iyi ulasilabilir olmalari ve gerektigi takdirde reaksiyon hizinin da yükselmesi suretiyle açiklanabilir. Karbon hidratlarin mevcut olmasi soya lesitinin analizleri suretiyle onaylanir, örn. Scholfield, C.R., Composition of Soybean Lecithin, JAOCS, vol. 58, no Böylece örnegin hücre duvari pektinleri ve polisakkaritler kismen ve diger hücre duvari bilesenleri kuvvetli oranda koyulastirici olarak etkilidirler. Bu sekilde ortaya Çikartilan viskozite yükselmesi belirli kosullar altinda fosfolipazlarin reaksiyon hizini düsürebilir.

Bu hücre duvari bilesenlerinin ve/ veya polisakkaritlerin iyi suda çözünür, viskoziteyi yükseltmeyen kisimlara ayrilmasi suretiyle ilave edilen enzimlerin fosfolipazlarin etkinligi üzerindeki etkisi açiklanabilir.

Fosfolipit ayiran enzimlerin oi -Amilaz ile bulusa uygun olarak kombine edilmesi vasitasi ile, fosfolipit ayiran enzimlerin, örnegin Fosfolipaz A1 ya da A2 gibi, gerektigi takdirde fosfolipaz C ile dozajlanmasinin azaltilmasi ve böylece proses için yukarida belirtilmis olan avantajlarin yaninda maliyetten de tasarruf edilebilir. Fosfolipit ayiran enzimler ile kombine edilen 0( -Amilaz, normal olarak örnegin fosfolipazlar olarak uygun maliyetli bir enzimdir ve büyük miktarlarda elde edilebilir. Bir avantajli reaksiyon idaresi ile kombinasyon içerisinde, yani kullanilan enzimlere uygun hale getirilmis olan proses kosullari ile bulusa uygun metot süre ve enerji ve ham madde sarfiyati açisindan daha da iyilestirilebilir.

Bulusa göre tercihen sunlar kullanilir: Thermomyces Ianuginosus, Fusarium oxysporium, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, Pseudomonas türleri, domuz pankreasi ve sigir pankreasi menseli olan Fosfolipaz A1; ve/ veya bagimsiz olarak, domuz pankreasi, sigir pankreasi, Streptomyces violaceoruber, Naja mossambica, Thermomyces lanuginosus, Fusarium oxysporium, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes ya da Pseudomonas türleri menseli Fosfolipaz A2, ve/ veya bagimsiz olarak, Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, Thermomyces lanuginosus, Fusarium oxysporium, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus ya da Pseudomonas türleri menseli Fosfolipaz C, ve/ veya bagimsiz olarak Thermomyces lanuginosus, Fusarium oxysporium, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, Pseudomonas spezies, Domuz pankreasi ya da Sigir pankreasi menseli Fosfolipaz B.

Thermomyces lanuginosus ya da Fusarium oxysporium menseli Fosfolipaz A1, ve/ veya bagimsiz olarak Domuz pankreasi, Sigir pankreasi, Streptomyces violaceoruber ya da Naja mossambica menseli Fosfolipaz A2 ve/ veya bagimsiz olarak Bacillus cereus, Clostridium perfringens ya da Listeria monocytogenes menseli Fosfolipaz C özellikle tercih edilir. 0( -Amilazlar olarak, d(1-4) glikosidik, oi('l-2) glikosidik, ci(1-6) glikosidik, ß(1-3) glikosidik, ß(1-4) glikosidik ve/ veya [3(1-6) glikosidik baglarini ayiranlar tercih edilir.

Amilazlar olarak, Bacillus ya da Pseudomonas ya da fungal türler ya da Pankreas menseli olanlar, Özellikle de Bacillus sp., Bacillus subtilis. Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus stearothermophilus, Pseudomonas aeroginosus, Pseudomonas quorescens, Aspergillus oryzae, Aspergillus niger ya da Trichoderma reesei menseli olanlar tercih edilir.

Soya yaginin zamksi maddelerinin giderilmesi için Özelikle Thermomyces lanuginosus ya da Fusarium oxysporium menseli Fosfolipaz A1 'in ve/ veya Domuz pankreasi ya da Sigir pankreasi menseli Fosfolipaz A2 'nin Bacillus- türlerinden bir oi-Amilaz ile bir kombinasyonu tercih edilir. Kolza yaginin zamksi maddesinin giderilmesi için 'özellikle Thermomyces lanuginosus ya da Fusarium oxysporium menseli Fosfolipaz A1 'in ve/ veya Domuz pankreasi ya da Sigir pankreasi menseli Fosfolipaz A2 'nin Bacillus- türleri ya da Aspergillus- türleri menseli bir oi-Amilaz ile kombinasyonu tercih edilir. edilen ham yaglar mevcut basvuru çerçevesi içerisinde ham soya yagi, ham kolza yagi, ham ayçiçegi yagi, ham zeytin yagi, ham palm yagi, ham jatropa yagi, ham alg yagi, ham ketencik yagi, ham pamuk çekirdegi yagi, özelikle ham soya yagi, ham kolza yagi, ham jatrofa yagi, ham ketencik yagi ve ham ayçiçegi yagidir. “ham” tanimlamasi burada, yagin henüz zamksi madde giderimi adimina, nötralizasyon adimina, agartma adimina ve/ veya koku gideme adimina tabi tutulmamis olmasi ile ilgilidir. Bulusa uygun metodun çerçevesi içerisinde çok sayida ham yaglarin bir karisiminin kullanilmasi ya da önceden islenmis, örnegin önceden kondisyonlanmis ya da önceden zamksi maddesi giderilmis yaglarin enzimler ile islenmesi de mümkündür. kisi tarafindan bulusa uygun amaç için uygun olarak görülmüs olan her sekilde meydana gelebilir. Temas ettirmenin tercih edilen türleri burada ham yagin ve bulusa uygun bilesimin bir karistirilmasidir.

Ham yagin bulusa uygun bilesim ile temas ettirilmesinden sonra ham yag ve bilesimden olusan karisim tercihen karistirilir, özelikle tercihen bir pervaneli karistirici ile 200 ila de./dak.*da karistirilir.

Karisimin sicakligi temas ettirme islemi sirasinda tercihen 15 ila 99 tercihen 27 ila 55 °C arasinda ve en çok tercihen 30 ila 45 °C arasindadir. Burada karisimin sicakliginin her zaman, enzimlerin denatürasyon sicakliginin asilmayacagi sekilde seçilmesi gerekir, tercihen karisimin sicakligi enzimlerin denatürasyon sicakliginin ya da enzimlerin en düsük denatürasyon sicakliginin en azindan 5 “C altindadir. Termofil organizmalardan izole edilmis olan enzimlerin kullaniminda esas olarak daha yüksek sicakliklar tercih edilir. Mevcut bulus çerçevesi içerisinde bir ya da daha çok termostabil enzimler kullanilacak olursa, bu durumda proses sicakligi Termostabil enzimlerin kullaniminin avantaji, böylece bir yükseltilmis islem sicakliginin seçilebilmesidir, bu sekilde bitkisel yagin viskozitesi azaltilabilir ve metot genel olarak kisaltilabilir - enzimlerin bir yükseltilmis reaksiyon hizi nedeniyle de olabilir. Ayrica avantajli olarak yine yükseltilmis sicakliklarda uygulanan bir ön islem durumunda, kullanilan enzimlerin daha düsük bir denatürasyon sicakliginin altina bir sogutma da gereksiz hale gelir. Genel olarak termostabil enzimlerin kullanimi bu sekilde bir islem kisalmasina ve maliyet düsüsüne neden olur.

Temas ettirme isleminin süresi burada tercihen 1 dakika ila 12 saat arasinda, tercihen 5 dakika ila 10 saat arasinda, yine tercihen 10 dakika ila 6 saat arasinda, daha da tercihen 20 dakika ila 3 saat arasindadir.

Karisimin pH degeri temas ettirme islemi sirasinda tercihen pH 3 ila pH 7,5, arasinda, tercihen pH 4 ila pH 6 arasinda ve özelikle tercihen pH 4,0 ila pH 5,2 arasindadir.

Ham bitkisel yagin bilesimin birinci ve ikinci enzim komponentleri ile temas ettirilmesi bu sirada ayni zamanda, ya da arka arkaya da meydana gelebilir. Bir temas ettirme islemi arka arkaya meydana geldiginde, mevcut bulus çerçevesi içerisinde, ham bitkisel yagin 'önce ikinci enzim komponenti ile temas ettirilmesi tercih edilir. Ham bitkisel yagin önce birinci enzim komponenti ve sora da diger enzim komponenti ile temas ettirilmesi durumunda, bir komponentin ilave edilmesinden sonra, diger komponentin ilavesi meydana gelmeden önce karisimin 30 ila 300 dakika, tercihen Bulusa uygun metodun b) adimina göre zamksi maddelerin “ayrilmasi”, teknikte uzman kisinin bulusa uygun amaç için uygun olarak gördügü her sekilde meydana gelebilir. Tercihen ayirma islemi ise santrif'ujleme ya da filtrasyon 'üzerinden meydana gelmekte olup, içerisinde santrif'üjleme tercih edilir. Santrifüjleme isleminde karisimin faz ayrimi meydana gelir, böylece islenen bitkisel yag, zamksi maddeler ve enzim bilesimi, kolayca birbirlerinden ayrilabilen ayri faz içerisinde mevcut olurlar.

Tercih edilen bir uygulama seklinde burada zamksi maddeleri içeren faz ve bulusa uygun bilesimi içeren faz islenen yagdan ayrilir. Burada,ayni zamanda zamksi maddeler ile birinci ve/ veya ikinci enzim komponentlerinin ayni zamanda ayrilmalari Özellikle tercih edilir.

Enzimler ayirma isleminden sonra rejenere edilebilir ya da temizlenebilir ve örnegin yeni bir temizleme metodu içerisinde kullanilabilir. Bu durumda da yine yukarida tarif edilmis olan bilesimler ile islenmesi uygun olup, içerisinde ya diger glikosit ayiran enzimler dogrudan eylemsiz fosfoliyazlar ve lipidasil transferazlar ile kombinasyon içerisinde kullanilirlar ya da ataletsiz fosfoliyazlarda yapisan bitkisel yag zamksi maddenin uzaklastirilmasi için, ataletsiz enzimlerin daha iyi bir sekilde yeni bir metot içerisinde yeniden kullanilabilmesi için bilesim kullanilir.

Mevcut bulusun bir diger tercih edilen uygulama sekli ayrica yukarida tarif edilen bir metodu içermekte olup, bu da ayrica, 0) b) adimina göre bitkisel yagin birinci ve/ veya ikinci enzim komponenti ile yeniden temas ettirilmesi adimini içerir. edildigi gibi ayni kosullar altinda meydana gelir. Burada özellikle tercih edilen bir uygulama seklinde birinci ve/ veya ikinci enzim komponenti yeniden temas ettirme isleminden önce bir rejenerasyona ya da temizlemeye tabi tutulur. a) adimina göre temas ettirme isleminden önce ham bitkisel yag su ve/ veya asit ile temas ettirilir. Tercih edilen asitler burada Kalsiyum - ve Magnezyum kompleksleyen asitler tek basina ya da kombinasyon içerisinde, örn. Sitrik asit ve Fosfor asit gibi.

Burada bir “ön kondisyonlamadan” söz edilir.

Bulusa uygun metodun bir tercih edilen uygulama seklinde su ile temas ettirme islemi dakikaligina meydana gelmekte olup, içerisinde 35 ila 85 I) arasindaki bir sicaklik tercih edilir ve 40 °C ila 80 T: arasindaki bir sic aklik özelikle tercih edilir. Asit ile, özelikle sitrik asit ya da fosfor asit ile temas ettirme islemi mevcut metot çerçevesi içerisinde tercihen SOCC ila 90 I) arasindaki bir sicaklikta 5 ila 60 dakikaligina, tercihen 15 ila 60 dakikaligina meydana gelmekte olup, içerisinde 35 °C ila 85 “(3 arasindaki bir sicaklik tercih edilir ve özelikle 40 °C ila 80 “C arasindaki bir sicaklik özellikle tercih edilir. Ozellikle tercih edilen bir uygulama seklinde asitle islemden sonra, 3,5 ila 8,0 arasinda, tercihen 4 ila 7 arasinda bir pH degerinin elde edilmesi için biruygun baz ile bir nötralizasyon adimi meydana gelir. Bilesim bu sirada, daha önce bir ayirma adimi uygulanmadan dogrudan bitkisel yaga ilave edilir.

Fosfolipaz(lar)in ve/ veya enzimlerin ilave edilmesinden önce ise, enzimin bir denatürasyonunun önlenmesi için reaksiyon sicakliginin enzimin optimal sicaklik alanini asmamasinin temin edilmesi gerekir. 35 T) ila 65 C a rasindaki sicakliklar, daha iyisi 45 “C ila 55 cC arasindaki sicakliklar u ygun olup, içerisinde termofil organizmalardan olusan enzimlerin kullanimi suretiyle yani özelikle isiya dayanikli enzimlerin kullanimi ile, 80 cC ila 100 °C arasinda ki bir kullanim mümkün olup, böylece ham bitkisel yagin su ile ve/ veya asit ile temas ettirilmesi ve bilesim ile temas ettirilmesi islemi arasinda isi düsüsünün meydana gelmemesi gerekir. Sicaklik stabilitesinin bir yükselmesi enzim komponentlerinin enzimlerinin bir imobizasyonu vasitasi ile de elde edilebilir. Çok sayida enzimin organik çözücü maddelere karsi belirli bir toleransa sahip olmalari nedeniyle (Faber, K., Biotransformations in Organic Chemistry (2001), Springer-Verlag, Heidelberg), mevcut bulus çerçevesi içerisinde buna göre önceden islemis yaglar ya da zamksi maddeler enzimler ile islenebilir.

Mevcut bulusun çerçevesini hiçbir seklide kisitlamayan 'özellikle tercih edilen uygulama sekillerinde mevcut bulusun metodu asagidaki adimlari içerir Tercih edilen uygulama sekli A) a) soya yagi ve/ veya kolza yagindan seçilmis olan ham bitkisel yagin, Fosfolipaz A1, Fosfolipaz A2 ve Fosfolipaz C'den olusan gruptan seçilmis olan en azindan bir enzime sahip olan bir birinci enzim komponentini ve içerisinde oi-Amilaziin söz konusu oldugu bir ikinci enzim komponentini içeren bir bilesim ile temas ettirilmesi, zamksi maddelerin bitkisel yagdan santrifüjleme vasitasi ile ayrilmasi, içerisinde metodun a) adimindan önce bir ön kondisyonlama uygulanir, içerisinde ham yagin bir ayri islem adimi içerisinde 1,5 ila 3 ml/Lrlik bir miktarda yagda organik asitle, tercihen sitrik asit ile karistirilir. Karisimin sicakligi burada tercihen 35 I) ila 60 °C'ye ayarlanir, özellikle tercihen 48 Üye ayarlanir. 30 dakika ila 2 saatlik,tercihen 1 saatlik bir reaksiyon süresinden sonra karisim bir stökiyometrik miktarda lavganin, tercihen sodyum lavgasinin ilavesi suretiyle, 0,5 ila 2 Mol/l, özellikle tercihen 1 Mol/I miktarda, 5 pH degerine ayarlanir. Ancak ondan sonra bulusa uygun metodun a) adamina göre isleme devam edilir.

Tercih edilen uygulama sekli B) a) soya yagi ve/ veya kolza yagindan seçilmis olan ham bitkisel yagin Fosfolipaz A1, Fosfolipaz A2 ve Fosfolipaz C*den olusan gruptan seçilmis olan en azindan bir enzime sahip olan bir enzim komponentini ve içerisinde ci-Amilazin söz konusu oldugu bir ikinci enzim komponentini içeren bir bilesim ile temas ettirilmesi, içerisinde birinci enzim komponentinin en azindan bir enzimimin bir tasiyici Temas ettirme islemi burada tercihen 70 “C ila 100 °C arasindaki bi r sicaklikta, tercihen 75 °C ila 85 (C arasindaki bir sicaklikta, yalnizca termostabil enzimlerin ya da denatürasyon sicakligi, proses sicakliginin en azindan 1 “C, tercihen 5 °C üzerinde bulunan enzimlerin kullanilmasi ile birlikte meydana gelir.

Burada metodun a) adimindan önce bir ön kondisyonlama uygulanmakta olup, içerisinde ham yag bir ayri metot adimi içerisinde 1,5 ila 5 mI/L 'lik bir miktarda yag ile organik asitte, tercihen 1,5 ila 2 ml/L yag sitrik asit ile karistirilir. Karisimin sicakligi burada tercihen 35 cC ila 60 cC'ye, özellikle terci hen 48 cC'ye ayarlanir. 30 dakika ila 2 saatlik, tercihen 1 saatlik bir reaksiyon süresinden sonra karisim, bir lavganin, tercihen sodyum lavgasinin ilavesi suretiyle tercihen 0,5 ila 2 mol/l, özellikle tercihen 1 mol/l miktarinda kondisyonlanir. Ancak ondan sonra bulusa uygun metodun a) adimina göre isleme devam edilir. b) Zamksi maddelerin bitkisel yagdan santritüjleme suretiyle ayrilmasi Ayrica muhtemelen, halen bitkisel yag içerisinde çözülmüs ve fosfolipazlar vasitasi ile ayrilmamis olan fosfatit asitler, mevcut bulusun metoduna göre islenmis olan yagin Ca ve/ veya Mg içeriginin azaltilmasi suretiyle daha da azaltilir. Bu nedenle de yukarida belirtilmis olan, bulusa uygun metodun tercih edilen uyulama sekilleri özelikle tercih edilen uygulama sekillerinde bir takip eden adim ile tamamlanmakta olup, burada sitrik asit ya da fosfor asit gibi kompleksleme maddelerin tekrar ilavesi suretiyle iki degerli iyonlarin içerigi ve buna paralel olarak yag içinde P içerigi daha da Bulusa uygun metot ile, ham bitkisel yag içindeki fosfor degerinin kuvvetli oranda düsürülmesi mümkündür. Burada fosfor degeri 20 ppmrin altina, 'özellikle tercihen 10 ppmtin altina, 'özellikle de 4 mm fosforun altina düsürülür.

Ayrica bulusa uygun metot ile, ham bitkisel yagin kalsiyum ve magnezyum içeriginin ppm'in altina, ozellikle tercihen 15 ppm'in altina, tamamen tercihen 10 ppm'in altina, yine tercihen 8 ppm'in altina ve en çok tercihen 4 ppm'in altina düsürülmesi mümkündür. Tamamen tercih edilen bir uygulama seklinde Kalsiyum - ve Magnezyum içerigi 3 ppm'in altina düsürülür.

Metotlar Asagidaki analiz metotlari kullanilmistir: Bitkisel yaglardaki fosfor içeriginin tespiti Fosforun tespit edilmesi DEV E-22*ye göre ICP vasitasi ile meydana gelmistir.

Bitkisel yaglarin içinde Kalsiyum - ve Maqnezyum içeriginin tespiti Fosfor içeriginin tespiti DEV E-22'ye göre lCP*ye göre meydana gelmistir.

Serbest yag asitlerinin (FFA) içeriginin tespiti Serbest yag asitlerinin içerigi bir sabunlasma reaksiyonu üzerinden sodyum hidroksitin ya da potasyum hidroksitin sarfiyati üzerinden tespit edilir. Incelenen yag içinde serbest yag asitlerinin yüzdelik içerigi elde edilir.Tespit DIN 53402,e göre (metot DGF C-V 2) meydana gelmistir.

Zamksi madde hacminin tespiti Bu tespit yardimi ile yag içinde mevcut olan zamksi madrde fazi enzimatik islenmemis ve enzimatik islenmis maddeden ölçülür. 10 ml'lik bir çalkalama bardagi reaksiyon karisiminin çalisma sicakligina isitilir, yagdan zamksi madde fazinin ayrilmasi için numuneler (2X 2 mL) doldurulur ve en azindan 4 dakika temperlenir 3000 rpm santirlüjlenir. Ust yag fazindan analiz için numuneler alinir. Belgelendirme amaçlari için faz olusumunun sonucu ilave olarak fotograflanir.

Zamksi madde fazi icindeki yag içeriginin tespiti Zamksi madde fazi içindeki kalan yag içeriginin tespiti DIN ISO 659'a göre Soxhlett Ekstrasiyonuna göre meydana gelir.

Varyant 1: içine doldurulur ve analiz için numuneler alinir. Duran Reakt'or içindeki yag bir isitma plakasi yardimi ile 35 °C ila 60 °C'Iik, 'özellikle 48 °C'lik bir sicakliga isitilmakta olup, içerisinde enzimin denatüre edilmedigi bir sicakligin korunmasi gerekir. Sicakliga ulastiktan sonra, ön kondisyonlama ile baslanir. Bunun için bir tanimlanmis, ya miktarina bagli miktar inceltilmis Sitrik asit, (örn. 450 ppm, yaga dozajlanir.

Sonra karisim bir Ultraturrax ile 1 dakikaligina karistirilir. Alternatif olarak karistirma ile birlikte, asidin reaksiyonunun beklenmesi için 600 rpm*de 1 dakika inkube edilir.

Sonra bir tanimlanmis miktarda sodyum lavgasi (1 Mol/L, % 2 hac/hac. ya da % 3 hac./ hac. kalan miktara, asit ilavesinden su çikartilarak ve enzim ilavesi ile birlikte) ilave edilir ve 10 dakika daha karistirilarak inkube edilir. Burada enzimin, enzim karisiminin ya da imobilatin ilavesi, tercihen tampon içinde çözülerek meydana gelir.

Enzim alttan karistirilir, bunun için karistirici devri kisa süreligine yükseltilir (1 dakika 900 rpm'ye) sonra düsük devirde karistirilmaya devam edilir.

Numune alimi tanimlanmis zaman araliklari içerisinde meydana gelir. Numune bir pipet yardimi ile alinir, bir temperlenmis çalkalama bardagi içine doldurulur (reaksiyon karisiminin sicakligi) ve zamksi fazin yagdan ayrilmasi için en azindan 4 dakika 3000 rpm'de santrifüjlenir. Belgelendirme amaçlari için faz olusumunun sonucu fotograflanir, fazlaliktan numuneler fosfor içeriginin, kalsiyum içeriginin ve magnezyum içeriginin tespiti için alinir.

Varyant 2: Bir diger uygulamada Fosfolipazlar ve ilave enzimler bir uygum kombinasyon içerisinde serbest enzimler olarak ya da imobilize edilmis enzimler olarak bir sulu faz (enzim tampon, pH 5) ile birlikte ag./hac. % 0,05 ila 5 % ham yaga ilave edilir. Su, enzim, muhtemelen enzim tasiyicisi ve yagdan olusan emülsiyon karistirilir. Ideal olarak reaksiyon 20 *C ila 70 “C arasinda, daha iyi si 40 °C ila 65 “C arasinda temperlenenek uygulanir. Sonra faz ayrimi beklenir, kati maddeler çökelir ya da teknikte uzman tarafindan bilinen standart metotlara göre, örnegin santrifüjleme ya da filtrasyon vasitasi ile uzaklastirilir. Sonraki islem olarak yag inceltilmis asit (örn. Sitrik asit) ya da Iavga ile teknikte uzman kisi tarafindan “Degumming” (“zamksi maddelerin giderilmesi) olarak bilinen metoda göre kalaninin zamksi maddesi giderilir.

Varyant 3: Bir diger uygulamada zamksi madde fazi enzimler ile islenir. Teknikte uzman kisi tarafindan “Degumming” olarak bilinen metotlara göre elde edilmis olan zamksi faza Fosfolipazlarin yaninda diger enzimler ilave edilir. Bunlar bir sulu faz içerisinde çözülmüs olarak ya da bir organik çözücü madde içerisinde süspande edilmis olarak bulunabilirler.

Karisim ideal olarak 20 cC ila 70 °C arasindaki bir sica klikta, daha iyisi 35 cC ila 60 °C arasindaki bir sicakliga temperlenir. Bu da viskozite ölçümü vasitasi ile kontrol edilebilir ya da görsel olarak bunun disindaki kati zamksi fazin çözülmesi suretiyle meydana gelebilir. Santrifüjleme vasitasi ile bir faz ayrimina ulasilabilir, bireysel fazlar ayrilabilir. Normal olarak üst faz elde edilen yagdan olusur, orta faz fosfolipitlerden olusur ve alt faz bir sulu fazdir ve enzimleri içerir. Sulu fazin tekrar elde edilmesi suretiyle enzimler yeniden dönüstürülür ve tekrar kullanilabilir. Iki degerli iyonlarini içerigine göre yag ya da enzim içeren sulu faz kompleks maddelerin ilavesi suretiyle sonraki kullanimdan önce iyonlardan temizlenmesi gerekir.

Varyant 4: Bir diger uygulamada ham yag bir yüksek sicakliga, 70 °C ila 100 °C arasindaki bir sicakliga daha dogrusu 75 cC ila 85 °C'Iik bir sicakli ga getirilir. Ham yag yukarida tarif edilen metotlara göre asit ve Iavga ile kondisyonlanir, sicaklik korunur ve termostabil enzimle ilave edilir. Ayrica tarif edildigi gibi hareket edilir. Enzim alttan karistirilir, bunun için de karistirici devri kisa süreligine yükseltilebilir (örn. 1 dakika 900 dev./dak.) sonra 600 rpmrde reaksiyon sona erinceye kadar karistirilmaya devam edilir. Zamksi madde fazinin ayrilmasi yukarida tarif edildigi gibi meydana gelebilir. Örnekler ve sekiller: Mevcut bulus asagida sekiller ve örnekler vasitasi ile daha yakindan açiklanmaktadir.

Burada örneklerin ve sekillerin yalnizca görsel karaktere sahip olduklari ve mevcut bulusun özellikle tercih edilen uygulama sekillerini gösterdikleri belirtilmektedir. Ne örnekler ne de sekiller mevcut bulusun çerçevesini kisitlarlar.

Sekil 1, soya yagi: % 2 toplam su orani ile ön kondisyonlamayi gösterir.

Sekil 2 Soya yagi: enzim PLA1 0,3 Units/g yag ve % 2 toplam su içerigi ilavesi ile ön kondisyonlamayi gösterir.

Sekil 3 soya yagi: enzim PLA1 0,3 Units/g yag ve enzim d-Amilaz Bacillus . spes 1 Unit/g yag, % 2 toplam su orani ilavesi ile ön kondisyonlamayi gösterir.

Sekil 4 soya yagi: Enzim PLA1 0,3 Units/g yag ve Enzim Mannanaz 0,3 Unit/g yag, % 2 toplam su içerigi ilavesi ile ön kondisyonlamayi gösterir (bulusa göre degil).

Sekil 5 Kolza yagi: % 3 toplam su içerigi ile ön kondisyonlamayi gösterir.

Sekil 6 kolza yagi: Enzim PLA1 0,3 Units/g yag ve °/o 3 toplam su içerigi ilavesi ile ön kondisyonlamayi gösterir.

Sekil 7, kolza yagi: enzim PLA1 0,3 Units/g yag ve enzim Amilaz PET 1 Unit/g yag, % 3 toplam su içerigi ilavesi ile ön kondisyonlamayi gösterir.

Sekil 8 kolza yagi: Enzim PLA1 0,3 Units/g yag ve enzim d-Amilaz Aspergillus 1 Unit/g yag, % 3 % toplam su içerigi ilavesi ile ön kondisyonlamayi gösterir.

Reaksiyon varyanti 1,9 göre bir soya yagi asagidaki baslangiç içerikleri ile serbest asitlerin bir içerigi. Ham yag sulu Sitrik asit (450 ppm) ve sulu soyum Iavgasi (1 Mol/L) yardimi ile bir ön kondisyonlamaya tabi tutulmustur. Düzenli olarak numuneler alinmistir (bkz. tablo 1). Karsilastirma olarak bu ön kondisyonlama Thermomyces lanuginosus (Sigma-Aldrich), organizmasindan bir enzimin Fosfolipaz A1 ilavesi ile uygulanmistir (bkz. sekil 2, tablo 2). Sekil 3, tablo 3'de PLA1 enziminin ve bir idger enzimin, Bacillus spec. (Sigma-Aldrich) organizmasindan bir d-Amilazin ilave edilmesi ile birlikte ön kondisyonlamanin sonuçlari gösterilmistir. Sekil 4, tablo 4'te enzim PLA1, bir diger enzim, bir mannaz (ASA - özel enzim) ilavesi ile birlikte ayni proses gösterilmistir. Sekil 4 ve tablo 4, bulusa uygun olmayan bir örnegi gösterirler.

Tablo 1: % 2 toplam su orani, fosfor-, kalsiyum-, magnezyum ve FFA içerigine sahip olan ön kondisyonlama Tablo 2: Thermomyces Ianuginosus 0,3 Units/g yag ve % 2 su içerigi, Fosfor-, Kalsiyum-, Magnezyum- ve FFA içeriginden olusan PLA1 ilavesi ile ön kondisyonlama Tablo. 3 PLA1 0,3 Units/g yag ve Bacillus specsden o-Amilaz 1 Unit/g yag, % 2 toplam su içerigi, Fosfor, Kalsiyum -, Magnezyum - ve FFA içerigi ilavesi ile 'ön kondisyonlama Zamksi madde fazi 4,0 2,5 2,5 2,5 Tablo 4: 0,3 Units/g yag ve Mannanaz 0,3 Unit/g yag, % 2 toplam su içerigi, Fosfor, Kalsiyum -, Magnezyum - ve FFA içeriginde PLA1 ilavesi ile ön kondisyonlama (bulusa uygun degil).

Sekil 1tden de görülebilecegi üzere asit ve lavganin ham yag üzerine uygulanmasi ön kondisyonlama olarak zamksi madde fazinin önemsiz bir miktarina neden olur, bu da sonra 600 dev./dak. “lik bir karistiricinin kullanilmasina ragmen esas olarak azalmaz. dakikalarinda meydana gelmistir (soldan saga dogru). Tablo 1rde ait olan analitik veriler belirtilmistir, fosfor içerigi 240 dakikadan sonra 33 ppmrden 21 ppmte düsmüstür, iki degerli iyonlarin kalsiyum ve magnezyum konsantrasyonu kalsiyum durumunda 7,8 ppm'den 9.8 ppm,e kolayca artar, magnezyumun konsantrasyonu 4,1 ppm*den 3,2 ppm*e reaksiyon akisi içerisinde düsmektedir. Serbest yag asitlerinin içerigi hemen hemen degismeden kalir. On kondisyonlama yagdan zamksi madde giderimi için 'ön islem reaksiyonu olarak ve ayni zamanda da referans islemi olarak görev yapar.

Sekil 2ide Thermomyces lanuginosus (Sigma-Aldrich) 'dan Thermomyces lanuginosus (Sigma-Aldrich) enziminin kullaniminda reaksiyon akisi içerisinde zamksi madde fazinin bir azalisi görülebilmektedir (ölçüm basina / numune alimi bir foto). Ait olan veriler ve numune aliminin zamanlari tablo 2'de gösterilmistir. Tablo Z'den kalsiyum konsantrasyonunun 9,6 ppm'den 7 ppmie bir düsüsü, magnezyum konsantrasyonunun 4,4 ppm'den 2,2 ppm*e bir düsüsü ve fosfor içeriginin 23 ppm*den 10 ppm'e bir düsüsü ortaya çikmaktadir, serbest asitlerin içerigi % 0,79'dan azalmasindan, PLA1 “in enzimatik olarak aktif oldugu ve bunun neticesinde de yagdan zamksi maddenin giderilmesinin basarili bir sekilde çalistigi ortaya çikmaktadir. Yag asitlerinin artisi artiyi, yag asitlerini fosfolipit moleküllerinden ayiran PLA1'Iin aktivitesi için bir isarettir ve zamksi madde fazi da sürekli azalmaktadir. Yag için bir genis kullanim paletinin elde edilmesi için, fosfor içeriginin daha da düsürülmesi amaçlanmaktadir.

Sekil S'te PLA1 ile ve ilave olarak alfa - Amilaz Bacillus spec. (Sigma-Aldrich) ile islenmis bir önceden kondisyonlanmis ham yagin zamksi madde fazi gösterilmistir.

Tablo 3'ten buna ait olan analitik verilerden, sasirtici bir sekilde 60 dakika sonra bile serbest yag asitlerinin içerigi de % O,86*dan % 1,16rya çikmaktadir ve bu sekilde fosfoliyazin aktivitesini gösterir. Fosfor içerigi ham yag içinde 700 ppm'den 13 ppm'e ve nihayet 240 dakika sonra 6,2 ppm'e düsmüstür. Kalsiyumun konsantrasyonu az oranda degisiklik gösterir, Magnezyum az oranda azalir.

Sekil 4 ve tablo 4'te (bulusa uygun degil) bir diger enzim kombinasyonunun kullaniminda deney verileri gösterilmistir. Yine Fosfolipaz A1 ve bir Mannanaz (ASA- özel enzimler) kullanilmistir. Verilerden 60 dakika sonra bile zamksi madde fazinin bir kuvvetli azalmasinin meydana gelmis oldugu görülmektedir. Serbest yag asitlerinin ppm'e (10 dakika numune) 11 ppm'e iki enzim ile 240 dakika islendikten sonra düser.

Iki degerli iyonlarin konsantrasyonlari da reaksiyonun tüm akisi boyunca azalir.

Sonuçlar, diger glikosit ayiran enzimin ilavesi suretiyle zamksi madde fazinin daha hizli ve daha kuvvetli bir sekilde azalmasinin ortaya çiktigini belgelendirmektedir.

Reaksiyon varyanti 1'e göre asagidaki baslangiç içeriklerine sahip olan bir kolza yagi 1,95,Iik serbest yag asitlerinin bir içerigi: Ham yag sulu Sitrik asit (1000 ppm) ve sulu sodyum Iavgasi (4 Mol/L) yardimi ile bir ön kondisyonlamaya tabi tutulmustur. Düzenli olarak numuneler alinmistir (bkz. tablo 5). Karsilastirmadan bu ön kondisyonlama bir enzim, Enzyms, Thermomyces Ianuginosus (Sigma-Aldrich) organizmasindan fosfolipaz A1 ilavesi ile uygulanmistir (bkz. sekil 6, tablo 6). Sekil 7, tablo 7rde enzim PLA1'in ve bir diger enzimin, Bacillus subtilis (ASA Spezialenzyme GmbH) organizmasindan bir amilaz PET ilavesi ile ön kondisyonlamanin sonuçlari gösterilmistir. Sekil 8, tablo 8'de yine PLA1 enziminin ve bir diger enzimin, Aspergillus oryzae (Sigma-Aldrich)'den bir d-Amilaz ilavesi ile birlikte ayni proses uygulanmistir.

Tablo 5. % 3 toplam su içerigi, fosfor-, kalsiyum-, magnezyum- ve FFA içerigi ile 'ön kondisyonlama Tablo 6. Thermomyces lanuginosus°dan PLA1, 0,3 unitslg yag ve % 3 toplam su içerigi, fosfor-, kalsiyum-, magnezyum- ve FFA içerigi ile ön kondisyonlama Tablo 7 PLA1 0,3 Units/g yag ve Amilaz PET 1 Unit/g yag,% 3 toplam su içerigi Fosfor, Kalsiyum -, Magnezyum - ve FFA içerigi ilavesi ile 'Ön kondisyonlama Tablo 8 PLA1 0,3 Units/g yag ve Aspergillusdan bir a-Amilaz Unit/g yag, % 3 toplam su içerigi, Fosfor, Kalsiyum -, Magnezyum - ve FFA içerigi ilavesi ile ön kondisyonlama Sekil 5*den de görülebilecegi üzere, ham yag üzerinde asit ve Iavganin kullanimi on kondisyonlama olarak zamksi madde fazinin bir önemli hacmine neden olur, bu da 600 dev./dak.'da bir karistiricinin kullanilmasina ragmen esas olarak azalmaz. Tek dakikada meydana gelmistir (soldan saga dogru). Tablo 5'de ait olan analitik veriler belirtilmistir, fosfor Içerigi 240 dakika sonra 247 ppmiden 14 ppm'e düsmüstür, iki degerli iyonlarin kalsiyum ve magnezyumun konsantrasyonu kalsiyum durumunda 76 ppm'den 9,5 ppm*e düsmüstür, Magnezyumun konsantrasyonu 31 ppm'den 1,7 ppm'e düsmüstür reaksiyon akisi içerisinde. Serbest yag asitlerinin içerigi hemen hemen degismeden kalmistir. On kondisyonlama yagdan zamksi madde giderimi için ön hazirlik reaksiyonu olarak ve ayni zamanda da referans islemi olarak görev yapar.

Sekil Gida Thermomyces Ianuginosus (Sigma-Aldrich)'dan fosfolipat A1 enziminin kullanilmasinda reaksiyon akisi içerisinde zamksi maddenin, reaksiyon sonunda yaklasik olarak % &lik bir hafif azalisi görülebilmektedir (ölçüm / numune alimi basina bir foto).

Ait olan veriler ve numune aliminin süreleri tablo 6'da gösterilmistir. Serbest yag asitlerinin içerigi % 1,76*dan % 2,14*e çikmistir. Serbest yag asitlerinin artisi, yag asitlerini fosfolipit moleküllerinden ayiran PLA1*in aktivitesi için bir isarettir.

Bir glikosit ayiran enzimin fosfolipaza ilave edilmesi suretiyle kolza yagi isleminin zamksi madde fazinin Önemli oranda azaldigi sasirtici bir sekilde bulunmustur, bkz. sekiller 7 ve 8 ve tablo 7 ve 8'den buna ait olan veriler. Sekil 71de bir Amilaz PET (ASA özel enzim) ilave edilmistir, sekil 8ide Aspergillus oryzae (Sigma-Aldrichydan bir 0- Amilaz ilave edilmistir. Sonuçlar burada da bir diger glikosit ayiran enzimin ilave edilmesi suretiyle, yag veriminin bir yükselisi anlamini tasiyan, zamksi maddenin daha hizli ve daha kuvvetli oranda bir azalisinin sasirtici bir sekilde ortaya çikmasini belgelendirmektedir.

Tablo 9: Kolza yagi: Zamksi madde fazinin Soxhlet ekstraksiyonuna göre yag verimi [%1 H3Cit (Sitrik asit) 96 PLA1 + Amilaz PET 98,5 PLA1 + oi Amilaz Aspergillus 98 Tablo 9”da Soxhlet ekstraksiyonuna göre zamksi madde fazindan örnek 27den reaksiyonlarin toplam yag verimi (kolza yagi) gösterilmistir. Burada, PLA1 ile kombinasyon içerisinde bir glikosit ayiran ilave enzimin yag verimini % 96 verimde enzim (H3Cit) olmadan ya da % 97 verimde enzim PLA1 ile islemede tek basina, % 98 (PLA1 + oi-Amilaz Aspergillus) ya da % oranda önemli oranda yükselttigi görülmektedir.

Tüm dünyada yilda yaklasik olarak 22,1 milyon ton kolza yagi 'üretilmektedir (USDA FAS - 2010). Burada gösterilmis olan enzimatik proses vasitasi ile % 2 - 2,5'Iik bir yag verimi yükselmesinde yilda yaklasik olarak 400 - 550.000 ton daha fazla kolza yagi üretilebilir.

Claims (1)

1. ISTEMLER Sulu faz içerisinde bitkisel yagin em'ulge edilebilirliginin azaltilmasi için metot a) ham bitkisel yagin, en azindan bir fosfolipit ayiran enzimi içeren bir birinci enzim komponentini ve fosfolipit ayirmayan en azindan bir enzimi içeren bir ikinci enzim komponentini içeren bir bilesik ile temas ettirilmesi, içerisinde ikinci enzim komponentinde bir 0- AmilaZ'in söz konusu olmasi; b) zamksi maddelerin bitkisel yagdan ayrilmasi, içerisinde a) adimina göre temas ettirmeden önce ham bitkisel yagin su ve/ veya asit ile temas ettirilmesi, fakat 3) adimindan `Önce sulu fazin bir ayriminin meydana gelmemesi, bunun yerine 'önceden kondisyonlanmis ham yagin dogrudan a) adiminda kullanilmasi, adimlarini içermesidir. Istem 1ie göre metot olup, özelligi; içerisinde birinci enzim komponentinin, Fosfolipaz A1, Fosfolipaz A2, Fosfolipaz C, Fosfolipaz B, Fosfolipaz Dve Asil transferazrdan olusan gruptan seçilmesidir. Istem 2'ye göre metot olup, özelligi; Fosfolipaz A1 'In Thermomyces Ianuginosus, Fusarium oxysporium, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, Pseudomonas spezies, Domuz pankreasi ya da Sigir pankreasi menseli olmasi; ve/ veya bagimsiz olarak Fosfolipaz A2'nin Domuz pankreasi, Sigir pankreasi, Streptomyces violaceoruber, Naja mossambica, Thermomyces Ianuginosus, Fusarium oxysporium, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Clostridium perfringens, Listeria mono- cytogenes ya da Pseudomonas türleri menseli olmasi; ve/ veya bagimsiz olarak Fosfolipaz Cinin Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, Thermomyces Ianuginosus, Fusarium oxysporium, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus ya da Pseudomonas türleri menseli olmasi; ve/ veya bagimsiz olarak Fosfolipaz B'nin Thermomyces Ianuginosus, Fusarium oxysporium, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, Pseudomonas türleri, Domuz pankreasi ya da Sigir pankreasi menseli olmasidir. 4. Istem 2 ya da 3'e göre metot olup, özelligi; Fosfolipaz A1 'in Thermomyces Fosfolipaz A2 'nin Domuz pankreasi, Sigir pankreasi, Streptomyces violaceoruber ya da Naja mossambica menseli olmasi, ve/ veya bagimsiz olarak Fosfolipaz Crnin Bacillus cereus, Clostridium perfringens ya da Listeria monocytogenes menseli olmasidir. . 1 ila 3 arasindaki istemlerden birisine göre metot olup, 'özelligi, içerisinde alfa Amilaz alfa(1-4) glikosidik, alfa(1-2) glkosidik, alfa(1-6) glikosidik, beta (1-3) glikosidik, beta(1-4) glikosidik ve/ veya beta(1-6) glikosidik baglari ayirmasidir. . Onceki istemlerden birine göre metot olup, özelligi, içerisinde alfa-AmilaZ'in Bacillus sp., Bacillus subtilis, Bacillus Iicheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus stearothermo-philus, Pseudomonas aeroginosus, Pseudomonas fluorescens, Aspergillus oryzae, ya da Aspergillusniger'den bir alfa-Amilaz olmasidir. . Onceki istemlerden birisine göre metot olup, özelligi, içerisinde birinci enzim komponentinin enzim aktivitesinin ikinci enzim komponentinin enzim aktivitesine olan oraninin 0,01 : 6 units/g yag ila 6 : 0,01 units/g yag arasinda olmasidir. . Onceki istemlerden birisine göre metot olup, 'özelligi, içerisinde birinci ve/ veya ikinci enzim komponentinin tasiyici formda mevcut olmasidir. . Onceki istemlerden birisine göre metot olup, özelligi, içerisinde ayni zamanda zamksi maddeler ile birlikte birinci ve/ veya ikinci enzim komponentinin bitkisel yagdan ayrilmasidir. 10. Onceki istemlerden birisine göre metot olup, 'özelligi, içerisinde bitkisel yag yerine bitkisel yag zamksi maddesinin kullanilmasidir.