TR201808486T4 - Bradikinin B1 reseptör ligandlarına karşı antikorlar. - Google Patents

Bradikinin B1 reseptör ligandlarına karşı antikorlar. Download PDF

Info

Publication number
TR201808486T4
TR201808486T4 TR2018/08486T TR201808486T TR201808486T4 TR 201808486 T4 TR201808486 T4 TR 201808486T4 TR 2018/08486 T TR2018/08486 T TR 2018/08486T TR 201808486 T TR201808486 T TR 201808486T TR 201808486 T4 TR201808486 T4 TR 201808486T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
seq
kallidin
antibody
des
nos
Prior art date
Application number
TR2018/08486T
Other languages
English (en)
Inventor
Kominos Dorothea
Zhang Jie
Pritsker Alla
Davison Matthew
Baurin Nicolas
Subramanian Govindan
Chen Xin
Li Han
Original Assignee
Sanofi Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=49261064&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TR201808486(T4) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sanofi Sa filed Critical Sanofi Sa
Publication of TR201808486T4 publication Critical patent/TR201808486T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6843—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2299/00—Coordinates from 3D structures of peptides, e.g. proteins or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/18—Kallidins; Bradykinins; Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Açıklama, Kallidin'i veya des-Arg10-Kallidin'i spesifik olarak bağlayan antikorlar sağlar. Açıklama ayrıca, farmasötik bileşimler aynı zamanda anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlarını kodlayan nükleik asitler, bu tarz antikorları veya bunların fragmanlarını yapmak için rekombinant ekspresyon vektörleri ve konak hücreler sağlar. İn vitro veya in vivo, Kallidin veya des-Arg10-Kallidin aktivitesini modüle etmek veya Kallidin'i veya des-Arg10-Kallidin'i saptamak için açıklamanın antikorlarını kullanmanın yöntemleri ayrıca, açıklama ile de sağlanır. Açıklama ilaveten, des-Argg-Bradikinin'i ve des-Arg10-Kallidin-benzeri peptidi spesifik olarak bağlayan antikorlar yapmanın yöntemlerini sağlar.

Description

TARIFNAME BRADIKININ B1 RESEPTÖR LIGANDLARINA KARSI ANTIKORLAR BULUSUN ALT-YAPISI Bradikinin B1 reseptörü, enflamatuvar hastaligin ve kronik agrinin patojenezinde gösterilmistir. Doku enflamasyonunu ve böbrek fibrözü modüle etme ile, B1 reseptörü ayrica, son-evre böbrek yetmezliginin ana nedenleri olan akut böbrek yaralanmasinin ayni zamanda kr0nik böbrek hastaliklarinin patojenezi ile de iliskilendirilmistir. Insanlarda, bradikinin B1 reseptörünün majör agonistleri kininlerdir. Kininler, kininojen proteinlerinin proteolitik klevajindan üretilen biyoaktif peptitlerdir. Bradikinin B1 reseptörünün majör kinin agonistleri, dekapeptit Kallidin'dir ve (Kallidin'den c-ucu arjininin proteolitik klevaji ile olusturulan) nonapeptit des-Argm-Kallidin'dir. Bundan dolayi, Kallidin'in ve des-Argio-Kallidin'in bradikinin B1 reseptörünü baglamasini inhibe edebilen ajanlar, bradikinin B1 reseptörü-aracin patolojileri tedavi etme veya önleme potansiyeline sahiptir. Bu dogrultuda, bradikinin B1 reseptörü-aracin insan patolojilerinin tedavisinde kullanilmasi için Kallidin'in ve des-Argm-Kallidin'in bradikinin B1 reseptörünü baglamasini inhibe eden yeni ajanlar için teknikte bir ihtiyaç vardir. bradikinini baglayan monoklonal antikorlari açiklar. spesifik bir anti-serumu tarif eder. anti kallidin anti-serumlarini tarif eder. insan nazal mukozasi üzerindeki analjezik etkisini tarif eder. KISA AÇIKLAMA Bulus, Kallidin'i veya des-Argm-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i spesifik olarak baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani ile ilgilidir, burada antikor veya antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: i) asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir agir zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 3 (HCDR3) amino asit dizisini, bir agir zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 2 (HCDR2) amino asit dizisini ve bir agir zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 1 (HCDR1) amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken domeni: a) sirasiyla, SEQ ID NO: 7 [X1Y X2 X3D X4HAM X5Y], burada X1, Y, F veya H'dir, X2, R, D, A, V, L, I, M, F, Y veya W'dir, X3, Y, F, W veya H'dir, X4, D, E veya Y'dir ve X5, D veya E'dir; SEQ ID NO: 8 [YFX1PX2NGNTGYNQKFRGL burada X1, D, R, A, V, L, I, M, F, Y veya W'dir ve X2, Y, D, E, N veya Q'dur; ve SEO ID NO: 9 [GYSFTDYXilYL burada X1, N, W veya Y'dir; b) sirasiyla, SEQ ID NO: 63 [X1EYDGX2YX3X4LDX51, burada X1, W veya F'dir, X2, N'dir veya amino asit degildir; X3, Y veya S'dir, X4, D veya P'dir ve X5, F veya Y'dir; SEQ ID NO: 64 [WX1DPENGDX2X3YAPKFQG1, burada X1, l veya V'dir, X2, T veya S'dir ve X3, G veya D'dir; ve SEO ID NO: 65 [GFNIKDYYX1H1, burada X1, L veya M'dir; c) sirasiyla, d) sirasiyla, e) sirasiyla, f) sirasiyla, SEÇ) ID NO: 48 g) sirasiyla, ii) asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir hafif zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 3 (LCDR3) amino asit dizisini, bir hafif zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 2 (LCDR2) amino asit dizisini ve bir hafif zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 1 (LCDR1) amino asit dizisini içeren bir hafif zincir degisken domeni: h) sirasiyla,SEQ ID NO: 10 [QQ X1 X2S X3P X4T], burada X1, Y, F veya H'dir, X2, Y, F, H veya W'dir, X3, Y, F, T veya H'dir ve X4, W, Y, F, H veya L'dir; SEQ ID NO: 11 [VVASTRX1], burada X1, E, D, Q veya N'dir; ve SEO ID NO: 12 [KSSQSLL X1SSNQKN X2LA], burada X1, W, H, Y veya F'dir ve X2, H veya Y'dir; i) sirasiyla, SEQ ID NO: 66 [QX1X2X38X4PX5T], burada X1, Q veya N'dir, X2, Y, F, D veya H'dir, X3, Y, F, H veya W'dir, X4, Y, F, T veya H'dir ve X5, W, Y, F, H veya L'dir; SEQ ID NO: 67 [X2ASTRX2], burada X1, W veya G'dir ve X2, E, D, Q veya N'dir; ve SEO ID NO: 68 [KSSQSLLX1X2SX3QX4NX5LA], burada X1, W, H, Y veya F'dir, X2, 8 veya G'dir, X3, N veya D'dir, X4, K veya R'dir, X5, H veya Y'dir; j) sirasiyla, SEQ ID NO: 69 [X1QGTHFPYT], burada X1, L veya M'dir; SEO ID NO: 70 [KSSQSLLYSNGX1TYLN], burada X1, K veya E'dir; k) sirasiyla, l) sirasiyla, m) sirasiyla, n) sirasiyla, o) sirasiyla, Bulusun bir uygulamasinda, istem 1'in izole edilmis monoklonal antikoru veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 13'te, 14'te ve 15'te izah edilen HCDR3, HCDR2 ve Seçilen pozisyonlarda bir veya birden fazla amino asit sübstitüsyonu içeren bir agir zincir degisken domeni ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 16'da, 17'de ve 18'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve veya birden fazla amino asit sübstitüsyonu içeren bir hafif zincir degisken domeni. Bulusun bir uygulamasinda, istem 1'in izole edilmis monoklonal antikoru veya bunun antijen baglama fragmani, sirasiyla SEQ ID NO: 24'te ve 30'da izah edilen agir zincir ve hafif zincir degisken domeni amino asit dizilerini içerir. Bulusun bir uygulamasinda, izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani, bir veya birden fazla farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici (tasiyicilar) ile birfarmasötik bilesim halindedir. Bulusun bir uygulamasinda, istem 1'in izole edilmis monoklonal antikoru veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir amino asit dizisine en az %90 özdesligi olan bir agir zincir degisken bölgesi domeni amino asit dizisi ve bir hafif zincir degisken domeni amino asit dizisi: a) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 19 ve 26, b) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 20 ve 27, c) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 21 ve 28, d) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 22 ve 28, e) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 23 ve 29, f) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 24 ve 30, g) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 25 ve 31, h) sirasiyla, SEQ lD NO.'Iari: 38 ve 39, i) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 45 ve 46, j) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 53 ve 54, k) sirasiyla, SEQ lD NO.'Iari: 61 ve 62. Bir uygulamada, istem 1'in izole edilmis monoklonal antikoru veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: degisken domeni ve bir amino asit dizisi içeren bir hafif zincir degisken domeni: a) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 19 ve 26, b) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 20 ve 27, c) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 21 ve 28, d) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 22 ve 28, e) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 23 ve 29, f) sirasiyla, SEQ lD NO.`Iari: 24 ve 30, g) sirasiyla, SEQ lD NO.'Iari: 25 ve 31, li) sirasiyla, SEQ lD NO.'Iari: 38 ve 39, i) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 45 ve 46, j) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 53 ve 54, k) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 61 ve 62. Bir uygulamada, izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 7'de, 8'de ve 9'da izah edilen konsensüs HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve b) Sirasiyla SEQ ID NO.`Iari: 10'da, 11'de ve 12'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. Bir uygulamada, izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 13'te, 14'te ve 15'te izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 16'da, 17'de ve 18'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. Bulusun bir uygulamasinda, izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 32'de, 33'te ve 34'te izah edilen HCDRS, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve b) sirasiyla SEO ID NO.'Iari: 35'te, 36'da ve 37'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. Bulusun bir uygulamasinda, istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i spesifik olarak baglamayan izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani, burada antikor veya antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 40'ta, 41'de ve 42'de izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 43'te, 17'de ve 44'te izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. Bulusun bir uygulamasinda, izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 47'de, 48'de ve 49'da izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve b) Sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 50'de, 51'de ve 52'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. Bulusun bir uygulamasinda, izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 55'te, 56'da ve 57'de izah edilen HCDRB, HCDRZ ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 58'de, 59'da ve 60'ta izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. Mevcut basvuru ilaveten, anti-Kallidin ve des-Argm-Kallidin antikorlarini kodlayan nükleik asitler, bu tarz antikorlari veya bunlarin fragmanlarini yapmak için rekombinant ekspresyon vektörleri ve konak hücreler saglar. In vitro veya in vi'vo, Kallidin'i ve des- Argio-Kallidin'i saptamak için veya Kallidin ve des-Arg1o-Kallidin aktivitesini modüle etmek için açiklamanin antikorlarini veya bunlarin fragmanlarini kullanmanin yöntemleri de açiklanir. Mevcut basvuru ayrica, des-Argg-Bradikinin'i ve des-Argm- Kallidin-benzeri peptidi spesifik olarak baglayan antikorlar yapmanin yöntemlerini de açiklar. Bu dogrultuda, bir yönünde, mevcut açiklama asagidaki sekilde olan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmanini saglar: a) spesifik olarak Kallidin'i veya des-Argm-Kallidin'i baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan; b) Kallidin'i veya des-Argw-Kallidin'i 1x10'10 M'den daha az olan bir KD ile spesifik olarak baglayan; c) Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i 1)(10'4 s-1'den daha az olan bir Kaynima ile spesifik olarak baglayan veya (:1) Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan ve bradikinin B1 reseptörünü baglamayi inhibe eden. Bir uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, Kallidin'in veya des- Argqo-Kallidin'in N-ucu Lizin rezidüsünü baglar. Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, Kallidin'in veya des-Arg10-Kallidin'in bir bradikinin-1 reseptörünü baglamasini inhibe eder. Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, fare Kallidin- benzeri peptidini (KLP) spesifik olarak baglar. Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden domeni içerir: a) SEQ ID NO: 7 [X1Y X2 X3D X4HAM X5Y], burada X1, Y, F veya H'dir, X2, R, D, A, V, L, I, M, F, Y veya W'dir, X3, Y, F, W veya H'dir, X4, D, E veya Y'dir ve X5, D veya E'dir; b) SEQ ID NO: 63 [X1EYDGX2YX3X4LDX51, burada X1, W veya F'dir, X2, N'dir veya amino asit degildir; X3, Y veya S'dir, X4, D veya P'dir ve X5, F veya Y'dir; g) SEQ ID NO:55. Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir HCDR2 amino asit dizisini içerir: a) SEQ ID NO: 8 [YFX1PX2NGNTGYNQKFRG1, burada X1, D, R, A, V, L, I, M, F, Y veya W'dir ve X2, Y, D, E, N veya Q'dur; b) SEQ ID NO: 64 [WX1DPENGDX2X3YAPKFQG1, burada X1, l veya V'dir, X2, T veya S'dir ve X3, G veya D'dir; d) SEQ lD NO:33; Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir HCDR1 amino asit dizisini içerir: a) SEQ ID NO: 9 [GYSFTDYX1IY], burada X1, N, W veya Y'dir; burada X1, L veya M'dir; Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir LCDR3 amino asit dizisini içeren bir hafif zincir degisken domeni içerir: a) SEQ ID NO: 10 [QQ X1X2S X3P X4T], burada X1, Y, F veya H'dir, X2, Y, F, H veya W'dir, X3, Y, F, T veya H'dir ve X4, W, Y, F, H veya L'dir: b) SEQ ID NO: 66 [QX1X2X3SX4PX5T], burada X1, Q veya N'dir, X2, Y, F, D veya H'dir, X3, Y, F, H veya W'dir, X4, Y, F, T veya H'dir ve X5, W, Y, F, H veya L'dir; c) SEQ ID NO: 69 [X1QGTHFPYT], burada X1, L veya M'dir; d) SEO ID NO:16; e) SEO ID NO:35; h) SEO ID NO:58. Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir LCDR2 amino asit dizisi içerir: a) SEO ID NO: 11 [WASTRX1], burada X1, E, D, O veya N'dir; b) SEO ID NO: 67 [X2ASTRX2], burada X1, W veya G'dir ve X2, E, D, O veya N'dir; Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir LCDR1 amino asit dizisi içerir: 3) SEO lD NO: 12 [KSSOSLL X1SSNOKN X2LA], burada X1, W, H, Y veya F'dir ve X2, H veya Y'dir; b) SEO ID NO: 68 [KSSOSLLX1X2SX3QX4NX5LA], burada X1, W, H, Y veya F'dir, X2, S veya G'dir, X3, N veya D'dir, X4, K veya R'dir, X5, H veya Y'dir; C) SEQ ID NO: 70 [KSSOSLLYSNGX1TYLN], burada X1, K veya E'dir; b) SEO ID NO:18; d) SEO ID NO:44; Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir LCDR3 amino asit dizisini içeren bir hafif zincir degisken domeni içerir: a) SEQ ID NO: 10 [QQ X1X2S X3P X4T], burada X1, Y, F veya H'dir, X2, Y, F, H veya W'dir, X3, Y, F, T veya H'dir ve X4, W, Y, F, H veya L'dir: b) SEQ ID NO: 66 [QX1X2X38X4PX5T], burada X1, Q veya N'dir, X2, Y, F, D veya H'dir, X3, Y, F, H veya W'dir, X4, Y, F, T veya H'dir ve X5, W, Y, F, H veya L'dir; c) SEQ ID NO: 69 [X1QGTHFPYT1, burada X1, L veya M'dir; d) SEQ ID NO:16; Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir LCDR2 amino asit dizisi içerir: a) SEQ ID NO: 11 [WASTRX1], burada X1, E, D, Q veya N'dir; b) SEO lD NO: 67 [X2ASTRX2], burada X1, W veya G'dir ve X2, E, D, Q veya N'dir; d) SEQ ID NO:36; Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir LCDR1 amino asit dizisi içerir: a) SEQ lD NO: 12 [KSSQSLL XissNQKN X2LA], burada X1, W, H, Y veya F'dir ve X2, H veya Y'dir; b) SEQ ID NO: 68 [KSSQSLLX1X2SX3QX4NX5LA], burada X1, W, H, Y veya F'dir, X2, 8 veya G'dir, X3, N veya D'dir, X4, K veya R'dir, X5, H veya Y'dir; c) SEQ ID NO: 70 [KSSQSLLYSNGXiTYLNL burada X1, K veya E'dir; Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 13'te, 14'te ve 15'te izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino veya birden fazla amino asit sübstitüsyonu içeren bir agir zincir degisken bölgesi içerir. Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 16'da, 17'de ve 18'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino L85, L100 ve L104'ten olusan gruptan seçilen pozisyonlarda bir veya birden fazla amino asit sübstitüsyonu içeren bir hafif zincir degisken bölgesi içerir. Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, SEQ ID NO.Iari: dizisine en az %90 özdesligi olan bir agir zincir degisken bölgesi amino asit dizisini Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, SEQ ID NO.lari: dizisine en az %90 özdesligi olan bir hafif zincir degisken domeni amino asit dizisini Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, SEQ lD NO.Iari: dizisine en az %90 özdesligi olan bir hafif zincir degisken bölgesi amino asit dizisini Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken domeni Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir hafif zincir degisken domeni amino asit dizisini içerir: SEQ ID Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, asagidakilerden Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, sirasiyla SEQ ID lD NO: 61 ve 62'de izah edilen agir zincir ve hafif zincir degisken bölgesi amino asit dizilerini içerir. Bir baska yönünde, açiklama Kallidin'i ve des-Argm-Kallidin'i spesifik olarak baglayan bir antikor veya bunun antijen baglama fragmanini saglar, burada antikor veya bunun antijen baglama fragmani, Kallidin'i ve des-Argm-Kallidin'i baglamak için sirasiyla SEQ 53 ve 54'te veya SEQ ID NO: 61 ve 62'de izah edilen agir zincir ve hafif zincir degisken bölgesi amino asit dizilerini içeren bir antikor ile rekabet eder. Bir baska yönünde, açiklama Kallidin'i veya des-Argw-Kallidin'i baglamak için önceki istemlerin herhangi birinin antikoru ile rekabet eden ve Bradikinin'i veya desArgg- Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmanini saglar. Bir baska yönünde, açiklama Kallidin'in (KD) veya desArg10-Kallidin'in (DAKD), KD'nin veya DAKD'nin Prolin 4'ünde bir tip Il siki dönüs içeren bir Pro4 kivrilma konformasyonunu benimseyen bir konformasyonel epitopunu spesifik olarak baglayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmanini saglar). Bir uygulamada, KD'nin veya DAKD'nin Pro 4 kivrilma konformasyonu ilaveten, amino asitlerin hidrofobik yan Zincirlerini bir uzaysal olarak istifleme modunda hizalayan bir sigmoid sekilli amino asit tekrarlari içerir. Bir baska uygulamada, antikor veya bunun antijen baglama fragmani içerir (a) spesifik olarak Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i baglar, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamaz; b) Kallidin'i veya des- Argio-Kallidin'i 1x10`10 M'den daha az olan bir KD ile spesifik olarak baglar; c) Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i 1x104 5'1'den daha az olan bir Kay,"ma ile spesifik olarak baglar; veya d) Kallidin'i veya des-Argm-Kallidin'i spesifik olarak baglar ve bradikinin B1 reseptörünü baglamayi inhibe eder. Bir baska yönünde, antikor veya antijen baglama fragmani, bir tanisal veya terapötik ajana konjuge edilir. Bir baska yönünde, açiklama, açiklamanin antikorunun veya bunun antijen baglama fragmaninin amino asit dizisini kodlayan izole edilmis nükleik asit saglar. Bir baska yönünde, açiklama, açiklamanin nükleik asidini içeren rekombinant ekspresyon vektörü saglar. Bir baska yönünde, açiklama, açiklamanin rekombinant ekspresyon vektörünü içeren bir konak hücre saglar. Bir baska yönünde, açiklama, Kallidin'i ve des-Argm-Kallidin'i spesifik olarak baglayan bir antikoru üretmenin, açiklamanin konak hücresini Kallidin'i ve des-Arg10-Kallidin'i spesifik olarak baglayan bir antikorun konak hücre tarafindan üretildigi kosullar altinda kültürlemeyi içeren bir yöntemini saglar. Bir baska yönünde, açiklama, açiklamanin antikorunu veya bunun antijen baglama fragmanini ve bir veya birden fazla farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici içeren bir farmasötik bilesim saglar. Bir baska yönünde, açiklama bir hastaligi veya bozuklugu, Kallidin veya des-Argm- Kallidin-iliskili hastaligi veya bozuklugu tedavi etmek için bir yöntem saglar, yöntem buna ihtiyaci olan bir süjeye açiklamanin farmasötik bilesimini uygulamayi içerir. Bir uygulamada, hastalik veya bozukluk, kronik agridir. Bir baska yönünde, açiklama des-Argg-Bradikinin'i ve des-Argio-Kallidin-benzeri peptidi spesifik olarak baglayan bir antikoru üretmenin asagidakileri içeren bir yöntemini saglar: bir hayvani bir peptidi içeren bir immünojen ile immünize etme, burada peptit SEQ ID NO: 11'de izah edilen amino asit dizisinden olusur ve burada peptidin amino ucu arjinini bir baglayici kisim yoluyla bir tasiyici kisma dolayli olarak kuple edilir, böylece des-Argg-Bradikinin'i, des-Argio-Kallidin'i ve des-Argio-Kallidin-benzeri peptidi spesifik olarak baglayan bir antikor hayvanin immün sistemi tarafindan üretilir. Bir baska uygulamada, yöntem ilaveten hayvandan antikoru, antikoru kodlayan bir nükleik izole ediciyi veya antikoru eksprese eden bir immün hücreyi izole etmeyi içerir. Bir uygulamada, tasiyici kisim, bir proteindir. Bir baska uygulamada, protein, Keyhole limpet hemosiyanindir (KLH). Bir baska uygulamada, burada baglayici kisim, [GIy-Gly- Gly]n içerir, burada n, en az 1'dir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, EE1 antikorunun kinin peptitlerini baglamasini gösteren ELISA analizlerinin sonuçlarini gösterir. Sekil 2, F151 antikorunun diferansiyel tarama kalorimetrisi ölçümlerinin sonuçlarini gösterir. Sekil 3, mürin ve hümanize F151 antikorunun degisken bölgelerinin amino asit dizisi hizalamalarini gösterir. Homolog rezidüler "+" Isareti ile belirtilirken ve homolog- olmayan rezidüler bos birakilirken, tüm özdes rezidüler hizalamada listelenir. Sekil 4, F151 antikoru/kallidin kompleksinin antijen baglama yerinin bir elektron yogunluk haritasini gösterir. Sekil 5, F151 antikoru/des-ArgiO-Kallidin k0mpleksinin antijen baglama yerinin bir elektron yogunluk haritasini gösterir. Sekil 6, kallidine baglanmis F151'in Fv alt-biriminin bir serit ve çubuk temsilini gösterir. Sekil 7, açiklamanin emsal mürin anti-kallidin antikorlarinin hafif zincir degisken bölgelerinin bir amino asit dizisi hizalamasini gösterir. Kallidin ile etkilesime giren amino asit rezidüleri yildiz isaretleri ile isaretlenir. Sekil 8, açiklamanin emsal mürin anti-kallidin antikorlarinin agir zincir degisken bölgelerinin bir amino asit dizisi hizalamasini gösterir. Kallidin ile etkilesime giren amino asit rezidüleri yildiz isaretleri ile isaretlenir. Sekil 9, EE1 antikorunun formalin-indüklü akut enflamatuvar agri üzerindeki etkisini gösteren in vivo deneylerin sonuçlarini gösterir. Sekil 10, EE1 antikorunun CFA-indüklü mekanik hipersensitivite üzerindeki etkisini gösteren in vivo deneylerin sonuçlarini gösterir. Sekil 11, EE1 antikorunun CFA-Indüklü termal hipersensitivite üzerindeki etkisini gösteren in vivo deneylerin sonuçlarini gösterir. Sekil 12, EE1 antikorunun CCI-indüklü mekanik hipersensitivite üzerindeki etkisini gösteren in vivo deneylerin sonuçlarini gösterir. Sekil 13, EE1 antikorunun CCI-indüklü termal hipersensitivite üzerindeki etkisini gösteren in vi'vo deneylerin sonuçlarini gösterir. Sekil 14, koyu ve alti çizili sekilde ortaya çikarilan diziler olarak sunulan restriksiyon DNA endonükleazi yerleri ile hümanize F151 varyanti HC3a/LC3a üretmek için VL ve VH ekspresyon yapilarinin sematik haritalarini gösterir. Panel A, hafif zinciri gösterir ve Panel B, agir zinciri gösterir. Sekil 15, F151 agir zincir (A) ve hafif zincir (B) amino asit dizilerinin en yakin insan germ-hatti amino asit dizileri ile bir hizalanmasini gösterir. Sekil 16, F151 agir zincirinin (A) ve hafif zincirinin (B) VH1 alt-familyasinin bir agir zincir Iokusu (1-08 & 1-18) ve hafif zincir (V IV-BS) lokusu ile bir hizalanmasini gösterir. CDR bölgeleri ve Vernier bölgeleri koyu renkte gösterilir ve hümanizelestirme mutasyonlarinin alti çizilidir. Sekil 17, Prolin 4'te bir tip II siki dönüs içeren F151 antikoruna (C) baglanmis sekilde kallidin'in (KD) ana zincir polipeptit omurgasi konformasyonunun (A) sekonder ve (B) tersiyer yapisini gösterir. DETAYLI AÇIKLAMA Mevcut açiklama, Kallidin'i ve des-Argm-Kallidin'i spesifik olarak baglayan ve bradikinin B1 reseptörünü baglamayi önleyen antikorlar saglar. Bu tarz antikorlar, Kallidin ve des- Argqo-Kallidin-iliskili hastaligi veya bozukluklari (örnegin, agriyi) tedavi etmek için özellikle yararlidir. Açiklama ayrica, farmasötik bilesimler ayni zamanda anti-Kallidin ve des-Argqo-Kallidin antikorlarini kodlayan nükleik asitler, bu tarz antikorlari veya bunlarin fragmanlarini yapmak için rekombinant ekspresyon vektörleri ve konak hücreler de saglar. In vitro veya in vivo, Kallidin'i ve des-Argio-Kallidin'i saptamak için veya Kallidin ve des-Argm-Kallidin aktivitesini modüle etmek için açiklamanin antikorlarini kullanmanin yöntemleri ayrica, açiklama tarafindan da kapsanir. l. Tanimlar Mevcut açiklamanin daha kolay bir sekilde anlasilabilmesi için, belirli terimler ilk defa tanimlanir. Burada kullanildigi sekliyle, "Kallidin" terimi, KRPPGFSPFR (SEO lD NO: 1) amino asit dizisini içeren veya bundan olusan bir peptidi ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, "des-Argm-Kallidin" terimi, KRPPGFSPF (SEQ ID NO: 2) amino asit dizisini içeren veya bundan olusan bir peptidi ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, "fare Kallidin'i" veya "Kallidin-benzeri peptit" terimi, peptidi ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, "fare des-Argio-Kallidin'i" veya " des-Arg1oKallidin-benzeri Burada kullanildigi sekliyle, "Bradikinin" terimi, RPPGFSPFR (SEQ ID NO: 5) amino asit dizisini içeren veya bundan olusan bir peptidi ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, " des-Argg-Bradikinin" terimi, RPPGFSPF (SEQ ID NO: 6) amino asit dizisini içeren veya bundan olusan bir peptidi ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, "antikor" terimi, dört polipeptit zinciri, disülfit baglar ile karsilikli-baglanmis iki agir (H) zincir ve iki hafif (L) zincir, içeren immünoglobülin molekülleri ayni zamanda bunlarin multimerlerini (örnegin, IgM) ifade eder. Her bir agir zincir, (VH veya VH olarak kisaltilmis olan) bir agir zincir degisken bölgesi ve bir agir zincir sabit bölgesi (CH veya CH) içerir. Agir zincir sabit bölgesi, üç domen, CH1, CH2 ve CH3, içerir. Her bir hafif zincir, (VL olarak kisaltilmis) bir hafif zincir degisken bölgesi ve bir hafif zincir sabit bölgesi (CL veya CL) içerir. Hafif zincir sabit bölgesi, bir domen (CL1) içerir. VH ve VL bölgeleri ilaveten aralarinda, çerçeve bölgeleri (FR) olarak adlandirilan, daha çok korunmus bölgeler bulunan tamamlayicilik belirleme bölgeleri (CDR'Ier) olarak adlandirilan hiper-degiskenlik bölgelerine alt-bölünebilir. Her bir VH ve VL, amino-ucundan karboksi-ucuna dogru asagidaki sirada dizilmis üç CDR'den ve dört FR'den olusur: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Burada kullanildigi sekliyle, bir antikorun "antijen-baglama fragmani", bir kompleks olusturmak için bir antijeni spesifik olarak baglayan herhangi bir dogal olusumlu, enzimatik olarak elde edilebilen, sentetik veya genetik olarak mühendislik uygulanmis polipeptidi veya glikoproteini içerir. Bir antikorun antijen-baglama fragmanlari, örnegin, herhangi bir uygun standart teknik, örnegin, proteolitik sindirme veya antikor degisken ve opsiyonel olarak sabit domenlerini kodlayan DNA'nin manipülasyonunu ve ekspresyonunu içeren rekombinant genetik mühendisligi teknikleri, kullanilarak tam antikor moleküllerinden, türetilebilir. Antikor-baglama kisimlarinin sinirlayici-olmayan örnekleri asagidakileri içerir: (i) Fab fragmanlari; (ii) F(ab`)2 fragmanlari; (iii) Fd fragmanlari; (iv) Fv fragmanlari; (v) tek-Zincirli Fv (scFv) molekülleri; (vi) dAb fragmanlari; ve (vii) bir antikorun hiper-degisken bölgesini (örnegin, bir izole edilmis tamamlayicilik belirleme bölgesini (CDR)) taklit eden amino asit rezidülerinden olusan minimal tanima birimleri. Baska mühendislik uygulanmis moleküller, örnegin, diabodiler, triabodiler, tetrabodiler ve minibodiler, de "antijen-baglama fragmani" ifadesi içinde kapsanir. Burada kullanildigi sekliyle, "CDR" veya "tamamlayicilik belirleme bölgesi" terimi, hem agir hem de hafif zincir polipeptitlerinin degisken bölgesi içinde bulunan bitisik-olmayan antijen birlestirme yerleri anlamina gelir. Bu özel bölgeler Kabat et al., J. Biol. Chem. tanimlar, birbiri ile karsilastirildiginda amino asit rezidülerinin kesisen veya alt- kümelerini içerir. Yukarida alinti yapilan referanslarin her biri ile tanimlandigi üzere CDR'Ieri kapsayan amino asit rezidüleri karsilastirma için izah edilir. Açiklamanin bir uygulamasinda, "CDR" terimi, dizi karsilastirmalarina göre, Kabat tarafindan tanimlandigi sekilde bir CDR'dir. Burada kullanildigi sekliyle, "çerçeve (FR) amino asit rezidüleri" terimi, bir lg zincirinin çerçeve bölgesi içindeki amino asitleri ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, "çerçeve bölgesi" veya "FR bölgesi" terimi, degisken bölgenin parçasi olan, ancak (örnegin, CDR'Ierin Kabat tanimlamasi kullanilarak) CDR'Ierin parçasi olmayan, amino asit rezidülerini içerir. Bundan dolayi, bir degisken bölge çerçevesi, yaklasik 100-120 amino asit uzunlugundadir, ancak yalnizca, CDR'Ierin disindaki bu amino asitleri içerir. Burada kullanildigi sekliyle, "spesifik olarak baglar" terimi, bir antikorun veya bunun bir baglama yetisini ifade eder. Terim ayrica, bir antikorun veya bunun bir antijen-baglama fragmaninin bir antijeni bunun bir spesifik-olmayan antijen için afinitesine kiyasla en az iki-kat daha büyük olan bir afinite ile baglama yetisini de kapsanmasini ifade eder. Bununla birlikte, bir antikorun veya bunun bir antijen-baglama fragmaninin dizi açisindan ilgili olan iki veya daha fazla antijeni (örnegin, Kallidin veya des-ArgiO- Kallidin ve fare Kallidin'i veya des-Arg10-Kallidin) spesifik olarak baglayabildigi anlasilmalidir. Burada kullanildigi sekliyle, "antijen" terimi, bir antikor veya bunun antijen baglama fragmani tarafindan taninan baglama yerini veya epitopu ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, "vektör" teriminin, buna baglanmis olan bir baska nükleik asidi tasiyabilen bir nükleik asit molekülünü ifade etmesi amaçlanir. Vektörün bir tipi, içine ilave DNA segmentlerinin baglanabildigi bir dairesel çift sarmalli DNA kivrimini ifade eden bir "plazmid'dir". Vektörün bir baska tipi, viral vektördür, burada ilave DNA segmentleri, viral genom içine baglanabilir. Belirli vektörler (örnegin, bir bakteriyel replikasyon orijinine sahip olan bakteriyel vektörler ve epizomal memeli vektörleri), içine bunlarin uygulandigi bir konak hücre içinde otonom replikasyon yapabilir. Diger vektörler (örnegin, epizomal-olmayan memeli vektörleri), konak hücre içine uygulama üzerine bir konak hücrenin genomuna entegre edilebilir ve böylece konak genomu ile birlikte kopyalanir. Dahasi, belirli vektörler, bunlarin operatif olarak baglandigi genlerin ekspresyonunu yönlendirebilir. Bu tarz vektörler burada "rekombinant ekspresyon vektörleri" (veya basitçe, "ekspresyon vektörleri") olarak ifade edilir. Genel olarak, rekombinant DNA tekniklerinde yararli ekspresyon vektörleri siklikla plazmidler formundadir. "Plazmid" ve i'vektör" terimleri birbiri yerine kullanilabilir. Bununla birlikte, açiklamanin, es-deger fonksiyonlar görevi gören, ekspresyon vektörlerinin bu tarz diger formlarini, örnegin, viral vektörleri (örnegin, replikasyon kusurlu retrovirüsleri, adenovirüsleri ve adeno-iliskili virüsleri), içermesi amaçlanir. Burada kullanildigi sekliyle, "konak hücre" teriminin, içine bir rekombinant ekspresyon vektörünün uygulandigi bir hücreyi ifade etmesi amaçlanir. Bu terimin, yalnizca söz konusu özel hücreyi degil ayni zamanda bu tarz bir hücrenin projenisini de ifade etmesinin amaçlandigi anlasilmalidir. Belirli modifikasyonlar mutasyondan veya çevresel etkilerden dolayi takip eden nesillerde gerçeklesebildiginden, bu tarz projeni, gerçekte, ana hücreye özdes olamayabilir, ancak hala burada kullanildigi sekliyle Burada kullanildigi sekliyle, "tedavi etmek", "tedavi etme" ve "tedavi" terimi, burada tarif edilen terapötik veya önleyici tedbirleri ifade eder. "Tedavi" yöntemleri, bir süjeye, örnegin, bir Kallidin ve des-Arg10-Kallidin-iliskili hastaliga veya bozukluga (örnegin, bir enflamatuvar hastaliga) sahip olan veya bu tarz bir hastaliga veya bozukluga sahip olmaya yatkin olan bir süjeye, hastaligin veya bozuklugun veya reküran hastaligin veya bozuklugun bir veya birden fazla semptomunu önlemek, kürlemek, geciktirmek, bunlarin siddetini azaltmak veya bunlari sagaltmak için veya bir süjenin sag kalimini bu tarz tedavinin yoklugunda beklenenin ötesine uzatmak için mevcut açiklamanin bir antikorunu veya antijen baglama fragmanini uygulamayi kullanilir. Burada kullanildigi sekliyle, "Kallidin veya des-Arg1o-Kallidin-iliskili hastalik veya bozukluk" terimi, burada Kallidin'in veya des-Arg10-Kallidin'in degistirilmis düzeylerinin veya aktivitesinin bulundugu hastalik hallerini ve/veya bir hastalik hali ile iliskili semptomlari içerir. Emsal Kallidin veya des-Argio-Kallidin-iliskili hastaliklar veya bozukluklar, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, agriyi ve fibrözü, içerir. Burada kullanildigi sekliyle, "etkili miktar", Kallidin'i veya des-Argm-Kallidin'i baglayan bir antikorun veya bunun bir antijen baglama fragmaninin, bir süjeye uygulandiginda, burada tarif edildigi üzere, bir Kallidin veya des-Argm-Kallidin-iliskili hastaligin veya bozuklugun tedavisini, prognozunu veya tanisini etkilemek için yeterli olan miktarini ifade eder. Bir terapötik olarak etkili miktar, tedavi edilmekte olan süjeye ve hastalik durumuna, süjenin agirligina ve yasina, hastalik durumunun siddetine, uygulama yoluna ve teknikte normal uzmanligi olan bir kisi tarafindan kolaylikla belirlenebilen, benzerlerine bagli olarak çesitlilik gösterecektir. Uygulama için dozajlar, örnegin, açiklamaya göre bir antikorun veya bunun antijen baglama fragmaninin yaklasik 1 ng'i yaklasik 1.000 mg'i, yaklasik 10 mg'i ila yaklasik 100 mg'i, araliginda olabilir. Dozaj rejimleri optimum terapötik yaniti saglamak için ayarlanabilir. Bir etkili miktar ayrica, burada bir antikorun veya bunun antijen baglama fragmaninin herhangi bir toksik veya zararli etkisinin (yani, yan etkisinin) minimuma indirildigi veya yararli etkilerin bunlara agir bastigi bir miktardir. Burada kullanildigi sekliyle, "süje" terimi, herhangi bir insani veya insan-olmayan hayvani içerir. Burada kullanildigi sekliyle, "epitop" terimi, bir antikor molekülünün degisken bölgesi içinde bir paratop olarak bilinen bir spesifik antijen baglama yeri ile etkilesime giren bir antijenik belirleyiciyi ifade eder. Bir tek antijeni, birden fazla epitopa sahip olabilir. Böylelikle, farkli antikorlar bir antijen üzerindeki farkli alanlari baglayabilir ve farkli biyolojik etkilere sahip olabilir. Epitoplar, konformasyonel veya lineer olabilir. Bir konformasyonel epitop, lineer polipeptit zincirinin farkli segmentlerinden uzaysal olarak yan yana koyulmus amino asitler tarafindan üretilir. Bir lineer epitop, bir polipeptit zinciri içinde bitisik amino asit rezidüleri tarafindan üretilendir. Bu spesifikasyonda ve eklenmis istemlerde kullanildigi üzere, baglam açik bir sekilde aksini söylemedikçe, "bir", "biri" ve "bu" tekil formlarinin çogul göndergeleri içerdigi burada bildirilir. ll. Anti-Kallidin veya des-Argm-Kallidin Antikorlari Bir yönünde, açiklama Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan antikorlar veya bunlarin antijen baglama fragmanlarini saglar. Açiklamanin antikorlarinin emsal VH, VL ve CDR amino asit dizileri Tablo 1'de izah edilir. Tablo 1: Emsal anti-Kallidin veya des-Argm-Kallidin antikorlarinin VH, VL ve CDR amino asit dizileri. Antikor Klonu Dizi SEQ ID X1, Y, F veya H'dir; X2, R, D, A, V, L, I, M, F, Y veya W'dir; Antikor Klonu F151 HCDR2 konsensüs F151 HCDR1 konsensüs F151 LCDR3 konsensüs F151 LCDR2 konsensüs F151 LCDR1 konsensüs F151 HCDR3 F151 HCDR2 F151 HCDR1 F151 LCDR3 Dizi SEO ID X3, Y, F, W veya H'dir; X4, D, E veya Y'dir; ve X5, D veya E'dir. YFX1PX2NGNTGYNQKFRG 8 X1, D, R, A, V, L, I, M, F, Y veya W'dir; ve X2, Y, D, E, N veya Q'dur. GYSFTDYX1IY 9 burada X1, N, W veya Y'dir. X1, Y, F veya H'dir; X2, Y, F, H veya W'dir; X3, Y, F, T veya H'dir; ve X4, W, Y, F, H veya L'dir. WASTRX1 11 burada, X1, E, D, Q veya N'dir. KSSQSLLX1SSNQKNX2LA 12 X1, W, H, Y veya F'dir; ve X2, H veya Y'dir. YYRYDDHAMDY 13 YFDPYNGNTGYNQKFRG 14 GYS FTDYNIY 15 QQYYSYPWT 1 6 Antikor Klonu F151 LCDR2 F151 LCDR1 F151 VH F151 hümanize HC1 F151 hümanize HCZa F151 hümanize HCZb F151 hümanize HCZC F151 hümanize HCSa F151 hümanize HC3b F151 VL WASTRES KSSQSLLYSSNQKNYLA EIÇLQQLGPEL'fKPC-TSX" WJEÂQSEGK .TLF'i-"TGTF'DF'TIIGHG'T . . HFPIFIIMHT. TSDDSATE'YCI-LLIY`1`R'i'DD:AMDI'/~JGÇGTSZ Tvfh. EIÇLVQ1-GPE'.'I~'.KPGASYIIVSCPIASGYS "'WVI* DSP: -K SLE"IG'L'FDPT'V`11'IG`11-."["FFCI'IATLT"3:I ÃFHHLSZL TSEDSA :'.YC-'. '.PIYY fD..D AMDIWGÇGTS. T QIÇLV C-GAEZ'.'I\'KPC-ÄS\I' (JT. FI'TG'~"`DF"'i"If'-H '.'qYî'__ '4 . . TSEESAS.YC`-L.IY`1`R'L'DDI~IÃD*ID± JGÇGTS. QIÇIV :GAE ZIKPGÄS". SGS SF T1112" GLE'."IG "DPI -îGIî'IGYI #KFFURATJTEYLJ STSIAYl-I' RILI):)`|'."- "î `i(,:`..h Y "H DUZ". :".'I II) i' !(5015 ll.. l GLEZ'MG`` DPYIIGNTSYII RIHIITI' i aSGiJJL' ;;`Ill;:' ' (FRGR'J `IT- ITTITSTÇTAYHELR; L Antikor Klonu F151 hümanize LC1 Hümanize LCZa F151 hümanize LCZb F151 hümanize LC3a F151 hümanize LC3b 821 HCDR3 821 HCDR2 821 HCDR1 821 LCDR3 821 LCDR2 PL: iwA: TREzsvpjiRFîGSGÇSTD: TLîzssxii 00"."1'?YÖI'JTFGGGTI'LFT3' EDIP. IYYC gQY `;` SYPi-VIE'GGGIKLE I I\' DI`HTQ-JDD_:JSLJEP .IINCKS ED ;VY_CQQ_YQYIJTF-QGT_VEZS LL'ES SI'QKIJ'L' LA'" 'Q ÖGTI'FTTJ T ?KIT ÇA 8D' -V`1_CQQ LS`1`:. '-JTFC- -QGTE VELI? WEYDGYYDLDY WIDPENGDTGYARKFQG GFNIKDYYLH LQGTH FPYT 3335Antikor Klonu B21 LCDR1 B21 VH B21 VL 063 HCDR3 063 HCDR2 063 HCDR1 063 LODR3 063 LCDR2 063 LCDR1 063 VH 063 VL KSSQSLLYSNGKTYLN GLEI"IGIGIDPEI1GB'ISYARI'IFCGKÂTI-ITA:T33I'IV`1'LI-IL33L DV" `[ ITQI?LT;3VT : sgpis ILCKS:::SLL'ISNGZITYLîJWLLQ RP(-Icj.'.'P`-`E).I.I `i'ICv'III",l).":Ya-'PIîI-"î".F'1.I i'u'i-iii-i DLG"YYÇLQGTHFP'i'TFGC-GTELEI]~". E I RSKSNNYATHYAESVKG G FTFSNYWMN WASTRES KSSQSLLYSSDQRNYLA GLEI'IVAEIRJ.. .A - . GRFTI-.\DD:I\I32I"{LÇÇ :1-1 lll.I`r`-VI".IJ "G l YTL` l (EVI) .(5l)`1'V`îê(_G`I`IÇ1,"|"'.'Ii."i QRCFQ ICLL: `HÜR Ç TRE: SVPDRFIGSGC SIDE-ILI : SSVI'IÄ ED" 73"."i'1"COOVTCYÜ'i'TFGSGT'~`I.F.-I FEYDGNYSPLDF WVDPENGDSDYAPKFQ GFNIKDYYMH QNDHSYPLT GASTRES 414344 Antikor Klonu 154 LCDR1 154 VH 154 VL BZ1/I22/I54 HCDR3 konsensüs KSSQSLLNSGNQKNYLA hi &Ni-LQQLGAE_'IRLJL-ÃLSL ..LSÇ'IASG: Lil-. GTI'JTGTI"DPTIIGI'II.'IYÃDKF'ÇGVÄTÜ'T ' "i.'T`1F'".'T. DlLITQ_:'SS_SJS.1..1EK.TMS-ÇKS: TSLL. ISGI QKII- LAF-,'12 OH FC OP?? LL:1G~±ÇTRE3I'IP I`E`"^3'("`"TD TLTI.. ?SYSà EDLI-;VYYCQIJS-HSY?LTFC-ÄGTI'LELF' FEYDGNYSPLDF WVDPENGDSDYAPKFQG GFNIKDYYMH MQGTHFPYT KSSQSLLYSNGETYLN r" L-IL'C "11` L'G: [liiî 'JTI III-I'm" Z\` MCP: l) GLE IGI': :DP: 1GB -.3Y.7-.`KE`ÇGKAT TAZT SS. TVYLQFSSL RPGQSPEIRLIYLVSEÂLDSSVPDPFTGIRSSTDFILKIÇTVEÇE DLG' `TTC` IOGT'IFF":`TFGGGTI='I ETI" X1EYDGX2YX3X4LDX5 X1, W veya F`dir; X2, N'dir veya amino asit degildir; X3, Y veya S'dir; 565860 Antikor Klonu BZ1/I22/I54 HCDR2 konsensüs BZ1/I22/I54 HCDR1 konsensüs F151/CGS/I22 LCDR3 konsensüs F151/CE53/I22 LCDR2 konsensüs F151/063/I22 LCDR1 konsensüs X4, D veya P'dir; ve X5, F veya Y'dir. WX1DPENGDX2X3YAPKFQG X1, I veya V'dir; X2, T veya S'dir; ve X3, G veya D'dir. GFNIKDYYX1H burada, X1, L veya M'dir. QX1X2X38X4PX5T X1, Q veya N'dir; X2, Y, F, D veya H'dir; X3, Y, F, H veya W'dir; X4, Y, F, T veya H'dir; ve X5, W, Y, F, H veya L'dir. X2ASTRX2 X1, W veya G'dir; ve X2, E, D, Q veya N'dir KSSQSLLX1X28X3QX4NX5LA X1, W, H, Y veya F'dir; X2, S veya G'dir; X3, N veya D'dir; Antikor Klonu Dizi X4, K veya R'dir; X5, H veya Y'dir. 821/I54 LCDR3 konsensüs X1QGTHFPYT X1, L veya M'dir; BZ1/I54 LCDR2 her ikisi özdes LVSKLDS B21/I54 LCDR1 KSSQSLLYSNGXiTYLN konsensüs burada: X1, K veya E'dir; Belirli uygulamalarda, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, SEQ ID NO: 7, 8, gruptan seçilen bir veya birden fazla CDR bölgesi amino asit dizisi içerir. Diger uygulamalarda, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, sirasiyla asagidakilerden olusan gruptan seçilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino asit dizilerini içerir: d) SEQ ID NO: 40,41 ve 42; e) SEQ ID NO: 47,48 ve 49; Diger uygulamalarda, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, sirasiyla asagidakilerden olusan gruptan seçilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino asit dizilerini içerir: b) SEQ ID NO:16,17 ve 18; e) SEQ ID NO:50, 51 ve 52; Diger uygulamalarda, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, sirasiyla asagidakilerden olusan gruptan seçilen HCDR3, HCDR2, HCDR1, LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino asit dizilerini içerir: Baska uygulamada, açiklama burada açiklanan mürin antikorlardan bir veya birden fazla CDR bölgesi (veya bunlarin konservatif olarak modifiye edilmis varyantlarini) içeren hümanize antikorlar veya bunlarin antijen baglama fragmanlarini saglar. Hümanizasyonun herhangi bir yöntemi, açiklamanin hümanize antikorlarini üretmek için kullanilabilir. Uygun yöntemler burada açiklanir ve Örnek 4'te spesifik olarak emsallendirilir. Özel bir uygulamada, hümanize antikor veya bunun antijen baglama fragmani asagidakileri içerir: sirasiyla 13'te, 14'te ve 15'te izah edilen HCDRB, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino birden fazla amino asit sübstitüsyonu içeren bir agir zincir degisken bölgesi ve/veya sirasiyla 16'da, 17'de ve 18'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino L104'ten olusan gruptan seçilen pozisyonlarda bir veya birden fazla amino asit sübstitüsyonu içeren bir hafif zincir degisken bölgesi (Kabat numaralandirma anlasmasina göre). Diger uygulamalarda, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, SEQ lD NO: 19, Diger uygulamalarda, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, SEO ID NO: 26, dizilerini içerir. Diger uygulamalarda, antikor veya bunun antijen baglama fragmani sirasiyla asagidakilerden olusan gruptan seçilen VH ve VL bölgesi amino asit dizilerini içerir: Belirli uygulamalarda, antikor veya bunun antijen baglama fragmani, SEQ ID NO: 7, 8, CDR bölgesi amino asit dizisi içerir, burada bir veya birden fazla CDR bölgesi amino asit dizisi, en az bir veya birden fazla konservatif amino asit sübstitüsyonu içerir. Mevcut açiklama ayrica, açiklamanin antikorlarinin CDR amino asit dizilerindeki amino asit substitüsyonlari'ni", yani, antikorun antijeni, örnegin, Kallidin'i veya des- Arg10-Kallidin'i, baglamasini feshetmeyen amino asit dizisi modifikasyonlarini, da kapsar. Konservatif amino asit sübstitüsyonlari, bir siniftaki bir amino asidin ayni siniftaki bir amino asit ile sübstitüsyonunu içerir, burada bir sinif, örnegin, bir standart Dayhoff siklik degisim matriksi veya BLOSUM matriksi ile, belirlendigi üzere, dogada bulunan homolog proteinlerdeki ortak fizikokimyasal amino asit yan zinciri özellikleri ve yüksek sübstitüsyon sikliklari ile tanimlanir. Amino asit yan zincirlerinin alti genel sinifi kategorize edilmistir ve asagidakileri içerir: Sinif I (Cys); Sinif II (Ser, Thr, Pro, Ala, Gly): Sinif III (Asn, Asp, Gln, Glu); Sinif IV (His, Arg, Lys): Sinif V (ile, Leu, Val, Met): ve Sinif VI (Phe, Tyr, Trp). Örnegin, bir Asp'nin bir baska sinif III rezidüsü, örnegin, Asn, Gln veya Glu, için sübstitüsyonu bir konservatif sübstitüsyondur. Böylelikle, bir anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikoru içindeki bir tahmin edilen esansiyel- olmayan amino asit rezidüsü tercihen, ayni siniftan bir baska amino asit rezidüsü ile degistirilir. Antijen baglamayi elimine etmeyen amino asit konservatif sübstitüsyonlarini tanimlamanin yöntemleri teknikte iyi bilinir (bakiniz, örnegin, Brummell et al., Biochem. anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari veya bunlarin antijen baglama fragmanini saglar. Bir baska uygulamada, mevcut açiklama, sirasiyla SEQ ID NO: 19 ve 25'te, SEQ ID 61 ve 62'de izah edilen VH ve VL bölgesi amino asit dizilerini içeren bir antikor veya bunun antijen baglama fragmani ile ayni epitopu baglayan ve/veya bununla çapraz rekabet eden anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlarini saglar. Bu tarz antikorlar, örnegin, yüzey plazmon rezonansi (SPR)-temelli kompetisyon analizlerini, içeren rutin kompetisyon baglama analizleri kullanilarak tanimlanabilir. Belirli uygulamalarda, açiklamanin antikorlari Kallidin'in (KD) veya desArg10-Kallidin'in, (DAKD) bir "Pro4 kivrilma" konformasyonuna uyum saglayan bir konformasyonel epitopunu baglar. Sekil 17'de gösterildigi üzere, "Pro 4 kivrilma" konformasyonunun bir özelligi, KD'de veya DAKD'de Prolin 4'te ana zincir polipeptit omurgasindaki bir tip II siki dönüstür. Teknikte uzmanligi olan kisiler tarafindan bilindigi üzere, bir tip II siki dönüs konformasyonu, tipik olarak bir glisin olan X3 rezidüsünün amid N'si ile bir hidrojen bagi olusturan X1 rezidüsünün karbonili ile üç rezidüsü (X1-X2-X3) içerir (bakiniz, burada referans olarak eklenmis olan, Richardson JS. "The anatomy and belirli uygulamalarda, bir tip ll siki dönüs konformasyonu, KD'nin veya DADK'nin Pr03- Pr04-Gly5 motifi ile olusturulur. Daha spesifik uygulamalarda, "Pro 4 kivrilma" konformasyonu ilaveten, KD'nin (1-2 ve 6-9) veya DAKD'nin, bir uzaysal olarak istifleme modunda hidrofobik yan zincirleri hizalayan bir sigmoid sekilli tekrarlara uyum saglayan, kalan amino asitlerinin tümü veya büyük ölçüde tümü ile tanimlanir. Belirli uygulamalarda, açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari bir veya birden fazla modifikasyon içerebilir. Açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10- Kallidin antikorlarinin modifiye edilmis formlari teknikte bilinen herhangi bir teknik kullanilarak yapilabilir. i) Immünojenisiteyi Azaltma Belirli uygulamalarda, açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari veya bunlarin antijen baglama fragmanlari, teknikte-bilinen teknikler kullanilarak bunlarin immünojenisitesini azaltmak için modifiye edilir. Örnegin, antikorlar veya bunlarin fragmanlari, kimerize edilebilir, hümanize edilebilir ve/veya deimmünize edilebilir. Bir uygulamada, açiklamanin bir antikoru veya bunun antijen baglama fragmanlari kimerik olabilir. Bir kimerik antikor, burada antikorun farkli kisimlarinin farkli hayvan türlerinden türetildigi bir antikordur, örnegin, bir mürin monoklonal antikordan türetilen bir degisken bölgeye ve bir insan immünoglobülin sabit bölgesine sahip olan antikorlardir. Kimerik antikorlari veya bunlarin fragmanlarini üretmek için yöntemler teknikte bilinir. Bakiniz, örnegin, tümü bütünüyle burada referans olarak eklenmis olan, 4,816,397. "Kimerik antikorlar'in" üretilmesi için gelistirilen teknikler (Morrison et al., kullanilabilir. Örnegin, bir fare anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikoru molekülünün bir baglama özgüllügünü kodlayan bir genetik dizi, uygun biyolojik aktivitesi olan bir insan antikor molekülünden bir dizi ile birlikte kaynastirilabilir. Burada kullanildigi sekliyle, bir kimerik antikor, burada farkli kisimlarin farkli hayvan türlerinden türetildigi bir moleküldür, örnegin, bir mürin monoklonal antikordan türetilen bir degisken bölgeyi ve bir insan immünoglobülin sabit bölgesine sahip olanlardir, örnegin, hümanize antikorlardir. Bir baska uygulamada, açiklamanin bir antikoru veya bunun antijen baglama fragmani hümanize edilir. Hümanize antikorlar, bir insan-olmayan antikordan bir veya birden fazla tamamlayicilik belirleme bölgesi (CDR'ler) ve bir insan antikor molekülünden çerçeve bölgeleri içeren bir baglama özgüllügüne sahiptir. Siklikla, insan çerçeve bölgeleri içindeki çerçeve rezidüleri, antijen baglamayi degistirmek, tercihen iyilestirmek, için CDR donör antikorundan karsilik gelen rezidü ile sübstüte edilecektir. Bu çerçeve sübstitüsyonlari teknikte iyi bilinen yöntemler ile, örnegin, antijen baglama için önemli olan çerçeve rezidülerini tanimlamak için CDR ve çerçeve rezidüleri etkilesimlerinin modellenmesi ve özel pozisyonlarda olagandisi çerçeve rezidülerini tanimlamak için dizi karsilastirmasi ile tanimlanir (Bakiniz, örnegin, tümü bütünüyle burada referans olarak eklenmis olan, Queen et al., U.S. Pat. No. 5,585,089; ve zincir karmayi (U.S. Pat. No. ,565,332), içeren teknikte bilinen çesitli teknikler kullanilarak hümanize edilebilir. Özel bir uygulamada, immün tanima sürecinde ve immün tanimada antikorun moleküler esnekliginin etkisine dayanan bir hümanizasyon yöntemi kullanilir (bakiniz, protein molekülünün moleküler hareketi ile ilgilidir. Protein esnekligi, bir tam proteinin, bir proteinin bir parçasinin veya bir tek amino asit rezidüsünün birbirinden anlamli sekilde farkli olan konformasyonlarin bir topluluguna uyum saglama yetisidir. Protein esnekligi hakkindaki bilgi, protein X-isini kristalografi deneyleri (bakiniz, örnegin, gerçeklestirme ile veya moleküler dinamikler (MD) simülasyonlari yürütme ile elde edilebilir. Bir proteinin bir MD simülasyonu bir bilgisayarda yapilir ve bir kisinin atomlarin birbirleri ile fiziksel etkilesimlerini hesaplama ile bir zaman periyodu boyunca tüm protein atomlarinin hareketini belirlemesine olanak saglar. Bir MD simülasyonunun çiktisi, simülasyon zaman periyodu boyunca çalisilan proteinin gidis-izidir. Gidis-izi, simülasyon periyodu boyunca periyodik olarak, örnegin, her 1 pikosaniyede (ps) bir, örnek toplanan, ayni zamanda anlik-görüntüler olarak da adlandirilan, protein konformasyonlarinin bir toplulugudur. Anlik-görüntülerin toplulugunu analiz etme ile, bir kisi protein amino asit rezidülerinin esnekligini kantifiye edebilir. Böylelikle, bir esnek rezidü, içinde bu rezidünün yer aldigi polipeptit baglaminda farkli konformasyonlarin bir topluluguna uyum saglayan bir rezidüdür. MD yöntemleri teknikte bilinir, bakiniz, örnegin, Brooks et al. "Proteinsz A Theoretical Perspective of Dynamics, Structure and Thermodynamics" (Wiley, New York, 1988). Bir kaç yazilim, örnegin, Amber (bakiniz, Computational Chemistry" vol. 1:271-177, Schleyer et al., eds. Chichester: John Wiley 12900.) MD simülasyonlarina olanak saglar. Çogu protein kompleksinde, bir görece genis ve düzlemsel gömülmüs yüzey ortaktir ve baglama partnerlerinin esnekliginin, bunlarin birbirine konformasyonel olarak uyum saglamasina olanak saglayarak, bunlarin plastisitesi için orijin sagladigi gösterilmistir protein-protein ara yüzlerinde baskin bir rol oynadigi gösterilmistir. Buna ek olarak, proteinlerin gerçekten çesitli sekillerdeki, boyutlardaki ve bilesimdeki Iigandlari partnerleri tanima yetisinin bir esansiyel bileseni olarak görüldügünü gösteren (Science Esnek rezidüler, büyük olasilikla hafiza B hücreleri tarafindan taninacak olan ve bir immünojenik yaniti tetiklemek için etkilesim alanlarinin bir toplulugunu saglayan çesitli konformasyonlara uyum saglayabilir. Böylelikle, bir antikor çerçeveden çok sayida rezidüyü modifiye etme ile hümanize edilebilir, böylece modifiye edilmis antikor tarafindan gösterilen konformasyonlar ve tanima alanlari toplulugu bir insan antikoru tarafindan uyum saglananlara mümkün oldugu kadar çok benzer. Bu, sinirli sayidaki rezidüyü asagidakiler ile modifiye etme ile basarilabilir: (1) ana mAb'nin bir homoloji modelini insa etme ve bir MD simülasyonu yürütme; (2) esnek rezidüleri analiz etme ve bir insan-olmayan antikor molekülünün en esnek rezidülerinin tanimlanmasi, ayni zamanda büyük olasilikla heterojenligin veya parçalanma reaksiyonunun bir kaynagi olacak olan rezidüleri veya motifleri tanimlama; (3) tanima alanlarinin ana antikor ile en çok benzeyen toplulugunu gösteren bir insan antikorunu tanimlama; (4) mutasyona ugratilacak olan esnek rezidüleri belirleme, büyük olasilikla heterojenligin ve parçalanmanin bir kaynagi olacak olan rezidüler veya motifler ayrica mutasyona da ugratilir; ve (5) bilinen T hücresi veya B hücresi epitoplarinin varligi için kontrol etme. Esnek rezidüler, simülasyon zaman periyodu boyunca su çözücüsünün protein atomlari ile etkilesimine açiklama getiren, bir örtük çözücü modeli kullanilarak burada ögretildigi üzere bir MD hesaplamasi kullanilarak bulunabilir. Esnek rezidüelerin seti, degisken hafif ve agir zincirler ile tanimlandiginda, söz konusu antikorunkine yakindan benzeyen insan agir ve hafif zincir degisken bölgesi çerçevelerinin bir seti tanimlanir. Bu, örnegin, antikor insan germ hatti dizisinin bir veri tabanina karsi esnek rezidülerin seti üzerinde bir BLAST arastirmasi kullanilarak, yapilabilir. Bu ayrica, ana mAb'nin dinamiklerini germ hatti kanonikal yapilarinin bir kütüphanesinin dinamikleri ile karsilastirma ile de yapilabilir. CDR rezidüleri ve komsu rezidüler antijen için yüksek afinitenin korundugunu garanti etmek Için arastirmadan çikarilir. Esnek rezidüler akabinde, degistirilir. Bir kaç insan rezidüsü benzer homolojiler gösterdiginde, seleksiyon ayrica, büyük olasilikla hümanize antikorun çözelti davranisini etkileyen rezidülerin dogasi ile de yönlendirilir. Örnegin, polar rezidüler hidrofobik rezidülere kiyasla açikta kalan esnek kivrimlarda tercih edilecektir. Kararsizligin ve heterojenligin bir potansiyel kaynagi olan rezidüler ayrica, burada CDR'Ier bulunsa bile, mutasyona ugratilir. Bu, sülfoksit olusumu oksijen radikallerinden, asit Iabil baglarin, örnegin, Asp-Pro dipeptidininkilerin, açikta kalan metiyoninler, bir açikta kalan asparajin rezidüsü, akabinde bir küçük amino bulunan deaminasyon yerleri ve N-glikosilasyon yerleri, örnegin, Asn-X-Ser/Thr yeri, içerecektir. Tipik olarak, açikta kalan metiyoninler bir Leu ile sübstüte edilecektir, açikta kalan asparajinler bir glutamin ile veya bir aspartat ile degistirilecektir veya müteakip rezidü degistirilecektir. Glikosilasyon yeri (Asn-X-Ser/Thr) için, Asn veya Ser/Thr rezidüsü degistirileoektir. Elde edilen bilesik antikor dizisi, bilinen B hücresi veya lineer T-hücresi epitoplarinin varligi için kontrol edilir. Bir arastirma, örnegin, halka açik Epitope Data Base (IEDB) (PLos Biol (2005) 3(3)e91) ile, gerçeklestirilir. Bilinen bir epitop bilesik dizi içinde bulundugunda, insan dizilerinin bir baska seti yeniden alinir ve sübstüte edilir. Böylelikle, U.S. Pat. No. 5,639,641lin yeniden-yüzeylendirme yönteminden farkli olarak, hem B-hücresi-aracili hem de T-hücresi-aracili immünojenik yanitlara yöntem ile deginilir. Yöntem ayrica, bazen CDR greftleme ile gözlenen aktivite kaybi meselesini de önler (U.S. Pat. No. 5,530,101). Buna ek olarak, kararlilik ve çözünürlük meseleleri ayrica, düsük immünojenisite, yüksek antijen afinitesi ve iyilestirilmis biyofiziksel özellikler için optimize edilmis bir antikor ile sonuçlanan, mühendislik ve seleksiyon prosesinde de göz önünde bulundurulur. Bazi uygulamalarda, de-immünizasyon ve bir antikorun veya bunun antijen baglama fragmaninin immünojenisitesini azaltmak için kullanilabilir. Burada kullanildigi sekliyle, bunun antijen baglama fragmaninin degistirilmesini içerir (bakiniz, örnegin, VL dizileri analiz edilebilir ve bir insan T hücresi epitopu i'haritasi", tamamlayicilik- belirleme bölgeleri (CDR'Ier) ve dizi içindeki diger anahtar rezidüler ile iliskili olarak epitoplarin Iokasyonunu gösteren her bir V bölgesinden üretilebilir. T hücresi epitopu haritasindan elde edilen münferit T hücresi epitoplari, nihai antikorun aktivitesini degistirmeye yönelik düsük bir riski olan alternatif amino asit sübstitüsyonlarini tanimlamak için analiz edilir. Amino asit sübstitüsyonlarinin kombinasyonlarini içeren bir dizi alternatif VH ve VL dizisi tasarlanir ve bu diziler bunu takiben, burada açiklanan tanisal yöntemlerde ve tedavi yöntemlerinde kullanilmasi için bir dizi Kallidin veya des- ArglO-Kallidin-spesifik antikora veya bunlarin fragmanlarina katilir, bu akabinde fonksiyon için test edilir. Tipik olarak, 12 ile 24 varyant antikor üretilir ve test edilir. Modifiye edilmis V ve insan C bölgeleri içeren tam agir ve hafif zincir genleri akabinde ekspresyon vektörlerine klonlanir ve müteakip plazmidler tam antikorun üretilmesi için hücre hatlarina katilir. Antikorlar akabinde uygun biyokimyasal ve biyolojik analizlerde karsilastirilir ve optimal varyant tanimlanir. ii) Efektör Fonksiyonlar ve Fc Modifikasyonlari Açiklamanin anti-Kallidin veya des-ArgiO-Kallidin antikorlari, bir veya birden fazla efektör fonksiyona aracilik eden bir antikor sabit bölgesi (örnegin, bir lgG sabit bölgesi, örnegin, bir insan lgG sabit bölgesi, örnegin, bir insan IgG1 veya IgG4 sabit bölgesi) içerebilir. Örnegin, komplemanin C1 bileseninin bir antikor sabit bölgesini baglamasi kompleman sistemini aktive edebilir. Komplemanin aktivasyonu, hücre patojenlerinin opsonizasyonunda ve Iizisinde önemlidir. Komplemanin aktivasyonu ayrica, enflamatuvar yaniti da stimüle eder ve ayrica otoimmün hipersensitiviteye de dahil edilebilir. ilaveten, antikorlar Fc bölgesi vasitasiyla çesitli hücreler üzerindeki reseptörleri, bir hücre üzerindeki bir PC reseptörünü (FcR) antikor Fc bölgesi baglamasi üzerindeki bir Fc reseptörü baglama yeri ile, baglar. Antikorun farkli siniflarina spesifik, lgG (gama reseptörlerini), lgE (epsilon reseptörlerini), IgA (alfa reseptörlerini) ve lgM (mu reseptörlerini) içeren çok sayida Fc reseptörü vardir. Antikorun hücre yüzeyleri üzerindeki Fc reseptörlerini baglamasi antikor-kapli parçaciklarin yutulmasini ve parçalanmasini, immün komplekslerin klirensini, antikor-kapli hedef hücrelerin katil hücreler tarafindan Iizisini (antikor-bagimli hücre-aracilik sitotoksisite veya ADCC, olarak adlandirilir), enflamatuvar mediyatörlerin salimini, plasental transferi ve immünoglobülin üretilmesinin kontrolünü içeren çok sayida önemli ve çesitli biyolojik yaniti tetikler. Tercih edilen uygulamalarda, açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari bir Fc-gama reseptörünü baglar. Alternatif uygulamalarda, açiklamanin anti-Kallidin veya des-ArgiO-Kallidin antikorlari, bir veya birden fazla efektör fonksiyondan (örnegin, ADCC aktivitesinden) yoksun olan ve/veya Fc reseptörünü baglayamayan bir sabit bölge içerebilir. Açiklamanin belirli uygulamalari, anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlarini içerir, burada sabit bölge domenlerinin birindeki veya birden fazlasindaki en az bir amino asit arzu edilen biyokimyasal karakteristikleri, örnegin, yaklasik olarak ayni immünojenisitesi olan bir tam, degistirilmemis antikor ile karsilastirildiginda, azaltilmis veya güçlendirilmis efektör fonksiyonlar, kovalent-olmayan bir sekilde dimerize olma yetisi, bir tümörün yerinde lokalize olmaya yönelik arttirilmis yeti, azaltilmis serum yari- ömrü veya arttirilmis serum yari-ömrü, saglamak için silinmistir veya aksi durumda degistirilmistir. Örnegin, burada tarif edilen tanisal yöntemlerde ve tedavi yöntemlerinde kullanilmasi için belirli antikorlar veya bunlarin fragmanlari, bir immünoglobülin agir zincirine benzeyen bir polipeptit zinciri içeren, ancak bir veya birden fazla agir zincir domeninin en az bir kismindan yoksun olan domen silinmis antikorlardir. Örnegin, belirli uygulamalarda, modifiye edilmis antikorun sabit bölgesinin bir tüm domeni silinecektir, örnegin, CH2 domeninin tümü veya parçasi silinecektir. Belirli baska uygulamalarda, anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari, farkli antikor izotiplerinden türetilen sabit bölgeler (örnegin, bir insan IgG1, IgG2, IgGS veya lgG4'ünün ikisinden veya daha fazlasindan sabit bölgeler) içerir. Diger uygulamalarda, anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari, bir kimerik mentese (yani, farkli antikor izotiplerinin mentese domenlerinden, örnegin, bir IgG4 molekülünden bir üst mentese domeninden ve bir IgG1 orta mentese domeninden, türetilen mentese kisimlari içeren bir mentese) içerir. Bir uygulamada, bir anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari, bir insan IgG4 molekülünden bir Fc bölgesi veya bunun kismini ve molekülün çekirdek mentese bölgesinde bir SER228Pro mutasyonu (EU numaralandirmasi) içerir. Belirli anti-Kallidin veya des-ArgfO-Kallidin antikorlarinda, Fc kismi, teknikte bilinen teknikler kullanilarak efektör fonksiyonu arttirmak veya düsürmek için mutasyona ugratilabilir. Örnegin, bir sabit bölge domeninin (nokta mutasyonlari veya baska araçlar yoluyla) silinmesi veya inaktivasyonu, dolasimdaki modifiye edilmis antikorun Fc reseptörü baglamasini azaltabilir, böylece tümör Iokalizasyonunu arttirabilir. Diger durumlarda, mevcut açiklama ile uygun sabit bölge modifikasyonlarinin kompleman baglamayi hafifletmesi ve böylece bir konjuge edilmis sitotoksinin serum yari ömrünü ve spesifik-olmayan birlesmesini azaltmasi olabilir. Sabit bölgenin daha baska modifikasyonlari, disülfit baglantilarini veya arttirilmis antijen özgüllügünden veya esnekliginden dolayi güçlendirilmis lokalizasyona izin veren oligosakkarit kisimlarini modifiye etmek için kullanilabilir. Elde edilen fizyolojik profil, biyoyararlanim ve modifikasyonlarin diger biyokimyasal etkileri, örnegin, tümör Iokalizasyonu, biyo- dagilim ve serum yari-ömrü, gereksiz deneyler olmadan iyi bilinen immünolojik teknikler kullanilarak kolaylikla ölçülebilir ve kantifiye edilebilir. Belirli uygulamalarda, açiklamanin bir antikorunda kullanilan bir FC domeni bir Fc varyantidir. Burada kullanildigi sekliyle, "FC varyanti", bundan söz konusu FC domeninin türetildigi dogal sus Fo domenine kiyasla en az bir amino asit sübstitüsyonuna sahip olan bir Fc domenini ifade eder. Örnegin, burada Fc domeni, bir insan lgG1 antikorundan türetilir, söz konusu insan IgG1 Fc domeninin FC varyanti, söz konusu Fc domenine kiyasla en az bir amino asit sübstitüsyonu içerir. Bir Fc varyantinin amino asit sübstitüsyonu(sübstitüsyonlari) Fc domeni içindeki herhangi bir pozisyonda (yani, herhangi bir EU anlasmasi amino asit pozisyonunda) yer alabilir. Bir uygulamada, FC varyanti, bir mentese domeninde veya bunun kisminda yer alan bir amino asit pozisyonunda bir sübstitüsyon içerir. Bir baska uygulamada, Fc varyanti, bir CH2 domeninde veya bunun kisminda yer alan bir amino asit pozisyonunda bir sübstitüsyon içerir. Bir baska uygulamada, Fc varyanti, bir CH3 domeninde veya bunun kisminda yer alan bir amino asit pozisyonunda bir sübstitüsyon içerir. Bir baska uygulamada, Fc varyanti, bir CH4 domeninde veya bunun kisminda yer alan bir amino asit pozisyonunda bir sübstitüsyon içerir. Açiklamanin antikorlari, efektör fonksiyonda ve/veya FcR baglamada bir iyilestirme (örnegin, azaltma veya güçlendirme) verdigi bilinen teknikte-bilinen herhangi bir Fc varyantini kullanabilir. Söz konusu FC varyantlari, örnegin, her biri burada referans 7,083,784'te açiklanan amino asit sübstitüsyonlarinin herhangi birini, içerebilir. Bir emsal uygulamada, açiklamanin bir antikonJ, EU pozisyonu 268'de bir amino asit sübstitüsyonu (örnegin, H268D veya H268E) içeren bir Fo varyanti içerebilir. Bir baska emsal uygulamada, açiklamanin bir antikoru, EU pozisyonu 239'da (örnegin, 8239D sübstitüsyonu içerebilir. Belirli uygulamalarda, açiklamanin bir antikoru, antikorun antijenden-bagimsiz efektör fonksiyonlarini, özellikle antikorun dolasimdaki yari-ömrünü, degistiren bir amino asit sübstitüsyonu içeren bir FC varyanti içerebilir. Bu tarz antikorlar, bu sübstitüsyonlardan yoksun olan antikorlar ile karsilastirildiginda, FcRn'yi arttirilmis veya azaltilmis baglama gösterir, bundan dolayi sirasiyla, serumda bir arttirilmis veya azaltilmis yari- ömre sahiptir. FcRn için iyilestirilmis afinitesi olan Fc varyantlarinin, daha uzun serum yari-ömürlerine sahip olmasi beklenir ve bu tarz moleküller memelileri tedavi etmenin yöntemlerinde yararli uygulamalara sahiptir, burada uygulanan antikorun uzun yari- ömrü, örnegin, bir kronik hastaligi veya bozuklugu tedavi etmek için, arzu edilir. Aksine, azaltilmis FcRn baglama afinitesi olan Fc varyantlarinin daha kisa yari ömürlere sahip olmasi beklenir ve bu tarz moleküller ayrica, örnegin, bir memeliye uygulama için de yararlidir, burada bir kisaltilmis dolasim süresi, örnegin, in vivo tanisal görüntüleme için veya uzatilmis periyotlar boyunca dolasimda bulundugunda, baslangiç antikorunun toksik yan etkilere sahip oldugu durumlarda, avantajli olabilir. Azaltilmis FcRn baglama afinitesi olan FC varyantlarinin ayrica, plasentayi geçmesi daha az olasidir ve böylece, bunlar gebe kadinlarda hastaliklarin veya bozukluklarin tedavisinde de yararlidir. Buna ek olarak, burada azaltilmis FcRn baglama afinitesinin arzu edilebildigi diger uygulamalar, burada beyin, böbrek ve/veya karaciger lokalizasyonunun arzu edildigi uygulamalari içerir. Bir emsal uygulamada, açiklamanin degistirilmis antikorlari, vaskülatürden böbrek glomeruluslarinin epitelyumunu geçen azaltilmis tasima gösterir. Baska uygulamada, açiklamanin degistirilmis antikorlari, beyinden vasküler bosluga kan beyin bariyerini (BBB) geçen azaltilmis tasima gösterir. Bir uygulamada, degistirilmis FcRn baglamasi olan bir antikor, bir F0 domeninin "FcRn baglama kivrimi'i içinde bir veya birden fazla amino asit sübstitüsyonuna sahip olan bir FC domeni içerir. FcRn baglama kivrimi, (EU numaralandirmasina göre) 280-299 amino asit rezidülerinden olusturulur. FcRn baglama aktivitesini degistirmis olan emsal amino asit sübstitüsyonlari, burada referans olarak eklenmis olan, W005/047327 Numarali Uluslararasi PCT Yayini'nda açiklanir. Belirli emsal uygulamalarda, açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari asagidaki sübstitüsyonlarin birine veya birden (EU numaralandirmasi). Diger uygulamalarda, burada tarif edilen tanisal yöntemlerde ve tedavi yöntemlerinde kullanilmasi için antikorlar, glikosilasyonu azaltmak veya elimine etmek için degistirilmis bir sabit bölgeye, örnegin, bir IgG1 veya IgG4 agir zincir sabit bölgesine, sahiptir. Örnegin, açiklamanin bir antikoru ayrica, antikorun glikosilasyonunu degistiren bir amino asit sübstitüsyonu içeren bir Fc varyanti da içerebilir. Örnegin, söz konusu Fc varyanti azaltilmis glikosilasyona (örnegin, N- veya O-bagli glikosilasyona) sahip olabilir. Emsal uygulamalarda, FC varyanti, normal olarak amino asit pozisyonu 2597'de (EU numaralandirmasi) bulunan N-bagli glikanin azaltilmis glikosilasyonunu içerir. Bir baska uygulamada, antikor, bir glikosilasyon motifi, örnegin, NXT veya NXS amino asit dizisini içeren bir N-bagli glikosilasyon motifi, yakininda veya içinde bir amino asit sübstitüsyonuna sahiptir. Özel bir uygulamada, antikor amino asit pozisyonu 228'de veya 299'da (EU numaralandirmasi) bir amino asit sübstitüsyonu olan bir PC varyanti içerir. Daha özel uygulamalarda, antikor, bir 8228P ve bir T299A mutasyonu (EU numaralandirmasi) içeren bir IgG1 veya IgG4 sabit bölgesi içerir. Azaltilmis veya degistirilmis glikosilasyon saglayan emsal amino asit sübstitüsyonlari, burada referans olarak eklenmis olan WOO5/018572 Numarali Uluslararasi PCT Yayini'nda açiklanir. Tercih edilen uygulamalarda, açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari, glikosilasyonu elimine etmek için modifiye edilir. Bu tarz antikorlar veya bunlarin fragmanlari, "agli" antikorlar veya bunlarin, (örnegin, "agli" antikorlarin), fragmanlari olarak ifade edilebilir. Teoriye bagli kalmadan, "agli" antikorlarin veya bunlarin fragmanlarinin in vivo bir iyilestirilmis güvenlik ve kararlilik profiline sahip olabilecegine inanilir. Emsal agli antikorlar veya bunlarin fragmanlari, bir IgG4 antikorunun, Fc-efektör fonksiyonundan yoksun olan, böylece Kallidin veya des-ArgiO- Kallidin eksprese eden normal vital organlara FC aracili toksisite için potansiyeli elimine eden, bir aglikosile edilmis Fc bölgesini içerir. Daha baska uygulamalarda, açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari, bir degistirilmis glikan içerir. Örnegin, antikor, Fc bölgesinin Asn297'sinde bir N-glikani Üzerinde bir azaltilmis sayida fükoz rezidüsüne sahip olabilir, yani, afükosillenir. Bir baska uygulamada, antikor, Fc bölgesinin Asn297'sinde bir N-glikani üzerinde bir degistirilmis sayida siyalik asit rezidüsüne sahip olabilir. iii) Kovalent Tutturma Açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari, örnegin, bir molekülün, kovalent tutturmanin antikorun bunun soydas epitopunu spesifik olarak baglamasini önlemeyecek bir sekilde, antikora kovalent tutturulmasi ile, modifiye edilebilir. Örnegin, ancak sinirlandirma olmaksizin, açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari glikosilasyon, asetilasyon, pegilasyon, fosforilasyon, amidasyon, bilinen koruma/bloke etme gruplari ile türevlendirme, proteolitik klevaj, bir hücresel Iiganda veya baska proteine baglanti, vb. ile modifiye edilebilir. Çok sayida kimyasal modifikasyonun herhangi biri, ancak bunlarla sinirli kalmamak kayiyla, spesifik kimyasal klevaji, asetilasyonu, formilasyonu, vb. içeren, bilinen teknikler ile yürütülebilir. Ilave olarak, türev, bir veya birden fazla klasik-olmayan amino asit içerebilir. Açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari ilaveten, N- veya C-ucunda bir heterolog polipeptide rekombinant olarak kaynastirilabilir veya polipeptitlere veya baska bilesimlere (kovalent ve kovalent-olmayan konjugasyonlari içeren) kimyasal olarak konjuge edilebilir. Örnegin, anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari, saptama analizlerinde etiketler olarak kullanisli olan moleküllere ve efektör moleküllere, örnegin, heterolog polipeptitlere, ilaçlara, radyonüklidlere veya toksinlere, rekombinant olarak kaynastirilabilir veya konjuge edilebilir. Bakiniz, örnegin, WO 92/08495; WO Anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari, in vivo yari ömrü arttirmak için veya immünoanalizlerde kullanilmasi için teknikte bilinen yöntemler kullanilarak heterolog polipeptitlere kaynastirilabilir. Örnegin, bir uygulamada, PEG, bunlarin in vivo yari- ömrünü arttirmak için açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlarina Dahasi, açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari, bunlarin saflastirilmasini veya saptanmasini kolaylastirmak için, belirteç dizilerine, örnegin, bir peptide, kaynastirilabilir. Tercih edilen uygulamalarda, çogu piyasada satilan, belirteç amino asit dizisi, bir hekza-histidin peptididir, örnegin, digerleri arasinda, bir pQE vektörü içinde saglanmis etikettir (QlAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, kaynaginda tarif edildigi üzere, hekza-histidin, füzyon proteininin uygun saflastirilmasini saglar. Saflastirma için kullanisli olan baska peptit etiketleri, ancak bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, enflüanza hemagglutinin proteininden türetilen bir epitopa karsilik gelen "HA" etiketini (Wilson et al., Cell 37:76? (1984)) ve "bayrak" etiketini, içerir. Açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari konjuge edilmemis formda kullanilabilir veya örnegin, molekülün terapötik özelliklerini iyilestirmek için, hedef saptanmasini kolaylastirmak için veya hastanin görüntülenmesi veya terapisi için, çesitli moleküllerin en az birine konjuge edilebilir. Açiklamanin anti-Kallidin veya des- Argio-Kallidin antikorlari, saflastirmadan önce veya sonra, saflastirma gerçeklestirildiginde, etiketlenebilir veya konjuge edilebilir. Özel olarak, açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari, terapötik ajanlara, ön-ilaçlara, peptitlere, proteinlere, enzimlere, virüslere, lipitlere, biyolojik yanit modifiye edicilerine, farmasötik ajanlara veya PEG'ye konjuge edilebilir. Mevcut açiklama ilaveten, bir tanisal veya terapötik ajana konjuge edilmis açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlarini kapsar. Anti-Kallidin veya des-ArglO- Kallidin antikorlari, mesela, örnegin, verilen bir tedavi ve/veya önleme rejiminin etkinligini belirlemek için, bir klinik test prosedürünün parçasi olarak bir immün hücre bozuklugunun (örnegin, CLL'nin) gelismesini veya progresyonunu izlemek, için tanisal olarak kullanilabilir. Saptama, anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlarini bir saptanabilen maddeye kuple etme ile kolaylastirilabilir. Saptanabilen maddelerin örnekleri, çesitli enzimleri, prostetik gruplari, flüoresan materyalleri, Iüminesan materyalleri, biyolüminesan materyalleri, radyoaktif materyalleri, çesitli pzositron emisyon tomografileri kullanilan pozitron yayan metalleri ve radyoaktif-olmayan paramanyetik metal iyonlarini içerir. Bakiniz, örnegin, mevcut açiklamaya göre tanisallar olarak kullanilmasi için antikorlara konjuge edilebilen metal iyonlari için, U.S. Pat. No. 4,741,900. Uygun enzimlerin örnekleri, yaban turpu peroksidazini, alkalin fosfatazi, .beta.-galaktosidazi veya asetilkolinesterazi içerir; uygun prostetik grup komplekslerinin örnekleri, streptavidin/biyotini ve avIdIn/biyotini içerir; uygun flüoresan materyallerin örnekleri, umbelliferonu, floreseini, floresein Izotiyosiyanati, rodamini, diklorotriazinilamin floreseini, dansil klorürü veya fikoeritrini içerir; bir Iüminesan materyalin bir örnegi, Iüminolü içerir; biyolüminesan materyallerin örnekleri, Iüsiferazi, veya 99Tc'yi içerir. Burada açiklanan tanisal yöntemlerde ve tedavi yöntemlerindeki kullanilmasi için anti- Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari sitotoksinlere (örnegin, radyoizotoplara, sitotoksik ilaçlara veya toksinlere), terapötik ajanlara, sitostatik ajanlara, biyolojik toksinlere, ön-ilaçlara, peptitlere, proteinlere, enzimlere, virüslere, Iipitlere, biyolojik yanit modifiye edicilerine, farmasötik ajanlara, immünolojik olarak aktif ligandlara (örnegin, Ienfokinlere veya baska antikorlara, burada elde edilen molekül hem neoplastik hücreyi hem de bir efektör hücreyi, örnegin, bir T hücresini, baglar) veya PEG'e konjuge edilebilir. Bir baska uygulamada, burada açiklanan tanisal yöntemlerde ve tedavi yöntemlerinde kullanilmasi için bir anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikoru, tümör hücresi büyümesini azaltan bir moleküle konjuge edilebilir. Diger uygulamalarda, açiklanan bilesimler, ilaçlara veya ön-ilaçlara kuple edilmis, antikorlar veya bunlarin fragmanlarini içerebilir. Mevcut açiklamanin daha baska uygulamalari, spesifik biyo-toksinlere veya bunlarin sitotoksik fragmanlarina, örnegin, risine, jelonine, Pseudomonas ekzotoksinine veya difteri toksinine konjuge edilmis antikorlarin veya bunlarin fragmanlarinin kullanimini içerir. Hangi konjuge edilmis veya konjuge edilmemis antikorun kullanilacagina yönelik seleksiyon, kanserin tipine ve evresine, yardimci tedavinin (örnegin, kemoterapinin veya disaridan uygulanan radyasyonun) kullanilmasina ve hastanin rahatsizligina bagli olacaktir. Teknikte uzmanligi olan bir kisinin burada ögretiler göz önüne alindiginda bu tarz bir seleksiyonu kolaylikla yapabilecegi anlasilacaktir. Önceki çalismalarda, izotoplar ile etiketlenmis anti-tümör antikorlarinin hayvan modellerinde ve insanlarda bazi olgularda tümör hücrelerini basarili bir sekilde yok etmek için kullanilmis oldugu anlasilacaktir. Emsal radyoizotoplar asagidakileri içerir: 188Re. Radyonüklidler, nükleer DNA'da çok sayida sarmal kirilmasina neden olan, böylece hücre ölümüne yol açan, iyonize radyasyon üretme ile etki eder. Terapötik konjugatlar üretmek için kullanilan izotoplar tipik olarak, kisa bir yol uzunluguna sahip olan yüksek enerjili alfa- veya beta-parçaciklari üretir. Bu tarz radyonüklidler, bunlara yakin yakinlikta olan hücreleri, örnegin, konjugatin bunlara tutundugu veya girdigi neoplastik hücreleri, öldürür. Bunlar lokalize olmamis hücreler üzerinde çok az etkiye sahiptir veya hiç etkiye sahip degildir. Radyonüklidler esas olarak, immünojenik- degildir. Baglama Fragmanlarinin Ekspresyonu Yukarida izah edildigi üzere açiklamanin anti-Kallidin veya des-ArglO-Kallidin antikorlarini saglamak için izole edilmis genetik materyalin manipülasyonunu takiben, genler tipik olarak, talep edilen antikorlarin veya bunlarin fragmanlarinin arzu edilen miktarini üretmek için kullanilabilen konak hücreler içine uygulamak için bir ekspresyon vektörü içine yerlestirilir. burada, bir hücre içine uygulamak ve bir hücre içinde aizu edilen bir geni eksprese etmek için bir vehikül olarak mevcut açiklamaya uygun sekilde kullanilan vektörler anlamina gelmesi için kullanilir. Teknikte uzmanligi olan kisiler tarafindan bilindigi üzere, bu tarz vektörler plazmidlerden, fajlardan, virüslerden ve retrovirüslerden olusan gruptan kolaylikla seçilebilir. Genel olarak, mevcut açiklama ile uyumlu olan vektörler, bir seleksiyon belirteci, arzu edilen genin klonlanmasini kolaylastirmak için uygun restriksiyon yerleri ve ökaryotik veya prokaryotik hücrelere girme ve/veya ökaryotik veya prokaryotik hücrelerde kopyalama yetisi içerecektir. Çok sayida ekspresyon vektörü sistemi, bu açiklamanin amaçlari için kullanilabilir. Örnegin, vektörün bir sinifi, hayvan virüslerinden, örnegin, bovin papillom virüsünden, polyom virüsünden, adenovirüsten, vaksiniya virüsünden, bakulovirüsten, retrovirüslerden (RSV, MMTV veya MOMLV) veya SV40 virüsünden, türetilen DNA elemanlarindan yararlanir. Digerleri, iç ribozom baglama yerleri olan polisistronik sistemlerin kullanimini içerir. Ilave olarak, DNA'yi kromozomlarina entegre eden hücreler, transfekte edilmis konak hücrelerin seleksiyonuna olanak saglayan bir veya birden fazla belirteci uygulama ile seçilebilir. Belirteç bir oksotrofik konaga prototrofi, biyosit direnci (örnegin, antibiyotikler) veya agir metallere, örnegin, bakira, direnç, saglayabilir. Seçilebilen belirteç geni, eksprese edilecek olan DNA dizilerine dogrudan baglanabilir veya ko-transformasyon ile ayni hücreye uygulanabilir. Ilave elemanlar ayrica, mRNA'nin optimal sentezi için de gerekli olabilir. Bu elemanlar, sinyal dizilerini, uç-birlestirme sinyallerini ayni zamanda transkripsiyonel promotörleri, hizlandiricilari ve sonlandirma sinyallerini içerebilir. Özel olarak tercih edilen uygulamalarda, klonlanmis degisken bölge genleri, yukarida tartisildigi üzere sentetik (tercihen insan) agir ve hafif zincir sabit bölge genleri ile birlikte bir ekspresyon vektörüne yerlestirilir. Tercih edilen diger uygulamalarda, açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari veya bunlarin fragmanlari, polisistronik yapilar kullanilarak eksprese edilebilir. Bu tarz ekspresyon sistemlerinde, söz konusu çok sayida gen ürünü, örnegin, antikorlarin agir ve hafif zincirleri, bir tek polisistronik yapidan üretilir. Bu sistemler, ökaryotik konak hücrelerde açiklamanin polipeptitlerinin görece yüksek düzeylerini saglamak için bir iç ribozom giris yerini (lRES) avantajli bir sekilde kullanir. Uygun açiklanir. Teknikte uzmanligi olan kisiler, bu tarz ekspresyon sistemlerinin mevcut basvuruda açiklanan polipeptitlerin tam araligini etkili bir sekilde üretmek için kullanilabilecegini anlayacaktir. Daha genel olarak, bir antikoru veya bunun fragmanini kodlayan bir vektör veya DNA dizisi hazirlandiginda, ekspresyon vektörü uygun bir konak hücre içine uygulanabilir. Yani, konak hücreler transforme edilebilir. Plazmidin konak hücre içine uygulanmasi, teknikte uzmanligi olan kisiler tarafindan iyi bilinen çesitli teknikler ile tamamlanabilir. Bunlar, ancak bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, (elektroforezi ve elektroporasyonu içeren) transfeksiyonu, protoplast füzyonunu, kalsiyum fosfat presipitasyonunu, zarf içine alinmis DNA ile hücre füzyonunu, mikro-enjeksiyonu ve aynen virüs ile enfeksiyonu, içerir. Bakiniz, Ridgway, A. A. G. "Mammalian Expression Vectors" Chapter 24.2, pp. 470-472 Vectors, Rodriguez and Denhardt, Eds. (Butterworths, Boston, Mass. 1988). En tercihen, konak içine plazmid uygulanmasi, elektroporasyon yoluyladir. Transforme edilmis hücreler, hafif zincirlerin ve agir zincirlerin üretilmesi için uygun kosullar altinda büyütülür ve agir ve/veya hafif zincir protein sentezi için analiz edilir. Emsal analiz teknikleri, enzime-bagli bagisiklik analizini (ELISA), radyoimmünoanalizi (RIA) veya flüoresans-aktive edilmis hücre ayirici analizi (FACS), immünohistokimyayi ve benzerlerini içerir. Burada kullanildigi sekliyle, "transformasyon" terimi, DNA'nin bir alici konak hücreye, genotipi degistiren ve sonuç olarak alici hücrede bir degisim ile sonuçlanan, uygulanmasini ifade etmek için genis bir anlamda kullanilmalidir. Bunlarla benzer bir sekilde, "konak hücreler", rekombinant DNA teknikleri kullanilarak yapilan ve en az bir heterolog geni kodlayan vektörler ile transforme edilmis hücreleri ifade eder. Rekombinant konaklardan polipeptitlerin izolasyonu için proseslerin açiklamalarinda, "hücre" ve "hücre kültürü" terimleri, bu açik bir sekilde aksini belirtmedikçe, antikorun kaynagini göstermek için birbiri ile degistirilebilir bir sekilde kullanilir. Bir baska ifadeyle, "hücrelerden" polipeptidin geri-kazanilmasi, asagi çökecek sekilde döndürülmüs tam hücrelerden veya hem vasati hem de süspanse edilmis hücreleri içeren hücre kültüründen anlamina gelebilir. Bir uygulamada, antikor ekspresyonu için kullanilan konak hücre hatti, memeli orijinlidir; teknikte uzmanligi olan kisiler orada eksprese edilecek olan arzu edilen gen ürünü için en uygun olan özel konak hücre hatlarini belirleyebilir. Emsal konak hücre hatlari, ancak bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, DG44'ü ve DUXBtt'i (Çin Hamsteri Over hatlari, DHFR eksi), HELA'yi (insan servikal karsinomu), CVI'yi (maymun böbrek hatti), COS'yi (CVl'nin SV40 T antijeni içeren bir türevi), R1610'u (Çin hamsteri fibroblasti) BALBC/, SP2/O'yu (fare miyelomu), BFA-1clBPT'yi (bovin endotelyal hücreleri), RAJI'yi (insan lenfositi), 293'ü (insan böbregi), içerir. Bir uygulamada, hücre hatti, bundan eksprese edilen antikorun degistirilmis glikosilasyonunu, örnegin, afükosilasyonunu, (örnegin, PER.CG.RTM. (Crucell) veya FUT8-nakavt CHO hücre hatlari (PotelligentRTM. Cells) (Biowa, Princeton, N.J.)) saglar. Bir uygulamada, N80 hücreleri kullanilabilir. CHO hücreleri özel olarak tercih edilir. Konak hücre hatlarina tipik olarak, ticari servislerden, Amerikan Doku Kültürü Koleksiyonu'ndan veya yayimlanmis Iiteratürden, erisilebilir. In vitro üretim, arzu edilen polipeptitlerin büyük miktarlarini vermesi için ölçek- büyütmeye olanak saglar. Doku kültürü kosullari altinda memeli hücre kültivasyonu için teknikler teknikte bilinir ve örnegin, bir hava-basma reaktörü içinde veya bir sürekli karistiricili reaktör içinde, homojen süspansiyon kültürünü veya örnegin, içi bos lifler, mikro-kapsüller için, agaroz mikro-bilyeler veya seramik kartuslar üzerinde, immobilize edilmis veya kistirilmis hücre kültürünü içerir. Gerektiginde ve/veya arzu edildiginde, polipeptitlerin çözeltileri, geleneksel kromatografi yöntemleri, örnegin, jel filtrasyonu, iyon-degisim kromatografisi, DEAD-selüloz üzerinde kromatografi ve/veya (immüno- )afinite kromatografisi, ile saflastirilabilir. Açiklamanin anti-Kallidin veya des-ArgiO-Kallidin antikorlarini veya bunlarin fragmanlarini kodlayan genler ayrica, memeli-olmayan hücrelerde, örnegin, bakteri veya maya veya bitki hücrelerinde, de eksprese edilebilir. Bu baglamda, çesitli tek- hücreli memeli-olmayan mikroorganizmanin, örnegin, bakterinin, de transforme edilebilecegi; yani, bunlarin kültürler içinde büyütülebilecegi veya fermentasyon yapabilecegi, anlasilacaktir. Transformasyona duyarli olan bakteriler, Enterobacteriaceae üyelerini, örnegin, Escherichia coli veya Salmonella suslarini; Bacillaceae, örnegin, Bacillus subtilis; Pneumococcus; Streptococcus ve Haemophilus influenzae'yi içerir. Bakterilerde eksprese edildiginde, ilaveten polipeptitlerin inklüzyon cisimciklerinin parçasi haline gelebilecegi anlasilacaktir. Polipeptitlerin izole edilmesi, saflastirilmasi ve akabinde fonksiyonel moleküller halinde birlestirilmesi gerekir. Prokaryotlara ek olarak, ökaryotik mikroplar da kullanilabilir. Çok sayida baska susun yaygin olarak erisilebilir olmasina ragmen, Saccharomyces cerevisiae veya yaygin ekmek mayasi, ökaryotik mikroorganizmalar arasinda en yaygin sekilde kullanilir. Saccharomyces'ta ekspresyon için, örnegin, YRp7 plazmidi (Stinchcomb et al., Nature, (1980)) yaygin bir sekilde kullanilir. Bu plazmid halihazirda, mayanin triptofan içinde büyüme yetisinden yoksun olan bir mutant susu, örnegin, ATCC No. 44076 veya PEP, için bir seleksiyon belirteci saglayan TRP1 genini içerir. Akabinde, maya konak hücresi genomunun bir karakteristigi olarak trpl etkili bir ortam saglar. V. Anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin Antikorlarinin Farmasötik Formülasyonlari ve Uygulama Yöntemleri Bir baska yönünde, açiklama bir anti-Kaliidin veya des-Arg10-Kallidin antikoru veya bunlarin fragmanini içeren farmasötik bilesimler saglar. Açiklamanin antikorlarini veya bunlarin fragmanlarini hazirlamanin ve bir süjeye uygulamanin yöntemleri teknikte uzmanligi olan kisiler tarafindan iyi bilinir veya kolaylikla belirlenir. Açiklamanin antikorlarinin veya bunlarin fragmanlarinin uygulama yolu, oral, parenteral, inhalasyon ile veya topikal olabilir. Burada kullanildigi sekliyle parenteral, intravenöz, intraarteriyel, intraperitoneal, intramüsküler, subkütan, rektal veya vajinal uygulamayi içerir. Parenteral uygulamanin intravenöz, intraarteriyel, subkütan ve intramüsküler formlari genel olarak tercih edilir. Uygulamanin tüm bu formlarinin açiklamanin kapsami içinde oldugu açik bir sekilde tasarlanirken, uygulama için bir form, enjeksiyon için, özellikle intravenöz veya intraarteriyel enjeksiyon veya damla için bir çözelti olacaktir. Genel olarak, enjeksiyon için uygun bir farmasötik bilesim, bir tampon (örnegin, asetat, fosfat veya sitrat tamponu), bir sürfaktan (örnegin, polisorbat), opsiyonel olarak bir stabilazör ajan (örnegin, insan albümini), vb., içerebilir. Bununla birlikte, buradaki ögretilere uygun olan diger yöntemlerde, polipeptitler advers hücresel popülasyon yerine dogrudan aktarilabilir, böylece hastalikli dokunun terapötik ajani maruziyetini arttirilabilir. Parenteral uygulama için preparasyonlar, steril sulu veya sulu-olmayan çözeltileri, süspansiyonlari ve emülsiyonlari içerir. Sulu-olmayan çözücülerin örnekleri, propilen glikoldür, polietilen glikoldür, bitkisel sivi yaglardir, örnegin, zeytinyagidir ve enjekte edilebilen organik esterlerdir, örnegin, etil oleattir. Sulu tasiyicilar, suyu, alkolik/sulu çözeltileri, emülsiyonlari veya süspansiyonlari, salin ve tamponlu vasatlar dahil, içerir. Söz konusu açiklamada, farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilar, ancak bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, 0,01-0,1M ve tercihen 0,05M fosfat tamponunu veya %O,8 salini, içerir. Diger yaygin parenteral vehiküller, sodyum fosfat çözeltilerini, Ringer dekstrozunu, dekstroz ve sodyum klorürü, Iaktatlanmis Ringer'i veya fikse edilmis sivi yaglari içerir. intravenöz vehiküller, sivi ve besin takviye edicilerini, elektrolit takviye edicilerini, örnegin, Ringer dekstrozu temelli olanlari ve benzerlerini içerir. Koruyucular ve diger katki maddeleri, örnegin, mesela, anti-mikrobiyaller, anti-oksidanlar, selatlama ajanlari ve inert gazlar ve benzerleri, de bulunabilir. Daha özel olarak, enjektabl kullanim için uygun farmasötik bilesimler, steril sulu çözeltileri (burada suda çözünebilen) veya dispersiyonlari ve steril enjektabl çözeltilerin veya dispersiyonlarin ekstamporane preparasyonu için steril tozlari içerir. Bu tarz durumlarda, bilesim steril olmak zorundadir ve kolay enjekte edilebilirligin gerçeklesecegi derecede sivi olmalidir. Su, imalat ve saklama kosullari altinda kararli olmalidir ve tercihen mikroorganizmalarin, örnegin, bakterilerin ve funguslarin, kontamine etme etkisine karsi korunacaktir. Tasiyici, örnegin, su, etanol, poliol (örnegin, gliserol, propilen glikol ve sivi polietilen glikol ve benzerlerini) ve bunlarin uygun karisimlarini içeren bir çözücü veya dispersiyon vasati olabilir. Uygun akiskanlik, örnegin, bir kaplama, örnegin, Iesitin, kullanilmasi ile, dispersiyon durumunda gerekli olan parçacik boyutunun idamesi ile ve sürfaktanlarin kullanilmasi ile, idame ettirilebilir. Mikroorganizmalarin etkisinin önlenmesi, çesitli antibakteriyel ve anti-fungal ajanlar, örnegin, parabenler, klorobütanol, fenol, askorbik asit, timerosal ve benzerleri, ile basarilabilir. Çogu durumda, bilesimin izotonik ajanlar, örnegin, sekerler, polialkoller, örnegin, mannitol, sorbitol veya sodyum klorür, içermesi tercih edilebilecektir. Enjektabl bilesimlerin uzatilmis emilimi, bilesime emilimi geciktiren bir ajani, örnegin, alüminyum monostearati ve jelatini, dahil etme ile gerçeklestirilebilir. Herhangi bir durumda, steril enjektabl çözeltiler, uygun çözücü içinde gerekli miktardaki bir aktif bilesigi (örnegin, tek basina veya baska aktif ajanlar ile kombinasyon halindeki bir antikoru) burada listelenen içerik maddelerinin birine veya bir kombinasyonuna katma, gerektiginde, akabinde filtreli sterilizasyon, ile hazirlanabilir. Genel olarak, dispersiyonlar aktif bilesigi bir bazik dispersiyon vasati ve yukarida Iistelenenlerden gerekli diger içerik maddelerini içeren bir steril vehiküle katma ile hazirlanir. Steril enjektabl çözeltilerin preparasyonu için steril tozlar durumunda, preparasyonun tercih edilen yöntemleri, bir etken maddenin arti bunun bir önceki steril-filtrelenmis çözeltisinden herhangi bir ilave arzu edilen içerik maddesinin bir tozunu üreten vakum- kurutma ve dondurarak-kurutma teknikleridir. Enjeksiyonlar için preparasyonlar teknikte iyi bilinen yöntemlere göre islenir, kaplar, örnegin, ampuller, posetler, siseler, enjektörler veya viyaller, içine doldurulur ve aseptik kosullar altinda sizdirmaz hale getirilir. ilaveten, preparasyonlar, örnegin, burada referans olarak eklenmis olan, U.S. satilabilir. Bu tarz üretim araç-gereçleri tercihen, ilgili bilesimlerin otoimmün veya neoplastik bozukluklardan muzdarip olan veya bunlara yatkin olan bir süjeyi tedavi etmek için kullanisli oldugunu gösteren etiketlere veya prospektüslere sahip olacaktir. Yukarida tarif edilen rahatsizliklarin tedavisi için mevcut açiklamanin stabilize edilmis antikorlarinin veya bunlarin fragmanlarinin etkili dozlari, uygulama araçlarini, hedef yeri, hastanin fizyolojik halini, hastanin insan veya bir hayvan olmasini, uygulanan diger ilaçlari ve tedavinin profilaktik veya terapötik olmasini içeren çok sayida farkli faktöre bagli olarak çesitlilik gösterir. Genel olarak, hasta bir insandir, ancak transgenik memelileri içeren insan-olmayan memeliler de tedavi edilebilir. Tedavi dozajlari, güvenligi ve etkinligi optimize etmek için teknikte uzmanligi olan kisiler tarafindan bilinen rutin yöntemler kullanilarak titre edilebilir. Açiklamanin bir antikoru ile pasif immünizasyon için, dozaj, örnegin, konak vücut vb.), araliginda olabilir. Örnegin, dozajlar, 1 mg/kg vücut agirligi veya 10 mg/kg vücut agirligi veya 1-10 mg/kg araliginda, tercihen en az 1 mg/kg, olabilir. Yukaridaki araliklar içindeki ara dozlarin ayrica açiklamanin kapsami içinde olmasi da amaçlanir. Süjelere bu tarz dozlar, günlük, iki günde bir, haftalik olarak veya deneysel analiz ile belirlenen herhangi bir baska planlamaya göre, uygulanabilir. Bir emsal tedavi, uzatilmis, örnegin, en az alti aylik, bir periyot boyunca çok sayida dozaj halinde uygulama gerektirir. Ilave emsal tedavi rejimleri, iki haftada bir veya ayda bir veya 3 ila 6 ayda bir uygulama gerektirir. Emsal dozaj planlamasi, ardisik günlerde 1-10 mg/kg'i veya 15 mg/kg'i, iki günde bir 30 mg/kg'i veya haftada bir 60 mg/kg'i içerir. Bazi yöntemlerde, farkli baglama özgüllügü olan iki veya daha fazla monoklonal antikor es- zamanli olarak uygulanir, bu durumda uygulanan her bir antikorun dozaji gösterilen aralik içinde olabilir. Açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari, bir kaç zamanda uygulanabilir. Tekli dozajlar arasindaki araliklar, örnegin, günlük, haftalik, aylik veya yillik, olabilir. Araliklar ayrica, hastada polipeptidin veya hedef molekülün kan düzeylerini ölçme ile gösterildigi üzere düzensiz de olabilir. Bazi yöntemlerde, dozaj belirli bir plazma antikoru veya ayarlanir. Alternatif olarak, antikorlar veya bunlarin fragmanlari, bir sürdürülmüs salim formülasyonu olarak uygulanabilir, bu durumda daha az sik uygulama gereklidir. Dozaj ve siklik hastada antikorun yari-ömrüne bagli olarak çesitlilik gösterir. Genel olarak, hümanize antikorlar en uzun yari-ömrü gösterir, bunu kimerik antikorlar ve insan- olmayan antikorlari, izler. Bir uygulamada, açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari konjuge edilmemis formda uygulanabilir. Bir baska uygulamada, açiklamanin antikorlari, konjuge edilmis formda birden fazla zamanda uygulanabilir. Daha baska bir uygulamada, açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari konjuge edilmemis formda, akabinde konjuge edilmis formda, uygulanabilir veya tersi. Uygulamanin dozaji ve sikligi, tedavinin profilaktik veya terapötik olmasina bagli olarak çesitlilik gösterebilir. Profilaktik uygulamalarda, mevcut antikorlari veya bunlarin bir kokteylini içeren bilesimler, hastanin direncini güçlendirmek için halihazirda hastalik halinde olmayan bir hastaya uygulanir. Bu tarz bir miktarin, bir "profilaktik etkili doz" oldugu tanimlanir. Bu kullanimda, kesin miktarlar yine hastanin hastalik haline ve genel immünitesine baglidir, ancak genel olarak her bir doz için 0,1 ila 25 mg, özellikle her bir doz için 0,5 ila 2,5 mg, araligindadir. Bir görece düsük dozaj, uzun bir zaman periyodu boyunca görece sik olmayan araliklarla uygulanir. Bazi hastalar, yasamlarinin kalani boyunca tedavi almaya devam eder. Terapötik uygulamalarda, görece kisa araliklarla bir görece yüksek dozaj (örnegin, radyoimmünokonjugatlar için 5 ila 25 mg araliginda dozajlarin ve sitotoksin-ilaç konjuge edilmis moleküller için daha yüksek dozlarin daha yaygin bir sekilde kullanilmasi ile, her bir doz için antikorun yaklasik 1 ila 400 mg/kg'i) bazen, hastaligin progresyonu azaltilana veya sonlandirilana ve tercihen hasta hastaligin semptomlarinin parsiyel veya tam sagaltilmasini gösterene kadar, gereklidir. Bundan sonra, hastaya bir profilaktik rejim uygulanabilir. Bir uygulamada, bir süje açiklamanin bir polipeptidini (örnegin, bir vektör içinde) kodlayan bir nükleik asit molekülü ile tedavi edilebilir. Polipeptitleri kodlayan nükleik mg veya 30-300 ug DNA araligindadir. Enfeksiyöz viral vektörler için dozlar, her bir doz için 10-100 veya daha fazla viriyon araligindadir. Terapötik ajanlar, profilaktik ve/veya terapötik tedavi için parenteral, topikal, intravenöz, oral, subkütan, intraarteriyel, intrakraniyal, intraperitoneal, intranazal veya intramüsküler araçlar ile uygulanabilir. intramüsküler enjeksiyon veya intravenöz infüzyon açiklamanin bir antikorunun uygulanmasi için tercih edilir. Bazi yöntemlerde, terapötik antikorlar veya bunlarin fragmanlari dogrudan kraniyuma enjekte edilir. Bazi yöntemlerde, antikorlar veya bunlarin fragmanlari, bir sürdürülmüs salim bilesimi veya cihazi, örnegin, bir Medipad TM cihazi, olarak uygulanir. Açiklamanin ajanlari opsiyonel olarak, (örnegin, profilaktik veya terapötik) tedaviye ihtiyaci olan bozuklugu veya rahatsizligi tedavi etmede etkili olan diger ajanlar ile kombinasyon halinde uygulanabilir. Tercih edilen ilave ajanlar, teknikte bilinenlerdir ve özel bir bozukluk için standart olarak uygulananlardir. Açiklamanin 90Y-etiketli antikorlarinin etkili tek tedavi dozajlari (yani, terapötik olarak etkili miktarlari), yaklasik 5 ile yaklasik 75 mCi, daha tercihen yaklasik 10 ile yaklasik 40 mCi, araligindadir. 131l-etiketli antikorlarin etkili tek tedavi ilik ablatif-olmayan dozajlari, yaklasik 5 ile yaklasik 70 mCi, daha tercihen yaklasik 5 ile yaklasik 40 mCi, araligindadir. 131l-etiketli antikorlarin etkili tek tedavi ablatif dozajlari (yani, otolog kemik iligi nakli gerektirebilenler) yaklasik 30 ile yaklasik 600 mCi, daha tercihen yaklasik 50 ile yaklasik 500 mCi'den daha az, olan araliktadir. Mürin antikorlar ile karsilastirildiginda daha uzun dolasim yari-ömründen dolayi, bir kimerik modifiye edilmis antikor ile baglantili olarak, iyot-131 ile etiketlenmis kimerik antikorlarin bir etkili tek tedavi ilik ablatif-olmayan dozajlari, yaklasik 5 ile yaklasik 40 mCi araligindadir, daha tercihen yaklasik 30 mCi'den daha azdir. Örnegin, 111In etiketi, için görüntüleme kriterleri, tipik olarak yaklasik 5 mCi'den daha azdir. Epey çok klinik tecrübe 131I ve 90Y ile kazanilmisken, diger radyo-etiketler teknikte bilinir ve benzer amaçlar için kullanilmaktadir. Daha baska radyo-izotoplar görüntüleme için kullanilir. Örnegin, mevcut açiklamanin kapsami ile uyumlu olan ilave radyo- 211A 213Bi'yi, içerir. Bu açidan, alfa, gama ve beta yayicilarin tümü, mevcut açiklama ile uyumludur. ilaveten, mevcut açiklama bakis açisiyla, teknikte uzmanligi olan bir kisinin gereksiz deneyler yapmadan seçilen bir tedavi süreci ile hangi radyonüklidlerin uyumlu oldugunu kolaylikla belirleyebilecegi kabul edilir. Bu amaçla, klinik tanida 68Ga ayni zamanda 111In'yi içerir. Antikorlar ayrica, hedeflenmis immünoterapide potansiyel kullanim için çesitli radyonüklidler ile de etiketlenmistir (Peirersz et al. zamanda daha az bir dereceye kadar 199Au'yu ve 67Cu'yu içerir. U.S. Pat. No. ,460,785, bu tarz radyo-izotoplara iliskin ilave veriler saglar ve burada referans olarak eklenir. Önceden tartisildigi Üzere, açiklamanin antikorlari veya bunlarin fragmanlari, memeli bozukluklarinin in vivo tedavisi için bir farmasötik olarak etkili miktarda uygulanabilir. Bu baglamda, açiklanan antikorlarin veya bunlarin fragmanlarinin uygulamayi kolaylastirmak ve aktif ajanin kararliligini tesvik etmek amaciyla formüle edilebilecegi anlasilacaktir. Tercihen, mevcut açiklamaya uygun sekilde farmasötik bilesimler, bir farmasötik olarak kabul edilebilir, toksik-olmayan, steril tasiyici, örnegin, fizyolojik salin, toksik-olmayan tamponlar, koruyucular ve benzerlerini içerir. Mevcut basvurunun amaçlari için, açiklamanin, bir terapötik ajana konjuge edilmis veya konjuge edilmemis, bir antikorunun bir farmasötik olarak etkili miktari, bir hedefi etkili baglama saglamak için ve bir yarar saglamak için, örnegin, bir hastaligin veya bozuklugun semptomlarini sagaltmak için veya bir maddeyi veya bir hücreyi saptamak için yeterli olan bir miktar anlamina bagli kalmalidir. Tümör hücreleri durumunda, polipeptit tercihen, neoplastik veya immüno-reaktif hücreler üzerinde seçilmis immüno-reaktif antijenler etkilesime girebilecektir ve bu hücrelerin ölümünde bir artis saglar. Elbette, mevcut açiklamanin farmasötik bilesimleri, polipeptidin bir farmasötik olarak etkili miktarini saglamak için tek veya çok doz halinde uygulanabilir. Mevcut açiklamanin kapsami içinde, açiklamanin antikorlari bir terapötik veya profilaktik etki üretmek için yeterli olan bir miktarda tedavinin yukarida bahsedilen yöntemlerine uygun sekilde bir insana veya baska hayvana uygulanabilir. Açiklamanin polipeptitleri, açiklamanin antikorunu bilinen tekniklere göre bir geleneksel farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici veya diluent ile birlestirme ile hazirlanmis bir geleneksel dozaj formunda bu tarz insana veya baska hayvana uygulanabilir. Farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicinin veya diluentin formunun ve karakterinin etken maddenin bununla birlestirilecek olan miktari, uygulama yolu ve diger iyi-bilinen degiskenler ile dikte edildigi teknikte uzmanligi olan bir kisi tarafindan fark edilecektir. Teknikte uzmanligi olan kisiler ilaveten, mevcut açiklamaya göre polipeptitlerin bir veya birden fazla türünü içeren bir kokteylin özel olarak etkili oldugunun kanitlanabilecegini anlayacaktir. VI. Kallidin veya des-Arg10-Kallidin-Iliskili Hastaligi veya Bozukluklari Tedavi Etmenin Yöntemleri Açiklamanin anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorlari veya bunlarin fragmanlari, Kallidin veya des-Arg10-Kallidin aktivitesini antagonize etme için kullanislidir. Bu dogrultuda, bir baska yönünde, açiklama buna ihtiyaci olan bir süjeye açiklamanin bir veya birden fazla anti-Kallidin veya des-Arg10-Kallidin antikorunu veya bunlarin antijen baglama fragmanini içeren bir farmasötik bilesimi uygulama ile Kallidin veya des- Arg10-Kallidin-iliskili hastaliklari veya bozukluklari tedavi etmek için yöntemler saglar. Tedaviye uyumlu olan Kallidin veya des-Arg10-Kallidin-iliskili hastaliklar veya bozukluklar, sinirlandirma olmaksizin, patofizyolojik durumlari, örnegin, enflamasyonu, travmayi, yaniklari, soku, alerjiyi, akut veya kronik agriyi ve fibrözü, örnegin, renal fibrözü, içerir. Belirli emsal, uygulamalarda, açiklamanin antikorlari renal fibrözü ve iliskili akut böbrek yaralanmasini ayni zamanda son-evre böbrek yetmezliginin ana nedenleri olan kronik böbrek hastaliklarini tedavi etmek için nesredilebilir. Teknikte uzmanligi olan bir kisi, rutin deneyler ile, antikorun (veya ilave terapötik ajanin) bir Kallidin veya des-Arg10-Kallidin-iliskili hastaligi veya bozuklugu tedavi etme amaci için bir etkili, toksik-olmayan miktarinin ne olacagini belirleyebilecektir. Örnegin, bir polipeptidin bir terapötik olarak aktif miktari, faktörlere, örnegin, hastalik haline (örnegin, evre IV'e kiyasla evre I'e), süjenin yasina, cinsiyetine, tibbi komplikasyonlarina (örnegin, immüno-baskilanmis rahatsizliklara veya hastaliklara) ve agirligina ve antikorun süjede arzu edilen bir yaniti meydana getirme yetisine, göre çesitlilik gösterebilir. Dozaj rejimi, optimum terapötik yanit saglamak için ayarlanabilir. Örnegin, bir kaç bölünmüs doz günlük olarak uygulanabilir veya doz terapötik durumun mecburiyetleri ile gösterildigi üzere orantili olarak düsürülebilir. Bununla birlikte, genel olarak, bir etkili dozajin günde vücut agirliginin her bir kilogrami için yaklasik 0,05 ila 100 miligram ve daha tercihen günde vücut agirliginin her bir kilogrami için yaklasik 0,5 ila 10 miligram, araliginda olmasi beklenir. VII. Örneklendirme Açiklama ilaveten, ilave sinirlayici olarak anlam çikarilmamasi gereken asagidaki örnekleri saglar. Dahasi, mevcut açiklamaya uygun sekilde, burada teknikteki uzmanligin içinde geleneksel moleküler biyoloji, mikrobiyoloji ve rekombinant DNA teknikleri kullanilabilir. Bu tarz teknikler, literatürde tam olarak açiklanir. Bakiniz, örnegin, Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecu/ar Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (burada "Sambrook et al., O/igonucleotide Synthesis (MJ. Gait ed. 1984); Nuc/eic Acid Hybridization [B.D. Hames & S.J.Higgins eds. (1985)]; Transcr/ption And Translation [B.D. Hames & S.J. Higgins, eds. (1984)]; Animal Cell Culture [R.I. Freshney, ed. (1986)]; lmmobi'lized Cells And Enzymes [IRL Press, (1986)]; B. Perbal, A Practi'cal Guide To Molecular Cloning (1984); FM. Ausubel et al. (eds.), Current Protocols i'n Molecular Bio/ogy, John Wiley & Sons, Inc. (1994). Örnek 1: Hibridom Üretimi: Farelerin KLH'ye Konjuge Edilmis Kallidin Peptidi ile Immünizasyonu ve Insan BKR1 Ligandlarina karsi Antikor Üretilmesi Amaç, Kallidin'e (KD; SEQ ID No:1) ve des-Arg-Kallidin'e (DAKD; SEQ ID No:2) karsi, bu Iigandlarin insan BKR1'ini baglamasini inhibe edecek olan çapraz-reaktif antikorlar gelistirmektir. Genel olarak, farelerin peptidin C- veya N-ucu üzerindeki ilave sisteinler yoluyla KD'ye konjuge edilmis KLH ile immünizasyonu, hibridomlar üretmek amaciyla bir füzyon partneri olarak fare miyelom hücre hatlari ile füzyon için fare splenositleri elde etmek için kullanilmistir. Kisacasi, immünizasyon protokolü asagidaki sekildedir: BALB/c Fareleri (8-20 haftalik naif disi), her bir fare içinde (gün 0) 200 ul'lik bir toplam hacim içinde Sigma Adjuvant System'in (Sigma kat #6322) 1:1'Iik oraninda karistirilmis her bir fare için toplamda 100 ug olan bir antijen olarak fosfat tamponlu salin (PBS) içinde KLH-KD'nin ve KD-KLH'nin esit miktarlarinin bir karisimi ile intraperitoneal olarak immünize edilmistir. Gün 21'de, fareler her bir fare içinde 200 ul'lik bir toplam hacim içinde Sigma Adjuvant System'in (Sigma kat #6322) 1:1'lik oraninda karistirilmis her bir fare için toplamda 50 ug olan bir antijen olarak PBS içinde KLH-KD'nin ve KD-KLH'nin esit miktarlarinin bir karisimi ile desteklenmistir. Gün 30'da kan numuneleri, KD spesifik antikor titre degerlendirmesi için hasat edilmistir. Gün 51'de, fareler her bir fare içinde 200 ul'lik bir toplam hacim içinde Sigma Adjuvant System'in (Sigma kat #6322) 1:1'Iik oraninda karistirilmis her bir fare için toplamda 50 ug olan bir antijen olarak PBS içinde KLH-KD'nin ve KD-KLH'nin esit miktarlarinin bir karisimi ile füzyon için desteklenmistir. Gün 55'te, fareler CO2 bölmesi ile kurban edilmistir, kardiyak ponksiyon yoluyla kan alinmistir ve dalak hibridom üretimi için hasat edilmistir. Hibridomlar, adenozin fosforibosiltransferaz (APRT) açisindan kusurlu olan fare miyelom hücrelerini spesifik antijenler ile immünize edilmis farelerden elde edilen dalak hücreleri ile kaynastirma ile yapilmistir. HAT (hipoksantin, azaserin ve timidin) vasati kullanilan bir seleksiyon sistemi, APRT+ olan füzyon hücreleri disindaki tümünü yok eder. Basarili hibridomlar ayrica, immünoglobülin (Igh) agir zincirini, immünoglobülin hafif zincir lokuslarinin birini muhafaza etmelidir ve fonksiyonel antikor salgilamalidir. Hibridom Üretim Vasati (IMDM) asagidakileri birlestirme ile yapilmistir: 500 ml Iscove Modifiye Edilmis Dulbecco Vasati (HyCIone SH30259.01), 50 ml fetal bovin serum esansiyeI-olmayan amino asitler (Gibco Invitrogen kat # 11140050), 5 ml sodyum vasati asagidakileri birlestirme ile yapilmistir: 1000 ml serumsuz vasat (Giboo edilmis FBS (HyCIone SH30070.03) ve 5 ml DMSO'dur, filtre ile sterilize edilmistir. Diger materyaller asagidakileri içermistir: HAT (50x), Sigma-Aldrich (# H0262) firmasindan elde edilmistir; Hibridom Füzyon ve Klonlama Takviyesi (50X) (Roche reaktifler 37°C'de kullanilmistir. Tablo 2. Immünizasyonda ve Taramada Kullanilan Peptit Reaktifleri Peptit SEQ ID Peptit Dizisi Peptit Adi Alternatif Ad 1 5 RPPGFSPFR bradikinin BK 2 70 biyotin-RPPGFSPFR b-BK 3 71 RPPGFSPFR-biyotin BK-b 4 72 KLH-RPPGFSPFR KLH-BK 73 RPPGFSPFR-KLH BK-KLH 6 1 KRPPGFSPFR kallidin KD biyotin- 7 74 KRPPGFSPFR b-KD KRPPGFSPFR- 8 75 biyotin KD-b 9 76 KLH-KRPPGFSPFR KLH-KD 77 KRPPGFSPFR-KLH KD-KLH 11 6 RPPGFSPF desArngradikinin DABK 12 78 biyotin-RPPGFSPF b-DABK 14 80 KLH-RPPGFSPF KLHDABK 81 RPPGFSPF-KLH DABK-KLH 16 2 KRPPGFSPF desArg10kaIlidin DAKD Peptit SEQ ID Peptit Dizisi Peptit Adi Alternatif Ad 19 84 KLH-KRPPGFSPF KLH-DAKD 85 KRPPGFSPF-KLH DAKD-KLH 21 3 RRPPGFSPFR Kallidin benzeri peptit KLP biyotin- 22 86 RRPPGFSPFR b-KLP 23 87 biyotin KLP-b 24 88 KLH-RRPPGFSPFR KLH-KLP 89 RRPPGFSPFR-KLH KLP-KLH 90 desArg10kallidin benzeri 26 RRPPGFSPF peptit DAKLP 27 91 biyotin-RRPPGFSPF b-DAKLP 28 92 RRPPGFSPF-biyotin DAKLP-b 29 93 KLH-RRPPGFSPF DAKLP 94 RRPPGFSPF-KLH DAKLP-b 32 96 biyotin-RPPGF b-BK15 Kisacasi, füzyondan üç veya dört gün önce, fare söz konusu bir antijen ile intraperitoneal veya intravenöz olarak desteklenmistir. Füzyon gününde, fare COz bölmesi ile kurban edilmistir, kardiyak ponksiyon yoluyla kan alinmistir ve dalak alinmistir ve bir Petri kabi içinde 10 ml serumsuz IMDM içine yerlestirilmistir. Füzyon CRL1580), bir log fazinda büyütülmüstür, akabinde füzyondan bir gün önce ayrilmistir (1 :2 ve 125) ve 20 ml'lik sentrifüj tüplerine toplanmistir, döndürülmüstür ve pelet 10 ml yikanmistir. Sentrifügasyonlarin tümü 1570 rpm'de 5 dakika boyunca gerçeklestirilmistir. Nihai yeniden süspansiyon, 10 ml serumsuz IMDM içindedir. Bag doku, dalaktan diseke edilmistir. Dalaga, önceden 37°C'ye isitilmis 1 ml serumsuz penseler ile fibroelastik kilifi çikarmak için sikistirilir ve 10 ml serumsuz IMDM (ilk döndürme dahil) içinde iki kere yikanir ve 10 ml serumsuz IMDM içinde yeniden- süspanse edilmistir. Hücreler, Countess Automated Cell Counter içinde sayilmistir. Füzyon partner hücreleri ve splenositler 122 ila 1:10 (hücre sayisi olarak) araliginda oranda bir 50 ml'lik tüp içinde birlestirilmistir ve bir gevsek pelet olusturmak için 970 rpm'de 10 dakika boyunca (yavas döndürme) döndürülmüstür. "Yavas" döndürmeden sonra, süpernatant, peleti bozmamaya dikkat ederek alinmistir, ancak PEG1500'ü seyreltmemek için hücrelerin üzerindeki Iikitin miktari minimuma indirilmistir. Son kalan vasat saklanmistir ve PEG eklendikten sonra geri eklenmistir (asagida). Önceden isitilmis PEG 1500 (37°C, toplam 1 ml), 1 dakikalik zaman periyodu boyunca hücre peletine damla damla eklenmistir ve hücreler PEG'in her bir damlasinin eklenmesinden sonra karistirilmistir. Pelet bir baska 1 dakika boyunca PEG ile inkübe edilmistir bunu 1 dakika boyunca 10 ml serumsuz IMDM vasatinin eklenmesi izlemistir, böylece 10'nun ilk 1 ml'si 30 saniye boyunca eklenmistir. Hücreler 970 rpm'de 10 dakika boyunca yavas döndürme geçirmistir ve süpernatant dökülmüstür. (2) 100 ml'lik oluk içine, asagidakileri eklenmistir: %10 FBS'II 70 ml IMDM, 2 ml HAT ve 2 ml Hibridom ve Füzyon Klonlama Takviyesi. Hücreler %10 FBS'II 10 ml IMDM içinde yeniden-süspanse edilmistir ve (2) 50 ml'lik tüpe (5 ml hücre/tüp) ayrilmistir ve 25 ml %1OFBS'II IMDM eklenmistir. Elde edilen 30 ml, 70ml HBSS/HAT/klonlama takviyesi içeren oluklara transfer edilmistir ve 200 ul hücre/göz (10) 96-gözlü plakaya pipetlenmistir. Füzyon, yaklasik 10 ila 14 gün sonra veya gözler içindeki vasat sari renge döndügünde ELISA ile (50 ul) tarama için hazirdir. Primer taramadan sonra, pozitif klonlar seçilmistir, numaralandirilmistir ve %10 FBSHI'Ii IMDM içeren her bir göze 500 ul halinde bir 24- gözlü plakaya koyulmustur. Hibridom süpernatantlari, N- ve C-ucu biyotinlenmis peptitler ile plakali kaplanmis streptavidin üzerinde ELISA ile taranmistir (asagiya bakiniz). Örnek 2: Insan BKR1 Ligandlarina Karsi Antikorlar Eksprese Eden Hibridomlarin Karakterizasyonu ve Seleksiyonu Hibridom süpernatantlari, N- ve C-ucu biyotinlenmis peptitler ile plakali kaplanmis streptavidin üzerinde ELISA ile taranmistir (bakiniz, örnegin, Tablo 2'de izah edilenler) ve akabinde antikor baglama kinetikleri konfirme edilmis pozitif hibridom klonlari için belirlenmistir. Hibridom süpernatantlari içindeki antikorlarin BKR1 Iigandi peptidini baglama yetisi bir ELISA analizi ile degerlendirilmistir. DAKD-biyotin veya KD-biyotin peptitleri, bir 96- gözlü SA plaka üzerinde 5 ug/ml'de oda sicakligindaki bir saat boyunca fosfat tamponlu salin (PBS) tamponu içinde kaplanmistir ve spesifik-olmayan baglama yerleri PBS tamponu içindeki %1'Iik bovin serum albümini (BSA) ile bloke edilmistir. Bu plaka, ham hibridom süpernatantlarinin primer ve sekonder taramasini gerçeklestirmek için kullanilmistir. Hibridom süpernatantlari kaplanmis KD veya DAKD peptitlerini baglamak için plakalara eklenmistir. 1 saatlik inkübasyondan sonra, plakalar yikanmistir ve bagli antikorlar, sekonder antikora konjuge edilmis yaban turpu peroksidazi (HRP) (HRP-keçi anti-fare IgG (H+L): Jackson ImmunoResearCh Labs # 115-035-166) kullanilarak saptanmistir ve substrati kullanilarak analiz edilmistir. Pozitif sinyaller gösteren antikorlar (1:10000'Iik serum seyreltme ELISA sinyaline kiyasla 2 kat daha yüksek) seçilmistir ve konfirmasyon Için iki kopya halinde yeniden-taranmistir. Konfirme edilmis pozitif hibridom klonlari seçilmistir ve Biacore ile baglama ayrilma hizi derecelendirmesine tabi tutulmustur. Antikor baglama kinetikleri için, kullanilan aygitlar, gerçek zamanli biyo-moleküler etkilesim analizi (BIA) için tasarlanmis, BIACORE 2000 veya BIACORE 3000 (GE Healthcare) aygitlaridir. Kullanilan sensör çipi, bir karboksimetillenmis dekstran matriksi üzerinde kovalent olarak immobilize edilmis streptavidin içeren SA çipidir (GE Healthcare). Her bir sensör çipi, dört paralel akis hücresine (Fc) sahiptir. Her biyotinlenmis BKR1 veya BKR2 Iigandi peptidi, baglama ayrilma hizi taramasi ve selektivite taramasi için SA çipi üzerindeki akis hücreleri 2 ila 4'ün (Fc2 ila Fc4'ün) birine immobilize edilmistir. Akis hücresi 1 (Fcl) saklanmistir ve negatif kontrol olarak test edilen Iigand peptitleri ile karsilastirildiginda esit veya yakin peptit uzunlugu olan (bir ucunda biyotinlenmis) bir rastgele peptit ile immobilize edilmistir. Tarama analizlerinde, geçici olarak eksprese edilen hümanize varyantlarin primer taramasi yoluyla seçilmis hibridom klonlarinin hücre kültürü süpernatantlari immobilize edilmis peptitlerin üzerine enjekte edilmistir. Hibridom hücre kültürü vasatlari ayrica, bir taban hatti olusturmak için kör-çözelti olarak çip yüzeyi üzerine de enjekte edilmistir. Fc1 ve kör tampon yürütmelerinin sinyalleri çikarildiktan sonra, antikorlarin her bir peptit için süpernatantlardan ayrilma hizi analiz edilmistir ve BlAevaIuation yazilimi kullanilarak derecelendirilmistir. Yalnizca, üstün (kd < 10'4 1/3) baglama ayrilma hizi gösteren antikor klonlari alt-klonlama ve ilave karakterizasyon için seçilmistir. Kinetikler analizinde, test edilen antikor için taramada tanimlanmis karsilik gelen biyotin-peptitleri Fc2 ila Fc4 içinde immobilize edilirken, bir rastgele peptit içeren Fc1 referans hücre olarak kullanilmistir. Taramalardan seçilen her bir saflastirilmis antikora, yürütme tamponu (1 x HBS-EP tamponu, GE Healthcare) içinde 0,1 ila 10 nM araliginda bir iki katlik seyreltmeler serisi yazilmistir. Baglama ayrilma hizi, ayrilma hizi ve genel afinite BIAevaIuation yaziliminda hesaplanmistir. Her bir antikor için antikor baglama kinetikleri her zaman, Biacore kullanilarak üç kopya halindeki analizlerde konfirme edilmistir. Toplamda 8 fare karma KLH-KD/KD-KLH ve KLH-DAKD/DAKD-KLH ile immünize edilmistir ve dalaklar yukaridaki protokoller kullanilarak kaynastirilmistir. DAKD-biyotin ve KD-biyotin ile ELISA'da yaklasik 7680 hibridom klonunun primer taramasindan sonra, yalnizca 76 klon pozitif konfirme edilmistir ve Streptavidin (SA) çipleri üzerinde immobilize edilmis DAKD-biyotin ve KD-biyotin üzerinde Biacore 3000/2000'de baglama ayrilma hizi derecelendirmesi için seçilmistir. Bunlar arasindan, <=10'4'Iük baglama ayrilma hizi olan 8 hibridom klonu alt-klonlanmistir, dizilenmistir, saflastirilmistir ve ilaveten karakterize edilmistir (bakiniz, Tablo 3). Tablo 3:KLH-KDIKD-KLH ve KLH-DAKDi'DAKD-KLH ile immünizasyon sonuçlari Klon ID E E 5..: -1 < .E 3 ELlSA + + , i, , + Biacore - › › - › › NS NS : «K - g (KDMJ E-1i E-IO 5-10 E-uo E-10 5-10 Biacore - - - - - - NS NS Biacore -' NS NS E 2( FLIPR T . 7* ivf-_N_- "131. ELlSA i r 1. Al i.." i i 3" _ ` :1 C V-S'D: ne nenmemisi r -' = 'azda-3 csg's '115 :Babam da :lusm' RL& Tablo 3'te görülen sonuçlara göre, essiz dizileri olan bes klon, kinetik çalismalari için seçilmistir. Bu antikorlar, DAKD-biyotin, KD-biyotin, DAKLP-biyotin ve KLP-biyotin baglamasi için oldukça selektiftir (bakiniz, Tablo 4). Bunlar, diger kinin peptitlerini veya N-ucunda biyotinlenmis peptitleri baglamaz. Tablo 4. Seçilmis anti-DAKDIKD Antikor Adaylarinin Kinetiklerini Kisa Açiklamasi Antikor kayrilma KD kayrilma KD Antikor n/b = baglama yok Ilave immünizasyon, kemirgen BKR1 Iigandlarini, DABK'yi ve DAKD'yi, bloke eden antikorlar ayni zamanda peptitlerin kinin familyasinin farkli üyesine karsi baska baglama özgüllükleri olan antikorlar üretmek için bir dizi immünojen (bakiniz, peptitlerin listesi, Tablo 2) ile gerçeklestirilmistir. Tablo 5, üretilen antikorlarin agir ve hafif dizilerini listeler. kayrilma 9.89E-05 1.36E-04 3.19E-04 3.06E-05 kayrilma 2.30 E-04 6.58E-05 51.0E-06 .66E-05 4.15E-11 1.62E-10 2.17E-10 9.53E-12 DAKLP-b 1.34E-10 2.12E-10 1.17E-11 kayrilma 2.04 E-04 2.00 E-05 2.10E-05 3.88 E-05 kayrilma 1 .12E-O4 51 .DE-06 1 .03 E-05 6.04 E-05 8.40E-11 2.88E-11 4.40E-12 1.12E-11 1.92E-1O 1.82E-12 9.56E-12 Tablo 5: Antikorlarin Agir ve Hafif Zincir Dizileri .45 .E' 5 . . . . . . E' 05 m Agir Zincir Dizisi 821 97 CG3 98 F151 99 154 10`. 821 38 (363 45 F151 g 19 . z "tagli-4,01 154 51 "Duvak-*K* -›*~ G -ê' 0 Hafif Zincir Dizisi 4 .2 'I' 821 - 102 I'Z-lTC'T'l'LILCÄ-"IIGQPASZSCFÇCOGL ' ` ii-. 'ULKLI-SL'L' 053 103 ELDE'JLYQ:: F151 ; fî 104 i22 : 105 .:::.::vp i açi* 154 I 105 ELE-:UITSLTLTLSK'P[GOP UHETGSRLUTNFTLHE 821 39 '47; x __cric Lt: i I'îi? F15t ö 25 ~ n "C F --n- . 9 ir vQ.:F.\rLI` , ,U . E 'ogl'KLELKSQXLL-"s , L l22 54 154 I 62 Tek alt-çizgi = CDR bölgesi: iki alt çizgi = CDR'Ieri tanimlamak için iinza amino asitler ÖRNEK 3: Mürin Hayvan Çalismalari için Destekleyici Antikorun Üretilmesi Mürin hayvan çalismalarinda kullanilacak olan bir destekleyici antikorun, kemirgen BKR1 Iigandlarini, DABK'yi ve DAKLP'yi (DAKD'nin fare es-degerini) baglayabilmesi ve nötralize edebilmesi gerekmistir. Gerekli olan destekleyici antikoru üretmek için, fareler ilk olarak, peptitlerin N-uçlarina dogrudan konjuge edilmis KLH tasiyan DABK ve/veya DAKD ile immünize edilmistir. ELISA taramasindan elde edilen biyotin- DABK/biyotin/DAKD (peptidin N-ucu üzerinde dogrudan biyotinilasyon) pozitif hibridom klonlari ölçek-büyütme ve saflastirma için seçilmistir. Biyotin-DABK'ye, biyotin- DAKLP'ye ve biyotin-DAKD'ye yüksek baglama afiniteleri gösteren Familya 7'de listelenen antikorlar (bakiniz, Tablo 12), Biacore dogrudan baglama analizine göre seçilmistir (Tablo 10). Bununla birlikte, bu Familya 7 antikorlari, kompetitif ELISA'da natif, modifiye edilmemis DABK ve DAKD peptitlerini baglama göstermemistir ve Fonksiyonel Ilaç Tarama Sistemi (FDSS) (Hamamatsu Photonics K.K., Japonya) ile bir kalsiyum içeri-aki analizinde fonksiyonelligi nötralize etmekten yoksundur. Dahasi, biyotin-DABK ve biyotin-DAKD natif, modifiye edilmemis DABK ve DAKD peptitleri ile karsilastirildiginda FDSS analizinde biyo-aktivitesini tamamen kaybetmistir (veriler gösterilmemistir). KLH'nin ve biyotinin dogrudan N-ucu konjugasyonunun DABK'nin ve DAKD'nin natif konformasyonunun olusmasini önledigi hipotezi ortaya atilmistir. KLH- ve biyotin- konjuge edilmis peptitlerde natif konformasyonu eski-haline getirme amaci ile, baglayicilar tasarlanmistir ve peptit konformasyonu üzerinde KLH/biyotin konjugasyon etkilerini "hafifletme" niyeti ile DABK'nin ve/veya DAKD'nin N-ucuna eklenmistir. Modelleme sonuçlarina göre bunlarin basit, polar-olmayan ve nötral özelliklerinden dolayi, ilk olarak poli-glisin baglayicilara tesebbüs edilmistir ve bunlar test edilmistir. FDSS analizi sonuçlari, gIy-gIy-gly (3G) baglayicinin bunun KLH ve biyotin konjuge edilmis DABK ve DAKD peptitlerinin biyo-aktivitelerini eski-haline getirme yetisine göre en iyi oldugunu göstermistir (veriler gösterilmemistir). Bundan dolayi, KLH-3G-DABK fareleri immünize etmek için seçilmistir. Ve biyotin-SG-DABK ve biyotin-SG-KD baglama temelli tarama analizlerinde (ELISA ve Biacore) kullanilmistir. Bir kaç DABK/DAKD spesifik antikor (Familya 3, bakiniz Tablo 13), destekleyici antikor hibridom seleksiyonunun bu yeni turunda tanimlanmistir. EE1, bunun natif DABK/DAKD'ye karsi üstün baglama afinitesine ve nötralizasyon aktivitesine ve diger peptitlere çapraz-reaktivitesinin yokluguna dayanarak önde gelen destekleyici antikor olarak seçilmistir (bakiniz, Tablolar 6-12). Farkli özgüllükleri olan antikorlar, Tablo 13'te listelenen farkli immünojenler kullanildiginda, üretilmistir. Familya 4 antikorlari BKR2 reseptörü ligandlarina, BK'ye ve KD'ye, spesifiktir. Familya 5 antikorlari spesifik olarak, BK'nin ve DABK'nin C ucunu baglar. Familya 6 antikorlari. BK'yi, DABK'yi ve DAKD'yi baglar, ancak KD'yi baglamaz. Daha uzun poIi-glisin baglayicilari, poIi-alanin baglayicilari ve önceden-var olan baglayicilari, örnegin, polietilen glikol (PEG2) baglayiciyi ve aminohekzanoik asit (Ahx) baglayiciyi (bir 6-karbonlu inert baglayiciyi) içeren ilave baglayicilar, bunlarin EE1 içindeki DABK/DAKD baglama cebi içine uyma yetisi için destekleyici EE1 antikorunu baglama için degerlendirilmistir. Tüm baglayici peptitler, Abgent (Can Diego, CA) tarafindan istek üzerine sentezlenmistir. Baglayicilari olan test edilen tüm biyotinlenmis peptitler (biyotin-baglayici-DABK/DAKD) EE1'i iyi baglamistir, bu herhangi bir inert N- ucu baglayicinin, biyotin veya baska molekül ile konjuge edildiginde, DABK ve DAKD peptitlerinin bunlarin natif biyo-aktif konformasyonunu muhafaza etmesine yardimci oldugunu göstermistir. Aksine EE1'i baglamama veya zayif baglama, dogrudan N-ucu biyotin konjugasyonuna sahip olan biyotin-DABK ve biyotin-DAKD peptitleri ile gözlenmistir (bakiniz, Sekil 1). Üretilen antikorlarin baglama kinetikleri Tablolar 5-11'de özetlenir. Akabinde, üretilen tüm antikorlar familyalara ayrilir ve bunlarin baglama özgüllükleri asagida Tablo 12'de özetlenir. Tablo 13, bunlarin baglama özgüllügüne göre (bakiniz, Tablo 12) familya 1'e ve familya 2'ye koyulan antikorlarin agir ve hafif zincir dizilerini saglar. Tablo 6. b-3G-DABK ve b-3G-DAKD Peptitleri için Antikor Kinetiklerinin Kisa Açiklamasi Klon b-3G-DABK b-3G-DAKD UR29 n/b* n/b n/b n/b n/b n/b LR4 n/b n/b n/b n/b n/b n/b LR16 n/b n/b n/b n/b n/b n/b LR6 n/b n/b n/b n/b n/b n/b LR12 n/b n/b n/b n/b n/b n/b NR1 n/b n/b n/b n/b n/b n/b NR15 n/b n/b n/b n/b n/b n/b Klon b-3G-DABK b-3G-DAKD n/b* = spesifik-olmayan baglama, n/b = baglama yok Tablo 7. b-3G-DAKLP ve b-SG-BK Peptitleri için Antikor Kinetiklerinin Kisa Açiklamasi Klon b-3G-DAKLP b-3G-BK UR11 n/b n/b n/b n/b n/b n/b EE36 n/b n/b n/b n/b n/b n/b UR29 n/b n/b n/b n/b n/b n/b JK3 ND ND ND n/b n/b n/b LR4 n/b n/b n/b n/b n/b n/b LR16 n/b n/b n/b n/b n/b n/b LR6 n/b n/b n/b n/b n/b n/b LR12 n/b n/b n/b n/b n/b n/b NR1 n/b n/b n/b n/b n/b n/b NR15 n/b n/b n/b n/b n/b n/b n/b = baglama yok; ND = belirlenmemis Tablo 8. b-3G-KLP ve b-3G-KD Peptitleri için Antikor Kinetiklerinin Kisa Açiklamasi Klon b-3G-KLP b-3G-KD 3.8E+05 1.5E+05 4.0E+05 b-3G-KLP .7E-04 2.1 E-O3 2.1E-03 KD(M) Ka(1lMs) 1.5E-09 n/b 1.5E-O8 2.2E+05 .3E-09 n/b n/b = baglama yok; ND = belirlenmemis 1.5E+06 .8E-05 Açiklamasi KD(M) Ka(1IMS) 3.9E-11 3.0E+06 b-3G-KD 1.3E-03 1.8E-03 DAKLP-b 2.1E-03 1 .1 E-08 8.4E-09 Tablo 9. DABK-b ve DAKLP-b Peptitleri için Antikor Kinetiklerinin Kisa 6.8E-10 n/b = baglama yok; ND = belirlenmemis DAKLP-b Tablo 10. BK-b ve b-BK Peptitleri için Antikor Kinetiklerinin Kisa Açiklamasi 1.5E+06 1 .OE-04 7.2E-11 8.69E+04 2.95E+05 8.77E-O4 1 .09E-03 1 .O1E-O8 3.68E-09 Klon BK-b b-BK n/b = baglama yok; ND = belirlenmemis Tablo 11. b-DABK ve b-DAKD Peptitleri için Antikor Kinetiklerinin Kisa Açiklamasi Klon b-DABK b-DAKD DD20 n/b n/b n/b n/b n/b n/b UR11 n/b n/b n/b n/b n/b n/b DD7 n/b n/b n/b n/b n/b n/b EE1 n/b n/b n/b n/b n/b n/b EE36 n/b n/b n/b n/b n/b n/b UR29 n/b n/b n/b n/b n/b n/b JK3 n/b n/b n/b n/b n/b n/b LR6 n/b n/b n/b n/b n/b n/b NR1 n/b n/b n/b n/b n/b n/b NR15 n/b n/b n/b n/b n/b n/b n/b = baglama yok; ND = belirlenmemis Tablo 12. b-DAKLP ve b-KD Peptitleri için Antikor Kinetiklerinin Kisa Açiklamasi Klon b-DAKLP b-KD DD20 n/b n/b n/b n/b n/b n/b Klon b-DAKLP b-KD UR11 n/b n/b n/b n/b n/b n/b DD7 n/b n/b n/b n/b n/b n/b EE1 n/b n/b n/b n/b n/b n/b EE36 n/b n/b n/b n/b n/b n/b UR29 n/b n/b n/b n/b n/b n/b JK3 n/b n/b n/b n/b n/b n/b LR12 n/b n/b n/b n/b n/b n/b n/b = baglama yok; ND = belirlenmemis Tablo 13. Anti-kinin peptit antikoru üretiminin kisa açiklamasi Antikor _ Temsili _. lmmünojenler Baglama Ozgüllügü Familyalari Antikorlar F _I 1 KD-KLH + KLH-KD veya F ve y DAKD-KLH + KLH-DAKD I54 KD'nin (KLP) N-ucu KD-KLH + KLH-KD veya DAKD'nin ve KD'nin N- Familya 2 C63 DAKD-KLH + KLH-DAKD ucu Familya 3 KLH-3G-DABK JK3 (DAKLP) C-ucu BK'nin ve KD'nin C- Familya 4 KLH-BK ve BSA-BK NR15, NR1 Familya 5 KLH-BK UR29 BK'nin ve DABK'nIn N- Antikor , Temsili _. lmmünojenler Baglama Ozgüllügü Familyalari Antikorlar Familya 6 KLH-BK UR11 BK, DABK ve DAKD KLH-DABK veya KLH- LR4, LR6, Natif peptitler ile Familya 7 DAKD LR12 ve LR16 baglama yok Örnek 4: des-arg-Kinin Ligandi Deplesyonunun Kalsiyum Mobilizasyonu kullanilarak karakterizasyonu Bir fonksiyonel analiz, üretilen antikorlarin yedi familyasini ilaveten karakterize etmek için kullanilmistir. Bradikinin B1 Reseptörü sinyallemesi, Gq kuple edilmistir, bundan dolayi reseptör aktiviasyonu IP3'ün Gq aktivasyonu ve downstream kalsiyum mobilizasyonu kullanilarak izlenebilir. HEK mBKR1 (rekombinant fare bradikinin B1 reseptörü) hücreleri veya MRCÖ (bradikinin B2 reseptörlerinin endojen ekspresyonu; (ATCC GOL-171)) kalsiyum mobilizasyonunu ölçmek için kullanilmistir. Kisacasi, fare Bdkrb1 geni (dizisi asagidaki saglanir), PCR primerleri 804_cGWY_F: 5'- NO: 107) ve 804_CGWY_R: 5'- NO: 108) ve Pfu Polimeraz (Agilent Technologies, Kat# 600264) kullanilarak fare akcigeri cDNA'sindan (Biochain, Kat# 01334152) çogaltilmistir ve BP klonaz enzim Paralel olarak, pEAK8 ekspresyon vektörü (EDGE Biosystems), EcoRI ve Hindlll ile lineer hale getirilmis pEAK8 içine bir N-ucu HA etiketi (GCATACCCATACGACGTCCCAGACTACGCT, Gen Bankasi SEQ ID No: ve EcoRI ve Notl ile sindirilmis ve Klenow polimerazi (NEB, kat# M021OS) ile küt-uçlu hale getirilmis pEAK8_nHA içine Gateway kaseti B'nin (Invitrogen, Kat# 11828-029) müteakip yerlestirilmesi ile modifiye edilmistir, pEAK8_nHA_DEST vektörü ile sonuçlanmistir. Sonra, fare Bdkrb1'i, LR klonaz (Invitrogen, Kat# 11791-100) kullanilarak pEAK8_nHA_DEST içine alt-klonlanmistir. 293-PSC hücreleri akabinde, Fugene 6 transfeksiyon reaktifi kullanilarak pEAK8- Bdkrb1 plazmidi ile transfekte edilmistir. Hücreler, transfeksiyondan 24 saat sonra antibiyotik (puromisin) seleksiyonu altina koyulmustur ve seleksiyon kararli bir hücre hatti üretmek için idame ettirilmistir. Elde edilen kararli hücre hatlarinda Bdkrb1 geninin varligi, gerçek zamanli RT-PCR kullanilarak ve agaroz jel elektroforezi ile konfirme edilmistir. Bradikinin B1 reseptörünün hücre yüzeyi ekspresyonu, bir FACS aygitinda Bradikinin BiR üzerindeki N-ucu-HA etiketine karsi bir antikor (Covance, Kat# MMS- 101 P) kullanilmasi ile gerçeklestirilmistir. Bradikinin B1 reseptörünün fonksiyonel aktivitesi selektif agonistler ile kalsiyum immobilizasyon analizinde gösterilmistir. Hücrelerin içine alt-klonlanan Bdkrb1 geni: ~ Gen Bankasi i.:i-:_i::i:fi?ri'::î-3,~ "310: 11) iki:: HEK mBKR1 veya MRCö hücreleri, büyüme vasati içinde 384 gözlü berrak tabanli plakalara plakalanmistir ve gece boyu tutunmalarina izin verilmistir. Akabinde, büyüme vasati uzaklastirilmistir, hücreler analiz tamponu (HBSS, 20mM HEPES, 2,5 mM probenesid) ile yikanmistir, sonrasinda 37C'de 1 saat boyunca %0,04 Pluronik Asit ile, 0,5 uM FIuo-4AM, bir hücre geçirgen kalsiyum algilama boyasi, ile boya-yüklenmistir. AM esteri yarilir ve kalsiyum boyasi sitoplazma içinde alikonulur. 1 saat sonra, hücreler fazla boyayi uzaklastirmak için yikanmistir ve rezidüel tamponun 20 ul'si hücrelerin üzerinde kalmistir. Muameleler, Hamamatsu firmasindan Fonksiyonel Ilaç Tarama Sistemi (FDSS) üzerinde 2x çözeltiler olarak eklenmistir ve kalsiyum mobilizasyonu en az 4 dakika boyunca kinetik olarak izlenmistir. BiR ve B2R reseptörü aktivasyonu, fosfolipaz C'nin Galfa q aracili aktivasyonu ve IP3 aracili kalsiyum mobilizasyonu ile sonuçlanir. Fluo-4 boya serbest birakilmis kalsiyumu selatlar ve flüoresansta güçlü bir degisim gözlenir. Sonuçlar plaka boyunca hücre yogunlugu veya boya yükleme arasindaki farkliliklar için normalize etmek amaciyla maks-min bagil flüoresans birimleri olarak alinmistir. Ligand potansiyeli, ligandin konsantrasyon yani egrilerini yürütme ile her gün belirlenmistir ve ligandin bir yaklasik E070-80 konsantrasyonu antikorlar ile inkübasyon için seçilmistir. Bir E080 konsantrasyonu, saptama egrisinin lineer araliginda oldugundan ve burada antagonistler veya Iigand tüketen antikorlar ile bir düsüsü görmek için genis pencere oldugundan, seçilmistir. Antikorlarin doz yanit egrisinin, bir E080 konsantrasyonlu Iigandi baglamasina izin vermistir ve Iigand deplesyonunun boyutu flüoresanstaki degisim kullanilarak izlenmistir. Sonuçlar tampona ve E080 Sonuçlar akabinde, kullanilan Iigand konsantrasyonuna bölünmüs Iigand yanitinin Ab'nin E050'si) olarak bildirilmistir. Antikorun bir biriminin ligandin 2 birimini tüketebilmesi gerektiginden teorik maksimum 0,5 olmalidir, ancak biz pratikte daha düsük degerler gördük, ancak bu antikor için bir stokiyometrik kisitlamadan ziyade, düsük Iigand konsantrasyonlari için saptama yönteminin duyarsizliginin bir yansima olabilir. Bu deneylerin sonuçlari Tablolar 1446'da izah edilir. Tüm familya 1 ve familya 2 antikorlari (bakiniz, Tablo 13), Biacore ile üstün baglama kinetikleri (Tablo 3) ve DAKD ve KD peptitlerine karsi kalsiyum mobilizasyonu ile ölçüldügü üzere nötralizasyon aktivitesi göstermistir (Tablolar 14 ve 15). Antikorlar ilaveten, hümanizasyon Için bunlarin termal kararliligi ve dizi uygunlugu için analiz edilmistir. F151, termal olarak kararli oldugundan, burada CDR bölgelerinde problematik rezidüler yoktur ve fare Iigandi KLP'ye ve DAKLP'ye çapraz-reaktif oldugundan, hümanizasyon için gelistirilmistir. Tablo 14: HEK mBKR1 hücrelerinde des-arg-Kinin Ligandi Deplesyonunun Kalsiyum Mobilizasyonu kullanilarak karakterizasyonu DABK'nin DAKD'nin DAKLP'nin DABK DAKD DAKLP (Ortalama (Ortalama (Ortalama Familya Antikor Molar n Molar ri Molar n DABK'nin DAKD'nin DAKLP'nin DABK DAKD DAKLP (Ortalama (Ortalama (Ortalama Familya Antikor Molar n Molar n Molar n 4 MBK3 ND ND ND 4 NR15 ND ND ND 4 NR1 ND ND ND Antikorlar, Bradikinin B1 Reseptörü'nde kalsiyum mobilizasyonunu aktive etmek için edilmistir. Antikor-Iigand karisimi, Hamamatsu FDSSGOOO aygiti üzerinde bir kalsiyum algilama boyasi (Flu0-4AM veya Fluo-8AM) ile önceden-yüklenmis HEK mBKR1 hücrelerine eklenmistir ve kalsiyum mobilizasyonu izlenmistir. Veriler, biyolojik yanitin bir maks-min bagil flüoresansi olarak alinmistir ve Iigand deplesyonu için IC50, Graph Pad Prism v4.03'te sigmoidal egri uydurma kullanilarak hesaplanmistir. Veriler, çesitli DABK'nin DAKD'nin DAKLP'nin DABK DAKD DAKLP (Ortalama (Ortalama (Ortalama Familya Antikor Molar n Molar n Molar n deneyler için kullanilmis olan ligandin farkli konsantrasyonunu standardize etmek için antikor tarafindan ligand deplesyonu için molar oran olarak bildirilmistir. Ligand deplesyonu için Molar Oran = [Antikorun ICSO'si]/ [Ligand] Tablo 15: MRC5 Fetal Akciger Fibroblast hücrelerinde Kinin Ligandi Deplesyonunun Kalsiyum Mobilizasyonu kullanilarak karakterizasyonu BK'nin Deplesyonu KD'nin Deplesyonu KLP'nin Deplesyonu (Ortalama (Ortalama (Ortalama Familya Antikor Molar n Molar n Molar n 3 JK3 IA3OO 2 IA300 2 ND 7 LR4 IA1OO 1 IA100 1 ND 7 LRS IA1OO 1 IA100 1 ND 7 LR12 IA1OO 1 IA100 1 ND Antikorlar, Bradikinin B2 Reseptörü'nde kalsiyum mobilizasyonunu aktive etmek için edilmistir. Antikor-Iigand karisimi, Hamamatsu FDSSGOOO aygiti üzerinde bir kalsiyum algilama boyasi (Flu0-4AM veya Fluo-8AM) ile Önceden-yüklenmis MRC5 Fetal Akciger Fibroblastlarina (ATCC GOL-171) eklenmistir ve kalsiyum mobilizasyonu izlenmistir. Veriler, biyolojik yanitin bir maks-min bagil flüoresansi olarak alinmistir ve kullanilarak hesaplanmistir. Veriler, çesitli deneyler için kullanilmis olan Iigandin farkli konsantrasyonunu standardize etmek için antikor tarafindan Iigand deplesyonu için molar oran olarak bildirilmistir. Ligand deplesyonu için Molar Oran = [Antikorun IC50'si]/ [Ligand] inaktif Örnek 5: F151'in Mühendisligi: Hümanizasyon, Stabilizasyon ve Istenmeyen Dizi Motiflerinin Mutasyonu 1. HÜMANIZASYON Kullanilan hümanizasyon protokolü, burada bütünüyle referans olarak eklenmis olan, (VL) ve degisken agir (VH) dizileri, Molecular Operating Environment'da (MOE: v. 2009.10; Chemical Computing Group) bir anti-DAKD/KD F151 LC ve HC homoloji modeli insa etmek için kullanilmistir. Asagidaki sablonlar kullanilmistir: hafif zincir çerçevesi - iSBS (çerçeve bölgelerinde %93 özdeslik), agir zincir çerçevesi - 2VXT özdeslik) ve HS - 1HIL (%49 özdeslik). Sablonlar, rcsb.org internet sunuculari aginda, Rutgers ve the University of California San Diego tarafindan yönetilen bir internet sitesinde, bulunan RCSB Protein Data Bank'ta mevcuttur (Berman, H.M; Westbrook J.; Feng. Z.; Gilliland, G.; Bhat, T.N.; Weissig, H.; Shindyalov, I.N.; Bourne, P.E. The bunu takiben, MOE'de uygulanan standart prosedürler kullanilarak enerji-minimize yapilmistir. Bunu takiben, Generalized Born örtük çözücü içinde 1,1 nano-saniye (ns) boyunca 500 K sicaklikta protein omurgasi üzerindeki kisitlamalar ile, mürin F151'inin minimize edilmis 3D homoloji modelinin bir moleküler dinamikler (MD) simülasyonu yapilmistir. Son 1 ns boyunca her 100 piko-saniyede (ps) bir bu birinci MD yürütmesinden on çesitli konformasyon çikarilmistir. Bu çesitli konformasyonlarin her biri akabinde, protein omurgasi üzerinde kisitlamalar olmasan ve 2,3 ns boyunca 300 K sicaklikta, bir MD simülasyonuna gönderilmistir. 10 MD yürütmesinin her biri için, MD gidis-izinden, her ps'de bir, son 2.000 anlik-görüntü akabinde, her bir mürin F151 amino asidi için hesap yapmak için kullanilmistir, bunun kök ortalama kare sapmasi (rmsd) bir referans medoid pozisyon ile karsilastirilmistir. Verilen bir amino-asidin 10 ayri MD yürütmesi üzerindeki ortalama rmsd'yi tüm F151 mürin amino-asitlerinin toplam ortalama rmsd'si ile karsilastirma ile, bir kisi amino-asidin MD sirasinda görüldügü üzere büyük olasilikla T-hücresi reseptörleri ile etkilesime girdigi ve immün yanitin aktivasyonundan sorumlu oldugu seklinde düsünülmesi için yeteri kadar esnek olup olmadigina karar verir. CDR ve bunun hemen 5 A civari çikarilarak, 62 amino-asit mürin F151 antikorunda esnek olarak tanimlanmistir. her biri için 10 x 2 ns MD simülasyonu yürütülen, 49 insan germ-hatti homoloji modelinin karsilik gelen esnek amino-asitlerinin hareketi ile karsilastirilmistir. 49 insan germ-hatti modeli, 7 en yaygin insan germ-hatti hafif zincirini (vk1, vk2, vk3, vk4, vlamda1, vlamda2, vlamda3) ve 7 en yaygin insan germ-hatti agir zincirini (vh1a, vh1 b, vh2, vh3, vh4, vh5, vh6) sistematik bir sekilde birlestirme ile insa edilmistir. vk1-vh1b insan germ-hatti antikoru, mürin F151 antikorunun esnek amino-asitleri ile karsilastirilan bunun esnek amino-asitlerinin 0,80 4D benzerligini göstermistir; bundan dolayi, vk1-vh1b germ-hatti antikoru esnek amino-asitlere odaklanarak F151 antikorunu hümanize etmek için kullanilmistir. Mürin F151 vk1-vh1b amino-asitleri arasinda ikili amino-asit iliskisi için, 2 dizi 2 karsilik gelen homoloji modelinin alfa karbonlarinin optimal 3D süper-pozisyonuna göre hizalanmistir (bakiniz, F151 LC'nin 2. STABILIZASYON Antikorun kararliligini iyilestirmek için iki yaklasim kullanilmistir. a) BILGI-TEMELLI YAKLASIM Bunlarin ilgili kanonikal dizilerine kiyasla, CDR'Ier hariç, düsük meydana gelme sikligi olan hafif ve agir zincirlerin amino asitlerinin, en sik bulunan amino asitlere mutasyona ugratilmasi önerilmistir (AAGth 0,5 kcal/mol; E. Monsellier, H. Bedouelle. J. Mol. Biol. mutasyonlarin bu birinci listesi, en yakin insan germ-hattinda (vk1-vh1b) bulunan amino asitler ile sinirlandirilmistir. CDR'Ierin hemen civarindaki (5 Angstrom "Vernier" çikarilmistir. Bu, LC'de 5 stabilize etme mutasyonu (bakiniz, Tablo 19) ve HC'de 4 stabilize etme mutasyonu (bakiniz, Tablo 20) ile sonuçlanmistir. Diger kriterler, anti- DAKD/KD F151 antikorunu potansiyel olarak stabilize etmek için bu mutasyonlari göz önünde bulundurmak amaciyla hesaba katilmistir. Bu kriterler, yüzeyde hidropatinin avantajli bir degisimidir veya mutantin bir moleküler mekanizmalartemelli tahmin edilen stabilizasyonudur. Ayrica, literatürde basarili olacagi bildirilen ilave stabilize etme Tablolar 16-22). Bu degisimlerin biri, asagida HCZa, HCZb ve HC2c dizilerine bir stabilize etme mutasyonu (D89E) olarak katilmistir. Önerilen bir baska degisim (Q62E), varyant HC2b'ye katilmistir. b) 3D ve MD-TEMELLI YAKLASIMLAR 3D ve MD-temelli yaklasimlar önceden bildirilmistir (Seco J, Luque FJ, Barril X., J Med ns üretim simülasyonu) içinde Fab'in moleküler dinamikleri simülasyonunu analiz etme ile açik bir sekilde tanimlanmistir. Akabinde, agregasyonu önlemek için bir tesebbüs olarak bu bölgelerin civarina lizin mutasyonlari uygulanmistir. Schrodinger maestro yazilimi (v. 8.5.20?) içinde bir hidrofobik yüzey haritasi kullanilarak ilave analiz tamamlanmistir. Bu iki teknigin bir kombinasyonu kullanilarak, 1'i agir zincirde ve 1'i hafif zincirde, 2 Lys mutasyonu önerilir. 3. GREFTLEME ILE HÜMANIZASYON Greftleme teknikleri kullanilarak hümanizasyon önceden bildirilmistir (Peter T. Jones, Paul H. Dear, Jefferson Foote, Michael S. Neuberger & Greg Winter Nature, 1986, 321, 522-525). Kullanilan hümanizasyon prosesi, anti-DAKD/KD hafif ve agir zincirlerine en yakin insan germ-hatlarini tanimlama ile baslamistir. Bu, sistematik olarak siralanan tüm insan germ-hatlarina (kappa ve Iamda zincirleri için V & J domenlerinin; agir zincirler için V, D ve J domenlerinin tüm olasi kombinasyonlarina) karsi bir BLAST arastirmasi yürütme ile yapilir. Asagidaki en yakin insan germ-hatlari anti-DAKD/KD F151 hafif zincirlerine (LC) ve agir zincirlerine (HC) sirasiyla %83 ve %62 dizi özdesligi ile tanimlanmistir (bakiniz, Sekil 16). Iç VBASE germ-hatti kullanilarak, hafif zincirin, VH1 alt-familyasinin V IV-B3 tanimlandigi üzere) koyu renkte gösterilir. Alti çizili olan hümanizelestirme mutasyonlari, yukarida tanimlandigi üzere CDR & Vernier zonu rezidülerini çikararak, 2 hizalanmis dizinin bir ikili karsilastirmasini gerçeklestirme ile elde edilmistir. Hümanizasyonun bir baska varyantinda, yalnizca CDR'Ier karsilastirmaya dahil edilmez. 4. ISTENMEYEN DIZI MOTIFLERININ MUTASYONU Dizilerin asagidaki motifleri göz önünde bulundurulmustur: Asp-Pro (asit Iabil bag), Asn-X-Ser/Thr (glikosilasyon, X= Pro disindaki herhangi bir amino asit), Asp- GIy/Ser/Thr (esnek bölgelerde süksinimid/iso-asp olusumu), Asn-GIy/His/Ser/AIa/Cys (açikta kalan deamidasyon yerleri) ve Met (açikta kalan alanlarda oksidasyon). Diger kriterler arasinda, mürin F151'i istenmeyen dizi motiflerine maruz kalmadigindan, mürin F151'inin VL & VH domenleri diger mürin antikorlarindan seçilmistir, ancak bunlar bazi hümanize varyantlarda uygulanir. LCSa, LC3b, HCSa ve HCSb'nin her biri, tanimlanmis olan potansiyel olarak problematik süksinimid yerlerine sahiptir. Dahil edilen rezidüler potansiyel olarak H- bagi agina dahil edildiginden (homoloji modelinin gözle incelenmesi), bu yerler önerilen dizilerde modifiye edilmemistir. Bu pozisyonlar ayrica, çok sayida baska antikor yapisinda da bulunur. Ilave olarak, hem HCßa'da hem de HC3b'de, greftleme ile bir kati hümanizasyon, Ser115'in Met'e bir sübstitüsyonunu içerecektir. Bu Metiyonin açikta kalir. Bu pozisyonda Lösin'e bir sübstitüsyon, bu çok sayida yakin insan germ- hatti dizisi arasinda ortak bir rezidü oldugundan bir hümanizelestirme mutasyonu olarak öne sürülür. Elde edilen hümanize diziler, dizilerin hiç birinin bilinen herhangi bir insan 8- veya T- hücresi epitopu içermedigini garanti etmek için International Epitope Database (lEDB) veri tabanina karsi dizi benzerligi için blastlanmistir (immuneepitopecom internet sunuculari aginda bulunur; versiyon Haziran 2009; Vita R, Zarebski L, Greenbaum JA, Emami H, Hoof I, Salimi N, Damle R, Sette A, Peters B. The immune epitope database (%70'Iik dizi özdesligi, BLAST arastirmasi yoluyla elde edilen sonuçlar için kesim- degeri olarak kullanilmistir ve yalnizca insan türünden elde edilen sonuçlar göz önünde bulundurulmustur). . MÜRIN F151 DEGISKEN DOMENLERININ ORIJINAL DIZILERI kaynaginda tanimlandigi üzere) Vernier bölgelerinin alti-çizilidir. Hafif Zincir (SEQ ID NO: 26) Cgi/"253513 35 ;AYSVGEKVINISCKSSQSLLYSSNQKNYLA Enomcçsp EIPLIYWASTRESCZ'PE;RFTESESEZEETLT i 3 o ii'liSxl-_LLJLA i i :'CQQYYSYPWTÄGS.Elliot-_Li r. Agir Zincir (SEQ ID NO: 19): iItWTGY FDPYNGNTGYNQKFRGTÃT"T\ .. îQTIJUSnViZCêiYYRYDDHAMDYEIQGZSV_VSS E QLQQSGPELÜKPGTSÜKVSCKÄSGYSFTDYNIYWVVQS 6. MÜHENDISLIK UYGULANMIS DIZILER a) Alt-yapi Hafif zincir için 5 versiyon (LC1, LC2a, LC2b, LCSa ve LC3b) ve agir zincir için 5 versiyon (HC1, HCZa, HCZb, HC3a ve HCSb) önerilmistir. LC1, 4D hümanizasyon protokolü kullanilarak tanimlanmis 5 hümanizelestirme mutasyonu içerir. LC2a, bir ilave 5 stabilize etme mutasyonu uygulamistir. LC2b, agregasyonu önlemeye yardimci olmak için 1 Lizin mutasyonu eklemistir. LCSa, en yakin insan germ-hatti dizisine greftleme ve mürin CDR'yi ve Vernier zonu rezidülerini muhafaza etme ile türetilen 15 mutasyon içerir. LC3b, bir ilave hümanizelestirme mutasyonu ile CDR-greftleme ile türetilen 16 mutasyon içermistir. HC1, kurum-içi protokol ile tanimlanmis 6 hümanizelestirme mutasyonu içerir. HC2a, ilave 5 ilave stabilize etme mutasyonu uygularken, HC2b, HC1 ile karsilastirildiginda 6 ilave stabilize etme mutasyonu içerir. HC2C, agregasyonu önlemeye yardimci olmak için, HCZa'nin stabilize etme mutasyonlarina ek olarak, 1 Lys mutasyonu içerir. Hcsa, en yakin insan germ-hatti dizisine greftleme ve mürin CDR'yi ve Vernier zonu rezidülerini muhafaza etme ile türetilen 19 mutasyon içerir. HC3b, CBR-greftleme ile türetilen 25 mutasyon içerir. Toplamda 6 kombinasyon önerilmistir (Tablo 16'da özetlenmistir): o LC1 x HC1 (yalnizca hümanizasyona deginen mutasyonlar) o LC2a x HCZa (hümanizasyona ve stabilizasyona deginen mutasyonlar) o LC2a x HCZb (hümanizasyona ve stabilizasyona deginen mutasyonlar) o LC2b x HC2c (hümanizasyona, stabilizasyona ve "anti-agregasyona" deginen mutasyonlar) oLCSa X HCSa (çogunlukla greftleme + Vernier ile hümanizasyona deginen mutasyonlar) . LC3b x HCBb (greftleme ile hümanizasyona deginen mutasyonlar) Tablo 18: Önerilen 8 LCXHC kombinasyonlarinin kisa açiklamasi etme + stabilize etme Greftleme (LCZa) Hümanize + stabilize etme + anti- (LC1)HLJmanize etme (LCZb) Hümanize etme agregasyon Vernier bölgeleri ile (LCSa) Greftleme Hümaniie etme Hümanize etme + stabilize etme Hümanize etme + stabilize etme Hümanize etme + stabilize etme x agregasyon Tablo 17: Anti-DAKD/KD F151 antikorunun 5 LC varyantinin mutasyonlari Hafif Zincir Hafif Zincir Sirali Kabat Numaralan Numaralan hümanizele stirme mutasyonla hümanizele stirme + stabilize mutasyonla hümanizele stirme + stabilize mutasyonla ri + anti- agregasyon mutasyonla Greftle rezidül Yalniz Greftle Hafif Zincir Hafif Zincir Sirali Kabat Numaralan Numaralan __ _ (LC1) humanizele humanizele stirme + stirme stabilize mutasyonla etme ri mutasyonla Mutasyonlar 5 10 hümanizele stirme + stabilize mutasyonla ri + anti- agregasyon mutasyonla Greftle (LC3b) me Yalniz CDR'Ie ca ri + Greftle Vernie me r CDR'Ie rezidül ri Tablo 18:anti-DAKDIKD F151 antikorunun 6 HC varyantlarinin mutasyonlari 300:. Enigma::: mEuo ou...n3m + @Ego 05:25.... AoNOIV .... Ly538 Hi541 Ly543 Ly566 Ly573 Ly538 Hiss? P-isSl Glu Glu Stars-4 C Serö'aA . ' Arg A'g lmJFß leu8?C lys Aspgcl AspSö Glu Glu GL: Ser9' 52197 'H Thr Seri 15 Serloa Leu Leu a) Mühendislik uygulanmis hafif zincir dizileri: Önerilen varyantlarin hiç birinde, bilinen potansiyel olarak problematik T-hücresi veya B-hücresi epitopu bulunmamistir. LC1 (SEQ ID NO: 27), hümanizelestirme mutasyonlarinin alti-çizilidir, CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir: WYQQVÜF KPLIYWASTRESCE-"DERFTGSGSGTZFTLT LC2a (SEQ lD NO: 28), hümanizelestirme mutasyonlarinin alti-çizilidir, CDR'ler ve vernier zonlari koyu renktedir, stabilizasyon mutasyonlari italiktir (asagida gösterilen pozisyon 5'te T, pozisyon 12'de S, pozisyon 21'de I, pozisyon 69'da S, pozisyon 91'de T): D IVMIQSE' E 3 Largsmßtî 1.:: ::(3 SQSLLYS SNQKNYLA WYQQKPCESPIÇPLIYWASTRESTVI DRFSGSGSGTDFTLT i s SV'QiJîiLA .- 1 YCQQYYSYPWTFîÇ-'GG- ;Ust im' LC2b (SEQ ID NO: 29) hümanizelestirme mutasyonlarinin alti-çizilidir, CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir, stabilizasyon mutasyonlari italiktir (asagida gösterilen pozisyon 5'te T, pozisyon 12'de S, pozisyon 21'de l, pozisyon 69'da S, pozisyon 91'de T) ve bir anti-agregasyon mutasyonu, pozisyon 89'daki K'dir: D I'JMIQSP : s L.57;\S`=.'I4%'.'T 1.:: ms SQSLLYS SNQKNYLA WYQQKPCEZPIÇPLIYWASTREST'JI DRFSGSGSGTZFTLT 1 s SV(_;.4.l-_'.L;;<-.A _. 1 YCQQYYSYPWTF ::issxmin LC3a (SEQ ID NO: 30), grefte edilmis mutasyonlar alti-çizili sekilde gösterilir ve CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir: DIVMZQSFQS LI-f-.I'SLGEETECKS SQSLLYS SNQKNYLA WYQQI'I P( Dili HFLIYWÄS'I'RESI'i`Ji` ÇI'RI'EGIZGÜGTIZF'I'V .' 3 L_ÇAEL`:AYI 'ECQQYYSYPWTF &genis : i' LC3b (SEO ID NO: 31), grefte edilmis mutasyonlar alti-çizili sekilde gösterilir ve CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir: o IKIMIQSP 25 LiHsgîsEErgCKs SQSLLYS SNQKNYLA WYQOPIDGQEPW_LIYWASTRES"NF îvRFgGssr'aGTâFTî * i ::olamissayn CQQYYSYPWTFLSQG'IKEU_1-1. Pozisyon 52'deki L'nin, insan için mutasyona ugratilan bir Vernier rezidüsü oldugu göz önüne alinmalidir. 0) Mühendislik uygulanmis agir zincir dizileri HC1 (SEQ ID NO: 20), hümanizelestirme mutasyonlarinin alti-çizilidir, CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir: FIQT.EQSCI'FIVF'ZPfîSRW'WßCT/IASGYSFTDYNIY'WKÇQ MHLs,s;Ts:Dset/Y&TANYYRYDDHAMDYWGÇGTS':Tvs3 HCZa (SEO lD NO: 21), hümanizelestirme mutasyonlarinin alti-çizilidir CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir, stabilizasyon mutasyonlari italiktir (asagida gösterilen pozisyon 1'de Q, pozisyon 9'da A, pozisyon 44'te G, pozisyon 80'de Y ve pozisyon 90'da E): gL-'l'aJ'LEWIGYFDPYNGNTGYNQKFRGEJXLL'i'VlsKijL ;:'l'A i' MH LSE- LT SSES HEY `I`CANYYRYDDHAMDYWGQSISVIVS â. HCZb (SEQ ID NO: 22), hümanizelestirme mutasyonlarinin alti-çizilidir, CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir, stabilizasyon mutasyonlari italiktir (asagida gösterilen pozisyon 1'de Q, pozisyon 9'da A, pozisyon 44'te G, pozisyon 62'de E, pozisyon 80'de Y ve pozisyon 90`da E): ÇI îT_îC`›C .ÂF'.\FT«'7I P (vîFiV'JT' 71-`, (71" A SGYSF TDYN IYW'IF'QF g?,l;(:'LljWIGYFDPYNGNTGYNL'KFRGSAI L'l'VL) Kb 1, ; TA `i MH LSS L 53135 :IS-"Y Y*IANYYRYDDHAMDYWGQGISVIVS 3 HC2c (SEO ID NO: 23), hümanizelestirme mutasyonlarinin alti-çizilidir, CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir, stabilizasyon mutasyonlari italiktir (asagida gösterilen pozisyon 1'de Q, pozisyon 9'da A, pozisyon 44'te G, pozisyon 80'de Y ve pozisyon 90'da E) ve bir anti-agregasyon mutasyonu pozisyon 86'daki ÇIQLEQSGEEYEKPGGSV275CEASGYSFTDYNIYWTKQE MH LSSKT SgES ::HY Y*IANYYRYDDHAMDYWGQGISVIVS 'i HC3a (SEO ID NO: 24), grefte edilmis mutasyonlar alti-çizili sekilde gösterilir ve CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir: g I QL:QS c-:::EEKP C-î-_svxvs CEIASGYSFTDYNIYIFJBÇI: »19.55 ;ESJUli-'J-J i' :' ÇANYYRYDDHAMDYWG'; ;315.1 vs '3 LC3b (SEO ID NO: 25), grefte edilmis mutasyonlar alti-çizili sekilde gösterilir ve CDR'Ier ve vernier zonlari koyu renktedir: Asagidaki Vernier Rezidülerinin insan için mutasyona ugratildigi göz önüne alinmalidir: pozisyon 2'deki V, pozisyon 48'deki M, pozisyon 68'deki V, pozisyon 70'teki M ve pozisyon 74'teki T. Rezidü Tablo 19: Hafif Zincirde Önerile Stabilize Etme Degisimleri Önerilen Hesaplanan Degisimi Kabul Etme Degisim Gth Thr 2.32286 Evet Ser 0.75228 Evet Leu 1.70059 Hayir - Vernier bölgesi Ser 1.10843 Evet Glu 2.00115 Hayir - hümanizasyon sirasinda Gln'ye degistirilmis Rezidü Rezidü Önerilen Degisim Hesaplanan 1 .27255 Degisimi Kabul Etme Tablo 20: Agir Zincirde Önerile Stabilize Etme Degisimleri Önerilen Degisim Hesaplanan 0.562423 2.15882 0.505324 1.50552 2.21586 1.03643 1.67738 1.5068 0.74934 2.32314 1.30935 2.24674 1.65409 3.65643 Degisimi Kabul Etme Hayir - Vernier bölgesi Hümanizasyonda halihazirda Ala'ya degistirilmis Hayir - germ-hatti dizisinde yok Hayir - germ-hatti dizisinde yok Hümanizasyonda halihazirda Pro'ya degistirilmis Hayir - germ-hatti dizisinde yok Hayir - germ-hatti dizisinde yok Hayir - germ-hatti dizisinde yok Hümanizasyonda halihazirda Glu'ya degistirilmis Hayir - Vernier bölgesi Tablo 21: Degerlendirilen stabilize etme mutasyonlarinin kombinasyonlari Kombinasyon* L1 (469P & 489Q) Önerilen ilaven degisimler K48-)Q Degisimi Kabul Etme Hayir - K48 hümanizelestirme mutasyonu Kombinasyon* Önerilen ilaven degisimler Degisimi Kabul Etme L2 (51 öK) Yok - halihazirda K51 Yok L3 (80-)T) Yok - halihazirda T80 Yok L4 (8298) Yok - halihazirda 882 Yok yukarida önerilir (Tablo 1) H1 (159G) Yok - halihazirda G15 Yok 649F) F64 S1 (L1 & L5) K489Q Hayir - K48 hümanizelestirme mutasyonu 82 (H1 & H3) D899E Hayir (bakiniz, H3) *Not Rezidüleri ifade etmek için kullanilan sirali numaralandirma Tablo 22: Potansiyel Stabilize Etme Mutasyonlari Hafif Zincir Önerilen ilaven Degisimi Kabul Etme Rezidüsü* degisimler -)L V159L Hayir- V15, Vk1 germ-hattinda 38-)Y Yok - halihazirda Y38 Yok 112-)I Yok - halihazirda I112 Yok 6998 G69-)8 Hayir - G69, Vernier Bölgesi'nde 21 öl M219l Halihazirda degistirilmis (bakiniz, *Not Rezidüleri ifade etmek için kullanilan sirali numaralandirma Örnek 6: Hümanizasyon Varyantlarinin Karakterizasyonu Tablo 16'da sunulan in siliko modellemeye göre, hümanize F151'n hafif zincir (VL) ve agir zincir (VH) DNA'sinin degisken bölgesi HEK293 ekspresyonu için kodon optimize edilmistir ve gen GeneArt (Life Technologies firmasinin yardimcisi) tarafindan sentezlenmistir. Sentezlenmis DNA fragmanlari sirasiyla, hafif zincirin sabit bölgesini (CL) kodlayan vektörlere, pFF, ApaLI/BsiWI yerlerinden ve agir zincirin sabit bölgelerini (CH1, CH2 ve CH3) kodlayan vektörlere, pFF, ApaLI/Apal yerlerinden klonlanmistir. boyunu içeren pFF0466 elde edilen plazmidleri, FreeSterTM 293 Ekspresyon Sistemi (Invitrogen/Life Technologies, katalog no. K9000-01) içine birlikte-transfekte edilmistir ve geçici olarak eksprese edilmistir. Tablo 16'da gösterilen alti hümanize varyant, çesitli parametreler, örnegin, baglama kinetikleri (yukarida tartisilir) ayni zamanda kimyasal ve fiziksel özellikler, örnegin, teknikte rutin olarak kullanilan termo-kararlilik, ile karakterize edilmistir. Karakterizasyon iki asamada yapilmistir. Asama 1, Tablo 24'te ve Sekil 2'de gösterilen diferansiyel tarama kalorimetrisini (DSC) içermistir. Kisacasi, DSC deneyleri için, antikorlar fosfat-tamponlu salin çözeltisine karsi diyalizden geçirilmistir. Antikor konsantrasyonu, UV absorbansi ile ölçülmüstür. Antikorlar, PBS kullanilarak 1 mg/mL'ye seyreltilmistir. Taramalar, referans hücresinde PBS ile bir 0,3268 mL'Iik kapiler hücre kullanilarak bir Calorimetry Sciences Corporation N-DSC II aygiti kullanilarak gerçeklestirilmistir. Tarama hizi, 2°Cldakikadir ve örnekler 20°C ila 100°C araliginda taranmistir. HCSb/LCSb disindaki tüm varyantlar, parental antikora karsilastirilabilir baglama afiniteleri göstermistir. Varyant HCSa/LCSa, diger fizikokimyasal özelliklere, örnegin, SEC verilerine, kararliliga ve agregasyon olmamasina, dayanarak diger varyantlara kiyasla seçilmistir (bakiniz, Tablolar 23-25). Tablo 23. Hümanize F151 Varyantlarinin Kinetiklerinin Karsilastirmasi HC1ILC1 HC2a/LC2a DAKLP-b DAKLP-b DAKLP-b Karsilastirma HC1ILC1 HCZb/LC2a HC3aILC3a için: mF151'in Ka(1lMs)'si, DAKD-b HC2a/LC2a 1.22E-05 6.12E-06 .67E-06 2.68E-05 HCZc/LCZb 4.34E-05 9.08E-06 1 .10505 1.02E-05 HC3b/LC3b .15E-05 3.02E-06 2.76E-O3 2.72E-O4 Için 7,84E+05'tir, 1.83E-11 8.71E-12 1.38E-11 4.34E-11 9.01E-11 1.74E-11 1.21 E-11 1.98E-11 1.355-10 1.44E-11 4.05E-08 .26E-10 Tablo 24: Humanizasyon varyantlarinin Asama 1 karsilastirmasi g ^ 5 E I .2 ::5 6› 3 g g; ?â E 5 8 gg 0 E 'E 2 3 3 :3 '3' G "7 N E c in :5 '..` 3 I" I 7.- ;E D E L Oê g Varyant " ° ° LC' TO?' Ag 70.0(m) &g g E S` HC2al 2.01 JLJ ..AJ v., 75.0iMi _5; T; 2 T; g : LCZa 83.0tmi r: 1 ?3 g 2? «:3 LC2b Trek' 64.0(m) g g % g .. gg 82.5imi g 2 ;3 e '-5 D e .:5'9'34; 5 N 3( N ; N LCSa i"0l:: 71.8lmi 3 g g g ; en »is's'i g '° '9 â '0 LCJb `fok 71.4(m) g. _ g_ g 06 -- :0 s o. 8. o_ 73 Kisaltmalar: Ag = agregasyon. Deg = parçalanma Tablo 25. Hümanizasyon varyantlarinin Asama 2 karsilastirmasi Varyant 1D-jel HC1I Ag/Deg Ag/Deg Termo-kararlilik Biacore 4C'ye kiyasla 45C biraz Kararlilik Konfirmasyonu Eksiksizlik ayrilma) ayrilma) N-ucu dizileme konfirmasyonu N-ucu dizileme Aynen LC & HC N uçlari Termo-kararlilik ayrilma 4C'ye kiyasla 45C biraz ayrilma 4C'ye kiyasla 45C biraz HC2bl Ag/Deg Ag/Deg n LC2a Yok Yok ayrilma 4C'ye kiyasla 450 biraz HC3a/ ayrilma HC3b/ Eksiksizlik N-ucu dizileme Kararlilik Konfirmasyonu konfirmasyonu GO baskin LC (üzerinde) HC (uzerinde) N uçlari GO baskin ayrilma) Aynen LC & HC N uçlari ayrilma) GO baskin LC (-2Da ayrilma) HC (-2Da Aynen LC & HC ayrilma) N uçlari GO baskin Termo-kararlilik = 3 gün boyunca 4°C'de (kontrol) ve 45°C'de inkübasyon; 1D-jel, Eksiksizlik N-ucu dizileme Termo-kararlilik Kararlilik Konfirmasyonu _ konfirmasyonu indirgememe kosullari altindadir; Kararlilik = 2 siklus dondurma/çözülme; LC-MS = indirgenmis ve indirgemis/deglikosilasyon Kisaltmalar: Ag=agregasyon, Deg=parçalanma, X = veriler sunulmamistir Parenlal ?151 DegiskenAgirZinc'i' Degisken HafifZinc'i' Hümanize F151iHcsaJLcsa) Prgtain Tek alt-çizgi = CDR bölgesi: iki alt-çizgi = CDR'Ieri tanimlamak için imza amino asitler Parental F hizalanmasi için, bakiniz, Sekil 3. Örnek 7: BRK1 Ligandi Kallidin'e ve des-arg10-Kallidin'e karsi hümanize Antikor F151'in Kristal Yapisi Kallidin'e veya des-argiO-Kallidin'e baglanmis hümanize F Fab'inin kristal yapilari belirlenmistir ve moleküler etkilesimler analiz edilmistir. Kallidin tozu, Phoenix Pharmaceuticals (Kat. No. 009-37) firmasindan satin alinmistir. Fab proteini üretimi için, hümanize F VH bölgesinin DNA'si 6XHis etiketli CH1 vektörü pFF0366'ya klonlanmistir. Burada kullanilan hafif zincir (LC) plazmidi, F151 hümanizasyonunda kullanilan orijinal F151 LC3a'ninki ile aynidir (bakiniz, Örnek 5). Iki plazmid, Fab ekspresyonu için serbest stil HEK293 hücrelerine birlikte-transfekte edilmistir. Fab proteini, kobalt-reçinesi kullanilarak saflastirilmistir, tampon yaklasik 9 mg/mL'ye konsantre edilmeden Önce 50 mM MES, pH 6,0, 50 mM NaCI'ye degistirilmistir. Saflastirilmis F151 Fab proteini, 12'lik bir molar oranda Kallidin ile karistirilmistir ve kristalizasyon taramasi için ayarlanmistir. Kristalizasyon taramasi, çok çesitli kosullar ile yapilmistir. En iyi kristal, Hampton Research arastirma kiti PEG/ION HT'nin 810, 812 ve G10 kosulu altinda gözlenmistir. Kristaller, göz tamponu içinde %20 gliserol ile dondurarak-korunmustur ve kirinim verileri toplanmasi için dondurulmustur. Her iki kompleks için X-isini kirinim verileri Canadian Light Source'da, isik huzmesi yolu CMCF-OSID, toplanmistir. F151-KD kompleksi için Rbirlesme, %8,9 ve Ils(l) = 20,2 iken, F151-DAKD için bunlar sirasiyla, domenlerine muamele ederek, PDB girisi 3QOS'den Fab koordinatlari kullanilarak Phaser'da moleküler degistirme ile çözülmüstür. Yapi, autoBuster`de, P212121 uzay düzeltilmistir. F151-DAKD yapisi, F151-KD koordinatlari kullanilarak çözülmüstür. Yapi, 0,238'lik bir Rserbest'e düzeltilmistir. Sekiller 4'te ve 5'te gösterilen elektron yogunluk haritalari, Kallidin'in (KD) ve des-Argw- kallidinin (DAKD) F151 Fab'ini baglamasini gösterir ve açik bir sekilde, her bir aminoasit pozisyonunu belirler. Kallidin için, asiri C-ucu rezidüsü Arg10 için elektron yogunlugu yoktur. Bu, C-ucu rezidüsü arjinini eksik olan DAKD'nin (asagida Tablo 27'de gösterilir) F151'i KD ile esit sekilde iyi bagladigi gözlemi ile tutarlidir. KD'ye ve DAKD'ye dogru nötralizasyon FDSS hücresel analizinde F151'in IC50 degerleri sirasiyla, 0,12 nM'dir ve 0,09 nM'dir. Her iki durumda da, elektron yogunlugu, peptitlerin C-uçlarina dogru daha zayiftir. KD'deki Phe9, DAKD'de olana kiyasla biraz daha iyi elektron yogunluguna sahip oldugundan; bu arjininin kendisinin X-isini ile gözlenmeye yetecek kadar kararli olmamasina ragmen, KD'nin C-ucunda ilave arjinin varliginin F151'i bagladiginda bu peptidin C-ucunu stabilize etmesi olasidir. Iki yapi esas olarak özdes oldugundan (KD ve DAKD arasindaki rms, C atOmIari için 0,139'dur ve tüm atomlar için 0,328'dir), asagidaki tartismalarin tümü F151-KD yapisina göredir. Tablo 27. Kinin peptitlerinin seçilmis bir listesi Peptit adi SEO Dizi KD (Kallidin) 1 Lys-Arg-Pro-Pro-GIy-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg DAKD(des-Arg'°-Kallidin) 2 Lys-Arg-Pro-Pro-GIy-Phe-Ser-Pro-Phe KLP(kemirgen KD ortolog) 3 Arg-Arg-Pro-Pro-GIy-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg BK (Bradikinin) 5 Arg-Pro-Pro-GIy-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg KD, Sekil 6'de gösterildigi üzere, hafif ve agir zincirlerin Fv alt-birimleri arasindaki ara yüzde gömülü olan bunun N-ucu ile baglanir. Hafif ve agir zincirler arasindaki ara yüz, istifleme ve hidrofobik etkilesimler yoluyla birbirini stabilize eden, Tyr-L42, Tyr-L93, Tyr- aromatik amino asitler ile doldurulur. Hafif ve agir zincirlerin CDR'Ierinin her birinden rezidüler, baglamaya katkida bulunur. Hafif ve agir zincirler boyunca, CDR'Ier üzerinde haritalandigi üzere KD ile etkilesimlere dahil edilen rezidüler Sekiller 7'de ve 8'de gösterilir. Agir zincirin CDR H3'ü, en uzun kivrimdir ve KD için bir yan kapak olusturarak, KD ile etkilesimlerde en sik sekilde kullanilandir. Kivrim agirlikli olarak, diger iki CDR, agir zincirin H1'i ve H2'si, yani, Asp-H101 ve Arg-H52 arasindaki Tuz köprüsü (H1'i ve H3'ü stabilize eder), Tyr-H102 ve Tyr-H54 arasindaki aren-H etkilesimi Tyr-L55 arasindaki H-bagi (H3'ü ve L2'yi stabilize eder), ile etkilesimler yoluyla stabilize edilmistir. Üretilen antikorlar arasinda KD ile etkilesime giren rezidüler karsilastirilarak, antikorlar arasinda benzerlik oldugu ve bazilarinin digerlerine kiyasla KD-etkilesimi için özel amino asitlerin kullanimi ile daha çok ilgili oldugu görülebilir. Örnegin, hafif zincirde, F151, C63 ve I22, KD'yi baglamak için bunlarin CDR'Ierinde daha benzer amino asitler birbirine ve BZ1'e, I22'ye ve I54'e benzemez. Son üçünün benzerlik açisindan bir grup olusturdugu görülür. 063, H2'deki ve H3'teki kivrim boyunun tüm digerlerinden daha farkli olmasi açisindan, bunun agir zinciri ile özellikle ilgilidir. Bir bütün olarak Fab düsünüldügünde, 821 ve i54 en yakin iliskilidir. Kristal yapida, KD'nin Fab ile sistemik hidrojen bagina ve hidrofobik etkilesimlere dahil edigini bulduk. KD'nin N-ucu Fab içine gömülürken ve daha yogun etkilesimler barindirirken, C-ucu esas olarak çözücüde açikta kalir. Ilk 4 rezidü (Lys-Arg-Pro-Pro) disinda, KD'nin diger rezidüleri kademeli olarak yigin çözücü içine uzanir. Lyst yan- zincirinin amidinyum grubu, tuz köprüleri yoluyla Glu-L61 (L: hafif zincir) ile ankrajlanirken, amino ucu amino grubu Lys1, Asp-H ile bir tuz köprüsü olusturur. Lys1 yan-zincirinin amidinyum grubu ayrica, katyon etkilesimlerine dahil edilen, Tyr-L55'in aromatik halkasi üstüne çikinti yapar. Lys1 ile dahil edilen bu tarz yogun etkilesimler, Fab içinde KD'nin amino ucunu siki bir sekilde ankrajlar. Bu ayrica, KD'nin F151'i baglamasinda Lys1'in önemine de açiklama getirir. Bu (yani, biradikinin) olmadan, hF151'i veya F151`i saptanabilen baglama ölçülemeyebilir. Lysi'e benzer olarak, Arg2, bir tuz köprüsü yoluyla Fab ile etkilesime girer. ArgZ'nin guanidiyum grubu, Asp-H104'ün yan-zinciri ile etkilesime girer. ArgZ'nin yan-zinciri ayrica, Arg-H101'in ana-zincir karbonil oksijeni ile H-baglanir. Ayrica, Pr08'in ana-zincir oksijeni, Arg-H101'in yan-zincirine H-baglidir. Tyr-H102, KD ile hidrofobik etkilesimlere dahil edilerek, Phe8'e ve Pr09'a yarim interkalardir. Dogrudan etkilesime ek olarak, KD ve Fab arasinda çok sayida su-aracili H-bagi da görülür. Tirozin rezidülerinin diger amino asitlere kiyasla etkilesimde en sik kullanildiginin farkina varmak da ilginçtir; Sekiller 7'de ve 8'de yildiz isaretleri ile isaretlenmis 16 rezidünün 9`u, tirozindir. KD'yi çevreleyen F151 içindeki rezidülerin, Phe6 yan-zincirine yakin olan, ancak polarite açisindan uyumsuz olan diger önemli etkilesimlerden yoksun olan Asn-H33 disindaki, tümünün ligand baglamada bir rol oynadigi görülür. Aromatik/hidrofobik rezidüler, örnegin, Phe8 ile etkilesim için Trp veya Tyr, ile sübstitüsyonun, afinite matürasyonu göz önüne alindiginda, çabuk bir seçim oldugu görülür. Bu iki aromatik amino asit gerçekte diger antikorlarda (C63'te Trp ve BZi'de l22'de l54'te Tyr) görülür. Asagida Tablo 28, Sekiller 7'de ve 8'de isaretlenmis 16 KD ile etkilesime giren amino asit rezidüsünün detayli bir analizini saglar ve CDR bölgeleri içinde yapilabilen, antijen baglamayi bozmamasi gereken fonksiyonel sübstitüsyonlari izah eder. Tablo 28: KD baglama cebi etrafinda bulunan amino asit rezidülerinin bir listesi ve KD baglamada bunlarin rolleri ve potansiyel fonksiyonel sübstitüsyonlar (gri- renkli hücrelerde hafif zincir rezidüleri ve gölgelendirilmemis hücrelerde agir Rezidü zincir rezidüleri vardir) KD Baglamadaki veya CDR Stabilizasyonundaki Rol - Pro4 ile hidrofobik etkilesimler avantaji saglar . Tyr-L38 ve Tyr-L98 ile birlikte, Pr04'te KD'nin 90 derece etrafini saran üç ortolog düzlem olusturur - Pro4 ile hidrofobik istifleme - Tyr-L31 ve Tyr-L98 ile birlikte, Pr04'te KD'nin 90 derece etrafini saran üç ortolog düzlem olusturur iyonu ile katyon-etkilesimi - His-H105 ile H-bagi; Tyr-L55 -- His-H105 eslesmesi L2 ve H3 kivrimlari arasina stabilizasyon - Lysl yan-zinciri ile anahtar yüz köprüleri olusturma - Trp-L56'nin amid N'si ile H-bagi olusturma Fonksiyonel Sübstitüsyon i Pr05'in amid N'si ile bir H-bagi eklemek ° baska aromatik a.a., örnegin, Trp ve ~ Arg2'nin karbonil O'su ile bir H-bagi eklemek için His ° Gln, Asn, Glu veya Asp'nin H105 mutasyonlari ile eslesmesi Için Trp (H- bagini idame ettirir); His_H105'in diger varyantlari Tyr'dir ve Ser'dir. . Asp, Gln, ASN (Asp, 821 'de ve I54'te halihazirda görülür, Sekil 7) - Aromatik aa.. örnegin. Phe veya His (Trp için çok siki bosluk) Rezidü KD Baglamadaki veya CDR Stabilizasyonundaki Rol Pro4'te KD'nin 90 derece etrafini saran üç ortolog düzlem olusturur - Pr03 için cep yüzeyi olusturma . L/H zincirleri arasindaki aromatik a.a. kümesi ara yüzünün parçasi, ilaven Tyr-L42, Tyr-L93, Trp_L102, Phe-L104 ve Tyr-H35, Trp-H47, ~ Tyr-H50 ile parsiyel istifleme . L/H zincirleri arasindaki aromatik a.a. kümesi ara yüzünün parçasi - Trp-H47 ile istifleme - Pheö yan-zincirine yakindir, ancak matürasyonu için bir hedef olabilir - Arg-H101 ile tuz köprüsü, H1 ve - Pro8'e yakindir, ancak spesifik etkilesimler yoktur - Arg-H101 'e yakindir, ancak yük etkilesimleri yoktur Fonksiyonel Sübstitüsyon veya His . Aromatik a.a., örnegin, Phe (Pr03 ile daha iyi hidrofobik etkilesimler) - Baska aromatik a.a., örnegin, Tyr'dir ~ Baska hidrofobik rezidü, örnegin, L (I22'de) (Cö3'te görülür) veya Tyr (821, I22, l54'te görülür) ile degistirilir . KD'nin Pheö'si ile bir küme olusturmak için, Arg-H101 ile bir çift olarak ters yüklü a.a., örnegin, Arg-H52/Asp-H101 veya bir hidrofobik a.a. çifti (Leu, Ile, Val, Met, Phe, Tyr, Trp, Ala) ile mutasyona ugratilir . Arg-H101 'i stabilize etmek için negatif yüklü a.a.'ya, örnegin, D'ye veya E'ye (821 'de, l22'de ve l54'te görülür) veya N`ye veya Q'ya, mutasyona ugratilir, ayrica Pr08'in karbonil O'su ile H-bagi da Rezidü KD Baglamadaki veya CDR Stabilizasyonundaki Rol aromatik ara yüzün parçasi - Asn-H33 ile H-bagi . Siki bosluk . Pro8'in amidi ile H-bagi - Asp-H52 tarafindan desteklenir (tuz köprüsü) . PheQ'a ve Pr08'e yarim interkalardir, KD ile hidrofobik etkilesimler - Arg2 ile tuz-köprüsü ile anahtar rezidü - KD'nin N-ucu -NH3+ ile tuz köprüsü için anahtar rezidü - Tyr-H33 ile H-bagi, H3 kivrimini stabilize etme - Korunmus rezidü! CDR içinde Fonksiyonel Sübstitüsyon saglar (Glu'ya yükü-degistirilebilen Cöß'teki bir Lys) i W disindaki küçük aromatik a.a.'ya, Örnegin, Phe'ye ve His'e, mutasyona ugratilir için, Asp-H52 ile bir çift olarak ters yüklü a.a., örnegin, Arg-H52/Asp-H101 veya bir hidrofobik a.a. çifti ile mutasyona ugratilir ° Phe, daha iyi olabilir, Trp veya His, de TAMAM olabilir Için Glu doldurmak için daha büyük a.a., örnegin, 821'de, I22'de ve I54'te görüldügü üzere Kallidin'in (KD) veya des-Arg10-Kallidin'in (DAKD) konformasyonel epitopunun analizi, bunun bir "Pro4 kivrilma" konformasyonuna uyum sagladigini ortaya çikarmistir. Sekil 17'de gösterildigi üzere, "Pr04 kivrilma" konformasyonunun bir özelligi, Prolin 4'te KD'nin veya DAKD'nin ana zincir polipeptit omurgasindaki bir tip II siki dönüstür (bakiniz, burada referans olarak eklenmis olan, Richardson JS. "The anatomy and konformasyonu ilaveten, KD'nin (1-2 ve 6-9) veya DAKD'nin bir uzaysal olarak istifleme modunda hidrofobik yan zincirleri hizalayan bir sigmoid sekilli tekrarlara uyum saglayan kalan amino asitlerinin tümü veya büyük ölçüde tümü ile tanimlanabilir. Örnek 8: Agri Modellerinde anti-BKR1-Ligandi Antikorlarinin in vivo Farmakolojisi 33:87-107, kaynaklarinda tarif edilen modifiye edilmis prosedürlere göre akut ve kronik agrinin farkli preklinik modellerinde anti-BKR1 reseptörü-Iigandi antikorlarinin in vivo etkinligini gösterir. Hayvanlar Deneyler, formalin çalismalari için erisken erkek OF1 fareleri (20-30 gr) ve hem CFA hem de CCI çalismalari için erisken erkek C57BI/6J fareleri (25-30 gr) kullanilarak yürütülmüstür. Fareler, bir 12 saat aydinlik-karanlik döngü altinda bir kontrollü sicakliktaki odada tutulmustur. Besin ve su, serbest yemleme olarak saglanmistir. Deneylerin tümü için, fareler test etmeden önce en az 2 saat boyunca laboratuvar odasina klimatize edilmistir. Çalismalar için randomizasyon yapilmamistir. Davranissal testler gerçeklestiren arastirmacilar tedaviye kör degildir; bununla birlikte, bunlar çalisma hipotezinden haberdar degildir. Tüm prosedürler, sanofi-aventis recherche & développement firmasi "Comité d'Expérimentation pour la Protection de l'AnimaI de Laboratoire" (Hayvan Bakim ve Kullanim Kurulu) tarafindan onaylanmistir ve A. Formalin-indüklü akut enflamatuvar agri Formalin testi, nosiseptif ve enflamatuvar agriyi ölçmek için kullanilmistir. Gerçekte, formalinin intra-plantar enjeksiyonu, bir baslangiç akut nosiseptif davranissal yanit (0- 12 dakika) indükler, bunu omurilik eksitabilitesine atfedilen, bir ikinci enflamatuvar- aracili yanit (15-45 dakika) izler. Formaldehit (%37, Sigma), bir %2,5'lik formaldehit konsantrasyonu (yani, 5 %625 formalin konsantrasyonu) elde etmek için salin (v/v) içinde seyreltilmistir. Fareler nazik bir sekilde tutulmustur ve bu çözeltinin 20 uL'si bir arka patinin dorsal kismina subkütan olarak enjekte edilmistir. Davranissal yanitlar formalin enjeksiyonundan hemen sonra, bundan sonra asagida oldugu üzere 45 dakika boyunca 3 dakikalik araliklarla, skorlanmistir: (O): enjekte edilmis patiyi tasiyan normal agirlik; (1): yere hafif bir sekilde dayanan enjekte edilmis pati; (2): enjekte edilmis patinin yüksege-kaldirilmasi; (3): enjekte edilmis patiyi yalama veya isirma. Grup boyutlari, 11-12 erkek OF1 faresidir. Skorlarin zamana karsi grafigi çizilmistir ve egrilerin altinda kalan alanlar (AUC), hem hesaplanmistir. Agri-benzeri davranislarin tersine dönmesi, AUC'de % olarak degisim olarak ifade edilmistir. EE1 antikoru, erkek OF1 farelerinde formalin testinin geç fazinda agri-benzeri davranisi inhibe etmistir. Formalinin intra-plantar enjeksiyonundan 48 saat önce intravenöz olarak uygulandiginda, EE1 antikoru Sekil 9'da gösterildigi üzere bir Minimal Etkili Doz (MED)=2,5 mg/kg ile yalnizca geç fazla agri-benzeri davranisin bir doza bagimli tersine dönmesini göstermistir. Gerçekte, 2,5, 10 ve 30 mg/kg'da uygulandiginda, EE1, Tablo 29'da gösterildigi üzere, geç fazi sirasiyla %35±5, %33±5 Aksine, F151, formalinin intra-plantar enjeksiyonundan 48 saat önce uygulandiginda, formalin testinin geç fazinda agri-benzeri davranisi zayif bir sekilde inhibe eder. Gerçekte, 2,5 ve 10 mg/kg'da uygulandiginda, F151, Tablo 29'da gösterildigi üzere, geç fazi sirasiyla %15±7 ve %21±5 tersine döndürmüstür. Tablo 29. EE1 ve F151 antikorlarinin erkek OF1 farelerinde formalin-indüklü agri- benzeri davranis üzerindeki etkisi Grup Doz A.U.C. ±SEM Agri-benzeri davranisin tersine (mg/kg, (15-45 dakika) dönmesi (% olarak) ±SEM (15-45 42,9± 33±5 Izotip-kontrol 10 57.3±3 0±5 1B7.11(F151) *, p<0,05; ***,p<0,001: Yeterli kontrole karsi Student t-testi kullanilmistir. NS: anlamli degil B. CFA (Komplet Freund adjuvani)-indüklü kronik enflamatuvar agri Kronik enflamasyon, mineral yag içinde 1 ug/pL isi ile öldürülmüs Mycobacterium tuberculosis ve mannid monooleat (Sigma) içeren 25 pL Komplet Freund Adjuvani'nin (CFA) bir intra-plantar uygulanmasi ile kisa süreli anestezi (Izofloran, %3) altinda indüklenmistir. Grup boyutlari, 8 erkek C57BI/6 faresidir. EE1 antikoru, 2,5 ve 30 mg/kg intra-plantar CFA enjeksiyonundan 22 saat sonra intravenöz olarak uygulanmistir ve CFA intra-plantar uygulamasindan sonraki Gün 1'de (D1), Gün 4'te (D4) ve Gün 7'de (D7) mekanik ve termal hipersensitiviteler degerlendirilmistir. B1. Mekanik Hipersensitivite Mekanik hipersensitivite, bir 0,6 9 Von Frey filamentinin (Bioseb, France) enjekte edilmis patinin plantar yüzeyi üzerine 10 uygulamasini takiben geri-çekilme Yanitinin Sikligini (FR, % olarak) ölçme ile degerlendirilmistir. EE1 antikorunun agri-benzeri davranis üzerindeki etkinligini arastirmak için. asagida oldugu sekilde mekanik hipersensitivitenin (°/o olarak) tersine dönmesini hesapladik: Tersine dönmelerin yüzdesi her bir fare için, (Ortalama FR-IZOtip-kontroidozsonrasi' FR- hesaplanmistir. CFA'nin intra-plantar enjeksiyonundan sonra D1'de, D4'te ve D7'de, Von Frey filamentlerine FR'nin anlamli bir artisi naif grup ile karsilastirildiginda izotip-kontrol 1 B7.11-muamele edilmis grupta gözlenmistir, bu mekanik hipersensitivitenin gelismesini gösterir. Intra-plantar CFA'dan 22 saat sonra intravenöz olarak uygulandiginda, EE1 antikoru, izotip-kontrol 1B7.11-muamele edilmis grupta elde edilenler ile karsilastirildiginda çalisilan farkli zamanlarda bu FR'yi anlamli olarak arttirabilmistir Mekanik hipersensitivitenin tersine dönmesi EE1 antikorunun bir 2,5 mg/kg ve 30 mg/kg intravenöz uygulamasi için sirasiyla D1'de %41±8'dir ve %22±8'dir, D4'te Tablo 30. EE1 antikorunun erkek C57BI16 farelerinde CFA-indüklü mekanik hipersensitivite üzerindeki etkisi Grup Doz CFA-sonrasi Gün 1 CFA-sonrasi Gün 4 CFA-sonrasi Gün 7 kontrol 1B7.11 Grup Doz CFA-sonrasi Gün1 CFA-sonrasi Gün 4 CFA-sonrasi Gün 7 FR: Yanitin Sikligi (% olarak) ± SEM, etkinin %'si ± SEM, n.a. uygulanabilir degil akabinde faktör süresinin her bir düzeyi için faktör grubu için Dunnett testi BZ. Termal Hipersensitivite Termal hipersensitivite için, bir plantar aparat (llTC, Woodland Hills, ABD) kullanilarak bir radyant isiya yanitta Pati Geri-Çekme Gecikmelerinin ölçümleri (PWL, saniye cinsinden) degerlendirilmistir. EE1 antikorunun agri-benzeri davranis üzerindeki etkisini arastirmak için, asagida oldugu sekilde termal hipersensitivitenin (% olarak) tersine dönmesini hesapladik: Tersine dönmelerin yüzdesi her bir fare için, (PWLdomnrasr Ortalama izotip- kontroldozsomas.) / (Ortalama izotip-kontroldozöncesi- Ortalama izotip-kontroldozsomas.) olarak hesaplanmistir. Termal hipersensitiviteler, taban hattinda, CFA'nin intra-plantar enjeksiyonundan önce, tüm gruplar arasinda farkli degildir (veriler gösterilmemistir). CFA'nin intra-plantar enjeksiyonundan sonra D1'de, D4'te ve D7'de, enjekte edilmis patinin pati geri-çekme gecikmesindeki anlamli bir düsüs farelerin izotip-kontrol 187.11- muamele edilmis grupta gözlenmistir, bu CFA indüklü bir termal hipersensitiviteyi gösterir (veriler gösterilmemistir). Intra-plantar CFA enjeksiyonundan 22 saat sonra (yani, intra-plantar CFA enjeksiyonundan sonra Gün 1'de) intravenöz olarak uygulanan EE1 antikoru, test edilen doz ne olursa olsun (Sekil 11), D1'de Pati Geri-Çekme Gecikmesini arttiramayabilmistir. Bununla birlikte, EE1 D4'te Pati Geri-Çekme Gecikmesi'ni anlamli bir sekilde arttirmistir ve bu etki ayrica D7'de de vardir (Sekil 11). Termal hipersensitivitenin tersine dönesi, EE1'in bir 2,5 mg/kg ve 30 mg/kg intravenöz Tablo 31. EE1 antikorunun erkek C57Bl/6 farelerinde CFA-indüklü termal hipersensitivite üzerindeki etkisi Grup Doz CFA-sonrasi Gün CFA-sonrasi Gün4 CFA-sonrasi Gün 7 (mg/kg, 1 PWL (saniye) PWL (saniye) etki PWL (saniye) etki i.v.) etki %'si %'si %'si kontrol 1B 46±1O PWL: Pati geri-çekme gecikmesi ± SEM, etki %`si ± SEM, n.a. uygulanabilir degil *, p<0,05, Tekrarli ölçüm olarak süre ile çift-tarafli ANOVA, akabinde faktör süresinin her bir düzeyi için faktör grubu için Dunnett testi C. CCI (Kronik Konstriksiyon Yaralanmasi)-indüklü nöropatik-benzeri agri (Bennett modeli) CCI modeli, periferik sinir yaralanmasinin bir modeli olarak kullanilmistir. Kisacasi, farelere, Izofloran (%3) anestezi uygulanmistir ve sag siyatik sinir, bir küçük insizyon yoluyla orta uyluk düzeyinde açiga çikarilmistir. 1 mm'lik boslukta 6.0 kromik gutun üç gevsek Iigatürü (Ethicon) siyatik sinir etrafina yerlestirilmistir. Cerrahi prosedür, kaslari ve cildi kapatma ile tamamlanmistir. CCI cerrahisi günü Gün 0 olarak düsünülmüstür. Grup boyutlari, 6-10 erkek CSTBI/ö faresidir. EE1 antikoru cerrahi sonrasi Gün 11'de 2,5 ve 30 mg/kg olarak intravenöz olarak uygulanmistir ve mekanik ve termal hipersensitiviteler, muamele-sonrasi Gün 1'e (D1), Gün 3'e (D3) ve Gün 7'ye (D7) karsilik gelen cerrahi-sonrasi Gün 12'de (D12), Gün 14'te (D14) ve Gün 18'de (D18) degerlendirilmistir. C1. Mekanik Hipersensitivite Mekanik hipersensitivite, bir Dinamik Plantar Aesteziyometre (Ugo-Basile, Italya) kullanilarak bir artan basinç (g cinsinden) stimulusa arka pati geri-çekme esik- degerlerini (hem yaralanmis [yani, Ipsi] ve hem de yaralanmamis [yani Contra] patiler üzerinde) ölçme ile degerlendirilmistir; bir çelik çubuk, bir artan kuvvet (10 saniyede 5 gram) ile farelerin arka patilerine uygulanmistir. EE1 antikorunun agri-benzeri davranis üzerindeki etkinligini arastirmak için, asagida oldugu sekilde mekanik hipersensitivitenin tersine dönmesini belirledik: tersine dönmelerin yüzdesi her bir fare için, (lpSidozsonrasi' lpsidozöncesi) / (contradozöncesi' Cerrahiyi takiben, cerrahi geçirmis fareler yaralanmis pati üzerinde mekanik stimulusa bir güçlü sensitizasyon gelistirirken, yaralanmamis pati etkilenmemistir. Gün 11'de, yaralanmis pati üzerindeki mekanik sensitizasyon, bir platoya ulasmistir (veriler gösterilmemistir). Gün 11'de intravenöz olarak uygulandiginda EE1 antikoru, 2,5 ve 30 mg/kg'da sirasiyla hipersensitiviteyi tersine döndürmeye yönelik hafif bir egilim göstermistir (Sekil 12 ve Tablo 32. EE1 antikorunun erkek C57BI/6 farelerinde CCI-indüklü mekanik hipersensitivite üzerindeki etkisi Grup Doz CCl-sonrasi Gün CGI-sonrasi Gün CGI-sonrasi Gün Grup Doz CGI-sonrasi Gün CGI-sonrasi Gün CCl-sonrasi Gün kontrol 1B 30,3±7,1 *, p<0,05 ve **,p<0,01, Tekrarli ölçüm olarak süre ile çift-tarafli ANOVA, akabinde faktör süresinin her bir düzeyi için faktör grubu için Dunnett testi (istatistikler Delta ipsi degerleri üzerinde gerçeklestirilmistir) C2. Termal Hipersensitivite Termal hipersensitivite için, bir plantar aparat (IlTC, Woodland Hills, ABD) kullanilarak bir radyant isiya yanitta Pati Geri-Çekme Gecikmelerinin ölçümleri (saniye cinsinden) enjekte edilmis arka pati üzerinde degerlendirilmistir. EE1 antikorunun agri-benzeri davranis üzerindeki etkisini arastirmak için, asagida oldugu sekilde termal hipersensitivitenin (% olarak) tersine dönmesini hesapladik: Tersine dönmelerin yüzdesi her bir fare için, (Ipsidozsomasr Ortalama izotip- kontroidozsonrasi) / (Ortalama naifdozsonrasi' Ortalama izotip-kontroldozsonras.) olarak hesaplanmistir. Cerrahiyi takiben, cerrahi geçirmis fareler yaralanmis pati üzerinde termal stimulusa bir güçlü sensitizasyon gelistirirken, yaralanmamis pati etkilenmemistir. Gün 11'de, yaralanmis pati üzerindeki termal sensitizasyon, bir platoya ulasmistir (veriler gösterilmemistir). Gün 11'de intravenöz olarak uygulandiginda EE1 antikoru, bir egilim gözlendiginde bile, D12'de yaralanmis patinin Pati Geri-Çekme Gecikmesini anlamli bir sekilde arttirmamistir. Bununla birlikte, D14'ten sonra, EE1 antikoru Pati Geri-Çekmeyi anlamli bir sekilde arttirmistir (Sekil 13). Termal hipersensitivitenin tersine döndürülmesi, EE1 antikorunun bir 2.5 mg/kg ve 30 Tablo 33. EE1 antikorunun erkek C578l/6 farelerinde CCI-indüklü termal hipersensitivite üzerindeki etkisi Kinetik degerlendirme Grup Doz CCI-sonrasiGün 12 CCI-sonrasiGün 14 CCl-sonrasi Gün18 (mg/kg, PWL (saniye) etki PWL (saniye) etki PWL (saniye) etki kontrol1 87.11 PWL: Pati geri-çekme gecikmesi ± SEM, etki %'si ± SEM, n.a. uygulanabilir degil *, p<0,05 ve **,p<0,01, Tekrarli ölçüm olarak süre ile çift-tarafli ANOVA, akabinde faktör süresinin her bir düzeyi için faktör grubu için Dunnett testi DIZI LISTESI <110 SANOFI <120 BRADIKININ B1 RESEPTÖR LIGANDLARINA KARSI ANTIKORLAR <140 Yeni Basvuru < 141› Bununla birlikte es zamanli olarak <160 137 <170 Patentln versiyonu 3.5 <210 1 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Homo sapiens <400 1 Lya Arq Pro Pro Giy Phe Ser Pro Phe Arg <210 2 < 211 9 < 212› PRT < 213› Homo sapiens <400 2 Lys Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 3 < 211 10 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 3 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 4 < 211 9 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 4 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <2105 <2119 <212 PRT < 213 Bilinmeyen <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="BiIinmeyenin Açiklamasi: Bradikinin peptidi" <400 5 Arg Pro Pro Giy Phe Ser Pro Phe Arg <210 6 < 211› 8 < 212› PRT < 213› Bilinmeyen <220 < 221› kaynak < 223› /not="BiIinmeyenin Açiklamasi: Des-ArgQ-Bradikinin peptidi" <400 6 Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 7 < 211› 11 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (1)..(1) < 223› /degistir="Phe" veya "His" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (1)..(1) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (3)..(3) < 223› /degistir="Asp" veya "Ala" veya "Val" veya "Leu" veya "Ile" veya "Met" veya <220 < 221› VARYANT < 222› (4)..(4) < 223› /degistir="Phe" veya "Trp" veya "His" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (3)..(4) < 223 /not="Dizide verilen kalintilar, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (6)..(6) < 223› /degistir="Glu" veya "Tyr" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (6)..(6) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (10)..(10) < 223› /degistir="Glu" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (10)..(10) < 223› /n0t="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <400 7 Tyr Ty:: Arq Tyr Asp Asp His Ala Met Asp 'ryr <210 8 < 211› 17 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (3)..(3) < 223› /degistir="Arg" veya "Ala" veya "Val" veya "Leu" veya "Ile" veya "Met" veya <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (3)..(3) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (5)..(5) < 223› /degistir="Asp" veya "Glu" veya "Asn" veya "Gln" <220 < 221› çesitli_özellik < 222 (5)..(5) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <400 8 Tyr Phe Asp Pro Tyr Asu Gly Asn i'm Gly Tyr Aan Gin Lys ?ne Arq i 5 10 is <210 9 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222 (8)..(8) < 223 /degistir="Trp" veya "Tyr" <220 < 221 çesitli_özellik < 222 (8)..(8) < 223 /n0t="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <400 9 Gly Ty:: Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Ile Ty:: <210 10 < 211› 9 < 212 PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223 /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221 VARYANT < 222 (3)..(3) < 223 /degistir="Phe" veya "His" <220 < 221 VARYANT < 222 (4)..(4) < 223 /degistir="Phe" veya "His" veya "Trp" <220 < 221› çesitli_özellik < 222 (3)..(4) < 223 /not="Dizide verilen kalintilar, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222 (6)..(6) < 223 /degistir="Phe" veya "Thr" veya "His" <220 < 221 çesitli_özellik < 222› (6)..(6) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (8)..(8) < 223› /degistir="Tyr" veya "Phe" veya "His" veya "Leu" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (8)..(8) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <400 10 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Trp Thr <210 11 < 211› 6 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (6)..(6) < 223› /degistir="Asp" veya "Gln" veya "Asn" <220 < 221 çesitli_özellik < 222› (6)..(6) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <400 11 <210 12 <211 17 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (8)..(8) < 223› /degistir="His" veya "Tyr" veya "Phe" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (8)..(8) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (15)..(15) < 223› /degistir="Tyr" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (15)..(15) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <400 12 Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Trp Ser Ser Aan Gin Lys han Hia Leo 1 5 10 15 <210 13 < 211› 11 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 13 Tyr Ty:: Arq 'ryr Asp Asp His Ala Met Asp 'ryr <210 14 <211 17 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 14 Tyr Phe Asp Pro Ty: Asn Gly Asn Thr Gly Ty: Asn Gln Lys Phe Arc; l 5 10 15 <210 15 < 211 10 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 15 Giy Ty: Ser Phe Thr Asp Tyr Asu Ile Ty: <210 16 < 211› 9 < 212› PRT < 213 Mus musculus <400 16 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Trp Thr <210 17 < 211› 7 < 212› PRT < 213 Mus musculus <400 17 <210 18 < 211› 17 < 212› PRT < 213 Mus musculus <400 18 Lys Ser Ser Gln Sex: Leu Leu Ty: Ser Ser Asn Gln Lys Asn Ty: Leu 1 5 10 15 <210 19 < 211 120 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 19 <210 20 < 211› 120 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223 /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 20 <210 21 < 211› 120 < 212 PRT < 213 Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 21 <210 22 < 211 120 < 212 PRT < 213 Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 22 <210 23 < 211› 120 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 23 <210 24 < 211› 120 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi rh: Vai Asp Lys Ser Ser Ser Thr Thr Ser Glu Glu Ser Ala Val Tyr Asp Asp His Ala Met Asp Tyr Trp <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 24 <210 25 < 211› 120 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 25 50 55 60 Arg Giy Arg Vai rhr Met Thr Thz Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Hot Glu Lou Arq Ser Lou Arq Ser asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Asn Tyr Tyr Arq Tyr &sp Asp His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Vai Thr Val Ser Ser 115 120 <210 26 < 211› 113 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 26 Asp Iie Vai Met Ser Gln Se: Pro Ser Ser Leu Ala Vai Ser Vai Giy 1 S 10 15 Glu Ly: Vai Thr Hat Sir Cy: Lys Sir Sir Gln Sir Liu Liu Ty: Set 25 30 S.: Asn Gln Lys Asn Ty: Lou ala Trp Tyr Gln Gln Ly: Pro Gly Gln 40 45 Ser Pro Lys Pro Leu Ile Ty: Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Giy Vai 50 55 60 Pro Asp Arq Ph. Thr Giy Sir Gly Sir Gly Thr Asp Ph. Thr Liu Thr 65 70 75 80 85 90 95 Ty: Ty: Ser Tyr Pro rrp Thz Phe Gly Giy Giy Thr Lya Leu Giu Iie 100 105 lLO <210 27 < 211› 113 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 27 <210 28 < 211› 113 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 28 Pro Asp Arg Phe Ser Giy Ser Giy Ser Giy Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 BU 85 90 95 Ty: Iyi: Ser Ty: Pro Tip Itir Phe Giy Giy Giy 'Ihr Lys Leu Giu ne 100 105 110 <210 29 < 211› 113 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 29 Asp Iie Vai Met rhr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Aia Ser Vai Giy 1 5 10 15 Asp Axg Vai Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 25 30 Ser Asn Gin Lya Ann Ty: Leu Ala Tip Tyr Gin Gin Lya Pro Giy Lya 40 45 Ser Pro Lys Pro Leu Ile Ty: Trp Ala Ser Thr Arg Giu Ser Giy Vai 50 55 60 Pro Asp Arq Ph. Sir Gly Sir Gly Sir Gly Thr Asp Ph. Thr Lcu Thr 65 70 75 80 85 90 95 Tyr Tyr Sir Ty: Pro Trp Thr Ph: Gly Gly Gly Thr Ly: Liu Glu II. 100 105 110 <210 30 < 211› 113 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 30 Asp Ile Vai Met Thr Gin Se: Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Giy 1 5 10 IS Giu Arg Ala Thr Ile Aan Cya Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Ser 25 30 Sir Âsn Gln Lyi Asn Tyr Lou Ala Trp Tyr Gln Gln Ly: Pro Gly Gln 40 45 Pro Pro Lya Pro Leu Ile Ty: Trp Ala Ser Thr Arg Giu Ser Giy Vai 50 55 60 Pro Asp Arq Ph. Sor Gly Sir Gly Sor Gly Thr Asp Ph. Thr Lou Thr 65 70 75 80 85 90 95 Ty: ?yt Sir Tyr Pro Trp Thr Ph. Gly Gln Gly Thr Ly: Val Glu II. 100 105 110 <210 31 < 211› 113 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 31 Asp Ile Vai Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Vai Ser Leu Giy 1 S 10 15 Giu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gin Sar Lou Lou Tyr Sar 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin GJn Lys Pro Giy Gln 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Giu Ser Gly Vai 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Se: Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 BU Ile Ser Ser Lan GLn AL.: Glu Asp Va! Ala Va] Tyr Tyr Cya Gln Çin 85 90 95 Tyr Tyr Ser Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 <210 32 < 211 11 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 32 Trp Glu Tyr Asp Gly Tyr Ty: Asp Leu Asp 'ryr <210 33 < 211 17 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 33 Tip Ile Asp Pro Giu Asn Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Arg Lya Phe Gin l 5 10 15 <210 34 < 211 10 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 34 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Leu His <210 35 <2119 <212 PRT < 213› Mus musculus Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Aan <400 35 Leu Gln Gly Thr His Phe Pro Tyr Thr <210 36 < 211 7 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 36 <210 37 < 211› 16 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 37 <210 38 < 211 120 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 38 <210 39 < 211› 112 < 212› PRT < 213 Mus musculus <400 39 <210 40 <2117 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 40 <210 41 < 211› 19 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 41 Giu Ile Arq Ser Lys Sar Asn Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Sar <210 42 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 42 Gly Phe Thr Phe Ser Asu Tyr Trp Met Asn <210 43 < 211 9 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 43 Gin Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr <210 44 < 211 17 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 44 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ty: Ser Ser Rep Gin Mg Asn Tyr Leu 1 5 10 15 <21045 < 211 118 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 45 <21046 < 211 113 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 46 Asp Iie Vai Met Ser Gin Sex Pro Ser Ser Leu Aia Vai Ser Vai Giy 1 S 10 15 Glu Lys Val Thr Met Sir Cy: Lys Sir Sir Gln Sir Liu Lou Tyr Sa: 25 30 Sir Asp Gln Arq Asn Tyr Lou Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Gln 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ty: Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Vai 50 55 60 Pro Asp Arq Phi Thr Gly Sir Gly Sir Gly Thr Asp Ph. Thr Liu Thr 65 70 75 BO 85 90 95 Ty: Ty: Ser Tyr Pro Ty: rh: Ph& Gly Gly Gly Thr Lys Leu Giu Ile 100 105 110 <210 47 < 211 12 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 47 Phe Glu Tyr Asp Gly Asn Tyr Ser Pro Leu Asp Phe <210 48 < 211 16 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 48 Trp Val Asp Pro Giu Ann Gly Asp Ser Asp Tyr Ala Pro Lys Phe Gln 1 5 10 IS <210 49 < 211 10 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 49 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Met His <210 50 < 211› 9 < 212› PRT < 213 Mus musculus <400 50 Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Leu Thr <210 51 < 211› 7 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 51 <210 52 < 211› 17 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 52 Lys Ser Ser GLn Ser Leu Leu Asn Ser Gly &en 610 Lya Asu Tyr Leu 1 S 10 15 <210 53 < 211› 121 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 53 Giu Vai Gin Leu Gin GLn Ser Giy Ala Giu Leu Vai Arg Ser Giy Ala 1 5 10 15 Ser Va] Lys Leu Sor Cys Thr Ala Ser Gly Pho Asn Ile Lys Asp Ty: 25 30 Tyr MeL His Trp Vai Lys Gin Arg Pro Glu Gln Giy Leu Giu Trp Ile Giy Trp Vai Asp Pro GLu Ann Giy Asp Ser Asp Tyr Ala Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Âla Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Ty: 65 70 75 80 Leu Gin Phe Ser Ser Leu rh: Set Asn Ala Phe Glu Ty: Asp Gly Asu Gln Gly Thr Sir Val Thr Val SC: 115 120 <210 54 < 211 113 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 54 Asp Iie Vai Met Thr Gln Se: Pro Giu Lys Vai Thr Met Ser Cya Lya Gly Asu Gln Lys Asn Ty: Lou Ala Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ty: Gly Pro Asp Arq Ph. Thr Giy Sir Gly Asp His Sir Tyr Pro Lou Thr Ph. <210 55 < 211› 12 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 55 Phe Glu Tyr Asp Gly Asn Ty: Ser Pro Leu Asp Phe <210 56 <211 17 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 56 Trp Vai Asp Pro Glu Asu Gly Asp Ser Asp Tyr Ala Pro Lys Pho Gin 1 5 10 15 <210 57 < 211 10 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 57 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Met His <210 58 < 211› 9 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 58 Met Gln Gly Thr His Phe Pro Tyr Thr <210 59 < 211› 7 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 59 <210 60 < 211› 16 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 60 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Aan Gly Giu Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210 61 < 211› 121 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 61 <210 62 < 211› 112 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 62 <210 63 < 211› 12 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (1)..(1) < 223› /degistir="Phe" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (1)..(1) < 223 /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (6)..(6) < 223› /degistir=" " <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (6)..(6) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <220 < 221 VARYANT < 222› (8)..(8) < 223› /degistir="8er" <220 < 221› VARYANT < 222› (9)..(9) < 223› /degistir="Pro" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (8)..(9) < 223› /not="Dizide verilen kalintilar, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (12)..(12) < 223 /degistir="Tyr" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (12)..(12) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <400 63 Trp Glu Ty: Asp Gly Ann Ty:: Tyr Asp Leu Asp Phe <210 64 < 211› 17 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (2) .. (2) < 223› /degistir="VaI" <220 < 221 çesitli_özellik < 222› (2)..(2) < 223› /n0t="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (9)..(9) < 223› /degistir="Ser" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (9)..(9) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (10)..(10) < 223› /degistir="Asp" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (10)..(10) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <400 64 Trp Il& Asp Pro G.Lu ken Giy Asp Thr Gly Tyr Ala Pro Lys Phû Sin 1 5 10 15 <210 65 < 211› 10 < 212 PRT < 213 Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (9)..(9) < 223› /degistir="Met" <220 < 221 çesitli_özellik < 222› (9)..(9) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <400 65 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Leu His <210 66 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (2)..(2) < 223› /degistir="Asn" <220 < 221› VARYANT < 222› (3)..(3) < 223› /degistir="Phe" veya "Asp" veya "His" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (2)..(3) < 223› /not="Dizide verilen kalintilar, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (4)..(4) < 223› /degistir="Phe" veya "His" veya "Trp" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (4)..(4) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (6)..(6) < 223› /degistir="Phe" veya "Thr" veya "His" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (6)..(6) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (8)..(8) < 223› /degistir="Tyr" veya "Phe" veya "His" veya "Leu" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (8)..(8) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <400 66 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Trp Thr <210 67 < 211› 6 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (1)..(1) < 223 /degistir="Gly" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (1)..(1) < 223 /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (6)..(6) < 223› /degistir="Asp" veya "Gln" veya "Asn" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (6)..(6) < 223› /n0t="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <400 67 <210 68 < 211› 17 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (8)..(8) < 223› /degistir="His" veya "Tyr" veya "Phe" <220 < 221 VARYANT < 222› (9)..(9) < 223› /degistir="GIy" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (8)..(9) < 223› /not="Dizide verilen kalintilar, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alanlara göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (11)..(11) < 223› /degistir="Asp" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (11)..(11) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (13)..(13) < 223 /degistir="Arg" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (13)..(13) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <220 < 221› VARYANT < 222› (15)..(15) < 223› /degistir="Tyr" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (15)..(15) < 223› /n0t="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <400 68 Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Trp Ser Ser han Gin Lye Asn 81.3 Leu 1 5 10 15 <210 69 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223 /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (1)..(1) < 223› /degistir="Met" <220 < 221› çesitli_özellik < 222› (1)..(1) < 223› /n0t="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <400 69 Leu Gln Gly Thr His Phe Pro Tyr Thr <210 70 < 211› 16 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik konsensüs peptidi" <220 < 221› VARYANT < 222› (12)..(12) < 223› /degistir="GIu" <220 < 221 çesitli_özellik < 222› (12)..(12) < 223› /not="Dizide verilen kalinti, söz konusu pozisyon için açiklamada yer alana göre öncelige sahip degildir" <400 70 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Aan Gly Lys Thr Tyr Leu Asn l 5 10 15 <210 71 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="C-term biyotin" <400 71 Arg Pro Pro Giy Phe Ser Pro Phe Arg <210 72 < 211› 9 < 212 PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="N-term KLH" <400 72 Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 73 < 211› 9 < 212 PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="C-term KLH" <400 73 Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 74 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="N-term biyotin" <400 74 Lya Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 75 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="C-term biyotin" <400 75 Lys Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 76 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="N-term KLH" <400 76 Lys Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 77 <211 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="C-term KLH" <400 77 Lys Arq Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 78 < 211› 8 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="N-term biyotin" <400 78 Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 79 < 211› 8 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /not="C-term biyotin" <400 79 Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 80 < 211› 8 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="N-term KLH" <400 80 Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 81 < 211› 8 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="C-term KLH" <400 81 Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 82 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="N-term biyotin" <400 82 Lys Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 83 < 211› 9 < 212 PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /not="C-term biyotin" <400 83 Lys Arg Pro Pro Giy Phe Ser Pro Phe <210 84 < 211 9 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="N-term KLH" <400 84 Lys Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 85 < 211› 9 < 212 PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="C-term KLH" <400 85 Lys Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 86 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="N-term biyotin" <400 86 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 87 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="C-term biyotin" <400 87 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 88 <211 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="N-term KLH" <400 88 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 89 < 211› 10 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="C-term KLH" <400 89 Arg Axg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 90 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 90 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 91 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="N-term biyotin" <400 91 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 92 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223› /not="C-term biyotin" <400 92 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 93 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="N-term KLH" <400 93 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 94 <2119 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /not="C-term KLH" <400 94 Arg Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe <210 95 < 211› 5 < 212› PRT < 213› Bilinmeyen <220 < 221› kaynak < 223› /not="BiIinmeyenin Açiklamasi: Bradikinin 1-5 peptit" <400 95 <210 96 < 211› 5 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221› kaynak < 223 /not="N-term biyotin" <400 96 <210 97 < 211 136 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 97 <210 98 < 211 134 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 98 <210 99 <211 136 <212 PRT < 213› Mus musculus <400 99 <210 100 < 211› 137 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 100 Leu Pro Glu Phe Glu Vai Lys Leu Gin Giu Ser Giy Ala Glu Leu Vai <210 101 < 211› 137 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 101 <210 102 < 211› 133 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 102 <210 103 < 211› 134 < 212› PRT < 213 Mus musculus <400 103 Glu Leu Asp Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ala Vai Set Tyr Asp Giy Aan Tyr Ser Pro Leu <210 104 < 211› 134 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 104 Gin Gin Tyr Tyr Ser Tyr Pro Trp Thr Phe Giy Giy Giy Thr Lya Leu 100 105 110 Glu Il. Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Vai Sor !li Phi Pro Pro 115 120 125 <210 105 < 211› 133 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 105 Giu Leu Asp Ile Vai Iie Thr Gin Thr Thr Leu Ser Leu Ser Vai Pro 1 5 10 15 25 30 Ty: Sir Asn Gly Glu Thr Tyr Lou Asn Trp Lou Liu Gln Arq Pro Gly 40 45 Gin Sir Pro Lyi Arg Lou Il. Ty: Lou Val Sor Lys Liu Agp Sor Giy 50 55 60 Val Pro Asp Arq Pha ?hr Gly Sar Arq Ser Gly Thr Asp Phe Thr Lou 65 70 75 80 Lys Ile Ser Arg Val Glu Ser Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Met 85 90 95 Gln Gly Thr His Phe Pro Ty: Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110 Ile Lys Arg Aia Asp Ala Ala Pro Thr Vai Ser Ile Phe Pro Pro Ser 115 120 125 <210 106 < 211› 133 < 212› PRT < 213 Mus musculus <400 106 Glu Leu Asp Ile Val Ile Thr Gln Ser Thr Leu Thr Leu Ser Val Pro 1 5 10 15 Ile Giy Gin Pro Ala Ser Ile Ser Cya Lys Ser Ser Gin Ty: Ser Asn Gly Glu ?hr Tyr Leu Aen Trp Leu Leu Çin 40 45 Gin Ser Pro Lya Arg Gin Iie Ty: Leu Vai Ser Lys Leu 50 55 GO Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Set &19 Ser Gly Thr Rep 65 70 75 Lys Ile Ser Arq Val Glu Ser Glu Asp Leu Gly Val Tyr Gln Gly Thr His Phe Pro ?yt Thr Phe Gly Gly Gly Thr 100 105 115 l20 125 Lys Liu 6111 1.011 Tyr <210 107 < 211› 46 < 212› DNA < 213 Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223 /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik primer" <400 107 <210 108 < 211› 46 < 212› DNA < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223 /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik primer" <400 108 <210109 <211 30 < 212 DNA < 213 Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik oligonükleotit" <400 109 <210 110 < 211 1005 < 212 DNA < 213 Mus musculus <400110 <210 111 < 211 111 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 111 <210 112 <211 105 <212 PRT <213H0mosapßns <400 112 <210 113 < 211 120 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 113 <210 114 < 211› 123 < 212› PRT < 213› Homo sapiens <400 114 Ala Arg Trp Giy Tyr Asp Ty: Asp Vai Phe Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 100 105 1i0 rrp Gly Gln Gly Thr Lou Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210 115 < 211› 113 < 212 PRT < 213 Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223 /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 115 Asp Iie Vai Met Thr Gln Se: Pro asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Giy 1 5 10 15 Giu Axg Ala Thr Ile Ann Cya Lya Ser Ser Gln Ser Vai Leu Tyr Ser 25 30 Sor Asn Asn Lys Asn Ty: Lou Ala Ttp Ty: Gln Gln Ly: Pro Gly Gln 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ty: Trp Ala Ser Thr Arg Gln Ser Giy Vai 50 55 60 Pro Asp Arq Ph. Sir Giy Sir Gly Sir Gly Thr Asp Ph. Thr Lcu Thr 65 70 75 BO 85 90 95 Ty:: ryr s.: Thx: Pro Trp Thr Ph. Giy Gln Gly rh: Lys Val Giu ri- <210 116 < 211› 120 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223 /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 116 <210117 < 211 9 < 212 PRT < 213 Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223 /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <220 < 221 kaynak < 223 /not="N-term biyotin" <400 117 Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe Arg <210 118 <211 127 <212 PRT < 213› Mus musculus <400 118 <210 119 < 211 125 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 119 <210 120 < 211 127 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 120 <210 121 < 211› 128 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 121 <210 122 < 211› 128 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 122 <210 123 < 211› 119 < 212› PRT < 213 Mus musculus <400 123 Asp Val Val Met 'rhr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Giy <210 124 < 211› 120 < 212› PRT < 213› Mus musculus <400 124 <210 125 < 211 120 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 125 <210 126 < 211› 120 < 212 PRT < 213 Mus musculus <400 126 A3P Arq Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys <210 127 < 211 360 < 212 DNA < 213› Mus musculus <400 127 <210 128 < 211 339 < 212 DNA < 213› Mus musculus <400 128 <210 129 < 211 360 < 212› DNA < 213› Yapay Dizi Ser Giy Thr Asp ?ne Thr Leu Thr <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polinükleotit" <400 129 <210 130 < 211 339 BCCGCQCCÂL < 212› DNA < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /not="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polinükleotit" <400 130 <210131 <211 119 < 212 PRT < 213› Mus musculus <400 131 <210 132 < 211› 4 < 212› PRT < 213› Homo sapiens <400 132 <210 133 < 211› 6 < 212› PRT < 213› Homo sapiens <400 133 <210 134 < 211› 220 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 134 <210 135 < 211› 229 < 212 PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221› kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik polipeptit" <400 135 Gin Ile Gln Leu Vai Gin Se: Gly Ala Giu Val Lys Lys PID Giy Ala 1 5 10 15 Ser Val Lya Vol Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Sar Phe Thr Asp Tyr 25 30 Asn Ile Tyr Trp Val Arq Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp 118 40 45 Gly Tyr Phe Asp Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Gly Tyr Asn Gln Lys ?be 50 55 60 Arg Giy Arg Ala Thr Leu rh: Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Axg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Aia Asn Tyr Tyr Arq Ty: Asp Asp His Ala Mat Asp Tyr Trp Giy Gin 100 105 110 Giy Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Giy Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 160 Leu Gly Cya Leu Val Lys Asp Ty: Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Liu Gin Sir 5.: Gly Lou Tyr Sor Liu Sir Sir Vai Vai Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly ?hr Gln ?hr Tyr [19 Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Sar Asn Thr Lys Val Asp Lys Lya Va] Glu Pro Lys Ser Cys His 210 215 220 <210136 < 211 6 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik peptit" <400 136 <210 137 < 211› 6 < 212› PRT < 213› Yapay Dizi <220 < 221 kaynak < 223› /n0t="Yapay Dizi Açiklamasi: Sentetik 6xHis etiketi" <400 137 TR

Claims (1)

1.ISTEMLER Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: i) asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir agir zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 3 (HCDR3) amino asit dizisini, bir agir zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 2 (HCDR2) amino asit dizisini ve bir agir zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 1 (HCDR1) amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken domeni: a) sirasiyla, SEQ ID NO: 7 [X1Y X2 XsD X4HAM X5Y], burada X1, Y, F veya H'dir, X2, R, D, A, V, L, I, M, F, Y veya W'dir, X3, Y, F, W veya H'dir, X4, D, E veya Y'dir ve X5, D veya E'dir; SEQ ID NO: 8 [YFXiPX2NGNTGYNQKFRG], burada X1, D, R, A, V, L, I, M, F, Y veya W'dir ve X2, Y, D, E, N veya Q'dur; ve SEO ID NO: 9[GYSFTDYX1IY], burada X1, N, W veya Y'dir; b) sirasiyla, SEQ ID NO: 63 [X1EYDGX2YX3X4LDX5], burada X1, W veya F'dir, X2, N'dir veya amino asit degildir; X3, Y veya S'dir, X4, D veya P'dir ve X5, F veya Y'dir; SEQ ID NO: 64 [WX1DPENGDX2X3YAPKFQG1, burada X1, l veya V'dir, X2, T veya S'dir ve X3, G veya D'dir; SEQ ID NO: 65 [GFNIKDYYX1H], burada X1, L veya M'dir; c) sirasiyla, d) Sirasiyla, e) sirasiyla, SEQ ID NO:40; f) sirasiyla, g) sirasiyla, ii) asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir hafif zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 3 (LCDR3) amino asit dizisini. bir hafif zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 2 (LCDR2) amino asit dizisini ve bir hafif zincir tamamlayicilik belirleme bölgesi 1 (LCDR1) amino asit dizisini içeren bir hafif zincir degisken domeni: h) sirasiyla, SEQ ID NO: 10 [QQ X1 Xzs X3P X4T], burada X1, Y, F veya H'dir, X2, Y, F, H veya W'dir. X3, Y, F, T veya H'dir ve X4, W, Y, F, H veya L'dir; SEQ ID NO: 11 [WASTRX1], burada X1, E, D, Q veya N'dir ve SEQ ID NO: 12 [KSSQSLL X1SSNQKN X2LA], burada X1, W, H, Y veya F`dir ve X2, H veya Y'dir; i) sirasiyla, SEQ ID NO: 66 [QX1X2X3SX4PX5T], burada X1, Q veya N'dir, X2, Y, F, D veya H'dir, X3, Y, F, H veya W'dir, X4, Y, F, T veya H'dir ve X5, W, Y, F, H veya L'dir; SEQ ID NO: 67 [X2ASTRX2], burada X1, W veya G'dir ve X2, E, D, Q veya N'dir ve SEO ID NO: 68 [KSSQSLLX1X28X3QX4NX5LA], burada X1, W, H, Y veya F'dir, X2, 8 veya G'dir, X3, N veya D'dir, X4, K veya R'dir, X5, H veya Y'dir. j) sirasiyla, SEQ ID NO: 69 [X1QGTHFPYT], burada X1, L veya M'dir; SEO ID NO: 70 [KSSQSLLYSNGX1TYLN], burada X1, K veya E'dir; k) sirasiyla, m) sirasiyla, SEQ ID NO:17 ve n) sirasiyla, 0) sirasiyla, Istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 13'te, 14'te ve 15'te izah edilen HCDRS, HCDR2 olusan gruptan seçilen pozisyonlarda bir veya birden fazla amino asit sübstitüsyonu içeren bir agir zincir degisken domeni ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 16'da, 17'de ve 18'de izah edilen LCDR3, LCDR2 pozisyonlarda bir veya birden fazla amino asit sübstitüsyonu içeren bir hafif zincir degisken domeni. istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argm-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya bunun antijen baglama fragmaninin sirasiyla SEQ ID NO: 24'te ve 30'da izah edilen agir zincir ve hafif zincir degisken domeni amino asit dizilerini içermesidir. Bir farmasötik bilesim olup, özelligi istem 1'e göre antikoru veya bunun antijen baglama fragmanini ve bir veya birden fazla farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyiciyi (tasiyicilari) içermesidir. istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir amino asit dizisine en az %90 özdesligi olan bir agir zincir degisken bölgesi domeni amino asit dizisi ve bir hafif zincir degisken domeni amino asit dizisi: a) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 19 ve 26, b) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 20 ve 27, c) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 21 ve 28, d) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 22 ve 28, e) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 23 ve 29, f) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 24 ve 30, g) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 25 ve 31, h) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 38 ve 39, i) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 45 ve 46, j) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 53 ve 54, k) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 61 ve 62. Istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: zincir degisken domeni ve bir amino asit dizisi içeren bir hafif zincir degisken domeni: a) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 19 ve 26, b) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 20 ve 27, c) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 21 ve 28, d) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 22 ve 28, e) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 23 ve 29, f) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 24 ve 30, g) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 25 ve 31, h) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 38 ve 39, i) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 45 ve 46, j) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 53 ve 54, k) sirasiyla, SEQ ID NO.'Iari: 61 ve 62. 7. Bir farmasötik bilesim olup, özelligi istem 2'ye göre antikoru veya bunun antijen baglama fragmanini ve bir veya birden fazla farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyiciyi (tasiyicilari) içermesidir. . Istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 7'de, 8'de ve 9'da izah edilen konsensüs HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 10'da, 11'de ve 12'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. . Istem 8'e göre Kallidin'i veya des-Argw-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 13'te, 14'te ve 15'te izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 16'da, 17'de ve 18'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 32'de, 33'te ve 34'te izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 35'te, 36'da ve 37'de izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Arg1o-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: a) Sirasiyla SEQ ID NO.'lari: 40'ta, 41'de ve 42'de izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve b) sirasiyla SEQ lD NO.'Iari: 43'te, 17'de ve 44'te izah edilen LCDR3, LCDR2 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. Istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 47'de, 48'de ve 49'da izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve b) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 50'de, 51'de ve 52'de izah edilen LCDR3, LCDR2 5 ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. 13. Istem 1'e göre Kallidin'i veya des-Argio-Kallidin'i spesifik olarak baglayan, ancak Bradikinin'i veya des-Argg-Bradikinin'i baglamayan bir izole edilmis monoklonal antikor veya bunun antijen baglama fragmani olup, özelligi antikor veya antijen 10 baglama fragmaninin asagidakileri içermesidir: a) sirasiyla SEQ ID NO.'Iari: 55'te, 56'da ve 57'de izah edilen HCDR3, HCDR2 ve HCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir agir zincir degisken domeni; ve LCDR1 bölgesi amino dizilerini içeren bir hafif zincir degisken domeni. TR
TR2018/08486T 2012-03-28 2013-03-15 Bradikinin B1 reseptör ligandlarına karşı antikorlar. TR201808486T4 (tr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261616845P 2012-03-28 2012-03-28
FR1350953 2013-02-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201808486T4 true TR201808486T4 (tr) 2018-07-23

Family

ID=49261064

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/08486T TR201808486T4 (tr) 2012-03-28 2013-03-15 Bradikinin B1 reseptör ligandlarına karşı antikorlar.

Country Status (39)

Country Link
US (5) US9376494B2 (tr)
EP (2) EP2831113B1 (tr)
JP (4) JP6779012B2 (tr)
KR (4) KR102166083B1 (tr)
CN (2) CN113773385A (tr)
AR (1) AR090352A1 (tr)
AU (2) AU2013240242B2 (tr)
BR (1) BR112014024282A2 (tr)
CA (1) CA2868353C (tr)
CL (2) CL2014002590A1 (tr)
CO (1) CO7111293A2 (tr)
CR (1) CR20140440A (tr)
CY (1) CY1121466T1 (tr)
DK (2) DK2831113T3 (tr)
DO (1) DOP2014000199A (tr)
EA (1) EA201491784A1 (tr)
ES (1) ES2673869T3 (tr)
GT (1) GT201400192A (tr)
HK (1) HK1206754A1 (tr)
HR (1) HRP20180928T1 (tr)
HU (1) HUE037720T2 (tr)
IL (1) IL234830B (tr)
LT (1) LT2831113T (tr)
MA (1) MA37407B1 (tr)
MX (2) MX361874B (tr)
MY (2) MY184037A (tr)
NZ (1) NZ631543A (tr)
PE (1) PE20142170A1 (tr)
PH (1) PH12014501970A1 (tr)
PL (1) PL2831113T3 (tr)
PT (1) PT2831113T (tr)
RS (1) RS57413B1 (tr)
SG (2) SG10201702396QA (tr)
SI (1) SI2831113T1 (tr)
TR (1) TR201808486T4 (tr)
TW (1) TWI605060B (tr)
UA (1) UA117097C2 (tr)
UY (1) UY34682A (tr)
WO (1) WO2013148296A1 (tr)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102166083B1 (ko) * 2012-03-28 2020-10-16 사노피 브라디키닌 b1 수용체 리간드에 대한 항체
SG11201506244VA (en) 2013-03-13 2015-09-29 Prothena Biosciences Ltd Tau immunotherapy
CN105504049B (zh) * 2014-09-26 2019-07-05 艾托金生物医药（苏州）有限公司 宫颈癌相关的hpv e7蛋白单克隆抗体及其应用
EP3390439A1 (en) 2015-12-15 2018-10-24 Dyax Corp. Peptide quantitation assay for differentiating full-length high molecular weight kininogen (hmwk) and cleaved hmwk
WO2017189959A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
EP3448987A4 (en) 2016-04-29 2020-05-27 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES
DK3452507T3 (da) 2016-05-02 2022-11-14 Prothena Biosciences Ltd Tau-immunoterapi
PE20190208A1 (es) 2016-05-02 2019-02-07 Prothena Biosciences Ltd Anticuerpos que reconocen tau
BR112018072389A2 (pt) 2016-05-02 2019-02-19 Prothena Biosciences Limited anticorpos que reconhecem tau
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
SG11201910066QA (en) 2017-05-02 2019-11-28 Prothena Biosciences Ltd Antibodies recognizing tau
WO2018208864A1 (en) * 2017-05-08 2018-11-15 Adimab, Llc Anti-cd3-binding domains and antibodies comprising them, and methods for their generation and use
WO2019148186A1 (en) * 2018-01-29 2019-08-01 Silarus Therapeutics, Inc. Antibodies binding erfe and methods of use
TW202100550A (zh) 2019-03-03 2021-01-01 愛爾蘭商普羅帝納生物科學公司 識別ｔａｕ之抗體

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
DE68921982T4 (de) 1988-06-14 1996-04-25 Cetus Oncology Corp Kupplungsmittel und sterisch gehinderte, mit disulfid gebundene konjugate daraus.
US6780613B1 (en) 1988-10-28 2004-08-24 Genentech, Inc. Growth hormone variants
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
US5460785A (en) 1989-08-09 1995-10-24 Rhomed Incorporated Direct labeling of antibodies and other protein with metal ions
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5314995A (en) 1990-01-22 1994-05-24 Oncogen Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins
WO1991014438A1 (en) 1990-03-20 1991-10-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Chimeric antibodies with receptor binding ligands in place of their constant region
JPH09506761A (ja) 1990-11-09 1997-07-08 ステファン ディー．ギリーズ サイトカインの免疫複合体
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
GB9422383D0 (en) 1994-11-05 1995-01-04 Wellcome Found Antibodies
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
GB9524973D0 (en) 1995-12-06 1996-02-07 Lynxvale Ltd Viral vectors
EP0918872B1 (en) 1996-08-02 2008-02-20 Bristol-Myers Squibb Company A method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
JP2002512624A (ja) 1997-05-21 2002-04-23 バイオベーション リミテッド 非免疫原性タンパク質の製造方法
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
JP2002510481A (ja) 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
CA2341029A1 (en) 1998-08-17 2000-02-24 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
EP1006183A1 (en) 1998-12-03 2000-06-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Recombinant soluble Fc receptors
EP1051432B1 (en) 1998-12-08 2007-01-24 Biovation Limited Method for reducing immunogenicity of proteins
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
GB0029407D0 (en) 2000-12-01 2001-01-17 Affitech As Product
DK1355919T3 (da) 2000-12-12 2011-03-14 Medimmune Llc Molekyler med længere halveringstider, sammensætninger og anvendelser deraf
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
AU2003209446B2 (en) 2002-03-01 2008-09-25 Immunomedics, Inc. Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
ATE536188T1 (de) 2002-08-14 2011-12-15 Macrogenics Inc Fcgammariib-spezifische antikörper und verfahren zur verwendung davon
DK2345671T3 (en) 2002-09-27 2016-02-15 Xencor Inc Optimized Fc variants and methods for their formation
AU2003286467B2 (en) 2002-10-15 2009-10-01 Abbvie Biotherapeutics Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
WO2004063351A2 (en) 2003-01-09 2004-07-29 Macrogenics, Inc. IDENTIFICATION AND ENGINEERING OF ANTIBODIES WITH VARIANT Fc REGIONS AND METHODS OF USING SAME
CN1871259A (zh) 2003-08-22 2006-11-29 比奥根艾迪克Ma公司 具有改变的效应物功能的经改进的抗体和制备它的方法
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
EP1697415A1 (en) 2003-11-12 2006-09-06 Biogen Idec MA Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
WO2005077981A2 (en) 2003-12-22 2005-08-25 Xencor, Inc. Fc POLYPEPTIDES WITH NOVEL Fc LIGAND BINDING SITES
BRPI0506771A (pt) 2004-01-12 2007-05-22 Applied Molecular Evolution anticorpo, e, composição farmacêutica
WO2005092925A2 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
WO2005123780A2 (en) 2004-04-09 2005-12-29 Protein Design Labs, Inc. Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
WO2006085967A2 (en) 2004-07-09 2006-08-17 Xencor, Inc. OPTIMIZED ANTI-CD20 MONOCONAL ANTIBODIES HAVING Fc VARIANTS
CN101987870B (zh) 2004-07-15 2013-07-03 赞科股份有限公司 优化的Fc变体
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
MX2007015781A (es) * 2005-06-14 2008-02-15 Cytos Biotechnology Ag Conjugados antigenos y sus usos.
US8460362B2 (en) 2006-07-20 2013-06-11 Orbusneich Medical, Inc. Bioabsorbable polymeric medical device
AR063840A1 (es) * 2006-11-15 2009-02-25 Medarex Inc Anticuerpos humanos monoclonales para btla y metodos de uso
WO2008151204A1 (en) 2007-06-04 2008-12-11 Sequent Medical Inc. Methods and devices for treatment of vascular defects
PL2170389T3 (pl) * 2007-06-12 2015-03-31 Ac Immune Sa Humanizowane przeciwciało przeciw amyloidowi beta
NO2195023T3 (tr) 2007-08-29 2018-08-04
EP2570137A3 (en) * 2007-11-07 2013-08-21 Celldex Therapeutics, Inc. Antibodies that bind human dendritic and epithelial cell 205 (DEC-205)
EP2420245A1 (en) * 2010-08-18 2012-02-22 Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin Therapeutic use of agonists or antagonists of bradykinin receptor 1 or 2, for modulation collateral blood vessel growth
KR102166083B1 (ko) * 2012-03-28 2020-10-16 사노피 브라디키닌 b1 수용체 리간드에 대한 항체

Also Published As

Publication number Publication date
DOP2014000199A (es) 2014-10-31
CL2017003039A1 (es) 2018-03-16
CO7111293A2 (es) 2014-11-10
KR20190121861A (ko) 2019-10-28
GT201400192A (es) 2015-07-29
US9376494B2 (en) 2016-06-28
US9879079B2 (en) 2018-01-30
JP2024038036A (ja) 2024-03-19
AR090352A1 (es) 2014-11-05
CN104334578B (zh) 2021-10-08
US20200115441A1 (en) 2020-04-16
EP2831113B1 (en) 2018-03-14
KR20200121370A (ko) 2020-10-23
JP2019050822A (ja) 2019-04-04
AU2013240242A1 (en) 2014-10-02
PH12014501970A1 (en) 2014-11-17
SI2831113T1 (en) 2018-08-31
HRP20180928T1 (hr) 2018-07-27
JP2015513903A (ja) 2015-05-18
JP6779012B2 (ja) 2020-11-04
CR20140440A (es) 2014-11-17
AU2018203081A1 (en) 2018-05-24
CA2868353C (en) 2023-10-31
MY166157A (en) 2018-06-06
PT2831113T (pt) 2018-06-20
CA2868353A1 (en) 2013-10-03
KR102035882B1 (ko) 2019-10-24
BR112014024282A2 (pt) 2017-08-08
EP2831113A1 (en) 2015-02-04
MX2014011688A (es) 2015-01-22
CY1121466T1 (el) 2020-05-29
KR102367723B1 (ko) 2022-02-28
SG10201702396QA (en) 2017-04-27
MY184037A (en) 2021-03-17
MA37407A1 (fr) 2016-05-31
PE20142170A1 (es) 2015-01-07
IL234830B (en) 2018-11-29
CL2014002590A1 (es) 2015-01-16
US20160368976A1 (en) 2016-12-22
WO2013148296A1 (en) 2013-10-03
CN113773385A (zh) 2021-12-10
EP3246339A1 (en) 2017-11-22
PL2831113T3 (pl) 2018-08-31
KR20150002679A (ko) 2015-01-07
EP3246339B1 (en) 2019-10-09
MA37407B1 (fr) 2018-03-30
UA117097C2 (uk) 2018-06-25
NZ631543A (en) 2017-03-31
LT2831113T (lt) 2018-06-25
DK3246339T3 (da) 2020-01-27
TW201343671A (zh) 2013-11-01
US20180222967A1 (en) 2018-08-09
TWI605060B (zh) 2017-11-11
UY34682A (es) 2013-10-31
RS57413B1 (sr) 2018-09-28
KR20220031728A (ko) 2022-03-11
EA201491784A1 (ru) 2015-02-27
US20230399388A1 (en) 2023-12-14
JP6912441B2 (ja) 2021-08-04
DK2831113T3 (en) 2018-06-25
MX2018015914A (es) 2021-12-08
CN104334578A (zh) 2015-02-04
JP2021166538A (ja) 2021-10-21
KR102166083B1 (ko) 2020-10-16
HK1206754A1 (en) 2016-01-15
US20150050270A1 (en) 2015-02-19
MX361874B (es) 2018-12-18
US10465002B2 (en) 2019-11-05
SG11201405162YA (en) 2014-09-26
HUE037720T2 (hu) 2018-09-28
AU2013240242B2 (en) 2018-02-08
ES2673869T3 (es) 2018-06-26
JP7411609B2 (ja) 2024-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7411609B2 (ja) ブラジキニンｂ１受容体リガンドに対する抗体
EP3712173B1 (en) Pdgf receptor beta binding polypeptides
US11208483B2 (en) CTLA-4 antibodies and uses thereof
WO2015091911A2 (en) Antibodies against canine pd-1
AU2014306649A1 (en) Antibodies to Plasminogen Activator inhibitor-1 (PAI-1) and uses thereof
US20240101674A1 (en) Pd1 and vegfr2 dual-binding agents
Li et al. Antibodies to kallidin and des-Arg 9-kallidin
OA17139A (en) Antibodies to bradykinin B1 receptor ligands