TH6088C3 - กรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส (beta-carboxyltransferase) หน่วยย่อย D (accD) ในปาล์มน้ำมัน - Google Patents
กรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส (beta-carboxyltransferase) หน่วยย่อย D (accD) ในปาล์มน้ำมันInfo
- Publication number
- TH6088C3 TH6088C3 TH503001553U TH0503001553U TH6088C3 TH 6088 C3 TH6088 C3 TH 6088C3 TH 503001553 U TH503001553 U TH 503001553U TH 0503001553 U TH0503001553 U TH 0503001553U TH 6088 C3 TH6088 C3 TH 6088C3
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- formula
- sequence
- gene
- beta
- subunit
- Prior art date
Links
Abstract
สิ่งประดิษฐ์นี้เป็นกรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บกอกวิลทรานสเฟอเรส หน่วย่อย D (สูตร) มีขั้นตอนคือ สังเคราะห์ยีนขนาดสมบูรณ์ด้วยไพร์เมอร์ SEQUENCE No.1 และ SEQUENCE No.2 มีสภาวะปฏิกิริยา คือ 45 ํC 30 นาที 1 รอบ แล้วตามด้วยปฏิกิริยา PCR ดังนี้ 95 ํC 15 นาที 1 รอบ; 94 ํC 30 วินาที 45 ํC 1 นาที 68 ํC 1.5 นาที 40 รอบ และ 68 ํC 10 นาที 1 รอบ, 4 ํC 30 นาที 1 รอบ นำดีเอ็นเอเส้นสมบูรณ์ไปหาการเรียงลำดับกรดนิวคลีอิค ได้ลำดับ กรดนิวคลีอิคขนาด 1605 คู่เบส (SEQUENCE NO.5) ตรวจวัดการแสดงออกของยีน (สูตร) โดยวิธี อาร์ทีพีซีอาร์ คือผสม RNA จากใบปาล์มน้ำมัน (400 นาโนกรัม) เอมไซม์ และ ไพรเมอร์ SEQUENCE NO.3 และ SEQUENCE NO.4 นำหลอดทอสอบไป อุ่นที่ 50 ํC นาที และ 95 ํC 15 นาที และอุ่นต่ออีก 35 รอบตามโปรแกรมของเครื่องพีซีอาร์ ดังต่อไปนี้ 94 ํC 1 นาที, 48 ํC 1นาที และ 72 ํC 1 นาที หยุดปฏิกิริยาโดยอุ่นที่ 72 ํC 10 นาที ส่วนผสมของปฏิกิริยาในหลอด ควบคุมประกอบด้วย สารเช่นเดียวกับหลอดทดสอบ แต่เปลี่ยนโอลิโกนิวคลีโอไทด์โพรเมอร์เป็นไพร เมอร์ที่จำเพาะต่อ 18s rRNA นำผลผลิตของปฏิกิริยาไปแยกบนอะกาโรสด้วยกระแสไฟฟ้า วัดความ เข้มแถบของผลผลิตพีซีอาร์ ด้วยเครื่อง densitometer เปรียบเทียบแถบที่ได้จากหลอดทดสอบ (สูตร) กับแถบของ หลอดควบคุม (18s rRNA) เมื่อกำหนดให้ความเข้มของหลอดควบคุมเป็น 1 ก็จะทำให้ เปรียบเทียบความแตกต่างของผลผลิตพีซีอาร์ของ (สูตร) จากแต่ละตัวอย่างได้ พืชที่มีผลผลิตสูงจะมี ระดับการแสดงออกของยีน (สูตร) สูง
Claims (4)
1. กรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส หน่วยย่อย D (สูตร) ใน ปาล์มน้ำมัน มีขั้นตอนดังต่อไปนี้ 1.1 โคลนยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส หน่วยย่อย D (สูตร) โคลนยีนเป้าหมายโดยนำยีนจาก EST library ที่เตรียมจาก mesocarp ของปาล์มน้ำมัน แล้วออกแบบไพรเมอร์เพื่อสังเคราะห์ยีนขนาดสมบูรณ์ ไพร์เมอร์ที่ใช้คือ SEQUENCE No. 1, SEQUENCE No.2 1.2 การเรียงลำดับกรดนิวคลีอิคของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส หน่วยย่อย D นำผลผลิตดีเอ็นเอจากปฏิกิริยาการโคลนยีน ไปหาการเรียงลำดับกรดนิวคลีอิค ได้ลำดับ กรดนิวคลีอิคที่ได้มีขนาด 1605 คู่เบส (SEQUENCE No. 5) 1.3 การตรวจวัดการแสดงออกของยีน (สูตร) โดยวิธีอาร์ทีพีซีอาร์ ส่วนผสมของปฏิกิริยาในหลอดทดสอบประกอบด้วย RNA (400 นาโนกรัม ) จากใบ ปาล์มน้ำมัน โอลิโนิวคลีโอไทดืที่ออกแบบจำเพาะ SEQUENCE No.3 และ SEQUENCE No.4 นำหลอดทดสอบไปอุ่นที่ 50 ํC 30 นาที และ 95 ํC 15 นาที และ อุ่นต่ออีก 35 รอบตามโปรแกรม ของเครื่องพีซีอาร์ ดังต่อไปนี้ 94 ํC 1 นาที, 48 ํC 1 นาที และ 72 ํC 1 นาที หยุดปฏิกิริยาโดยอุ่นที่ 72 ํC 10 นาที ส่วนผสมของปฏิกิริยาในหลอดควบคุมประกอบด้วย สารเช่นเดียวกับหลอดทดสอบ แต่ เปลี่ยนโอลิโกนิวคลีโอไทดไพรเมอร์เป็นไพรเมอร์ที่จำเพาะต่อ 18s rRNA 1.4 การตรวจวัดปริมาณผลผลิตพีซีอาร์ของ (สูตร) นำผลผลิตของปฏิกิริยาพีซีอาร์ ไปแยกบนอะกาโรสด้วยกระแสไฟฟ้า วัดความเข้มแถบ ของผลผลิตพีซีอาร์ ด้วยเครื่อง densitometer เปรียบเทียบแถบที่ได้จากหลอดทดสอบ (สูตร) กับ แถบของหลอดควบคุม (18s rRNA) (รูปที่ 1) กำหนดให้ความเข้มของหลอดควบคุมเป็น 1 ทำให้ สามารถเปรียบเทียบความแตกต่างของผลผลิตพีซีอาร์ของ (สูตร) จากแต่ละตัวอย่างได้ 1.5 ความสัมพันธ์ระหว่างปริมาณผลผลิตพีซีอาร์ ของ (สูตร) และ ผลผลิตปาล์มน้ำมัน ต่อต้นต่อไป พบว่าระดับการแสดงออกของยีน (สูตร) ในพืชสอดคล้องกับปริมาณผลผลิตของพืช จึงใช้ วิธีการนี้แสดงสมบัติของพืชปาล์มน้ำมันว่ามีผลผลิตสูงหรือต่ำ
2. กรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส หน่วยย่อย D ((สูตร)) ในปาล์มน้ำมัน ตามข้อถือสิทธิ์ที่ 1 ที่ซึ่งไพรเมอร์ที่ใช้ในการสังเคราะห์ cDNA ของยีน (สูตร) คือ SEQUENCE NO.1:5\'-GGATGACTATTCATCTATTGTATTTTC-3\' SEQUENCE NO.2:5\'-GCAAGCTTATAAATTTTTTGAGTT-3\'
3. กรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส หน่วยย่อย D ((สูตร)) ในปาล์มน้ำมัน ตามข้อถือสิทธิ์ที่ 1-2 ข้อใดข้อหนึ่งที่ซึ่ง cDNA ของยีนที่ได้มีลำดับกรดนิว คลีอิลตาม SEQUENCE NO.5
4. กรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส หน่วยย่อย D ((สูตร)) ในปาล์มน้ำมัน ตามข้อถือสิทธิ์ที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่งที่ซึ่งในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอซึ่งเป็นส่วนหนึ่ง ของ (สูตร) นั้นใช้ไพรเมอร์ SEQUENCE NO.3:5\'-CT ATA GCA A TT GGA GTT ATG AAT T-3\' SEQUENCE NO.4:5\'-CY GCT TGT GAA CCT TCR GGY AC-3\'
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH6088A3 TH6088A3 (th) | 2011-03-23 |
| TH6088C3 true TH6088C3 (th) | 2011-03-23 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2370596B1 (en) | Novel combination of fluorescent dyes for the detection of nucleic acids | |
| CN111733168B (zh) | 干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用 | |
| EP3292217B1 (en) | Formation of hairpins in situ using force-induced strand invasion | |
| CN110016518A (zh) | 一种黄秋葵内参基因EF-1α及其应用 | |
| ES2691306T3 (es) | Procedimientos y composiciones para detectar mutaciones en el gen PI3KCA (PIK3CA) humano | |
| CN109735648A (zh) | 一种筛选不同千粒重小麦的方法及其专用试剂盒 | |
| Kaushik et al. | Molecular characterization and expression profiling of ENOX2 gene in response to heat stress in goats | |
| KR101861592B1 (ko) | 청춘찰옥수수 품종을 구분하기 위한 특이 ssr 프라이머 및 이의 용도 | |
| TH6088C3 (th) | กรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส (beta-carboxyltransferase) หน่วยย่อย D (accD) ในปาล์มน้ำมัน | |
| TH6088A3 (th) | กรรมวิธีการตรวจวัดการแสดงออกของยีนเบตาคาร์บอกซิลทรานสเฟอเรส (beta-carboxyltransferase) หน่วยย่อย D (accD) ในปาล์มน้ำมัน | |
| Al-Robaiy et al. | Rapid competitive PCR using melting curve analysis for DNA quantification | |
| CN109097479A (zh) | Cyp2c19基因多态性检测试剂盒 | |
| EP3320113B1 (en) | Methods and kits for the detection of powdery mildew | |
| Maloukh et al. | Housekeeping gene selection for real time-PCR normalization in female hop (Humulus lupulus L) tissues | |
| Wadhwani et al. | Quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction of glucose transporter 1 mRNA levels in rat brain microvessels | |
| CN104212880B (zh) | 基于lamp的转基因玉米mon863基因快检试剂盒及检测方法 | |
| JP2007020466A (ja) | 大麻ＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａＬ．の識別方法 | |
| CN104017812A (zh) | 用于蝴蝶兰内参基因的tua片段序列 | |
| CN108728453A (zh) | 一种印度南瓜EF1-α基因及其应用 | |
| Thilagavathy et al. | Evaluation of appropriate reference gene for normalization of microRNA expression by real-time PCR in Lablab purpureus under abiotic stress conditions | |
| CN103088115B (zh) | 检测病原的方法及试剂盒 | |
| Cui et al. | Evaluation of suitable reference genes for gene expression studies in Lycoris longituba | |
| WO2007032743A3 (en) | In vitro assay for identification of allergenic proteins | |
| Kelleher et al. | A one-step quantitative reverse transcription polymerase chain reaction procedure | |
| ATE513059T1 (de) | Verfahren zum nachweis oder zur quantitativen bestimmung der mitochondrialen dna-variation 3243 und kit dafür |