CN111733168B - 干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用 - Google Patents

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    • C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes

Abstract

本发明涉及干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用，内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因、肌动蛋白ACT1基因、肌动蛋白ACT2基因、甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶GAPDH基因、真核生物翻译起始因子eIF1基因、真核生物翻译起始因子eIF2基因、微管蛋白α‑TUB基因、微管蛋白β‑TUB基因、RNA聚合酶II RNA Pol II基因或RNA聚合酶II转录因子RP II基因；上述基因的核苷酸序列详见序列表所示。本发明的目的在于提供一个干旱胁迫下凤丹基因表达谱中稳定表达的基因，以其作为凤丹干旱胁迫内参基因。

Description

干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用
技术领域
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用。
背景技术
内参基因是表达水平不受研究条件影响而恒定表达的基因，常被用于实时荧光定量PCR检测的校正。在日常实验过程中，传统使用的内参基因在不同条件下的表达水平可能是不稳定的，容易导致错误的结果甚至形成相悖的结论。因此，选择筛选出合适的基因作为内参基因用于基因表达量的参考和校正显得尤为重要。
凤丹(Paeonia ostii)是芍药科芍药属多年生木本植物，是杨山牡丹的变种。因其具有很高的药用价值、观赏价值和油用价值而被大力推广种植。凤丹在干旱胁迫下会出现叶片颜色萎蔫、焦枯，其各项生理指标也明显下降。筛选干旱胁迫相关的关键基因，对于缓解干旱胁迫对凤丹的伤害、改善凤丹在干旱或半干旱地区的种植情况具有十分重要的理论和实践意义。在对干旱胁迫下凤丹基因表达差异的研究过程中，需要稳定可靠的内参基因作为参照来进行实时荧光定量PCR检测和验证基因的表达水平，因此筛选凤丹干旱胁迫条件下稳定表达的内参基因对其实时荧光定量PCR检测结果的准确性起着关键作用。而前人只有以油用牡丹成熟种子为材料开展过实时荧光定量PCR内参候选基因的筛选(张莞晨，阮成江，李景滨，韩平，丁健，刘祾悦，吴波，阮东，四种木本油料内参基因筛选及.4ctin基因时空表达分析，分子植物育种，2018，14：4576-4582)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种干旱胁迫下凤丹基因表达谱中稳定表达的基因，以其作为凤丹干旱胁迫内参基因。
本发明还提供了用于扩增所述的干旱胁迫下凤丹内参基因的专用引物及其应用。
本发明所采取的技术方案是：
一种干旱胁迫下凤丹内参基因，所述干旱胁迫下凤丹内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因、肌动蛋白ACT1基因、肌动蛋白ACT2基因、甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因、真核生物翻译起始因子eIF1基因、真核生物翻译起始因子eIF2基因、微管蛋白α-TUB基因、微管蛋白β-TUB基因、RNA聚合酶II RNA Pol II基因或RNA聚合酶II转录因子RP II基因；所述TATA盒结合蛋白TBP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述肌动蛋白ACT1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述肌动蛋白ACT2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述真核生物翻译起始因子eIF1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述真核生物翻译起始因子eIF2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述微管蛋白α-TUB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述微管蛋白β-TUB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述RNA聚合酶II RNA PolII基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述RNA聚合酶II转录因子RP II基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
作为优选地，所述干旱胁迫下凤丹内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因。
本发明内容还包括用于扩增如前所述的干旱胁迫下凤丹内参基因的专用引物，所述内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因的引物序列是：
F：5’-GTAATGCTGAATACAATCCC-3’；
R：5’-ATACTTCCGTGCTGCTAA-3’；
所述内参基因是肌动蛋白ACT1基因的引物序列是：
F：5’-CTTCTTGCTACGACATCC-3’；
R：5’-AGCTAAGGTATTGCCACT-3’；
所述内参基因是肌动蛋白ACT2基因的引物序列是：
F：5’-GCAGAGGGGTATGTTATT-3’；
R：5’-CTTCACTTTGCGAGCTAC-3’；
所述内参基因是甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因的引物序列是：
F：5’-ATGACCACTGTCCACTCC-3’；
R：5’-TTCCAGTCAACTTCCCAT-3’；
所述内参基因是真核生物翻译起始因子eIF1基因的引物序列是：
F：5’-ACGATTACGAAGACAGACC-3’；
R：5’-CAAAGGACTTGACAGAGTC-3’；
所述内参基因是真核生物翻译起始因子eIF2基因的引物序列是：
F：5’-GGAAGTGGAAAGGAAGAC-3’；
R：5’-ATCCATAATAGCAGCTCC-3’；
所述内参基因是微管蛋白α-TUB基因的引物序列是：
F：5’-CTGGGAACTTTACTGTCTC-3’；
R：5’-TCCTGACTTCATCAATGAC-3’；
所述内参基因是微管蛋白β-TUB基因的引物序列是：
F：5’-GTATTACAACGAGGCTTCT-3’；
R：5’-CAGCATCAATCAACTCAG-3’；
所述内参基因是RNA聚合酶II RNAPol II基因的引物序列是：
F：5’-GGTTTGTGACATTTCCTG-3’；
R：5’-ATAGTTTGGTGCATCTCC-3’；
所述内参基因是RNA聚合酶II转录因子RP II基因的引物序列是：
F：5’-ACGGAGATAGGGTTTGCC-3’；
R：5’-CCCAAAGTTCTTATCGCATT-3’。
干旱胁迫下凤丹内参基因在凤丹实时荧光定量PCR中的应用。
专用引物在凤丹实时荧光定量PCR中的应用。
干旱胁迫下凤丹内参基因的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：
1)基于前期凤丹正常生长与干旱胁迫叶片所获得的RNA-seq数据库，获得Unigene的RPKM值，找到表达稳定的Unigene作为候选内参基因；
2)针对步骤1)找到的在干旱胁迫下表达稳定的候选内参基因，采用Premier 5.0软件设计并合成凤丹候选内参基因的实时荧光定量PCR检测引物，利用琼脂糖胶和凝胶成像系统观察PCR产物的条带，检测产物特异性；选择条带大小正确，条带特异性好，没有引物二聚体的引物；
3)以凤丹三年生盆栽苗为植物材料，在自然干旱处理前连续3天在每天同一时间正常浇水，而后进行自然干旱处理，采集样品后使用液氮速冻，并保存在-80℃下；使用MiniBEST Plant RNA Extraction Kit试剂盒进行RNA的提取，并使用核酸蛋白仪检测RNA浓度和OD值，利用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性；反转录使用5×M-MLVBuffer反转录酶，利用Oligo dT 18引物进行cDNA的合成，将获得的cDNA产物作为PCR扩增的模板，内参基因表达水平分析步骤2)确定的引物组合，试剂为
Figure BDA0002585165100000031
Premix Ex TaqTM试剂盒；
4)将步骤3)获得的实时荧光定量PCR数据通过BestKeeper和GeNorm软件进行候选内参基因的稳定性分析，最终筛选出最稳定表达的基因。
作为优选，本发明所采用的步骤3)中实时荧光定量PCR反应总体系为25μL，包含12.5μL的2×SYBR Premix Ex TaqTM，正向引物/反向引物各1μM，cDNA模板2μL，灭菌蒸馏水8.5μL；
所述实时荧光定量PCR反应程序是：95℃预变性30s，接下来95℃～5s、55℃～30s和72℃～30s共40个循环；溶解曲线程序：65℃加热至90℃，5s，每0.5℃收集一次荧光信号，每次反应要重复三次；在PCR完成后，获得相应的域值循环数，即Ct值。
本发明的有益效果是：
本发明筛选了10个在干旱胁迫条件下凤丹基因表达谱中稳定表达的基因，以其作为凤丹干旱胁迫内参基因，通过综合分析筛选到最优用于凤丹干旱胁迫下荧光定量内参基因TBP，有利于提高干旱胁迫下凤丹基因表达分析研究的稳定性和可靠性。
附图说明
图1是本发明候选内参基因TBP实时荧光定量PCR的扩增曲线；
图2是本发明候选内参基因TBP的溶解曲线；
图3是GeNorm软件对10个候选内参基因表达稳定值(M)的排序。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例1：干旱胁迫下凤丹实时荧光定量PCR内参基因的筛选
基于前期凤丹正常生长与干旱胁迫12天叶片所获得的RNA-seq数据库，获得78392个Unigene的RPKM值，找到10个表达稳定的Unigene作为候选内参基因(见表1)。
表1 RNA-seq中代表各Unigene表达水平的RPKM值
转录组中序列编号 正常生长 干旱胁迫12天 序列编号
Unigene0040750 9.53 9.69 SEQ ID NO.1
Unigene0029456 13.58 14.29 SEQ ID NO.2
Unigene0043536 19.05 18.33 SEQ ID NO.3
Unigene0041281 56.98 54.97 SEQ ID NO.4
Unigene0043455 9.08 8.90 SEQ ID NO.5
Unigene0041583 144.36 136.35 SEQ ID NO.6
Unigene0030732 5.34 5.62 SEQ ID NO.7
Unigene0032356 16.17 15.81 SEQ ID NO.8
Unigene0006653 9.99 9.43 SEQ ID NO.9
Unigene0043820 10.85 10.95 SEQ ID NO.10
针对以上找到的10个在干旱胁迫下表达稳定的候选内参基因，采用Premier 5.0软件设计并合成10个凤丹候选内参基因的实时荧光定量PCR检测引物，利用琼脂糖胶和凝胶成像系统观察PCR产物的条带，检测产物特异性。选择条带大小正确，条带特异性好，没有引物二聚体的引物，筛选后得到的引物序列如表2所示：
表2 10个在干旱胁迫下表达稳定的候选内参基因引物序列
Figure BDA0002585165100000051
实施例2：候选内参基因的表达稳定性分析
不同干旱胁迫时间下，候选内参基因在凤丹叶片中的表达稳定性分析：以凤丹三年生盆栽苗为植物材料，在自然干旱处理前连续3天在每天17：00时正常浇水，而后进行自然干旱处理(0天、4天、8天和12天)，每个处理设三个生物学重复，采后使用液氮速冻，并保存在-80℃下。
样品使用MiniBEST Plant RNAExtraction Kit(Takara，Japan)试剂盒进行RNA的提取，并使用核酸蛋白仪检测RNA浓度和OD值，利用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性；反转录使用5×M-MLV Buffer反转录酶(TaKaRa，Japan)，利用Oligo dT 18引物进行cDNA的合成，具体操作方法参照试剂盒说明书进行。将获得的cDNA产物作为PCR扩增的模板，内参基因表达水平分析采用表2的引物组合，试剂为
Figure BDA0002585165100000052
Premix Ex TaqTM(PerfectReal Time)(TaKaRa，Japan)试剂盒。
实时荧光定量PCR反应总体系为25μL，包含12.5μL的2×SYBR Premix Ex TaqTM，正向引物/反向引物各1μM，cDNA模板2μL，灭菌蒸馏水8.5μL；
反应程序：95℃～30s，[95℃～5s，55℃～30s，72℃～30s]×40个循环；溶解曲线程序：65℃加热至90℃，5s，每0.5℃收集一次荧光信号，每次反应要重复三次。在PCR完成后，获得相应的域值循环数，即Ct值，具体列于表3。
表3凤丹不同干旱胁迫时间下候选内参基因的平均Ct值
基因名称 干旱胁迫0天 干旱胁迫4天 干旱胁迫8天 干旱胁迫12天
TBP 27.07 26.67 27.48 27.41
ACT1 27.01 27.16 27.14 27.27
ACT2 31.18 29.69 30.55 28.99
GAPDH 30.23 29.94 29.51 29.43
eIF1 27.87 28.51 30.47 29.11
eIF2 26.37 26.33 29.64 28.40
α-TUB 24.97 25.18 27.05 25.41
β-TUB 28.16 28.45 29.01 28.99
RNA PolII 24.91 25.01 25.80 25.50
RPII 30.82 28.55 30.11 29.92
BestKeeper软件分析：对荧光定量PCR反应后得到的Ct值采用BestKeeper软件进行分析，直接输入获得每个内参基因在不同干旱处理时间下获得的Ct值，获得用来衡量基因稳定性的标准偏差(SD)和变异系数(CV)，最终确定稳定性较好的内参基因。标准偏差和变异系数越小，内参基因稳定性越好，反之，稳定性越差；当SD＜1时，说明该基因表达稳定，可以作为内参基因使用。分析结果列于表4，其中eIF2基因的SD数值大于1，其余内参基因SD数值均小于1，内参基因的稳定性依次为ACT1＞TBP＞GAPDH＞RNA Pol II＞β-TUB＞RPII＞α-TUB＞ACT2＞eIF1，表达最稳定的是ACT1基因，最不稳定的为eIF2基因。
表4 BestKeeper软件分析结果
Figure BDA0002585165100000061
Figure BDA0002585165100000071
GeNorm软件分析：GeNorm软件根据基因表达稳定度M值来衡量内参基因的稳定性和可靠性，软件默认的取舍值为1.5，高于1.5的基因不适合作为内参使用，M值越低表示基因越稳定。同时根据M值可以获得候选内参基因稳定性折线图，对内参基因的表达稳定度进行排序。分析结果列于表5，10个内参基因的M值均小于1.5，内参基因的稳定性依次为RNAPol II≥β-TUB＞TBP＞ACT1＞α-TUB＞eIF1＞GAPDH＞RP II＞ACT2＞eIF2(图3)。
表5 GeNorm软件分析结果
排名 基因名称 稳定值
1 RNA PolII 0.14
1 β-TUB 0.14
3 TBP 0.22
4 ACT1 0.29
5 α-TUB 0.47
6 eIF1 0.57
7 GAPDH 0.67
8 RPII 0.77
9 ACT2 0.85
10 eIF2 0.96
候选内参基因的表达稳定性综合评价：综合考虑Ct值、BestKeeper和GeNorm软件的分析结果，内参基因的稳定性依次为TBP＞RNA Pol II≥ACT1＞β-TUB＞GAPDH＞α-TUB＞RPII＞eIF1＞ACT2＞eIF2，鉴定出TBP是适于凤丹干旱胁迫条件下最稳定的内参基因，可以应用于干旱胁迫下凤丹基因的表达水平研究。
序列表
<110> 扬州大学
<120> 干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用
<160> 30
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1190
<212> DNA
<213> TBP基因(Artificial Sequence)
<400> 1
cagctctctc ccttctctct ctctctcgcc cctccttttt aagcctccaa atacaaatcc 60
ttcacatata tcacctataa aagatgccca ttttcaaatt ctatctgcta taaaacccgt 120
ttactcatcc gattttccca ggaatttcta tttctgaatt gcaattaacc ctaaggtttc 180
attcagaagg tctgcttatc ccttttccgt tccgccagat cttcattttt attgcacttc 240
aaaatttcag tcatttgtct atcaccggaa tttatctatc cgtgatcaaa accagctgtt 300
tgaagcctat tttcctcatt tccatttcag aaagctggtt tcgactttct aaatttaatc 360
aaagattctc tgggataaac ccgaatattt cagcagattg attatacttg gggtttgttt 420
gctgatatta gtctgtccga gttttgagag tgatttataa cataagatgg cagatcaggt 480
aatggaaggg agccaacctg tagacctttc taagcaccca tctgggatcg tccctactct 540
ccagaacatt gtgtcaacag tcaatctgga ctgcaagctg gatctaaagt ctattgcact 600
gcaagcgcgt aatgctgaat acaatcccaa gcgttttgct gctgtaatta tgaggataag 660
ggatccgaaa accacagcat tgatatttgc ttctggaaag atggtttgta ctggagctaa 720
gagtgaacaa cagtcgaaat tagcagcacg gaagtatgct cgaatcattc aaaaactcgg 780
ttttccagct aagttcaagg attttaagat ccagaatatt gttggctcat gcgatgttaa 840
atttcctata aggcttgaag ggcttgcata ttcccatggt gccttttcaa gtgtaagtat 900
aatgatattt gtgattatcc tttttaagat taaatgtgcc attttttgtg ttgtattgga 960
tattgttcac gtttgttttg gacagtatga accagaactc ttcccaggct tgatttaccg 1020
aatgaagcaa ccaaagattg tgctgttaat ctttgtgtct gggaaaattg ttcttacagg 1080
agctaaggtg agagatgaga cctacaccgc atttgagaac atttacccgg tgcttactga 1140
attcaggaaa agccagcaat gattatgtgc caagagtgaa gtttttgagt 1190
<210> 2
<211> 1685
<212> DNA
<213> ACT1基因(Artificial Sequence)
<400> 2
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tggcgcatct ggatctcatt atagatagat ggcggcgatt tcagttcacc agttcgctga 120
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<210> 3
<211> 2232
<212> DNA
<213> ACT2基因(Artificial Sequence)
<400> 3
tatctctcgt tttctctcct ccaacgagag tgaaaaaaca tcaatccatc actcaacgta 60
tcattggcct gcagaatctc tcaccataca gcgtgctgcc cacagatcga acggttgaaa 120
atctaccgtc acatatcatt tgcgacaatt ctcacagaag tttacaggga aaaaacaggg 180
aggtagacag aggagagaga gtagtgttgt ttgatttcga agaaaagaat ctaaccgtag 240
agacccacct caggataatg atgaagctga tgaaaccttc tataatcaat cctcccgttc 300
ggtcttgata tggatgtaag aacaatcccc ttctccgtct cttccaagtc atcacgctgt 360
gcgttgagtc gcttctttca cttaagatca aagtcgattt caccatcatt agcaacagca 420
acaccgacac cttcatttcc cgccttcttc tcgctcttcc cgaggcggct tcaacaaata 480
tgaccccctc ccttaaaccc tcactaggat ctcagtcgca gatccaccat tattataatc 540
tttcactctc ttttatctat aatggatgca gccacctctc gtcccaccgt agtaatcgac 600
aatggctctg ggtatactaa gatggggttt gcgggtaacg ttgagccgtg ttttatcgtt 660
ccgacagtag tagcagttaa cgagtcattt ttaaatcaat ccagaagcac aaacaagagc 720
aattggctag cgcagcacag tgcgggcgtg atggccgatc tagatttctt tattggagag 780
gaggcgcttg gcaaatcgag atctagtagt acgtataatc ttagctatcc gattcgacaa 840
gggcaggtag ataattggga tgccatggag cggttttggc aacagtgtat attcaattac 900
ttgcggtgtg atccggagga tcattacttt ttattgactg agagtccgct tactgctcca 960
gagagtcgcg agtatactgg tgaaattatg tttgaaacgt ttaatgttcc tgggctatat 1020
attgcagtgc agcctgtcct cgcacttgca gctgggtaca caacatctaa gtgtgagatg 1080
acaggggttg tagtagatat tggagacggg gctactcata tcgtacctgt tgcagagggg 1140
tatgttattg ggagcagcat taagtcgatt cctattgcag ggaaagatgt cactcttttc 1200
atccagcagc tcatgcggga acggggggaa aatattccaa ccgaggactc cttcgaagta 1260
gctcgcaaag tgaaggaaac ttactgctac actagttctg atatcgtcaa ggagtacaac 1320
aaacatgaca aagaaccttc aaagtacatt aagcaatgga gaggtattaa accaaggaca 1380
ggggctccat actcttgtga tgttggctat gaacgatttc ttggccccga ggttttcttc 1440
aatcctgaga tttatagcag tgactttacc accccactgc cagacgtaat tgataagtgt 1500
attcagtctg caccaattga cacgaggagg gctctgtata agaacatagt tttatctggg 1560
ggatcaacca tgttcaagga cttccataga aggttgcaac gagatgtcaa gaagatcgtg 1620
gatgctcggg ttcttgcatc tgatgctcgg catggtggag agataaaagc acaacccgtg 1680
gaagtcaatg tagttagcca tcccatccag agatatgcag tttggtttgg aggctctgtt 1740
cttgcatcca cgcctgaatt ttttgcagct tgtcatacta aagcagagta tgaggaatac 1800
ggagcaagca tatgcagaac aaatcctgtt ttcaagggaa tgtattgatg ggaaaaccag 1860
aaatatttta tttatcgaat gcctcaccat ttccaccttc aacatgcacc tcaattctca 1920
atctgagctt cagaatatag ccttcggttt ttcgtgtaca tttacaggga ggtggtgttg 1980
taaaatagag ttatgaaagt ggtttttttt cttctattct tttggttagg gagcaaatag 2040
tttttttttt tttttttgca gccaaagaga tgctgctgct tgtgctatcg gactatgatg 2100
acgacccaga tgtagacatt ataaaactaa gctgaattgc atttttagtg ttcagcttag 2160
ttggagttta tatttgtttt tattttattg ggatgataat tcattttgta cacttttgag 2220
atggggatta at 2232
<210> 4
<211> 836
<212> DNA
<213> GAPDH基因(Artificial Sequence)
<400> 4
gtttgttgtg ggtgttaatg agaaggaata caaaccagaa attgacattg tttccaatgc 60
tagctgcact accaactgtc ttgctccctt ggccaaggtt ataaatgata ggtttggaat 120
agttgagggt cttatgacca ctgtccactc catcactgct acccagaaaa ctgttgatgg 180
gccctcaatg aaggactgga gaggtggaag ggctgcttcc ttcaacatca ttcccagcag 240
cactggagct gccaaggctg tcggaaaagt gctccccgct ttgaatggga agttgactgg 300
aatggctttc cgagttccta ctgttgatgt ttcggttgtg gatcttactg tcaggcttga 360
gaaggcggcc acctatgaac agatcaaggc tgctatcaag gaggagtctg aaggcaagct 420
caaggggatt ttgggttaca cagaagatga tgtagtgtca acagactttg ttggtgataa 480
caggtcaagc atatttgatg ccaaggctgg aattgctctc aatgacaact ttgtcaagct 540
tgtctcctgg tacgacaatg aatggggtta cagttcgcgt gtgattgatt tgatctctca 600
catggcttct acacaagctt gaagttaatt tgaggccctt ttcggtgtgg aatgagttaa 660
attctgattt gtcttatgtt tctttcttag tggagcatat ttttgcagaa taatattagc 720
ggttccttca ttttcatttc tatgttgttg tcattttctg tgtctatttt gttcttgtgg 780
ttcattttca cttaatattt cctttgagat taatccatta caccttctga attatg 836
<210> 5
<211> 1887
<212> DNA
<213> eIF1基因(Artificial Sequence)
<400> 5
cggtgtcccc aatccagaaa ccctcatacc atacgaatca aaccattcgt tcttccccaa 60
ccctaattcg aactccgcat cacacagaga gagggagaaa tcaacaaaaa atcaccaaaa 120
gtatggcttc ttcatacgat tacgaagaca gacccactac cttcgacgat caagcccacc 180
gcaaccctca agatctcggc tacgacccga acttcgtccc cgactctgtc aagtcctttg 240
tggttcacct ctaccgtcac atccgcgaga agaatgtata tgaaatccac caaatgtacg 300
agacctcatt ccaaaccctc tcggaccgct tgttcaagga ctcaccttgg ccttccgttg 360
acgccgttgc gcagtatgtc gacaacgacc acgtcttctg cctcctttat cgcgagatgt 420
ggtttcgcca cctctacgct cggctttccc ctactttgaa gcagaggatc gattcgtggg 480
acaattattg tggtcttttt caggtggtgt tgcacggggt ggttaatatg cagttgccca 540
accagtggtt gtgggatatg gtggatgagt ttgtctacca gtttcagtcc ttctgtcagt 600
accgggccaa gatgaagagc aagtctgagc aggagattgc gcttttgcag cagtttgacc 660
aggcttggaa tgtctatggc gtgctcaact tcttgcaagc acttgttgag aagtccacga 720
tcattcagat tctggagcag gagaaggaag gtcttgaaca gtttactgct actgatggat 780
atgattacaa tggtggaagt aatgttttga aggtgttggg atattttagc atggtgggtt 840
tgctgcgagt tcactgtctt ttaggtgatt atcataccgg attgaagtgc ttacttccca 900
ttgacattac tcaacaaggt gtttacacca gtgttatagg aagccacatc accaccatat 960
atcattatgg gtttgcgaat ctgatgttga ggaggtatgt tgaggctatt cgcgagttca 1020
acaagattct cttatacatt tacaaaacca agcaatacca tcagaaatct ccacagtatg 1080
agcagatact gaagaagaat gaacaaatgt atgcattgct tgccatctct ctttcactct 1140
gcccccaagt gaagcttgtt gaagaaaccg tgaacgctca gttaagagag aagtatggcg 1200
aaaagatgat cagaatgcag agatatgacg atgaggcatt tgctctttac gatgagctct 1260
tctcatacgc ttgtcccaag tttattactc cctctgctcc aagttatgaa gagccacttg 1320
taaattacaa ccaggatgcc tataggcttc agttgaagct gtttctgtat gaagtgaagc 1380
agcaacagtt gttatcaggt gttagaactt tcttgaaagt gtattcaacc atttcacttg 1440
ggaaacttgc aacttatatg gaagttgatg aacccacttt aaggacaatc ttgatgacat 1500
acaagcataa aacacatgct gttgatagtg atggaaaaat cacgtccaat gctgatatcg 1560
atttctacat cgatgatgat atggttaatg ttgttgaatc gaaaccaatt aagcgatatg 1620
gggattattt tatgcgtcaa attattaagc ttgaaggagt gattaccgat atggacagga 1680
taaaggtaga atgagttgct cgtttccttt cattttcctt atgatttttt ttttttgagt 1740
tagtgtaatg tgtgaaattt ttggaatgga aaattttatc ttccagttgg agatctgatg 1800
tttatttgtt tgaattgcat taaagatgat tctaatttgg tttaacttgg tctccccttc 1860
atttggtatg ggtgatataa ttagncn 1887
<210> 6
<211> 1645
<212> DNA
<213> eIF2基因(Artificial Sequence)
<400> 6
agggaataag ctgtctggaa ccagcgctta ccaaacaggg gtcaaggata agccatgaac 60
agcatggctt gtccctggac aacaaatatg gcttatactt atcattaaaa ttcttatctg 120
catacgaaac gccccaggtt gatcactgct aaagagagtg ctgaccatct taagacatac 180
aaaatgtctc ggaagggatt aatggagcag gatttgggga agctggatgt gaaaacatta 240
catcctcttt cacctgaagt tatttctcgt caggctacaa taaatattgg cactatcggt 300
catgtggcac atggcaagtc aactgttgta aaagcgatat ctggtgttca gactgttcgt 360
tttaaaaatg agcttgagcg gaacattact attaagctcg gttatgcaaa tgcgaagatc 420
tacaaatgcg aagatgaccg gtgccctcga cctgcgtgct acaagacata tggaagtgga 480
aaggaagaca atcctccatg tgatgtgcca gggtttgaaa actgcaggat gaaattgttg 540
agacatgtat cttttgtaga ttgcccgggt cacgatattc tcatggctac gatgcttaat 600
ggagctgcta ttatggatgg agcattactt ctaatagctg caaacgaaac ctttccccaa 660
ccacagacat ctgaacatct tgctgctgtt gatttaatgg gtctcaaaca cattataatc 720
cttcaaaata aagttgatct cattcaagaa agtgtagcca tgaaccaaca ggcattagtt 780
cagaaattta tcaagggaac cggtgcagat ggtgcacaga taattccaat atctgcacaa 840
ctcaagtata acattgacgt ggtggccgag tacattgtga agaaggtccc agttcctgtt 900
agagacttcg tatcaccgcc acgtatgatt gttatccgtt cttttgacgt caacaagcct 960
gggtttgagg ttgatgagat aagaggtggt gttgctggtg gaagcatctt aatgggcgtt 1020
ttaaagttga accaaatgat tgaaattcgt cctggaattg tggtcaaaga cgagagaggg 1080
aacatcaggt gcactcccat ttattctaga attgtttcgt tatttgcaga acaaaacgag 1140
cttcagtttg ctgttcctgg aggtttgatc ggagttggaa caaccatgga ccctacttta 1200
actcgtgcag ataggttggt tggtcaggtt cttggcgagg ttgggtcttt accggaagta 1260
tatgttgaat tggaggtgaa ctttgtattg ctgagaaggc tactgggagt gagggccaag 1320
gatatggaga ggcaagggaa ggtggctaag ttggctaagg gagagatatt gatgttgaat 1380
atagggtcta tgtcgacagg tgcacggctg gtggctgtaa agaatgattt ggcaaaattg 1440
cagctcacat ctccggtttg cactacaaga ggggagaaga ttgcgcttag tcggagggtt 1500
gagaagcatt ggcggcttat aggttggggc aaaattcaag ctgggactac cgtcaacgta 1560
ccaccctccc ctgtttgaca ccattcaaac gtgactgctt tgggataaat gcatagggta 1620
ttttttattt ataaaatatt tgcta 1645
<210> 7
<211> 1721
<212> DNA
<213> α-TUB基因(Artificial Sequence)
<400> 7
cttcataaac gccacaccct ctctctcttt ctcatttctt ttcatctcca tcaattttct 60
cgaaaatgag agagtgcatt tcggtccaca ttggtcaggc tggtatccag gtcggaaatg 120
catgctggga actttactgt ctcgagcatg gcattcagcc cgatggccag atgccaagtg 180
acaaaactgt tggtggaggc gatgatgctt tcaacacctt cttcagtgaa actggtgctg 240
ggaagcatgt tccacgagcc atttttgtag atctcgagcc cactgtcatt gatgaagtca 300
ggactggaac ataccgccaa ctctttcacc cagaacagct catcagcgga aaggaagatg 360
cagcaaacaa ctttgctcga ggccactata ccattgggaa agaaattgtc gatctatgtc 420
tggaccgtat tcgtaagctt gctgacaact gcactggtct ccaaggcttt ctagtgttta 480
atgctgtagg tggtggcact ggatctggcc ttggctctct tttgcttgag cgtttatctg 540
ttgactatgg caaaaaatca aagcttggtt tcactgttta cccttcccca caagtctcca 600
cctcagttgt tgagccatac aacagtgtcc tctctaccca ctctcttctt gaacacactg 660
atgttgctgt tcttctcgac aatgaggcca tctatgatat ttgcaggcgt tctcttgaca 720
ttgaacgccc aacctacacg aacctcaacc gcttggtttc tcaggtaata tcttcgctca 780
ctgcttctct aaggtttgat ggtgccttga atgtggatgt cacagagttt cagaccaact 840
tggttccata cccaagaatc cacttcatgc tttcatctta cgctcctgtt atctcagctg 900
agaaggctta tcatgaacaa ctctcagtag cagaaatcac taacagtgcg tttgagcctt 960
catccatgat ggccaagtgc gaccctcgtc atggtaagta catggcttgc tgcttgatgt 1020
acaggggtga tgtggtgcct aaagatgtta atgcggctgt tgccactatc aaaaccaagc 1080
gaactattca gtttgttgat tggtgtccaa ctgggtttaa gtgtggtatt aactaccagc 1140
ctcctactgt tgttccgggt ggtgatcttg ccaaggttca gagagctgtg tgcatgatat 1200
cgaattcgac cagtgttgct gaggtgtttt ccaggattga tcataagttt gatctgatgt 1260
actcaaagag agcttttgtg cattggtatg ttggcgaggg gatggaggaa ggtgagtttt 1320
cagaagcacg tgaggatctt gctgccttgg agaaggatta tgaggaggtg ggtgctgagt 1380
ctgctgaagg tgacgagggc gatgaaggag atgagtactg agagttggat ctaatgtgaa 1440
tccctgtttg tgttgtttgc ttgtgctgag tcttttgtta tgttcttgtg tgaaacttca 1500
gtgatatgat tgtggctttt cttcttgttt ttttgatgtg gaacactttg tgctcttttg 1560
ttatgttgtg tgaaacttca gtgatatgat tgtggctttc gtgttttaca tgtgttattt 1620
ttttttcctt ctcagatttt ttgctgccct tttgtttcgc atgttaaatg aagtgggcta 1680
caaattgaag tgggttaaga tggatatgtt tgttagactt g 1721
<210> 8
<211> 1670
<212> DNA
<213> β-TUB基因(Artificial Sequence)
<400> 8
ctctcatcac tcccctacat atacatacac acatacaact cttcctcctc gttcatttca 60
ccaccaccat cgtcatcaac ctccaaaccc tataattcct tcttctcttt agtcatgaga 120
gaaatcttgc acattcaagg tggtcaatgc ggcaaccaaa tcggatctaa gttttgggaa 180
gtgatttgtg acgaacatgg cgttgatccc accgggaggt acaaaggcga tggcggaatt 240
tcggatcttc aattggagag gatcaatgtg tattacaacg aggcttctgg tggaaggtat 300
gtcccgagag cggttctcat ggatcttgaa ccagggacca tggatagtat cagatccgga 360
ccttatggtc agatctttcg gccggataac tttgtgttcg ggcagtctgg tgccggaaat 420
aattgggcga aaggccatta tactgaagga gctgagttga ttgatgctgt tcttgatgtt 480
gttcgcaaag aggctgagaa ttgtgactgt ttgcaaggtt tccaagtatg tcattcgctt 540
ggaggaggta caggttctgg catgggaacc cttttgatat caaagatcag agaggagtac 600
ccagatagaa tgatgctcac attctctgtt ttcccttcac ctaaggtctc cgacacggtc 660
gttgaaccct acaatgctac cctctctgtg caccagttgg tagagaatgc cgatgaatgc 720
atggttcttg acaatgaagc cctgtatgac atttgcttca ggaccttaaa acttagtact 780
ccaagctttg gtgatctgaa ccatttaatt tctgctacta tgagtggagt aacatgttgt 840
ctgaggttcc ctggtcaact aaactctgac ctccgaaagc tagcggtcaa ccttatccca 900
ttcccacgtc tccatttctt catggttggg ttcgcacctc tcacctcccg tggttctcag 960
cagtacattt ccctcaccgt cccggagctc actcaacaaa tgtgggatgc caagaacatg 1020
atgtgtgcag ctgatccccg tcatggccgc tacttgaccg tctccgccat gttccgagga 1080
aagatgagca caaaggaagt tgacgagcag atgatcaacg tacaaaacaa aaactcatcc 1140
tactttgtcg agtggattcc aaacaatgtt aagtcgagtg tgtgtgatat cccaccccag 1200
ggtcttaaga tggcatctac ttttgttggg aactcgactt ctattcagga gatgttcagg 1260
cgagtgagtg aacagttcac tgctatgttc cgaaggaagg ctttcttgca ttggtatact 1320
ggagaaggca tggacgagat ggagttcacc gaggcggaga gtaatatgaa tgatttggtg 1380
tcggagtatc agcagtacca ggatgccacg gctgaggacg agggtgagta cgaggatgaa 1440
ggtgttgaag aggtttacga ggggtgaaaa gtgcaaaagg aaaaaaagac atactgcctc 1500
ggaccagaaa ataaggtttg atcgatgaga ctagctctct gttctgtttt tatgatgtaa 1560
ctagtgttat ttggatgtcc agcgcttttt ctttttactt ggtatcttct gtttcttgag 1620
attgttatgt ttggttgttg aattcatgaa attgatgaag taattgttaa 1670
<210> 9
<211> 834
<212> DNA
<213> RNA Pol II基因(Artificial Sequence)
<400> 9
tctctctcgt cgagcttgtt gctgctggca acttttctcc ttgaagcaag agtttacttc 60
gaaatataag caaatccctt cctttcaatt gcagaggtct tcaaagccta gtcgcgaaga 120
tgttcttcca tataattttg gaacgaaaca tgcaactcca ccctcgccac ttcggtcgtc 180
aactccgtga aaatctagtt tcgaaactca tgaaggatgt cgaaggcact tgcagcggtc 240
gacatggctt tgtagtggca ataaccggta ttgaaaacat tgggaagggt ttgattcgag 300
acggaacggg gtttgtgaca tttcctgtaa agtatcagtg tgttgtgttc agaccattta 360
aaggagagat cttggaagct gttgttacca tggttaacaa gatgggtttc tttgccgaag 420
ctgggccagt tcaaattttt gtttcaaacc atttgatacc tgatgatatg gagtttcaat 480
ctggagatgc accaaactat acaacttcag atggatcggt taagattcaa aaagacagtg 540
aagtgaggct aaagataatt gggactcgag tcgatgctac agaaattttt tgtatcggca 600
caataaaaga tgatttcttg ggtgttatca atgatcctgg aacggcttag tggcgttttt 660
ggaagttgaa gttgcttgtt tgcgttaaaa tatttgtatt ctaaatttgg tttttttttg 720
tcttcttaat tacattaagt tatattgtat ctctaatttc tctttaacta gggtaactca 780
tgtactgaaa ctcatttgta ccaagaattt gctgcccaca agcaagggta aacc 834
<210> 10
<211> 1478
<212> DNA
<213> RP II基因(Artificial Sequence)
<400> 10
tttgggcaac aaggaagaaa ttgctgaatg gagacactag tggaacttca aaacaacggg 60
ttggggtcaa aagtgccatg atatcagctc tcaaaccagg ggttgatggt cggacgaaca 120
taatgacatt caacttgaca ccagagatca ttcatcagat ttttgctgag aaaccagccg 180
ttcgtcaggc attcttaaat tttgttccca acaagatgac agaaaaagac ttctggacca 240
aatattttag agcagaacag ctccatagta tgaaaaacac tatagcggct gcagcagagg 300
ctgccgatga cgaggagctt gccgttttct tgaagcgtga tgagcttctg gccggggaag 360
ctaagcggaa gattagacgg gttgatccaa ctttagacat tgaagctgat caaggggacg 420
attacatgca tcttccggat catggaattt ttcgtgatgg taccaaggaa attgctgaca 480
ccgagtacga ccagtataga aggacccttg cgcaggatat taatcggcac gcagcagtgg 540
ttcttgaagg aagagatact gacgtggaga tgggcgacac aaagtctgtg gcagaggccc 600
ttgccaggtc aaaacaggtt agcttagcta acgaagcatc caatgagaat gcaaatctgg 660
acggagatag ggtttgccgg atgactgaaa tcgaggatct tcaggcacct cgcaacctcc 720
cttttgcacc acttagcatc aaggatcctc gtgactattt tgactcgcaa caagcaaatg 780
cgataagaac tttgggagac acactgggcg gaacaaaaca agtaaaatgc aacttgagca 840
cccaagcttc atataattct ttgagagagt caattttaga gattaaagct caaggattga 900
gtcatcctgc agttaaatct gatgttgctc tcaaggtgtt taatggattg acccaaaaca 960
tctcaagtgc taagtatcac ctcggaaaga attcacacga gagtgttttg gatagattga 1020
caaacttaac tcgagatgaa cttctgcatc actggacgtc gattcaggaa ttattgaaac 1080
atttttggtc atcttatcca atcacaactt catatcttta taataaggtt gggaaactga 1140
aggaagccat gtcacagatt tatccgaagt tacaggagat aaaagaatcg gtaccatcag 1200
attcccgaca tcaagtatcc ctccttgttc agccaatgct tcaggctttg gatgcagcat 1260
ttgcacatta tgaagcagag ctacaaaaaa gagcgtctta agtagtggag ggacaaggaa 1320
tgattttgtt taatagaatt agtttaatga ttgtatattt aatcaatttt gttgtgattt 1380
ctttgtcaga tttgtcatta ggaatgtatt ttatctataa tcatacacaa tttactatca 1440
cccctcacag atataaattg tacgacatcc acatctct 1478
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> TBP基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 11
gtaatgctga atacaatccc 20
<210> 12
<211> 18
<212> DNA
<213> TBP基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 12
atacttccgt gctgctaa 18
<210> 13
<211> 18
<212> DNA
<213> act1基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 13
cttcttgcta cgacatcc 18
<210> 14
<211> 18
<212> DNA
<213> act1基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 14
agctaaggta ttgccact 18
<210> 15
<211> 18
<212> DNA
<213> act2基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 15
gcagaggggt atgttatt 18
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> act2基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 16
cttcactttg cgagctac 18
<210> 17
<211> 18
<212> DNA
<213> GAPDH基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 17
atgaccactg tccactcc 18
<210> 18
<211> 18
<212> DNA
<213> GAPDH基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 18
ttccagtcaa cttcccat 18
<210> 19
<211> 19
<212> DNA
<213> eIF1基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 19
acgattacga agacagacc 19
<210> 20
<211> 19
<212> DNA
<213> eIF1基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 20
caaaggactt gacagagtc 19
<210> 21
<211> 18
<212> DNA
<213> eIF2基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 21
ggaagtggaa aggaagac 18
<210> 22
<211> 18
<212> DNA
<213> eIF2基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 22
atccataata gcagctcc 18
<210> 23
<211> 19
<212> DNA
<213> α-TUB基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 23
ctgggaactt tactgtctc 19
<210> 24
<211> 19
<212> DNA
<213> α-TUB基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 24
tcctgacttc atcaatgac 19
<210> 25
<211> 19
<212> DNA
<213> β-TUB基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 25
gtattacaac gaggcttct 19
<210> 26
<211> 18
<212> DNA
<213> β-TUB基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 26
cagcatcaat caactcag 18
<210> 27
<211> 18
<212> DNA
<213> RNA Pol II基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 27
ggtttgtgac atttcctg 18
<210> 28
<211> 18
<212> DNA
<213> RNA Pol II基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 28
atagtttggt gcatctcc 18
<210> 29
<211> 18
<212> DNA
<213> RP II基因的上游引物(Artificial Sequence)
<400> 29
acggagatag ggtttgcc 18
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> RP II基因的下游引物(Artificial Sequence)
<400> 30
cccaaagttc ttatcgcatt 20

Claims (6)

1.一种干旱胁迫下凤丹内参基因，其特征在于：所述干旱胁迫下凤丹内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因、肌动蛋白ACT1基因、肌动蛋白ACT2基因、甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因、真核生物翻译起始因子eIF1基因、真核生物翻译起始因子eIF2基因、微管蛋白α-TUB基因、微管蛋白β-TUB基因、RNA聚合酶II RNA Pol II基因或RNA聚合酶II转录因子RP II基因；所述TATA盒结合蛋白TBP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述肌动蛋白ACT1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述肌动蛋白ACT2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述真核生物翻译起始因子eIF1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述真核生物翻译起始因子eIF2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述微管蛋白α-TUB基因的核苷酸序列如SEQID NO.7所示；所述微管蛋白β-TUB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述RNA聚合酶II RNA Pol II基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述RNA聚合酶II转录因子RP II基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
2.根据权利要求1所述的干旱胁迫下凤丹内参基因，其特征在于：所述干旱胁迫下凤丹内参基因优选是TATA盒结合蛋白TBP基因、肌动蛋白ACT1基因、肌动蛋白ACT2基因、甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因、真核生物翻译起始因子eIF1基因、真核生物翻译起始因子eIF2基因、微管蛋白α-TUB基因、微管蛋白β-TUB基因、RNA聚合酶II RNA Pol II基因或RNA聚合酶II转录因子RP II基因；所述TATA盒结合蛋白TBP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述肌动蛋白ACT1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述肌动蛋白ACT2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示；所述真核生物翻译起始因子eIF1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
3.用于扩增如权利要求1所述的干旱胁迫下凤丹内参基因的专用引物，其特征在于：
所述内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因的引物序列是：
F：5’- GTAATGCTGAATACAATCCC-3’；
R：5’- ATACTTCCGTGCTGCTAA-3’；
所述内参基因是肌动蛋白ACT1基因的引物序列是：
F：5’- CTTCTTGCTACGACATCC -3’；
R：5’- AGCTAAGGTATTGCCACT -3’；
所述内参基因是肌动蛋白ACT2基因的引物序列是：
F：5’- GCAGAGGGGTATGTTATT -3’；
R：5’- CTTCACTTTGCGAGCTAC -3’；
所述内参基因是甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因的引物序列是：
F：5’- ATGACCACTGTCCACTCC -3’；
R：5’- TTCCAGTCAACTTCCCAT -3’；
所述内参基因是真核生物翻译起始因子eIF1基因的引物序列是：
F：5’- ACGATTACGAAGACAGACC -3’；
R：5’- CAAAGGACTTGACAGAGTC -3’；
所述内参基因是真核生物翻译起始因子eIF2基因的引物序列是：
F：5’- GGAAGTGGAAAGGAAGAC-3’；
R：5’- ATCCATAATAGCAGCTCC-3’；
所述内参基因是微管蛋白α-TUB基因的引物序列是：
F：5’- CTGGGAACTTTACTGTCTC -3’；
R：5’- TCCTGACTTCATCAATGAC -3’；
所述内参基因是微管蛋白β-TUB基因的引物序列是：
F：5’- GTATTACAACGAGGCTTCT -3’；
R：5’- CAGCATCAATCAACTCAG -3’；
所述内参基因是RNA聚合酶II RNA Pol II基因的引物序列是：
F：5’- GGTTTGTGACATTTCCTG -3’；
R：5’- ATAGTTTGGTGCATCTCC -3’；
所述内参基因是RNA聚合酶II转录因子RP II基因的引物序列是：
F：5’- ACGGAGATAGGGTTTGCC -3’；
R：5’- CCCAAAGTTCTTATCGCATT -3’。
4.根据权利要求3所述的专用引物，其特征在于：
当内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因时，所述引物序列是：
F：5’- GTAATGCTGAATACAATCCC-3’；
R：5’- ATACTTCCGTGCTGCTAA-3’；
当内参基因是肌动蛋白ACT1基因时，所述引物序列是：
F：5’- CTTCTTGCTACGACATCC -3’；
R：5’- AGCTAAGGTATTGCCACT -3’；
当内参基因是肌动蛋白ACT2基因时，所述引物序列是：
F：5’- GCAGAGGGGTATGTTATT -3’；
R：5’- CTTCACTTTGCGAGCTAC -3’；
当内参基因是甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因时，所述引物序列是：
F：5’- ATGACCACTGTCCACTCC -3’；
R：5’- TTCCAGTCAACTTCCCAT -3’；
当内参基因是真核生物翻译起始因子eIF1基因时，所述引物序列是：
F：5’- ACGATTACGAAGACAGACC -3’；
R：5’- CAAAGGACTTGACAGAGTC -3’。
5.权利要求1或2所述的干旱胁迫下凤丹内参基因在干旱胁迫下以凤丹叶片作为样本进行实时荧光定量PCR中的应用。
6.权利要求3或4所述的专用引物在干旱胁迫下以凤丹叶片作为样本进行实时荧光定量PCR中的应用。
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