TH4142A

TH4142A - สารคล้ายคลึงอินซูลินและกรรมวิธีสำหรับการเตรียมสารดังกล่าว

Info

Publication number: TH4142A
Application number: TH8601000449A
Authority: TH
Inventors: เจอร์เกน ไวล์การ์ดแบรนจ์ นายเจนส์; นอร์ริส นายคเจลด์; เทรียร์ แฮนเซน นายมอเกนส์
Original assignee: นายดำเนิน การเด่น; นายวิรัช ศรีเอนกราธา
Filing date: 1986-08-29
Publication date: 1987-05-01

Abstract

สารคล้ายคลึงอินซูลินของคนชนิดใหมีซึ่งออกฤทธิ์เร็วมีคุณสมบัติในการรวมตัวกันเองเป็น ไดเมอร์, เททราเมอร์, เฮกซาเมอร์ รหือ โพลีเมอร์ต่ำ การเตรียมสารคล้ายคลึงอินซูลินของคนชนิดใหมี่ทำได้โดยการแทนที่กรดอะมิโนของอินซูลินของคนด้วยกรดอะมิโนที่เกิดเองในธรรมชาติ กรดอะมิดนที่นำมาแทนที่นี้นิยมให้มีคุณสมบัติเป็นไฮโดรฟิลลิกมากกว่ากรดอะมิโนของอิซูลินที่อยู่ในตำแหน่งของโมเลกุล นอกจากนั้นพบว่าสารคล้ายคลึงอินซูลินนี้มีประจุเหมือน หรือเป็นลบมากกว่าอินซูลินของคนที่ pH เป็นกลาง กรดอะมิโนที่นิยมใช้แทนที่คือ Asp, Glu, Ser, Thr, His และ Ile โดยเฉพาะที่นิยมมาก คือ Asp และ Glu สารคล้ายคลึงอินซูลินชนิดใหม่นี้ นิยาใช้เตรียมเป็นสารละลายอินซูลินที่ออกฤทธิ์เร็ว สิทธิบัตรยา

Claims

1.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลิน ของคนที่มีสูตรI สาย A (สูตรเคมี) สาย B โดยที่ X คือกรดอิมิโนของ อินซูลิน ของคน หรือคืออนุมูลของกรดอะมิโนที่เหมือนกันหรือต่างกันที่แทนที่ หน้าที่ทั้งหมดก็คือทำให้โมเลกุลทำให้โมเลกุลมีประจุเหมือนกันหรือเป็นลบมากกว่าอินซูลินของคนที่ pH เป็นกลาง และกำหนดให้อย่าง น้อยมี X 1 ตัว แตกต่างจากกรดอะมิโนของคนที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันในโมเลกุลอินซูลิน ซึ่งก็คือ เมื่อ X ในตำแหน่ง A(8) คือ His หรือ Phe, X ใน ตำแหน่ง A (21) คือ Asp, X ใน ตำแหน่ง B(5) คือ Ala, X ในตำแหน่ง B(9) คือ Leu, X ในตำแหน่ง B(10) , คือ Asn หรือ Leu, X ในตำแหน่ง B(12) คือAsn หรือ X ในตำแหน่ง B(26) คือ Ala ดังนั้นอย่างน้อยจะ ต้องมี X 1 ตัวที่แตกต่างจากกรดอะมิโนของอินซูลินของคนที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันโดยมีเงื่อนไขว่าอาจมีการเอาส่วนกรดอะมิโนมากถึง 4 ตัว ออกจาปลายด้าน Nและ/หรือ เอาส่วนกรดอะมิโนมากถึง 5 ตัว ออกจากปลายด้าน C ของ สาย-B โดยที่ทำการเพราะเลี้ยงยีสต์สายพันธุ์ที่มีพาหะแสดงลักษณะที่ถอดแบบได้ซึ่งประกอบด้วยลำดับดีเอนเอที่ประมวลรหัสสารตั้งต้นของสารคล้ายคลึงอินซูลินในอาหารเพาะเลี้ยงที่เหมาะสม และนำสารตั้งต้นออกจากเซลล์เพาะเลี้ยงแล้วเปลี่ยนมันให้เป็นสารคล้ายคลึงอินซูลินชนิดใหม่ โดยการเปลี่ยนแปลงโดยเอนไซม์ และสารเคมีแบบอินวิโทร 2.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลิน ของคนที่มีสูตร I โดยใช้สารตั้งต้นซึ่งสังเคราะห์ทางชีวภาพ มีสูตร II สาย A (สูตรเคมี) สาย B โดยที่ Qn คือสายเพบไทด์ และ n คือกรดอะมิโนที่เกิดตามธรรมชาติ R คือ Lys หรือ Arg, n คือ จำนวนเต็มจาก 0 ถึง 33m คือ Q หรือ 1 และ X คือ ที่ได้นิยามไว้ข้างต้นและกำหนดให้สายเพบไทด์ -Qn-R- ไม่มีกรดอะมิโน ที่อยู่ติดกัน 2 ตัวมีคุณสมบัตเป็นเบส นำสารตั้งต้น สูตร II นี้มาทำปฏิกิริยากับ L-รีโอนีน เอสเทอร์ เมื่อมี ทริพซิน หรืออนุพันธ์ของทริพซิน แล้วเปลี่ยน ธรีโอนีนเอสเทอร์ของสารคล้ายคลึงอินซูลินของคนไปเป็น สารคล้ายคลึอินซิลินของคนตามวิธีที่ทราบกันดีแล้ว 3.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลิน ของคนที่มีสูตร I โดยที่สารตั้งต้นที่สังเคราะห์ทางชีวภาพ มีสูตร III สาย A (สูตรเคมี) สาย B โดยที่ V และ T ต่างก็คือ Lys หรือ Asg และ X คือที่ให้นิยามไว้ข้างต้นนำสารตั้งต้นสูตร III มาทำปฏิกิริยากับเทรพิซินและคาร์บอกซีเพบทิเดส B ในสารละลายน้ำ แล้วแยกเก็บสารคล้ายคลึงอินซูลินของคนจากสารละลายของปฏิกิริยา 4.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลิน ของคนที่มีสูตร I โดยที่สารคล้ายคลึงอินซูลินประกอบด้วยกรดอะมิดนแทนที่ทีทเหมาะสมซึ่งสังเคราะห์ขึ้นทางเคมีตามวิธีที่เป็นที่รู้จักกัน หรือ สาย A- และ B- ที่มีกรดอะมิโนแทนที่ที่เหมาะสมนั้นสร้างขึ้นทางเคมีตามวิธีที่เป็นที่รู้จักกัน และ A-และ B- ที่แปรเปลี่ยนนั้นจะเชื่อมต่อกันด้วยสะพานไดซัลไฟด์ระหว่าง A(7)Cys และระหว่าง A(20)Cys และ B(19)Cys และสะพานในสาย A ระหว่าง A(6)Cys และ A(11)Cys 5.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลิน ของคนที่มีสูตร I โดยที่กรดอะมิโนที่แทนที่คุณสมบัติเป็นไฮโดรฟิลิกมากกว่ากรดอะมิโนในโมเลกุลของอินซูลินของคนที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกัน 6.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลินของคนดังกล่าวในข้อถือสิทธิ 1 โดยที่ X ไม่มากกว่า 7 ตัว แตกต่างจากกรดอะมิโนที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันของอินซูลินของคน 7.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลินของคนดังกล่าวในข้อถือสิทธิ 1 โดยเลือกกรดอะมิโนที่แทนที่มาจากกลุ่มที่ประกอบด้วย Asp, Glu, Ser, Thr, His และ Ile 8.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลินของคนดังกล่าวในข้อถือสิทธิ 1 โดยที่กรดอะมิโนที่แทนที่คือ Asp และ/หรือGlu 9.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินลินของคนดังกล่าวในข้อถือสิทธิ 1 โดยที่อย่างน้อย มี X หนึ่งตัวในตำแหน่งB(9), B(10), B(12), B(26), B(27) หรือ B(28) แต่งต่างจากกรดอะมิโนที่ตำแหน่งเดียวกันในโมเลกุลของอินซูลินของคน 1 0.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลินของคนดังกล่าวในข้อถือสิทธิ 1 โดยที่อย่างน้อย มี X หนึ่งตัวในตำแหน่งB(9), B(12), B(27), หรือ B(28) แตกต่างจากกรดกรดอะมิโนที่ตำแหน่งเดียวกันในโมเลกุลของอินซูลินของคน 1

1.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลินของคนดังกล่าวในข้อถือสิทธิ 1 โดยที่อย่างน้อย มี X หนึ่งตัวในตำแหน่งB(27), คือ Glu, X ในตำแหน่ง B(12) คือ Ile หรือ Tye, X ในตำแหน่ง A21 คือ Asp และในตำแหน่ง B27 คือ Glu X ในตำแหน่งB9 คือ Asp X ในตำแหน่ง A21 และตำแหน่ง B9 คือ Asp และในตำแหน่ง B27 คือ Glu x ในตำแหน่ง A8 คือ His ในตำแหน่ง B9คือ Asp และในตำแหน่ง B27 คือ Glu X ในตำแหน่ง B10 คือ Aspหรือ X ในตำแหน่ง B9 คือ Asp และในตำแหน่ง B27 คือ Gluหรือ X ในตำแหน่ง B28 คือ Asp 1

2.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลินของคนดังกล่าวในข้อถือสิทธิ 1 แต่มีลักษณะที่ขาดกรดอะมิโนที่ปลาย N ของสายB ได้ถึง 4 ตัว และ/หรือ ขาดกรดอะมิโนได้ถึง 5 ตัว ที่ปลายC ของสาย B 1

3.กรรมวิธีการเตรียมสารคล้ายคลึง อินซูลินของคนดังกล่าวในข้อถือสิทธิ 12 โดยมีลักษณะที่ขาดกรดอะมิโน B(1) และ/หรือ B(30)