TH17404U - กรรมวิธีการผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อสารดีออกซีโนจิริมัยซิน - Google Patents
กรรมวิธีการผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อสารดีออกซีโนจิริมัยซินInfo
- Publication number
- TH17404U TH17404U TH1603001672U TH1603001672U TH17404U TH 17404 U TH17404 U TH 17404U TH 1603001672 U TH1603001672 U TH 1603001672U TH 1603001672 U TH1603001672 U TH 1603001672U TH 17404 U TH17404 U TH 17404U
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- deoxynojirimycin
- bsa
- hsa
- ova
- conjugates
- Prior art date
Links
Abstract
กรรมวิธีการผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อสารดีออกซีโนจิริมัยซิน เป็นการสร้างโพลี โคลนอลแอนติบอดี (Polyclonal antibodies; PAbs) ที่จำเพาะต่อสารดีเอ็นจี โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อจะนำโพ ลีโคลนอลแอนติบอดีดังกล่าวไปใช้สำหรับการวิธีวิเคาะห์สารดีเอ็นเจที่ผลิตขึ้นในหม่อน ด้วยวิธีการ วิเคราะห์ทางอิมมูโนวิทยา (Immunoassay) อาทิ วิธีอีไลซ่า ซึ่งจะช่วยให้สามารถวิเคราะห์สารดีเอ็นเจซึ่งเป็น สารสำคัญที่มีอยู่ในหม่อนได้อย่างรวดเร็ว ซึ่งโพลีโคลนอลแอนติบอดีที่ใช้ตรวจสอบสารสำคัญในสมุนไพร นี้เป็นวิธีที่มีความไว แม่นยำสูง และช่วยลดเวลาการเตรียมตัวอย่างในการวิเคราะห์ เนื่องจากโพลีโคลนอล แอนติบอดีที่ใช้ในการวิเคราะห์ถูกสร้างขึ้นให้มีความจำเพาะกับสารที่ต้องการวิเคราะห์ จึงสามารถใช้ในการ วิเคราะห์ได้ทั้งในเชิงคุณภาพวิเคราะห์และปริมาณวิเคราะห์ ได้อย่างรวดเร็วและแม่นยำ
Claims (2)
1. กรรมวิธีการผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อสารดีออกซีโนจิริมัยซิน มีขั้นตอนดังนี้ ก) การสังเคราะห์คคอนจูเกตของดีออกซีโนจิริมัยซิน กับบีเอสเอและคอนจูเกตของดีออกซีโนจิริมัยซินกับ เอซเอสเอ/โอวีเอ (DNJ-BSA conjugates/DNJ-HSA/OVA conjugates ) เตรียมสาร cationic ของ BSA/HSA (cBSA/cHSA) ด้วยวิธี Cationization จากการเชื่อมกันระหว่าง 1-ethyl-3- [3-methylaminopropyl]- carbodiimide-hydrochloride (EDC) และ BSA/HSA ด้วยสาร ethylenediamin (EDA) จากนั้นทำการเชื่อมต่อ สารโปรตีนกับดีออกซีโนจิริมัยซิน โดยนำ สารละลายดีออกซีโนจิริมัยซิน 5 มิลลิกรัม ในเมธานอล 250 ไมโครลิตร ค่อยๆ หยดสาร ในสารละลาย cBSA หรือ cHSA10 มิลลิกรัม ละลายใน 1 มิลลิกรัม ของ 0.1 โมลาร์ MES buffer pH 4.5 จนหมด แล้วเติมสารฟอร์มารอลดีไฮน์ จำนวน 200 ไมโครลิตร แล้วปั่นผสมที่ อุณภูมิ 37 องศาเซลเซียส 24 ชั่วโมง สารที่ได้ใส่ในถุงเซลลูโลสและนำไปทำการ dialysis ด้วยน้ำกลั่น บริสุทธิ์ครั้งละ 1 ลิตร และทำการเปลี่ยนน้ำใหม่ ทำทั้งหมด 5 รอบและนำสารคอนจูเกตที่ได้ไปทำให้แห้ง ด้วยเครื่อง freeze dryer จากนั้นนำผงของคอนจูเกตที่ได้เก็บไว้ในอุณหภูมิต่ำกว่า -20 องศาเซลเซียส การสังเคราะห์คอนจูเกตของดีออกซีโนจิริมัยซินกับบนเอสเอ (Bovin serum albumin; BSA) เพื่อใช้เตรียม เป็นอิมมูโนเจน (immunogen) กระตุ้นภูมิคุ้มกันดังนี้ ส่วนการสังเคราะห์คอนจูเกตของดีออกซีโนจิริมัยซิน กับเอชเอสเอ (Human serum albumin; HSA) หรือ โอวีเอ (Oval Albumin OVA) ก็ใช้วิธีเดียวกันนี้ เพียงแต่ ใช้เอชเอสเอหรือโอวีเอแทนบีเอสเอ ข) ตรวจสอบการเชื่อมต่อกันโปรตีนด้วยมัลดิ-ทอฟ-เอ็มเอส (MALDI-TOF-MS) การเชื่อมต่อดีออกซีโนจิริมัยซินกับบีเอสเอและการเชื่อมต่อดีออกซีโนจิริมัยซินกับเอชเอสเอหรือโอวีเอ วิเคราะห์โดยมัลดิ-ทอฟ-เอ็มเอส (Matrix-Assisted Laser Desorption/lonization Time-of-Flight Mass Sprctrometry; MALDI-TOF-MS) ค) การกระตุ้นกระต่ายให้สร้างภูมิคุ้มกัน (lmmunization) กระต่าย (New Zealand Whitw Rabbit, เพศเมีย) น้ำหนัก 1,800-2,000 กรัม จำนวน 2 ตัว ถูกกระตุ้นการ สร้างภูมิคุ้มกัน จำนวน 3 ครั้ง ทุกๆ 20 วัน โดยครั้งที่ 1 เตรียมสารฉีดสร้างภูมิคุ้มกันอัตราส่วน 1:1 จากซีเอฟ เอ (Complete Freund's adjuvant; CFA) และดีออกซีโนจิริมัยซินที่เชื่อมต่อกับบีเอสเอ 0.4 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร ฉีดเข้าใต้ผิวหนัง ส่วนครั้งที่ 2 ใช้ไอเอฟเอ (lmcomplete Freund,s adjuvant; JFA) แทนซีเอฟเอ ฉีดเข้า กล้ามเนื้อ จากนั้น 3 วัน ตรวจสอบสารภูมิคุ้มกันที่จำเพาะต่อ ดีออกซีโนจิริมัยซินโดยวิธีเอ็มไซม์ลิงเกตอิมมู โนซอแบนเอสเสย์ (Enzyme linked immunosorbant assay:ELISA) ซึ่งใช้หลักการการจับกับแบบ เฉพาะเจาะจงของแอนติเจนและแอนติบอดี ฉีดกระตุ้นครั้งที่ 3 หรือ 4 ด้วยดีออกซีโนจิริมัยซินที่เชื่อมต่อกัน บีเอสเอ 0.2 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรที่ละลายในฟอสเฟตบัพเฟอร์ซาไลน์ pH 7.0-7.4 ปริมาณ 1 มิลลิตร เข้า หลอดเลือดที่ใบหู จากนั้น 3 วัน ทดสอบความเข้มข้นของแอนติบอดีด้วยวิธี อีไลซ่าหลังจากการฉีดกระตุ้น ในครั้งที่ 3 หรือ 4 ง) การแยกแอนติบอดีให้บริสุทธิ์ นำเลือดกระต่ายที่ได้จากการเจาะเลือดจากหัวใจ จะได้เลือดประมาณ 30-50 มิลลิตรต่อกระต่ายหนึ่งตัว นำ เลือดไปปั่นที่ความเร็วรอบ 2,000-3,000 รอบต่อนาที แยกเฉพาะส่วนบนหรือซีรั่มมาทำให้บริสุทธิ์ ใช้ คอลัมน์โปรตีนจี (column protein G) และแยกสารออกด้วยบัฟเฟอร์ที่มีพีเอชต่ำ ไดอะไลซ์ที่อุณหภูมิในช่วง 4-8 องศาเซลเซียส และทำไลโอฟิลไลซ์ก็จะได้โพลีโคลนอลแอนติบอดีที่บริสุทธิ์
2. การใช้โพลีโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อสารดีออกซีโนจิริมัยซิน ตามข้อถือสิทธิ 1 หรือ 2 ด้วยวิธีการทางอิมมูโนวิทยาในการวิเคราะห์สาร ดีออกซีโนจิริมัยซินที่มีโคงสร้างใกล้เคียงกับดีออกซีโนจิริ มัยซิน ในการพัฒนาเป็นวิธีอีไลซ่าเพื่อวิเคราะห์สารกลุ่มดีออกซีโนจิริมัยซิน
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH17404Y TH17404Y (th) | 2021-02-23 |
| TH17404U true TH17404U (th) | 2021-02-23 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102633864B (zh) | 一种gpc3抗原多肽，抗gpc3的多克隆抗体及其应用 | |
| Stevens et al. | Optimization of a methamphetamine conjugate vaccine for antibody production in mice | |
| CN105585636A (zh) | 一种人NOTCH1 NICD蛋白Ser2162位点磷酸化抗体及其制备方法和应用 | |
| CN104744588A (zh) | 一种用于制备抗体的抗原预处理方法 | |
| Kabanova et al. | Preparation, characterization and immunogenicity of HIV-1 related high-mannose oligosaccharides-CRM197 glycoconjugates | |
| US7335516B2 (en) | Methods to improve immunogenicity of antigens and specificity of antibodies | |
| CN104744580B (zh) | 一种TgVP1胞外区抗原多肽、抗TgVP1的多克隆抗体及其应用 | |
| TH17404Y (th) | กรรมวิธีการผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อสารดีออกซีโนจิริมัยซิน | |
| CN109851665B (zh) | 一种褐飞虱Vg多肽及其多克隆抗体制备方法 | |
| US9880181B2 (en) | Method for preparation of purified autoimmune antigen positive serum | |
| CN103113455B (zh) | 血凝素肽标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱制备及其应用 | |
| CN118185914A (zh) | 一种PGAM1蛋白Ser23位点的磷酸化抗原、抗体及其制备方法和应用 | |
| CN1327158A (zh) | 抗吗啡单抗细胞株的建立和吗啡双面检测试纸的制作方法 | |
| TH13664U (th) | โพลีโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อสารจีปีโนซายด์ | |
| TH13664Y (th) | โพลีโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อสารจีปีโนซายด์ | |
| CN111675670A (zh) | 一种用于直接检测amoz的柠檬酸基树状半抗原caa、树状抗原、重链抗体及制备方法 | |
| CN108164598B (zh) | 岩白菜素的偶联物及其制备方法与应用 | |
| US10308716B2 (en) | Method for producing polyclonal antibodies using an antigenic composition comprising protein-containing membrane vesicles | |
| CN101215322A (zh) | 呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮的人工抗原、抗体及其制备方法 | |
| US20150031056A1 (en) | Development of specific immunoassay critical reagents for pharmacokinetic assessments of peptide polymers in preclinical and clinical matrices | |
| RU2499605C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИКЛОНАЛЬНОЙ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ СЕКРЕТОРНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ЧЕЛОВЕКА - SIgA | |
| JP2025115571A (ja) | 免疫抑制剤を特異的に認識する抗体及びその製造方法 | |
| CN115806609A (zh) | 一种ɑ-芋螺毒素MI-蛋白偶联抗原及其应用 | |
| CN116425861A (zh) | 一种梣酮-血蓝蛋白免疫原及其多克隆抗体与制备方法、应用 | |
| TH13664A3 (th) | โพลีโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อสารจีปีโนซายด์ |