TH13329Y

TH13329Y - กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อย ในประเทศไทย

Info

Publication number: TH13329Y
Application number: TH1503001228U
Authority: TH
Inventors: วิริยะชัยพร นางสาวณัฐปภัสร; จาปรุง นางสาวเดือนเพ็ญ; ศิริเขตต์ นางสาวหทัยณันท์
Original assignee: สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
Filing date: 2015-08-14
Publication date: 2017-12-01

Abstract

บทสรุปการประดิษฐ์ แก้ไขวันที่ 19/1/2559 การประดิษฐ์นี้เป็นการพัฒนากรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อต่อยาเมธิชิลินสาย พันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทยในปฏิกิริยาเดียว การตรวจหาสายพันธุ์ที่พบได้บ่อยในประเทศไทยนับว่ามี ความสำคัญทางคลีนิคเนื่องจากพบว่าส่วนใหญ่เชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสที่ดื้อต่อยาเมธีซิลินที่พบในทางคลินิก นั้นมักจะมีสายพันธุ์เดียวกัน หากสามารถตรวจสายพันธุ์ดังกล่าวได้เร็วก็จะเป็นประโยชน์ต่อการรักษาและการ ป้องกันการแพร่กระจายในทางคลีนิกได้ด้วย กรรมวิธีดังกล่าวนี้สามารถลดขั้นตอนในการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโล คอคลัสออเรียสดื้อยาเมธีชิลีนที่มีอยู่ทั่วไป คือสามารถบอกได้ว่าเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสที่พบนั้นเป็นเชื้อที่ดื้อ ต่อยาเมธิชิลินหรือไม่ และบอกได้ว่าเชื้อดังกล่าวเป็นเชื้อดื้อยาสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทยหรือไม่ โดย สามารถทำได้ในหลอดทดลองเดียวในปฏิกิริยาเดียว ทำให้ลดค่าใช้จ่าย เวลา และขั้นตอนในการตรวจเมื่อเทียบกับ วิธีอื่นๆ ด้งที่ได้กล่าวมาแล้ว การพัฒนาดังกล่าวนี้จะเป็นประโยชน์กับการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสที่ ดื้อต่อยาเมธิชิลิน โดยเฉพาะเชื้อดื้อยาสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทยทางคลีนิกได้ ................................................................................................................................................................................ คำขอใหม่ปรับปรุง การประดิษฐ์นี้เป็นการพัฒนากรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อต่อยาเมธิซิลินสาย พันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทยในปฏิกิริยาเดียว การตรวจหาสายพันธุ์ที่พบได้บ่อยในประเทศไทยนับว่ามี ความสำคัญทางคลีนิคเนื่องจากพบว่าส่วนใหญ่เชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสที่ดื้อต่อยาเมธิซิลินที่พบในทางคลีนิก นั้นมักจะมีสายพันธุ์เดียวกัน หากสามารถตรวจสายพันธ์ดังกล่าวได้เร็วก็จะเป็นประโยชน์ต่อการรักษาและการ ป้องกันการแพร่กระจายในทางคลีนิคได้ด้วย กรรมวิธีดังกล่าวนี้สามารถลดขั้นตอนในการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโล คอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินที่มีอยู่ทั่วไป คือสามารถบอกได้ว่าเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสที่พบนั้นเป็นเชื้อที่ดื้อ ต่อยาเมธิซิลินหรือไม่ และบอกได้ว่าเชื้อดังกล่าวเป็นเชื้อดื้อยาสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทยหรือไม่ โดย สามารถทำได้ในหลอดทดลองเดียวในปฏิกิริยาเดียว ทำให้ลดค่าใช้จ่าย เวลา และขั้นตอนในการตรวจเมื่อเทียบกับ วิธีอื่นๆ ดังที่ได้กล่าวมาแล้ว การพัฒนาดังกล่าวนี้จะเป็นประโยชน์กับการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสที่ ดื้อต่อยาเมธิซิลิน โดยเฉพาะเชื้อดื้อยาสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทยทางคลีนิกได้

Claims

แก้ไข 19/1/59 1. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเทธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ที่ประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ ก) การเตรียมสารพันธุกรรมตั้งต้นจากตัวอย่าง ข) การเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมตั้งต้นด้วยคู่ไพรเมอร์ ค) การนำผลิตภัณฑ์จากการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมไปตรวจสอบขนาดของสารพันธุกรรมด้วย วิธีอิเล็กโตรโฟรีซีส โดยมีลักษณะเฉพาะคือการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมดังกล่าวเป็นปฏิกิริยาแบบหลายเป้าหมายในปฏิกิริยา เดียว และใช้ยีนเป้าหมาย 4 ยีน คือ ยีน femA ยีน SA2003 และยีน SA0317 2. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน femA มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ femA (ฟอร์เวิร์ด) 5’.GCGGTCCAGTGATCGATTATGA.3’ - ไพรเมอร์ femA (รีเวิร์ส) 5’.TAACGAATTTGTAGCACAGGATCA.3’ 3. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน mecA มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ mecA (ฟอร์เวิร์ด) 5’. AATAGTTTAGGCGTTAAAGATATAAAC.3’ - ไพรเมอร์ mecA (รีเวิร์ส) 5’. TTGTTTTAATTTTATATTGAGCATCTAC.3’ 4. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน SA2003 มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ SA2003 (ฟอร์เวิร์ด) 5’. CTGGTGCTTATGGCGTTGTACT.3’ - ไพรเมอร์ SA2003 (รีเวิร์ส) 5’.CATTTCACCTTTATAAATGAGTGGT.3’ 5. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน SA0317 มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ SA0317 (ฟอร์เวิร์ด) 5’. GAAGCAATGAAAGATTGTAAATATGT.3’ - ไพรเมอร์ SA0317 (รีเวิร์ส) 5’. TTTTTATCTTTATTGCTAAAACCAACT.3’ 6. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน femA มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ femA (ฟอร์เวิร์ด) 5’.GCGGTCCAGTGATCGATTATGA.3’ - ไพรเมอร์ femA (รีเวิร์ส) 5’.TAACGAATTTGTAGCACAGGATCA.3’ คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน mecA มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ mecA (ฟอร์เวิร์ด) 5’. AATAGTTTAGGCGTTAAAGATATAAAC.3’ - ไพร์เมอร์ mecA (รีเวิร์ส) 5’. TTGTTTTAATTTTATATTGAGCATCTAC.3’ คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน SA2003 มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ SA2003 (ฟอร์เวิร์ด) 5’. CTGGTGCTTATGGCGTTGTACT.3’ - ไพรเมอร์ SA2003 (รีเวิร์ส) 5’. CATTTCACCTTTATAAATGAGTGGT.3’ คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน SA0317 มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ SA0317 (ฟอร์เวิร์ด) 5’. GAAGCAATGAAAGATTGTAAATATGT.3’ - ไพรเมอร์ SA0317 (รีเวิร์ส) 5’. TTTTTATCTTTATTGCTAAAACCAACT.3’ 7. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 ถึง 6 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สภาวะที่เหมาะสมในการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของแต่ละยีนเป้าหมายใน ปฏิกิริยาเดียว เป็นดังนี้ ก) การให้ความร้อนเพื่อให้ดีเอ็นเอคลายตัว ที่อุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 นาที ข) การแยกดีเอ็มเอที่เป็นสายคู่ให้เป็นสายเดี่ยว 95 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 วินาที ค) การเกาะกันระหว่างไพรเมอร์กับสารพันธุกรรมต้นแบบ 58 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 วินาที ง) การสังเคราะห์สารพันธุกรรมสายใหม่ ที่อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส เป้นเวลา 30 วินาที จ) การทำซ้ำตั้งแต่ขั้นตอน ข)-ง) จำนวน 35 รอบ ฉ) การสังเคราะห์สารพันธุกรรมรอบสุดท้าย ที่อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 วินาที ช) การทำให้เย็น ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ------------------------------------------------------ คำขอใหม่ปรับปรุง

1. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ที่ประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ ก) การเตรียมสารพันธุกรรมตั้งต้นจากตัวอย่าง ข) การเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมตั้งต้นด้วยคู่ไพรเมอร์ ค) การนำผลิตภัณฑ์จากการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมไปตรวจสอบขนาดของสารพันธุกรรมด้วย วิธีอิเล็กโตรโฟรีซีส โดยมีลักษณะเฉพาะคือการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมดังกล่าวเป็นปฏิกิริยาแบบหลายเป้าหมายในปฏิกิริยา เดียว และใช้ยีนเป้าหมาย อย่างน้อย 4 ยีน

2. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ยีนเป้าหมายทั้ง 4 เป้าหมาย ดังกล่าว คือ ยีน femA ยีน mecA ยีน SA2003 และยีน SA0317

3. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือสิทธิ 1 หรือ 2 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน femA มีลำดับเบส ดังนี้ -ไพรเมอร์ femA(ฟอร์เวิร์ด) 5’. GCGGTCCAGTGATCGATTATGA.3’ - ไพรเมอร์ femA(รีเวิร์ส) 5’. TAACGAATTTGTAGCACAGGATCA.3’

4. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 หรือ 2 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน mecA มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ mecA(ฟอร์เวิร์ด) 5’. AATAGTTTAGGCGTTAAAGATATAAAC.3’ - ไพรเมอร์ mecA(รีเวิร์ส) 5’.TTGTTTTAATTTTATATTGAGCATCTAC.3’

5. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 หรือ 2 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน SA2003 มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ SA2003(ฟอร์เวิร์ด) 5’. CTGGTGCTTATGGCGTTGTACT.3’ - ไพรเมอร์ SA2003(รีเวิร์ส) 5’. CATTTCACCTTTATAAATGAGTGGT.3’

6. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 หรือ 2 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน SA0317 มีลำดับเบส ดังนี้ - ไพรเมอร์ SA0317(ฟอร์เวิร์ด) 5’.GAAGCAATGAAAGATTGTAAATATGT.3’ - ไพรเมอร์ SA0317(รีเวิร์ส) 5’.TTTTTATCTTTATTGCTAAAACCAACT.3’

7. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 หรือ 2 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน femA มีลำดับเบส ดังนี้ -ไพรเมอร์ femA (ฟอร์เวิร์ด) 5’.GCGGTCCAGTGATCGATTATGA.3’ -ไพรเมอร์ femA (รีเวิร์ส) 5’TAACGAATTTGTAGCACAGGATCA.3’ คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน mecA มีลำดับเบส ดังนี้ -ไพรเมอร์ mecA (ฟอร์เวิร์ด) 5’.AATAGTTTAGGCGTTAAAGATATAAAC.3’ -ไพรเมอร์ mecA (รีเวิร์ส) 5’TTGTTTTAATTTTATATTGAGCATCTAC.3’ คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน SA2003 มีลำดับเบส ดังนี้ -ไพรเมอร์ SA2003 (ฟอร์เวิร์ด) 5’.CTGGTGCTTATGGCGTTGTACT.3’ -ไพรเมอร์ SA2003 (รีเวิร์ส) 5’CATTTCACCTTTATAAATGAGTGGT.3’ คู่ไพรเมอร์สำหรับเพิ่มปริมาณยีน SA0317 มีลำดับเบส ดังนี้ -ไพรเมอร์ SA0317 (ฟอร์เวิร์ด) 5’.GAAGCAATGAAAGATTGTAAATATGT.3’ -ไพรเมอร์ SA0317 (รีเวิร์ส) 5’TTTTTATCTTTATTGCTAAAACCAACT.3’

8. กรรมวิธีการตรวจหาเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัสออเรียสดื้อยาเมธิซิลินสายพันธุ์ที่พบบ่อยในประเทศไทย ตามข้อถือ สิทธิ 1 ถึง 7 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สภาวะที่เหมาะสมในการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของแต่ละยีนเป้าหมายใน ปฏิกิริยาเดียว เป็นดังนี้ ก) การให้ความร้อนเพื่อให้ดีเอ็นเอคลายตัว ที่อุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 นาที ข) การแยกดีเอ็นเอที่เป็นสายคู่ให้เป็นสายเดี่ยว 95 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 วินาที ค) การเกาะกันระหว่างไพรเมอร์กับสารพันธุกรรมต้นแบบ 58 องศาเซลเซียส เป็น 30 วินาที ง) การสังเคราะห์สารพันธุกรรมสายใหม่ ที่อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 วินาที จ) การทำซ้ำตั้งแต่ขั้นตอนที่ 2-4 จำนวน 35 รอบ ฉ) การสังเคราะห์สารพันธุกรรมรอบสุดท้าย ที่อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 วินาที ช) การทำให้เย็น ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส