JP5595612B1 - 肌分析用プライマーセット及び肌の検査方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】特定の配列からなるプライマーから選択される2種のプライマーセットを含む肌診断用のプライマーセット。そのプライマーセットを用いて,対象物に含まれるDNA断片の増幅反応を行って増幅産物を得る工程と,増幅産物を検出する工程と,を含む肌の診断方法。
【選択図】図1
Description
前記2種のプライマーセットが,
配列番号2及び配列番号3で示される塩基配列を有するプライマーセット,
配列番号4及び配列番号5で示される塩基配列を有するプライマーセット,
配列番号6及び配列番号7で示される塩基配列を有するプライマーセット,
配列番号8及び配列番号9で示される塩基配列を有するプライマーセット,及び
配列番号10及び配列番号11で示される塩基配列を有するプライマーセットから選択されるいずれかのプライマーセットのものである。
2種のプライマーセットが,
配列番号2及び配列番号3で示される塩基配列を有するプライマーセット(配列番号2で示される塩基配列を有するプライマーと,配列番号3で示される塩基配列を有するプライマーのセット,以下同様),
配列番号4及び配列番号5で示される塩基配列を有するプライマーセット,
配列番号6及び配列番号7で示される塩基配列を有するプライマーセット,
配列番号8及び配列番号9で示される塩基配列を有するプライマーセット,及び
配列番号10及び配列番号11で示される塩基配列を有するプライマーセットから選択されるいずれかのプライマーセットのものである。これらプライマーの塩基配列は,以下の表2に示されるとおりである。
二本鎖DNAの一本鎖への熱変性は,例えば,摂氏90度以上摂氏100度以下(又は摂氏94度以上摂氏98度以下)で3秒以上10秒以下(又は4秒以上7秒以下)により行う。
アニーリングは,例えば,摂氏50度以上摂氏70度以下(又は摂氏55度以上摂氏65度以下)で3秒以上10秒以下(又は4秒以上7秒以下)により行う。
DNA伸長反応は,通常,通常アニーリング工程より高温にて行う。DNA伸長反応は,例えば,摂氏60度以上摂氏80度以下(又は摂氏63度以上摂氏73度以下)で5秒以上20秒以下(又は6秒以上12秒以下)により行う。
ヒトの肌の状態が悪化する原因となる菌叢についての知見を得るため,被験者の協力のもと肌に悪影響を及ぼす菌叢及びその菌叢のDNAを調査した。
具体的には,被験者は,その顔の皮膚を綿棒でこすり,その綿棒で寒天培地をこすり,皮膚に存在する常在菌を増幅させた。さらに,各被験者について,肌の状況と肌の変化とを記録した。各サンプルについて,大規模配列解析を行った。配列解析には,イルミナ社のHiSeq2000を用いた。
配列番号2,3の塩基配列を基に,フリーのヌクレオチドをFmoc固相法によって結合し,次いでOPCカラムにより精製することによって,2種類のプライマーを作製した。合成されたプライマーは,使用直前まで−80℃にて保管し,融解後直ちに使用するようにし,凍結融解を3回以上繰り返さないようにした。
Blood&Tissue kit(QIAGEN社製)を用いてサンプルのDNAを精製した。上記精製したサンプルのDNAの濃度を測定し,滅菌水を加えて希釈し,被験DNA液(1ng/μl)に希釈した。それぞれの被験DNA液1μlに滅菌水及びPCR酵素バッファー混合液およびプライマーを,QIAGEN
Fast Cycling PCR
Kit(QIAGEN社製)のプロトコルに従って加え,総液量を20μlに調整してPCR反応を行った。
配列番号2及び配列番号3で示される塩基配列を有するプライマーセットに代えて,配列番号4及び配列番号5で示される塩基配列を有するプライマーセットを用いた以外は実施例1と同様にしてPCRに基づく肌の状況解析を行った。その結果,肌の状態が良く後悪化するまでの時間が短いサンプルのみで,110bpのバンドが確認できた。
配列番号2及び配列番号3で示される塩基配列を有するプライマーセットに代えて,配列番号6及び配列番号7で示される塩基配列を有するプライマーセットを用いた以外は実施例1と同様にしてPCRに基づく肌の状況解析を行った。その結果,肌の状態が良く後悪化するまでの時間が短いサンプルのみで,109bpのバンドが確認できた。
配列番号2及び配列番号3で示される塩基配列を有するプライマーセットに代えて,配列番号8及び配列番号9で示される塩基配列を有するプライマーセットを用いた以外は実施例1と同様にしてPCRに基づく肌の状況解析を行った。その結果,肌の状態が良く後悪化するまでの時間が短いサンプルのみで,109bpのバンドが確認できた。
配列番号2及び配列番号3で示される塩基配列を有するプライマーセットに代えて,配列番号10及び配列番号11で示される塩基配列を有するプライマーセットを用いた以外は実施例1と同様にしてPCRに基づく肌の状況解析を行った。その結果,肌の状態が良く後悪化するまでの時間が短いサンプルのみで,109bpのバンドが確認できた。
配列番号2:プライマー
配列番号3:プライマー
配列番号4:プライマー
配列番号5:プライマー
配列番号6:プライマー
配列番号7:プライマー
配列番号8:プライマー
配列番号9:プライマー
配列番号10:プライマー
配列番号11:プライマー
Claims (2)
- 配列番号2〜11のプライマーから選択される2種のプライマーセットを含む肌診断用のプライマーセットであって,
前記2種のプライマーセットは,
配列番号2及び配列番号3で示される塩基配列を有するプライマーセット,
配列番号4及び配列番号5で示される塩基配列を有するプライマーセット,
配列番号6及び配列番号7で示される塩基配列を有するプライマーセット,
配列番号8及び配列番号9で示される塩基配列を有するプライマーセット,及び
配列番号10及び配列番号11で示される塩基配列を有するプライマーセットから選択されるいずれかのプライマーセットである
肌診断用のプライマーセット。 - 請求項1に記載の肌診断用のプライマーセットを用いて,対象物に含まれるDNA断片の増幅反応を行って増幅産物を得る工程と,
前記増幅産物を検出する工程と,
を含む,
肌の検査方法。
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JP2014045776A JP5595612B1 (ja) | 2014-03-08 | 2014-03-08 | 肌分析用プライマーセット及び肌の検査方法 |
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KR20230083091A (ko) | 2021-12-02 | 2023-06-09 | 소프트지노믹스(주) | 여드름 진단을 위한 정보제공방법, 여드름 진단용 조성물 및 이를 포함하는 키트 |
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