RU2705813C1 - Способ идентификации штаммов yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов - Google Patents
Способ идентификации штаммов yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2705813C1 RU2705813C1 RU2018139857A RU2018139857A RU2705813C1 RU 2705813 C1 RU2705813 C1 RU 2705813C1 RU 2018139857 A RU2018139857 A RU 2018139857A RU 2018139857 A RU2018139857 A RU 2018139857A RU 2705813 C1 RU2705813 C1 RU 2705813C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- primers
- med3
- med1
- strains
- signals
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и предназначено для идентификации штаммов Yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом ПЦР в режиме реального времени. Проводят ПЦР с праймерами и зондами на ДНК мишени Med24, 2.Med1, 2.Med3 и pCKF. По наличию сигналов с указанными праймерами по мишеням Med24 и pCKF идентифицируют 2.MED0. По наличию сигналов с праймерами по мишени 2.Med3 и отсутствию сигналов по мишеням Med24, 2.Med1 и pCKF идентифицируют 2.MED1. По наличию сигналов с праймерами по мишеням 2.Med1 и 2.Med3 и отсутствию сигналов по мишеням Med24 и pCKF идентифицируют 2.MED2. По наличию сигналов с праймерами по мишени 2.Med1 и отсутствию сигналов по мишеням Med24, 2.Med3 и pCKF идентифицируют 2.MED3. Изобретение обеспечивает быструю и надежную идентификацию штаммов Y. pestis средневекового биовара с их разделением по филогенетической принадлежности. 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности, к молекулярному типированию и подвидовой дифференциации штаммов Yersinia pestis и может быть использовано в научно-исследовательских медицинских учреждениях и службах Роспотребнадзора.
Бактерия Y. pestis является возбудителем особо опасной инфекции - чумы, способной приводить к возникновению чрезвычайных ситуаций в области общественного здравоохранения. Вид Y. pestis включает в себя основной подвид, отличающийся высокой вирулентностью и эпидемиологической значимостью и ряд неосновных подвидов, которые эпидемически малозначимы. На территории природных очагов чумы Российской Федерации и сопредельных государств широко распространены штаммы возбудителя чумы основного подвида. В большинстве этих очагов чумы циркулируют штаммы основного подвида средневекового биовара. Штаммы средневекового биовара высоко вирулентны и не-однократно служили причиной вспышек и случаев заболевания чумой в России в разные периоды ее истории. Ввиду этого актуальной является разработка способов быстрой и эффективной идентификации и дифференциации штаммов возбудителя чумы средневекового биовара.
Все штаммы Y. pestis основного подвида средневекового биовара делят на 4 филогенетические ветви - 2.MED0, 2.MED1, 2.MED2 и 2.MED3. Штаммы ветви 2.MED0 циркулируют только в Центрально-Кавказском высокогорном очаге в РФ, все остальные штаммы средневекового биовара из природных очагов РФ и стран ближнего зарубежья относятся к филогенетической ветви 2.MED1. Штаммы средневекового биовара ветвей 2.MED2 и 2.MED3 встречаются на территории Китая. Установление принадлежности выделенного штамма Y. pestis к средневековому биовару основного подвида позволит оценить его вирулентный и эпидемиологический потенциал, дальнейшая дифференциация по принадлежности к одной из 4-х филогенетических ветвей - определить его происхождение и установить источник инфекции.
Современный уровень молекулярно-генетических методов исследования позволяет разрабатывать быстрые и эффективные способы идентификации и дифференциации Y. pestis и других возбудителей инфекционных болезней на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР), обладающие высокой степенью воспроизводимости. Одной из наиболее эффективных разновидностей ПЦР является ПЦР в режиме реального времени с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени. На текущий момент разработано несколько способов индикации и идентификации штаммов возбудителя чумы при помощи ПЦР.
Зарегистрирована «Тест-система для выявления ДНК Yersinia pestis методом ПЦР «ГенПест». Эта система основана на использовании ДНК мишеней - участков генов cafl и pla, находящихся в плазмидах pFra и pPst возбудителя чумы, соответственно. Однако эта тест-система не предназначена для внутривидовой дифференциации и идентификации штаммов средневекового биовара.
Внутривидовая дифференциация штаммов возбудителя чумы описана в патенте RU №2425891, дата опубликования 10.08.2011. При помощи указанного способа, возможно разделение штаммов Y. pestis и Y. pseudotuberculosis с дальнейшей дифференциацией штаммов Y. pestis по их принадлежности к основному и неосновным подвидам. В тоже время этот способ не предусматривает разделения биоваров основного подвида, в том числе и дифференциации штаммов средневекового биовара.
Разделение штаммов средневекового и античного биоваров основного подвида проводится способом, описанном в патенте RU №2496882 (опубликован 27.10.2013), который основан на ПЦР с электрофоретическим учетом результатов. Однако этот способ не предназначен для внутрибиоварной дифференциации штаммов средневекового биовара по принадлежности к четырем известным филогенетическим ветвям - 2.MED0, 2.MED1, 2.MED2 и 2.MED3.
Известен способ дифференциации биоваров и геновариантов штаммов Yersinia pestis основного подвида с помощью полимеразной цепной реакции (патент RU №2565554, опубликован 20.10.2015). Способ обеспечивает разделение античного, средне-векового биоваров основного подвида возбудителя чумы, а также филогенетических линий 1.ANT/1.ORI и 2.ANT/2.MED основного подвида. Однако способ не пригоден для определения филогенетической принадлежности штаммов средневекового биовара.
Опубликован способ подвидовой дифференциации штаммов возбудителя чумы методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени (Патент RU №2621869, опубликован 07.06.2017). Способ обеспечивает разделение основного, кавказского, алтайского, гиссарского и улегейского подвидов, но не решает проблемы идентификации штаммов средневекового биовара и внутрибиоварной дифференциации этих штаммов.
Известен способ дифференциации типичных и атипичных штаммов Y. pestis средневекового биовара из Центрально-Кавказского высокогорного очага в России, содержащих маркерную плазмиду pCKF. (Патент RU №2550257, опубликован 10.05.2015 г.) Однако данный способ не позволяет дифференцировать штаммы средневекового биовара по их принадлежности к филогенетическим ветвям 2.MED1, 2.MED2 и 2.MED3.
В научной и специальной литературе отсутствуют другие данные о способах идентификации штаммов Y. pestis средневекового биовара с их последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени.
Технический результат изобретения заключается в обеспечении быстрой и надежной идентификации штаммов Y. pestis средневекового биовара с разделением этих штаммов по филогенетической принадлежности.
Технический результат достигается способом идентификации штаммов Y. pestis средневекового биовара с определением филогенетической принадлежности методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени, который предусматривает проведение ПЦР с праймерами и зондами на ДНК мишень «Med24», имеющими последовательность SEQ ID NO: 3 и мультиплексной ПЦР с праймерами и зондами на ДНК мишени «2.Med1», «2.Med3», «pCKF», имеющими последовательность SEQ ID NO: 1, 2, 4 с последующей дифференциацией штаммов средневекового биовара по наличию и отсутствию сигналов с указанными праймерами в соответствии с таблицей.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом.
Выделение ДНК исследуемого штамма чумного микроба проводят по стандартной методике в соответствии с МУ 1.3.2569-09 «Организация работ лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Полимеразную цепную реакцию осуществляют с использованием предложенных праймеров и зондов на мишени «Med24», «pCKF», «2.Med1» и «2.Med3». Олигонуклеотидные праймеры, и зонды, применяемые для амплификации в ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов хромосомных мишеней «Med24», «2.Med1» и «2.Med3», рассчитаны на основе нуклеотидных последовательностей этих участков у штаммов Y. pestis С092, KIM, Antiqua и Nepal516, а также последовательности плазмиды pCKF, представленных в базе данных NCBI GenBank. С помощью указанных праймеров в ПЦР проводят амплификацию участков «Med24», «pCKF», «2.Med1» и «2.Med3». Для проведения ПЦР используют зонды в формате TaqMan и применяют следующие условия реакции: 1 цикл 95°С 15 мин; 5 циклов 95°С 20 с, 60°С 20 с, 72°С 20 сек; 30 циклов: 95°С 15 с, 58°С 45 с, 72°С 20 с.
Принадлежность выделенного изолята Y. pestis к средневековому биовару основного подвида и его филогенетическим ветвям устанавливают по совокупному результату двух реакций. В отдельной реакции проводят определение принадлежности штаммов к средневековому биовару с использованием праймеров на ДНК мишень «Med24». У всех штаммов средневекового биовара (за исключением штаммов филогенетической ветви 2.MED0) сигнал флуоресценции по мишени «Med24» отсутствует, поскольку рассчитанный на эту ДНК мишень зонд комплементарен участку делеции в 24 пн в этом участке генома, маркерной для штаммов средневекового биовара. Составляющие исключение штаммы средневекового биовара ветви 2.MED0 (циркулируют в Центрально-Кавказском высокогорном очаге чумы) идентифицируют по наличию сигнала флуоресценции с праймерами на мишень «pCKF» - участок плазмиды pCKF, маркерной только для штаммов ветви 2.MED0. Последовательность мишени «pCKF» выявляют в мультиплексной реакции одновременно с последовательностями мишеней «2.Med1» и «2.Med3». Мультиплексную ПЦР с праймерами на ДНК мишени «2.Med1», «2.Med3» и «pCKF» применяют для внут-рибиоварной дифференциации штаммов средневекового биовара по филогенетической принадлежности.
У штаммов средневекового биовара филогенетической ветви 2.MED1 отсутствует сигнал флуоресценции с праймерами на мишень «2.Med1» и присутствует сигнал с праймерами на мишень «2.Med3». У штаммов ветви 2.MED2 присутствует сигнал с праймерами на мишени «2.Med1» и «2.Med3», а у штаммов ветви 2.MED3 присутствует сигнал флуоресценции с праймерами «2.Med1» и отсутствует сигнал с праймерами «2.Med.3». У штаммов ветви 2.MED0 с праймерами на мишень «pCKF» в ПЦР проявляется сигнал флуоресценции, в то время как у штаммов других филогенетических ветвей средневекового биовара он отсутствует. Учет результатов идентификации и дифференциации штаммов Yersinia pestis средневекового биовара представлен в таблице.
Сущность изобретения поясняется примерами.
Пример 1. Дифференциация штамма Y. pestis средневекового биовара филогенети-ческой ветви 2.MED1 (модельный эксперимент) Выделение ДНК Y. pestis проводят стандартным методом с помощью лизирующего раствора на основе 6М гуанидинизотиоцианата с предварительным обеззараживанием культуры путем добавления мертиолята натрия до концентрации 1:10000 с последующим прогреванием при температуре 56°С в течение 30 мин. [МУ 1.3.2569-09].
С праймерами на ДНК мишень «Med24» ПЦР проводят в объеме 25 мкл, реакцион-ная смесь содержит: 2,5 мкл 10х буфера для ПЦР, 2,5 мкл раствора по 2 мМ четырех дНТФ, 1 мкл 25 мМ MgCl2, по 0,1 мкл (10 пМ) каждого праймера, 0,05 мкл (5 пМ) зонда в формате TaqMan, 0,2 мкл (5 ед.) Taq полимеразы, 10 мкл ДНК штамма. Мультиплексную ПЦР с праймерами на ДНК мишени «2.Med1», «2.Med3» и «pCKF» проводят в одной ре-акции. Реакционная смесь содержит 2,5 мкл 10х буфера для ПЦР, 2,5 мкл раствора по 2 мМ четырех дНТФ, 1,5 мкл 25 мМ MgCl2, по 0,08 мкл (8 пМ) каждого праймера, 0,04 мкл (4 пМ) зонда в формате TaqMan, 0,2 мкл (5 ед.) Taq полимеразы, 10 мкл ДНК штамма. В результате проведения реакции получают следующие результаты. По мишеням «Med24», «pCKF» и «2.Med1» сигнал флуоресценции отсутствует, но он проявляется по мишени «2.Med3». Следовательно, исследуемый штамм Y. pestis относится к средневековому биовару, филогенетической ветви 2.MED1.
Пример 2. Дифференциация штамма Y. pestis средневекового биовара филогенетической ветви 2.MED2
Исследование штамма Y. pestis проводят аналогично примеру №1. В ПЦР с использованием праймеров на ДНК мишени «Med24» и «pCKF» у исследуемого штамма отсутствуют сигналы флуоресценции, однако они проявляются с праймерами на мишени 2.Medl и 2.Med3. Следовательно, исследуемый штамм Y. pestis относится к средневековому биовару, филогенетической ветви 2.MED2.
Пример 3. Дифференциация штамма Y. pestis средневекового биовара филогенетической ветви 2.MED3
Исследование штамма Y. pestis проводят аналогично примеру №1. В ПЦР с использованием праймеров на ДНК мишени «Med24» и «pCKF» и «2.Med3» у исследуемого штамма Y. pestis отсутствуют сигналы флуоресценции, но он проявляется с праймерами по мишени «2.Med1». Следовательно, исследуемый штамм Y. pestis относится к средневековому биовару, филогенетической ветви 2.MED3.
Пример 4. Дифференциация штаммов Y.pestis средневекового биовара филогенетической ветви 2.MED0
Исследование штамма Y. pestis проводят аналогично примеру №1. В ПЦР с праймерами по мишени «Med24» наблюдают наличие флуоресцентного сигнала. В реакции по мишени pCKF также наблюдают наличие сигнала, что свидетельствует о принадлежности штамма к филогенетической ветви 2.MED0.
Таким образом, заявленный способ идентификации штаммов Y. pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов с использованием мишеней «Med24», «2.Med1», «2.Med3» и «pCKF» позволяет быстро и эффективно определять принадлежность штаммов возбудителя чумы к основному подвиду средневекового биовара и дифференцировать их по филогенетической принадлежности.
Claims (1)
- Способ идентификации штаммов Yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени, предусматривающий проведение ПЦР с праймерами и зондами на ДНК мишень Med24, имеющими последовательность SEQ ID NO: 3, и мультиплексной ПЦР с праймерами и зондами на ДНК мишени 2.Med1, 2.Med3 и pCKF, имеющими последовательность SEQ ID NO: 1, 2, 4 со следующей дифференциацией штаммов средневекового биовара по их принадлежности к филогенетической ветви: 2.MED0 по наличию сигналов с указанными праймерами по мишеням Med24 и pCKF; 2.MED1 по наличию сигналов с праймерами по мишени 2.Med3 и отсутствию сигналов по мишеням Med24, 2.Med1 и pCKF; 2.MED2 по наличию сигналов с праймерами по мишеням 2.Med1 и 2.Med3 и отсутствию сигналов по мишеням Med24 и pCKF; 2.MED3 по наличию сигналов с праймерами по мишени 2.Med1 и отсутствию сигналов по мишеням Med24, 2.Med3 и pCKF.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018139857A RU2705813C1 (ru) | 2018-11-12 | 2018-11-12 | Способ идентификации штаммов yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018139857A RU2705813C1 (ru) | 2018-11-12 | 2018-11-12 | Способ идентификации штаммов yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2705813C1 true RU2705813C1 (ru) | 2019-11-12 |
Family
ID=68579803
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018139857A RU2705813C1 (ru) | 2018-11-12 | 2018-11-12 | Способ идентификации штаммов yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2705813C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2471872C1 (ru) * | 2011-09-08 | 2013-01-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации штаммов yersinia pestis различных подвидов и биоваров методами полимеразной цепной реакции и мультилокусного сиквенс-типирования |
| RU2565554C2 (ru) * | 2014-09-23 | 2015-10-20 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФКУЗ "РосНИПЧИ "Микроб") | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БИОВАРОВ И ГЕНОВАРИАНТОВ ШТАММОВ Yersinia pestis ОСНОВНОГО ПОДВИДА С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ |
-
2018
- 2018-11-12 RU RU2018139857A patent/RU2705813C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2471872C1 (ru) * | 2011-09-08 | 2013-01-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации штаммов yersinia pestis различных подвидов и биоваров методами полимеразной цепной реакции и мультилокусного сиквенс-типирования |
| RU2565554C2 (ru) * | 2014-09-23 | 2015-10-20 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФКУЗ "РосНИПЧИ "Микроб") | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БИОВАРОВ И ГЕНОВАРИАНТОВ ШТАММОВ Yersinia pestis ОСНОВНОГО ПОДВИДА С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ОГЛОДИН Е.Г. Филогенетическая принадлежность штаммов Yersinia pestis основного подвида из природных очагов России и сопредельных государств. Дисс. канд. биол. наук. Саратов, 2015, 127 с. [Найдено 23.07.2019] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: * |
| ОГЛОДИН Е.Г. Филогенетическая принадлежность штаммов Yersinia pestis основного подвида из природных очагов России и сопредельных государств. Дисс. канд. биол. наук. Саратов, 2015, 127 с. [Найдено 23.07.2019] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: http://ibppm.ru/dissertacionnyy-sovet/149-oglodin-evgeniy-gennadevich.html . PLATONOV M.E. et al. Molecular typing of Yersinia pestis. Mol Gen Mikrobiol Virusol. 2013; (2): 3-12. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Iraola et al. | Application of a multiplex PCR assay for Campylobacter fetus detection and subspecies differentiation in uncultured samples of aborted bovine fetuses | |
| Venkatesan et al. | Multiplex PCR for simultaneous detection and differentiation of sheeppox, goatpox and orf viruses from clinical samples of sheep and goats | |
| Kumar et al. | Rapid multiplex PCR assay for the simultaneous detection of the Brucella Genus, B. abortus, B. melitensis, and B. suis | |
| JP2015530096A (ja) | 非干渉性、ノイズキャンセル性のポリヌクレオチド識別タグを用いたマルチプレックスパイロシーケンシング | |
| US20220325324A1 (en) | Systems and methods for the detection of infectious diseases | |
| JP2017184642A (ja) | 認知症マーカー、それを用いた認知症の評価方法、評価試薬および評価キット | |
| RU2612137C1 (ru) | Способ идентификации подвидов возбудителя туляремии Francisella tularensis subsp. tularensis, Francisella tularensis subsp. mediasiatica и Francisella tularensis subsp. holarctica | |
| Bölske et al. | Diagnosis of paratuberculosis by PCR. | |
| RU2405836C2 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза генотипа beijing | |
| RU2360972C1 (ru) | Способ детекции и определения биотипа, серогруппы и токсигенности возбудителя холеры и набор для его осуществления | |
| RU2550257C2 (ru) | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ ШТАММОВ Yersinia pestis СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА МЕТОДОМ ПЦР С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ | |
| CN103014135A (zh) | 一种鉴定结核分枝杆菌的方法 | |
| RU2471872C1 (ru) | Способ дифференциации штаммов yersinia pestis различных подвидов и биоваров методами полимеразной цепной реакции и мультилокусного сиквенс-типирования | |
| RU2705813C1 (ru) | Способ идентификации штаммов yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов | |
| RU2332464C1 (ru) | Способ дифференциации чумного и псевдотуберкулезного микробов с одновременной внутривидовой дифференциацией штаммов чумного микроба | |
| RU2736649C1 (ru) | Способ генетической дифференциации штаммов Yersinia pseudotuberculosis путем молекулярно-генетического типирования | |
| RU2737775C1 (ru) | Способ идентификации yersinia pestis и yersinia pseudotuberculosis и одновременной дифференциации yersinia pestis основного и центральноазиатского подвидов методом мультиплексной пцр | |
| Ravibalan et al. | Characterization of katG and rpoB gene mutations in multi drug resistant Mycobacterium tuberculosis clinical isolates | |
| RU2496882C2 (ru) | Способ дифференциации штаммов возбудителя чумы основного подвида средневекового и античного биоваров методом полимеразной цепной реакции | |
| RU2565554C2 (ru) | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БИОВАРОВ И ГЕНОВАРИАНТОВ ШТАММОВ Yersinia pestis ОСНОВНОГО ПОДВИДА С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ | |
| JP2013188224A (ja) | 病原性リステリア菌の検出方法 | |
| RU2455364C2 (ru) | Способ идентификации микобактерий с помощью полимеразной цепной реакции | |
| TW201408779A (zh) | 檢測結核菌的方法及套組 | |
| RU2478717C1 (ru) | Способ дифференцирования подвидов туляремийного микроба | |
| TWI658048B (zh) | 檢測美人魚發光桿菌殺魚亞種之特異性引子及其使用方法 |