RU2550257C2 - СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ ШТАММОВ Yersinia pestis СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА МЕТОДОМ ПЦР С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ - Google Patents
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ ШТАММОВ Yersinia pestis СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА МЕТОДОМ ПЦР С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2550257C2 RU2550257C2 RU2014114712/10A RU2014114712A RU2550257C2 RU 2550257 C2 RU2550257 C2 RU 2550257C2 RU 2014114712/10 A RU2014114712/10 A RU 2014114712/10A RU 2014114712 A RU2014114712 A RU 2014114712A RU 2550257 C2 RU2550257 C2 RU 2550257C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strains
- med24
- pckf
- realtime
- typical
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к cпособу дифференциации типичных и атипичных штаммов Yersinia pestis основного подвида средневекового биовара. Способ предусматривает проведение в двух реакционных смесях ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов с использованием соответствующих олигонуклеотидных праймеров и зондов на ДНК-мишени «Med24» и «pCKF» следующего состава: праймеры прямой Med24 RealTime-S GCCAGTGTGTGTCTAAA, обратный Med24 RealTime-As CAACATTCGTCGCAAAG и зонд Med24 Zond FAM-ACATTGTGCTGGACTCACAGCCCC-BHQ1, праймеры прямой pCKF RealTime-S AACCGCCTAAGCACTTTAT, обратный pCKF RealTime-As CGTCAGGAACTCAACGAA и зонд pCKF Zond FAM-ATCAGAGAGCATTTGAGCGGTTG-BHQ1. Разделяют типичные и атипичные штаммы средневекового биовара следующим образом: отсутствие гибридизационно-флуоресцентного сигнала по обеим ДНК-мишеням «Med24» и «pCKF» у типичных штаммов, наличие по обеим ДНК-мишеням «Med24» и «pCKF» у атипичных штаммов, наличие ДНК-сигнала по «Med24» и отсутствие по «pCKF» у штаммов, не относящихся к штаммам средневекового биовара. 1 ил., 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицинской микробиологии, в частности к внутривидовой дифференциации и молекулярному типированию штаммов возбудителя чумы, и может быть использовано в научно-исследовательских учреждениях медицинского профиля и учреждениях Роспотребнадзора.
Штаммы Yersinia pestis вызывают особо опасную инфекционную природно-очаговую болезнь, которая в отсутствие лечения, как правило, приводит к летальному исходу. Существует опасность использования вирулентных типичных и атипичных штаммов возбудителя чумы в актах биотерроризма. Необходимость быстрого выявления возбудителя чумы, включая и его атипичные штаммы, требует разработки современных молекулярно-генетических способов их идентификации, которые существенно сокращают время проведения анализа и обеспечивают получение более полной и точной информации по сравнению с традиционно используемыми в практике лабораторной диагностики методами.
В Российской Федерации, других странах СНГ и сопредельных государствах наибольшее распространение имеют высоковирулентные штаммы Y. pestis основного подвида средневекового биовара, которые циркулируют в большинстве природных очагов России и граничащих с ней территорий. Штаммы средневекового биовара способны вызывать эпидемии чумы и в средние века явились этиологическим агентом пандемии «Черная смерть», поразившей средневековую Европу и унесшей более трети ее населения. Отличительным биохимическим признаком, используемым в лабораторной диагностике для выявления штаммов средневекового биовара, является отсутствие у них нитрифицирующей и денитрифицирующей активности, т.е. способности превращать нитриты в нитраты и осуществлять обратную реакцию. Однако таким же отличительным биохимическим свойством обладают и штаммы трех неосновных подвидов - алтайского гиссарского и улегейского, на основании чего их часто ошибочно относят к средневековому биовару. В то же время неосновные подвиды возбудителя чумы характеризуются избирательной вирулентностью и достаточно редко вызывают болезнь у человека. Из этого следует, что использование только одних биохимических признаков может приводить к ошибочному определению внутривидовой систематической принадлежности штаммов Y. pestis и, как следствие, к неправильной оценке их эпидемической значимости.
Сами штаммы средневекового биовара Y. pestis неоднородны по составу и наряду с типичными широко распространенными изолятами включают и отдельную группу штаммов с атипичными свойствами. Эта группа представлена штаммами из Центрально-Кавказского высокогорного очага чумы, расположенного в России. Атипичные штаммы обладают сниженной вирулентностью по сравнению с другими штаммами средневекового биовара, содержат дополнительную плазмиду размером около 5.4 т.п.н., отсутствующую у других штаммов Y. pestis. Они также имеют уникальную питательную потребность в аминокислоте пролине, не встречающуюся у других штаммов возбудителя чумы. Поскольку эти штаммы отличаются от типичных штаммов средневекового биовара сниженной вирулентностью и, следовательно, более низкой эпидемической значимостью, то необходимо предусмотреть и способ их дифференциации от типичных штаммов этого биовара.
При выборе современного метода для проведения дифференциации штаммов Y. pestis средневекового биовара следует учесть то, что высокой разрешающей способностью, специфичностью и чувствительностью обладает полимеразная цепная реакция, применение которой позволяет в короткие сроки получать стабильные и хорошо воспроизводимые результаты.
Традиционный вариант метода полимеразной цепной реакции - ПЦР с электрофоретическим учетом результатов достаточно широко применяется для определения видовой принадлежности, а в последнее время и для проведения внутривидовой дифференциации штаммов возбудителя чумы. Так, известен способ детекции бактерий рода Yersinia и дифференциации патогенных для человека видов иерсиний методом полимеразной цепной реакции на основе использования последовательности участка гена ompF порина возбудителя чумы. [Патент RU №2354700, опубликован 10.05.2009]. Этот способ позволяет разделять виды патогенных иерсиний - возбудителей чумы, псевдотуберкулеза, кишечного иерсиниоза на видовом уровне, но он не предусматривает проведения внутривидовой дифференциации штаммов Y. pestis, в том числе не позволяет проводить разделения штаммов внутри средневекового биовара.
Известен другой способ быстрой детекции и дифференциации Y. pestis и Y. pseudotuberculosis с помощью их амплификации и гибридизации, который включает два этапа детекции ДНК этих возбудителей методом ПЦР и гибридизации фрагментов амплификации со специфическими зондами, что повышает надежность проводимого исследования [Патент № DE10124342, опубликован 11.28.2002]. Однако этот способ более сложен в исполнении, занимает большее время при проведении анализа и не обеспечивает дифференциации штаммов Y. pestis по их биоварной принадлежности.
Известен способ дифференциации штаммов возбудителя чумы основного и неосновных подвидов и возбудителя псевдотуберкулеза методом полимеразной цепной реакции [Патент RU №2425891, опубликован 10.08.2011]. Этот способ, в отличие от вышеперечисленных, позволяет проводить внутривидовую дифференциацию штаммов Y. pestis. Он обеспечивает разделение не только штаммов Y. pestis и Y. pseudotuberculosis, но и штаммов основного и неосновных подвидов возбудителя чумы. Однако этот способ не предусматривает разделения штаммов основного подвида по их принадлежности к одному из трех биоваров возбудителя чумы и проведения дифференциации среди штаммов средневекового биовара.
Известен способ подвидовой и биоварной дифференциации штаммов Y. pestis методом ПЦР и мультилокусного сиквенс-типирования [Патент RU №2471872, опубликован 10.01.2013]. Применение этого метода обеспечивает определение подвидовой и биоварной принадлежности исследуемого штамма Y. pestis. В то же время способ основан на использовании метода мультилокусного секвенирования, связанного с использованием дорогостоящего оборудования и реактивов для проведения секвенирования амплифицированных в ПЦР фрагментов ДНК, а также требующего значительного увеличения времени проведения исследования. Этот способ также не позволяет проводить разделение штаммов Y. pestis внутри средневекового биовара.
Известен способ дифференциации штаммов возбудителя чумы основного подвида средневекового и античного биоваров методом полимеразной цепной реакции [патент RU №2496882, опубликован 27.10.2013], который направлен на разделение штаммов средневекового и античного биоваров Y. pestis с помощью метода ПЦР с электрофоретическим учетом результатов. Однако с помощью этого способа обеспечивается детекция типичных штаммов средневекового биовара, но не атипичных штаммов этого биовара.
Большими разрешающими возможностями при проведении идентификации микроорганизмов обладает метод ПЦР в режиме реального времени с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов, который позволяет проводить одновременное исследование большого количества образцов по нескольким ДНК-мишеням, что существенно сокращает время проведения анализа. Отсутствие этапа электрофоретического учета результатов, характерного для ПЦР в традиционном формате, позволяет избежать риска контаминации образцов на этапе учета результатов.
До сих пор метод ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов применяли, в основном, для видоспецифической детекции возбудителя чумы. При этом для детекции возбудителя чумы в ПЦР использовали нуклеотидные последовательности генов и участков ДНК - cafl, pla, 3а [Тест-система для выявления ДНК Yersinia pestis методом ПЦР (ГенПест); набор реагентов для выявления ДНК Yersinia pestis методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени (Ген Yersinia pestis индикация РГФ)]. ПЦР в реальном времени используется также для дифференциации вирулентных и авирулентных штаммов Ypestis по генам irp2, hmsH и IcrV [Набор реагентов для ускоренной идентификации штаммов Yersinia pestis методом мультилокусной полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени (Ген Yersinia pestis идентификация - РГФ)]. Однако эти способы не обеспечивают проведение внутривидовой дифференциации штаммов Ypestis, в частности, дифференциации штаммов средневекового биовара.
В научной и специальной литературе отсутствуют публикации об использовании метода полимеразной цепной реакции для дифференциации штаммов средневекового биовара, включая и атипичные изоляты этого биовара. Все вышеизложенное требует разработки чувствительного, быстрого и простого способа дифференциации типичных и атипичных штаммов возбудителя чумы средневекового биовара.
Технический результат заключается в обеспечении простой и надежной молекулярной дифференциации типичных и атипичных штаммов средневекового биовара возбудителя чумы.
Технический результат достигается способом дифференциации типичных и атипичных штаммов возбудителя чумы средневекового биовара методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов, который предусматривает амплификацию ДНК-мишеней «Med24» и «pCKF» в исследуемом материале в двух раздельных ПЦР реакциях, при этом олигонуклеотидные праймеры и зонды на ДНК-мишени имеют следующие последовательности: праймеры прямой Med24 RealTime-S GCCAGTGTGTGTCTAAA, обратный Med24 RealTime-As CAACATTCGTCGCAAAG и зонд Med24 Zond FAM-ACATTGTGCTGGACTCACAGCCCC-BHQ1, праймеры прямой pCKF RealTime-S AACCGCCTAAGCACTTTAT, обратный pCKF RealTime-As CGTCAGGAACTCAACGAA и зонд pCKF Zond FAM-ATCAGAGAGC ATTTGAGCGGTTG-BHQ1 и последующее разделение типичных и атипичных штаммов средневекового биовара по отсутствию гибридизационно-флуоресцентного сигнала по обеим ДНК-мишеням «Med24» и «pCKF» у типичных штаммов и по его наличию по обеим ДНК-мишеням у атипичных штаммов средневекового биовара. При наличии ДНК-сигнала по «Med24» и отсутствии по «pCKF» ДНК- мишеням исследуемые штаммы не относят к штаммам средневековым биовара.
Выделение ДНК исследуемого штамма чумного микроба проводят по стандартной методике в соответствии с МУ 1.3.2569-09 «Организация работ лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Полимеразную цепную реакцию осуществляют с применением вышеуказанных праймеров на мишени «Med24» и «pCKF». Олигонуклеотидные праймеры, используемые для амплификации в ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов хромосомной мишени «Med24», рассчитаны на основе нуклеотидной последовательности этого участка у штаммов Y. pestis С 092, KIM, Antiqua, и Nepal 516, представленных в базе данных NCBI GenBank, а праймеры на участок «pCKF» - на основе полученного нами полного сиквенса плазмиды размером 5,4 т.п.н атипичных штаммов средневекового биовара из Центрально-Кавказского высокогорного очага чумы. С помощью рассчитанных праймеров в ПЦР проводят амплификацию участков «Med24» и «рСКР».
Олигонуклеотидные праймеры на участки «Med24» и «pCKF» и зонды имеют следующий состав:
Праймеры: Med24 RealTime-S GCCAGTGTGTGTCTAAA
Med24 RealTime-As CAACATTCGTCGCAAAG
Зонд: Med24 Zond FAM-ACATTGTGCTGGACTCACAGCCCC-BHQ1
Праймеры: pCKF RealTime-S AACCGCCTAAGCACTTTAT pCKF RealTime-As CGTCAGGAACTCAACGAA Зонд: pCKF Zond FAM-ATCAGAGAGCATTTGAGCGGTTG-BHQ1
Амплификацию участков «Med24» и «pCKF» проводят в раздельных ПЦР-смесях с использованием специфических для каждой мишени праймеров. Полимеразную цепную реакцию с амплификацией участков «Med24» и «pCKF» проводят по следующей программе: 1 цикл при температуре 95°С в течение 15 мин, затем 35 циклов при температуре 95°С в течение 20 с, при температуре 56°С в течение 40 с, на этапе отжига праймеров осуществляют учет флуоресценции.
Типичные штаммы средневекового биовара не дают флуоресцентно-гибридизационного сигнала при использовании праймеров и зондов на обе ДНК-мишени, в то время как у атипичных штаммов средневекового биовара наблюдается положительный гибридизационно-флуоресцентный сигнал по обеим ДНК-мишеням. Штаммы других биоваров (античного и восточного) основного подвида и подвидов возбудителя чумы (кавказский, алтайский, гиссарский и улегейский) дают положительный гибридизационно-флуоресцентный сигнал с праймерами на мишень «Med24» и не дают положительного сигнала с праймерами на мишень «pCKF».
Дифференциацию типичных и атипичных штаммов Y. pestis основного подвида средневекового биовара проводят в соответствии с таблицей.
Сущность изобретения поясняется примерами.
Пример 1. Дифференциация типичного штамма Y. pestis средневекового биовара (модельный эксперимент)
Выделение ДНК Y.pestis проводят стандартным методом с помощью лизирующего раствора на основе 6М гуанидинизотиоцианата с предварительным обеззараживанием культуры путем добавления мертиолята натрия до концентрации 1:10000 с последующим прогреванием при температуре 56°С в течение 30 мин [МУ 1.3.2569-09].
Для ДНК-мишени «Med24» полимеразную цепную реакцию проводят в объеме 25 мкл, реакционная смесь содержит: 1х буфер (10х ПЦР-буфер - 2,5 мкл), MgCl2 - 2,0 ммоль, смесь dNTP - 0,3 ммоль, олигонуклеотидные праймеры (прямой Med24 RealTime-S, обратный Med24 RealTime-As) - 12 пмоль, олигонуклеотидный зонд (Med24 Zond) - 6 пмоль, Taq DNA полимераза - 0,1 ед., исследуемая ДНК - 10 мкл. Для ДНК-мишени «pCKF» реакционная смесь аналогична для ДНК-мишени «Med24». В ПЦР в режиме реального времени гибридизационно-флуоресцентный сигнал с праймерами на мишень «Med24» у исследуемого штамма отсутствует. У него также отсутствует гибридизационно-флуоресцентный сигнал в ПЦР с праймерами на мишень «pCKF». Следовательно, исследуемый штамм Y.pestis относится к типичным штаммам средневекового биовара.
Пример 2. Дифференциация атипичного штамма Y.pestis средневекового биовара
Исследование штамма Y. pestis проводят аналогично примеру №1. В ПЦР в режиме реального времени у изучаемого штамма присутствует гибридизационно-флуоресцентный сигнал с праймерами на мишени «Med24» и «pCKF». Следовательно, исследуемый штамм относится к атипичным штаммам средневекового биовара из Центрально-Кавказского высокогорного очага чумы.
Пример 3. Дифференциация штамма Y. pestis, не относящегося к средневековому биовару
Исследование штамма Y. pestis проводят аналогично примеру №1. В ПЦР в режиме реального времени у изучаемого штамма присутствует гибридизационно-флуоресцентный сигнал с праймерами на мишень «Med24» и отсутствует гибридизационно-флуоресцентный сигнал на мишень «pCKF». Следовательно, исследуемый штамм не относится к штаммам средневекового биовара.
Штаммы Y. pestis, которые могли бы дать положительный сигнал на мишень «pCKF» и отрицательный сигнал на мишень «Med24», в природе отсутствуют.
Пример дифференциации типичных и атипичных штаммов Y. pestis основного подвида средневекового биовара в ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов с использованием мишеней «Med24»(A) и «pCKF»(Б) приведен на фигуре.
Таким образом, заявленный способ дифференциации типичных и атипичных штаммов Y. pestis основного подвида средневекового биовара, основанный на выявлении в ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени мишеней «Med24» и «pCKF», обеспечивает простую и надежную молекулярную идентификацию этих штаммов.
Claims (1)
- Способ дифференциации типичных и атипичных штаммов Yersinia pestis основного подвида средневекового биовара, предусматривающий проведение в двух реакционных смесях ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов с использованием соответствующих олигонуклеотидных праймеров и зондов на ДНК-мишени «Med24» и «pCKF» следующего состава: праймеры прямой Med24 RealTime-S GCCAGTGTGTGTCTAAA, обратный Med24 RealTime-As CAACATTCGTCGCAAAG и зонд Med24 Zond FAM-ACATTGTGCTGGACTCACAGCCCC-BHQ1, праймеры прямой pCKF RealTime-S AACCGCCTAAGCACTTTAT, обратный pCKF RealTime-As CGTCAGGAACTCAACGAA и зонд pCKF Zond FAM-ATCAGAGAGCATTTGAGCGGTTG-BHQ1, и разделение типичных и атипичных штаммов средневекового биовара по отсутствию гибридизационно-флуоресцентного сигнала по обеим ДНК-мишеням «Med24» и «pCKF» у типичных штаммов, по его наличию в обеих ДНК-мишенях у атипичных штаммов, а при наличии ДНК-сигнала по «Med24» и отсутствии по «pCKF» исследуемые штаммы не относятся к штаммам средневекового биовара.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014114712/10A RU2550257C2 (ru) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ ШТАММОВ Yersinia pestis СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА МЕТОДОМ ПЦР С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014114712/10A RU2550257C2 (ru) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ ШТАММОВ Yersinia pestis СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА МЕТОДОМ ПЦР С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014114712A RU2014114712A (ru) | 2014-08-10 |
RU2550257C2 true RU2550257C2 (ru) | 2015-05-10 |
Family
ID=51355052
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014114712/10A RU2550257C2 (ru) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ ШТАММОВ Yersinia pestis СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА МЕТОДОМ ПЦР С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2550257C2 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2621869C1 (ru) * | 2016-11-17 | 2017-06-07 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Способ подвидовой дифференциации штаммов возбудителя чумы методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени |
RU2736649C1 (ru) * | 2019-12-30 | 2020-11-19 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ генетической дифференциации штаммов Yersinia pseudotuberculosis путем молекулярно-генетического типирования |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2642273C1 (ru) * | 2016-07-25 | 2018-01-24 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации штаммов Yersinia pestis на основной и неосновные подвиды методом ПЦР в режиме реального времени |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1795614A1 (en) * | 2005-12-08 | 2007-06-13 | Simo Nikkari | Diagnostic method and products useful therein |
RU2385941C1 (ru) * | 2008-12-01 | 2010-04-10 | Ооо "Научно-Производственная Фирма "Омикс" | СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА Yersinia И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПАТОГЕННЫХ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА ВИДОВ ИЕРСИНИЙ МЕТОДОМ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ |
RU2415948C1 (ru) * | 2009-12-11 | 2011-04-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | СПОСОБ ПОДВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ШТАММОВ Yersinia pestis МЕТОДОМ МУЛЬТИЛОКУСНОГО СИКВЕНС-ТИПИРОВАНИЯ |
CN101560560B (zh) * | 2009-03-17 | 2012-04-18 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种检测鼠疫菌的基因液相芯片及其检测方法 |
RU2471872C1 (ru) * | 2011-09-08 | 2013-01-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации штаммов yersinia pestis различных подвидов и биоваров методами полимеразной цепной реакции и мультилокусного сиквенс-типирования |
RU2496882C2 (ru) * | 2012-09-17 | 2013-10-27 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации штаммов возбудителя чумы основного подвида средневекового и античного биоваров методом полимеразной цепной реакции |
-
2014
- 2014-04-14 RU RU2014114712/10A patent/RU2550257C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1795614A1 (en) * | 2005-12-08 | 2007-06-13 | Simo Nikkari | Diagnostic method and products useful therein |
RU2385941C1 (ru) * | 2008-12-01 | 2010-04-10 | Ооо "Научно-Производственная Фирма "Омикс" | СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА Yersinia И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПАТОГЕННЫХ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА ВИДОВ ИЕРСИНИЙ МЕТОДОМ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ |
CN101560560B (zh) * | 2009-03-17 | 2012-04-18 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种检测鼠疫菌的基因液相芯片及其检测方法 |
RU2415948C1 (ru) * | 2009-12-11 | 2011-04-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | СПОСОБ ПОДВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ШТАММОВ Yersinia pestis МЕТОДОМ МУЛЬТИЛОКУСНОГО СИКВЕНС-ТИПИРОВАНИЯ |
RU2471872C1 (ru) * | 2011-09-08 | 2013-01-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации штаммов yersinia pestis различных подвидов и биоваров методами полимеразной цепной реакции и мультилокусного сиквенс-типирования |
RU2496882C2 (ru) * | 2012-09-17 | 2013-10-27 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциации штаммов возбудителя чумы основного подвида средневекового и античного биоваров методом полимеразной цепной реакции |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2621869C1 (ru) * | 2016-11-17 | 2017-06-07 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Способ подвидовой дифференциации штаммов возбудителя чумы методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени |
RU2736649C1 (ru) * | 2019-12-30 | 2020-11-19 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ генетической дифференциации штаммов Yersinia pseudotuberculosis путем молекулярно-генетического типирования |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2014114712A (ru) | 2014-08-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2019201658A (ja) | 非干渉性、ノイズキャンセル性のポリヌクレオチド識別タグを用いたマルチプレックスパイロシーケンシング | |
Furuya et al. | Quantitative PCR detection of feline morbillivirus in cat urine samples | |
Kim et al. | Differential diagnosis of Brucella abortus by real-time PCR based on a single-nucleotide polymorphisms | |
CN112739833A (zh) | 利用巢式RPA技术检测SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用 | |
RU2550257C2 (ru) | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ ШТАММОВ Yersinia pestis СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА МЕТОДОМ ПЦР С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ | |
CN111607658A (zh) | 用于人类真菌感染检测的引物探针系统、试剂盒及检测方法 | |
RU2612137C1 (ru) | Способ идентификации подвидов возбудителя туляремии Francisella tularensis subsp. tularensis, Francisella tularensis subsp. mediasiatica и Francisella tularensis subsp. holarctica | |
RU2471872C1 (ru) | Способ дифференциации штаммов yersinia pestis различных подвидов и биоваров методами полимеразной цепной реакции и мультилокусного сиквенс-типирования | |
CN109811073B (zh) | 双重pcr早期快速检测无乳链球菌和海豚链球菌的引物及其应用 | |
RU2565554C2 (ru) | СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БИОВАРОВ И ГЕНОВАРИАНТОВ ШТАММОВ Yersinia pestis ОСНОВНОГО ПОДВИДА С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ | |
RU2496882C2 (ru) | Способ дифференциации штаммов возбудителя чумы основного подвида средневекового и античного биоваров методом полимеразной цепной реакции | |
RU2715625C1 (ru) | Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации вируса западного нила 1 генотипа | |
KR102076343B1 (ko) | 실시간 lamp법을 이용한 아데노바이러스 55형 검출용 조성물 및 이의 용도 | |
CN107937584B (zh) | 一种肉品沙门氏菌分子检测试剂盒及其非诊断性检测方法 | |
RU2478717C1 (ru) | Способ дифференцирования подвидов туляремийного микроба | |
RU2486252C1 (ru) | СПОСОБ ВИДОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ШТАММОВ Yersinia pseudotuberculosis ОТ Yersinia pestis И Yersinia enterocolitica | |
RU2404256C1 (ru) | Способ подвидовой дифференциации штаммов возбудителя чумы методом секвенирования | |
CN113549709A (zh) | 利用巢式RPA技术检测SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用 | |
RU2705813C1 (ru) | Способ идентификации штаммов yersinia pestis средневекового биовара с последующей дифференциацией по филогенетической принадлежности методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов | |
CN110592270A (zh) | 锦鲤疱疹病毒(khv)的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
RU2425891C1 (ru) | Способ дифференциации штаммов возбудителя чумы основного и неосновных подвидов и возбудителя псевдотуберкулеза методом полимеразной цепной реакции | |
RU2737396C1 (ru) | Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации вируса западного нила 4 генотипа (west nile virus lineage 4) | |
RU2621869C1 (ru) | Способ подвидовой дифференциации штаммов возбудителя чумы методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени | |
CN103757110A (zh) | 一种霍乱弧菌分析分型试剂盒 | |
RU2738358C1 (ru) | Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченых зондов и способ выявления ДНК возбудителей сапа и мелиоидоза методом ПЦР с детекцией продукта в режиме реального времени |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160415 |