RU2611040C1 - Набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli и способ выявления возбудителя Acidovorax citrulli - Google Patents

Набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli и способ выявления возбудителя Acidovorax citrulli Download PDF

Info

Publication number
RU2611040C1
RU2611040C1 RU2016105552A RU2016105552A RU2611040C1 RU 2611040 C1 RU2611040 C1 RU 2611040C1 RU 2016105552 A RU2016105552 A RU 2016105552A RU 2016105552 A RU2016105552 A RU 2016105552A RU 2611040 C1 RU2611040 C1 RU 2611040C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
primers
citrulli
seq
dna
pathogen
Prior art date
Application number
RU2016105552A
Other languages
English (en)
Inventor
Елена Владимировна Каримова
Юрий Андреевич Шнейдер
Ирина Павловна Смирнова
Original Assignee
федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) filed Critical федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН)
Priority to RU2016105552A priority Critical patent/RU2611040C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2611040C1 publication Critical patent/RU2611040C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
    • C12Q2527/101—Temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
    • C12Q2527/113—Time
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2565/00—Nucleic acid analysis characterised by mode or means of detection
    • C12Q2565/10—Detection mode being characterised by the assay principle
    • C12Q2565/125—Electrophoretic separation

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Группа изобретение относится к молекулярной микробиологии. Предложены набор праймеров и способ для выявления возбудителя Acidovorax citrulli в семенах и вегетативных частях растений семейства Cucurbitaceae. Праймеры специфичны к 16S рибосомальной РНК и представляют собой АС-1 F: 5'-ATGGTGTGTTCTTCGGGACC-3' (SEQ ID NO:А) и АС-1 R: 5'-ATCGGCGATCTCTTCGTGTC-3' (SEQ ID NO:В). Для выявления возбудителя A. citrulli получают ДНК из растительной ткани. Осуществляют амплификацию полученной ДНК с праймерами SEQ ID NO: A и SEQ ID NO: В. Начальную денатурацию проводят при 96°C в течение 5 мин. Далее проводят 35 циклов денатурации при 96°C в течение 5 с. Осуществляют отжиг при 63°C в течение 30 с и элонгацию при 72°C в течение 30 с. Финальную элонгацию проводят при 72°C в течение 5 мин. Детектируют продукт амплификации методом электрофореза. Изобретения обеспечивают высокую чувствительность, позволяя выявлять A. сitrulli в концентрации до 102 КОЕ/мл, а также приводят к сокращению времени анализа. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.

Description

Изобретение относится к молекулярной микробиологии, экологии, растениеводству, к сфере карантина растений, в частности к специфичным праймерам для выявления возбудителя Acidovorax citrulli (A. citrulli) в семенах и тканях растений семейства Cucurbitaceae, и может быть использовано в фитосанитарной диагностике данного возбудителя.
В качестве ближайшего аналога (прототипа) выбраны олигонуклеотидные праймеры для выявления возбудителя Acidovorax avenae subsp. citrulli в тканях арбузов и дынь, с последовательностью олигонуклеотидов SEQ. ID NO: 1 и SEQ. ID NO: 2 [WO 2004/013291 А2, (SEMINIS VEGETABLE SEEDS, INC., US) 12.02.2004, Д1]. Из указанного источника также известен способ определения возбудителя Acidovorax avenae
Figure 00000001
citrulli с использованием олигонуклеотидных праймеров SEQ. ID NO: 1 и SEQ. ID NO: 2, включающий следующие стадии:
- получение ДНК из растительной ткани или чистой культуры микроорганизма;
-амплификацию полученной ДНК с праймерами, содержащими олигонуклеотидную последовательность SEQ. ID NO: 1 и SEQ. ID NO: 2;
- детектирование продукта амплификации как индикатора присутствия патогена в исследуемом образце.
Недостатком [Д1] является отсутствие селективности праймеров к 16S рибосомальной РНК при проведении полимеразной цепной реакции (ПЦР), что не позволяет идентифицировать возбудителя до вида бактерии.
Техническим результатом, достигаемым при осуществлении настоящего изобретения, является высокая специфичность синтезированных праймеров к 16S рибосомальной РНК, комплементарных к участку гена leucine-rich repeat ribonuclease inhibitor, позволяющих амплифицировать фрагмент комплементарной ДНК возбудителя A. citrulli с планируемым размером продукта 140 п.о. для проведения диагностики методом ПЦР, высокая чувствительность способа выявления возбудителя A. citrulli, а также сокращение времени проведения диагностической работы с подкарантинным материалом растений.
Технический результат достигается тем, что предложен набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli в семенах и вегетативных частях растений семейства Cucurbitaceae, специфичных к 16S рибосомальной РНК:
Figure 00000002
Figure 00000003
Технический результат достигается также тем, что способ выявления возбудителя A. citrulli в семенах и вегетативных частях растений семейства Cucurbitaceae включает получение ДНК из растительной ткани, амплификацию полученной ДНК с праймерами, детектирование продукта амплификации методом электрофореза, причем для амплификации используют праймеры SEQ. IDNO: A, SEQ. ID NO: В по п. 1, а амплификацию проводят по следующему протоколу: начальная денатурация при температуре 96°C в течение 5 минут, далее проводят 35 циклов, включающих денатурацию при температуре 96°C в течение 5 секунд, отжиг при температуре 63°C в течение 30 секунд и элонгацию при температуре 72°C в течение 30 секунд, при этом финальную элонгацию проводят при температуре 72°C в течение 5 минут.
Существенным отличием работы с данными праймерами является:
1) высокая специфичность праймеров к 16S рибосомальной РНК и чувствительность, что позволяют выявлять ДНК возбудителя A. citrulli в семенах и вегетативных частях растений при низкой концентрации возбудителя A. citrulli, а также идентифицировать бактериальную культуру;
2) высокая температура отжига праймеров (63°C), что снижает вероятность образования неспецифических продуктов реакции;
3) использование данных праймеров для ПЦР совместимо с этапом выделения ДНК различными коммерческими наборами, такими как «НК-М-Сорб», «ДНК-Экстран-3», «ДНК-Экстран-4» - ЗАО «Синтол» (Россия), «Проба ГС» - ООО «АгроДиагностика» (Россия), «DNeasyKit» (Qiagen, США).
Предложенное изобретение поясняется следующими приложениями.
Приложение 1. Фиг. 1. Олигонуклеотидные последовательности праймеров для выявления патогена Acidovorax citrulli.
Приложение 2. Фиг. 2. Электрофореграмма продуктов амплификации при проверке подлинности и отработке температуры отжига праймеров АС-1 F/R (1-6 - праймеры АС-1 F/R с положительным контролем; М - маркер длины продукта ПЦР) (пример 1).
Приложение 3. Фиг. 3. Выявление патогена A. citrulli в семенах и вегетативных частях растений с помощью праймеров АС-1 F/R (1-4 - зараженные возбудителем A. citrulli семена и вегетативные части растений; 5 - слабозараженный возбудителем A. citrulli образец растения; 6 - отрицательные контроль; М - маркер длины продукта ПЦР (пример 3).
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.
Пример 1. Проверка подлинности для синтезированной пары праймеров.
При проверке подлинности для данной пары праймеров предварительно в отдельной пробирке готовили смесь для ПЦР следующего состава: Master-Mix (5Х MasCFETagMIX - 2025 не окрашенный) (Диалат, Россия) по 5 мкл на образец, праймеры прямые и обратные - по 0,75 мкл каждого (10 пмоль/мкл) на образец. После чего к общему объему добавляли 94,5 мкл воды, свободной от ДНК, и 30 мкл целевой ДНК возбудителя. Смесь тщательно перемешивали и переносили в чистые промаркированные пробирки по 25 мкл в каждую. ПЦР-амплификацию проводили согласно следующему протоколу: начальная денатурация при температуре 96°C 5 минут, далее 35 циклов, включающих денатурацию при температуре 96°C 5 секунд, отжиг при температуре 63°C 30 секунд, элонгацию при температуре 72°C 30 секунд. Финальную элонгацию проводили при температуре 72°C в течение 5 минут. Хранение продукта при температуре +4°C. Результаты учитывали при помощи электрофореза. На электрофореграмме (Фиг. 2) наличие светлой полосы на уровне ~140 п.о. свидетельствовало о прохождении ПЦР и, соответственно, о возможности диагностировать бактерию A. citrulli.
Пример 2. Проверка специфичности синтезированных праймеров.
При проверке специфичности помимо целевой ДНК использовали ДНК других бактериальных культур. Смесь для ПЦР для каждого образца содержала: 5 мкл Master-Mix, по 0,75 мкл прямого и обратного праймера, 13,5 мкл воды, свободной от ДНК, и по 5 мкл ДНК различных бактериальных культур. ПЦР-амплификацию проводили согласно следующему протоколу: начальная денатурация при температуре 96°C - 5 минут, далее 35 циклов, включающих денатурацию при температуре 96°C - 5 секунд, отжиг при температуре 63°C - 30 секунд, элонгацию при температуре 72°C - 30 секунд. Финальную элонгацию проводили при температуре 72°C в течение 5 минут. Хранение продукта при температуре +4°C. Результаты учитывали при помощи электрофореза. На электрофореграмме видно, что неспецифичных продуктов реакции при постановке ПЦР с праймерами АС-1 F/R, подобранными для возбудителя A. citrulli, не наблюдалось. В результате реакции был получен продукт хорошего качества размером 140 п.о. Данная пара праймеров также обладала высокой чувствительностью, что в ходе наших исследований позволяло обнаружить возбудителя в концентрации до 102 КОЕ/мл.
Пример 3. Выявление патогена A. citrulli в семенах и вегетативных частях растений.
При выявлении возбудителя A. citrulli в семенах и вегетативных частях растений, необходимо было выделить ДНК из зараженного растительного материала. Для выделения ДНК возбудителя можно использовать любой доступный коммерческий набор из перечисленных выше. После выделения ДНК в чистой комнате была приготовлена смесь для ПЦР, которая содержала 5 мкл Master-Mix, по 0,75 мкл прямого и обратного праймера, 13,5 мкл воды, свободной от ДНК. Далее для ПЦР вносили по 5 мкл ДНК из зараженного растительного материала в каждую пробирку. Амплификацию проводили по следующему протоколу: начальная денатурация при температуре 96°C 5 минут, далее 35 циклов, включающих денатурацию при температуре 96°C 5 секунд, отжиг при температуре 63°C 30 секунд, элонгацию при температуре 72°C 30 секунд. Финальную элонгацию проводили при температуре 72°C в течение 5 минут. Хранение продукта при температуре +4°C. Результаты учитывали при помощи электрофореза. Наличие на электрофореграмме светлой полосы на уровне ~140 п.о. свидетельствовало о прохождении ПЦР и наличии возбудителя A. citrulli в растительном образце, отсутствие полосы - отсутствие искомого возбудителя в растительном материале (Фиг. 3).
Таким образом, предложенная пара олигонуклеотидных праймеров обеспечивает высокую чувствительность и сокращает время при выявлении данного патогена.

Claims (4)

1. Набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli в семенах и вегетативных частях растений семейства Cucurbitaceae, специфичных к 16S рибосомальной РНК:
АС-1 F: 5'-ATGGTGTGTTCTTCGGGACC-3' (SEQ ID NO: А);
АС-1 R: 5'-ATCGGCGATCTCTTCGTGTC-3' (SEQ ID NO: В).
2. Способ выявления возбудителя A. citrulli в семенах и вегетативных частях растений семейства Cucurbitaceae, включающий получение ДНК из растительной ткани, амплификацию полученной ДНК с праймерами, детектирование продукта амплификации методом электрофореза, отличающийся тем, что для амплификации используют праймеры SEQ ID NO: A, SEQ ID NO: В по п. 1, а амплификацию проводят по следующему протоколу: начальная денатурация при температуре 96°С в течение 5 мин, далее проводят 35 циклов, включающих денатурацию при температуре 96°С в течение 5 с, отжиг при температуре 63°С в течение 30 с и элонгацию при температуре 72°С в течение 30 с, при этом финальную элонгацию проводят при температуре 72°С в течение 5 мин.
RU2016105552A 2016-02-18 2016-02-18 Набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli и способ выявления возбудителя Acidovorax citrulli RU2611040C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016105552A RU2611040C1 (ru) 2016-02-18 2016-02-18 Набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli и способ выявления возбудителя Acidovorax citrulli

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016105552A RU2611040C1 (ru) 2016-02-18 2016-02-18 Набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli и способ выявления возбудителя Acidovorax citrulli

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2611040C1 true RU2611040C1 (ru) 2017-02-20

Family

ID=58458661

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016105552A RU2611040C1 (ru) 2016-02-18 2016-02-18 Набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli и способ выявления возбудителя Acidovorax citrulli

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2611040C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115044687A (zh) * 2022-06-17 2022-09-13 中国热带农业科学院三亚研究院 一种西瓜果斑病菌巢式pcr检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6146834A (en) * 1999-09-10 2000-11-14 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture PCR primers for detection of plant pathogenic species and subspecies of acidovorax
US6423499B1 (en) * 1999-09-10 2002-07-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture PCR primers for detection and identification of plant pathogenic species, subspecies, and strains of acidovorax
WO2004013291A2 (en) * 2002-08-01 2004-02-12 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Primers and primer sets for use in methods to detect the presence of acidovorax avenae subsp. citrulli
RU2535983C1 (ru) * 2013-12-17 2014-12-20 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА ВОЗБУДИТЕЛЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПЯТНИСТОСТИ ТЫКВЕННЫХ КУЛЬТУР (Acidovorax citrulli)

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6146834A (en) * 1999-09-10 2000-11-14 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture PCR primers for detection of plant pathogenic species and subspecies of acidovorax
US6423499B1 (en) * 1999-09-10 2002-07-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture PCR primers for detection and identification of plant pathogenic species, subspecies, and strains of acidovorax
WO2004013291A2 (en) * 2002-08-01 2004-02-12 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Primers and primer sets for use in methods to detect the presence of acidovorax avenae subsp. citrulli
RU2535983C1 (ru) * 2013-12-17 2014-12-20 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА ВОЗБУДИТЕЛЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПЯТНИСТОСТИ ТЫКВЕННЫХ КУЛЬТУР (Acidovorax citrulli)

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SONG W. Y. et al. "Use of PCR for rapid identification of Acidovorax avenae and A. avenae subsp. citrulli", Pseudomonas syringae and related pathogens. 2003, p.531-544. *
WALCOTT R. R. et al. "Progress towards a commercial PCR-based seed assay for Acidovorax avenae subsp. citrulli", Seed Science and Technology, 2006, v.34, no.1, p.101-116. *
WALCOTT R. R. et al. "Progress towards a commercial PCR-based seed assay for Acidovorax avenae subsp. citrulli", Seed Science and Technology, 2006, v.34, no.1, p.101-116. SONG W. Y. et al. "Use of PCR for rapid identification of Acidovorax avenae and A. avenae subsp. citrulli", Pseudomonas syringae and related pathogens. 2003, p.531-544. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115044687A (zh) * 2022-06-17 2022-09-13 中国热带农业科学院三亚研究院 一种西瓜果斑病菌巢式pcr检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2420595C2 (ru) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ИНТЕРЕС БАКТЕРИИ В ЖИВОМ СОСТОЯНИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ рРНК В КАЧЕСТВЕ МИШЕНИ
Chaban et al. Evaluation of a Campylobacter fetus subspecies venerealis real-time quantitative polymerase chain reaction for direct analysis of bovine preputial samples
Bölske et al. Diagnosis of paratuberculosis by PCR.
RU2611040C1 (ru) Набор праймеров для выявления возбудителя Acidovorax citrulli и способ выявления возбудителя Acidovorax citrulli
EP1937836A1 (en) Control of preservation by biomarkers
CN107849566B (zh) 用于检测白粉病的方法和试剂盒
EP0943010B1 (fr) Procede de mise en evidence de contaminants microbiologiques vivants dans un echantillon de produit a usage alimentaire
Swaran Direct PCR in forensic science-an overview
Soto et al. Leprosy diagnosis: an update on the use of molecular tools lucrecia
JP4899009B2 (ja) ＬＡＭＰ法を用いたクロストリディウム・ディフィシルｔｏｘｉｎＢ遺伝子検出方法およびこの方法に用いるプライマーセット
JP3525259B2 (ja) ペクチネータス属菌の検出
JP5595612B1 (ja) 肌分析用プライマーセット及び肌の検査方法
JP6156824B2 (ja) ヨーネ菌検出用プライマー及びそれを用いたヨーネ菌の検出方法
CN107937584B (zh) 一种肉品沙门氏菌分子检测试剂盒及其非诊断性检测方法
JP2016000015A (ja) 食中毒菌検出用担体、及び食中毒菌検出用キット
JP2007189980A (ja) 黄色ブドウ球菌検出のためのプライマーおよびそれを用いた検出法
KR101448890B1 (ko) 멍게물렁증을 일으키는 병원성 편모충 검사용 프로브와 프라이머를 이용한 검사키트 및 검사방법
KR101336948B1 (ko) 쉬겔라 소네이 검출방법
RU2435852C1 (ru) ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК Mycobacterium paratuberculosis - ВОЗБУДИТЕЛЯ ПАРАТУБЕРКУЛЕЗА МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)
JP2006345844A (ja) トマト萎凋性病害菌を間接的に識別できる分子マーカー
KR101603728B1 (ko) 벼 흰잎마름병 진단용 조성물
Bukte et al. Rapid serum agglutination, cultural isolation and PCR for detection of M. gallisepticum and M. synoviae infection in poultry
KR101686434B1 (ko) 벼 흰잎마름병균 hb01014 균주 및 이의 진단용 조성물
Acosta et al. Leprosy Diagnosis: An Update on the Use of Molecular Tools
KR101336947B1 (ko) 쉬겔라 플렉스네리 검출방법

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200219