SU988866A1 - Способ культивировани вSснеRIснIQ coLI нв 1100 Ry-13,продуцента рестриктазы - Google Patents

Description

9 НОИ среды одного и того же состава 5 . После проведени  балансировки исходной питательной среды установлено что дл  штамма .coli НВ 1100 RY-1 компоненты питательной среды должны находитьс  в следующих соотношени х: NHji.: глюкоза: , «1:6,7:0,3:10,8:3,2 (1), Полученное соотношение между компонентами  вл етс  однозначным дл  данной культу ры. Недостатком этого способа  вл етс  то, что Сбалансированна  среда используетс  недостаточно эффективно и не позвол ет получить высокого выхода продуцента. Цель изобрегени  - увеличение выхода биомассы. Поставленна  цель достигаетс  тем ЧТО; согласно способу культивировани  Escherlchia coli НВ 1100 RY-13f продуцента рестриктазы, предусматривающему посев продуцента и выращивание его на сбалансированной по удельным ростовым свойствам компонен тов питательной среды одного и того же состава, посев продуцента осуществл ют в 1/10 часть Питательной среды, а при достижении в процессе выращивани  уровн  растворимого кисл рода бО-70 от насыщени  провод т подпитку среды равными порци ми оставшейс  части последней. П р и м е р 1. Выращивание Е. co НВ 1100 RY-13 провод т на несбалансированной питательной среде в ферментере с рабочим объемом 350 мл. Оснащенном рН и рО датчиком при , Величину рН в процессе роста продуцента поддерживают автоматичес ки на уровне добавлением 0,1 NaOH Аэраци  составл ет 1 объем воздуха йа 1 объем культуральной жидкости в минуту. Число оборотов выбирают таким , чтобы кислород не был лимитирующим фактором роста микроорганизма . В опыте это значение находитс  в пределах 400-700 об/мин. Рост биомассы оценивают по измерению оптической плотности на фотокалориметре фЭК-5бМ с последующим пересче том на сухой вес по калибровочной кривой. Подпитку провод т раствором глюкозы с концентрацией kQ г/л при достижении концентрации растворенно го кислорода 70% от насыщени . Величина подпиткисоставл ет 5 мл. Вы ход биомассы при таком способе куль 4 тивировани  составл ет 7,2 г/л по сухому весу при суммарном расходе глюкозы 15 г/л. П р и м е р 2. Выращивание Е.сЬП НВ 1100 провод т в тех же услови х, что и в примере 1, но в качестве питательной среды и субстрата используют сбалансированную питательную среду, компоненты которой удовлетвор ют соотношению С Перед посевом в ферментер внос т такую часть среды, чтобы концентраци  компонентов была, г/л: гидролизат рыбной муки NH 0,751 глюкоза k; N9804-7HjО 0,23; Na2.HP048, КНа,Р04 2,«. Подпитку как и в предыдущем примере провод т при достижении уровн  растворенного кислорода 70 от насыщени , Количество концентрата питательной среды, вносимого за один раз при подпитке, равно 2 мл. Выход биомассы составл ет 11,0 г;/л по сухому весу при суммарном расходе глюкозы 8 г/л, т.е. выход биомассы увеличен в 1,7 раза. Дополнительные эксперименты показывают , что предел, до которого можно проводить разбавление исходной питательной среды, равен 1/25. }1спользование изобретени  позвол ет повысить выход биомассы, а так-I же снизить количество неутилизированных компонентов в сточных водах за счет использовани  сбалансированной питательной среды. формула изобретени  Способ культивировани  Escherichia coll НВ 1100 RY-13, продуцента рестриктазы, предусматривающий по-; сев Продуцента и выращивание его на сбалансированной по удельным ростовым свойствам компонентов питательной среды одного и того же состава,, отличающийс  тем, что, с целью увеличени  выхода биокрссы, посев продуцента осуществл ют в 1/10 часть питательной среды, а при достижении в процессе выращивани  уровн  растворимого |{ислорода 6070 от насыщени  провод т подпитку среды равными порци ми оставшейс  части последней. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Greene P.J, et al The Е. coLi. restriction endonuclease, Metnods in neolecular biology v. 7 ONA repU catJon, 197, p. 87-111. 2.Nishio N. et at., Abed-batch culture of methanol-utiIiztng bacteria with ph-stat, J.Ferm Fechnol, 1977, 55 p. 151-155. 3.Vano T. et a1 Fedbatch culture of methand-utiUzing bacteruen with DO-stat, J.Ferm. Fechnol, 1978, 58, fj. tl6-l20. 9 6 i. Гуревич Ю.Л. и др. Зависимость экономического коэффиц е та ат концентрации субстрата в пфрйодической культуре микрооцганиэмов, Ди нймика биологических систем. Горький , 1977,, с. 52-55. 5. Васильев Н.Н. и др. Моделирование процессов микробиологического синтеза . Н., Лесна  промышленность, 1975 (прототип)

Claims (4)

формула изобретения оснащенном pH и р0^_ датчиком при 37°С, Величину pH в процессе роста продуцента поддерживают автоматически на уровне 7,2 добавлением 0,1 NaOH. Аэрация составляет 1 объем воздуха На 1 объем культуральной жидкости в минуту. Число оборотов выбирают таким, чтобы кислород не был лимитирующим фактором роста микроорганизма. В опыте это значение находится в пределах 400-700 об/мин. Рост биомассы оценивают по измерению оптической плотности на фотокалориметре ФЭК-56М с последующим пересчетом на сухой вес по калибровочной кривой. Подпитку проводят раствором глюкозы с концентрацией 140 г/л при достижении концентрации растворенного кислорода 70? от насыщения. Величина подпитки'составляет 5 мл. Выход биомассы при таком способе кульСпособ культивирования Escherichia coli НВ 1100 RY-13, продуцента рестриктазы, предусматривающий пот сев продуцента и выращивание его на сбалансированной по удельным ростовым свойствам компонентов питатель45 ной среды одного и того же состава,, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода био*рссы, посев продуцента осуществляют в 1/10 часть питательной среды, а при до50 стижении в процессе выращивания уровня растворимого Кислорода 6070? от насыщения проводят подпитку среды равными порциями оставшейся части последней. 55 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Greene P.J, et al The E. col J restriction endonuclease, Metnods

5 9'

In neolecular biology v. 7 ONA replication, 1974., p. 87-111.

2, Nishio N. et al., Abed-batch culture of methanol-utlIIzing bacteria with ph-stat, J.Ferm Fechnol, 1977, 55, p. 151-155.

3. Vano T. et al Fedbatch culture of methand-utillzing bacteruem with DO-stat, J.Ferm. Fechnol, 1978, 58, p. 416-420.

1866 6

4. Гуревич Ю.Л. и др. Зависимость экономического коэффициента от концентрации субстрата в периодической культуре микроорганизмов, Дм* 5 нймика биологических систем. Горький, 1977,. с. 52-55«

S, Васильев Н.Н. и др. Моделирование процессов микробиологического син* теза. М., Лесная промышленность, о 1975 (прототип).