SU928995A3 - Способ получени делипилизированной сыворотки крови животных - Google Patents

Description

присутствующих в сыворотке, которую предстоит обработать. Дл  полного о мена анионов и катионов необходимо использовать достаточное количество смешанной ионообмен юй смолы, а также контролируют рН. Величина рН соответствует изоэлектрической точке липопротеинов, обычно присутствующих в сыворотке.. Дл  достижени  снижени  величины рН, вызывающего осаждение липопротеинов из сыворотки одновременно с ионным обменом, необходимо использовать избыток катионообменной смолы т.е. необходимо, чтобы в используемую смешанную анионо- катионообмен-, ную смолу был введен избыток катионобменной смолы. Это избыточное коли чество катионообменной смолы определ ют путем титровани  данного объема сыворотки, например 25 мл, разбавленной (1,ООЛ) сол ной кислотой до рН . Объем кислоты, пошедшей на титрование, обозначают как титр сыворотки и, зна  этот титр, используют соответствующее количество катионообменной смолы. Дл  получени  делипилизированной /сыворотки используют замороженную человеческую сыворотку. Ей дают отта ть , при 32 - 37 С, использу вод  ную баню. Отта вшую сыворотку осмат ривают, нет ли в .ней .видимых призна ков липемии или гемолиза, т.е. сыво ротка должна быть прозрачной и прак тичеЬки бесцветной. Если сыворотка визуально выгл дит красной или розо вой по цвету или мутной на просвет, то эта сывор5отка непригодна дл  использовани . Кроме того, сыворотка не должна содержать патогенных микроорганизмов . При смешении ионообменной смолы и сыворотки осуществл ют -посто нный контроль за изменени ми величины рН В первые несколько минут после прибавлени  смолы к сыворотке величина рН увеличиваетс  по сравнению с первоначальной до 9,0 - 10,3- Дл  снижени  рН и удалени  ионов из сыворотки обычно используют избыток смешанной ионообменной смолы с тем, чтобы компенсировать некоторое умень шение эффективности смолы, вызванное отложением липопротеинового осадка на поверхности гранул смолы в процес се преципитации липопронтеинов. При необходимости к сыворотке добавл ют в 1,,15 раз больше по сравнению с теоретически вычисленным количество смешанной ионообменной смолы., После того, как рН достигает 5,21:0,3 (это обычно занимает 8 15 мин|, перемешивание смеси ионообменной смолы и сыворотки прекращают и надосадочную сыворотку (суперна-. тант) отдел ют от смолы и выпавших в осадок липопротеинов. Отделение супернатанта от осадка осуществл ют любым известным способом, таким как фильтрование, декантаци , отсасывание надосадочной сыворотки. Величину рН сыворотки, отделенной от осадка, довод т затем до 4,0 t1,0 добавлением сол ной кислоты, чтобы обеспечить низкую ферментативную активность в сыворотке. Желательно, чтобы активность фермента креатинкиназы (КК не превышало 3 МЕ/л. Дл  этого сыворотку выдерживают при рН А, О to, 2 в течение длительного времени, чтобы обеспечить полное завершение денатурации. Этот процесс контролируют, периодически провод  анализ сыворотки дл  определени  активности КК. Эту сыворотку можно оставить на ночь ,на хранение при конечном значении рН, если хранить ее при k С, рН сыворотки довод т до конечного значени , равного 7,,3, путем добавлени  подход щего буферного раствора, такого как 2-амино2-оксиметил-1 ,3 пропандиола. Эту делипилизированную сыворотку можно хранить длительное врем  в замороженном состо нии или при в течение 48 ч (без добавлени  микробных ингибиторов). Эту сыворотку можно использовать дЛ  клинических анализов. П р и м е .р. Приготовление смешанной анионо-катионообменной смолы. Универсальную высокоемкую сильнокислотную катионообменную смолу Дуолйт б-РС-301 и высокопористую сильноосновную анионообменную смолу ДуолитGPC-316 смешивают между собой , полученную смесь тщательно перемешивают с целью гомогенизации в смесителе до получени  гомогенной смеси, которую можно хранить в герметично закрытых сосудах или контейнерах дл  предотвращени  изменени  воздушно-сухого веса и нежелательного взаимодействи  с атмосферной двуокисью углерода.

Claims (2)

1. Формула изобретения

   30 1. Способ получения делипилизированной сыворотки крови животных путем смешивания сыворотки с анионообменными смолами, отличающийся тем, что, с целью повыше₃₅ ния степени делипилизации и отделения электролитов от сыворотки, смешивают сыворотку крови с анионо-катионо обменными смолами, доводя pH до 4,9“ 5,5, отделяют надосадочную жидкость, доводят pH надосадочной жидкости до 3,0-5,0, выдерживают надосадочную жидкость до снижения ферментативной активности до 1-3 МЕ/л.
2. 2. Способ поп. 1, отличаю- ₄₅ щ и й с я тем, что pH надосадочной жидкости доводят до 6,7“7,6 путем добавления 2-амино-2-оксиметил-1,3“ пропандиола.

   ₅₀ Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

   1. A. Noma. S imu 1 tatceoas Determination of Serum Cholesterol in Hiqh and Low Density Lipoproteins. - Cli5$ nical Chem, 1978, v. .№ 24, p. 1504.

   • 3

   Тираж 717 Подписное

   Ужгород, ул. Проектная, 4

   Филиал ППП Патент, г.