SU912753A1 - Способ получени глюкоамилазы - Google Patents

Description

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ

IV .Изобретение относитс  к ферментной отрасли микробиологической промышленности и может быть использовано при производстве ферментных првпаратов глюкоамилазы на основе глу . бинного спосйба культивировани ,

Известны способы получени  фермен тов., позвол ющие интенсифицировать процесс культивировани  продуцентов путем дробной подачи питательных веществ .

При получении цефалоспорина культ турой Streptomyces clavuligerus установлено , что аммонийный азот усиливает рост микроорганизма, но ингиби ует антибиотикообразование l. Ингибирующее действие солей аммони  на образование антибиотика сказываетс  лишь при добавлении их к средам в начале ферментации или через 2А ч, а более позднее добавление не сказываетс  на продуцирующую способность микроорганизма, т.е. соЛИ аммони  не св заны непосредствен но с механизмом биосинтеза.

Известен способ получени  глюкоамилазы при глубинном культивировании продуцентов из рода Asperg i BEus на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и стимул торы биосинтеза ферментов, где предусматриваетс  добавление э процессе роста продуцента

10 аммонийного азота в виде газообразного или водного раствора аммиака, количество которого регулируетс  поддержанием величины рН культуральной жидкости в пределах 5)510,2. При

15 этом конечна  активность в культуральной жидкости повышаетс  на BQ% по сравнени|р с подачей аммонийного азота в виде (МН4.)(НР04. в количестве 1,0% непосредственно в питательную

Claims (2)

1. 20 . среду перед началом культивировани  t2. Недостатки известного способа заключаютс  в том, что основное воздей3 91 ствие аммонийного азота на культуру осуществл етс  только в стадии актив ного роста культурыJ не учитываютс  оптимальные концентрации азога на разных стади х роста и развити  продуцента ) не обеспечиваетс  оптимальное соотношение углерода и азота в начальном периоде образовани  биомассы{ не создаютс  услови  дл  максимального накоплени  глюкоамилазы в конце культивировани . Цель изобретени  - увеличение выхода и активности глюкоамилазы и сокращение срока культивировани  продуцента . Поставленна  цель достигаетс  тем что согласно способу получени  глюкоамилазы , предусматривающему глубинное культивирование продуцентов и рода AspergiFtus на питательной ереде , содержащей источник углерода, ис точник аммонийного азота, минеральны соли и стимул торы биосинтеза фермам тов, в процессе культивировани  концентрацию аммонийного азота в сре де измен ют постадийно: источник аммонийного азота ввод т в количестве 0,1-0, г/л на стадии экспоненциального роста культуры до начали активного синтеза глюкоамилазы, в период активного синтеза фермента концентра цию аммонийного азота увеличивает до 0,25-1,0 г/л, а по окончании синтеза фермента до начала автолиза культуры снижают до 0,,5 г/л пу тем разбавлени  культуральной жидкое ти стерильной водой. В качестве источника аммонийного азота используют двузамещенный фосфорнокислый аммоний или трехзамещенный фосфорнокислый аммоний, или гидро окись аммони , или аммониевые соли молочной или лимонной кислот, или аммонийные поликарбоновые кислоты,которые ввод т в культуральную жидкость в виде стерильных растворов. Способ осуществл етс  следующим образом. Готов т питательную среду, содержащую ,: кукурузна  мука 7, кукурузный крахмал 5, БВК 2,0 и (NN4) «i НР04 0,05-0,2. После стерилизации и охлаждени  среду, в которой содержитс  0,1-0, г/л аммонийного азота, засееают посевн1 1м материалом грибов из рода AspergiiFus. После 2k ч культивйровани  в культуральную жидкость ввод т источники аммонийного азота в виде стерильного раствора в количест 4 вах, обеспечивающих концентрацию аммонийного азота на стадии активного биосинтеза, в пределах 0,25 1,0 г/л. После 60-90 ч культивировани  к культуральной жидкости добавл ют 20-301 стерильной воды, снижа  таким образом концентрацию аммонийного азота в среде до 0,05-0,5 г/л. Культивирование продолжают до макси.мальиого накоплени  .тлюкоамилазной акг i тивности (72-110 ч pocta). Пример 1 (контроль). В биолафит емкостью 50 л загружают при коэффициенте заполнени  0,5 питательную среду с оптимальными соотношением компонентовД: мука кукурузна  7, крахмал кукурузный 5 БВК 2,0, (NH),HPO 0,1. После стерилизации и охлаждени  среды, в которой содержитс  0,2 г/л аммонийного азота,производ т засев посевйым материалом гриба Aspergl BEus nlger Т-ЗЗ- Культи - вирорание продуцента глюкоамилазы сэсуществл ют в течение ч с подачей раствора аммиака(NH40H) до поддер- жани  рН в процессе культивировани  на уровне 5,5i 0,2. Активность глю- ; коамилазы в конце культивировани  составл ет 80 ед/мл. П р и м е р 2. Подготовку и за-.) сев питательной среды осуществл ют как в примере 1, но начальна  концентраци  аммонийного азота в среде составл ет 0,1 г/л за счет добавлени  0,5% ()oPO. В качестве продуцентй используют посевной материал Aspergi Eus awamori-122. После 2k ч культивировани  в культуральную жидкость ввод т стерильный раствор C4H50HNH4 в количестве , поддерживающем концентрацию аммонийного азота в пределах 0,25 /л до 60 ч роста, затем в культуральную жидкость добавл ют 20 стерильной воды до содержани  аммонийного ; азота 0,05 г/л и культивирование продолжают до 72 ч роста. Конечна  активность в культуральной жидкости 126 ед/мл. Пример 3- Подготовку и засев питательной среды провод т аналогично примеру 2 за исключением начальной концентрации аммонийного азота в среде , котора  составл ет 0,k г/л за счет добавлени  0,2% ( j JtiWQ. После 2k ч культивировани ,когда концентраци  аммонийного азота снижаетс  до 0,2 г/л, в культуральную жидкость добавл ют стерильный раствор С НфОуМН в количестве, обеспечивающем содержание аммонийного азота 0,6 г/л. После 60 ч культивировани  в культуральную жидкость добавл ют 30 стерильной воды и культивировани продолжают до 90 ч роста. Конечна  активность глюкоамилазы в культуральной жидкости составл ет 138 ед/м Таким образом, предложенный способ получени  глюкоамилазы позвол ет сократить срок выращивани  продуцен тов глюкоам илазы на 30-бЭ ч за счет ускорени  роста биомассы в начале процесса, повысить глюкоамилазную ак тивность в культуралвной жидкости на 17-58 ед/мл и, соответственно, ,выход целевого продукта на 8-29 усл.к за счет интенсификации накоплени  глюкоамилазы в период активного биосинтезаJ снизить удельный расход компонентов питательной среды в .1,2-1,3 раза за счет увеличени  продуктивности процесса. Ожидаемый экономический эффект составл ет ,55 тыс. руб. Формула изобретени  1. Способ получени  глюкоамилазы путем глубинного культивировани  прю дуцентов из рода AspergiBBus на пита тельной среде, содержащей источник у лерода, источник аммонийного азота, минеральные соЛи и .стимул торы биоси теза ферментов, отличающийс   тем, что, с целью увеличени  выхода и активности глюкоамилазы и сокращени  срока культивировани  про дуцента, в процессе культивировани  концентрацию аммонийного азота в среде измен ют постадийно: источник аммонийного азота ввод т в количестве О, 1-0, А г/л на стадии экспоненциального роста культуры до начала активного синтеза глюкоамилазы, в период активного синтеза фермента концентрацию аммонийного азота увеличивают до 0,25-1 г/л, а по окончании синтеза фермента до начала автолиза культуры снижают до 0,,5 Г/ путем разбавлени  культуральной жидкости стерильной водой.
2. 2. Способ по п. 1, о т л и.ч а ющ и и с   тем, что в качестве источника аммонийного азота используют двузамещенный фосфорнокислый аммоний или трехзамещенный фосфорнокислый аммоний, или гидроокись аммони , или аммониевые соли молочной или лимонной кислот, или аммонийные поликарбоновые кислоты , при этом в культуральную жидкость их внос т в виде стерильных растворов. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Canadian GournaB of Microbiology . 1979, 25, № 1, 61-67. г. Патент США № 3660236, кл. С 12 D 13/10, опублик. 1972 (прототип ) ,