SU1073282A1 - Способ получени целлюлозолитических ферментов - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯЦЕЛЛЮЛОЗОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ путем глубинного культивировани  продуцента Trichoderma viride 44 на питательной среде, содержащей свекловичный жом, однозамещенный фосфат ка .ли , сульфат магни , сульфат аммони , сульфат хрома и воду, отличающийс  тем, что, с целью повышени  активности целлюлаз , в культуральную жидкость на экспоненциальной стадии роста дополнительно ввод т сульфат хрома в два приема: сначала на 24-32 ч культивировани  в количестве 0,20 ,4 г/л и затем на 72-96 ч в количестве 0,3-0,5 г/л. 8

Description

Vl

00 ic

00

tc Изобретение относитс  к ферментной подотрасли микробиологической промышленности и может быть использовано дл  получени  целлюлаэы методом глубинного культивировани  микроскопических грибов на жидких питательных средах. Известен способ получени  целлюлозолитических ферментов путем глубинного культивировани  продуцента - Trichoderma viride 44, заключающийс  в применении в качест ве стимул тора роста и целлюлозолитической активности продуцента целлюлазы экстрактов из биомассы, образованных при термофильном метановом брожении мелассо-зерновой, ацетонобутиловой барды, которые содержат вещества, обладающие способностью ускор ть рост и увеличивать накопление мицели  и повышать С и Cj гриба Trichoderma viride Cl. АКТИВНОСТЬ целлюлазы составила 8 ед.мл. Однако в данном способе, не учитывйютс  оптимапьные концентрации активатора на разных стади х культивировани ; активаци  роста и раз вити  Trichoderma viride 44 осуществл етс  недостаточно; кроме того низка ферментативна  активность . Наиболее близким к изобретению по технической сущности  вл ютс  среда и способ получени  целлюлозолитических ферментов путем глубинного культивировани  продуцента Trichoderma viride 44 на среде, со держащей свекловичный жом, однозамещенный фосфат кали , сернокислый магний, сульфат аммони , сульфат х ма и лизаты дрожжей 2. Культивирование ведут в течение 144 ч, активность ферментов . 10,4-11,2 ед/мл. Недостатками известного способа  вл ютс  низка  активность фермента и больша  продолжительность кул тивировани . Целью изобретени   вл етс  повы шение активности целлюлаз. Поставленна  цель достигаетс  тем, что согласно способу получени целлюлозолитических ферментов путем глубинного культивировани  про дуцента - Trichoderma viride 44 на питательной среде, содержаще-й свекловичный жом, однозамещенный фосфат кали , сульфат магни , суль фат аммони , сульфат хрома и воду, в культуральную жидкость на экспоненциальной стадии роста дополнительно ввод т сульфат хрома в два приема; сначала на 24-32 ч. культивировани  в количестве 0,2-0,4 г/л и затем на 72-96 ч .в количестве 0,3-0,5 г/л. Сущность способа заключаетс  в следующем. Готов т питательную среду, соержащую , вес.%: свекловичный жом 1,5-5,0 Дрожжи кормовые 0,3-1,0 Однозамещенный фосфорнойислый калий0,2-0,4 Аммоний сернокислый0 ,2-0,5 Магний сернокислый 0,02-0,05 Сульфат хрома 0/02-0,04 Вода Остальное Питательную среду.готов т путем последовательной загрузки всех компонентов при посто нном перемешивании , рН среды довод т ортофосфорной кислотой до 4,6,ввод т дополнительно. до стерилизации сульфат хрома в количестве 0,2-0,3-0,4 г/л, стерилизуют ocTptjM паром 1 ч при 0,8 ата. Охлажденную до 37°С питательную среду засеивают посевным материалом Trichoderma viride 44 и культивируют глубинным способом при посто нной аэрации культуры воздухом из расчета 1 об/об среды. По истечении 24-32 ч роста культуры в ферментер вьод т вторично сульфат хрома из расчета 0,2-0,3-0,4 г/л в виде сте- . рильного раствора на стадии активного потр.еблени  питательных веществ. Третий раз сульфат хрома ввод т на стадии активного синтеза целлюлазы на 72-96 ч роста продуцента в количестве 0,3-0,4-0,5 г/л также в виде стерильного раствора. Пример (контроль). В ферментер объемом 50 л при коэффициенте , заполнени  0,5 загружают питательную среду с оптимальными соотношени ми компонентов, мае.%: свекловичный жом 1,5.; дрожжи кормовые 0,3;. ( 0,2; 0,2; МдЗО 0,02. Все компоненты питательной среды последовательно загружают в ферментер при перемешивании (180 об/мин), аэрировании воздухом из расчета 1 об/об среды, рН среды довод т ортофосфорной кислотой до 4,6, и всю питательную среду стерилизуют острым паром 1 ч при 0,8 ата. Охлажденную до 37°С питательную среду засевают посевным материалом Trichoderma viride 44. Глубинное культивирование ведут 144 ч. Максимальна  ферментативна  активность составл ет 12 ед./мл (метод Сомоджи-Нельсона). П р и м е р 2. Подготовку питательной среды производ т аналогично примеру 1. Состав питательно.й среды ввод т дополнительно 0,2 г/л или 5 кг сульфата хрома до стерилизации . Стерилизацию и засев посевным

материалом провод т аналогично при меру 1.

После 24 ч роста культуры ввод т еще 0,2. г/л или 5 кг сульфата хрома в виде стерильного раствора. В третий раз сульфат хрома ввод т на 72. ч роста, продуцента из расчета 0,3 г/л или 7,5 кг в виде стерильиого раствора. Процесс глубинного культивировани  ведут до максимального синтеза фермента, т.е. до 108 ч роста. Ферментативна  активность целлюлаэы в этом случае соетавл ет 14 ед./ют (метод тот же).

П р и м ё р 3. Подготовку пита ,тельной среды производ т аналогично примеру 1. в состав питательной среды до стерилизации ввод т суль .фат хрома из расчета 0,3 г/л или 7,5 кг. Стерилизацию и засев питательной среды производ т аналогично примеру 1. На 28 ч роста культуры Trlchoderma viride 44 ввод т вторично 7,5 кг сульфата хрома в виде стерильного раствора, третий раз сульфат хрома ввод т на 84 ч рота культуры из. расчета 0,4 г/л или

10 кг в виде стерильного раствора. Глубинное культивирование заканчивают на 108 ч роста культуры. Ферментативна  активность целлюлазы в этом случае равна 15 ед./мл (метод тот же).

П р и м е р 4. Подготовку питательной среды производ т аналогично примеру 1. В состав питательной среды до стерилизации дополнительно ввод т 10 кг сульфата хрома из расчета 0,4 г/л. Стерилизацию и засев питательной среды производ  , аналогично примеру 1. На 32 ч роста продуцента вторично внос т 10 кг сульфата хрома из расчета 0,4 г/л в виде стерильного раствора. На 96 ч роста продуцента в третий раз внос т сульфат хрома в количестве 12,5 кг из расчета 0,5 г/л в виде стерильного раствора. Глубинное культивирование продолжают до максимального накоплени  фермента с активностью 15,5 ед./мл на 108 ч роста продуцента.

Таким образом, реализаци  изобретени  позвол ет повысить.активность целлюлаз.

Claims (1)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЗОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ путем глубинного культивирования продуцента Trichoderma viride 44 на питательной среде, содержащей свекловичный жом, однозамещенный фосфат калия, сульфат магния, сульфат аммония, сульфат хрома и воду, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целлюлаз, в культуральную жидкость на экспоненциальной стадии роста дополнительно вводят сульфат хрома в два приема: сначала на 24-32 ч культивирования в количестве 0,20,4 г/л и затем на 72-96 ч в количестве 0,3-0,5 г/л.