SU910117A3 - Способ получени продукта присоединени дипептидного производного и аминокислоты - Google Patents
Способ получени продукта присоединени дипептидного производного и аминокислоты Download PDFInfo
- Publication number
- SU910117A3 SU910117A3 SU782570052A SU2570052A SU910117A3 SU 910117 A3 SU910117 A3 SU 910117A3 SU 782570052 A SU782570052 A SU 782570052A SU 2570052 A SU2570052 A SU 2570052A SU 910117 A3 SU910117 A3 SU 910117A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- methyl ester
- phenylalanine
- product
- benzyloxycarbonyl
- ppm
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
- C07K5/06113—Asp- or Asn-amino acid
- C07K5/06121—Asp- or Asn-amino acid the second amino acid being aromatic or cycloaliphatic
- C07K5/0613—Aspartame
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
39 где R ензилоксикарбонил, пара-ме токсибензилоксикарбонил; RJJ - бензил; R -метокси, этоксй-группы; П - 1 или 2 N-замещённую аминодикарбоновую кислоту общей формулы .J S 1 и НОС-(СН2)п-СН-СОН где значени R-f и п указаны выще, подвергают взаимодействиф со сложным эфиром аминокарбоновой кислоты общей формулы НгТ -СЙ-С-Вз (Ш) И, где значени R и Rg указаны выше. При пол рном соотношении исходных .соединений формул II. и III 1:1 - 1: :3э75, в водной среде, в присутствии металлопротеазы при рН 5,, температуре 10-90 С. Продукты, полученные в процессе реакции, мало раствор мы а воде и выпадают в осадок. Кроме того, предлагаемый способ позвол ет получить оптически активный продукт присоединени дипептида и сложного эфира аминокислоты из рацематов, поскольку реакци образовани пептидно св зи при этом происходит только на L-изомерах. С другой стороны, сложны эфиры аминокислот, используемые дл проведени реакции присоединени с образованием продуктов присоединени могут быть либо, в L-форме, либо в D-форме, либо их смесью. При использовании DL-формы сложно го эфира аминокарбойовой кислоты Lизомер DL-формы сложного эфира амино карбоновой кислоты расходуетс в про цессе пептидного синтеза при получении продукта присоединени , остающий с сложный эфир аминокислоты имеет D-форму.. Если концентрации исходных вещест высоки, процесс проходит с количестве ным выходом. При использовании двух молей DL-формы сложного эфира аминокарбоновой кислоты на 1 моль L-формы N-замещенной моноаминодикарбоновой кислоты получают продукт присоединени , состо щий в основном из LL-дипептидного сложного эфира и сложного 74 эфира D-аминокарбоновой Кислоты. Полученный продукт присоединени может быть легко разделен на два частичных компонента, т. е. на LL-дипептидный эфир и сложный эфир D-аминокислоты. Таким образом, предлагаемый способ может одновременно обеспечить получение дипептидного эфира и оптическое разделение сложного эфира DL-аминокарбоновой кислоты. Отделенную D-форму или обогащенную D-форму сложного эфира аминокислоты можно рацемизовать обычным способом , и полученный продукт использовать в качестве исходного вещества в описываемом способе. При использовании DL-формы N-замещенной моноаминодикарбоновой кислоты и L-формы сложного эфира аминокислоты D-изомер из DL-формы N-зaмel43ннoй моноаминодикарбоновой кислоты, вл сь инертным, остаетс в водной среде , в результате чего может быть получен продукт присоединени LL-дипептидного сложного эфира и сложного эфира L-аминокарбон-эвой кислоты. Соответственно , если D-форму Ы замещенной моноаминодикарбоновой кислоты выдел ют из водной среды, то это моксет одновременно обеспечить получение продукта присоединени и оптическое разделение 1-замещенной DL-моноаминодикарбоновой кислоты. Если выделенную N-замещенную D-моноаминодикарбоновую кислоту рацемизировать известным способом, то полученный продукт может быть исп,ользован в качестве исходного вещества. При использовании DL-формы N-замещенной моноаминодикарбоновой кислоты и DLформы сложного эфира аминокарбоновой кислоты из водной среды может быть получена N-замещенна DL-моноаминодикарбонова кислота, а также продукт присоединени LL-дипептидного сложного эфира и сложного Эфира D-аминокарбоновой кислоты, причём указанный продукт присоединени раздел ют на компоненты, как указано выше. Одновременно может быть достигнуто образорание дипептидного сложного эфира и оптическое разделение N-замещенной DL-моноаминодикарбоновой кислоты и сложного эфира DL-аминокарбоновой кислоты. Предлагаемый способ позвол ет исключить стадии введени и удалени защитных групп вбоковой цепи, которые считаютс неизбежными в известных 59 способах, что соответственно позвол ет предотвратить потерю исходных веществ; а также использовать DL-форму исходных соединений. В обычных спосо бах с использованием фермента D-изрмер 13Ь-формы исходных веществ не нужен в реакции, и хот он не вли ет на ход реакции, но вызывает потерю исходных веществ. Однако D-форму исходных веществ можно с успехом использовать в качестве агента дл оса дени пептида с последующим их восстановлением . Таким образом, при осуществлении предлагаемого способа может быть одновременно достигнуто оптическое раз деление N-замещенной DL-аминодикарбо новой кислоты и сложного эфира DLаминокарбоновой кислоты, Продукты присоединени имеют характеристики , которые можно ожидать на основании формулы I. Например, типичный продукт присоединени , полученный реакцией М-бёнзилоксикарбоНИЛ L-аспарагиновой кислоты и метилового эфира L-фенилаланина, дает поглощение в инфракрасном диапазоне и спектр ЯМР, указанные ниже. Инфракрасный спектр: 32бО см (колебание раст жени св зи N-41) ; 3000-3200 см (коле1)ание раст жени св зи С-Н) ; Г/ч О (сложный эфир ); 172U см ( уретан); 1ббО см (1-ое амидное поглощение); 1бЗО см (карбоксилат); lijAOcM (2-е амидное поглои1ение1; и I+SO см ( деформационное колебание); 1390 см (карбоксилат); 1200 и 1290 см (С-О-С колебание раст жени св зи и 3-е амидное поглощение); 1050 см (колебание фенила в плоскости ); и и 69IJ см (Колебание монозамещенного бензольного кольца вне плоскости). . ЯМР-спектр, 6 :. (1) 2,75 ррп (2Н ( 2) 3i02 ррт (itH); (3) 3,61 ррп СЗН) 3,7 ррт (ЗН); (А) k,-k,Q ррт (ЗН); (5.) 5,05 ррт (2Н); (6) 5,82 ррт (5Н) (7) 7,3 ррт (15Н). Результаты элементарного анализа продукта присоединени оказались такими же, что и рассчитанные значени дл формулы I, где значени R{, R2., Rj и п указаны выше. Когда продукт присоединени обраб тывают сильной кислотой, такой как сол на , и полученный продукт экстра гируют из органического растворител такого как этилацетат, то из органи-г 7 6 ческого сло получают кислотное соединение . При обработке продукта присоединени указанным образом получают кислотное соединение с характеристика .ми и свойствами, отвечающими соединению формулы ;НОС-(СНг)п-СН СШ-СНС-Кз 0) в LL-форме, где R, Rg.,, RT, и n имеют те же значени , что и в продукте присоединени . Кислотное соединение, полученное из продукта присоединени при каталитическом восстановлении дает известное соединение - метиловый эфир па ртил-фенил аланина.. Результаты анализа соединений, полученные на основании инфракрасных спектров, спектр ЯМР и элементарного анализа подтверждают структуру соединени формулы I. Полностью .совпадаю - щие. результаты получены также и в случае , когда выбраны соединени с другими значени ми R , Rj, Ъ Протеазы, используемые в предлагаемом способе, вл ютс металлопротеазами , имеющими металлический ион в активном центре. Пригодными металлопротеазами вл ютс ферменты, полученные из микроорганизмов, такие как нейтральные протеазы из актиномицета, пролизин, термолизин, коллагеназа, протеаза Crotuliis atrox и т. д. Могут быть использованы также -неочищенные ферменты, такие как термоаз, тациназа-N , проназа и т, д. Чтобы подавить действие эстеразы, содержащейс в неочищенных ферментах, предпочтительно использовать ферментный ингибитор, картофельный ингибитор вместе с неочищенными ферментами. Используют тиольные протеазы, папаин или сериновые протеазы, трипсин, однако они обладают эстеразной активностью. Поэтому , во врем проведен1;1 реакции с использованием таких ферментов необходимо прин ть меры дл предотвращени гидролиза сложных эфиров. Пример 1. 1335 мг (5 ммоль) Н-бензилоксикарбонил L-аспарагиновой кислоты и 1078 мг (5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина помещают в 30 мл колбу и добавл ют 20 мл/ВОДЫ до их растворени , рИ довод т до 6 с помощью . аммиачной
791
воды. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, смесь встр хивают при 38-4оС в течение ночи. Выпавший рсадок отфильтровывают и промывают НО мл воды и сушат. Получают 1145 мг тонких игольчатых кристаллов, имеющи Y. пл. (продукт присоедине .:ни метилового эфира N-бензилоксикарбонил L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1); выход 75,5% в расчете на хлоргидрат метилового эфира-фенилаланина).
После перекристаллизации из смеси растворителей этилацетата и н-гексана физические свойства и результаты ; элементарного анализа продукта следующие: т. пл. 120-124С; (JL) + +7,} (, метанол).
Найдено, %: С 63,15; Н 6,15; N7,00
Саг.Нз HjOg
Рассчитано, %: С 63,24; Н 6,13; N 6,97.
Сн ты ИК-спектр и спектр 1Н-ЯМР продукта.
1145 мг полученного продукта раствор ют в 40 мл 1 Н. НС и трижды экстрагируют 30 мл этилацетата. Экстракты объедин ют и промывают . бер порции по 20 мл (3 раза), и сушат над безводном сульфатом магни . Раствор концентрируют и продукт перекристаллизовывают из н-гексана, получают 640 мг. Физические свойстваи результаты элементарного анализа Продукта следующие: т. пл. 115-125 С; (J) -15,3 ( метанол)
Найдено, %: С 61,52; Н 5,65; 146,57
СааНгАНгОг
Рассчитано, %: С 61,67; Н 5,65; N6,54.
Результаты инфракрасного спектра и ЯМР-спектра дают характеристики, ожидаемые в метиловом сложном эфире
N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фe7 .нилаланина.
Полученные результаты совпадают с
результатами исследовани соединени , полученного при бензилоксикарбонилировании аминогруппы метилового эфира L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa.
Метиловый эфир L-фенилаланина выдел ют из смеси сол нокислой фазы и фракции промывочной воды, отделенной при экстракции из этилацетатной фазы. Подтверждено, что соединение, полученное посредством первой реакции продукт присоединени метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира L78 ;
фенилаланина. СпектромН-ЯМР подтверждено , что их мол рное отношение составл ет 1:1.
Пример 2. 133i мг (5 ммоль) Ы-бензилоксикар6онил:-Ь-аспарагиновой кислоты и 1078 мг (5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина загружают в 30 мл колбу и к смеси добавл ют 10 мл воды, до их растворени и рН раствора довод т до 6 с помощью аммиачной воды. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина , и смесь непрерывно встр хивают при С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, сушат, получают 1504 мг продукта присоединени метилового эфира М-бензилоЛсикар6онил-L-аспартил-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина 0-0 (выход в расчете на хлоргидрат метилового эфира L-фенилаланина, т. пл. 10 }113 0 .
Пример 3. Получение продукта и обработку реакционной массы провод т аналогично примеру 2, но измен ют количество N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпарагиновой кислоты и метилового эфира L-фенилаланина на 53 мг (2 ммоль) и 863 мг (4 ммоль) соответственно, получают 1068 мг продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбoнил-L-acпapтиn-L-фeнилaлaнинa и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход 70,4% в расчете на N-бензилоксикapбoнил-L-acпapaгинoвyЮ кислоту, т. пл. 11б-119 С.
Пример 4. 534 мг (2 ммоль) N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapaгинoвoй кислоты и 863 мг (4 ммопь) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина загружают в 30 мл колбу, раствор ют в 8 мл воды, рН довод т до 6,2 с помощью -ной аммиачной воды. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина , и смесь встр хивают при 38-40 0 в течение ночи. Осадок отфильтровывают , отдел ют от раствора и сушат, получают Т099 мг продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонйл-L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход 90,5 в расчете на N-бензилокcикapбoнил-L-acпapaгинoвyю кислоту.
Пример 5. 2б7,2 мг (1 ммоль) N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapaгинoвoй кислоты и 537г6 мг (3 ммоль) метилового эфира L-фенилзланина раствор ют в 5 мл буферного раствора Мак-Илвай9 9
на (рН 7,0), Полученный раствор смешивают с 100 мг термоазы .и 100 мг картофельного ингибитора, и смесь встр хивают в течение 20 ч при . Осадок отфильтровывают и промывают водой и сушат, получают 580 нг неочищенного кристаллического продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход .95,5 в расчете на М-бензилоксикарбонил-Ь-аспаргиновую кислоту, т. пл. 123-125 С.
Продукт раствор ют в tO мл смеси диметилформамид и вода (1:1), и к раствору добавл ют при перемешивании Н-форму сильнокислотной катионообменной смолы, которую затем отдел ют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток раствор ют в диметилформамиде и к раствору добавл ют воду, в осадок выпадает 330 мг метилового эфира Ы7бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина , выход 77,0% в расчете на М-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновую кислоту, т. пл. 123125 0 .
Пример 6. 2б7,2 мг (1 ммоль) Ы-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и 537,6 мг (3 ммоль) метилового эфира L-фенилаланина раствор ют в 5 мл буферного раствора Мак-Илвайна . (рН 7,0). Полученный раствор смешивают со 100 мг тациназы N и со 100 мг картофельного ингибитора, , смесь встр хивают в течение 6 ч при . Осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат. Получают 120 нг неочищенного кристаллического продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира Ь-фенилаланина (1:1) выход 19,7, т. пл. 119-123 С.
Согласно примеру 5 продукт обрабатывают сильнокислотной катионообменной смолы в Н-форме, получают 50 мг метилового эфира Н-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина . выход 11,7%, т. пл. 95-1054.
Пример 7. 1335 мг (5 ммоль) М-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и 1078 мг (5 ммоль) метилового сложного эфира L-фёнилаланина загружают в 30 мл колбу, добавл ют k ЦП воды, рН полученного раствора довод т до 6,8 с помощью триэтиламиrta , добавл ют 20 мг термолизина, смесьвстр хивают hp в тече7-10 .
ние 2 дней. Осадок отфильтровывают, промывают kQ мл воды, сушат, получаtoT .475 кг продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1 -аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1), Выход 31,3 в расчете на хлоргидрат метилового эфира L-фенилаланина. После перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гексана получают продукт с т. пл. 120-124 С, (i-)J + 7,2|С
1, метанол)
Элементарный анализ Найдено, %: С 63,52; Н 6,22; N 7,Q Рассчитано, %: С 63,2А; Н 6,13; N 6,97
Пример 8. Процесс ведут аналогично примеру 7, но рН довод т . до 5,2, получают 753 мг продукта присоединени метилового эфира N-бензйлoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход ,5 в расчете на метиловый эфир L-фенилаланина.
Пример 9. К раствору 133,6 мг (0,5 ммоль) К-бензилок€Икарбонил- -аспарагиновой кислоты и 89,2 мг (0,5 ммоль) метилового эфира L-фенилаланина в 2,5 мл буферного раствора
Мак-Илвайна (рН7,0) с 0,07 мл триэтиламина , имеющему рН 6,7, добавл ют 50 мг термоазы и 50 мг картофельного ингибитора, смесь встр хивают при в течение 20 ч. Осадок отфильтровывают , промывают водой, получают 130 мг неочищенного продукта присое динени метилового эфира N-бензилокcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход 85,5 в расчете на метиловый эфир L-фенилаланина, т. пл. 115 .
Раствор продукта раствор ют в 20 мл смеси из диметилформамида и воды (1:1), обрабатывают сильнокислот
ной катионообменной смолой в Н-форме
согласно примеру 5 получают 75 мг метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-фенилаланина , полный выход 70% в расчете на 50% количества исходного
метилового эфира L-фенилаланина.
Пример 10. Реакцию провод т аналоП чно примеру 9, но используют О , 05 мл N-метилмррфолина вместо 0,07 мл триэтиламина при начальном рН 6,А. Получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарoнилгL-acпapтил-L-фeнилaлaнинa и 119 метилового эфира L-фенилаланина (1:1 ыход 78,9 в расчете на метиловый эфир L-фенилаланина, т. пл. llS-IZiC Продукт обрабатывают сильнокислотной катионнообменной смолой в Н-форме согласно примеру 9, получают 70 мг кристаллического метилового эфира N-бенэилоксикарбонил-Ь-фенилаланина . Полный выход 66% в расчете на использование количества исходного метилового эфира L-фенилаланина. Пример 11. Провод т реакцию аналогично примеру t, но реакцию проводит при рН 6,5 при встр хивании в течение 1 ч, получают 920 мг продукта присоединени метилового эфира N-бёнзилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фе нилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход 75,8, Пример 12. 52 мг (2 ммоль) М-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиНовой кислоты и 863 мг (k ммоль) ;хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина раствор ют в 2 мл воды, к раствору добавл ют 5,5 мг 1н. НаШ до рН 7Полученный pactBop смешивают с 50 мг термолизина и смесь встр хивают при 38-tO C в течение 2 4i Осадок отфильтровывают, высушивают, получа-ют 73 мг продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход 60,. пл.10б-118°С.П р. и м е р 13. мг (2 ммоль) N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapaгинoвoй кислоты и 863 мг (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина раствор ют в 7 мл воды, рН раствора довод т до 6 с помощью аммиачной воды, к.раствору добавл ют 100 мг термоазы, смесь встр хивают при 38АО С в течение нЪчи. Осадок отфильтровывают , промывают 70 мл воды, сушат , получают 550 мг продукта присрединени метилового эфира Ы-бензилокcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa (1:1). Выход 5,3%, т. пл. 113-1164. П р и м е р И. 270 мл (1 ммоль) N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapaгинoвoй кислоты и мг (2 ммаль) метилового эфира L-фенилаланина раствор ют в 4 мл воды, рН раствора довод т до 6 с помощью 7%-ной аммиачной воды. К полученному раствору добавл ют 50 мг термоазы, смесь непрерывно встр хивают при в .течение О.ч. Осадок отфильтровывают сушат, получают 177 мг продукта присоедине7 .12 ни метилового эфира N-бёнзилоксикарбонил-L-acnap гил-L-фeнилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход 23,П т. пл. 103-112С. Пример 15. Процесс провод т аналогично примеру Н, но в раствор добавл ют дополнительно еще 50 мг картофельного ингибитора. Получают 381 мг того же самого продукта. Выход 62,У, т. пл. 105-117°С. Пример 16. 53 мг (2 ммоль) N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapaгинoвoй кислоты и 863 мг (k ммоль) хлоргидрата метилового эфира DU-фенилаланина раствор ют в 7 мл воды, величину рН довод т до 6,2 с помощью 7%-ной аммиачной воды. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина и встр хивают в течение ночи при . Осадок отфильтровывают , сушат, получают мг продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-аспартил-фенилаланина и метилового эфира фенилаланина (1:1). Вь1ход 86,1 в расчете на N-бeнзoилкapбoнил-L-acпapгиновую кислоту, т. пл. . , После перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гексана получают продукт с т. пл. 127-135 0,14-1 - 6, (С 1, метанол). Найдено, %: С 63,52; Н 6,19; N6,92 aCaaHvNjOg ; Рассчитано, : С 63,24; Н 6,13; N6,97. Методом ЯМР показана тождественность полученного продукта с продуктом присоединени метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпaptил-L-фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина (1:1), т. е. соединение по примеру 1. 800 мг продукта раствор ют в 0 мг 1 Н. нес и экстрагируют дихлорметаном, (30 мл X 3) органическую фазу отде- , л ют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом, упаривают, остаток перекристаллизовывают из смеси этил- ,. ацетата и н-гексана, получают мг кристаллическогопродукта, т. п. 12 1324 , - 15,3 (С 1 метанол). . Найдено, : С 61,38; Н 5,58; N6,29 СгаИгцы б . Рассчитано, %: С 61,67;.Н 5,б5; N 6,5А. Продукт представл ет собой метиловый эфир N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapгил-L-фeнилaлaнинa .
13:9101
Водную фазу после отделени слой дихлорметана смешивают с бикарбонатом натри , значение рН довод т до 8,7 продукт трижды экстрагируют 30 мл хлористого метилена. Экстракт 5 сушат над безводным сульфатом-магни , в экстракт подают газообразный хлористый водород 8 течение 10 мин, затем упаривают досуха. Остаток перекристаллизовывают из этилового эфира, по- Ю лучают 29,0 мг хлоргидрата метилового
K-Z-DL-Asp
. А
Ъ-изоме/} L изомер
i ffWf/, N-Z-I,-Ap-L-Phe-№
В реакцион-
ном растВо
%ннь1м N-z-L-Asp -L- Phe- Me-L10б9 MrCt ммоль) N-бензилокси карбонил-БЬ-аспарагиновой кислоты и1 863 мг ( ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина раствор ют а 2 мл воды, значение рН довод т до 6с помощью аммиачной воды.
Полученный раствор смешивают с 50 .мг термолизина и встр хивают при 38-40 0 в течение 2 ч. Осадок отфильтровывают , промывают 20 мл воды, сушат , получают 787 мг продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспаргил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина
N-Z-DL-Asp л
Ъ-изомер 1,-изомер ir-ZОСГПС161ЛСЯ 8 реакционном pacmSope растборенным
{роцесс провод т аналогично при-меру 17, но используют метиловый эфир DL-фенилаланина вместо метилового
171
эфира D-фвнилаланина, f, пл. ЙЭ 151°С ,Ш - 1В,1 (С 1, метанол); (инфракрасный спектр и-спектр ЯМР совпадают со спектрами L-формы),
Таким образом, полученный продукт продукт присоединени метилового эфира N-бензилокси карбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира Dфенилаланина (1:1).
Пример 17. I
L Phe-Me
.1
(1:1) выход 6,8 в расчете на N-бензилоксика|эбонил-Ь-аспарагиновую кислоту, т. пл. 105-110 0.
После перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гексана, получают продукт ст. пл. 121-125 0; ti-1 If « 7,2 (С 1, метанол).
Из оставшейс реакционной смеси выдел ют N-бензилоксикарбониласпарагиновую кислоту (в основном в D-форме ). i .,.П р и м ер 18. .Используют оба дйуемета
DL - Phe - Me
.
It-изомер й-изопер
эфира L-фейилаланина. Получают 75б м1- продукта присоединени метилового эфира Ы-бензилоксикарбонил-ЬL-Asp-L-Pbe-Me t H-Z-L-A p-L-Phe-Me-D-Phe-Me . остаток 91 -аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина (1:1). Выход 62,3% в расчете на N-бвнзилоксикарбонил-| -аспарагиновук кислоту, т. гш. 105-111 С, Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и н-гексана, т.пл, - л г л лх г. о л ж Г 1,1 .XV f С- --; ; Ш - 6/5 (0 1, мета126-13 C/- .ratX нол). Из оставшейс реакцконной смеси выдел ют Ы- бензилоксикарбонИласпарагиновую кислоту (в основном в D-форме ). ;. П р им а р 19. г (20 ммоль) К-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и 7,32 г (2 ммоль) метилового эфира L-фенйлаланина раствор ют в 70 мл воды. Получают раствор с рН 6,2-6,3. К раствору добавл ют 200 мл термолизина и смесь непрерывно встр хивают в течение k ч при . Осадок отфильтровывают , промывают 70 vs воды, сушат, получают 10,11 г продукта, (т. пл. П7-120 С).: Полученное соединение - продукт . присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилала нина и метилового эфира L-фенилаланин ( 1:1), после перекристаллизации из смеси ацетата и Н-гексана, т. пл, 120 12VC, + 7,2 (С 1, метанол). Найдено, % С 63,Т6; Н 6,14; N6,99 C..2Hi7N509 Рассчитано, G 63,24; Нб,13 N 6,97Инфракрасный спектр и спектр ЯМР показали Те же характеристики, которые указаны выше дл продукта Присоединени (1:1) метилового эфира N-бёи зилоксикарбонил-Ь-аспаргил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина . После обработки по/мученного Продукта сильной кислотой, экстракции этилацетатом, последующей отгонки органического растворите получают мет тиловый эфир К-бензилЬксикарбонил-Ь аспартил-Ь-фенилаланина . 1,00 г (,б5 ммоль) полученного продукта присоединени метилового эфира Н-бензилоксикарбони -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и сложного эфира L-фенилаланина загружают в 30 мл колбу и добавл ют 2 мл воды и 2,0 мл 1н. НС, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Суспензию фильтруют, осадок промы веют 4 мл воды, сушат, получают 0,72 г метилового эфира N-бензилок7 сикарбонил-Ь-аспаргил-Ь-фенилаланина . Выход 98,8%. После растворени в этилацетате продукт осаждают н-гексаном , т. пл. 121-12tC, 1 -15,4 (С 1, мёнол). Найдено, % С 61,58; Н 5, N6.56. СггН21,ЫгО Рассчитано, % С 61,б7; Н 5,65; N 6,5. Инфракрасный спектр продукта совпадает со спектром стандартного продуктй . Идентичность продукта подтверждена сравнением водного раствора полученного продукта с водным раствором стандартного соединени методом высокоскоростной жидкостной хроматографии . Чистота, измеренна этим способом , составл ет 100%. Устройство дл проведени высокоскоростной жидкостной хроматографии и услови ее проведени указаны ниже. Этот способ также использован дл оценки чистоты продуктов разложени , продуктов присоединени в примерах, если это не оговорено иначе. То же устройство и те же услови использованы в примерах , если речь идет об этом способе. Устройство дл высокоскоростной жидкостной хроматографии (TSK-HLC 801). Колонка: внутренний диаметр 7,5 мм длина 30 см; наполнитель: крахмальный гель, размер частиц 5 мкм (TSKGEL LS 170)V. Элюент: 0, водный раствор ацетата натри . Скорость потока 0,8 мл/мин перепад давлени 20 кг/см j. температура измерени комнатна , детектор - дифференциальный рефрактометр .V Прим ер 20. 1,00 г ,б5 ммоль продукта присоединени метилового эф1фа М-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил 1 ,-фенилаланина и метилового эфира И-фенилапанина, полученного в примере 19, раствор ют в смеси 2 мл воды и 1,32 МП I Н. НС. Реакционную Maqcy перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и обрабатывают в услови х по примеру 19. Получают 0,70 г продукта в виде тонких призматических кристаллов. Содержание метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-и-фенилаланина 96,8% т. пл. 100-.126С. П р и м е р 21.
17910117J8
C-2-L-A5P .Di.-Phe-Me
K-Z-L-Asp-L Phe-Ke
N-Z-L-Asp-L-Flie-Me-D-Phe-Me D-Phe-Me не реагирует с N-Z-L-Asp, в реакции с протеазой св зываетс с дипептидом и осаждаетс как аддитивное соединение. 0,53 г (2 ммоль) N-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и 0,863 г (k ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилапанина расдвор ют в 10 мл воды, рН раствора довод до 6,0 с помощью аммиачной воды . К раствору добавл ют с 50 мг термолизина и смесь встр хивают в течение ночи при . Осадок отфильтровывают , промывают 10 мл воды и сушат , получают 0,90 г кристаллического продукта. Т. пл. 120-126 0. После перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гексана, получают продукт с т.пл. 128-13 С - 6,3 (С 1, метанол ). Инфракрасный спектр и спектр ЯМР продукта идентичны спектрам присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилапанина и метилового эфира L-фенйлаланина (1:1). Найдено, %: С 63,А2; Н 6,17; N6,95 CbaHvNiOs Рассчитано, %-. С 63,24; Н 6,13; N 6,97. Продукт обрабатывают кислотой, получают метиловый эфир N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метиловый эфир D-фенилаланина в мольном отношении 1:V. Из полученных результатов сделан вывод, что соедийение есть продукт присоединени метилового эфира Ы-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина (1:1). Смесь 0,50 т (0,82 ммоль) продукта присоединени с 4 мл воды и 0,26 г лимонной кислоты перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и обрабатывают в услови х
/ -
Ij-изомер I -изрмер
Т
-f
I
Осадок мера 19, получают 0,35 г кристаллов метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина . Чистота выход 99,3%. Пример 22.. К 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового .эфира L-фенилаланина, полученного в примере 19, добавл ют k мл воды и 0,24 г (1,2 ммоль) п-толуолсульфокислоты моногидрата, обрабатывают смесь по примеру 19, получают 0,33 г кристаллрв метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспаргил-Ь-фенилаланина . Чистота 100%; выход 93,6%. Пример 23. К смеси 0,45 г (0,82 ммоль) 85% муравьиной кислоты и 8 мл воды добавл ют 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина, полученного в примере 19, смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре, продукт отфильтровывают , промыв.ают 10 мл воды, сушат,, получают 0,312 г белых кристаллов метилового эфира, М-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина . Чистота выход 88,6%. Пример 24. 0,47 г (0,82 ммоль) лед ной уксусной кислоты и 8 мл воды помещают в 30 мл колбу, 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенила 1анина и метилового эфира L-фенилаланина, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин, продукт отфильтровывают, промывают 10 мл во-ды , сУшат, получают 0,308 г белых кристаллов метилового эфира М-бенаи-|. 199 локсикарбонил Ь аспартил Ь-фенилаланина . Чистота 100 выход 8792%, Пример 25. 1,00 г (1,65 ммоль) продукта присоединени метилового эфмра N-бензи оксикарбонил-Ь-аспартил Ь-фвнилаланина и метилового эфира L-фенилаланина, полученного в примере 19 Загружают в 30 мл колбу, добавл ют 2 мл воды и 2,0 мл 1 , смесь перемешивают при в течение 3 мин, затем обрабатывают способом;, описанным аналогичным а примеру 19, получают 0,35 г кристаллов метилового эфира Н-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланин . Чистота выход 100%. Пример 26. 0,59 г (2 ммоль Н-Р-метоксибензилоксикарбонил-Ь-аспарап ноаой кислоты и 0,860 г (.k ммоль хлоргидрата метилового эфира Ь-фе нилаланина раствор ют в 1 н.НаОН, значение рН довод т до 6,0. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина , встр хивают в течение ночи . Осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат, получают 0,928 г кристаллов, имеющих . Результаты подтверждают получение продукта присоединени метилового эфира N-P-метоксибензйлоксикарбонил-Ь аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L фенилаланина (1:.1). После перекристаллизации продукта из смеси этилацетата и н-гексана. . Т.пл. 72-76 С. i-1 + 6,5 (С 1, метанол). Найдено, %-. С б1,85; Н 6, N6,f Cb H NiOio Рассчитано , : С 62,15; Н 6,16; N 6,5:9. Инфракрасный спектр: 3280 см .(колебание раст жени св зи N-H); 3020 и 2930 см (колебание раст жени С-Н); 1735 см (сложный эфир С « 0); 1700 см (С О уретан,); (2-ое амидное поглощение); см ( деформационное колебание); 1380 см (карбоксилат); 1210 до см- (колебание раст жени св зи G-0-C и 3-е амидное поглощение); 1030 см (колебание фенила в плоскости ), и 690, и 810 см колебани фенила вне плоскости). Спектр ЯМР, t : (1) 2,7 ppm (2Н); (2) 3,1 ppm (); (3) 3,6.ppn (ЗЮ; 3.7 ppi (ЗН); (i) 3,8 ppm (3H); (5) 4,0 ppm (IH); (6)it,3ppm (1H); (7) 720 . ,8 ppm (IH); (8) 5.0ppm.(2H); (9) 5,65 ppm (3H); (10) 5,65 ppm (IH); (11) b,); и (12) 6,8 до 7,3 ppm (ЙН). Полученные результаты показывают, . что продукт вл етс продуктом присоединени формулы I, где RI, Ra, R, и п означают п-метоксибензилоксикарбонил , бензил, метокси и 1 соответственно . Смесь 0,500 г (0,78 ммоль) продукта присоединени метилового эфира N-Р-метоксибензилоксикарбонил-L-acnap-тил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина, полученного таким образом , с 2 мл воды и 0,9 мл (0,9 ммоль) 1 н.НС перемешивают при 60°С в течение 3 мин. Полученную суспензию отфиль тровывают и промь|вают 6 мл воды, сушат, получают 0,32 г кристаллов . Нижеследующие результаты подверждают , что продукт вл етс сложным эфиром N-P-метокси-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина . Чистота 100, выход 89,1. . Кристаллы раствор ют в этилацетатеи продукт осаждают н-гексаном получают соединение с т. пл. 128-130 С, WQ - 15,1 (С 1 метанбл) Найдено, %: С 60,30; Н 5,7t;N5,99 GabHaeNtOe Рассчитано, %: С 60,25; Н 5,72; N6,11. Инфракрасный спектр: 3280 см (раст жение N-H); 2930 и 3020 , (колебание раст жени С-Н); 1735 см (С О сложный ); 1700 см ( уретан); 1б50 см (1-ое амидное поглощение ); 1510 до см (2-е амидное поглощение); ЙАО см (деформаци С-Н); 1220 до 1270 см (колебание раст жени С-О-С, 3-е амидное поглощение); 1030 и 1050 (колеба ние фенила в плоскости); 690 и 810см (колебание фенила вне плоскости). ЯМР спектр, 5 : (1) 2,8 ррга (2Н); (2) 3,0 ppm (2Ю (3) 3,6 ppm (ЗН); (i) 3,8 ppm (ЗН) (5) 4,5 ppm (1Н); (6),8ppm (IH) (7)6,6ppm (2Н); (8) 6,0 ppm (IH) (9) 6,6ppm (IH); (10) 6,6 ppm (IH) (11) 6,8 до 7,3 ppm C9H). Эти результаты показывают, что конечным продуктом вл етс соединение формулы IV, в KOtQpOM RI, Rj, R и n означает n-иетоксибензилоксикарбонил , бензил, метокси и 1 соответственно . 219 0,2 весовых частей полученного ме тилового эфира N-P-метоксибензилокси -карбонил-Ь-аспаргил-Ь-фенилаланина раствор ют в 2 вес.ч. ацетона и к полученному раствору добавл ют 1 вес.ч. k Н.НС2, смесь нагревают на вод ной бане со слабым противотоком в течение 1,5 ч, до полного разложени дл образовани раствора, содержащего .в качестве.основных компонентов метиловый сложный эфир L-аспарти -L-фенилаланина, метиловый эфир, L-фе нилаланина и анисовый спирт, причем из указанного раствора получают мети ловый эфир Ь-аспартил-Ь-фенилаланина Пример 27. 0,ii62 г (2 ммоль М-бензилоксикарбонил-Ь-глутаминовой кислоты и 0,86О г (4 ммоль) хлоргидра та метилового эфира L-фенилаланина раствор ют в 1 H.NaOH, и.рН довод т до 6,0.. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина и смесь встр хивают при 38-40 С в течение ночи. Осадок-отфильтровывают , промывают 10 мл воды, сушат, получают 0,510 г кристаллов , т. пл. 80-85 0. Следующие результаты подтверждают что получили продукт присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-глутамил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и н-гексана т. пп 92-97°С. 0,1 (С 1, метанол Найдено, %: С 63,61; Н 6,31;N&,6 CbiHsgNiOs Рассчитано, %: С 63,75; Н 6,32; N 6,76. Инфракрасный спектр: см (колебание раст жени св зи N-H); 2950 и 3030 см (колебание раст жени св зи С-Н); 1730 и см-(С 0 сложный эфир); 1бЭО (С О урета ,н); IbbO см (1-ое амидное поглощение ); 1б20 см (карбоксилат); 1530 см (2-ое амидное поглощение); ЙАО см (С-Н деформационное колеба ние); I40b см (карбоксилат); 12АО до 1310 см (С-0-С колебание раст жение и амидное поглощение); 1050 см(колебание фенила в плоскости ); 700 и 750 см(колебание фенила вне плоскости). Спектр ЯМР, S : (1) 2,0 ррт 2Н); (2) 2,3 ррт (2Н); (3) 3,0 ррт (iH); (k) 3,6ppm(3H) и 3,7 РЮТ ЗН); (5) 3,8 ррт (1Н); (6) «.З Ррт ПН); (7) i4,8 ррт (1н); (8) 5,0 Ррт (2Н); (9) 722 5,6 ррт (ЗН); (10) 5,8 ррш (1Н); (11) 7,2 ррт (1Н); (12).7Г2 ррт (ЮН); (1Д) 7,3 ррт (5Н) . Эти результаты показывают, что продукт вл етс присоединением формулы I, где R, Rg, Rj, и n означают бензилоксикарбонил, бензил, метокси и 2 соответственно. 0,100 г продукта присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-глутамил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина добавл ют при перемешивании 2,3 мл (0,32 ммоль) 0,,. и смесь затем перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Полученный белый осадок отфильтровывают и промывают 3 мл во- ды, сушат, получают О,0683 г кристаллов . Следующие результаты подверждают, что продукт представл ет метиловый эфир N-бeнзилoкcикapбoнил-L-глyтaмил-L-фенилаланина .,Чистота выход 95,81. Кристаллы раствор ют в этилацетате ,-и продукт осаедагот-и-гексаном, т. пл. 97-99°С, - 11,0 (С 1, метанол) Найдено, С 62,63; Н 5, N6, Саь Иге NaO Рассчитано, %: С 62,3; Н 5,92; N6,33. Инфракрасный спектр: 3300 см (колебание раст жени N-H); 2930 и 3030 (колебание раст жени С-Н); 1735 см (С О сложный эфир); 1б90 см- (С О уретан); 1650 см (1-ое амидное поглощение); 1530 см (2-ое амидное поглощение); см (колебание деформации С-Н); 1220 до 1280 см (колебание раст жени С-О-С и амидное поглощение); 1050 . (колебание фенила в плоскости) и 695 и 735 см (колебание фенила вне плоскости). Спектр ЯМР, 5 : (1) 2,0 р (2Н); (2) 2,k ррт (2Н); (3) 37 рртТ2Н); (it) 3,7 ррт (ЗН); (5) ,3 ррт (-Ж); (6) k,8 ррт (1Н); (7) 5,1 ррт (2Н); (8) 5,9 ррп (1Н); (9) 7,2 ррт (1Н); (10) 7,2 ррт (5Н); (11) 7,Зррт(5Н); (12) 8,1 ррт (1Н). Эти результаты показывают-, что конечный продукт представл ет собой соединение формулы IN, где Ri, Ra, Яз и п означает бензилоксикарбонил, бен- зил, метокси и 2 соответственно. Полученный метиловый эфир N-бензи- лoкcикapбoнил-L-глyтaмил-L-фeнилaлa23 , 9 нина посредством восстановлени водо родом превращают в метиловый эфир L глутамил-Ь-фенилаланина , и гидролизом его превращают а N-бензилоксикapбoнил-L-глyтaмил-L-фeнилaпaкинt Пример 28. К раствору 0,686 г (3,12 ммоль) хж пидрата метилового эфира L-фенйлаланина в 25мл воды при охлаждении льдом-добавл ют 2 H.NaOH водного раствора при переме шивании, при этом довод т рН до , затем не прекраща перемешивани , постепенно добавл ют 0,ЗбО г , (1,4 ммоль) ангидрида N-бензилокси арбонил-Ь-аспарагиновой кислоты, рН поддерживают в пределах 7,0-7,5 посредством добавлени 2 н.водного раствора NaOH. Смесь перемешивают в te чение 2 ц, к реакционной смеси добав л ют 1 н.НСб водный раствор, чтсбы довести рН до 6. Полученный осадок отфильтровывают, промывают 50 мл воды , сушат, получают О,А16 г продукта присоединени метилового эфира N-бен зилоксикарбонил-Ь-аспартил-фенилалаНина (смесь 86 метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил- (О-)-L-фенилаланина и. метилового эфи ра Н-бензилоксикарбрнил-Ь-аспартил- (СуЗ)-Ь-фенилаланина) и метилового эфира L-фенилаланин (1:1) (т. пл. 103-П5°С), В реакционной смеси обра зуетс значительное количество метилового эфира i I-бeнзилoкcиkapбoнил-Ь-аспартил- (04)-Ь-фенилаланина, но больша часть соединени остаетс в фильтрате и в промывочной воде. Полученный продукт присоединени метилового эфира N-бензилоксикарбо- . нил-Ь-аспартил-( и ОД-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина добавл ют к 1,7 мл (0,7 моль 0,4 Н.НС2 при перемешивании, смесь продолжают перемешивать при комнатной температуре в течение 15 мин. По лученный белый осадок отфильтровывают , промывают 3 мл воды, сушат, получают 0,136 г (выход 96,3) кристал лов метилового эсрира N-бензилоксикар бонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина (содержащий 11% Н-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил- (С)-Ь-фенилаланина (т.пл. 110-118°С). При м е р 29. В 30 мл колбе 0, г (2 ммоль) N-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и 0,918 г (k ммоль) хлоргидрата этилового эфира L-фенилаланина раствор ют в 5 мл воды, к раствору добавл ют k H.NaCH72 значение рН довод т до 6. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина , и смесь встр хивают в течение ночи при . ОсаДок отфильтровывают , промывают 30 мл воды, сущат , получают 0,913 г кристаллов, т. пл. 85-90. Продукт тождественен с продуктом . присоединени этилового эфира N-бензи локси ка рбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и этилового эфира L-фенилаланина (1:1). После перекристаллизации из смесИ этилацетата и н-гексана получают продукт ст. пл. 93-95 C,ti-lo + 6,0 (С 1, метанол). Найдено, %, С 6,50;.Н 6,56; N 6,63 Рассчитано, %: С 6,23; Н 6,50; N6,61 Инфракрасный спектр: 3300 см (колебание раст жени св зи N-H); 2900 до 3050 см (колебание раст жени С-Н); 1710 и см (С О сложный эфир и С О уретан); 1640 см (1-ое амидное поглощение); 1585 см (карбоксилат ); 1520 см(2-е амидное поглощение ); IjfO см (деформационное колебание С-Н) ; 1380 см(карбоксилат); 1200, 1270:см (колебание раст жени С-О-С и 3-е амидное поглощение); 1055 см(колебание фенила в плоскости ); 700, 730 и 750 см (колебание фенила вне плоскости). Спектр ЯМР, в : (1) 1,1 ррп (6Н); (2) 2,7 ррп (2Н); (3) 3,0 ррт (Н); (i.) 4,0 ppm (4Н); (5) 4,1 ppm (IH); (6) 4,5 PiJm(lH); (7) 4,7 ppm (IH); (8) 5,0 ppm (2H); (9) 6,2 ppm (IH);; (10) 6,7 ppm (3H); (11) 7,2 ppm (IH); (12) 7,2 ppm (10H); (13) 7,3 ррт (5H). Эти результаты показь1вают, что продукт вл етс продуктом присоединени формулы I, где R, R, Ri и n означают бензилоксикарбонил, бензил, этокси и 1. , В 30 мл колбе О,125 г (0,197 ммоль) полученного продукта присоединени этилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и этилового эфира L-фенилаланина смешивают 2 мл воды и мл 1н. HCf (0,24 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 NMH. Полученную суспензию фильтруют, осадок промывают 5 МП воды, сушат, получают 0,0807 г кристаллов этилового эфира N-бёнзилoкcикapбoниЛ-L-acпapтил-L-фенилаланина . Чистота 100%; выход 92,6%. Кристаллы перекристаллизовывают из смеси этилацетата и н-гексана , получают продукт с т, пл. 128135c ,cl - 17,3 (С 1, метаС 62,82; Н 5,96; N6,1 Найдено, %: CabiiieiJiO %: С 62,t3; Н 5,92; Рассчитано N6,33. 3300 CM Инфракрасный спектр: 2900 до 3100 см-; 1730 см , -. 1690 1655 1530 см; . kkO см; 1200-1280 1030 см 690 Спектр ЯМР, б : 1,1 ррп; 2,8 ррт; 3.0ррт; ,1 ррт; +,6 ррт; k,8 ppm; 5.1ppm; 6,0 рри; 7,1 ppm; 7,3 ppn; 9,6 ppm. Пример 30. 5,00 г ( 16,82 ммоль к-Р-метокси-бензилокси карбонил-Ь-аспарагиновойкислоты и 7,26 г (33,6 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина загружают в 100 мл колбу и добавл ют 1н. NaGH, рН раствора 6,0. Полученный раствор смешивают с 2,0 г термолизина и с 0,4 г картофельного ингибитора , смесь встр хивают при в течение 5 ч. Осадок отфильтровывают, промывают 100 мл воды, сушат, получа ют 8,11 г кристаллов, имеющих т.пл. 88-92®С, Выход 75,6% в виде продукта присоединени метилового эфира N-P-меТоксибензилокси карбонил-аспартил-фенилаланина и метилового эфира фенилаланина (1:1). 1осле перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гек сана физические характеристики и результаты элементарного анализа, аналогичны продукту присоединени , полу ченного в примере 26. .0,3 г продукта присоединени мети лового эфира N-P-метоксибензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина раст вор ют 3 мл ацетона, к раствору добавл ют 2 мл 2,4 н.НСЕ, реакцию провод т при бОС в течение 1 . Реакци онную смесь смешивают с водой, н водным раствором NaHCOj) и циклогексаноном , добавленным в качестве внутреннего стандарта. Методом высокоскоростной жидкостной хроматографии подверждено получение метилового эфи ра А.-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина. Вы .ход 72,7%. Пример 31. 0,3 продукта при соединени метилового эфира N-P-метоксибензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фёнилаланина, полученного в примере 30, разлагают и анализируют сог-. ласно примеру 30, но вместо ацетона используют диоксан. Выход метилового эфира -L-acпартил-Ь-фенилаланина . Пример 32J Аналогичен при- меру 31 но используют метанол вместо диоксана. Выход метилового эфираА( -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина 63,3%. Пример 33. Аналогичен примеру 31, но используют вместо диоксана NI N-ди мет ил форма МИД. Выход метилового эфира db -Ь-аспартил-Ь-фенил- . аланина 28,1. Пример 3. Аналогичен примеру 31 но в качестве нейтрализующего агента используют k мл диоксана, 1 мл диоксанового раствора 5,3 н,НС и триэтиламин вместо 3 мл диоксана, 2 мл 2fk н.НСЕ и 1,2 Н. водного раствора МаНСОз, соответственно. Выход метилового эфира -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина 98,6%. П р и м е р 35. Аналогичен примеру но реакцию провод т при 90С в течение 20 мин (вместо 60°С в течение 1 ч). Выход метилового эфира -Ь-аспартил-Ь фенилаланина 88,5%. Пример 36. Аналогичен примеру 3, но используют ,5 диоксана и 0,5 мл диоксанового раствора 5,3 н. НС 8 вместо мл и 1 мл вышеуказанных веществ соответственно, а также провод т реакцию при 90 вместо 60С. Выход метилового эфира -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина 84,%. П р и м е р 37. Аналогичен примеру З, но используют 3 мл диоксана и 2 мл диоксанового раствора 5,3 н.НСЕ вместо мл и 1 мл указанных веществ соответственно, а также провод т реакцию при 30°С в течение 120 мин вместо 60°С в течение 1 ч. Выход метилового эфира «L -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина 98,6%. Пример 38. Аналогичен примеру но используют ,5 мл диоксана и 0,5 МП 60% хлорной кислоты вместо 4 мл диоксана и 1 мл диоксанового раствора 5,3 н.НС соответственно. Выход метилового эфира -L-аспартил-L-фенилаланина . П р. и м ё р 39. Аналогичен примеру . но используют 4,85 мл диоксана и 0,15 мл концентрированной серной киcлotы вместо 4 мл диоксана и 1 мл 279 диоксанового раствора 5,3 н.НС. Выход метилоеого эфира -L-аспартил-L-фемилаланина . Пример fO. 0,3 г продукта присоединени метилового эфира N P-метоксибеизилоксикарбонил Ь-аспарти -L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилапанина (1:1), полученного в примере 30, раствор ют в 2 мл диокса на и добавл ют 3 мл трифторуксусной кислоты. Реакцию провод т при в течение 1 ч. Реакционную смесь упа ривают под пониженным давлением, а затем к части этого вещества добавл ют воду, триэтиламин и циклогексанои в качестве внутреннего стандарта, по лученный образец анализируют высокоскоростной жидкостной хроматографией Выход метилового эфира « -L-аспартил -L-фенилаланина 96,А. Пример 41. Смесь 1,000 г продукта присоединени метилового эфира М-Р-метоксибензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилалаиина и метилового эфира L-фенйлаланина,(1:1), полученного в .примере ЗО, И мл диоксана и 4 мл диоксанового раствора /5,3 н.НСЕ, загружают в 650 мл колбу ;,и.перемешивают при , в течение 1 ч, Диоксан ОТГОНЯЮТ из реакционной смеси при пониженном давлении, добав л ют 6 мл воды и 21}мп диэтилового эфира к оставшемус масл нистому про дукту, перемешивают, смесь раздел ют на две фазы, К водной фазе добавл ют 10 мл диэтилового эфира, продукт экс рагируют трижды таким же образом. Эфирные экстракты объедин ют, дважды промывают 5 мл 5 -ного водного раствора бикарбоната натри и сушат над безводным сульфатом магни . Эфир отгон ют при пониженном давлении, полу чают 0,176 г (выход 81,2) неочищенного анисового спирта. Водную фазу нейтрализуют водным раствором гидрата окиси до рН 6, выдерживают примерно при в течение ночи. Полученные кристаллы отфильтровывают и промывают 2 мл воды, сушат, получают 0,316 г (выход 68,5%) неочищенного метилового эфира Ь-аспартил-Ь-фенил аланиНа . Маточник и водные промывки объедин ют и подщелачивают водным раствором гидрата окиси натри до рН, продукт экстрагируют дихлорметаном (3 х 15 мл), объединенные экстракты промывают 5 мл воды, сушат над безводным сульфатом магни . Дихлорметан отгон ют при пониженном 728 давлении, получают 0,23 г (выход 83,4%) неочищенного метилового эфира L-фенилаланина. П р и м е р , 1,189 г((4 ммопь) М-Р-метоксибензилоксикарбонил-Ь-аспарагиноаой кислоты и 1,837 г (8 ммоль) хлоргидрата этилового эфира L-фенйлаланина раствор ют в1 н. водном растворе NaCH, рН 6,0. Довод т объем реакционной смеси водой до 15 мл. Полученный раствор смешивают с 100 мг термолизина. Смесь переме,шивают при 38-40 С в течение 7 ч. Осадок отфильтровывают, промывают 30 мл воды, сушат, получают 2,01 г (выход 90,2) продукта присоединени этилового эфира N-P-метрксибензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фанилаланина и этилового эфира L-фенилаланина (1;1j- ЧТО подтверждено нижеприведенными результатами анализа. Продукт перекристаллизовывают из смеси метанола и эфира. Т. пл. 82ВУ С . CW н- 6,0 (С 1, метанол) Найдено, %: С 63,52; Н 6,57;N6,5 CjsHiibNjOio Рассчитано, %: С бЗ, Н 6,51; N 6,31. Спектры инфракрасного поглощени и ЯМР дают следующие характеристические максимумы. Инфракрасный спектр: 3300 см (колебание раст жени N-H); от 2900 до 3050 см (колебание раст жени С-Н); 1720, 1730 и (С О сложные эфиры и уретан); 1650 см (1-ое амидное поглощение)J от 1510 до см(2-ое амидное поглощение); Н40 см (деформационное колебание С-Н); 1390 см (карбоксилат); от 1220 до 1280 см (С-О-С раст жение и 3-е амидное поглощение ) ; 1030 см (деформаци фенила в плоскости); и 690, 760 и 810 см (колебание фенила вне плоскости). Спектр ЯМР, : (1) 1,2 pim(6H); (2) 2,7ppm (2Й); (3) 3,1 ppm (Н); (4)3,8 ppm (ЗН); (5) 4,0 ppm (4н); (6) 4,1 ppm (1Н); (7) 4,5 ppm (1Н); (8) 4,7ppm (1Н); (9) 5,0 ppm (1Н); (10,) 5,5 (4Н); (11) 6,1 ppm (1Н); (12) 6,8-7,4 {jprn (14Н). Результаты показывают, что продукт представл ет собой присоединение формулы (1}, где R4, R2, Rj и и означает р-метоксибензилоксикарбонил, бензил, этокси и t, соответственно. Повтор ют процесс аналогично примеру 34, но используют полученный продукт присоединени вместо продукта присоединени метилового эфира Nrp-метоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и Этилового эфира L-фенилаланина , получают этиловый эфир L-аспартил-Ь-фенилаланина . Выход этилового эфира -L -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина 95,1)%. Пример {З. 1,89 г(. ммоль) М-р-метоксибензилоксикарбонил-Ь-аспа рагиновой кислоты и 1,725 г (8 ммоль х оргидрата метилового эфира DL-фенилаланина загружают в 30 мл колбу и раствбр ют при добавлении 1 н. водно го раствора NaCH; рН 6,0. Раствор ра бавл ют водой до 15 мл. Полученный раствор смешивают с 0,1 г,термолизина , и смесь перемешивают при 38-ЛО С в течение 50 мин. Осадок отфильтровы вают, промывают 30 мл воды и сушат, получают 2,109 г кристаллов, имеющих т. пл. 119-123 С, затем перекристаллизовывают продукт из смеси этилацетата и н-гексана, высушивают при в течение 7 ч при пониженном давпеНИИ , Подтверждено, что соединение продукт присоединени метилового эфи ра Н-р-метоксибензилоксикарбонил-Ьаспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира 1 -фенилаланина (1:0 по угидра та. Т. пл. 131-138° :,lJ-lf - i,2 (С 1, метанол). Найдено, %: С б1.50г,Н 6,12; N6, Сз МмНьОто- 1/2 НгР Рассчитано, %: С 61,29; Н 6,23; N 6,50. Спектры инфракрасного поглощени и ЯМР дали те же характеристические особенности, что и в продукте присоединени формулы I, полученном в при мере 26, где R{, R, Ri и h означали р-мет6ксибензилоксикарбонил, бензил, метокси и 1 соответственно, за тем исключением, что поглощени , вызванные протонами воды и групп -NH- и МН| - сдвигались на 4,1 ррт из-за во мущени , обусловленного наличием вод поскольку продукт включал кристаллизационную воду, как указано ниже. Навеску 1,502 г продукта нагревают микроволновым излучением в течение 12 мин в микроволновой печи при частоте 2, ГГц и мощности 1,2 кВт, чтобы высушить образец, вес которого уменьшилс до 1,8152 г после облуче ни (потер при сушке О,,02091 г). Элементарный анализ обулученного образца дал следующие результаты: 1730 Найдено, %: С 62,07; Н 6,17; N6,69 CiiliisNjOw (I) .Рассчитано, С 62,15 Н 6,16; N 6,69. -Спектры инфракрасного поглощени и ЯМР облученного образца дали те же характерные особенности, что и в продукте присоединени формулы I, полученном в примере 26. Навеску 1,0 г облученного образца смешивают с 4 мл воды и 2 мл 1 н. HCt затем полученную смесь перемешивают при в течение 3 мин. Фильтруют, ввод т метиловый эфир N-p-метоксикарбонил-Ь-фенилаланина и метиловый эфир D-фенилаланина в мол рном отношении 1:1 из твердой фазы и из жидкой фазы, соответственно. Повтор ют способ аналогичный примеру 3, но используют 0,3 г полученного продукта присоединени (полугидрат вместо продукта присоединени , полученного в примере 30). Выход метилового эфира -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина 95, Пример 4.0,3 продукта присоединени метилового эфира N-p-метоксибензилоксикарбонил-L-acnapтил-Ь-фенилаланина и метиловогб эфира L-фенилаланина (1:1), полученного в примере 30, раствор ют в 10 мл раствора 0,3 н.НСВв хлороформе, реакци1д провод т при 60 С в течение 2 ч. Реакционную смесь упаривают при пониженном давлении, к остатку добавл ют воду, триэтиламин и циклогексанон в качестве внутреннего стандарта, образец анализируют высокоскоростной жидкостной хроматографией . Выход метилового эфира А- -L ,-аспартил-Ь-фенипаланина 9.3. П р и м е р kS. 53, г N-бензилоксикарбонил-L-acnapaгиновой кислоты и 107,8 г (0,5 моль) хлористоводородного метилового эфира фенилаланина помещают в 1-литровую колбу и добавл ют к смеси 300 мл водного раствора едкого натри дл их растворени и дл доведени рН до 6,4. Добавл ют к реакционной массе 0,3 г термоазы и 0,26 г моногидрата ацетата кальци , полученный раствор оставл ютпри 20 С на 218 ч, при этом в осадок выпадает полученное в результате реакции аддитивное соединение метилового эфира М-бензйлоксикарбонил-1-аспарагил-11-фениЛаланина и метилового эфира 0-фенилаланина . Осадок отфильтровывают.
319101
промывают водой, высушивают Скоростной жидкостной хроматографией показывают , что выход продукта 92,7, счита на вз тую N-6eнзилoкcикapбoнил-L ; -аспарагиновую кислоту.5
П р им ер 6. Процесс и анализ продукта реакции провод т аналогично примеру 45, но используют 161,8 г (0,75 моль)гхлорист©водор0|дного метиposoго эфира D-фенилаланина, 500 мл раствора едкого натри , рН 6,7, 1,0 г термоазы и 0,88 г моногидрата ацетата кальци ,вместо соответственно 107,8 г, /6,4, 0,3 г и 0,26 г при в те- чение 100 ч, вместо и 21Ь ч. Вы-1 ход 93.3,Счита на вз тую N-бензилоксикарбонил-Ь-аспараги«овую кислоту.
Пример 47. Процесс провод т в услови х примера 45, но используют 149,2 Г (0,65 ммоль) метилового эфира DL-фенилаланина гидрохлррида, 50fl мл водного раствора гидроокиси натри , рН 6,6, 0-,7 г термоаэы и 0,62 г ацетата кальци моногидрата вместо 107,8 г, 300 мл, 6,4, 0,3 г и 0,26 г « соответственно,прй в течение 195 ч вместо 20°С и 218 ч. Выход 90,9% исход из Н-бензило ссикарбонила-Ь-аспартата .
Г1 р и м е р -48. 0,534 г (2 ммоль) зо N-бензилоксикарбонил-i-аспартата и 0,863 г (4 ммоль) метилового эфира L-фенилаланина гидрохлорида помацают в 30 мл колбу и туда же добавл ют
7мл гидроокиси аммони дл растворе- 35 ни и доведени рН раствора до 6,0.
8раствор ввод т 50 мг термолизина. Раствор перемешивают при в течение 2 ч до выпадени продукта присоединени из метилового эфира N-бемзи- 40 локсикарбонил-Ь-аспарти -Ь-фенипапа Нина и метилового эфира L-фенилапани на. Большое количество в(эдь добавл ют
в реакционную смесь, содержащую вы- павшие кристаллы примесного соедине- . 45 ни дл их растворени . Полученный в результате этого гомогенный раствор анализируют с помс1и1ью вьгсокоскоростной жидкостной хроматографии; выход примесных соединений 54%.JQ
П р,и мер 49. 0,534 г (2 ммоль) Ы-бензилоксикарбонил-Ь-аспартата и 0,853 г (4 ммоль) метилового эфира DL-фенилаланина гидрохлорида помаца1732 :
ют в 30 мл колбу и туда же добавл ют
5мл воды вместе с триэтиламином дл растворени и доведени рН до 5,0. В раствор ввод т 50 мг термолизина. Раствор перемешивают при в течение 16 ч. Выпавшие кристаллы продукта присоединени , состо щего из метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина, отдел ют фильтрацией, сушат. Получают 0,836 1 кристаллов, т- пл. 96-113 0.
Пример 50, 0,53 г (2 ммоль) N-бенЗилоксикарбонил-L-аспартата и 0,863 г ( ммоль) метилового эфира DL-фенилалаНина гидрохлорида помещают в 30 мл колбу и туда же добавл ют
6мл аммиачной воды дл растворени
и доведени рН до 7,2. В раствор ввод т 50 мг термолизина и перемешивают при в течение 4,5 ч. Выпавшие кристаллы продукта присоединени , состо щего из метилового эфира N-бензилоксикарбогил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира DL-фенилаланина , отфильтровывают и сушат. Получают 0,630 г кристаллов. Выход 51,8. П р и мер 51 10,7 г CtO ммоль) М-бензилоксикарбонил-Ь-аспартата и 28,0 (130 ммоль) метилового эфира Lфенилаланина тидрохлорида помещают в 260 мл колбу и tyдa же добавл ют 10 мл водного раствора гидроокиси матрий дл растворени и доведени до 6,6. В раствор ввод т 32 мг термолизина. Раствор выдерживают до выпадени кристаллов продукта присоединени . Состо щего из метилового эфира М-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира Ь-фенилаланина. Полученные кристаллы отфильтровывают и сушат. Высокоскоростна хр(1атографи показала выход 82,5%, исход из Ы-бензилоксикарбонил-L-аспартата .
П р и м а р 52. Процесс провод т в услови х примера 9, но используют 15 мл аммиачной воды вместо воды и трцэтиламина, рН раствора довод т до 6,0 вместо 5,0. Получают 0,800 г примесных соединений. Выход 65,8%.
Изобретение иллюстрируетс табл. 1 и 2.
33
: 3
Claims (1)
- 910117 Таблица . 39910П Формула изобретени Способ получени продуктов присое- . it 1 Rj-C-CH-HHj-HOC-(CHi) где R - бен илоксикарбонил, п-ме токсибензилоксикарбонил Ri-бензил; Rj - метокси, этокси-группы; п 1 или 2,. «$ отличающийс тем, что N-замещенную аминодикарбоновую кислоту общей формулы RJ п « л20 ЛИ V II I И HOC-fCHjU-CH--СОН где значени R и п указаны выше, прдвергают взаимодействию со сложнымj. эфиром аминокарбоновой кислоты общей формулы III динени дипептидного производного и аминокислоты общей формулы I 7 п ° n-CH-C-lM-ai-C-Rj i О П iHiK-CH-C-Kj , где значени Кг и Кь указаны выше, при мол рном соотношении соединений формулы II и III 1:1 - , в водной среде, в присутствии металлопротеазы при рН Ь,0-7,2, температуре in -tin ®г Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Josef S. Fnifon Advances in Protein chemistry, Academic Press, Jnc, New Jork, Н. Y. ISjS, vol. 5, c. 33.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP727977A JPS5392729A (en) | 1977-01-27 | 1977-01-27 | Adduct of dipeptide derivatives and amino acid derivatives and process for their preparation |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU910117A3 true SU910117A3 (ru) | 1982-02-28 |
Family
ID=11661579
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU782570052A SU910117A3 (ru) | 1977-01-27 | 1978-01-26 | Способ получени продукта присоединени дипептидного производного и аминокислоты |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5392729A (ru) |
BE (1) | BE863245A (ru) |
SU (1) | SU910117A3 (ru) |
UA (1) | UA8374A1 (ru) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6020389A (ja) * | 1983-07-14 | 1985-02-01 | Nec Corp | 半導体メモリ |
JPS6274296A (ja) * | 1985-09-25 | 1987-04-06 | Ajinomoto Co Inc | α―L―アスパルチル―L―フェニルアラニンメチルエステルの製造方法 |
JPH0279993A (ja) * | 1987-12-11 | 1990-03-20 | Fan Shun Mou Ii Yuu Shen Kun Tsu | L,l−ジペプチドアスパルテームの製法 |
CN1529712A (zh) | 2001-07-26 | 2004-09-15 | ֮����ʽ���� | 二肽的制备方法、其中所用的肽生成酶及肽生成酶的制备方法 |
JP4483579B2 (ja) | 2002-07-26 | 2010-06-16 | 味の素株式会社 | トリペプチド以上のペプチドの製造方法 |
KR100855520B1 (ko) | 2002-07-26 | 2008-09-02 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 신규 펩타이드 신타제 유전자 |
JP2005040037A (ja) | 2003-07-25 | 2005-02-17 | Ajinomoto Co Inc | ジペプチドの製造方法、それに用いるペプチド生成酵素、およびペプチド生成酵素の製造方法 |
JP2005168405A (ja) | 2003-12-11 | 2005-06-30 | Ajinomoto Co Inc | ジペプチドの製造方法 |
WO2013051685A1 (ja) | 2011-10-07 | 2013-04-11 | 味の素株式会社 | 変異型γ-グルタミルトランスフェラーゼ、及び、γ-グルタミルバリルグリシン又はその塩の製造法 |
JP6007684B2 (ja) * | 2012-09-05 | 2016-10-12 | 富士ゼロックス株式会社 | 静電荷像現像用トナーの製造方法 |
-
1977
- 1977-01-27 JP JP727977A patent/JPS5392729A/ja active Granted
-
1978
- 1978-01-24 BE BE184577A patent/BE863245A/fr not_active IP Right Cessation
- 1978-01-26 SU SU782570052A patent/SU910117A3/ru active
- 1978-01-26 UA UA2570052A patent/UA8374A1/ru unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5392729A (en) | 1978-08-15 |
UA8374A1 (ru) | 1996-03-29 |
BE863245A (fr) | 1978-07-24 |
JPS5745427B2 (ru) | 1982-09-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4165311A (en) | Addition compound of dipeptide derivative and amino acid derivative | |
SU910117A3 (ru) | Способ получени продукта присоединени дипептидного производного и аминокислоты | |
RU2152953C1 (ru) | Производные дипептидных п-амидино-бензиламидов с n-концевыми сульфонильными остатками и их соли с физиологически приемлемыми кислотами | |
US4212946A (en) | Process for recovering protease | |
US4371464A (en) | Dipeptide sweetener | |
IL95949A (en) | Process for the preparation of L-) - 3 pyroglutamil (- L-thiolidine-4-carboxylic acid and its history | |
US4212945A (en) | Process for recovering protease | |
US4490386A (en) | Phosphate salts of 1-[2-[(1-alkoxycarbonyl-3-aralkyl)-amino]-1-oxoalkyl]octahydro-1H-indole-2-carboxylic acids, preparation of, and medical compositions thereof | |
KR100438879B1 (ko) | N-아세틸(L)-4-시아노페닐알라닌Ac-(L)-Phe(4-CN)-OH및N-아세틸-(L)-p-아미디노페닐알라닌-시클로헥실글리신-β-(3-N-메틸피리디늄)-알라닌Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe(3)-NH2의신규제조방법 | |
US4761479A (en) | Crystalline quinapril and a process for producing the same | |
KR100445124B1 (ko) | 돌라스타틴15의제조방법및그의중간체 | |
FR2547816A1 (fr) | Procede de synthese de l'aspartame | |
SU841583A3 (ru) | Способ получени дипептидныхэфиРОВ | |
SU1625882A1 (ru) | Способ получени гликопептидов глицирризиновой кислоты | |
EP0074103B1 (de) | N-(N'-(2-Chloräthyl)-N'-nitroso-carbamoyl)- oligopeptidester und -amide und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
US3948971A (en) | N-protected-α-amino acid compounds | |
SU1681732A3 (ru) | Способ получени дипептидов или их приемлемых дл пищевых продуктов солей | |
US4760162A (en) | Inorganic acid salt of N-(1(S)-ethoxycarbonyl-3-phenylpropyl)-L-alanylchloride and process for preparing the same | |
CA1100948A (en) | Addition compound of dipeptide derivative and amino acid derivative | |
EP0170148A2 (en) | Process for the preparation of alfa-L-aspartyl-L-phenylalanine alkyl esters | |
JP2647439B2 (ja) | N−保護−α−L−アスパルチル−L−フェニルアラニンメチルエステルの製造方法 | |
SU1051062A1 (ru) | Способ получени ариламидов @ -защищенных аминокислот и пептидов | |
JPS6022918B2 (ja) | N−ベンジルオキシカルボニル−l−アスパルチル−l−フェニルアラニンメチル−エステルとフェニルアラニンメチルエステルとの付加化合物の製造方法 | |
JPH0832718B2 (ja) | α−L−アスパルチル−L−フエニルアラニンメチルエステルの製造方法 | |
US5929253A (en) | L-aspartyl-L-thienylalanine methyl ester, process for its preparation and use as sweetener |