SU841583A3 - Способ получени дипептидныхэфиРОВ - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к способу получени  новых производных дипептид ных эфиров - биологически активных соединений, которые могут найти применение в качестве Промежуточных продуктов при получении сахаристых веществ. Известен способ получени  N-защищенных или незащищенных дипептидных эфиров путем взаимодействи  ангидрида аминокислоты, имеющего защищён ную или незащищенную аминогруппу, с алкильным сложным эфиром аминокислоты l . Недостаток этого способа состоит в том, что нар ду с целевыми дипептидными эфирами образуютс  дипептид ные эфиры, имекнцие пептидные св зи по карбоксильной группе боковой цепи аминокислоты. Цель изобретени  - создание спос ба получени  новых производных дипе тидных эфиров, позвол ющего получит дипептидный эфир со свободной в бок вой цепи карбоксильной группой без образовани  побочных продуктов. Поставленна  цель достигаетс  способом получени  дипептидных эфиров общей формулы Q . NHR, (сн)-6н-с-йн-сн-с-к I ) t-.( где R -бензилоксикарбонил или п-метоксибензилоксикарбонил; . R -бензил; R,-низший алкоксил; п -1 или 2, заключающийс  в том, что соединени  формулы . 0 о NHR.O О (fH-NH НОС-(СН,), -CH-C-NH-CH-C-Rg R где R, Rj, R,n имеют указанные значени , обрабатывают водным раствором кислоты и отдел ют полученный целевого дипептидный эфир в виде твердого продукта . Способ состоит в разложении продукта присоединени  дипептиднох-о сло« ного эфира и соли сложного эфира аминокислоты под действием водного раствора кислоты. Существенна  часть Дипептидного сложного эфира находитс  в твердом состо нии после окончани  реакции, поскольку он обладает низкой растворимостью в кислом водно раствор.е. в силу того, что соль хорошо растворима в растворе, реакцион на  система становитс  ,смесью твердо го дипептидного сложного эфира и раствора соли, который может содержать избыток кислотного компонента. Полученный твердый дипептидный слож ный эфир отдел ют обычным способом, например фильтрованием или центрифу гированием.. Дл  выделени  из отделенного солевого раствора сложного эфира аминокислоты используют кристаллизацию или экстракцию, после ос вобождени  сложного эфира аминокислоты . Согласно предлагаемому способу дипептидный сложный эфир может быть легко получен и вьщелен путем разло жени  продукта присоединени  без ус ложненной стадии экстракции и обработки ионообменной смолой. Выход и чистота дипептидного сложного эфира высокие. Пример 1. К раствору 1335 Ml (5 ммоль) N-бензилоксикарбо нил-1 аспарагиновой кисшоты и 1078 мг (5 /lмoль) хлоргидрата меТилового эфира L-фенилаланина в 20 мл воды с рН б (довод т с помощью 7%ой аммиачной воды) прибавл ют 50 мг термолизина и смесь встр хивают при температуре 38 - 40°С в течение ночи , Выпавший в осадок продукт отдел ют , промывают 40 мл воды, сушат, получают1145 мг тонких игольчатых кристаллов, имеющих точку плавлени  117 - 120°С (продукт присоединени  метилового эфира N-бензилоксикарбонйл- 1-аспартил-1-фенилаланина и ме тилового эфира L-фенилаланина (1:1) ВЫХОД: 75,5% в расчете на хлоргидрит метиловго эфира L-фенилаланина) Продукт перекристаллизовывают из смеси, этилацетата и п-гексана. Точка плавлени  .120 - 124°С. 7,1 (С 1, метанол). Элементный анализ. Найдено., %: С 63,15; Н 6,15; N 7,00. Si Вычислено, %: С 63,24; Н 6,13; N 6,97. 1145 мг полученного продукта рас твор ют в40мл1нНС1 и трижды экстрагируют 30 мл этилацетата. Экс траты смешивают и промывают порци ми по 20 мл воды (3 раза) и сушат над безродным сульфатом магни . Раствор концентрируют в вакууме, ос таток кристаллизуют при добавлении п-гексана, получают 640 мг кристаллического продукта. Точка плавлени  115 - 125 С. 15,3 (, метанол). Элементныйанализ. Найдено, %: С 61,52; Н 5,65; N С2.2Н24«207- .. Вычислено, %: С 61,67; Н 5,65;N 6,54. Метиловый эфир L-фенилаланина выдел ют из смеси сол нокислой фазы и фракции промывочной воды, отделенной при экстракции из этилацетатной фазы. Соединение, полученное посредством первой реакции,  вл етс  продуктом присоединени  метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина . Из спектра ЯМР подтверждено , что их мол рное отношение составл ет 1:1. П р и м е р 2. к раствору 267,2 мг (1 ммоль) N-бензилоксикарбонил-1-аспарагиновой кислоты и 537,6 мг (3 ммоль) метиловго эфира L-фенилаланина в 5 мл буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) добавл ют 100 мг термоазы и 100 мг картофельного ингибитора и смесь встр хивают в течение 20 ч при 38°С. Осадок собирают, промывают водой, сушат, получают 580 мг неочищенного кристаллического продукта присоединени  метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-acпapтил-L-фeнилcLлaнинa и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка плавлени  123 - 125°С, выход 35,5% в расчете на N-бензилоксикарбoнил-L-acпapaгинoвyю кислоту). Продукт раствор ют в 40 мл смеси из диметилформамида и воды (1:1) и к раствору добавл ют при перемешивании Н-форму сильнокислотной катионообменной смолы, смолу отдел ют, фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток раствор ют в диметилформамиде и к раствору добавл ют воду. Выпавший, осадок собиреиот, получают 330 мг метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина (выход 77,0% в расчете на N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapaгиновую кислоту, точка плавлени  123 - 125С) . Пример 3. К раствору 267,2 мг (1 ммоль) N-бензилоксикарбонил-1 .-аспарагиновой кислоты и 359,4 мг {2 ммоль) метилового эфира L-фёнилаланина в 5 мл буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) добавл ют 100 мг тациназы-N и 100 мг картофельного ингибитора и смесь встр хивают в течение 6 ч при . Выпавший в осадок продукт отдел ют, про№ вают водой, получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединени  метилового эфира Nбeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка плавлени  119 - выход 19,7%). Продукт обрабатывают по примеру 2 Н-формой сильнокислотной катионообменной смолой, в Н-форме получают 50 мг метилового эфира М-бензилоксиг|

карбонил-1-аспартил-1-фенилаланнна (точка плавлени  95 - 105С, выход 11,7%).

Пример 4. К раствору 133,6 мг (0,5 ммоль) N-бензилоксикарбонил-1-аспарагиновой кислоты и 89,6 мг 0,5 ммоль) метилового эфира L-фенилаланина в 2,5 мл буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) с 0,07 мл триэтиламина при рН 6,7 добавл ют 50 мг термоаэы и 50 мг картофельного ингибитора, смесь перемешивают путем встр хивани  при в течение 20 ч. Осадок отфильтровывают , промывают водой, получают 130 мг неочищенного продукта присоединени  метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка плавлени  115 - , выход 85,5.% в расчете на метиловый эфир L-фенилаланина) .

Полученный продукт раствор ют в 20 мл диметилформамида и воды (1:1) и обрабатывают сильнокислотной катионообменной смолой в Н-форме (по примеру 5), получают 75 мг метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-фeнилаланина (полный выход 70% в расчете на исходный метиловый эфир L-фенилаланина ) .

Пример 5. Процесс провод т по примеру 4, за тем исключением, что используют 0,05 мл N-метилморфолина вместо 0,07 мл-триэтиламина, при начальном рН 6,4.Получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединени  метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира Lфенилаланина (1:1) (точка плавлени  118 - 124°С, выход 78,9% в расчете на метиловый эфир L-фенилаланина).

Продукт -обрабатывают сильнокислотной катионообменной смолой в Нформе . Получают 70 мг кристаллического метилового эфира N-бензилоксикapбoнил-L-фeнилaнинa (полный выход 66% в расчете на исходный метиловый эфир L-фенилаланина с учетом его . 50%-го использовани ).

Пример 6. 534 мг (2 ммоль) N-бeнзилoкcйкapбoнил-L-acпapaгинoвoй кислоты и 863 мг (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилаланина помещают в колбу емкостью 30 мл и раствор ют в 7 млводы, значение рН довод т до 6,2 с помощью 7%-ой аммиачной воды.

Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина и .встр хивают при температуре 38 - 40°С в течение ночи . Осадок отфильтровывают, сушат, получают 1045 мг кристаллов продук ,та присоединени  метилового N- бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка Ш1авлё11и  104 - , выход 86,1% в расчете

на N-бeнзилкapбoнил-L-acпapaгинoвyю кислоту).

После перекристаллизации из смеси этилацетата и п-гексана получают продукт , имеющий следующие физические свойства и результаты элементного анашиза. Точка плавлени  127 - 135°С. Соб1 6,4 (, метанол).

Элементный анализ.

Найдено, %: с 63,52; Н 6,19; N 6,92.

SiS7S°

Шлчислено, %: С 63,24; Н 6,13; N 6,97.

Продукт тождественен с продуктом присоединени  метилового эфира N-бензилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1), поскольку инфракрасный спектр и спектр ЯМР продукта идентичны со спектрами соединени , Полученного по примеру 1.

800 мг продукта раствор ют в 40 м. 1н. НС1 и раствор экстрагируют хлорис тым метиленом (ЗхЗО мл), органическую фазу отдел ют, промывают водой,

сушат над фильтратом магни , хлористый метилен отгон ют, твердый остаток перекристаллизовывают из смеси этилацетета и п-гексана, получают 450 мг кристаллического продукта. .Точка плавлени  124 - 132°С.

(, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 61,38; Н 5,58; N6,29. f и и п

.

Вычислено, %: С 61,67; Н 5,65; N 6,54.

Продукт представл ет собой ме.тиловый эфир М-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина .

Водный слой, оставшийс  после экстракции хлористым метиленом, обрабатывают бикарбонатом натри , рН довод т до 8,7 и продукт трижды экстрагируют хлористым метиленом смешивают с бикарбонатом натри , величину рН довод т до 8,7 и продук.т трижды экстрагируют хлористым метиленом, бер  порции по 50 мл. Экстракты сушат

над сульфатом магни , пропускают через раствор газообразный хлористый водород в течение 10 мин, раствор концентрируют, к остатку добавл ют этиловый эфир, выпавший осадок отфйльтровывают , получают 29,0 мг метилового эфира D-фенилаланина.Точка плавлени  149 - 151 С.

15,1 (, метанол). Инфракрасный спектр и спектр ЯМР ее падает со спектрами Ь-формы.

Проведенный анализ показывает,

что полученный продукт --продукт при;соединёни  метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилапанина и метилового эфира фенилаланина

(l:lK Пример 7. В колбе емкостью 100 мл в 70. мл воды раствор ют 5,34 г (20 ммоль) N-бензилоксикарбонил-1-аспарагиновой кислоты и 7,32 г (42 ммоль) метилового эфира L-фенила ланина. К полученному раствору с рН 6,2 - 6,3 добавл ют 200 мг термолизина и смесь встр хивают при температуре 38 - в течение 4 ч. Осадок отфильтровывают, промывают в 70 мл водыгсушат, получают 10,11 г кристаллов (точка плавлени  117 ). Проведенный анализ показывает , что продукт есть продукт присоединени  метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фвнилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). После перекристаллизации, продукта из смеси этилацетата и п-, гексана получают следующие значени  Точка плавлени  120 - 124С. Со(|,+ 7,2 (С 1, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С«.63,16; Н 6,14;. 6,99, С 63, 24; Н 6,13; BычиcJleнo, N 6,97.. , . Инфракрасный спектр и спектр ЯМР про вл ют те же характеристики, кото рые указаны дл  продукта присоединени  (1:1) метилового эфира N-бензил оксикарбонил-1-аспартил-L-фенилалани на и метилового эфира L-фенилаланина После обработки сильной кислотой про дукт экстрагируют этилацетатом, после отгонки которого получают в оста ке метиловый эфир N-бензилоксикарбо нил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa. К 1,00 г (1,65 ммоль) получен-ного продукта.присоединени  метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa и сложного эфира L-фенилаланина добавл ют 2 мл и 2,0мл 1 Н НС1 , смесь перемешивают при. комнатной температуре в течение 10 мин. Полученную суспензию фильтруют и осадок промывают 4. мл .воды, получают 0,72 г кристаллического ме лового эфира N-бензилоксикарбонила:-L-аспартил-L-фенилаланина (выход . 98,8%). Полученные кристаллы перекристал лизовывают из смеси этилацетата и п-гексана. Точка плавлени  121 - 124 С. CC( 15,4 (, метанол). . Элементный анализ. Найдено, %: С 61,58; Н 5,64; N6,56. имп - С2дН24. Вычислено, %: С 61,67; Н 5,65;, N 6,54. Инфракрасный спектр продукта сов падает соспектром стандартного про дукта. Идентичность продукта го стандар ным подтверждена посредством сравне ни  водного раствора продукта с вод ным раствором стандартного соединени  в высокоскоростной жидкостной хроматографии . Чистота,, измеренна  этим способом , составл ет 100%. Этот способ использован также .дл  оценки чистоты продуктов разложени  присоединени  в следующих примерах . (если это не оговорено иначе) . Устройство дл  высокоскоростной жидкостной хроматографии (TSK - HLC 801, поставл емой Тоуо Soda К.К.) включает колонку, внутренний диаметр которой 7,5 ммк, длина 30 см, детектор (дифференциальный рефрактометр). В качестве наполнител  используют крахмальный геЛь с размером частиц 5 мк (TSK - CELLS 170, поставл емый Тоуо Soda К.К.). Элюентом служит 0,5%ный водный раствор ацетата натри . Измерени  провод т при комнатной температуре,скорости потока 0,8 мп/мин, перепаде давлени  20 кг/смI Пример8. К1,00г (1,65 IMoль) продуктов присоединени  метилового эфира N-бензилоксикарбонил- L-acпapтил-L- .фeнилaлaнинa и метилового эфира L -фенилаланинадобавл ют 2 мл воды и 1,32 мл 1н НС Г и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную массу обрабатывают по примеру 7. Получают 0,70 г тонких призматических кристаллов, имеющих точку плавлени  100 - 126С (содержание метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина 96,8%). Пример 9. О,534 г (2 ммоль) N-бензилoкcикapбoнил-L-acпapaгиновой кислоты и 0,863 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилаланина раствор ют в 10 мл воды, значение рН довод т до 6,0 с помощью 7%-ой аммиачной воды.. . Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, смесь встр хивают. в течение ночи при температуре 38 . осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат, получают 0,90 г кристаллов, имеющих точку плавлени  120 - 126С. Часть Кристаллов перекристаллиэовывают из смеси этилацетата и п-гексана , получают продукт с точкой плавлени  128 - 134°С иПо равный -6,3 (, метанол). .Этот продукт имеет инфракрасный спектр и спектр ЯМР, которые , идентичны этим же спектрам продукта присоединени  метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилаланила и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Элементный анализ. Найдено, %:С63,42;Н6,17; С Н N О Вычислено, %: С 63,24; Н 6,13; N 6,97. Затем продуктОбрабатывают кислотой , получают метиловый эфир N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина и метиловый эфир О-фенилаланинагг. в мольном отношении 1:1. Эти результа ты позвол ют сделать вывод, что полученные кристаллы есть продукты присоединени  метилового эфира N-бензилоксикарбонила-1-аспартил-1-фенилалани на и метилового эфира D-фенилаланина (1:1). . 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединени  смешивают с 4 мл воды и 0,26 г лимонной кислоты, смеси перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и обрабатывают по примеру 7, псэлучают 0,35 г кристаллов метилового эфира N-бензилоксикарбонил -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина (чистота 100%, выход 99,3%). , Пример 10. К 0,50 г (0,82 ммоль).продукта присоединени  метилового, эфира N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина и метилового эфира 1,-фенилаланина, получен ного по примеру 7, добавл ют 4 мл во ды и 0,24 г (1,2 ммоль) р-толуолсуль фокислоты моногидрата. Смесь обрабатывают в услови х примера 7. ПолучаютО ,33 г кристаллов метилового эфира М-бензилоксикарбонила-1-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, выход 93,6%). Пример 11. В колбу емкостью 30 мл помещают 0,45 г -(3,2 ммоль) 85% муравьиной кислоты и 8 мл воды и к смеси добавл ют 0,50 г (О-,82 ммоль продукта присоединени  метилового эф ра М-бензилоксикарбонил-1-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина, полученного в примере 7. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин, продукт отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат, получают 0,312 г белых кристаллов метилового эфира М-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина (чистота 100%, выход 88,6%). Пример 12. К 0,47 г (8,2 ммоль) лед ной уксусной кислоты к 8 -МП воды добавл ют 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединени  метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина и мети лового эфира L-фенилаланина, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, продукт отфильтровывают . Промывают 10 мл воды, сушат. Получают 0,308 г белых кристаллов метилового эфира N-бензилокси карбонила-1-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, выход 87,2%). П р и, м е р 13. 1,00 г (1,65ммол продукта присоединени  метилового эфира N-бeнэилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилово-о эфира L-фенилаланина, полученного в при мере 7, загружают в колбу емкостью 30 мл и добавл ют 2 мл воды и 0,2 мл 1 н НС1 . Смесь перемешивают при в течение 3 мин, а затем обрабатывают по примеру 7. Получают 0,35 г кристаллов метилового эфира N-бензилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнина (чистота 100%, выход 100%). Пример.14. ,В колбу емкостью 30 мл помещают 0,594 г (2 ммоль) N-p-мeтoкcибeнзилoкcикapбoнил-L-acпaрагиновой кислоты и 0,860 г-(4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина и раствор ют в небольшом количестве 1н NaOH, величину рН довод т до 6,0. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина и встр хивают при температуре ot 38 до в течение ночи. Осадок отфильтровывают, npoi«Mвают 10 мл воды и сушат. Получают 0,928 г кристаллов, имеющих точку плавлени  68 - . Полученный продукт представл ет собой присоединение метилового эфира N-p-мeтoкcибeнзилoкcикapбoнил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и п-гексана. Точка плавлени  72 - 76°С. 6,5 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 61,85; Н 6,04; N 6/46. с н N О Вычислено, %: С 62,15; Н 6,16; N 6,59. Инфракрасный спектр: 3280 (колебани  раст жени  св зи N-H } 3020 и 2930 см-- (колебани  раст жени  С-Н) ; 1735 см (сложный эфир ); 1700 ( уретан) ; 1640 (1-ое амидное поглощение ); 1500 до 1540 см- (2-е амидное поглощение); 1435 см- (С-Н деформационное колебание) ; 1380 (карбоксилат); 1210 до 1240 см- (колебание раст жени  св зи С-О-С и 3-е амидное. поглощение) ; 1030 см- (колебание фенила в плоскости) и 690, 740 и 810 см- (колебание фенила вне плоскости).. Спектр ЯМР: () 2,7 частей на миллион (2Н) } ; (2) 3,1 частей на миллион (4Н); ( 3 )3,6 частей на миллион (ЗН)и 3,7 частей на миллион (ЗН); ( 4)3,8 частей на миллион (ЗН); ( 5)4,0 частей на миллион -(IH) ; ( 6)4,5 частей на миллион (IH); ( 7)4,8, частей на миллион (IH); (-8) 5,0. частей на миллион (2Н) } ( 9)5,65 частей на миллион (ЗН); ( 10)5,65 частей на миллион (1Н) (11)6,2 частей на миллион (1Н); ( 12)6,8 до 7,3 частей на миллиоь (14Н). Эти результаты показывают, что продукт  вл етс  продуктом присоединени -формулы (1), где R, Rj/ п означает р-метоксибензилоксикарбоНИЛ , бензил, метокси и 1; соответственно . 0,500 г (0,78 ммоль) продукта при соединени  метилового эфира N-p-Мето си6ензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фе нилаланина и метилового эфира и-фени аланина, полученного образом, помещают в колбу емкостью 30 мл,доба л ют 2 мл воды иО,94 мл (0,94 ммоль 1 н НС1, смесь перемешивают при в течение 3 мин, фильтруют, осадок промывают б мл воды и сушат, получают 0,32 г кристаллов.Следующие результаты подтверждают что продукт  вл етс  сложным эфиром М-р-метоксибензилоксикарбонил-1-аспа тил-1-фенилаланина (чистота 100%, вы ход 89,1%).. Кристаллы раствор ют в этилацетате и высаживают при добавлении п-ге сана. Точка плавлени  128 - 130с. 15,1 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 60,30; Н 5,74; N5,99., г н N п . Вычислено, %: С 60,25 Н 5,72; N 6,11. Инфракрасный спектр: 3280 см--, (раСт жение N-H),; 2930 и 3020 см- (колебание раст жени  С-Н) ; 1735 CM- (с 0 сложный эфир) ; 1700 см- ( уретан) ; 1650 см-- (1-ое амидное поглощение)} 1510 1540 см .(2-е амидное поглощение); 1440 смг. деформаци  С-Н) : 1220 1270 см-ч колебание раст жени  С-О-С 3-е амидное поглощение); 1030 и 1050 см- (колебание фенила в плоско ти ) f 690 и 810 (колебание фени ла вне плоскости). ЯМР спектр: . (1)2,8 частей на миллион (2Н); ( 2)3,0 частей на миллион (2Н); 3,6 частей на миллион (ЗН); 3,8 частей на миллион (ЗН); 4,5 частей на миллион (1Н); 4,8 частей на миллион (1Н); 5,0 частей на миллион (2Н); 6,0 частей йа миллион (1Н); ( 9)6,6 частей на миллион (1Н); ( 10)6,6 частей на миллион (1Н); ( 11)6,8 частей на миллион до 7, частей на миллион (9Н); Эти результаты показывают, что конеч 1ым продуктом  вл етс  соедине ние формулы ( ), в котором R, Rg, R и n означают р-метоксибензилоксикарбонил , бензил,метокси и 1, соответственно . 0,2 вес.ч. полученного метилового эфира N-p-метоксйбензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина раствор ют в 2 вес.ч. ацетона и к полученному раствору добавл ют 1 вес.ч. 4н НС 1. Смесь нагревают на вод ной бане со слабым противотоком в течение 1,5 ч до полного разложени  и получё ни  раствора, содержащего .в качестве основных компонентов метиловый сложный эфир 1-аспартил-1-фенилаланина, метиловый эфир L-фенилаланина и анисовый спирт. Из указанного раствора получают метиловый эфир L-аспартил-L-фенилаланина . Пример 15. 0,562 г(2 ммоль) М-бензилоксикарбонил-1-глутаминоврй кислоты и 0,862 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина помещают в колбу емкостью 30 мл и добавл ют 1 н NaOH до их полного растворени , рН довод т до 6,0. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, встр хивают при температуре 38 - 40°С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат. Получают 0,510 г кристаллов, имеющих точку плавлени  80 - 85°С. Следующие результаты подтверждают, что вещество представл ет собой продукт присоединени  метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-глy тамил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси атилацетата и п-гексана. Точка плавлени  92 - 97с. WJff- 0,1 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 63,61; Н 6,31; N6,65. г U м р. Вычислено/ %: С 63,75; Н 6,32; N 6,76. Инфракрасный спектр: 3340 см (колебание раст жени  св зи N-H) ; 2950 и 3030 CM-t (колеба- ние раст жени  св зи С-н); 1730 и . 1745 см- ( сложный эфир) ; 1690см ( уретан); 1660 (1-ое амидное поглощение) ; 1620 см (карбокси- . лат) (2-ое амидное поглощение) ;1440cAi. (С-Ндеформационное колебание)1405см (карбрксилат) ,1240 до 1310 см С-О-С колебание раст жени  и 3-е амидное ; поглощение); 1440 см (С-Н деформационное .колебание) ; 1405 см (карбоксилат ), 1240 до 1310 см (С-О-С колебание раст жени  и 3-е амидное поглощение); 1050 см (колебание фенила в плоскости); 700 и 750 см, (колебание фенила вне плоскости). Спектр ЯМР: ( 1)2,0 частей на миллион ( 2)2,3 частей на миллион ( 3)3,0 частей на миллион 3,6 частей на миллион частей на миллион (5) 3,8 частей на миллион (6) 4,3 частей на миллион ( 7) 4,8 частей на миллион (8) 5,0 частей на миллион ( 9) частей на миллион ( 10)5,8 частей на миллион ( 11)7,2 частей на миллион ( 12)7,2 частей на миллион (ЮН); ( 13)7,3 частей на миллион (5Н) . Эти результаты показывают, что продукт  вл етс  продуктом присоединени  формулы;(I),где R, Rg, Rg и n означают бензилоксикарбонил, бензил , метокси и 2, соответственно. 0,001 г продукта присоединени  метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1-глутамил-1-фенилаланина и мети лового эфира L-феннлаланина добавл ют к 2 , 3 мл (0,32 ммоль) 0,14 н НС1 при перемешивании в пробирке емкость 15 мл. Смесь перемешивают при комнат ной температуре в течение 15 мин. Полученный белый осадок отфильтро вывают, промывают 3 мл воды, сушат, получают 0,683 г кристаллов. Следующие результаты подтверждают что продукт представл ет собой этило вый эфир М-бензилоксикарбонил-1-глутамин-1-фенилаланина (чистота 100%, выход 95,8%) . Кристаллы раствор ют-в этилацетате и переосаждают при добавлении пгексана . Точка плавлени  97 - 99°С, 11,0 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 62,63} Н 5,94; N 6,24. р и U n Вычислено, %: С 62,43; Н 5,92; N 6,33. Инфракрасный спектр: 3300 см- (колебание раст жени  N-H) ; 2930 и 3030 см- (колебание раст жени  С-н) ; 1735 см ( слож ный эфир) ; 1690 см - ( уретан) ; 1650 см- (1-ое амидное поглощение) 1530 см- (2-ое амидное поглощение) 1440 (колебание деформации С-Н от 1220 до 1280 см- (колебание рас т жени  С-О-С и 3-е амидное поглоще ние) ; 1050 см- (колебание фенила в плоскости) и 695 и 735 см- (колеба ние фенила вне плоскости). Спектр ЯМР: ( 1)2,0 части на миллион (2Н); ( 2)2,4/части на миллион (2Н); ( 3)3,1 части на миллион (2Н); ( 4)3,7 части на миллион (ЗН); ( 5)4,3 части на миллион (1Н); ( 6)4,8 части на миллион (1Н); ( 7)5,1 части на миллион (2Н); ( 8)5,9 части на миллион (1Н); . (9). 7,2 части на миллион (1Н); ( 10)7,2 части на миллион (5Н); ( 11)7,3 части на миллион (5Н)} ( 12)8,1 части на миллион (1Н). Эти результаты показывают, что конечный продукт представл ет собой соединение формулы ( II ), где R , R R и n означают бензилоксикарбонил, бензил,- метокси и 2, соответсгвенно Полученный метиловый эфир N-бенз локсикарбонил-1-глутамил-1-фенилала нина можно превратить посредством восстановлени  водородом в метиловы эфир 1-глутамил-1-фенилаланина, и его также можно превратить гидролизом в Н-бенэилоксикарбонил-1-глутамил-1-фенИлаланин . Пример 16. В колбу емкостью 100 мл помещают. 0,686 г (3,12 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилсьпанина , 25 мл воды, к полученному раствору добавл ют водный 2н NaOH при охлаждении льдом и при перемешива 1ии рН довод т до .7,5. Продолжа  перемешивани  к раствору постепенно добавл ют 0,360 г (1,44 ммоль) ангидрида Ы-бензилоксикарбонил-1-аспарагиновой кислоты и поддерживают рН от 7,0 до 7,5 с помощью -2н водного раствора NaOH. Продолжают перемешивание в течение 2 ч и к .реакционной смеси добавл ют водную 1н НС1 и довод т рН до 6. Выпавший в осадок продукт отфильтровывают, про1«ывают 50 мл воды , сушат, получают 0,416 г продукта присоединени , метилового эфира М-,бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина (смесь 86% метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-acnapтил- (С)-1-фенилаланина и 14% метилового эфира N-бензилаксикарбонил-L-аспартил- (Сп)-1-фенилаланина) и метилового эфира L-фёнилаланина (1:1)(точка плавлени  от 108 до 115°С). В процессе реакции образуетс  значительное количество метилового эфира Ы-бензилоксикарбонил-1-аспартил- (Cf, )-1-фенилаланина, но больша  часть этого соединени  остаетс  в фильтре..и в промывочной воде. В химическом стаКане ёмкостью 12 мл при перемешивании к полученному продукту присоединени  метилового эфира Н-бенпилоксикарбонил-1-аспартил- (с I и Са)-1-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина добавл ют 1,7 мл (0,7 ммоль) 0,4 НС1 водного раствора и смесь продолжают перемешивать при комнатной температуре в течение 15 мин. Белый осадок отфильтровывают, промывают 3 мл воды, сушат. Получгиот 0,136 г (выход 96,3%) кристаллов Nметилового эфира N-бензилоксикарбонйл-1-аспартил-L-фенилаланина (содержащий 17% N-бензилоксикарбонил-1-аспартил- (Са)-L-фенилаланина . Точка плавлени  110 -- 118с. Пример 17. В кстбе емкостью 30 мл 0,543 г (2 ммоль) N-бензилoкcикapбoнилгL-acпapaгинoвoй кислоты и 0,918 г (4 ммоль) хлоргидрата этилового эфира L-фенилаланина раствор ют в 5 мл воды, к раствору добавл ют 4н водный NaOH, рН довод т до 6. В полученный раствор ввод т 50 мг термолизина и смесь встр хивают при температуре 38 - 40°С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, промывают 30 мл воды, сушат. Получают 0,913 г кристаллов, имеющих точку пдавлени  85 - . Продукт тождественен с продуктом присоединени  этилового эфира N-бен зилоксикарбонил-1-аспартиЛ-1-фенилаланина и этилового эфира L-фенилал нина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из этилацетата и п-гексана. Точка плавлени  93 - 95с. 6,0 (С 1, метанол).. Элементный анализ. Найдено, %: С 64,50} Н 6,56; Г н м п Вычислено, %: С 64,23; Н 6,50; N 6,61. Инфракрасный спектр: 3300 см (колебание раст жени  св зи N-H); 2900 - 3050 см- (колебание раст жени  С-Н); 1710 - 1740с ( сложный эфир и С О уретан); 1640 . (1-ое амидное поглощение) 1585 см- (карбоксилат) ; 1520 см- (.2-ое амидное поглощение) ; 1440 см ( деформационное коле бание С-Н) ; 1380-. см (кэрбоксилат) ; 1200 и 1270 см(колебание раст жени  С-О-С и 3-е амидное поглощение) ; 1055 см колебание фенила в плоскости); 700 730 и, 750 СМ, (колебание фенила вн плоскости). Спектр ЯМР: ( 1)1,1 части на миллион (6Н); ( 2)2,7 части на миллион (2Н); ( 3)3,0 части на миллион (4Н); ( 4)4,0 части на миллион (4Н); ( 5)4,1 части на миллион (1Н); ( 6)4,5 части на миллион (1Н); ( 7)4,0 части на миллион (1Н); ( 8)5,0 части на миллион (2Н); ( 9)6,2 части на миллион (1н),; ( 10)6,7 частина миллион (ЗН) ( 11)7,2 частина миллион (1Н); ( 12)7,2 частина миллион (Юн); ( 13)7,3 частина миллион (5Н). Эти результатыподтверждают, что продукт  вл етс  продуктом присоеди нени  формулы (I) ,где R , R, vi n означают бензилоксикарбонил, бенз этокси и 1 соответственно. В колбе емкостью 30 мл 0,125 г (0,197 ммоль) полученного продукта присоединени  метилового эфира Nбензилоксикарбонил-1-аспартил-Ь-фенилаланина и этилового, эфира L-фени аланина смешивают с 2 мл воды и 0,24 мл 1н НС1 (0,24 ммоль), смесь перемешивают при комнатной температ ре в течение 30. мин. Полученную сус пензию фильтруют, осадок промывают 5 мл воды, сушат, получают 0,0807 г кристаллов этилового эфира N-бензил оксикарбонил-1-аспартил-1--фенилалан на (чистота 100%, выход 92,6%). Кри таллы перекристаллизовывают из смес этилацетата и п-гексана. Точка плавлени  128 - 135с. 17,3 (, метанол) . Элементный анализ. Найдено, %: С 62,82; Н 5,96; «.л«/ Вычислено, %: С 62,43; Н 5,92; N 6,33. Инфракрасный спектр: 3300; 2900 - 3100; 1730; 1690; 1665; 1530; 1440; 1200 - 1280; 1030; 620; 740 см Спектр ЯМР, (f: . . 1,1 части на миллион; 2,8 части на миллион, 3,0 части на миллион, 4,1 части на миллион; 4,6 части на миллион, 4,8 части на миллион; 5,1 части на миллион; 6,0 части на миллион; 7,1 части на миллион; 7,3 части на миллион; 9,6 части на миллион. Пример 18. 1,189 г (4ммоль) N-p-метоксибензилоксикарбонил-L-acnaрагиновой кислоты и 1,837 г (8 ммоль) хлоргидрата этилового эфира L-фенилаланина помещают в колбу емкостью 30 мл и раствор ют в 1н водном NaOH, рН довод т до 6,0. Раствор разбавл ют водой до 15 мл и смешивают с 0,1 г термолизина.Смесь перемешивают при температуре 38-40с в течение 7 ч. Полученный осадок отфильтровывают. Промывают 30 мл воды, сушат. Получают 2,401 г (выход 90,2%) продукта присоединени  этилового эфира N-p-меТоксибензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-фенилаланина и этилового эфира .L-фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси метанола и диэтилового эфира. Точка плавлени  82 - . 6,0 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 63,52; Н 6,77; .°-ro Вычислено, %: С 63,14; Н 6,51; N 6,31. . Спектр инфракрасного поглощени  и ЯМР дают следующие- характеристические , максимумы. Инфракрасный спектр: 3300 СМ (колебани  раст жени  N-H) ; 2900 - 3050 см-I (колебание . раст жени  С-Н); 1720, 1730 и 1740см ( сложные эфиры и уретан); 1650см (1-ое амидное поглощение); 1510 ,1540 (2-ое амидное поглощение); 1440 см-f (деформационное колебание С-Н); 1390 см- (карбоксидат) ; 1220 1280 СМ (С-О-с) раст жение и 3-е амидное поглощение) ; 1030 (деформаци  фенила в плоскости); 690, 760 и 810 (колебание фенила вне плоскости). Спектр ЯМР (с значение) : ( 1)1,2 части на миллион (6Н); ( 2)2,7 части на миллион (2Н); (3.) 3,1 части на миллион (4Н);

(4)3,8 части на миллион (ЗН)

(5)4,0 части на миллион (4Н)}

(6)4,1 части на миллион (IH) ;

(7)4,5 части на миллион (IH);

(8)4,7 части на миллион (1Н);

(9)5,0 части, на миллион (1Н)j

(10)5,5 части на миллион {4Н);

(11)6,1 части на миллион (1Н); (12) 6,8-7,4 части на миллион

,(14Н).

Эти результаты показывают, что продукт представл ет собой продукт присоединени  формул (I),.где R , Rj , Rj и n означают р-метоксибензиоксикарбонил , бензил, этокси и 1, сответственно .

Повтор ют процесс описанный в примере 22, за тем исключением,.что используют полученный продукт присоединени  вместо продукта присоединени  метилового эфира N-p-метоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина.Получают этиловый эфир 1-аспартил-1фенилаланина . Выход эфира 95,5%.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ получени  дипептидных ров формулы

   MUD

   оQ

   П И Н « «чf

   Hot-CCHg bCH - C-NH-CH-C-R

   R2

   где R,

   гл бензилоксикарбонил,

   п-метоксибензилоксикарбонилf R - бензил; Rj - низший алкоксил; п - 1 или 2,

   личающийс  тем, что

   о т соединение формулы

   О О

   NHR.O ( -111 II II

   ,- L -ен-C-NH-CH-C-Ra R -C-CH-NH . НОС-(СН

   iL ИL у

   II

   йа

   5

   где ,., Rg, R-j, n имеют указанные значени , обрабатывают водным раствором кислоты и отдел ют полученный

   .целевой дипепт дный эфир в виде твер|дого продукта.

   ; Источники информации,

   ;прин тые во внимание при экспертизе 1. Патент Японии № 14217,

   -кл. 16 С 64, 1974.