JPH0279993A - L,l−ジペプチドアスパルテームの製法 - Google Patents
L,l−ジペプチドアスパルテームの製法Info
- Publication number
- JPH0279993A JPH0279993A JP31243387A JP31243387A JPH0279993A JP H0279993 A JPH0279993 A JP H0279993A JP 31243387 A JP31243387 A JP 31243387A JP 31243387 A JP31243387 A JP 31243387A JP H0279993 A JPH0279993 A JP H0279993A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- producing
- organic solvent
- dipeptide
- dipeptide aspartame
- phenylalanine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 title claims description 17
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 title claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 17
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 title claims description 16
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 title claims description 16
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 title claims description 16
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 5
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 claims description 4
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 3
- PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N pentyl acetate Chemical compound CCCCCOC(C)=O PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- POEDHWVTLBLWDA-UHFFFAOYSA-N 1-butylindole-2,3-dione Chemical compound C1=CC=C2N(CCCC)C(=O)C(=O)C2=C1 POEDHWVTLBLWDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PTTPXKJBFFKCEK-UHFFFAOYSA-N 2-Methyl-4-heptanone Chemical compound CC(C)CC(=O)CC(C)C PTTPXKJBFFKCEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VGVHNLRUAMRIEW-UHFFFAOYSA-N 4-methylcyclohexan-1-one Chemical compound CC1CCC(=O)CC1 VGVHNLRUAMRIEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims description 2
- YKYONYBAUNKHLG-UHFFFAOYSA-N n-Propyl acetate Natural products CCCOC(C)=O YKYONYBAUNKHLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940090181 propyl acetate Drugs 0.000 claims description 2
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YIWUKEYIRIRTPP-UHFFFAOYSA-N 2-ethylhexan-1-ol Chemical compound CCCCC(CC)CO YIWUKEYIRIRTPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloroethane Chemical compound CC(Cl)(Cl)Cl UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 14
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 8
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 abstract description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 11
- -1 amino acid amine Chemical class 0.000 description 10
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- VSDUZFOSJDMAFZ-VIFPVBQESA-N methyl L-phenylalaninate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 VSDUZFOSJDMAFZ-VIFPVBQESA-N 0.000 description 7
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 3
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 3
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- SWVMLNPDTIFDDY-FVGYRXGTSA-N methyl (2s)-2-amino-3-phenylpropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SWVMLNPDTIFDDY-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072049 amyl acetate Drugs 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M heptanoate Chemical compound CCCCCCC([O-])=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000001913 submandibular gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明はり、L−ジペプチドアスパルテームの製法に係
り、殊にN−保護基−アスパラギン酸と、フェニルアラ
ニンメチルエステルとから出発し、酵素を触媒とし反応
させてN−保護基−L−アスパルチル−し−フェニルア
ラニンメチルエステルを製造する方法に係る。
り、殊にN−保護基−アスパラギン酸と、フェニルアラ
ニンメチルエステルとから出発し、酵素を触媒とし反応
させてN−保護基−L−アスパルチル−し−フェニルア
ラニンメチルエステルを製造する方法に係る。
(従来の技術)
L、L−ジペプチドアスパルテームとしては、例えば砂
糖の約200倍の甘味を有するα−L−アスパルチルー
L−フェニルアラニンメチルエステルがある。この化合
物は、従来、アミノ基が反応性官能基としてのし一カル
ボキシル基で保護されたし一アスパラギン酸とL−チロ
シンのメチルエステルとを反応させ、次いで保護基を脱
離させることにより製造されて来たが、前処理や後処理
が煩雑である点に難点があった。
糖の約200倍の甘味を有するα−L−アスパルチルー
L−フェニルアラニンメチルエステルがある。この化合
物は、従来、アミノ基が反応性官能基としてのし一カル
ボキシル基で保護されたし一アスパラギン酸とL−チロ
シンのメチルエステルとを反応させ、次いで保護基を脱
離させることにより製造されて来たが、前処理や後処理
が煩雑である点に難点があった。
そこで、これらの難点を回避する方法として固定化ペニ
シラーゼを用いる酵素法が発表され、注目を集めた(C
,Fuganti等rTetrahedron Let
t、J第27巻第3191頁、1980年)。
シラーゼを用いる酵素法が発表され、注目を集めた(C
,Fuganti等rTetrahedron Let
t、J第27巻第3191頁、1980年)。
一方、サーモライシンを触媒として、L−アスパラギン
酸と疎水性アミノ酸のアミンとを反応させて光学活性の
り、L−ジペプチドアスパルテームを製造する方法も東
洋曹達工業株式会社から発表されている(K、OYAM
A等r Ann、N、Y、Acad、Sci J第43
4頁、1984年)。
酸と疎水性アミノ酸のアミンとを反応させて光学活性の
り、L−ジペプチドアスパルテームを製造する方法も東
洋曹達工業株式会社から発表されている(K、OYAM
A等r Ann、N、Y、Acad、Sci J第43
4頁、1984年)。
(発明が解決しようとする問題点)
L、L−ジペプチドアスパルテームの製造に関する上記
の両従来法は、先ず、アスパルチル誘導体として高価な
し一体を必要とする点に問題がある。更に、上記に、O
YAMA等の方法は触媒としてのサーモライシンが高価
であって、入手性に難があり、又得られるり、L−ジペ
プチドアスパルテームは苦味を呈するβ−異性体を含有
している点、収率が使用される溶媒の量や熱力学的平衡
に左右される点並びに反応生成物を沈澱させるために等
量の且つ高価なり又はL−フェニルアラニンメチルエス
テルの添加を必要とする点に問題がある。
の両従来法は、先ず、アスパルチル誘導体として高価な
し一体を必要とする点に問題がある。更に、上記に、O
YAMA等の方法は触媒としてのサーモライシンが高価
であって、入手性に難があり、又得られるり、L−ジペ
プチドアスパルテームは苦味を呈するβ−異性体を含有
している点、収率が使用される溶媒の量や熱力学的平衡
に左右される点並びに反応生成物を沈澱させるために等
量の且つ高価なり又はL−フェニルアラニンメチルエス
テルの添加を必要とする点に問題がある。
(発明の目的)
本発明はN−保護基−アスパラギン酸と、フェニルアラ
ニンメチルエステルとから出発し、酵素を触媒として反
応させることにより、光学活性体であるり、L−ジペプ
チドアスパルテームとしてのN−保1基−L−アスパル
チル−L−フェニルアラニンメチルエステルを合成する
方法を提供しようとするものであり、その主たる目的は
出発物質として高価な光学活性体を用いる必要性が必ず
しもない合成法を提供することにある。
ニンメチルエステルとから出発し、酵素を触媒として反
応させることにより、光学活性体であるり、L−ジペプ
チドアスパルテームとしてのN−保1基−L−アスパル
チル−L−フェニルアラニンメチルエステルを合成する
方法を提供しようとするものであり、その主たる目的は
出発物質として高価な光学活性体を用いる必要性が必ず
しもない合成法を提供することにある。
本発明の副次的目的は、酵素として廉価な且つ人手が容
易なものを用い、しかも収率を向上させることにある。
易なものを用い、しかも収率を向上させることにある。
(問題点を解決し、目的を達成するための手段及び作用
) 本発明によれば、上記の問題点はN−保護基一アスパラ
ギン酸とフェニルアラニンとを酵素の存在において反応
させることによりN−保護基一り一アスパルチルーL−
フェニルアラニンメチルエステルを製造する方法におい
て、酵素としてパパインを用い且つ二相溶媒系で緩衝液
によりpHを4〜7とし、20〜45℃において反応さ
せることを特徴とする、L、L−ジペプチドアスパルテ
ームの製法により解決されると共に、上記の目的が達成
される。
) 本発明によれば、上記の問題点はN−保護基一アスパラ
ギン酸とフェニルアラニンとを酵素の存在において反応
させることによりN−保護基一り一アスパルチルーL−
フェニルアラニンメチルエステルを製造する方法におい
て、酵素としてパパインを用い且つ二相溶媒系で緩衝液
によりpHを4〜7とし、20〜45℃において反応さ
せることを特徴とする、L、L−ジペプチドアスパルテ
ームの製法により解決されると共に、上記の目的が達成
される。
この本発明方法の主たる特徴的構成は、先ず、二相溶媒
系の採用にある。この二相溶媒系は、本発明方法によれ
ば水と有機溶媒とで構成される。
系の採用にある。この二相溶媒系は、本発明方法によれ
ば水と有機溶媒とで構成される。
本発明方法において二相溶媒系が採用される理由は、反
応を水相で行ない、形成された反応生成物を有機溶媒相
に移行させることにより、反応生成物が更に反応したり
或は又反応生成物が可逆反応により原料物質に変換して
しまうのを阻止するためである。このような観点から、
有機溶媒としては、当然のことながら、水に不溶又は僅
かに可溶なものが採択され、例えばメチル−t−ブチル
エーテル、n 7’チルエーテル、ペンチルエーテル
等の低級エーテル;エチルアセテート、プロピルアセテ
ート、ブチルアセテート、アミルアセテート等の低級エ
ステル;クロロホルム、四塩化炭素、1.1.1−トリ
クロロエタン等の塩素化炭化水素;n−ブチルアルコー
ル、ペンタノール、ヘキサノール、シクロヘキサノール
、2−エチルヘキサノール等の04〜C8のアルコール
類;メチルイソブチルケトン、ジイソブチルケトン、シ
クロヘキサノン、メチルシクロヘキサノン等のケトン類
等を例示することができる。
応を水相で行ない、形成された反応生成物を有機溶媒相
に移行させることにより、反応生成物が更に反応したり
或は又反応生成物が可逆反応により原料物質に変換して
しまうのを阻止するためである。このような観点から、
有機溶媒としては、当然のことながら、水に不溶又は僅
かに可溶なものが採択され、例えばメチル−t−ブチル
エーテル、n 7’チルエーテル、ペンチルエーテル
等の低級エーテル;エチルアセテート、プロピルアセテ
ート、ブチルアセテート、アミルアセテート等の低級エ
ステル;クロロホルム、四塩化炭素、1.1.1−トリ
クロロエタン等の塩素化炭化水素;n−ブチルアルコー
ル、ペンタノール、ヘキサノール、シクロヘキサノール
、2−エチルヘキサノール等の04〜C8のアルコール
類;メチルイソブチルケトン、ジイソブチルケトン、シ
クロヘキサノン、メチルシクロヘキサノン等のケトン類
等を例示することができる。
本発明方法における副次的な構成的特徴は触媒としてパ
パイン酵素を使用する点にある。、このパパイン酵素は
、従来使用されて来たサーモライシン酵素に比較する場
合に、廉価であり、安定に且つ容易に入手し得ると云う
利点を有している。
パイン酵素を使用する点にある。、このパパイン酵素は
、従来使用されて来たサーモライシン酵素に比較する場
合に、廉価であり、安定に且つ容易に入手し得ると云う
利点を有している。
しかもパパイン酵素は水溶性が高く、上記のような有機
溶媒に難溶であり、従って本発明が採用する二相溶媒系
に適用する要件を満たしている。
溶媒に難溶であり、従って本発明が採用する二相溶媒系
に適用する要件を満たしている。
本発明方法において、一方の反応関与体であるN−保護
基−アスパラギン酸や他方の反応関与体であるフェニル
アラニンとしては光学的に純粋であり高価なL体を用い
ることも、廉価なりL体を用いることもでき、所望生成
物の収率は原料物質の光学的純度には無関係である。従
来の諸方法は、アスパルチル誘導体として光学的純度が
高く且つ高価なし一体の使用を要件としているので、両
反応関与体に関して光学活性体の使用を要件としない本
発明方法はコスト面及び原料面において極めて有利であ
る。
基−アスパラギン酸や他方の反応関与体であるフェニル
アラニンとしては光学的に純粋であり高価なL体を用い
ることも、廉価なりL体を用いることもでき、所望生成
物の収率は原料物質の光学的純度には無関係である。従
来の諸方法は、アスパルチル誘導体として光学的純度が
高く且つ高価なし一体の使用を要件としているので、両
反応関与体に関して光学活性体の使用を要件としない本
発明方法はコスト面及び原料面において極めて有利であ
る。
尚、本発明方法に使用される一方の原料(基質)である
アスパルチル誘導体が有している保護基としては自体周
知のものであることができる。
アスパルチル誘導体が有している保護基としては自体周
知のものであることができる。
(実施例等)
次に、実施例及び比較例に関連して本発明を更に詳細に
説明する。尚、実施例中において記されている略号は当
該分野において慣用されている略記法に則ったものであ
り、略号とその意味は下記の通りである。
説明する。尚、実施例中において記されている略号は当
該分野において慣用されている略記法に則ったものであ
り、略号とその意味は下記の通りである。
BOCニブチルオキシカルボニル
ASp:アスパラギン酸
Cbz:ベンジルオキシ力ルボニル
MOZ:メトキシベンジルオキシカルボニルPhe:フ
ェニルアラニン OMe:メチルエステル 実施例I N−カルボキシベンジルオキシ−L−アスパラギン酸l
OミリモルとL−フェニルアラニンメチルエステルlO
ミリモルとを原料とし、これにエチルアセテート500
mlを添加し、Mcllvaine緩衝液(p H4,
6) 50mlにパパイン2gと少量のメルカプトエタ
ノールとを加えた溶液を上記の溶液に添加して混合した
。この混合物を35℃で25時間反応させ、次いで有機
溶媒を減圧除去した。残留物を20calの水−アセト
ン混液に添加して混合し、放置し結晶化させて所望のN
−ベンジルオキシカルボニル−L−アスパルチル−L−
フェニルアラニンメチルエステル7.2 ミリモルを得
た。尚、この物質はα−異性体であって、β−異性体を
含有していないことが高速液体クロマトグラフィーによ
り判明した。
ェニルアラニン OMe:メチルエステル 実施例I N−カルボキシベンジルオキシ−L−アスパラギン酸l
OミリモルとL−フェニルアラニンメチルエステルlO
ミリモルとを原料とし、これにエチルアセテート500
mlを添加し、Mcllvaine緩衝液(p H4,
6) 50mlにパパイン2gと少量のメルカプトエタ
ノールとを加えた溶液を上記の溶液に添加して混合した
。この混合物を35℃で25時間反応させ、次いで有機
溶媒を減圧除去した。残留物を20calの水−アセト
ン混液に添加して混合し、放置し結晶化させて所望のN
−ベンジルオキシカルボニル−L−アスパルチル−L−
フェニルアラニンメチルエステル7.2 ミリモルを得
た。尚、この物質はα−異性体であって、β−異性体を
含有していないことが高速液体クロマトグラフィーによ
り判明した。
融点:104〜105℃
〔α) =−16,0’(メタノール、c=1)尚
、上記と同様にして、 −L−アスパラギン酸(1 ニンメチルエステル(n) 行なった結果は下記の表1 た。
、上記と同様にして、 −L−アスパラギン酸(1 ニンメチルエステル(n) 行なった結果は下記の表1 た。
但し各種のN−保護基
)とL−フェニルアラ
とを基質として反応を
に示される通りであっ
表−」2
VGF
αTGF
EGFの
の
無し
VGF
TGF−α
1 、779 < 202.3
3,760 1080.
2 N T
294実施例1と同様にして、但し基質1及び■の少
くとも一方を、高価な光学活性体の代りにラセミ体とし
て反応を行なった。
3,760 1080.
2 N T
294実施例1と同様にして、但し基質1及び■の少
くとも一方を、高価な光学活性体の代りにラセミ体とし
て反応を行なった。
結果は下記の表2に示される通りであった。
注(1)VGF(EGF相当量ng/μg蛋白質)をゲ
ル濾過及びこれに続<C+a μBondapak (
ウォーターズ・アソシエート)カラムからの溶出により
精製した。αTGFは、Marquardt等、Pro
c、Natl、Acad。
ル濾過及びこれに続<C+a μBondapak (
ウォーターズ・アソシエート)カラムからの溶出により
精製した。αTGFは、Marquardt等、Pro
c、Natl、Acad。
Sci、 LISA(1983)80 : 4686−
4688に記載されているようにして、5nyder−
Theilenネコ肉耳重ウィルスにつり形質転換され
たFisherラット胚細胞から精製した。EGFはマ
ウス下顎腺から精製した(Cohen等、J、Biol
、Chem、 (1980)255 : 41834−
41842)。
4688に記載されているようにして、5nyder−
Theilenネコ肉耳重ウィルスにつり形質転換され
たFisherラット胚細胞から精製した。EGFはマ
ウス下顎腺から精製した(Cohen等、J、Biol
、Chem、 (1980)255 : 41834−
41842)。
の混合溶媒(1:1.30mj2)に溶解させ、冷蔵庫
内に一夜放置することにより結晶化させて所望のN−ベ
ンジルオキシカルボニル−し−アルパルチル−し−フェ
ニルアラニンメチルエステルを5.97g得た(収率7
0%)。
内に一夜放置することにより結晶化させて所望のN−ベ
ンジルオキシカルボニル−し−アルパルチル−し−フェ
ニルアラニンメチルエステルを5.97g得た(収率7
0%)。
実施例4
N−(4−メトキシ)ベンジルオキシカルボニルアスパ
ラギン酸2.97g (10ミリモル)とL−フェニル
アラニンメチルエステル塩酸塩2.36g(11ミリモ
ル)とをメチルエチルケトン4001111に溶解させ
た。一方、パパイン4gをMclla−vaine E
ll液液p H4,2) 75mnに溶解させ、この溶
液を上記のメチルエチルケトン溶液に添加し、混合した
後に37℃で20時間反応させた0次いでメチルエチル
ケトンを減圧下に除去し、残留物を、熱アセトン/水混
合溶媒(1: 1) 20mj!に溶解させ、冷蔵庫内
に一夜放置することにより結晶化させて所望のN−(4
−メトキシ)ベンジルオキシカルボニル−L−アスパル
チル−し−フェニルアラニンメチルエステル’1.99
g1た(収率80%)。
ラギン酸2.97g (10ミリモル)とL−フェニル
アラニンメチルエステル塩酸塩2.36g(11ミリモ
ル)とをメチルエチルケトン4001111に溶解させ
た。一方、パパイン4gをMclla−vaine E
ll液液p H4,2) 75mnに溶解させ、この溶
液を上記のメチルエチルケトン溶液に添加し、混合した
後に37℃で20時間反応させた0次いでメチルエチル
ケトンを減圧下に除去し、残留物を、熱アセトン/水混
合溶媒(1: 1) 20mj!に溶解させ、冷蔵庫内
に一夜放置することにより結晶化させて所望のN−(4
−メトキシ)ベンジルオキシカルボニル−L−アスパル
チル−し−フェニルアラニンメチルエステル’1.99
g1た(収率80%)。
スW
N−(4−メトキシ)ベンジルオキシカルボニルアスパ
ラギン酸5゜94g(20ミリモル)とL−フェニルア
ラニンメチルエステル塩酸塩4.72g(22ミリモル
)とをn−ブタノール600mlに溶解させた。一方、
パパイン6g;ft−肚夏1vaine緩衝液(p H
4,2) 75m#に溶解させ、この溶液を上記のn−
ブタノール溶液に添加し、混合した後に37℃で20時
間反応させた。次いでブタノールを減圧下に除去し、残
留物を熱アセトン/水混合溶媒(1: 1)30cal
に溶解させ、冷蔵庫内に一夜放置することにより結晶化
させて所望のN−(4−メトキシ)ベンジルオキシカル
ボニル−し−アスパルチル−し−フェニルアラニンメチ
ルエステルを5.96g得た(収率65%)。
ラギン酸5゜94g(20ミリモル)とL−フェニルア
ラニンメチルエステル塩酸塩4.72g(22ミリモル
)とをn−ブタノール600mlに溶解させた。一方、
パパイン6g;ft−肚夏1vaine緩衝液(p H
4,2) 75m#に溶解させ、この溶液を上記のn−
ブタノール溶液に添加し、混合した後に37℃で20時
間反応させた。次いでブタノールを減圧下に除去し、残
留物を熱アセトン/水混合溶媒(1: 1)30cal
に溶解させ、冷蔵庫内に一夜放置することにより結晶化
させて所望のN−(4−メトキシ)ベンジルオキシカル
ボニル−し−アスパルチル−し−フェニルアラニンメチ
ルエステルを5.96g得た(収率65%)。
1較■
250wj!容のフラスコに、N−ペンジルオキシカル
ボニルアスパルギン酸2.67g(10ミリモル)と、
フェニルアラニンメチルエステル2.58g(12ミリ
モル)と、パパイン1gと、Mcllvaine緩衝液
(p H4,2) 100ralと、エタノール30m
1とを添加し、37℃で24時間攪拌しつつ反応させた
。生成した沈澱物を炉取し、水洗しく20m1!X2)
て白色固形物を3.72 g得た。
ボニルアスパルギン酸2.67g(10ミリモル)と、
フェニルアラニンメチルエステル2.58g(12ミリ
モル)と、パパイン1gと、Mcllvaine緩衝液
(p H4,2) 100ralと、エタノール30m
1とを添加し、37℃で24時間攪拌しつつ反応させた
。生成した沈澱物を炉取し、水洗しく20m1!X2)
て白色固形物を3.72 g得た。
この固形物についてTLC及びHPLC分析を行なった
処、所望物質であるN−ベンジルオキシカルボニル−し
−アスパルチル−し−フェニルアラニンメチルエステル
のα−異性体の含有量は5%以下であることが判明した
。
処、所望物質であるN−ベンジルオキシカルボニル−し
−アスパルチル−し−フェニルアラニンメチルエステル
のα−異性体の含有量は5%以下であることが判明した
。
(発明の効果)
本発明方法によれば、L、L−ジペプチドアスパルテー
ム殊にN−保護基−L−アスパルチル−L−フェニルア
ラニンメチルエステルの製造に際して二相溶媒系(例え
ば水と有機溶媒とからなる二相溶媒系が用いられるため
に、水相中での反応により形成された所望生成物が有機
溶媒相に移行し、その結果反応生成物が逆反応により出
発物質に変換するのが回避されて収率が向上し、又触媒
として廉価なパパイン酵素が用いられるので製造コスト
を低減することができる。
ム殊にN−保護基−L−アスパルチル−L−フェニルア
ラニンメチルエステルの製造に際して二相溶媒系(例え
ば水と有機溶媒とからなる二相溶媒系が用いられるため
に、水相中での反応により形成された所望生成物が有機
溶媒相に移行し、その結果反応生成物が逆反応により出
発物質に変換するのが回避されて収率が向上し、又触媒
として廉価なパパイン酵素が用いられるので製造コスト
を低減することができる。
更に、本発明方法によれば原料物質の光学的純度が所望
生成物の収率に影響を与えないので、原料物質としてラ
セミ体をも使用することができ、従ってこの点からもコ
スト面や原料確保の面で本発明方法は有利である。
生成物の収率に影響を与えないので、原料物質としてラ
セミ体をも使用することができ、従ってこの点からもコ
スト面や原料確保の面で本発明方法は有利である。
Claims (8)
- (1)N−保護基−アスパラギン酸とフェニルアラニン
とを酵素の存在において反応させることによりN−保護
基−L−アスパルチル−L−フェニルアラニンメチルエ
ステルを製造する方法において、酵素としてパパインを
用い且つ二相溶媒系で緩衝液によりpHを4〜7とし、
20〜45℃において反応させることを特徴とする、L
,L−ジペプチドアスパルテームの製法。 - (2)二相溶媒系が水と有機溶媒とで構成されているこ
とを特徴とする、特許請求の範囲第1項に記載のL,L
−ジペプチドアスパルテームの製法。 - (3)有機溶媒が低級エーテル、低級エステル、塩素化
炭化水素、炭素数4〜8のアルコール及びケトンから選
択されたものであって、水に不溶又は僅かに可溶なもの
であることを特徴とする、特許請求の範囲第1又は2項
に記載のL,L−ジペプチドアスパルテームの製法。 - (4)有機溶媒としての低級エーテルがメチル−t−ブ
チルエーテル、n−ブチルエーテル及びペンチルエーテ
ルから選択された少くとも1種類のものであることを特
徴とする、特許請求の範囲第1乃至3項の何れか1つに
記載のL,L−ジペプチドアスパルテームの製法。 - (5)有機溶媒としての低級エステルがエチルアセテー
ト、プロピルアセテート、ブチルアセテート及びn−ア
ミルアセテートから選択された少くとも1種類のもので
あることを特徴とする、特許請求の範囲の範囲第1乃至
3項の何れか1つに記載のL,L−ジペプチドアスパル
テームの製法。 - (6)有機溶媒としての塩素化炭化水素がクロロホルム
、塩化エチレン、四塩化炭素及び1,1,1−トリクロ
ロエタンから選択された少くとも1種類のものであるこ
とを特徴とする、特許請求の範囲第1乃至3項の何れか
1つに記載のL,L−ジペプチドアスパルテームの製法
。 - (7)有機溶媒としてのアルコールがn−ブチルアルコ
ール、ペンタノール、ヘキサノール、シクロヘキサノー
ル及び2−エチルヘキサノールから選択された少くとも
1種類のものであることを特徴とする、特許請求の範囲
第1乃至3項の何れか1つに記載のL,L−ジペプチド
アスパルテームの製法。 - (8)有機溶媒としてのケトンがメチルイソブチルケト
ン、ジイソブチルケトン、シクロヘキサノン及びメチル
シクロヘキサノンから選択された少くとも1種類のもの
であることを特徴とする、特許請求の範囲第1乃至3項
の何れか1つに記載のL,L−ジペプチドアスパルテー
ムの製法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP31243387A JPH0279993A (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | L,l−ジペプチドアスパルテームの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP31243387A JPH0279993A (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | L,l−ジペプチドアスパルテームの製法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0279993A true JPH0279993A (ja) | 1990-03-20 |
Family
ID=18029147
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP31243387A Pending JPH0279993A (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | L,l−ジペプチドアスパルテームの製法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0279993A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05284991A (ja) * | 1991-07-10 | 1993-11-02 | Dev Center For Biotechnol | N−ベンジルオキシカルボニル−α−L−アスパルチル−L−フェニルアラニンメチルエステルの製造法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5392729A (en) * | 1977-01-27 | 1978-08-15 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Adduct of dipeptide derivatives and amino acid derivatives and process for their preparation |
JPS55135595A (en) * | 1979-04-03 | 1980-10-22 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Preparation of dipeptide |
JPS6045596A (ja) * | 1983-08-22 | 1985-03-12 | Tadashi Kamikubo | ジペプチド類の製造法 |
-
1987
- 1987-12-11 JP JP31243387A patent/JPH0279993A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5392729A (en) * | 1977-01-27 | 1978-08-15 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Adduct of dipeptide derivatives and amino acid derivatives and process for their preparation |
JPS55135595A (en) * | 1979-04-03 | 1980-10-22 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Preparation of dipeptide |
JPS6045596A (ja) * | 1983-08-22 | 1985-03-12 | Tadashi Kamikubo | ジペプチド類の製造法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05284991A (ja) * | 1991-07-10 | 1993-11-02 | Dev Center For Biotechnol | N−ベンジルオキシカルボニル−α−L−アスパルチル−L−フェニルアラニンメチルエステルの製造法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5162500A (en) | Poststatin and related compounds or salts thereof | |
US5359138A (en) | Poststatin and related compounds or salts thereof | |
US4256836A (en) | Addition compound of dipeptide derivative and amino acid derivative | |
SU1378785A3 (ru) | Способ ферментативного получени пептидов | |
US4189604A (en) | Bestatin | |
IE60128B1 (en) | Hydroxylamine derivatives,their preparation and use as medicaments | |
US5304470A (en) | Process for the enzymatic preparation of protected and unprotected di- and oligopeptides in aqueous solutions | |
US5032675A (en) | Process for the production of glutamine derivatives | |
SE447389B (sv) | Nya tripeptider, som inverkar pa det centrala nervsystemet | |
US4240975A (en) | Bestatin | |
US5117031A (en) | Active esters used for production of esters or amides and process for producing esters or amides | |
EP0149594A2 (en) | Enzymatic coupling of n-formyl amino acids and/or peptide residues | |
CH635571A5 (fr) | Tetrapeptides et composition therapeutique les contenant. | |
JPH0279993A (ja) | L,l−ジペプチドアスパルテームの製法 | |
CH646415A5 (fr) | Tetrapeptides homologues des enkephalines, leur preparation et composition pharmaceutique les contenant. | |
Pellegrini et al. | Pepsin‐catalyzed peptide synthesis | |
WO1997007129A1 (en) | Solution synthesis of peripheral acting analgesic opioid tetrapeptides | |
BE863245A (fr) | Nouveaux composes d'addition d'un derive de dipeptide et d'un derive d'amino-acide, et leur procede de preparation et de decomposition | |
CS197268B2 (en) | Process for preparing l-pyroglutamyl-l-histidyl-3-alkylprolinamides | |
US4257939A (en) | Peptide derivative | |
EP0256812B1 (en) | Process for separation of n-protected alpha-l-aspartyl-l-phenylalanines | |
DE68923625T2 (de) | Enzymatischer Prozess zur Herstellung immunomodulatorischer Pentapeptide und Intermediate zu deren Herstellung. | |
Ohno et al. | Partial enzymic deprotection in the synthesis of a protected octapeptide bearing a free terminal carboxyl group | |
US5216125A (en) | Active ester used for production of acylated amino acids | |
CN105392891B (zh) | 具有硫醇基的d-型或l-型氨基酸衍生物的制造方法 |