SU784784A3 - Способ выделени протеина - Google Patents
Способ выделени протеина Download PDFInfo
- Publication number
- SU784784A3 SU784784A3 SU782614452A SU2614452A SU784784A3 SU 784784 A3 SU784784 A3 SU 784784A3 SU 782614452 A SU782614452 A SU 782614452A SU 2614452 A SU2614452 A SU 2614452A SU 784784 A3 SU784784 A3 SU 784784A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- protein
- solution
- virus
- molecular weight
- chloroform
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 title 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 238000002161 passivation Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 40
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 19
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 12
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 3
- FJBFPHVGVWTDIP-UHFFFAOYSA-N dibromomethane Chemical compound BrCBr FJBFPHVGVWTDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NZZFYRREKKOMAT-UHFFFAOYSA-N diiodomethane Chemical compound ICI NZZFYRREKKOMAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 2
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 claims description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 241000208202 Linaceae Species 0.000 claims 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 claims 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052910 alkali metal silicate Inorganic materials 0.000 claims 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 11
- -1 aliphatic halogenated hydrocarbons Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 abstract 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 35
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 2
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- DIKBFYAXUHHXCS-UHFFFAOYSA-N bromoform Chemical compound BrC(Br)Br DIKBFYAXUHHXCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UBOXGVDOUJQMTN-UHFFFAOYSA-N 1,1,2-trichloroethane Chemical compound ClCC(Cl)Cl UBOXGVDOUJQMTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033468 Lysozyme C Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001419232 Tornos Species 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229950005228 bromoform Drugs 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940105657 catalase Drugs 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 125000006000 trichloroethyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/34—Size selective separation, e.g. size exclusion chromatography, gel filtration, permeation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/282—Porous sorbents
- B01J20/283—Porous sorbents based on silica
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/3085—Chemical treatments not covered by groups B01J20/3007 - B01J20/3078
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
- B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
- B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/826—Viruses
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ПРОТЕИНА
(54;
Изобретение относитс к способу выделени протеинов с различными мо лекул рными массами, с использованием хроматографии, который может найти применение в микробиологии дл выделени и очистки вирусов. Разделительна хроматографи широко используетс дл очистки и раз делени организованных фракций бактериальных или вирусных тел, макромолекул l, 2. Высокой чистоты про теины-вирусы получены при использовании хроматографии на эластичных гел х, например шариках агара i. Однако этот носитель имеет существенные недостатки: низкую механичес кую прочность, не вьздерживает стери лизации нагреванием, что ограничивает его применение дл разделени продуктов, которые должны быть сохранены стерильными. Наиболее близким к описываемому вл етс способ разделени протеина хроматографией на силикагеле силикагель промывают водой, 1%-ным водным раствором карбовакса 20 М при при последующей промывке температуру снижают до 9°С. Затем колонку вновь промывают водой и буфером (рН 5,5-7,6), разделение провод т при низкой температуре (9°С) , дезактиваци силикагел карбоваксом 20 М предотвращает адсорбцию протеинов , разделение их осуществл ют за счет градиента концентрации соли в элюирующем буфере и изменени рН и при приложении повышенного давлени (несколько дес тков бар). Недостаток способа состоит в том, что протеины могут быть разделены только, под действием сильных дав.пений . Кроме того, способ применим только к аналитически чистым протеинам невысокой молекул рной массы (25 000 - 800 000): лизоцим, альбумин, каталаза, тироглобулин, цитохром С. Способ неприменим к протеинам с высокими молекул рными массами (выше миллиона), с чем встречаютс при выделении и очистке вирусов гриппа, средние молекул рные массы которых вЕгпле нескольких миллионов. Цель предлагаемого изобретени способ выделени протеинов с высокими молекул рными массами и упрощени процесса. Поставленна цель достигаетс описываемым способом выделени протеина из водной среды путем разделительной хроматографии на твердом носителе, предварительно пассивированном водным раствором полимера и элюировакием протеина буферным раствором с рН 5,5-7,6, заключающийс в том, что в качестве твердого носител используют силикагель или силикат щелочного металла с частицами размером от 40 до 200 мкм, порами диаметром от 5 до 200 нм, носитель после первичной пассивации водным раствором полимера с молекул рной массой от 5000 до 30000, пассивирую повторно 0,2-20%-ным водным раствором протеина с молекул рной массой меньше молекул рной массы вьщел емого протеина.
Предпочтительными вариантами способа вл ютс использование в качестве полимера дл первичной пассивации полиэтиленгликол , поливинилпирролидона или полипропиленгликол В качестве протеина дл повторноэ о пассивировани протеины с молекул рным весом меньше 100000 - альбумин, желати-н, пептон или продукты разложени полипептидов. Использование буферного раствора с добавкой антисептика в количестве от 0,1 до 10 г представл ющего собой дихлорметан, дибромметан, дийодметан, 1,2-дихлорэтан , дибром-1,2-этан или трихлорэтилйн . Использова ше в качестве вьщел емого пептида вируса.
Пример 1. Подготовка колонны . Колонну с внутренним диаметром 10 см и высотой 120 см заполн ют порошком силикаг ел Сферозил Хов 030 (рон-Пуленк) в виде частиц размером 100-20-0 мкм, со средним диаметром пор нм и- удельной поверхностью 50 , объем пор наполнител 1 мл/г. После стерилизации паром помещенный в колонну гель предварительно пассивируют, т.е. обрабатывают водным 1%-ным раствором полиэтйленгликол молекул рной массы 20 000 в течение 24 ч дл блокировки его г дсорбционноспособных участков . Затем в колонну загружают 500 не содержащей гриппозный вирус алантоисной жидкости, с помощь которо.й проводитс повторна пассиваци .
Циркул цию раствора через колонн осуществл ют при незначительном поBtittiieHHH давлени на входе в коло -:ну (примерно 1 бар.).
Из 450 мл вирусного раствора :з результате его хроматографической очистки получают 1050 мл элюата, содержащего вирус высокой степени чистоты .
На чертеже представле.ча хроматографическа крива выделени вируса гриппа штамма А/х53 из его алантоисной питательной среды, по оси ордиHciT отложены оптические плотности
элюата, по оси абсцисс - объемы элюата . Чистому вирусу соответствует пик V, примес м соответствует пик 1, прерывистость пика 1 вызвана изменением расхода элюата с 9 до 27 л/ч. При работе с аналитической хроматографической колонкой (диаметр 0,8 см, высота 120 см), заполненной такой же двуокисью кремнй , как указано вьтше f получают раствор чистого вируса , не содержащий примесей (1050 мл)
Баланс составл ют путем определени активности вируса в растворе по методу гемагглютинации (ГА). Установлено , что в 450 мл исходного алантоисного раствора активность составл ет 1200 единиц ГА/0,25 мл. Активность раствора вируса после хроматографической очистки - 480 единиц ГА/0,25 мл. Объем элюата - 1050 t-vi. Таким образом, активность в исходном растворе 2160000 единиц ГА, активность в очищенном растворе вируса 2016000 единиц ГА. Следовательно, выход: (2016000:2160000) 93,8% Этот выход намного выше выхода, получаемого при использовании известного метода очистки.
За этой двойной пассивацией следует промывка водным стерильным буферным раствором первичного фосфата кали и вторичного фосфата натри с рН 7,5, содержащим NaCI в концентрации 0,15 М.
Пример 2. Выделение вируса гриппа штамма А/х53 из его алантоисной питательной среды. Раствор вируса из классической культуры в алантоисной полости куриного эмбрионального йца, после инкубации в течение 10-12 дней содержит 1 200 единиц ГА (метод гемагглютинации) на 0,25 мл.
450 iviri этого раствора ввод т в колонну, скорость пропускани раствора 150 мл/мин. В течение этого времени через колонну посто нно пропускают буферный раствор со скоростью 9 л/ч до по влени одного вируса на выходе из колонны (л/ЗО мин) . Скорост подачи буфера утраивают (до 27 л/ч), что позвол ет провести весь процесс за 1 ч.
Колонна, снабженна автоматическим устройством, функционирует без перерыва в течение всего необходимого дл проведени процесса времени,,
Определение составл ющих элюата на выходе из колонны осуществл ют по оптической плотности в ультра-фиоле;товой области при длине волны 252 нм
Пример 3. Выделение 1фипп озного вируса двойным способом адсорбции - элюировани на эритроцитах с последующей очисткой путем хроматографии на силикагеле.
SO л ВИРУСНЫХ алантоисных жидкостей , происход щих из эмбриональных куриных иц, 10-12 дневных, предварительно осветл ют центрифугированием , дл удалени нерастворимых веществ. Надосадочна жидкость имее 1200 единиц ГА в 0,25 мл, К полученной жидкости добавл ют 4 об,% осадка куриных эритроцитов. Через 8-16 ч при температуре +4с или +37 С, эритроциты отдел ют цент рифугированием со скоростью 3 000 о мин и вирус элюируют фосфатным буфером в объеме 5 л. Элюат имеет гемагглютинатный титр 12000 единиц ГА в 0,25 мл. 450 мл этой вирусной суспензии автоматически ввод т в колон ну, в течение 3 мин (с расходом 150 мл/мин). В течение этого времени непрерывно пропускают через колонну описанный в примере буферный раствор(расход этого раствора 9 л/ч до по влени только одного вируса на выходе из колонны. Расход утраивают (27 л/ч), когда в элюате не обнаруживают более вируса, элюат пр этом содержит загр зненные протеины Кажда операци длитс 1 ч. Благода р своему автоматическому устройству , колонна функционирует непрерывно , при этом расходуетс 5 л элюата Фракции, соответствующие очищенным вирусам, собирают, получают 15 Титр этого раствора в гемагглютинат ных единицах составл ет 32 00 единиц ГА на 0,25 мл, что означает выход пор дка 100%. Пример 4. Исход из 10 л раствора алантоисной жидкости, зар женной гриппозным вирусом, подобного описанному в примере 2, осуществ л ют в первой стадии концентрирование-очистку на полимерном комплексе кальци . Дл этого к раствору добав л ют водный 2%-ный (вес.%) раствор полиэтиленгликол молекул рной массы 20 000 и 12 г виде порош Смесь гомогенизируют в течение 30 мин, осадок отдел ют декантацией с последующим центрифугированием, осадок обрабатывают примерно 500 мл водного 0,2 М раствора динатриевой соли этилендиаминотетрауксусной кислоты, рН которого доведен до 7,5 с помощью б н. раствора едкого натра. Полученный таким образом раствор ц ентрифугируют дл удалени нерастворимой части и верхнюю прозрачную жидкость (около 500 мл) собирают. Выход этой операции концентрировани -очистки найден близким к 65 500 мл этого концентрированного раствора хроматографируют в колонне с внутренним диаметром 10 см и высотой 120 см снабженной такой же двуокисью кремни , что и в примере 1, и используют такой же буферный раствор . 500 мл ввод т как описано в при мере 2. Вирус собирают элюированием в 1500 мл раствора, титр которого 10 800 единиц ГА/0,25 мл, что соответствует выходу очисэки, близкому к 98%. Полученный раствор вируса одновременно очень чистый и концентрированный . Пример 5. Aлaнтoиqнyю зараженную жидкость, как описано выше, концентрируют диафильтрацией на мембранах или полых волокнах. 50 л таким образом довод т до объема 5 л или меньше. После осветлени этот концентрат непосредственно ввод т в колонну, согласно описанной в предыдущих примерах модели и по такому же способу. Вирусный пик содержит совокупность гемагглютинатных единиц, которые были предложены. Этот раствор, очень чистый в отношении протеинов, может быть загр знен фосфолипидами желточного мешка, организованными в мицелы; это загр знение отдел ют ультрацентрифугированием в градиенте сахарозы. При удалении всех примесей с помощью разделительной хроматографии выход на всех операци х увеличиваетс . Пример 6. 500 л зараженной алантоисной жидкости, как описано выше, очищают путем ультрацентрифугировани в градиенте сахарозы. Объем фракций, соответствующий пику вируса на графике, составл ет объем 1л. Выход этой операции 30-80%. Эту фракцию ввод т автоматически в колонну с силикагелем, как это описано в примере 2, и осуществл ют разделительную хроматографию по способу этого примера. Собирают 3 л элюата. Выход операции хроматографии бли-зок к 100%. Пример 7. Операции, реализованные в этом примере, идентичны таковым описанным в примерах 2, 3, 4, 5 и 6. Однако вирусна суспензи , подвергнута разделительной хроматографии , предварительно инактивирована формалином, fi -пропиолактоном или ультрафиолетовым излучением, и/или обработана органическим растворителем . Пример 8. Хроматографическую колонну, подготовленную согласно примеру 1, используют дл очистки водного, с примесью, раствора катгшазы , извлеченной из бычьей печени. Этот раствор имеет активность 220 международных единиц. Элюат буферируют при рН 7. Получают раствор с активностью 1800 между народных единиц , выход составл ет 86%. Пример 9. Повтор ют операции , описанные в примере 2 при использовании описанной в примере 1 колонны, но наполнитель колонны представл ет собой стекл нные шарики размерами 80-280 мк, средний диаметр пор которых составл ет 50 нм.
Выход очищенного вируса составл ет 87%.
Пример 10. Очистку вируса штамма Е/НК осуществл ют согласно примерам 1 и 2, за исключением второй пассивации наполнител колонны, используют 500 мл водного 6%-ного раствора лактальбумина молекул рной массы около 18 000. Выход 92%.
Пример 11. Указанный в примере 10 лактальбумин замен ют |8%-ным раствором м сного пептона, т.е. продуктов протеолиза полипептидов м са. Выход составл ет 93%.
Пример 12. После выделени вируса согласно примеру 2 полученный продукт (А) исследуют с точки зрени его микробной флоры: количесво микробов на мл указано ниже,,
Подобное выделение осуществл ют с той разницей, что к буферному рас:вору добавл ют 5 г хлороформа на литр дл стерилизации среды: полученный раствор В содержит очень ьшло микробов. В операции С добавл ют тот же антисептик в количестве 5 г/л как к буферному раствору, так и к обрабатываемой жидкости. Результат подобен В. Вирусную среду подвергают зональному ультрацентрифугированию , после обычного добавлени 0,01% метиол та и 0,02% формальдегида .
Пблучены следующие результаты, микробов/мл:
A.Хроматографи , без антисептиков10
B.Хроматографи , хлороформ в буфере 10
C.Хроматографи , хлороформ в буфере и в обрабатываемой жидкости 10 Д. Зональное ультрацентрифугирование метиол т + формальдегид 3 000
Кроме того, полученные в операци х А, В к С вирусы живые, в то врем как полученный в операции Д вирус неактивен. Более того, полученные в результате операций в и С, с хлороформом, продукты сохран ют тот же самый инфекционный титр и обладают той же самой гемагглютинатной способностью, как и продукт, полученный в операции А,вьщеление которого осуществл лось безвс кого антисептика.
Пример 13, Вирусный раство подобный тому, что использован в опытах А-Д в примере 1, но соответствующий другим штаммам вируса, подвергают разделению по способу,, описанному в примере 2.
Таким образом, были исследованы жидкости, полученные в 3 вирусов гриппа: А/СССР, А/Техас,, В/НК
В каждом случае, осуществл ют хроматографию, элюиру буфернглм расвором , содержсццим 5 г хлороформа в 1 л или без хлороформа. Кроме тог провод т сравнительные выделени путем зонального центрифугировани .
Ниже даны выход, % по отношению к исходной жидкости, и вирусный тит ( в международных единицах на мг протеина ) .
Выход, %
А/СССР А/Техас Н/НК Хроматографи с хлороформом 88 77,5 88 Хроматографи без
хлороформа 81 71,5 81 Зональное ультрацентрифугирование {метиол т+формальдегнд ) 72 50 63
Международна ед/мг
протеина Хроматографи с хлороформом 19800 23400 26200 Хроматографи без
хлороформа 15900 12100 19200 Зональное ультрацентрифугирование (метиол т+формальдегид ) 12900 13600 15300 Результаты показывают, что добавление хлороформа улучшает как выход , так и .концентрацию вируса в полученном продукте. Из результатов полученных при осуществлении процесса описанного в примере 13 найдено, что выделенный в присутствии хлороформа вирус живой и имеет тот же самый инфекционный титр и обладает той же самой гемагглютинатной способностью , как и вирус, полученный в результате хроматографии без хлороформа . Напротив, вьщеленный- центрифугированием с классической стерилизацией вирус вл етс неактивным.
Пример 14. В операци х, подобных В и С примера 12, используют бромоформ в концентрации около 1 г/л что соответствует максимуму растворимости CHBr.j в зоде. Наход т около сотни микробов, на мл, в конечной жидкости.
Пример 15. Замена хлороформа в примере 12 на 1,1, 2-трихлорэтан , по 4 г/л (растворимость 4,4 г/ при 20°С) , приводит к значительному уменьшению микробной флоры, менеге 30 микробов/мл.
Пример 16. Операции примера 2 реализуютс в колонне, описанной в примере 1 но без второй пассивации , т.е. без обработки наполнител алантоисной . жидкостью. Выход виру са равен 70%. Пример 17. Работа без вто рой пассивации, как в примере 16, причем наполнитель представл ет со бой такие же стекл нные шарики, ка в примере 9, получают выход 64% (по сравнению с 87%, пример 9). Услови расхода элюирующего сред ства, количество обрабатываемой инжектируемой в колонну жидкости, 1частота этой инжекции, описанные в примерах, не вл ютс ограничитель ными , их можно измен ть в широких пределах. Пример 18. Растворы алантоисной жидкости, зараженной вирусо приготовл ют известным образом, с помощью разл 1чных штаммов вируса. В эти растворы ввод т 6 г/л хлороформа . Ниже показано, что введение хлороформа не измен ет инфекционный:: титр и гемагглютинатную способность этих растворов. А/Викто- А/Х47 НК 7 ри 75 Титр: ГА до хлороформа 210 160 290 спуст 24 ч 210 160 280 2дн 180 спуст 3дн 230 160 спуст спуст 5 дней Диаметр частиц, мкм 100-200 50-100 10 Средний диаметр пор , им Удельна поверхность, рН элюента 1-й агент пассивации . Полиэтиленгликоль По молекул рна масса 20000 2-й агент пассива- Яичный альбумин (нез ции, на алантоисна жид молекул рна масса Выход, %93,3 93,0
Claims (5)
- Формула изобретени 1. Способ выделени протеина из водной среды путем разделительной хроматографии на твердом носителе, предварительно пассивированном водным раствором полимера и элюированием протеина буферным раствором с рН 5,5-7,6, отлич ающийс 60 140 50 230 7,5 7,0тем, что, с целью упрощени процес- . са, в качестве твердого носител используют силикагель или силикат щелочного металла с части.цами размером от 40 до 200 мкм, порами диаметром 9 5 Д° 200 нм, носитель после первичной пассивации водным раствором полимера с молекул рной массой екционный р: без хлороформа с хлороформомЮ Пример 19. Иcпытaни аналоные тем, которые проведены в мере 13 с различными антисептикав буферном растворе, дают следуюрезультаты . Концентра- Микробы, Антисептик ци , г/л обнаруженные на мл (средние округленные значени ) Никакой 6 200 Дихлорметан 6 100 Дибромметан . 640 Дийодометан Дихлор-1,2-этан Дибром-1,2этан Трихлорэти1300 лен 20-23. По методу Примеры ведени примеров 1 и 2, проведехроматографические анализы, и этом проводилось изменение некоых факторов, которые указаны в лице, где результаты примера 2 ведены в качестве сравнени . 0-200 40-80 50-150 30 10 70 420 6,5 6,7 Полипроливинилпирропиленлиден гликоль 6000 29000 Лактальар жен- Пепкость ) тон, бумин 44000 18000 92,6 92,9 90,7от 5 000 до 30 000 , пассивируют повторно 0,2-20%-нь м водным раствором гпротеина с молекул рной массойменьше молекул рной массы выдел емого ; протеина,
- 2.Способ по п. 1,отлича ющ и и с тем, что в качестве полимера дл первичной пассивации используют полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон или полипропиленгликоль .
- 3.Способ поп. 1, отлича юЩ и и с тем, что протеин используемый при повторном пассивировании, имеет молекул рный вес меньше 100 00 и представл ет собой ешьбумин, желатину , пептон или продукты разложени полипептидов.
- 4.Способ по п. 1, отличающийс тем, что в буферный раствор добавл ют антисептик в количестве от 0,1 до 10 г, представл ющиробой дихлорметан, дибромметан, дийодметан , 1,2-дихлорэтан, дибром-1,2-этан или трихлорэтилен.
- 5. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с тем, что в качестве выдел емого протеина, используют вирус .Приоритет по пунктам:26.04.77- по пп. 1, 2, 3, 5.12.04.78-. по п. 4.Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе1.S. Bengtsson, L. Philipson, С h roma tog of animal viruses on pearl-condensed.agar, Blochim. Biophss. Acta Э6 , 79, 399.2,Jshaiuhu Shechter, Separation of Proteins b High-Speed Pressure liguid Ch roma tog ra ph-j , . Biochemistry , 197, 58, 30.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR7712518A FR2388585A1 (fr) | 1977-04-26 | 1977-04-26 | Separation et purification de proteines et/ou d'unites morphologiquement organisees (virus) par la chromatographie d'exclusion |
| FR7810769A FR2422720A2 (fr) | 1977-04-26 | 1978-04-12 | Separation et purification de proteines par chromatographie |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU784784A3 true SU784784A3 (ru) | 1980-11-30 |
Family
ID=26219979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU782614452A SU784784A3 (ru) | 1977-04-26 | 1978-04-26 | Способ выделени протеина |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4199450A (ru) |
| JP (1) | JPS53140097A (ru) |
| CA (1) | CA1111415A (ru) |
| DE (1) | DE2817871A1 (ru) |
| ES (1) | ES469156A1 (ru) |
| FR (1) | FR2422720A2 (ru) |
| GB (1) | GB1595378A (ru) |
| SU (1) | SU784784A3 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2606609C2 (ru) * | 2010-10-27 | 2017-01-10 | Филип Моррис Продактс С.А. | Способ (варианты) захвата представляющих интерес частиц из смеси |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2475572A1 (fr) * | 1980-02-11 | 1981-08-14 | Pasteur Institut | Procede pour l'obtention de fragments de virus a enveloppe lipidique, en particulier d'antigenes utilisables comme vaccins, produits obtenus et applications |
| DE3005495C2 (de) * | 1980-02-14 | 1983-03-31 | Institut Pasteur, 75724 Paris | Herstellung von Fragmenten von Viren mit Lipidhülle und sie enthaltende Arzneimittelzubereitungen |
| FR2483779A1 (fr) | 1980-06-05 | 1981-12-11 | Synthelabo | Procede pour isoler des antigenes glycoproteiques viraux et son application a la preparation de vaccins |
| JPS5760261A (en) * | 1980-09-29 | 1982-04-12 | Sekisui Chem Co Ltd | Manufacture of filler for liquid chromatograph |
| JPS58223062A (ja) * | 1982-06-21 | 1983-12-24 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | 生理活性物質及び／又は薬物の分離分析方法 |
| US4468331A (en) * | 1982-09-13 | 1984-08-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method and system for liquid choromatography separations |
| HU192642B (en) * | 1984-12-19 | 1987-06-29 | Forte Fotokemiai Ipar | Process for the extraction of nucleinic acids and purine bases from gelatine |
| WO1994000214A1 (en) * | 1992-06-19 | 1994-01-06 | Sepracor Inc. | Passivated and stabilized porous supports and methods for the preparation and use of same |
| US5451660A (en) * | 1993-12-13 | 1995-09-19 | Genentech, Inc. | Method for purifying polypeptides |
| DE19964015A1 (de) * | 1999-12-30 | 2001-08-09 | Octapharma Ag Lachen | Verfahren zur Entfernung oder Abtrennung von Viren in potentiell Viren enthaltenden Proben |
| DE19926041A1 (de) * | 1999-06-08 | 2000-12-21 | Octapharma Ag Lachen | Verfahren zur Entfernung oder Abtrennung von Viren in potentiell Viren enthaltenden Proben |
| JP6232067B2 (ja) * | 2012-08-31 | 2017-11-15 | 西安奥▲嵐▼科技▲開▼▲発▼有限▲責▼任公司 | タンパク質分離用多次元の液体クロマトグラフィーの分離システム及分離方法 |
| RU2015114330A (ru) | 2012-09-17 | 2016-11-10 | У.Р. Грейс Энд Ко.-Конн. | Хроматографические среды и устройства |
| EP3137209B1 (en) | 2014-05-02 | 2022-10-05 | W.R. Grace & CO. - CONN. | Functionalized support material and methods of making and using functionalized support material |
| PL3302784T3 (pl) | 2015-06-05 | 2022-01-17 | W.R. Grace & Co.-Conn. | Adsorbentowe środki klarujące do bioprzetwarzania oraz sposoby ich wytwarzania i stosowania |
| CN114894946B (zh) * | 2022-06-20 | 2023-07-18 | 山东宏济堂制药集团股份有限公司 | 一种抗流感、解热抗炎的中药组合物的质量控制方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3549524A (en) * | 1965-11-10 | 1970-12-22 | Wolfgang Haller | Material and method for performing steric separations |
| SE334862B (ru) * | 1966-04-14 | 1971-05-10 | Pharmacia Ab | |
| SE333824B (ru) * | 1966-06-22 | 1971-03-29 | Pharmacia Ab | |
| GB1342409A (en) * | 1970-07-23 | 1974-01-03 | Ciba Geigy Ag | Flowable pancreatin preparation of low microorgan ism content and a process for its manufacture |
| US3701609A (en) * | 1971-05-13 | 1972-10-31 | David G Bailey | Apparatus for automatically adding preselected patterns of eluent solutions to a chromatographic column and monitoring and collecting eluted fractions |
| CA987230A (en) * | 1972-12-05 | 1976-04-13 | Jean C. Gilker | Process for the filtration of a suspension containing a protein such as an influenza virus vaccine |
| US3926800A (en) * | 1974-01-25 | 1975-12-16 | Beckman Instruments Inc | Temperature stabilized water jacket chromatographic column |
| US4123931A (en) * | 1976-08-03 | 1978-11-07 | The Dow Chemical Company | Method for uniformly coating liquid phases on glass beads and applications thereof |
-
1978
- 1978-04-12 FR FR7810769A patent/FR2422720A2/fr active Granted
- 1978-04-24 DE DE19782817871 patent/DE2817871A1/de not_active Withdrawn
- 1978-04-25 CA CA301,897A patent/CA1111415A/fr not_active Expired
- 1978-04-25 JP JP4916878A patent/JPS53140097A/ja active Pending
- 1978-04-25 GB GB16321/78A patent/GB1595378A/en not_active Expired
- 1978-04-26 ES ES469156A patent/ES469156A1/es not_active Expired
- 1978-04-26 US US05/900,081 patent/US4199450A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-04-26 SU SU782614452A patent/SU784784A3/ru active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2606609C2 (ru) * | 2010-10-27 | 2017-01-10 | Филип Моррис Продактс С.А. | Способ (варианты) захвата представляющих интерес частиц из смеси |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2422720A2 (fr) | 1979-11-09 |
| FR2422720B2 (ru) | 1983-02-04 |
| JPS53140097A (en) | 1978-12-06 |
| US4199450A (en) | 1980-04-22 |
| GB1595378A (en) | 1981-08-12 |
| DE2817871A1 (de) | 1978-12-07 |
| CA1111415A (fr) | 1981-10-27 |
| ES469156A1 (es) | 1979-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU784784A3 (ru) | Способ выделени протеина | |
| US5177194A (en) | Process for purifying immune serum globulins | |
| EP0751988B1 (en) | Highly efficient production and isolation of viral particles | |
| RU2484135C2 (ru) | Способ очистки, предназначенный для получения очищенного вируса везикулярного стоматита из клеточной культуры | |
| Emerson et al. | Both NS and L proteins are required for in vitro RNA synthesis by vesicular stomatitis virus | |
| US4683293A (en) | Purification of pichia produced lipophilic proteins | |
| Lockart Jr | Production of an interferon by L cells infected with Western equine encephalomyelitis virus | |
| US6149917A (en) | Industrial production process for a vaccine against Japanese encephalitis virus and vaccine produced | |
| KR19980081114A (ko) | 인플루엔자 백신 | |
| NO320952B1 (no) | Fremgangsmate for virusfiltrering av en losning inneholdende minst ett makromolekyl | |
| JP2002034556A (ja) | ウイルスの不活化方法 | |
| Karger et al. | Simple and rapid purification of alphaherpesviruses by chromatography on a cation exchange membrane | |
| US4206014A (en) | Process for removing detergents from virus-antigen suspensions | |
| Fujinami et al. | Failure to cleave measles virus fusion protein in lymphoid cells. A possible mechanism for viral persistence in lymphocytes | |
| US4485038A (en) | Method for the production and purification of human leukocyte interferon | |
| US5731187A (en) | Process for preparing hepatitis A (HAV) antigens and vaccines | |
| EP0138167A1 (en) | Method for purification of HBs antigen | |
| US3197374A (en) | Process for the disaggregation and purification of viruses | |
| US4189535A (en) | Serum cell growth promoting materials | |
| US3478145A (en) | Chromatographic purification of virus with brushite modified by autoclaving | |
| Schneider et al. | Purification of rabies virus from tissue culture | |
| Nakajima et al. | Physicochemical studies of equine infectious anemia virus: I. Buoyant density of the virus | |
| US3485718A (en) | Virus purification | |
| US3368867A (en) | Chromatographic purification of influenza virus with brushite modified by autoclaving | |
| RU2067617C1 (ru) | Способ получения димера лизоцима |