SU777041A1 - Биоспецифический сорбент дл аффинной хроматографии трипсина - Google Patents

Биоспецифический сорбент дл аффинной хроматографии трипсина Download PDF

Info

Publication number
SU777041A1
SU777041A1 SU782607809A SU2607809A SU777041A1 SU 777041 A1 SU777041 A1 SU 777041A1 SU 782607809 A SU782607809 A SU 782607809A SU 2607809 A SU2607809 A SU 2607809A SU 777041 A1 SU777041 A1 SU 777041A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
carrier
trypsin
solution
ovomucoid
sorbent
Prior art date
Application number
SU782607809A
Other languages
English (en)
Inventor
Дайна Яновна Дайя
Рута Валдовна Берзиня-Берзите
Вия Хермановна Кирсе
Август Карлович Арен
Original Assignee
Предприятие П/Я Г-4740
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Предприятие П/Я Г-4740 filed Critical Предприятие П/Я Г-4740
Priority to SU782607809A priority Critical patent/SU777041A1/ru
Application granted granted Critical
Publication of SU777041A1 publication Critical patent/SU777041A1/ru

Links

Landscapes

  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Description

3
мость (цена сефарозы 125 руб/кг); загр знение им окружающей среды, так как в качестве активатора иснользуют сильно  довитое и отравл ющее вещество - цианобромид; недостаточно высока  степень очистки трипсина.
Предлагаетс  новый биоспецифический сорбент общей формулы
ОН
1 0вомуноид
P-0-Si-{ H2)3
где Р - остаток силохрома, дл  аффинной хроматографии трипсина.
В предлагаемом сорбенте матрицей служит силохром, в качестве промежуточных соединений (активаторов) используют аминопропилтриэтоксисилан и п-бензохинон, а в качестве лиганда - овомукоид.
Такой сорбент получают следующим образом .
Силохром обрабатывают -у-аминопропилтриэтоксисиланом по известной методике:
р|-о- 11-(снг)з-кнг-Ь г I I л
Ситхром оЗраЗотанньш
jf- аминопрзпилтризтожс/си/ атм
Я I
(енг)з - NH
- о- L - (еН2)з-МН
АI
OBoi tjKoud
рЯ-0- i- (ен2)
Силохром обогащают аминогруппами обработкой уачинопронилтриэтоксисиланом, затем активируют /г-бенохиноном. К полученному активированному носителю присоедин ют овомукоид, растворенный в боратном буфере при рН 8,0 в течение 1 ч при комнатной температуре.
Овомукоид присоедин етс  в положении 5 хинонового цикла с помощью е-аминогруппы лизина или концевых аминогрупп белков, что обеспечивает прочную и стабильную св зь, не нарушает ингибиторную способность овомукоида. Полученный сорбент содержит 45-50 мг овомукоида на 1 г сухого сорбента.
Силохром благодар  своему неорганическому происхождению обладает жесткой, неизмен емой микроструктурой, которой обусловливаютс  механическа  прочность, долговечность, хорощие гидродинамические свойства и возможность повторной регенерации сорбентов на основе силохрома. Сорбенты на основе силохрома также устойчивы против воздействи  микроорганизмов.
Благодар  стабильной св зи д-бензохинона с овомукоидом и также микроструктуре нерастворимой матрицы силохрома достигаетс  высокое содержание овомукоида в сорбенте: 45-50 мг на 1 г сухого носител , что, в свою очередь, повышает эффективность очистки трипсина. Достигаетс  чистота прапаратов трипсина 64-67 ед. БАЭЭ/мкмол/мин/мгбелка.
Овомукоид-силохром три раза дешевле овомукоид-сефарозы (цена силохрома 40 руб./кг).
Использование в качестве активатора /х-бензохинона позвол ет исключить применение цианобромида - сильного  да и отравл ющего вещества. Преимуществом предлагаемого сорбента  вл етс  также возможность его регенерации прокаливанием при 500-900°С с повторной активацией согласно изобретению.
Срок использовани  такого сорбента 2,5-3,0 мес ца.

Claims (3)

  1. Приме.р 1. Используют силохром (СХ-2), выпускаемый Горьковским опыт-. ным заводом ВНИИ нефт ных продуктов ВТУ-341671 (Д 920 А, S 71 , Vnop 1,63 фракции 0,1 -1,0 мм). В колбу наливают 350 мл 1,5%-ного раствора у-аминопропилтриэтоксисилана, при перемешивании внос т 100 г силохрома (СХ-2) и выдерживают в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем жидкость декантируют и осадок высушивают в термостате при 130°С в течение 4-5 ч. К 0,5 г силохрома, обработанного -аминопропилтриэтоксисиланом (содержаш,им 200 мк-экв. аминогрупп на 1 г носител ), прибавл ют 30 мл 70%-кого раствора изопропилового спирта, который включает 0,105 г /г-бензохинона, и выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч, затем носитель отфильтровывают, промывают 3X20 мл изопропилового спирта и высушивают . Получают 0,5 г носител , содержащего 200 мк-экв. хиноновых групп на 1 г носител . Далее активированный носитель пропитывают 1,7 мл раствора овомукоида в боратном буфере с рН8 (содержащем 25 мг овомукоида) и выдерживают в течение 1 ч в вакууме (15-20 мм рт. ст.) при комнатной температуре. После этого препарат фильтруют, промывают боратным буфером, рН 8,0, 1 М раствором хлористого натри  и еще раз дополнительно боратным буфером дл  удалени  несв занного белка. Полученный сорбент содержит 45 мг овомукоида на 1 г сухого носител . Пример
  2. 2. К 1,0 г силохрома, обработанного -уэминопропилтриэтоксисиланом (содержащим 250 мк-экв. аминогрупп на 1 г носител ), прибавл ют 60 мл 70%-ного раствора изопропилового спирта, содержащего 0,21 г п-бензохинона, и выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч, затем носитель отфильтровывают, промывают 3X40 мл изопропилового спирта и высушивают . Получают 1,0 г носител , содержащего 250 мк-экв. хиноновых групп на 1 г носител . Далее активированный носитель пропитывают 3,5 мл раствора овомукоида в боратном буфере с рН 8,0 (содержащем 50 мг овомукоида) и выдерживают в течение 1 ч в вакууме (15-20 мм рт. ст.) при комнатной температуре. После этого препарат фильтруют, промывают боратным буфером, рН 8,0, 1 М раствором хлористого натри  и еще раз дополнительно боратным буфером дл  удалени  несв занного белка. Получают сорбент, содержащий 50 мг овомукоида на 1 г сухого носител . Пример
  3. 3. К 5,0 г силохрома, обработанного 7-аминопропилтриэтоксиланом (содержащим 240 мк-экв. аминогрупп на 1 г носител ), прибавл ют 300 мл 70%-ного раствора изопропилового спирта, содержа щего 1,05 г п-бензохинона, и выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч, затем носитель отфильтровывают, промывают 3X200 мл изопропилового спирта и высушивают. Получают 5,0 г носител , включаюш;его 240 мг-экв. хиноновых групп на 1 г носител . Далее активированный носитель промывают 17,5 мл раствора овомукоида в боратном буфере, рН 8,0 (содержащем 250 мг овомукоида) и выдерлсивают в течение 1 ч в вакууме при комнатной температуре. После этого препарат фильтруют, промывают боратным буфером, рН 8,0, 1 М раствором хлористого натри  и еще раз дополнительно боратным буфером дл  удалени  несв занного белка. Получают 15,0 г влажного носител , содержащего 48 мг овомукоида на 1 г сухого носител . Приготовленный биоспецифический сорбент дл  аффинной хроматографии трипсина внос т в колонку (1,9X25 см) и промывают до уравновешивани  0,05 М буферным раствором ТРИС-НС1, содержащим 0,02 М хлористого кальци , рП 8,0, при комнатной температуре. 210 мг производственного трипсина (производства ОЗХР марки Б) с удельной активностью 16 ед. БАЭЭ/мкмоль/мин/мг белка раствор ют в 40 мл 0,05 М ТРИС-НС1-буфера, рН 8,0, содержащего М хлористого кальци , и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат нанос т на колонку с уравновешенным тем же буферным раствором биоспецифическим сорбентом, Скорость пропускани  жидкости через колонку 40 мл/ч. После нанесени  раствора трипсина колонку промывают тем же буферным раствором до отрицательной реакции на белок у выхода колонки. Десорбцию провод т при температуре от О до 4°С пропусканием через колонку 0,05 М б ферного раствора глицина - НС1, рН 2,2-2,3, до отрицательной реакции на белок у выхода колонки . Фракции трипсина собирают и после диализа лиофильно высушивают. Получают 140 г очищенного трипсина с удельной активностью 64 ед. БАЭЭ/мкмоль/мин/мг белка . Степень очистки 4 раза. Выход препарата - высокоочищенного трипсина с активностью 64-67 ед. БАЭЭ/мкмоль/мин/мг белка зависит от времени использовани  колонки с биоспецифическим сорбентом. За единицу эстеразной активности трипсина прин то количество фермента, которое за 1 мин при 30°С и рН 8,0 катализирует расщепление 1 мкмоль БАЭЭ. Технико-экономический эффект изобретени  заключаетс  в создании стабильного. долговечного и дешевого биоспецифического сорбента дл  аффинной хроматографии. Использование такого сорбента обеспечивает получение высокоочищенных препаратов трипсина, которые по качеству не уступают продукции ведущих фирм мира. Формула изобретени  Биоспецифический сорбент общей формулы Обомуноид -0-$1-(СН2)з-Ш
    где P - остаток силохрома, дл  аффинной хроматографии трипсина. 5 10 Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1.Мосолов В. В., Лушникова Е. В. Принцип очистки пептидгидролаз, основанный на применении нерастворимых ингибиторов белковой природы, «Биохими , т. 35, 1970, вып. 3. 2.N. S. Robinson, R. W. Туе, Н. Neurath, К. А. Walsh Isolation of trypsin by affinite chromatography, «Biochem., 1971. V. 10, № 14, p. 2743-2747.
SU782607809A 1978-04-18 1978-04-18 Биоспецифический сорбент дл аффинной хроматографии трипсина SU777041A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU782607809A SU777041A1 (ru) 1978-04-18 1978-04-18 Биоспецифический сорбент дл аффинной хроматографии трипсина

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU782607809A SU777041A1 (ru) 1978-04-18 1978-04-18 Биоспецифический сорбент дл аффинной хроматографии трипсина

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU777041A1 true SU777041A1 (ru) 1980-11-07

Family

ID=20761183

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU782607809A SU777041A1 (ru) 1978-04-18 1978-04-18 Биоспецифический сорбент дл аффинной хроматографии трипсина

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU777041A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5246846A (en) * 1989-04-04 1993-09-21 Fritz Pittner Process for immobilizing proteins on a support containing amino, mercapto or hydroxy groups

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5246846A (en) * 1989-04-04 1993-09-21 Fritz Pittner Process for immobilizing proteins on a support containing amino, mercapto or hydroxy groups

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102834415A (zh) 亲和色谱用填充剂以及离析免疫球蛋白的方法
CN103270044A (zh) 亲和色谱用载体和分离免疫球蛋白的方法
WO1997039115B1 (en) Immobilized alliinase and continuous production of allicin
ATE314391T1 (de) Methode zur reinigung von thrombopoietin
SU777041A1 (ru) Биоспецифический сорбент дл аффинной хроматографии трипсина
Vijayalakshmi Histidine ligand affinity chromatography
FI72342B (fi) Foerfarande foer isolering av bakterieluciferas och affinitetsharts anvaendbart daeri
NZ510539A (en) A chromatographic process for producing peptides from biological fluids such as milk, whey, blood, egg white and cell culture extracts
CN104447977A (zh) 一种重组人骨形态发生蛋白-2的纯化生产方法
JP2007238479A (ja) ハイドロキシアパタイトに吸着された有機物の溶出方法及び該溶出方法を用いた有機物の精製方法
SU644796A1 (ru) Способ очистки протеолитических ферментов
SU671385A1 (ru) Способ приготовлени сорбента"
SU942427A1 (ru) Способ очистки протеолитических ферментов
RU2065877C1 (ru) Способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ
CN100371034C (zh) 组氨酸在血液净化亲合吸附介质中的应用
SU767121A1 (ru) Способ выделени и очистки трипсина и химотрипсина
JPH0147997B2 (ru)
CN103506080A (zh) 一种用于分离纯化凝血因子viii的介质及其制备方法
Gauthier et al. Immobilization of α‐chymotrypsin and trypsin on different agarose gels
RU686377C (ru) Способ получени препарата иммобилизованной протеазы BACILLUS SUBTILIS
SU1478112A1 (ru) Способ получени сорбента дл разделени биологических жидкостей жидкостной хроматографией
SU979354A1 (ru) Способ получени сорбента
JPH0126709B2 (ru)
RU2230072C1 (ru) Способ получения афинного сорбента для очистки ферментных препаратов
RU1777951C (ru) Способ получени сорбента дл выделени фибронектина