SU749891A1

SU749891A1 - Способ получени щелочной протеазы

Info

Publication number: SU749891A1
Application number: SU2657879A
Authority: SU
Inventors: Зиновий Григорьевич Медведев; Владимир Васильевич Дорохов; Валентин Георгиевич Халабузарь; Эдуард Витальевич Кузнецов; Любовь Борисовна Носкова; Леонид Михайлович Вайнер
Original assignee: Всесоюзный Научно-Исследовательский Биотехнический Институт; Ладыжинский Завод Ферментных Препаратов
Priority date: 1978-08-28
Filing date: 1978-08-28
Publication date: 1980-07-23

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЩЕЛОЧНОЙ ПРОТЕАЗЫ

1

Изобретение относитс к микробиологической промышленности, а именно к способу получени щелочной протеазы.

Из8есте 1 способ получени щелочной протеазы, предусматривающий культивирование бактерий рода Bacillus на питатель- , ной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора, минеральные соли, а также глутаминовую кислоту и лизин в качестве стимул торов биосинтеза щелочной протеазы с последующим выделением конечного продукта {.to

Недостатком известного способа вл етс низкий выход щелочной протеазы, который составл ет 11660 ед/мл по методике ФОЛ П.

Цель изобретени - повыщение выхода фермента.

Указанна цель достигаетс тем, что в качестве стимул тора биосинтеза щелочной протеазы используют содержащие глутаминовую кислоту и лизин клетки продуцента, 20 полученные после 24-48 ч Культивировани , которые предварительно подвергают тепловой обработке сначала при температуре 130 160°С в течение 30-60 мин, затем при

температуре 40-60°С и рН 7-10 в течение 3-6 ч в присутствии нейтральной протеазы. . Клетки продуцента после 24-48 ч культивировани содержат большое количество, а именно 20-60% от суммы всех аминокислот, глутаминовой кислоты и лизина,.чем и обусловлено стимулирующее действие гидролизата продуцента на биосинтез щелочной протеазы . В качестве продуцентов щелочной протеазы используют бактерии из группы Bacillus §ubtilis-Bacillus mesentericus.

Пример. Культуральную жидкость Bacillus subtilis J2, полученную в производственном ферментере после выращивани в течение 3fe-48ч. направл ют на сепарацию, где отдел ют клетки продуцента. С ферментера, емкостью 6 м, после сепарации получают 4,0 м клеток продуцента и часть культуральной жидкости.

Смесь клеток продуцента и культуральной жидкости загружают в сборник емкостью 6,3 м, где ее обрабатывают при температуре 135°С в течение 60 мин. После термообработки смесь охлаждают до температуры 50°С, довод т с помощью щелочи до рН 8,0, добавл ют нейтральную протсазу из расчета 0,125 ед/л удельной активно74989 сти {по методу Ансона-Мирского) и при посто нном перемешквйннн выдерживают смесь в течение 5ч.,. . .. Полученный гиДролйзат наП аёЛ югт а сборник, емкостью 63 м, добавл ют 19,2 кг бактернальной амилазы, nepeMefflHiterot и внос т 3840 кг крахмала, 960 кг кукурузной мукн, 192 кг белково-витаминного концентрата , 32 кг фосфорнокислого двузамещенного аммони и пеногаситель. После чего рН раствЪра довод т до 6,4, и нагревают до 75°С. Раствор стерилизуют и подают в ферментер, емкостью 63 м. В отдельной емкости готовит раствор технического казеина. Наливают 8 м воДы, довод т рН до 0 и внос т 320 .кг,технического казеина. Температуру patTBopa поднимают до 50°С н перемешивают в течение 60 мин. Раствор стерилизуют и подают в ферментер . После стерилизации в реактор наливают 2000 л воды, промывные вода стерилизуют и направл ют в ферментер. Объем среды в ферментере 31,5 рН средь в ферментере довод т до 6,8, производ т посев и ведут культивирование при посто нном перемешивании и аэрировании в течение 36 ч. .Активность культуральной жидкости в конце ферментации 15300 ед/мл (по методу ФОЛП). Способ получени щелочной прОтеаз1У с испрльэ10ванием в качествеСтимул тора био; синтеза фермента гидролизата клеток продуцента с высоким содержанием глутамнно--;;-:;- ;-: ---.

Claims

4ftV -i sfeVl ВОЙ КИСЛОТЫ и лизина позвол ет увеличить выход конечного продукта на 30%. Формула изобретени Способ получени щелочной протеазы, предусматривающий культивирование бактерий рода BacHlus на питательной среде, содержащей источники углероДа, азота, фосфора , минеральные соли, а также глутаминовую .кислоту и лизин в качестве стимул торов биосинтеза ихелочной протеазы с последующим выделе.нием конечного продукта, отличающийс тем, что, с целью повышени выхода фермента, в качестве стнмул .тора биосинтеза щелочной протеазы используют содержащие глутаминовую кислоту и лизин клетки продуцента, полученные после 24-48 ч культивировани , которые предварительно подвергают тепловой обработке сначала при температуре 130 160°С в течение 30-60 мин, затем при температуре 40-60°С и рН 7-10 в течение 3-6 ч в присутствии нейтральной протеазы. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Емцева Т. В. Физиолого-биохимические исследовани .экспериментально полученного мутанта Bacillus mesentericus и природного щтамма Bacillus subtilis - продуцентов протеолитических ферментов. Автореф. дис. М., МГУ, 1975, с. 12.