SU659612A1 - Способ получени ферментного препарата -галактозидазы - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА /3-ГА ЛАКТОЗ ИДА ЗЫ

получа  нативные растворы с активнотью 3,0-4,0 ед/мл.

Затем из нативного раствора вылел ют ферментный препарат путем сорбции на высокодисперсном карбоксильном катионите КМТ с размером зерна мкм, промывки и десорбции цитратным буфером,

В процессе сорбции нативный раствор подкисл ют 50%-ной уксусной кислотой.

Далее провод т ультрафильтрацию раствора через ацетатцеллюлозную мембрану с размером пор 80-150 А при рН 4,2-7,0 с последующей лиофильной сушкой.

Пример. Культивирование продуцента /i -галактозидазы провод т в глубинных УСЛОВИЯХ на комплекной питательной среде состава,%; соева  мука -2,0; лимонна  кислота 1,5 К2,НР04.- 0,4; ( 0,2;

Ксе - 0,05; 0,015; адеканоль , пропинал - 400, 0,04; сол на  кислота до ph 2,9. Культивирование провод т в 100 л ферментере с перемешиванием при 280-350 об/мин, поДачей воздуха в количестве 1 объем/

объем среды в мин при 28± 1°С в течение 72-96 час.

В процессе ферментации в течение первых 48 час происходит интенсивное потребление лимонной кислоты, повышение рН среды и биосинтез фермента р -галактозидазы. Ферментаци  заканчиваетс  при рН 4,7-5,2, активность фермента в среде 3,0-4,0 ед/мл, содержание лимонной кислоты - 2,05 ,0 мг/мл.

Сравнительна  характеристика процесса биосинтеза jb - галактозидазы на известной среде и предлагаемой приведены в табл.1.

Таблица 1

г1итательна  среда не содержаща  соевых шрот (данныё 10 операций)

Выделение и очистку фермента провод т путем сорбции его на высокодисперсном катионите - смоле КМТ и дисперсностью 20-40 мкм, вз том в количестве 40 г, на трехступенчатой цинтрифуге, при этом подаваемую через за рузрчное устройство жидкость последовательно фильтруют через 3 сло  смолы. Смолу готов т путем последовательной ее обработки 1 н сол ной кислотой, дистиллированной во72

1,83

7,0

дой/ 1н NaOH в 2 н NaCe,a затем 2 н NaCS и 0,5 М адетатным буфером при рН 3,7.

Сорбцию провод т из нативного раствора объемом 13,5 л, при этом сорбируетс  73-75% фермента от общего его содержани  в нативном растворе.

Результаты сорбции /5 -галактозидазы из нативного-раствора приведены в табл.2.

После сорбции смолу промывают 1 л 0,033%-ной уксусной кислоты (рН ) и-дистиллированной водой,

Уксусна  кислота 0,033%, рН 3,5

Десорбцию провод т 0,1 М Na цитратным буфером прискорости 0,5 л/часа, при этом снимают 97,8% |i-галактозидазы (65,5% белка от сорбированного количества).

При. этом достигаетс  концентрирование в 18у4 раза.

Таблица2

Данные анализа промывки смолы после сообщени , приведены в 30 габл, 3.

Таблица 3

Буро-желтый

цвет(цвет исходного

нативного pacTsopaСодержание белка в высокоактивных фракци х 9,7% от общего количества в исходном нативне растворе или 35,5% от сорбированного белка.

Данные десорбции /Ь - галактозидазы приведены в табл.4.