SU602544A1 - Способ получени глюкоамилазы - Google Patents

Description

1

Предлагаемое изобретение относитс  к микробиологической промышленности и может быть использовано дл  получени  амилолитических ферментов.

Известен способ получени  глюкоамилазы глубинным культивированием его продуцентов из рода дрожжей Еndowy сор bib fibuftge в аэробных услови х .

При этом выращивание продуцента и главную ферментацию ведут на питательной среде одного состава, содержащей крахмал в чистом виде или вещества , содержащие крахмал CiJ- Посевной материал, выращенный на данной среде, подают непосредственно в главные ферментаторы, например, передавливанием . Выход 60-120 ед./ЮО мл.

Однако данный процесс длителен, общий цикл составл ет 64-68 ч, из которых 48 ч приходитс  на выращивание продуцента. Приготовление крахмалсодержащей среды затруднено, так как крахмал оседает, затруднена также сте рилизаци , поскольку крахмал термически неустойчив.

Цель изобретени  заключаетс  в увеличении активности фермента и ускорении процесса получени  глюкоамилазы. .

Дл  этого в предложенном способе при выращивании посевной культуры EHctomycop&is и выращивании биомассы в качестве источника углерода используют спирт алифатического р да в количестве 1,5-5,0%. Выращивание биомассы следует осуществл ть на питательной среде при скорости ее протока , равной 0,3-1,1 .

Предложенный способ заключаетс  в следующем.

Claims (2)

1. Посевной материал и биомасс культуиы E«domy сора S -f-ibHtigef fi-574 выращивают на полусинтетической среде , содержащей в качестве единственного источника углерода спирт алифатического р да, минеральные соли., кукурузный экстракт и кашалотовый жир После выращивани  посевного материала его ввод т в главный ферментатор, в котором при скорости протока среды 0,3-1,1 ч выращивают биомассу продуцента . Затем в культуральную жидкость ввод т индуктор биосинтеза глюкоамилазы - крахмал, и культивирование продолжают до накоплени  максимальной глюкоамилазной акггивности. Полученнуюкультуральную жидкость сушат или из фильтрата культуральной жидкости выдел ют глюкоамилазу общеприн тым методом . Выздод глюкоамилазы составл ет 80100 ед./мл. Длительность процесса 30 40 ч. Пример. В качестве продуцента используют дрожжи EMdow у copbib fi bu Eigef R-574. Посевной материал -выращивают в те чение 18 ч в колбах на качалке при . Выращенный посевной материал в количестве 10% ввод т в ферментатор , затем в течение 1 ч периодически размножают культуру и после этог переход т на выращивание продуцента непрерывным методом при скорости про тока среды 0,3-1,1 ч , рН 7,0, температуре и непрерывной аэрации при расходе 80 мг/О2/л-мин. Состав среды дл  выращивани  посевной культуры и выращивани  биомассы следующий, %: Этиловый спирт 1/5 Сульфат аммони  0,25 Однозамещенный фосфат кали 0,2 Хлористый кальций 0,04 Кукурузный экстракт 1,0 ,Кашалотовый жир 0,5 Культур льную жидкость, вытекающую из непрерывно действующего фермен татора, ввод т в периодически действующий ферментатор, в котором в течение 1-2 ч продолжают периодическсэе культивирование с целью полного усвоени  этилового спирта культурой. Затем в культуральную жидкость ввод  индуктор биосинтеза глюкоамилазы - :крахмал с таким расчетом,чтобы обще количество крахмала в культуральной .жидкости составл ло 0,5-0,8%.После добавлени  крахмала культивирование продолжают при и непрерывной аэ ции до достижени  максимальной глюко амилазной активности. Через 8 ч глюкоамилазна  активность в культуральной жидкости составл ет 100 ед./мл по глюкозооксидазному методу. Весь цикл составл ет Зи-40 ч. П р и м е р ;i. Выращивание продуцента и получение посевного материал аналогично примеру 1. После достижени  стационарного режима непрерывног выращивани  биомассы при скорости пр тока среды 0,6-1,0 культуральную жид кость ввод т в периодически действую щий ферментатор. После заполнени  20-50% полезного объема ферментатора методом притока в течение 6-10 ч приливают п тикратн концентрированную питательную среду содержащую 20-30% этилового спирта. Интенсивность аэрации повышают пропорционально росту биомассы при усло вии насыщени . После окончани  приливани  более концентрированной питательной среды концентраци  биомассы увеличиваетс  дважды до 35-40 г/л. После полного израсходовани  этилового спирта культурой в питательнойвсреде приливают в водном растворе разбавленныйкрахмал с расчетом, чтобы количество крахмала в культуральной жидкости составлрло 0,5-0,8%. Затем культивирование продолжают в течение 8-14 ч при услови х , аналогичных в примере 1. Глюкоамилазна  активность составл ет 809Оед ./мл. Продолжительность цикла 44-52 ч. Примерз. Посевной материал выращивают в течение 18 ч в колбах на качалке при . Выращенный посевной материал ввод т в количестве 810% в ферментатор, который заранее заполн ют питательной средой с этиловым спиртом до 2/3 рабочего объема. Затем культивирование по периодическому проточному методу продолжают при услови х, аналогичных в примере 2. П р и м е р 4. Выращивание продуцента и посевного материала ведут аналогично примерам 1 и 2. Состав питательной среды дл  выращивани  посевного материала и биомассы следующий,: Метиловый спирт . 2,0 Сульфат аммони  0,25 Однозамещенный фосфат кали 0,2 Хлористый кальций 0,04 Кукурузный экстракт 1,0 Кашалотовый жир 0,5 Количество получаемой биомассы составл ет 40 г/л. Процесс главной ферментации можно вести по примеру 1, 2, 3. Через 10-16 ч глюкоамилазна  активность составл ет 80 ед./мл. Общий цикл 44-56 ч. Во всех случа х обработку культуральной жидкости ведут любым из известных методов. таким образом, предлагаемый способ позволил сократить общий цикл на 3040 %, ускорить приготовление питательной среды дл  выращивани  продуцента, т.к. спирты не оседают и термически более устойчивы, чем крахмал, а также на 30% сократить расход кислорода при аэрации. Предлагаемый способ позволит впервые в Советском Союзе промышленно получить глюкоамилазу микробиологическим путем. В насто щее врем  ведутс  подготовительные работы дл  внедрени  способа на ливанс сом опытном биохимическом заводе. Предлагаемый объем выпуска 20 усл.т. в год. Формула изобретени  1. Способ получени  глюкоамилазы путем выращивани  посевной культуры из рода Ек сЗо ту сор si S на питательной среде, выращивани  биомассы и синтеза фермента на питательной ере-;

   ле, содержащей крахмал, отделени  биомассы от культуральной жидкости и выделени  фермента из нее, о т л и чающийс   тем, что, с целью увеличени  активности фермента и ускорени  процесса, при выращивании посевной культуры и выращивании биомассы в качестве источника углерода используют спирт алифатического р да в количестве 1,5-5%.
2. 2. Способ ПОП.1, отличающийс  тем, что выращивание биомассы на питательной среде осуществл ют при скорости ее протока, равной 0,3--1,1 чЧ

   Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе:

   1. Авторское свидетельство СССР 340690, кл. С 12 и 13/10, 1970.