SU490284A3 - Способ получени пептидов с последовательностью актг-человека,содержащих в -конечном положении аминооксикислоту - Google Patents
Способ получени пептидов с последовательностью актг-человека,содержащих в -конечном положении аминооксикислотуInfo
- Publication number
- SU490284A3 SU490284A3 SU731963873A SU1963873A SU490284A3 SU 490284 A3 SU490284 A3 SU 490284A3 SU 731963873 A SU731963873 A SU 731963873A SU 1963873 A SU1963873 A SU 1963873A SU 490284 A3 SU490284 A3 SU 490284A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- acid
- lysyl
- obut
- amino
- arginyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
- C07K14/695—Corticotropin [ACTH]
- C07K14/6955—Corticotropin [ACTH] with at least 1 amino acid in D-form
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
- C07K14/695—Corticotropin [ACTH]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ
С ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬЮ АКТГ-ЧЕЛОВЕКА,
СОДЕРЖАЩИХ В N-KOHE4HOM ПОЛОЖЕНИИ
а-АМИНООКСИКИСЛОТУ
слойыой хроматографии проводились на силикагеле по Шталю со следующими системами растворителей.
Этилацетат - (пиридин - уксусна кислота - вода 20 : 6 : 1 1) 8 : 2.
Этнлацетат - (пиридин - уксусна кнслота - вода 20:6: 11) 6:4.
Этил ацетат-пиридин муравьина кислота --вода 50:20:6:5,5.
Хлороформ - метанол 98 : 2.
Хлороформ - метанол 95 : 5.
П р и м ер 1. Аминооксиацетил -- тирозил - серил - метиопил - глутамил - гистидил -
-фенилаланил - аргинил - трпптофил -
-глицил - лизил - пролил - валил - глицил - лизил -- лизил - аргинил-пролил-
-валил - лизил - валпл - тирозил - пролил - аспарагинил - аланил - глицил -
-глутаминова кислота.
0,600 г (0,143 мол ) БОС - аминооксиацетил - тирозил - серил - метионил - у - OBut - глутамил-гистидил-фенилаланил-
-аргпипл - триптофил - глицил-s-ВОС-
-лизил - пролил - валил - глицил - е - -ВОС --лизил -- 8 - ВОС - лизил - аргинил - аргинпл - пролил - валил-s-ВОС-
-лизил - валил - OBut - тирозил - нролил - OBut - аспартил-аланил - глицил -
-у-OBut - глутамил - OBut-3HCl раствор ют в смеси из 4,8 мл трифторуксусиой кислоты , 0,6 мл воды и 0,6 мл анизола. Раствор оставл ют сто ть при комнатной температуре в течение I час, а затем разбавл ют 60 мл эфира. Выиавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром и сушат в вакууме над п тиокисью фосфора и гидроокисью кали . Получают 0,538 г (87%) замещенного трифторацетата октакозапептида.
Полученный трифторацетат октакозапептида пропускают через колонку с Дауэкс 1X8 в ацетатной форме. Ацетат октакозапеитида нанос т иа колонку с ионообменником Ватман СМ-51, разделение провод т с помощью аммопийацетатного буфера (0,01 М, рН 4,5; 0,4 М, рН 6,7). Содержащие целевое вещество фракции собирают и лиофилизуют. Получают 0,22 г (34%) октакозанентида.
Аминокислотный анализ показал следующее соотношеппе комионентов: лизин 4,05 (4); гпстидин 0,93 (1); аргииин 3,08 (3); аспарагин 0,99 (1); серии 0,79 (1); глутаминова кислота 2,05 (2); пролин 3,09 (3); глицин 3,04 (3); аланин 0,92 (1); валин 3,12 (3); метионин 0,60 (1); тирозин 1,88 (2); феиилаланин 0,85
(1).
Примен емый в качестве исходного вещества гидрохлорид защищенного октакозаиеитида получают следующим образом:
А. грет-Бути локсикарбониламинооксиуксусна кислота.
316,0 г (2,27 моль) грет-бутилоксикарбонилгидроксиламина раствор ют в 2680 мл этанола и к раствору при охлаждении добавл ют 207,8 г (5,19 моль) гидроокиси натри и 350,4 г (2,52 моль) монобромуксусной кислоты . Реакционную смесь кип т т в течение 20 мин, затем отгон ют растворитель. Остаток раствор ют в 1940 мл воды и подкисл ют до рН 3 концентрироваиной НС1. После 2 час охлаждени и перемешивани отфильтровывают выделившиес кристаллы. Сырой продукт (419 г) кристаллизуют из смеси хлороформа и н-гексапа. Выход 388,8 г (86%): т. ил. 115- 116°С.
Пайдено, %: С 43,9; П 6,9; N 7,1. CynisNOs.
Вычислено, %: С 44,0; И 6,8; N 7,2. Б. 7рсг-Бутилоксикарбонил-аминооксиацетил - тирозил - сери.л -- - мегионил - NH-
-NH2.
1.72 г (9,0 ммолей) г/7ет-бутилоксикарбопиламинооксиуксусной кислоты и 4,50 г (10 ммоль) хлоргидрата метилового эфира тирозил - серил - метиопина раствор ют в
10 мл диметилформамида. Раствор охлаждают до и обрабатывают 1,11 мл (10 ммоль) метилморфолина, а затем 1,85 г (0,9 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 час при 0°С
и оставл ют сто ть при комнатной темнературе до следующего дн . После этого выпавшую дппиклогексил мочевину отфильтровывают, фильтрат упаривают, а остаток раствор ют в 200 мл этилацетата. Раствор промывают 1 н.
НС1 (2X100), 8%-ным раствором КПСОз (2X100). водой (1X100), затем сушат и упаривают . По.тученный метиловый эфир тетранептида (4,5 г) раствор ют в 45 мл метанола, раствор смешивают с 1,26 .мл (26,0 ммоль)
гидразингидрата и реакционную смесь оставл ют сто ть на ночь при комнатной температуре . После этого раствор упаривают, остаток растирают с этилацетатом, отфильтровывают, осадок промывают этилацетатом и эфиром и
высушивают пад копцентрированной серной кислотой. Получают 3,30 г (62,5%) гидразида защищенного тетрапептида. Температура плавлени перекристаллизованного из воды прод,укта около 137°С.
Найдено, %: С 49,0; Н 6,6; N 14,4.
С24Пз8Мб09.
Вычислено, %: С 49,1; П 6,5; N 14,4. Б. Хлоргидрат трег-бутилоксикарбонил - алппю - оксиацетил - тирозил - серил -
- метионил - у - OBut - глутамил, гистидил - фенилаланил-аргинил - триптофил- - глицил-е-ВОС - лизил - пролил - ва .лил - глицина. 0,41 г (0,70 ммоль) г/7ег-бутилоксикарбоНИЛ-аминооксиацетил - тирозил - серил- метионин - раствор ют в 5 мл диметилформалшда . В охлажденный до -20°С раствор по капл м вливают 0,4 мл этилацетата, насыщенного НС1 (4,4 н.), а затем 0,105 мл
(0,85 ммоль) г/ ег-бутилнитрита. Реакционную смесь перемешивают при -10°С в течение 5 мин, затем охлаждают до -20°С и к ней добавл ют раствор 0,96 г (0,70 ммоль) 7-But-глутамил-гистидил-фенилаланил-
-аргинил - тринтофил - глицил-в-ВОС- -лизни-пролил-валил-глицина и 0,48 мл (2,8 ммоль) диизопропиламина в 8 мл диметнлформамида . Реакционную смесь перемешивают при температуре от - 5 до в течение 1 чае и оетавл ют ето ть на ночь при . После этого раетвор упаривают, а остаток перетирают с 8%-ным раствором двууглекислого натри . Осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат. Получают 0,93 г (69%) защищепного тетрадекапептида. Последиий суспензируют в 6 мл метанола и обрабатывают раствором .лоргидрата ниридииа. приготовленного из 1,35 мл пиридина п 1.35 мл ,ентрированиой сол ной кислоты. Полученный раствор разбавл ют 50 мл воды, выпавгиий хлоргидрат тетрадекапентида отфильтровывают , промывают водой, а затем суигат. Вы.ход 0,78 г (57%); т. ил. 202-204 0; Rr 0,18. C9oHi32N2iO24ClS (1959,66). Г. т/оег-Бутилоксикарбоннл-аминооксиацетил - гирозил - серил --- метионил - у--OBut - глутамил - гистидил -- фенилаланил - аргиннл - трннтофил -- глицгм -е - -вое - лизил - F - вое - лизнл аргинил - аргинил - нролил - валил - Р - -вое - лизил - валил - OBut---тиpoзнл--нролил--аепартил -- аланил -- г.ицил--V -OBut - глутамил -- OBut-ЗНС. 0,346 г (0,176 миллимоль) хлоргидрата г оет-бутилоксикарбонил-аминооксиацетил- -тирозил - сери;1 - метнонил - v OBut- - -глутамил - гистидил - феинлаланнл-аргиннл - тринтофил - глтнтил - е - ВОС - -лизил-пролил-валнл - глицниа. 0,400 г (0,176 ммоль) g - ВОС - лизил-е--ВОС- -лизил - Е - ВОС - лизнл - аргинил - -аргинил - пролил - валил - Е - ВОС - -лиЗИЛ - валил - тирозил - ирол«л -Р- -OBut - аснартил - аланнл - глицнл - -глутамил--OBut-ЗНС1 иО,281г (1,05 ммоль) пентахлорфенола раствор ют в 3,3 мл диметилформамида и к раствору добавл ют 0,025 мл (0,18 моль) трнэтиламина, а затем 0,074 г (0,36 Л1моль) днциклогексилкарбодимнда . Реакционную смесь оставл ют ето ть при комнатной температуре двое суток, затем отфильтровывают вЕ навшую дициклогексилмочевину , а фильтрат разбавл ют 30 мл эфира . Выпавший нродукт отфильтровывают, промывают эфиром, а затем сушат. Гидрохлорид занлищенного октакозапептида получают с выходом 0.640 г (87%); т. пл. 208-212 С; R 0,22. С19.4Нз1,К.иО49С1з (4182,29). П р и м е р 2. Аминооксипропнонил - тирозил - серил - метионил - глутамил - гистидил - фенилаланнл - аргинил - тринтофил - глицил - лизил - пролил - валил - - глицил - лнзил - лизил - аргнннл - аргинил - нролил - валил - лизнл -- -тирозил - пролил - аспартил-аланил - глицн; - глутамннова кислота. ГУ „ ,1О ,,,,л Л -T-MXJT- глл-т-тг чг.т./«тпа рил - метионил - у - OBut - гл тампл - --- гистидил -- феиилалаипл -- аргинил - -триптофнл - глнцил - S - ВОС-лизил- -пролил - валил - глицил - 8 - ВОС- -лизил-Е-ВОС-лизил - аргинил - аргинил-иролил-валил-е-ВОС - лизил-валил-OBut-тнрозил - пролил-Р-OBut - -аспартил-алаиил-глицил - у - OBut- -глутамнл-OBut-ЗНС раствор ют в смеси из 4,8 мл трифторуксуспой кис.юты, 0,6 м,1 гюды и 0,6 м, анизола. Раствор оставл ют сто т) в течепис 1 час npii к()л;н:;т:;о; тол;1;ерагуре. а затем разбав.ч ют 60 мл эфира. Вы.1елииипп1е осадок отфильтровы: ают, промывают эфиром и сушат в вакууме над пигиокисью фосфора и гидроок1 сью кали . Трифторацетат зашищеиного октакозапептидй получают с выходом 0.532 г (86,5%). Полученный сырой трнфторацстат рас вор ют в 10 Л1Л воды и пропускают через колонк с Дауэкс 1X8 в ацетатной форме. Получениый раствор, содержаидий ацетат окгакозапептида, ианосптс на колонку, занол.нсннхю ионообменной смолой Ватман СД1-52. Разделение провод ;т с помслцыо градие1ггиого элюировани аммо11нйацетатцым буферов (0.01 У, рП 4,5; 0,4 . рП 6.7). Фракцнн, содержащне целевой продукт, лиофнлизуют. Получают 0,23 г (42%) октакозапептнда. Соотношение тирозин -етс 2,10. .- м П1окис.ютный ана.П;з показал содержание колпюнентов в следуктщсм соотношении: лизин 3,89 (4); гистт1дин0,97 (1); арпп-пш 3,00 (3); аснарагин 1,10 (1); серии 0,97 (П; глутаминова кислота 1,9-1 (2) глицин 3.06 (3); аланин 2,84 (31; метнон1ш 0,68 (П: фенилаланни 1,06 (1). Примененный в качестве исходного вещества тригидрохлорнд защнщеглюго октакозанептида нолучают ,им образом. А. 7/;ег-Бутноксикарбон л - L-a-аминоокснпропионовую кислоту получают нз 4,09 г (29 ммоль) О-сх.-бромпронионовой кнслоты, 3,62 г (65 ммоль) гндроокнсн калн.ч и 4,39 г (33 лшль) грсг-бутилокснкарбо1П1л -- гидроксиламина ло способу, указанному в примере 1. Сырой нродукт раствор ют в эфире и обрабатывают 6,3 мл (32 ммоль) дициклогексилам1П1а . Полу ч а ОТ днцнклогекс 1ламонийну10 еоль трсг-бутилоксикарбонил-Ь - о: - аминоокснпронноновой кнслоты с выходом 6,7 г (60%), т. пл. 157С. Дициклогексиламонийную еоль суспендируют в эфире, суспензию встр хивают с 0,2 и. серной кислотой, эфирную фазу упаривают и получают 3,05 г (50%) г/оег-бутилоксикарбопил-L - ос - аминооксипропиоиовой кислоты , т. пл. ПО-112 С; (, этанол). Найдено. РЛ : С 46,6; П 7,5; N 6.8. ГЛ-Т,.Пг.
Б. трег-Бутилоксикарбонил - сс-аминооксипропионил - тирозил - серил - метнонил -
-N2H3.
1,44 г (7,0 ммоль) грег-бутилоксикарбоНИЛ - 06 - аМИНООКСИПрОПИОНОВОЙ кислоты II
3,50 г (7,8 ммоль) хлоргидрата метилового эфира тирозил - серил - метионина раствор ют в 12 мл димстилформамида.
Раствор охлаждают до 0°С и обрабатывают 0,85 мл (7,8 ммоль) N-метилморфолина, затем смешивают с 1,48 г (7,2 ммоль) дициклогекснлкарбодиимида . Реакционную смесь при 0°С леремешивают в течение 1 час и оставл ют сто ть ночь при комнатной температуре. Отфильтровывают выпавшую дициклогексилмочсвину , фильтрат упаривают, а остаток перетирают с зтилацетатом. Продукт отфильтровывают , промывают этилацетатом и эфиром, а затем высушивают над концентрированной серной кислотой. Гидразид защищенного тетрапептида получают с выходом 2,1 г (50%); т. пл. 147°С (после перекристаллизации из воды ) ; R I 0,43.
Найдено, %: С 49,6; Н 6,7.
С25Н4оНбО95.
Вычислепо, %: С 50,0; Н 6,7. В. Хлоргидрат грег-бутилоксикарбонил-аамипооксипропионил - тирозил - серил -
-метионил - Y - О But - глутамил - гистидил - фенилаланил - арганил - трлптофил - глицил - 8 - БОС - лизил - пролил - валил - глицина.
0,266 г (0,44 моль) грег-бутилоксикарбонил - а. - аминооксипронионил - тирозил -
-серил - метионил - N2H3 раствор ют в 3,2 мл диметилформамида ц раствор охлаждают до -20°С. При перемешивании по капл м ввод т 0,41 мл этилацетата, насыщенного НС1 (4,4 Н.), затем 0,07 мл (0,59 ммоль) трет-бутилнитрита . Реакционную смесь церемешивают при -10°С в течение 5 мин затем охлаждают до - 20°С и добавл ют к ней раствор 0,600 г (0,438 ммоль) глутамил - гистидил -
-фенилаланил - аргинил - триптофил -
-глицил - 8 - вое - лизил - пролил -
-валил - глицина, и 0,31 г (1,8 ммоль) диизопропилэтиламина в 5 мл диметилформамида . Реакционную смесь в течение 1 час неремешивают при температуре от -5 до 0°С, а затем оставл ют сто ть ночь при 0°С. На следующий день диметилформамид отгон ют, а остаток перетирают с 8%-ным раствором двууглекислого натри . После фильтровани , промывки водой и последующей сушки получают 0,70 г (81%) защищенного тетрадекапептида. Из 1 мл пиридина и 1 мл концентрированной сол ной кислоты готов т раствор хлоргидрата пиридина и добавл ют его к суспендированному в 5 мл метанола защищенному тетрадекапептиду . Полученный таким образом раствор разбавл ют 50 мл воды, выпавший осадок оттида получают с выходом 0,513 г (59,5%); т. пл. 200 -202Т; Rf 0,19.
Г. грег-Бутилоксикарбопил - а-аминооксипропнопил - тирозмл - серил - метионнл -
-- у - -OBut - глутамил - гистидил - фе}П1лалани ,-1 - аргинил - триптофил - глицил - е - вое - лизил - пролил - валил - глицил - 8 -- БОС -- лизи;г - аргинил - аргинил-пролил-валил - 8 -ВОС-
-лизил - валил - OBut - тирозил - пролил - аспартил - аланил - глицил - - - -OBut -- глутамил - OBut.3HCl.
0,348 г (0,176 ммоль) хлоргидрата грет-бутилоксикарбонил - а-аминооксипропионил-
-тирозил - серил - метионил - у-OBut- -глутамил - гистидил - фенилаланил-аргиннл - триптофил - глиццл - 8 -ВОС -
-лизил - пролил - валкл - глицина 0,400 г (0,176 ммолей) - е - ВОС - лизил -- лизил - аргинил - аргинил - пролил - валил - 8 - ВОС - лпзил - валил - OBut -
-тирозил - пролил - |3 - OBut - аспартил - аланил - глицил - - OBut - глутамил - OBut-3HCl и 0,281 г (1,05 ммоль) пентахлорфенола раствор ют в 3,3 мл диметилформамида . К раствору добавл ют 0,025 мл (0,18 ммоль) триэтиламина, затем 0,074 г (0,36 ммоль) дициклогексилкарбодиимида (DCC). Реакционную смесь оставл ют сто ть при комнатной температуре в течение двух суток, затем отфильтровывают дициклогексилкарбамид , а фильтрат разбавл ют 30 мл эфира. Выделившийс продукт отфнльтровывают , промывают эфиром, а затем сушат . Хлоргидрат защищенного октакозанептида получают с выходом 0,658 г (89%); т. пл. 175-177°С; R 0,25.
Пример 3. Аминооксипропионил - тирозил - серил - метионил - глутамил - гистидил - фенилаланил - аргинил - триптофил - глицил - лизил - пролил - валил -
-глицил - лизил - лизил - аргинил - аргинил - пролил - валил - лизил - валил -
-тирозил - пролил - аспартил -- аланил- -глицил - глутаминова кислота.
0,600 г (0,142 ммоль) грег-б тилоксикарбонил - D - и-аминооксипропионил - тирозил - сери.л - мстиопил - глутамил - гистидил - фенплаланил - аргинил - триптофил - глицил - е - ВОС - лизил - пролил - валил - глицил - в - ВОС - лизил - в - БОС - лизил - аргипил - аргиНИЛ - пролил - валил - 8 - ВОС - лизил - валил - OBut - тирозил - пролил -
-OBut-аспартил - аланил - глицил -
-Y - OBut - глутамил - OBut-НС раствор ют в смеси из 4,8 мл трифторуксусной кислоты , 0,6 мл воды и 0,6 мл анизола. Раствор оставл ют сто ть при комнатной температуре в течение 1 час, л затем разбавл ют 60 мл эфира. Быцавши; осадок огфцл1)Тровывают, Выход трифторацета октакозапептида составл ет 0,546 г (88,5%). Трифторацетат раствор ют в 10 мл воды и трифторацетатные ионы с помощью ионообменной смолы Даузкс 1X8 обменивают на ацетатные ионы. Полученный таким образом раствор, содержащий ацетат замещенного октакозапептцда , вноситс на колонку, заполненную цонообменной смолой марки Ватман СМ-52. Целевой продукт выдел ют градиентным элюированием аммонийацетатным буфером (0,01 М, рН 4,5; 0,4 М, рН 6,7). Фракции, содержащие целевое вещество, собирают и лиофилизуют . Выход октакозапептида составл ет 0,245 г (39%). Содержание метионпнсульфоксида 2,57%. Соотнощение тирозина - триптофана равно 2,07. Аминокислотный анализ: лизин 4,35 (4); гиетидин 0,97 (1); аргинин 3,13 (3); аспарагинова кислота 1,06 (1); серин 1,00 (1); глутаминова кислота 1,92 (2); пролин 2,90 (3); глицин 3,00 (3); аланин 1,00 (1); валин 2,92 (3); метионин 0,87 (1); тирозин 2,21 (2); фенила л анин 1,06 (1). Пример 4. а-Аминокси - |3 - гидрооксипропионил - тирозил - серил - метионил - глутамил - гистидил-фенилаланил- -аргииил - триптофил - глицил-лизил - -пролил - валил - глицил - лизил - лизил - аргинил - аргинил-пролил -валил- -лизил - валил - тирозил - пролил - аспартил - аланил - глицил - глутаминова кислота. 0,600 г (0,142 ммоль) г/оет-бутилоксикарбонил - а - аминоокси - р - гидрооксипропионил - тирозил - серил - метионил-7- -OBut - глутамил - гистидил - фенилаланил - аргинил - триптофил - глицил - - - вое - лизил - пролил - валил - -глицил - 8 - вое - лизил - 8 - вое- -лнзил - аргинил - аргинил - пролил - -валил - 8 - вое - лизил - валил - -OBut - тирозил - пролил - р - OBut - -аспартил - ее - аминооксипропионил - -глицил - 7 - OBut - глутамил - OButЗНе раствор ют в смеси из 4,8 мл трифторуксусной кислоты 0,16 мл воды и 0,6 мл анизола , емесь оставл ют сто ть при комнатной температуре в течение часа, а затем разбавл ют 60 мл эфира. Выделившийс осадок отфильтровывают , промывают эфиром и сущат над п тиокисью фосфора и гидроокисью кали в вакууме. Получают 0,400 г (65%) трифторацетата замещенного октакозапептида. еырой Трифторацетат раствор ют в 8 мл воды и пропускают через колонку с Дауэкс 1X8 в ацетатной форме. Полученный таким образом раствор, содержащий ацетат октакозапептида, наноситс на колонку, заполненную ионообменной смолой марки Ватман еМ-52, и элюируетс градиентным элюированием аммонийацетатным буфером (0,1 М, рН 4,5; 0,4 М, рН 6,7). Фракции, содержащие целевое вещество, собирают и лиофилизуют. Получают 0.240 г (41,5%) октакозапептида , пептидное содержание которого по измерени м методом поглощени ультрафиолетовых лучей составл ет 81,6%. Содержание метионина - сульфоксида 4,4%. еоотнощение тирозина - триптофана равно 2,13. Аминокислотный ана,1из: лизин 3,92 (4); гиетидин 1,00 (1); аргинин 3,15 (3); аспарагин 0,99 (1); серин 0.83 (1); глутаминова кислота 1,94 (2); пролин 3,00 (3); глицин 3,05 (3), аланин 1,04 (1); валин 2,92 (3); метнопин 0,79 (1); тирозин 1.83 (2): феннлалапин 0.97 Пример 5. й-Амино - - гидроксипропиоНИЛ - тирозил - серил - метиопил - r;iyтамил - гистидил - фснилаланил - аргинил - трипфтофил - глицил - лизил - пролил - валил - глицил - лизил - лизил - -аргииил - аргинил - проли,т - валил - - лизил - валил - тирозил - пролом -- аспартил - алани,т - глицил - глутамнногзз кислота. 0,600 г (0,142 ммоль) ВОе-D- -амииоокси-р-гидроксипропцон 1л-тирозил-серил - -метионил-Y OBut-глутамил -гистид1 л- -фенилаланил-аргинил-триптофил - глицил-8-ВОе-лизил-пролил-валил - глицил - е-ВОе - лизил - f-BOe - лизил - -аргинил - аргинил - пролил -- валил ---Е-ВОе - лизил - валил - OBut - ттгрозил - пролил - р - OBut - аспартнл - -аланил - глицил - - глхтамнл - -OBut-3Hei раствор ют в смеси из 4,8 мл трифторуксусной кислоты 0,6 мл воды и 0,6 мл анизола. Раствор оставл ют в течение 1 час при комнатной температуре, а затем добавл ют 60 мл эфира. Выпавший осадок отфильтровывают , промывают эфиром и над н тиокисью фосфора ц гидроокисью кали в вакууме . Трифторацетат замещенного октакозапептида получают с выходом 0,533 г (86,5%). еырой Трифторацетат раствор ют в 10 м,т воды и пропускают через колонку с Дауэкс 1X8 в ацетатной форме. Полученный раствор, содержащий ацетат замещенного октакозапептида , наноситс на заполненную ионообменной смолой марки Ватман еМ-52 колонку и элюируетс аммонийацетатным буфером линейным буферным гpaдиeнтo t, (0,01 М, рН 4,5; 0,4 Л1. рН 6,7). Фракции, содержащие целевое вещество , собирают и лиофилизируют. Получают 0,250 г (43%) октакозапептида, содержащего 81,0% пептида, еодержание мет юнцнсульфоксида 4,4%. еоотнощение тирозина - тринтофана состав,1 ет 2,05. Аминокислотный анализ: лизин 3,76 (4); гиетидин 0,8 (1); аргинин 3,05 (3); аснарагин 1,00 (1); серин 0,73 (1); глутаминова кислота 1,94 (2); пролин 3,00 (3); глищш 2,95 (3): аланнн 1,05 (1), валин 2,82 (3): метнонип 0,78 (1); тирозин 1,6 (2); фенилаланин 0,83 (1). П р и М е р 6. D-a-Аминоокси - (З-гидроксипропионил - гнрози,1 - серил --- lelпoнIIл- -глутамил - гистидил - фенилаланил - - аргинил - триптофил - глицил - лизил-
-пролил - валил - глицил - лизил - лизил - аргинил - аргинил - пролил - валил - лизил-валил-тирозил-пролил-аспарагинил-глицил - аланин - глутамил - аспартил - глутамил - серил - аланин.
1,00 г (0,214 ммоль) т/ ег-бутилоксикарбоиил - D-a-аминоокси - (3 - гидрокси - пропионил - тирозил - серил - метионил -
-YOBut - глутамил - гистидил - фенилаланил - аргинил - триптофил - глицил -
-8-ВОС - лизил - пролил - валил - глнцил - g-BOC - лизил - S-BOC - лизил -
-аргинил - аргинил - пролил - валил -
-е-ВОС - лизил - валил - OBut - тирозил - пролил - р - OBut - аспартил-глицил - аланил - Y - OBut - глутамипил -
-OBut - аспартил - OBut - асиартил - Y - OBut - глутамил - серил - аланил -
-OBut-3HCI раствор ют в смеси из 8 мл трифторуксусной кислоты, 1 мл воды и 1 мл анизола. Раствор при комнатной температуре оставл ют на 1 час, а затем разбавл ют 200 мл эфира. Выделившийс осадок отфильтровывают , промывают эфиром и сушат в вакууме над п тиокисью фосфора и гидроокисью кали . Трифторацетат замещенного дотриаконтапептида получают с выходом 0,90 г (88%).
Сырой Трифторацетат раствор ют в 20 мл воды и пропускают через колонку с Дауэкс 1X8 в ацетатной форме. Полученный раствор, содержащий ацетат замещенного дотрнакоптапептида , наноситс на занолнепную ионообменной смолой Ватман СМ-52 колонку.
Разделение провод т при помощи линейного градиентного элюировани аммонийацетатным буфером (0,01 М, рН 4,5; 0,4 М, рН 6,7). Фракции, содержащие целевое вещество, собирают и лиофилизуют. Пол)чают 0,46 г (46%) дотриаконтаиептида.
12
Предмет изобретени
Claims (6)
1.Способ получени пептидов с последовательностью АКТГ-человека, содержащих в N-конечном положении сс-аминооксикислоту, отличающийс тем, что, от пептидов последовательности от АКТГ- до , содержащих в N-конечном положении сс-аминооксикислоту и вместо р да аминокислот природного человеческого АКТГ другие аминокислоты и защищенных по N-конечной аминооксигрунпе и аминогруппам боковых цепей, а также но конечной карбоксильной группе и карбоксильным группам боковых цепей, отщепл ют защитные группы, и полученные соединени перевод т в соли или комплексы известным способом.
2.Способ по п. 1, отличающийс тем, что в качестве N-конечпой аминооксикислоты используют аминооксиуксусную кислоту или D- или /,-а-аминооксинропионовую кислоту или D- или L-a-аминоокси-р-оксипропионовую кислоту.
3.Способ по п. 1, отличающийс тем, что в качестве исходного вещества используют пептид, в котором аспарагин в 25 положении замещен аспарагиновой кислотой или глицин в 26 положении замещен на Ala, или аланин в 27 положении замещен на глицин.
4.Способ по пп. 1-3, отличающийс тем, что в качестве исходного вещества используют пептид, в котором аминоокси и аминогруппы защищены г/5ег-бутилоксикарбопильной группой, и карбоксильные группы защищены г/рег-бутильной грунпой.
5.Способ но п. 4, отличающийс тем, что защитные группы удал ют ацидолизом.
6.Способ по пн. 4 и 5, отличающийс тем, что защитные группы отщепл ют трифторуксуспой кислотой.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HURI480A HU167655B (ru) | 1972-08-18 | 1972-08-18 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU490284A3 true SU490284A3 (ru) | 1975-10-30 |
Family
ID=11000901
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU731963873A SU490284A3 (ru) | 1972-08-18 | 1973-08-17 | Способ получени пептидов с последовательностью актг-человека,содержащих в -конечном положении аминооксикислоту |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US3873510A (ru) |
JP (1) | JPS532866B2 (ru) |
AT (1) | AT340070B (ru) |
AU (1) | AU472380B2 (ru) |
BE (1) | BE803728A (ru) |
CA (1) | CA1005051A (ru) |
CH (1) | CH590212A5 (ru) |
CS (1) | CS171183B2 (ru) |
DD (1) | DD109969A5 (ru) |
DE (1) | DE2341775C3 (ru) |
ES (1) | ES417951A1 (ru) |
FR (1) | FR2196174B1 (ru) |
GB (1) | GB1416214A (ru) |
HU (1) | HU167655B (ru) |
IL (1) | IL42973A (ru) |
NL (1) | NL7311407A (ru) |
RO (1) | RO70609B (ru) |
SE (1) | SE408299B (ru) |
SU (1) | SU490284A3 (ru) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4071510A (en) * | 1974-12-16 | 1978-01-31 | Lars Ake Ingemar Carlsson | Peptides having a high adrenocorticotropic effect and a method of producing the same |
HU175151B (hu) * | 1976-12-24 | 1980-05-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Sposob poluchenija peptidov s aktivnost'ju tipa gastrina soderzhashchie fenilglicin |
HU175152B (hu) * | 1976-12-30 | 1980-05-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Sposob poluchenija peptidov s gastrin-aktivnost'ju, soderzhahhikh amino-oksi-kisloty |
JPS61186691U (ru) * | 1985-05-15 | 1986-11-20 | ||
IT1204434B (it) * | 1986-01-15 | 1989-03-01 | Alfio Bertolini | Composizioni farmaceutiche comprendenti frammenti di acth per il trattamento terapeutico degli stati di shock e dell'insufficienza respiratoria e cardiocircolatoria |
-
1972
- 1972-08-18 HU HURI480A patent/HU167655B/hu unknown
-
1973
- 1973-08-10 CH CH1154673A patent/CH590212A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-08-13 AT AT706273A patent/AT340070B/de not_active IP Right Cessation
- 1973-08-14 CA CA178,753A patent/CA1005051A/en not_active Expired
- 1973-08-14 IL IL42973A patent/IL42973A/en unknown
- 1973-08-14 AU AU59204/73A patent/AU472380B2/en not_active Expired
- 1973-08-15 GB GB3859973A patent/GB1416214A/en not_active Expired
- 1973-08-15 US US388546A patent/US3873510A/en not_active Expired - Lifetime
- 1973-08-16 CS CS5784A patent/CS171183B2/cs unknown
- 1973-08-16 SE SE7311207A patent/SE408299B/xx unknown
- 1973-08-17 NL NL7311407A patent/NL7311407A/xx not_active Application Discontinuation
- 1973-08-17 DE DE2341775A patent/DE2341775C3/de not_active Expired
- 1973-08-17 JP JP9232473A patent/JPS532866B2/ja not_active Expired
- 1973-08-17 DD DD172966A patent/DD109969A5/xx unknown
- 1973-08-17 FR FR7330091A patent/FR2196174B1/fr not_active Expired
- 1973-08-17 SU SU731963873A patent/SU490284A3/ru active
- 1973-08-17 ES ES417951A patent/ES417951A1/es not_active Expired
- 1973-08-17 BE BE134685A patent/BE803728A/xx unknown
- 1973-08-18 RO RO75832A patent/RO70609B/ro unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU5920473A (en) | 1975-02-20 |
DE2341775B2 (de) | 1980-04-24 |
JPS532866B2 (ru) | 1978-02-01 |
CH590212A5 (ru) | 1977-07-29 |
CA1005051A (en) | 1977-02-08 |
DE2341775C3 (de) | 1980-12-18 |
FR2196174B1 (ru) | 1976-10-22 |
GB1416214A (en) | 1975-12-03 |
ATA706273A (de) | 1977-03-15 |
IL42973A0 (en) | 1973-11-28 |
NL7311407A (ru) | 1974-02-20 |
ES417951A1 (es) | 1976-03-16 |
JPS49132074A (ru) | 1974-12-18 |
HU167655B (ru) | 1975-11-28 |
IL42973A (en) | 1977-06-30 |
US3873510A (en) | 1975-03-25 |
AU472380B2 (en) | 1976-05-20 |
RO70609B (ro) | 1984-03-31 |
DE2341775A1 (de) | 1974-02-28 |
SE408299B (sv) | 1979-06-05 |
AT340070B (de) | 1977-11-25 |
BE803728A (fr) | 1973-12-17 |
CS171183B2 (ru) | 1976-10-29 |
DD109969A5 (ru) | 1974-11-20 |
RO70609A (ro) | 1984-03-15 |
FR2196174A1 (ru) | 1974-03-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU700060A3 (ru) | Способ получени пептидов или их солей | |
US4029642A (en) | Process for the manufacture of human insulin | |
SU490284A3 (ru) | Способ получени пептидов с последовательностью актг-человека,содержащих в -конечном положении аминооксикислоту | |
US3917578A (en) | Process for producing somatostatin and intermediates | |
GB2127830A (en) | Amides of tripeptides and tetrapeptides | |
US3853845A (en) | 5-n-aminoacyl-5-aminouridines | |
Otsuka et al. | The syntheses of peptides related to the N-terminal structure of corticotropin. VII. The synthesis of peptide derivatives corresponding to positions 11 to 18 in the corticotropin molecule | |
JPH02292245A (ja) | 保護されたアミノ酸及びその製造方法 | |
Sakakibara et al. | The trifluoroacetate method of peptide synthesis. II. An improved synthesis of bradykinin | |
US3870694A (en) | Peptide synthesis with n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide | |
JPS60226898A (ja) | 新規ゴナドリベリン誘導体およびその製造方法 | |
Pellegrini et al. | Pepsin‐catalyzed peptide synthesis | |
US4038282A (en) | Pyridyl-4-methyl-succinimidocarbonate and process for its preparation | |
FI56830C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av asparaginylgrupper innehaollande biologiskt aktiva polypeptider | |
Ariyoshi et al. | The synthesis of a sweet peptide, α-l-aspartyl-l-phenylalanine methyl ester, without the use of protecting groups | |
SE461042B (sv) | Peptider med tillvaextbefraemjande aktivitet jaemte veterinaera kompositioner innehaallande naemnda peptider | |
US3966701A (en) | Fibrinogen peptide derivatives | |
US3247178A (en) | Synthesis of peptides containing alpha, omega-diamino acids protected by phthalyl and t-butyloxycarbonyl groups | |
HU221619B1 (hu) | Eljárás peptidek előállítására és intermedierek | |
US3780015A (en) | Process for preparing lysine containing peptides | |
US4172130A (en) | α-AMINOACYL CONTAINING NEW PEPTIDES WITH GASTRIN EFFECTS AND A PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF | |
US3247180A (en) | Nonadecapeptides and intermediates for the preparation thereof | |
Schattenkerk et al. | Studies on polypeptides xiv synthesis of possible rennin substrates | |
SE464814B (sv) | Gonadoliberinderivat innehaallande en beta-aspartylgrupp, ett foerfarande foer framstaellning daerav och farmaceutiska preparat innehaallande desamma | |
US3812091A (en) | D-analogs of secretin |