SU358360A1 - - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к производству ферментных препаратов, в частности к способу получени  литических ферментов.

Известен способ получени  литических ферментов путем выращивани  их продуцентов на питательной среде.

В предлагаемом способе используют Actinomyces cellulosae, что повышает активность ферментов.

Дл  получени  литических ферментов целесообразно использовать штамм Actinomyces cellulosae № 41.

В качестве питательной среды можно использовать питательную среду следующего состава (в %): глюкоза 0,25; крахмал 0,7; отруби пшеничные 0,7; дрожжи пекарские (по сухому весу) 1,0; кукурузный экстракт (по сухому весу) 0,5; мел 0,5; двузамещенный сернокислый аммоний 0,3 при рН равном 7,0.

Способ заключаетс  в следующем.

Пример. Посевной материал выращивают в колбах емкостью 750 мл на качалке в течение 1-2 суток. Посевной материал внос т в среду в количестве 4% от общего объема среды . Состав посевной среды и среды дл  культивировани  актиномицета следующий (в %): глюкоза 0,25; крахмал 0,7; отруби пщеничные (измельченные) 0,7; дрожжи пекарские (по сухому весу) 1,0; двузамещенный сернокислый аммоний (NH4)2SO4 0,3, кукурузный экстракт (по сухому весу) 0,5, мел 0,5, рН после стерилизации должен быть равен 7,0, температура выращивани  27-28°, аэраци  1-2 объема воздуха на 1 объем среды в минуту, скорость вращени  мещалки 300-400 об/мин. длительность культивировани  4 суток.

Культуральна  жидкость, полученна  после отделени  мицели , способна полностью раствор ть вещества клеточных стенок дрожжей, в том числе трудногидролизуемый дрожжевой глюкан клеточных стенок с образованием восстанавливающих Сахаров, среди которых преобладает глюкоза.

1 мл культуральной жидкости, разведенной в 15 раз, за 1 час при 40°С, рН 7,5-8,0 в 1,5 мл инкубационной смеси способен лизировать 20% прогретых при 100° в течение 10 мин дрожжей Saccharomyces cerevisiae, когда их концентраци  в инкубационной смеси составл ет 0,20% (по весу сухого вещества ). Дрожжи выращивают на сусле 7,5 Балл в течение 17 час.

мл неразведенной культуральной жидкости за то же врем  и в тех же услови х лизирует прогретые дрожжи S. cerevisiae при Candida guilliermondii за 2 час на 90%.

1 мл перазведенной культуральной жидкости нредлагаемого актиномицета способен в тех же услови х расщепить 25% клеток живых дрожжей за 4 час и 90% клеток живых дрожжей за 1 сутки.

Сухой препарат лизирующих ферментов может быть получен путем осаждени  ферментов четырьм  объемами этилового спирта, двум  объемами ацетона или сернокислым аммонием при 80% насыщени .

В процессе получени  сухого препарата наименьша  инактиваци  (на 10-15%) наблюдаетс  в случае осаждени  сернокислым аммонием .

Культурно-морфологическа  характеристика Actinomyces cellulosae штамма 41 на 10-е сутки роста.

На агаре Ваксмана и на синтетической среде СР 1сглюкозой. Воздушный мицелий очень скудный, белесый (д )-обозначени  окраски - по «Шкале цветов Бондарцева, 1954, собственный мицелий светло-оливково-серый (н1), пигмента нет, колонии округлые, уплош,енные, слегка фестончатые.

На синтетической среде СР 1 с крахмалом. Воздушный мицелий мучнистый бледно-розоватый (а5), субстратный мицелий палевый (о4), пигмента нет.

На кукурузный среде № 2. Воздушный мицелий палевый (о4), субстратный мицелий оливковый (н1), пигмент буроватый.

На овс ной среде. Воздушный мицелий скудный, белесый (д1), субстратный мицелий сливковый (п1), пигмент буроватый.

На среде Г аузе № 2. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий коричневый (в7), пигмент светло-буроватый.

Спороносцы пр мые, искривленные, споры круглые и овальные.

Физиолого-биохимические свойства А. cellulosae штамма 41. Не образует меланоидного пигмента. Гидролизует крахмал (зоны гидролиза - 19 мм). Использует в качестве единственных источников углерода: глюкозу, ксилозу , арабинозу, маннит и фруктозу. Не потребл ет: рамнозу, сахарозу, рафинозу и инозит .

Штамм синтезирует в глубинных услови х систему ферментов, состо шую из р-1,3-

глюканазы, протеиназы и хитиназы.

Нредмет изобретени 

Claims (3)

1.Способ получени  литических ферментов путем вырашивани  их продуцентов на питательной среде, отличающийс  тем, что, с целью повышени  активности ферментов, в качестве продуцентов используют Actinomyces cellulosae.

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что используют штамм Actinomyces cellulosae

Л-Ь 41.

3.Способ по пп. 1 и 2, отличающийс  тем, что используют питательную среду следуюшего состава (в %): глюкоза 0,25; крахмал 0,7;

отруби пшеничные 0,7; дрожжи пекарские (по сухому весу) 1,0; кукурузный экстракт (по сухому весу) 0,5; мел 0,5; двузамешенный сернокислый аммоний 0,3 при рН равном 7,0.