SU775124A1 - Штамм -68-продуцент леваназы - Google Patents

Description

Союз Советских Социалистических Республик

Государственный комитет СССР ло делам изобретении н открытий

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву- (22) Заявлено 30.01.79 (21) 2721429/28-13 с присоединением заявки № - (23) Приоритет -

Опубликовано 30.10,80. Бюллетень № 40

Дата опубликования описания 30.10J80 <.»775124 (51 )М. Кл.³

С 12 К 1/02

С 12 0 13/10 (53) УДК 577.15 (088.8) »ПТЕ (72) Авторы изобретения (71) Заявители

Т.И. Баранова, А.А. Бенкен, М.С. Лойцянская, Л.К. Хацкевич и В.И. Элисашвили

Ленинградский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени Государственный университет им. А.А. Жданова и Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (54) ШТАММ ГРИБА FUSARIUM SO IAN 1-68 ПРОДУЦЕНТ ЛЕВАНАЗЫ

Известны различные штаммы микроорганизмов, у которых обнаружена фруктоэаназная активность. Ферменты проявляли специфичность по отношению к инулину и левану. Продуктами гид- 5 ролиза этих полисахаридов были фруктоза, леванбиоза, левантриоза, левантетраоза, а также олигосахара более высокого молекулярного веса.

Известен штамм Streptomyces grI seus - продуцент леваназы, который после выращивания микроорганизмов в течение трех дней на качалке в .среде, содержащей щелочной гидролизат соевой муки - 1%, дрожжевой экстракт - 15

0,1%, КН2РО4 - 0,1%, леван в концентрации 1% и культивировании при температуре 37®С продуцирует леваназу, которая разлагает леван на фруктору, леванбиоэу и ряд олигосахаридов. Вы- 20 ход фермента не указан?

Целью изобретения является выделение штамма гриба - продуцента леваназы, отвечающего производственным тре-25 бованиям получения ферментных препаратов : высокой леванозной активностью, высокой интенсивностью размножения, возможностью культивирования на простых питательных средах при использо-, 3Q вании обычного микробиологического оборудования.

Штамм гриба Fusarium solanl-68 выделен в Красноярском крае в 1973 г. из пораженных гнилью тканей всходов пшеницы. Штамм зарегистрирован в кол*« ’< лекции Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений, коллекционный номер 135.

Морфологические и культуральные признаки штамма.

На агаризованной среде Чапека на шестые сутки при температуре 18-20® колонии гриба достигают в диаметре

3-4 см. Воздушный мицелий беловатый (по шкале А.С. Бондарцева, 1954, -д-1), войлочный.

Обратная сторона колоний со слабой синевато-зеленоватой (6-2) пигментацией. Спороношение обильное, первоначально преимущественно в мицелии : микро- и макроконидии.

Макроконидии с тремя перегородками 22,4-33,6 х 5,6-7,0 мкм. Микроконидии от 3 до 6 мкм. Хламидоспоры единичные, конечные или промежуточные. На 15-20 сутки под воздушным мицелием образуются синевато-зеленоватые спородохии.

На картофельном агаре на шестые сутки колонии достигают 3,5-4,5 см в диаметре. Воздушный мицелий беловатый. Колонии рыхлые, слегка порошащие. Обратная сторона колоний без пигментации. На пятнадцатые сутки , спороношение обильное, преимущественно ⁵ микроконидии.' Макроконидии с тремя перегородками, несколько дпинее и ^тоньше, чем на агаре Чапека 28,0-

39,4 х 4,2-5,6 мкм. Хламидоспоры .

единичные. ·

На зернах риса (по Райло, 1950) окраска культуры серовато-розово-лиловая. Спороношение слабое.

Отношение к источнику углерода. Гриб хорошо усваивает глюкозу, саха- 15 розу, лактозу, крахмал, хуже - целлюлозу. Спородохии обильнее всего образуются на средах с лактозой.

Отношение к источнику азота. Гриб почти одинаково успешно использует 20 источники аммонийного и нитратного азота (азотнокислый аммоний и азотнокислый' натрий), а также мочевину. Под воздействием гриба среды с азотнокислым аммонием или мочевиной при- je обретают розовато-фиолетовую (Н-4) пигментацию.

Штамм продуцирует леваназу во время культивирования гриба в питательной среде, содержащей леван.

Пример. Культуру F. solani-68 выращивают на первом этапе в пробирке со скошенной средой следующего состава, %: агар-агар 2,0, пивное сусло крепостью 8° Баллинга.

Для синтеза леваназы гриб выращивали при температуре 25 или 30°С в питательной среде, содержащей, %: леван 0,8; КС€ 0,62; Na₄HPO₄0,25J пептон 0,2; дрожжевой экстракт 0,3. Среды стерилизовали при 1 атм в течение 30 мин, растворы левана стерилизовали отдельно путем дробной стерилизации при нейтральном значении pH и добавляли в питательные среды перед постановкой опыта. Культивирование производили в течение двух суток в колбах емкостью 0,5 л на качалке или в 1 л питательной среды с стеклянных сосудах для глубинного культивирования микроорганизмов. Посев в эти питательные среды производили водной суспензией культуры, полученной на первом этапе.

Активность готовой культуры составляет 11-15 единиц леваназы в 1 мл культуральной-жидкости (за единицу леваназной активности принято количество фермента, которое катализирует уменьшение оптической плотности реакционной смеси на 0,01 при 450 нм за 1 мин инкубации при следующих , условиях: концентрация левана в реакционной системе 6,7-7,0 мг/мл, используется 0,05 М фосфатный буфер с pH 6,0, температура инкубирования 40°). Выделение препарата леваназы из куль

5S туральной жидкости производили после отделения от нее биомассы гриба. Для этого к культуральной жидкости добавляли сульфат аммония до 80% насыщения и выпавшие осадки отделяли центрифугированием.

Штамм Fusarium solani-68 - может найти применение для получения леванаэы-фермента, гидролизующего полисахариды леван и инулин. Продукт гидролитического действия леваназыфруктоэа используется в пищевой промышленности, в медицине и научных исследованиях. Леванаэа может быть использована для профилактики зубного кариеса, так как она гидролизует полисахариды, содержащиеся в зубных бляшках. Фермент может быть использован для исследования структуры полисахаридов .

Claims (1)

1. Известны различные штаммы микроорганизмов , у которых обнаружена фруктозаназна  активность. Ферменты про вл ли спегщфичность по отношению к инулину и левану. Продуктами гидролиза этих полисахаридов были фруктоза , леванбиоза, левантриоза, леваатетраоза , а также олигосахара более высокого молекул рного веса. Известен штамм Streptomuces griseus - продуцент леваназы, который после выращивани  микроорганизмов в течение трех дней на качалке в реде содержащей щелочной гидролизат соевой муки - 1%, дрожжевой экстракт 0 ,1%, KHnPO j - 0,1%, леван в концент рации 1% и культивировании при температуре продуцирует леваназу, котора  разлагает леван на фруктору, леванбиозу и р д олигосахаридов. Выход фермента не указан. Целью изобретени   вл етс  вьвделе ние штамма гриба - продуцента левана зы, отвечающего производственным тре бовани м получени  ферментных препаратов: высокой леванозной активность высокой интенсивностью размножени , возможностью культивировани  на прос тых питательных средах при использо-, вании обычного микробиологического оборудовани . Штамм гриба Fusarium so anI-68 выделен в Красно рском крае в 1973 г. из пораженных гнилью тканей всходов пшеницы. Штамм зарегистрирован в кол лекции Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений, коллекционный номер 135, Морфологические и культуральные признаки штамма. На агаризованной среде Чапека на шестые сутки при температуре 18-20 колонии гриба достигают в диаметре 3-4 см. Воздушный мицелий беловатый (по шкале А.С. Бондарцева, 1954, -д-1), войлочный. Обратна  сторона колоний со слабой синевато-зеленоватой (6-2) пигментацией . Спороношение обильное, первоначально преимущественно в мицелии : микро- и макроконидии. Макроконидии с трем  перегородками 22,4-33,6 X 5,6-7,0 мкм. Микроконидии от 3 до 6 мкм. Хламидоспоры единичные , конечные или промежуточные . На 15-20 сутки под воздушным мицелием образуютс  синевато-зеленоватые спородохии. На картофельном агаре на шестые сутки к.олонии достигают 3,5-4,5 см в диаметре. Воздушный мицелий беловатый . Колонии рыхлые, слегка порошащие . Обратна  сторона колоний без пигментации. На п тнадцатые сутки спороношение обильное, преимуществен микроконидии. Макроконидии с трем  перегородками, несколько длинее и ;тоньше, чем на агаре Чапека 28,039 ,4 X 4,2-5,6 мкм. Хламидоспоры единичные. На зернах риса (по Райло, 1950) окраска культуры серовато-розово-лилова . Спороношение слабое. Отношение к источнику углерода. Гриб хорошо усваивает глюкозу, саха розу, лактозу, крахмал, хуже - целлю лозу. Спородохии обильнее -всего образуютс  на средах с лактозой. Отношение к источнику азота. Гриб почти одинаково успешно использует источники аммонийного и нитратного азота (азотнокислый аммоний и азотнокислый натрий), а также мочевину. Под воздействием гриба среды с азотнокислым аммонием или мочевиной при обретают розовато-Фиолетовую (Н-4) пигментацию. Штамм продуцирует леваназу во врем  культивировани  гриба в питательной среде, содержащей леван. Пример. Культуру F, so I aniвыращивают на первом этапе в пробир ке со скошенной средой следующего состава, %: агар-агар 2,0, пивное су ло крепостью 8° Баллинга. Дл  синтеза леваназы гриб выращивали при температуре 25 или 30°С в питательной среде, содержащей, %: леван 0,8, КСС 0,62; Ма,НРОд0,25, пептон 0,2{ дрожжевой экстракт 0,3, Среды стерилизовали при 1 атм в течение 30 мин, растворы левана стери лизовали отдельно путем дробной сте рилизации при нейтральном значении рН и добавл ли в питательные среды перед постановкой опыта. Культивирование производили в течение двух суток в колбах емкостью 0,5 л на качалке или в 1 л питательной среды с стекл нных сосудах дл  глубинного культивировани  микроорганизмов, По сев в эти питательньге среды произво дили водной суспензией культуры, полученной на первом этапе. Активность готовой культуры сост л ет 11-15 единиц леваназы в 1 мл культуральнойжидкости (за единицу леваназной активности прин то количество фермента, которое катализиру ет уменьшение оптической плотности реакционной смеси на 0,01 при 450 н за 1 мин инкубации при следующих услови х: концентраци  левана в реа ционной системе 6,7-7,0 мг/мл, испо зуетс  0,05 М фосфатный буфер с рН 6,0, температура инкубировани  ) Выделение препарата леваназы из кул уральной жидкости производили после тделени  от нее биомассы гриба. л  этого к культуральной жидкости обавл ли сульфат аммони  до 80% асыщени  и выпавшие осадки отдел ли ентрифугированием, Штамм Fusarlum solani-68 - может айти применение дл  получени  леваазы-фермента , гидролизуюадего полиахариды леван и инулин. Продукт идролитического действи  леваназыруктоза используетс  в пищевой проышленности , в медицине и научных сследовани х. Леванаэа может быть спользована дл  профилактики зубноо кариеса, так как она гидролизует олисахариды, содержащиес  в зубных л шках. Фермент может быть испольован дл  исследовани  структуры поисахаридов . Формула изобретени  Штамм гриба Fusarium solani-68 продуцент леваназы. Штамм хранитс  в коллекции культур Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений, коллекционный номер 135. Морфологические и культуральные признаки штамма. На агаризованной среде Чапека на шестые сутки при температуре 18-20 колонии гриба достигают в диаметре 3-4 см. Воздушный мицелий беловатый войлочный. Обратна  сторона колонии со слабой синевато-зеленоватой (6-2) пигментацией . Спороношение обильное, первоначал1зно преимущественно в мицелии: микро- и макроконидии. Макроконидии с трем  перегородками 22,4-33,6 X 5,6-7,0 мкм. Микроконидии от 3 до 6 мкм. Хламидоспоры единичные, конечные или промежуточные ,. На 15-30 сутки под воздушным мицелием образуютс  синевато-зеленоватые спородохии. На картофельном агаре на шестые сутки колонии достигают 3,5-4,5 см в диаметре. Воздушный мицелий беловатый . Колонии рыхлые, слегка порошащие . Обратна  сторона колоний без пигментации. На п тнадцатые сутки спороношение обильное, преимущественно микроконидии. Макроконидии с трем  перегородками, несколько длинее и тоньше, чем на агаре Чапека 28,039 ,4 х 4, мкм. Хламидоспоры единичные. На зернах риса окраска культуры серовато-розово-лилова . Спороношени .е слабое. Отношение к источнику углерода. Гриб хорошо усваивает глюкозу, саха 7751246

   розу, лактозу, крахмал, хуже - цел- .гриба среды с азотнокислым аммонием

   люлозу. Спородохии обильнее всегоили мочевиной приобретают розоватообразуютс  на средах с лактозой.фиолетовую (Н-4) пигментацию.

   Отнесение к источнику азота. ГрибШтамм продуцирует фермент леванозу

   почти одинаково успешно используетпри культивировании микроорганизмов

   аммонийные и нитратные формы азота,в питательных средах, содержащих леа также мочевину. Под воздействием ван в качестве источника углерода.