SU271472A1 - Способ выделения ферментного препарата липазы - Google Patents

Description

Изобретение отиоситс  к фермеитной промышленности и представл ет собой способ выделени  ферментных препаратов, например липазы, из сырь  животного происхождени . Препарат может быть использован как реактив дл  исследовательских работ.

Уже известен способ получени  иреиарата липазы из сухой, обезжиренной и измельченной поджелудочной железы свиней.

Липазу получают экстрагированием измельченной обезжирениой и высушенной ацетоном железы с последуюи им удалением балластных белков и осаждение.м липазы путем многократного высаливани  сульфатом аммони  и дальнейшей сушкой липазы.

Большие объемы реакционных смесей, иолучаюшихс  в результате применени  насыщениого раствора сульфата аммони  в качестве осаждаюшего реагента, а также наличие большого количества слизистых и балластных веществ затрудн ет фильтрацию раствора. Это значительно усложн ет процесс производства липазы и увеличивает его трудоемкость .

Дл  повышени  выхода ферментного препарата предлагаетс  на первой ступени высаливани  резко измен ть рН среды вначале от 6,0 до 9,0 и виовь от 9,0 до 6,0. Осаждаюшнй реагент - сульфат аммони  исиользуют в кристаллическом виде. Очистку лииазы осуществл ют диализом против 0,02 н. ацетатного буфера при рН, равном 5,0.

Предлагаемый способ осуществл ют по следующей технологии.

Сухую измельченную и обезжиренную поджелудочную железу свиней экстрагируют водой в соотношении 1 : 10, затем при перемешивании отдел ют жмых. После этого высаливают балластные белки и осаждают липазу

иутел многократного высаливани  с}льфатом аммони .

При иервой ступени высаливание балластиых белков из экстракта кристаллическим сульфатом аммони  осуществл ют до степени

иасыщени  0,2, при этом резко измен ют рП среды от 6,0 до 9,0 п от 9,0 до 6,0.

После фильтрацти липазу высаливают из фильтрата кристаллическим сульфатом аммони  до степени насыщени  0,5, затем оп ть

фильтруют и раствор ют осадок лииазы в воде в соотношении 1 : 4 к весу осадка.

Высаливание балластных белков кристаллическим сульфатом аммони  до степени насыщени  0,2 осуществл ют на следующей ступени и фильтруют.

Затем лппазу высаливают из фильтрата кристаллическим сульфатом аммони  до степени насыщени  0,45, фильтруют и раствор ют осадок лииазы в воде в объеме 1 ; 4 с

& соотношении 1 : 0,4 соответственно к весу осадка.

После этого липазу осаждают ацетоном при - 12°С до концентрации 46%, отстаивают при темиературе -12°С, фильтруют и раствор ют осадок лнпазы в воде в соотношении 1 : 10 к весу осадка ирн рН 7,6.

Затем осуществл ют диализ раствора линазы против 0,02 н. ацетатного буфера при рН 5,0 в теченне 48 час н лиофильную сушку лниазы.

Пример. 50 е сухой, измельченной н обезжиренной поджелудочной железы свиней экстрагируют в 500 мл воды в течение 2 час при неремешиваннн и отдел ют . Затем измер ют объем нолученного экстракта и высаливают балластные белкн до стеиени насыщени  0,2 кристаллическим сульфатом аммони . Дл  .коагул ции балластных белков производ т быструю смену рН раствора, увеличива  его от 6,0 до 9,0 добавлением аммиака и затем резко снижа  от 9,0 до 6,0 нодкнсленнем 50%-ным раствором серной кислоты . Балластные белкн отдел ют фильтрацией . Из фильтрата липазу осаждают кристаллическим сульфатом аммони  до стененн насыщени  0,5 и отдел ют фильтрацией под вакуумом. Полученный осадок лнназы раствор ют в 4 об. воды с последующим высаливанием балластных белков кристаллическим сульфатом аммони  до 0,2 насыщени . Балластные вещества удал ют фильтрацней. Из полученного фильтрата вновь осаждают липазу кристаллическим сульфатом аммони  до 0,45 насыщени  и отфильтровывают под вакуумом . Осадок линазы раствор ют в 4 об. воды с добавлением 0,4 об. ( к весу осадка)

1 М раствора сульфата аммони . Осаждение лнназы нз раствора производ т ацетоном при температуре -12°С и 46%-ном насыщении. После 30-мииутного перемешивани  нри той же температуре осадок липазы отфильтровывают н раствор ют в 10 об. воды, подщелоченной раствором аммиака до рН 7,6. Раствор деализуют против 0,02 и. ацетатиого буфера ири рН 5,0 в течение двух суток и лиофильно высушивают.

Выход лнофнльно высушенного препарата лнпазы 0,15 г.

Активность ирепарата 55000, 83000 (по трибутнрнну).

Предмет изобретени 

Claims (3)

1. Способ выделени  фермеитного иренарата липазы из животиого сырь , например

поджелудочной железы свиньи, путем экстрагировани  измельченной обезжиреиной и высушенной ацетоном железы с иоследующнм удалением балластных белков и осаждением лнназы путем многократного высаливани 

сульфатом аммони , и дальнейшей очисткой линазы, отличающийс  тем, что, с целью новыщенн  выхода ферментного ирепарата, на первой ступени высаливани  резко измен ют рН среды вначале от 6,0 до 9,0 и вновь от

9,0 до 6,0.

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что сульфат аммони  используетс  в кристаллическом виде.

3.Способ по н. 1, отличающийс  тем, что очистку липазы осуществл ют диализом против 0,02 н ацетатного буфера нри рН, равном 5,0.