SU1404513A1

SU1404513A1 - Способ получени овомукоида

Info

Publication number: SU1404513A1
Application number: SU864108343A
Authority: SU
Inventors: Татьяна Александровна Валуева; Любовь Ильясовна Григорьева; Владимир Васильевич Мосолов; Николай Альфредович Платэ; Лев Иванович Валуев; Владимир Александрович Синани; Владимир Владимирович Чупов; Леонид Владимирович Николайчик; Лариса Ивановна Мазур; Виктор Владимирович Николайчик; Валерий Минович Царенков; Галина Брониславовна Храменко; Алла Владимировна Какарека; Владимир Иосифович Ромашкин
Original assignee: Институт биохимии им.А.Н.Баха; МГУ им.М.В.Ломоносова; Минский государственный медицинский институт; Белорусский научно-исследовательский институт переливания крови; Институт нефтехимического синтеза им.А.В.Топчиева
Priority date: 1986-06-20
Filing date: 1986-06-20
Publication date: 1988-06-23

Abstract

Изобретение относитс к биохимии и медицинской промышленности и может быть использовано в препаративной и аналитической биохимии, химии медико-биологических полимеров и в медицине дл извлечени протео- литических ферментов из биологических жидкостей, включа и кровь. Изобретение позвол ет повысить выход овомукоида и степень его очистки до 85-91%, а также расширить спектр ин- гибирующих ферментов, что достигаетс использованием белка утиных иц, смеси 0,5 М водного раствора трихлор- уксусной кислоты и этанола в объемном соотношении 1:1,8-2,3 и добавлением к фильтрату этанола при объемном соотношении этанола и фильтрата 3- 3,5:1. о (О Ф (Л с:

Description

Изобретение относитс к области биохимии и медицинской промышленности , а именно к способу получени ово- мукоида, который вл етс эффектив- ным ингибитором протеолитш:еских ферментов и используетс дл создани биоспецифических сорбентов дл извлечени протеолитических ферментов из различных биологических жидкостей, включа кровь.

Цель изобретени - повьшение выхода и степени чистоты овомукоида, а также расширение спектра ингибируемых ферментов.

Способ состоит в добавлении к белку иц при перемешивании равного объема смеси 0,5 М водного раствора три- хлоруксусной кислоты и органического растворител , отделении образующегос осадка фильтрованием при 0-5°С, добавлении к фильтрату органического растворител , удалении надосадочной жидкости декантированием, диализе осадка против дистиллированной воды и высушивании овомукоида, в качестве органического растворител используют этанол, а в качестве белка иц используют белок утиных иц, причем к белку утиных иц добавл ют смесь 0,5 М вод- ного раствора трихлоруксусной кислоты и этанола в объемном отношении 1;1,8- 2,3, к фильтрйту этанол добавл ют при объемном отношении этанола и фильтрата 3-3,5:1 и высзппивают, высушивание овомукоида провод т лиофильно.

Добавление к белку утиных иц смеси 0,5 М водного раствора трихлорук- -сусной кислоты и этанола в объемном отношении 1:1,8-2,3 приводит к более полному осаждению балластных белков, чем в известном способе. Использовани этанола на последзпощей стадии осаждени овомукоида обеспечивает более полное осаждение и увеличение выхода овомукоида. Об зательным условием полного осаждени овомукоида вл етс наличие в фильтрате вводимой на первой стадии смеси водного раствора трихлоруксусной кислоты и этанола. При этом наиболее оптимальные параметры процесса (по выходу овомукоида и по степени его чистоты) достигаютс только при использовании указанных соотношений . Уменьшение количества вод- ного раствора трихлоруксусной кислоты приводит к увеличению содержани балластных белков в овомукоиде (степень чистоты овомукоида при соотношении.

, Q

5

0 5 о

д г

5

0,5 М водного раствора трихлоруксусной кислоты и этанола 1:2,4 составл ют 82%), а увеличение этого количества до соотношени 1:1,7 приводит к снижению выхода овомукоида до 0,8 г на 100 мл ичного белка.

Уменьшение количества добавл емого к фильтрату этанола также приводит к снижению выхода овомукоида (до 0,7 г на 100 мп ичного белка при объемном отношении этанола и фильтрата 2,9:1), а увеличение количества этанола приводит к его непродуктивному расходу практически без изменени выхода и степени чистоты овомукоида.

В отличие от куриного, получаемьй по предлагаемому способу овомукоид из белка утиных иц содержит два ан- титриптических центра и один антих - мотриптический центр и 1 мг этого овомукоида способен ингибировать активность 1,95 мг трипсина (в том числе человека) и 0,97 мг химотрипси- на. Кроме того, этот овомукоид способен ингибировать активность бактериальной , панкреатической и лейкоцитарной эластазы в количестве до 0,9 мг эластазы на 1 мг овомукоида.

Пример 1, Яйца утки разбивают и отдел ют белки. К 300 мл белка при 20 С и перемешивании добавл ют 300 мл смеси 107,14 мл 0,5 М водного раствора трихлоруксусной кислоты и 192,86 мл этанола (объемное отношение 1:1,8).

После добавлени всего количества смеси реакционную массу перемешивают 30 мин. Выпавший осадок отфильтгровы- вают при О С и отбрасывают. К фильтрату добавл ют 1960 мп этанола (3,5 объема на 1 объем фильтрата) и смесь оставл ют на сутки при 0°С дл полного вьзделени осадка овомукоида. Затем надосадочнзт) жидкость -удал ют декантированием, осадок перенос т в диализньй мешок и диализуют против дистиллированной воды в течение 2 сут. В результате диализа осадок раствор етс , образующийс раствор перенос т из диализного мешка в колбу и лиофильно сушат.

Степень чистоты овомукоида определ ют путем пропускани раствора овомукоида в трис-буфере (рН 8,0), содержаш;ем 0,2 М СаС , через колонку с иммобилизованным на сефарозе трипсином и нахождением количества св занного белка (овомукоида) и белка , прошедшего через колонку (балластные белки). Степень чистоты овому- коида равна 91%, выход 2,68 г, т.е. 0,89 г на 100 мл ичного белка.

П р и м е р 2. Процесс провод т по примеру 1, но используют 300 мп смеси 90,91 мл 0,5 М водного раствора трихлоруксусной кислоты и 209,09 мл этанола (объемное отношение 1:2,3), фильтрование провод т при 5°С и к фильтрату добавл ют 1650 мп этанола (3 объема на объем фильтрата ) .

Степень чистоты овомукоида равна 85%, выход 3,19 г, т.е. 1,06 г на 100 мг ичного белка.

Пример 3. Процесс провод т по примеру , но в качестве исходного сырь используют замороженные при белки утиных иц. Белки размораживают и на 100 МП белков используют 100 МП смеси 35 мп 0,5 М водного раствора трихлоруксусной кислоты и 65 МП этанола (объемное отношение 1:1,86), фильтрование провод т при 5°С и к фильтрату добавл ют 550 мп этанола (3,1 объема на 1 объем фильтрата )-.

Степень чистоты овомукоида равна 87%, выход 0,93 г на 100 мл ичного белка.

Таким образом, предлагаемый способ позвол ет повысить выход овомукоида с 0,65-0,72 до 0,89-1,06 г на 100 мл ичного белка и повысить степень чистоты овомукоида с 80 до 85-91%

Это позвол ет более эффективно использовать исходное сырье (утиные йца) и снизить стоимость как самого овомукоида, так и материалов, синтезированных с его применением (гемо- сорбентов и гемосовместимых полимеров ) ,

Claims

Формула изобретени

5

Способ получени овомукоида, предусматривающий добавление к белку иц при перемешивании равного объема смеси 0,5 М водного раствора трихлоруксусной кислоты и органического растворител , отделение образующегос осадка фильтрованием при 0-5 С, добавление к фильтрату органического растворител , удаление надосадочной жидкости декантированием, диализ осадка против дистиллированной воды и высушивание овомуко1ада, о тличаю- щ и и с тем, что, с целью повышени выхода и степени чистоты овомукоида , а также расширени спектра ин- гибируемых ферментов, в. качестве органического растворител используют этанол, в качестве белка иц используют белок утиных иц, к которому добавл ют смесь 0,5 М водного раствора трихлоруксусной кислоты и этанола в объемном отношении 1:1,8-2,3, а к фильтрату этанол добавл ют при объем- . ном отношении этанол:фильтрат 3-3,5:1 и высушивание овом коида провод т лиофильно.

0

5

0

5