SU1694647A1 - Штамм бактерий BacILLUS вRеVIS - продуцент рестриктазы В @ 12 I - Google Patents
Штамм бактерий BacILLUS вRеVIS - продуцент рестриктазы В @ 12 I Download PDFInfo
- Publication number
- SU1694647A1 SU1694647A1 SU904783329A SU4783329A SU1694647A1 SU 1694647 A1 SU1694647 A1 SU 1694647A1 SU 904783329 A SU904783329 A SU 904783329A SU 4783329 A SU4783329 A SU 4783329A SU 1694647 A1 SU1694647 A1 SU 1694647A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- restriction enzyme
- enzyme
- bbv
- yield
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и генной инженерии. Цель изобретени - вы вление штамма Bacillus brevis, синтезирующего рестриктазу Bbv 12 I, способную узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов 5 - G(A/T) GC (А/Т)С - 3 с более высоким выходом фермента . Предлагаемый штамм выделен в результате систематического поиска штаммов - продуцентов рестриктаз и хра- нитс чво ВКПМ ВНИИгенетика под регистрационным номером В-4906. Штамм продуцирует рестриктазу Bbv 12 I, имеющую сайт узнавани , идентичный рестрик- тазе Hgl A I, и может полностью заменить известный во всех генно-инженерных работах . Преимуществом предлагаемого штамма вл етс повышение выхода целевого фермента, вдвое большего чем у известного штамма. Выход фермента Bbv 12 (составл ет 6000ед./гсырой биомассы. Штамм неприхотлив к питательным средам. дл определени молекул рных весов фрагментов ДНК. Данна рестриктаза вл етс удобной моделью дл излучени специфичности белок-нуклеиновых взаимодействий. Известен штамм Bacillus brevis - продуцент рестриктазы Bbv II, Однако культивирование штамма трудоемко , выход рестриктазы составл ет 667 ед/r сырой биомассы. Кроме того, рестриктаза , продуцируема этим штаммом, не способна узнавать и расщепл ть послеЁ О ю Јь о &
Description
довательность нуклеотидов б - G(A/T) GC(A/T)C3 .
Наиболее близким к предлагаемому вл етс штамм - продуцент рестриктазы Hgi А 1, узнающей и расщепл ющей последовательность 5 G(A/T)GC(A/T)C-3 . Штамм выращивают на среде, содержащей 1% бактоказитон (Difco), 0,5%-ный дрожжевой экстракт. Культивирование осуществл ют в термостатированных качалках при 30°С.
Недостатками данного штамма (по литературным данным) вл ютс низкий выход фермента, составл ющий 3000 ед/г сырой биомассы, а также требовательность к богатым и дорогосто щим питательным средам (выход биомассы не указан).
Цель изобретени - вы вление штамма Bacillus brevis - продуцента, синтезирующего рестриктазу Bbv 12 I, способную узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов 5 G(A/T)GC(A/T)C-3 с более высоким выходом фермента.
Штамм выделен из бурой окультуренной почвы в результате систематического поиска штаммов - продуцентов эндонукле- аз рестрикции в роде Bacillus и хранитс в ВКПМ под регистрационным номером В- 4906.
Рестриктаза из Bacillus brevis B-4906 названа 12 I согласно общеприн той номенклатуре .
Штамм Bacillus brevis характеризуетс следующими признаками.
Культу рал ьно-морфо логические признаки . На МПА и РА колонии кремовые, пло- ские, гладкие, блест щие. Клетки палочковидные, размеры: длины 1.6 - 2,5 и ширина 0,6 - 0,8 мкм. Образуют эндоспоры овальной формы, расположенные в основном центрально или парацентрально. Отмечаетс некоторое раздувание споранги . Аэробы, температурный оптимум роста 27 - 30°С, растет при РН 7,0 - 9,0.
Физиолого-биохимические свойства. Образует каталазу, протеазу, крахмал не гидролизует, ацетоинотрицательные, нитраты не восстанавливает, в 7%-ном NaCI не растет, кислоту из глюкозы, арабинозы, ксилозы , маннита не образует, утилизирует цитрат. Из источников азота использует пептон и соли аммони .
Предлагаемый штамм в отличие от известного хорошо растет в агаризованной пи- тательной среде отечественного производства, приготовленной на основе 3,7% гидролизата кильки.
Биомасса легко лизируетс лизоцином.
Хранение штамма осуществл ют под вазелиновым маслом или в 30%-ном глицерине при 70°С.
Дл глубиного культивировани Bacillus brevis B-4906 примен ют питательную среду следующего состава, г/л:
Рыбный гидролизат 37 Вода Остальное
Культивирование провод т при 30°С с хорошей аэрацией до достижени фазы замедлени роста. Выход рестриктазы Bbv 12 I 6000 ед/r сырой биомассы. 0 Определ ющие отличи предлагаемого штамма Bacillus brevis следующие:
штамм содержит одну сайт-специфическую рестриктазу Bbv 12 I способную узнавать и расщепл ть нуклеотидную 5 последовательность 5 -G(A/T)GC(A/T)C-31:
продуктивность штамма в 2 раза превосходит по целевому ферменту известный штамм.
Предлагаемый штамм способен к куль- 0 тивированию в недорогой питательной среде отечественного производства.
Пример. Культуру хран т в кос ках под вазелиновым маслом. Перед началом работы клетки пересевают бактериологиче- 5 ской петлей на твердую агаризованную среду (3,7% СПА)./
Чашки Петри помещают в термостат на 30°С.
После 24-часовой инкубации подрос- 0 шие клетки пересевают в колбы со свежей питательной средой, состо щей из 3,7% гидролизата кильки, и помещают в термостат на ночь. Ночную культуру штамма Bacillus brevis засевают в жидкую пита- 5 тельную среду, состо щую из 3,7% рыбного гидролизата, остальное - вода. Культивируют в термостатированных качалках при температуре 30°С при 200 об/мин до достижени фазы замедлени роста. Клетки 0 осаждают центрифугированием при 4°С. Выделение осуществл ют по известной методике Bickle, Pirotta Imber. Выход фермента составл ет 6000 ед/г сырой биомассы. Фермент хранитс при 20°С в глицерине. 5 Полученный штамм обладает следующим преимуществами по сравнению с известным:
содержит сайт-специфическую рестриктазу Bbv12 I с высоким выходом фермента 0 (6000 ед/г вместо 3000 ед/г у известного.
Способен расти на простых недорогих отечественных средах.
Поскольку рестриктаза Bbv 12 I имеет
сайт узнавани , идентичный сайту узнава5 ни Hgl A I, а выход фермента более высок,
то Bbv12 I может заменить известный во
всех генно-инженерных работах.
Claims (1)
- Формула изобретениШтамм бактерий Bacillus brevis ВКПМ В-4906- продуцент рестриктазы Bbv12 I.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904783329A SU1694647A1 (ru) | 1990-01-16 | 1990-01-16 | Штамм бактерий BacILLUS вRеVIS - продуцент рестриктазы В @ 12 I |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904783329A SU1694647A1 (ru) | 1990-01-16 | 1990-01-16 | Штамм бактерий BacILLUS вRеVIS - продуцент рестриктазы В @ 12 I |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1694647A1 true SU1694647A1 (ru) | 1991-11-30 |
Family
ID=21492020
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU904783329A SU1694647A1 (ru) | 1990-01-16 | 1990-01-16 | Штамм бактерий BacILLUS вRеVIS - продуцент рестриктазы В @ 12 I |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1694647A1 (ru) |
-
1990
- 1990-01-16 SU SU904783329A patent/SU1694647A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Matvlenko N.I.. Pachkinov D.M., Kramarov V.M. The recognition sequence of site - specific endonuclease Bbv II from Bacillus BrevisSO. FEBS Letters, 1984, V.177,p.23-26. Brown N.L, Me. Clelland M., Whltehead P.R. Hgl Al: A. restriction endonuclease from Herpetosiphon giganteus HP 1023, Gene, 1980. v.9, p.49-68. Blckle Т.Д., Plrotta V., Imber R. A simple, general procedure for purifying restriction endonucleases. - Nucleic Acids, Res, 1977, v.4. №8, p.2561 -2572. Изобретение относитс к биотехнологии и генной инженерии, в частности к получению штамма, используемого дл получени сайт-специфической эндонуклеа- зы рестрикции (рестриктазы), узнающей и расщепл ющей последовательность нукле- отидов 5 -G(A/T)GC(A/T)C-3 . Рекстриктаза данной специфичности может быть использована дл работ по клонированию, физическому картированию генов, гидролизат ДНК фага Арестриктазой Bbv 12 I может служить удобным маркером * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR940014776A (ko) | 플루라아나제, 이를 제조하는 미생물, 이 플루라나아제의 제조방법과 이의 용도 | |
CN103911315B (zh) | 一株产褐藻胶裂解酶的菌株及其应用 | |
SU1694647A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS вRеVIS - продуцент рестриктазы В @ 12 I | |
CN101137743B (zh) | 能够将XMP转化成GMP并保持与GMP降解有关的基因为失活状态的Escherichia菌株及其使用方法 | |
EP0152235A2 (en) | Process for producing L-phenylalanine and novel microorganisms therefor | |
SU764617A3 (ru) | Способ получени глюкозоизомеразы | |
US4010072A (en) | Process for preparing L-tartaric acid | |
SU1659480A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1 | |
RU2007453C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus sphaericus-продуцент рестриктазы bsh 45 i | |
SU1532583A1 (ru) | Штамм бактерий PaRacoccUS DеNIтRIFIсаNS-продуцент эндонуклеазы рестрикции Р @ 121 | |
RU2021373C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus pumilus, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5` = cctnagc-3` | |
RU2073717C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus schlegelii - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5' - ccnnnnnnn gg-3' | |
RU2500812C1 (ru) | Рекомбинантный штамм бактерий bacillus licheniformis - продуцент термостабильной липазы | |
RU2046142C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus pumilus - продуцент эндонуклеазы рестрикции ври 19 1 | |
RU2110573C1 (ru) | Штамм бактерий photobacterium phosphoreum - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5 - gg (t/c)(ag)cc-3' | |
RU2057806C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-gatnnnnatc-3' | |
RU2266323C2 (ru) | Штамм бактерий sphingobacterium mizutae-32 - продуцент эндонуклеазы рестрикции spmi, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ат'cgat-3' | |
RU2105811C1 (ru) | Штамм бактерии deleya aquamarina - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-gtgcac-3' | |
Iizuka et al. | Synthesis of Fructan and Oligosaccharides by Microbial and Plant Fructosyltransf erasest | |
RU2077577C1 (ru) | Штамм бактерии delcya marina - продуцент щелочной фосфатазы и способ получения щелочной фосфатазы | |
RU2040540C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент сайт - специфическойй эндокуклазы, способной узнать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5'- ct (a/g) (t/c)ag - 3' | |
RU2018533C1 (ru) | Штамм бактерий micrococcus varians, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5′-ttcgaa-3' | |
RU1806192C (ru) | Штамм бактерий VIвRIо наRVеYI - продуцент рестриктазы Vна 464 I | |
RU1806191C (ru) | Штамм бактерий MIcRococcUS SpecIeS - продуцент рестриктазы MSp 20 I | |
RU2053299C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus badius - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-(a/t)ccgg(a/t)-3' |