RU2018533C1 - Штамм бактерий micrococcus varians, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5′-ttcgaa-3' - Google Patents
Штамм бактерий micrococcus varians, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5′-ttcgaa-3' Download PDFInfo
- Publication number
- RU2018533C1 RU2018533C1 SU5054102A RU2018533C1 RU 2018533 C1 RU2018533 C1 RU 2018533C1 SU 5054102 A SU5054102 A SU 5054102A RU 2018533 C1 RU2018533 C1 RU 2018533C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- ttcgaa
- recognizes
- restriction
- splints
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Использование: биотехнология и генная инженерия, может быть использован для работ по клонированию, физическому картированию генов. Сущность изобретения: штамм бактерий Micrococcus varians ВКПМ В-5942 - продуцент рестриктазы Mva 16 1, узнающей и расщепляющей нуклеотидную последовательность 5′-TTCGAA-3' , выделен из морской воды в результате поиска продуцентов рестриктаз, прост в культивировании, не требует специальных многокомпонентных сред, специального освещения и длительного культивирования. Выход фермента составляет 50000 ед/г сырой биомассы, удельная активность целевого фермента 50000 ед/мл. Рестриктаза Mva 16 1 является изошизомером рестриктазы Mla 1 и может заменить последнюю во всех генно-инженерных работах. 1 ил.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии, в частности к получению штамма продуцента эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-TTCGAA-3'.
Эндонуклеаза такой специфичности может быть использована для работ по клонированию, физическому картированию генов. Данная эндонуклеаза является удобной моделью для изучения специфичности белок-нуклеиновых взаимодействий.
Известен штамм бактерий Micrococcus varians-продуцент эндонуклеазы Mva 1, узнающей сайт 5'-CC(A/T)GG-3' [1]. Основным недостатком штамма является его неспособность продуцировать рестриктазу, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5'-TTCGAA-3'.
Известен штамм бактерий Nostoc speci- es, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции Nsp V, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5'-TTCGAA-3' [2] . Основной недостаток штамма - наличие в нем еще четырех эндонуклеаз рестрикции, что значительно усложняет процедуры выделения и очистки целевого фермента.
Наиболее близким к изобретению является штамм бактерии Mastigogladus laminosus - продуцент эндонуклеазы Mla 1, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-TTCGAA-3' [3]. Основными недостатками штамма являются требование специальных многокомпонентных сред, специального освещения, длительность культивирования (выход биомассы составляет 10 г/л за 3 недели выращивания).
Технической задачей изобретения является выявление штамма- продуцента, синтезирующего эндонуклеазу рестрикции, способную узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5'-TTCGAA-3', растущего на обычных питательных средах, традиционном оборудовании и не требующего длительного культивирования.
Поставленная цель достигается получением штамма Micrococcus varians16 ВКПМ В-5942 - продуцента эндонуклеазы рестрикции Mva16 1.
Новый штамм выделен в результате систематического поиска продуцентов эндонуклеаз рестрикции среди морских микроорганизмов.
Штамм депонирован и хранится во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика под номером ВКПМ В-5942.
Фермент назван Mva16 1 согласно общепринятой номенклатуре.
Штамм Micrococcus varians обладает следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки: клетки сферические, размером 0,5-0,7 мкм в диаметре, расположенные одиночно, в парах или группами. Неподвижны, не образуют эндоспор. Хорошо растут на обычных питательных средах (СПА, МПБ) при температуре 35оС. Колонии на СПА желтоватые, слегка выпуклые, округлые, края ровные. Физиолого-биохимические свойства: аэроб, отрицателен по оксидазе. Восстанавливает нитраты, не растет на среде Симмонса, растет при наличии в среде 7,5% NaCl. Гидролизует желатин, крахмал, мочевину.
Хранение штамма осуществляют под вазелиновым маслом или в 30%-ном глицерине при -70оС.
Выход рестриктазы Mva16 1 - 50000 ед/г сырой биомассы. Определяющими отличиями предлагаемого штамма от штамма-прототипа являются возможность роста на обычных питательных средах, не требует специального освещения и длительного культивирования; высокие выход рестриктазы и активность целевого фермента.
В связи с тем, что в известных научно-технических решениях сведений об аналогичном штамме не обнаружено, можно сделать вывод, что предлагаемый штамм отвечает критерию "существенные отличия".
На чертеже представлена электрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фага лямбда-ферментами Mva16 1 и Asu 11(5'-TTCGAA-3').
1-я дорожка-гидролиз Pst 1 (контроль),
2 - дорожка - гидролиз Mva16 1,
3-я дорожка - совместный гидролиз Nva16 1 и Asu 11,
4-я дорожка - гидролиз Asu 11,
5-я дорожка - ДНК фага лямбда (контроль).
2 - дорожка - гидролиз Mva16 1,
3-я дорожка - совместный гидролиз Nva16 1 и Asu 11,
4-я дорожка - гидролиз Asu 11,
5-я дорожка - ДНК фага лямбда (контроль).
П р и м е р 1. Получение биомассы и выделение фермента.
Перед началом работы клетки штамма-продуцента пересевают бактериологической петлей на агаризованную среду. Чашки Петри помещают в термостат на 35оС. После 10-12 инкубации подросшие клетки пересевают в колбы со свежей питательной средой, состоящей из следующих компонентов, г/л: бактотриптон 10, дрожжевой экстракт 5, хлористый натрий 10, и помещают в термостатированную качалку.
Культивируют при 35оС, 200 об/мин до достижения стационарной фазы роста (4-5 ч). Клетки осаждают центрифугированием при 4оС. Выход биомассы за это время культивирования составляет 8 г/л. Выделение осуществляют по методике Bickle, Pirotta, Imber. Выход фермента составляет 50000 ед/г сырой биомассы.
Фермент хранится при -20оС в глицерине.
П р и м е р 2. Определение специфичности и активности фермента.
Специфичность фермента определяют по картине совместного и параллельного гидролиза субстратной ДНК (чертеж). Идентичность картин гидролиза на 2-4-й дорожках говорит о том, что эти ферменты узнают и расщепляют одинаковую последовательность нуклеотидов 5'-TTCGAA-3'.
Выход фермента Mva16 1 определяют по электрофоретической картине гидролиза ДНК фага лямбда. За единицу активности принимают минимальное количество фермента, необходимое для полного расщепления 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 1 ч при температуре 37оС. Выход фермента составляет 50000 ед/г, активность 50000 ед/мл.
Поскольку эндонуклеаза рестрикции Nva16 1 имеет сайт узнавания, идентичный сайту прототипа, а культивирование штамма по нескольким параметрам проще, то Mva16 1 может заменить прототип во всех генно-инженерных работах.
Внедрение штамма планируется в НИКТИ биологически активных веществ НПО "Вектор" в 1992-1993 г.
Claims (1)
- Штамм бактерий Micrococcus varians ВКПМ В-5942, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5' - ТТС G АА-3'.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5054102 RU2018533C1 (ru) | 1992-07-06 | 1992-07-06 | Штамм бактерий micrococcus varians, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5′-ttcgaa-3' |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5054102 RU2018533C1 (ru) | 1992-07-06 | 1992-07-06 | Штамм бактерий micrococcus varians, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5′-ttcgaa-3' |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2018533C1 true RU2018533C1 (ru) | 1994-08-30 |
Family
ID=21609234
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU5054102 RU2018533C1 (ru) | 1992-07-06 | 1992-07-06 | Штамм бактерий micrococcus varians, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5′-ttcgaa-3' |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2018533C1 (ru) |
-
1992
- 1992-07-06 RU SU5054102 patent/RU2018533C1/ru active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
1. Catalog "Biolabs", USA, 1988/1989. * |
2. Reaston J., Duyvesteyn M., de Waard A. Gene.-1982.-v.20. p.103-110. * |
3. Duyvesteyn M., de Waard A. FEBS Letters.-1980. v.111, N 2.-p.423-426 (прототип). * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101883853A (zh) | 具有生产1,4-丁二醇能力的突变体和使用该突变体制备1,4-丁二醇的方法 | |
CN1367244A (zh) | 通过发酵生产l-精氨酸的微生物和方法 | |
Lang et al. | Bioprocess engineering data on the cultivation of marine prokaryotes and fungi | |
RU2018533C1 (ru) | Штамм бактерий micrococcus varians, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5′-ttcgaa-3' | |
RU2500811C1 (ru) | Рекомбинантный штамм бактерий bacillus subtilis - продуцент фосфолипазы с | |
DE69738080T2 (de) | Biokatalysatoren mit amin-acylase aktivität | |
RU1806191C (ru) | Штамм бактерий MIcRococcUS SpecIeS - продуцент рестриктазы MSp 20 I | |
RU2046142C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus pumilus - продуцент эндонуклеазы рестрикции ври 19 1 | |
RU2057806C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-gatnnnnatc-3' | |
RU2110573C1 (ru) | Штамм бактерий photobacterium phosphoreum - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5 - gg (t/c)(ag)cc-3' | |
RU2105811C1 (ru) | Штамм бактерии deleya aquamarina - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-gtgcac-3' | |
RU2021373C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus pumilus, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5` = cctnagc-3` | |
RU2115728C1 (ru) | Штамм бактерии bacillus stearothermophilus - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ggtnacc-3' | |
RU2040540C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент сайт - специфическойй эндокуклазы, способной узнать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5'- ct (a/g) (t/c)ag - 3' | |
RU2054040C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент сайт - специфической эндонуклазы, способной узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5′-ctcttc-3′ | |
SU1694647A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS вRеVIS - продуцент рестриктазы В @ 12 I | |
SU1532583A1 (ru) | Штамм бактерий PaRacoccUS DеNIтRIFIсаNS-продуцент эндонуклеазы рестрикции Р @ 121 | |
RU2073717C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus schlegelii - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5' - ccnnnnnnn gg-3' | |
RU1806192C (ru) | Штамм бактерий VIвRIо наRVеYI - продуцент рестриктазы Vна 464 I | |
RU2053299C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus badius - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-(a/t)ccgg(a/t)-3' | |
SU1659480A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1 | |
RU2135581C1 (ru) | Штамм бактерий streptomyces sp. st-12 - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'- ctgcag -3' | |
CN1121498C (zh) | 巨大芽孢杆菌青霉素g酰化酶的枯草芽孢杆菌表达元件 | |
SU1761804A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS coaGULaNS - продуцент рестриктазы Всо AI | |
RU2077577C1 (ru) | Штамм бактерии delcya marina - продуцент щелочной фосфатазы и способ получения щелочной фосфатазы |