SU1693041A1 - Питательна среда дл культивировани MIcRococcUS LUтеUS ВКПМ В-2836 - продуцента сайт-специфической эндонуклеазы MLU1 - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к биотехнологии и касаетс  получени  сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I, С целью повышени  выхода биомассы и фермента продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I - Micrococcus luteus ВКПМ В- 2836 культивируют на среде, содержащей следующие компоненты, мас.%: гидролизат казеина 1,8-2,0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0; хлористый натрий 0,2-0,3; дистиллированна  вода остальное. Преимущество предлагаемой среды заключаетс  в увеличении выхода биомассы и фермента в 4 раза по сравнению с культивированием на известной питательной среде, при этом выход биомассы достигает 20-24 г сырой биомассы с 1 л среды, а активность фермента - 100-420 тыс. ед/г, 2 ил., 1 табл. сл

Description

Изобретение относитс  к биотехнологии и может быть использовано при получении сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I.

Цель изобретени  - повышение выхода биомассы и фермента.

На фиг. 1 и 2 представлены графики, отображающие рост культур.

Изобретение заключаетс  в том, что в известной питательной среде дл  культивировани  продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I в качестве источника аминного азота используют гидролизат казеина .

В качестве продуцента Сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I используют штамм М. luteus, полученный из Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов ВНИИ генетика, г. Москва, где хранитс  под номером В-2836

Пример 1. Эксперименты с жидкой средой провод т в качалочных колбах Эр- ленмейера вместимостью 750 мл в 100 мл среды при 30°С с качанием 200-220 об/мин. Концентрацию Клеток определ ют по оптической плотности путем измерени  на приборе фотоэлектроколориметр КФК-2 при длине волн 540 нм в кювете толщиной 5,05 мм.

Культуру выращивают на среде следующего состава, мас.%: гидролизат казеина 1,8; дрожжевой экстракт 2,7; хлористый натрий 0,2; дистиллированна  вода остальное. Данна  среда соответствует минимальным концентраци м компонентов (фиг. 1, крива 

1)

Пример 2. Среда содержит мас.%: гидролизат казеина 2,0; дрожжевой экстракт 3,0; хлористый натрий 0,3; дистиллиО Ю СО О

.&.

рованна  вода остальное. Данна  среда соответствует максимальным концентраци м компонентов. Услови  культивировани , как в примере 1. На фиг. 1 рост представлен кривой 2. Как видно по кривым 1 и 2 минимальные и максимальные значени  содержани  компонентов среды показывают идентичные результаты.

Пример 3. Среда с концентрацией компонентов меньше предлагаемой, мас.%: гидролизат казеина 1,5; дрожжевой экстракт 2,5; хлористый натрий 0,1; дистиллированна  вода остальное. Услови  культивировани , как в примере 1. На фиг. 1 рост клеток представлен кривой 3. Как видно по характеру кривой 3, в сравнении с кривыми 1 и 2, снижение концентраций компонентов приводит к уменьшению плотности клеток в конце роста.

Пример 4. Среда с концентрацией компонентов выше предлагаемой, мас.%: гидролизат казеина 2,5; дрожжевой экстракт 3,5; хлористый натрий 0,4; дистилли- рованна  вода остальное. Услови  культивировани , как в примере 1. На фиг. 1 рост клеток представлен кривой 4. По характеру кривой 4 видно что увеличение кон- центраций компонентов среды выше предлагаемого значени  к улучшению роста не приводит, но наблюдаетс  торможение в фазе экспоненциального роста культуры.

Таким образом, предложенные концентрации компонентов  вл ютс  оптимальными .

Пример 5. Совокупность компонентов в предлагаемой среде подобрана по результатам двухэтапного эксперимента.

В таблице представлены данные, подтверждающие , что штамм М. luteus предпочитает в своем развитии гидролизат казеина и дрожжевой экстракт (врем  культивировани  24 ч).

Пример 6, Культивирование провод т в ферментере вместимостью 30 л в 20 л

питательной среды, снабженном автоматической системой регулировани  рН среды, температуры 30°С, воздух 20 л/мин, скорость перемешивани  500 об/мин, на двух

средах - предложенной и известной. Состав предложенной среды, мас.%: гидролизат казеина 1,8; дрожжевой экстракт 2,7; хлори- хтый натрий 0,2; дистиллированна  вида остальное . Состав известной среды, мас.%:

триптон (Dlfco) 1,0; дрожжевой экстракт (Dlfco) 0,5; хлористый натрий 0,5. Пробы отбирали , как указано на фиг. 2. Активность Mlii I определ ли в грубом клеточном экстракте . Как видно по кривым фиг. 2, рост на

предлагаемой среде (крива  5) в 4,6 раз лучше , чем рост на среде прототипа (крива  6), при этом получают 20-24 г сырой биомассы с 1 л среды в той точке (16 опт. ед.), котора  соответствует максимальной активности

фермента 400-420 тыс. ед./г, в то врем  как выход биомассы на известной среде (крива  6) составл ет 7-9 г с 1 л среды и максимальна  активность фермента около 90 тыс. ед./г.

Преимущество предложенной среды заключаетс  в повышении у продуцента выхода биомассы и фермента в 4 раза по сравнению с культивированием на известной среде.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Питательна  среда дл  культивировани  Micrococcus luteus ВКПМ В-2836- продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I, включающа  источник аминного азота , дрожжевой экстракт, хлористый натрий и дистиллированную воду, отличающа с  тем, что, с целью повышени  выхода биомассы и фермента, она содержит в качестве источника аминного азота гидролизат

   казеина при следующем соотношении компонентов , мас.%: гидролизат казеина 1,8- 2,0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0;.хлористый натрий 0,2-0,3; дистиллированна  вода остальное .

   Продолжение таблицы

   Ю 15 20 25 30 35 40 45 SO 55 WC

   Фиг Л

   2 Ц

   6 в Ю 72 W $ 78 Фиг.2

   vac