SU1650699A1 - Фаговый вектор замещени @ К15 дл конструировани библиотек структурных генов к ДНК - Google Patents
Фаговый вектор замещени @ К15 дл конструировани библиотек структурных генов к ДНК Download PDFInfo
- Publication number
- SU1650699A1 SU1650699A1 SU884478259A SU4478259A SU1650699A1 SU 1650699 A1 SU1650699 A1 SU 1650699A1 SU 884478259 A SU884478259 A SU 884478259A SU 4478259 A SU4478259 A SU 4478259A SU 1650699 A1 SU1650699 A1 SU 1650699A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- dna
- phage
- sup
- vector
- hsd
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
- C12N15/73—Expression systems using phage (lambda) regulatory sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии , в частности к генетической инженерии Целью изобретени вл етс создание вектора на основе фагаА-i, сочетающего свойства как экспрессирующих, так и неэкспрессирующих векторов, а также повышение эффективности перевода вс-тзвки в плазмидную и одноцепочечную формы. Способ заключаетс в том. что в вектор ASK 9 встраивают sal 1 фрагмент плазмиды риС4К, в которую встроен Hind III - фрагмент фага А
Description
Изобретение относитс к биотехнологии , в частности к генетической инженерии.
Целью изобретени вл етс уменьшение затрат труда и ускорение генно- инженерных процедур дл получени репрезентативных библиотек структурных генов (кДНК) и их дальнейшего использовани .
ASK15 - фаговый вектор дл конструировани библиотек структурных генов (кДНК) по участкам узнавани рестриктаз Ват 1 и EcoR 1. Вектор можно также использовать дл специального клонировани генов. Размер ASK15 около 51,2 т.п.н. Емкость вектора от 0,2 до 15,4 т.п.н. ASK15 состоит из ДНК фага ASK9, в который введен инактивиро- ванный ген устойчивости к канамицину, вы- щелленный рестриктазой sal 1 из плазмиды pHC4K(Virira I., Messing I, Gene, 1982, v. 19. p. 259-268) размер 1,5 т.п.н., со встроенным в него участком ДНК фага 1 размером
2.0т.п.н, выщепл емый рестриктазой Hind III (23130 н - 25157 н .).
Хоз евами могут служить штаммы Е. coli, используемые при работе с Agt 11, AEMBL 3, AZAP, рИС 18, mp 18 и др., в том числе: LE 392 F1, hsdR 514 (гк, тк), sup E 44, sup F 58, lac Y 10 Z (lac 1 Z.Y) 6, gal K2 gal T22, met В1, trp R55; R 359 hsd RK, hsd МЛ sup F, Ф80, P2. Этот вектор обладает максимальной , известной дл векторов этого класса емкостью и позвол ет получать библиотеки кДНК как по стандартному методу, так и с использованием частичной достройки липких концов без применени метилаз. ASK15 дает возможность перевода вставки в плазмидную и одноцепочечную формы, при этом используетс способ, принципиально отличный от AZAP. Применение этого метода позвол ет перевести вставку в плазмидную форму быстрее (3-4ч), и кроме того, перевод происходит значительно эффективнее и стабильнее. Дл библиотек в
Ё
О- СП
о а ю о
ASK15 гарантированы невозможность неконтролируемого перевода вставки кДНК в фаге Я в одноцепочечную форму. Вектор дает возможность проводить селекцию в поль- зу истинно рекомбинантных фагов перед 5 исходными и фальшивыми рекомбинанта-4 мй. В библиотеках, полученных вА5К15, легко оценить процент рекомбинантных фагов по фенотипу. Селективное давление при конструировании в нем библиотек кДНК на- 10 правлено в отличие от других векторов не в сторону маленьких вставок, а, наоборот, в сторону крупных (2-8 Т.п.н.). кДНК в этом векторе может быть экспрессирована, причем трансл ци может проходить в строго 15 контролируемых услови х при наличии в штамме Е. coll мутации sup С или sup G, sup V, sup В.
Способ конструировани вектора ASK15 заключаетс во введении в фаг ASK9 фраг- 20 мента ДНК размером 3,5 т.п.н., состо щего из инактивированного гена устойчивости к канамицину из pUC 4K со встроенным в него участком ДНК фага Я (участок 23130-25157 н.).
Стади 1. Получение плазмиды р4К4-1 25 ДНК плазмиды pUC 4K гидролизуют ре- стриктааой Hind HI и останавливают реакцию прогреванием 15 мин при 65°С, Затем ДНК фага Я расщепл ют также Hind III и фрагмент размером 2,0 т.п.н. очищают 30 гель-электрофорезом в 0,7%-ной легкоплавкой агарозе (slgma). Очищенный фрагмент смешивают в зквимол рных концентраци х pUC 4K, разрезанной Hind III, и лигируют. Цитированной ДНК трансформируют клет- 35 ки Е. colt штамм j.M.109, которые высевают на L-arap с антибиотиком - ампициллином. С выросших колоний снимают отпечаток на нитроцеллюлозный фильтр и провод т гибридизацию с меченой32Р ДНК фага Я. Из 40 шести гибридизующихс колоний клетки наращивают в 10 мл L-среды с ампициллином и выдел ют ДНК щелочным лизисом. 0,5 мкг ДНК расщепл ют рестриктазами EcoR 1, Bam 1, sal 1, Hind III и анализируют 45 электрофорезом в 1%-ном агарозном геле. Одна из плазмид обладает прогнозируемой рестриктазной картой, одну из них, названную p4KL-1, используют на следующей стадии .50
Стади 2. Конструирование фагаЯдЗКб. ДНК плазмиды p4KL-1 гидролизуют ре- стриктазами EcoR 1 и sal 1 и реакцию останавливают прогреванием 15 мин, при 65°С. ДНК фага ЯдЕ57 расщепл ют рестрйктазой 55 sal 1 и фермент инактивируют прогреванием 15 мин при 65°С. Оба препарата смешивают в эквимол рных соотношени х и лигируют. Лигированную ДНК упаковывают в белки
фага in vitro и полученные фаговые частицы рассевают на газон клеток E.coli штамм LE392. С чашки Петри снимают отпечаток на нитроцеллюлозный фильтр и провод т гибридизацию с меченым32Р фрагментом ДНК pUC4K, содержащим ген устойчивости к канамицину и выщепленным из плазмиды рестрйктазой sal 1. Из шести гибридизующихс бл шек наращивают фаг, выдел ют ДНК и анализируют с помощью рестриктаз EcoR 1, Bam 1 и sal 1. Все фаги содержат инактивированный ген устойчивости к канамицину и один из них (AgSK5) используют дл конструировани ASK15.
Стади 3. Конструирование фага-вектора ASK15.
ДНК фага AEMBL 3 гидролизуют рестрйктазой Ват 1 и вставочный фрагмент размером около 13,7 т п.н очищают гель- электрофорезом в 0,7%-ной легкоплавкой агарозе. ДНК фага ASK5 гидролизуют рестрйктазой Ват 1 и фермент инактивируют прогреванием 15 мин при 65°С. Оба препарата смешивают в эквимол рных соотношени х и лигируют. Лигированную ДНК упаковывают In vitro в белки фага и полученные фаговые частицы рассевают на газон клеток Е. coli штамм LE392. Выросшие бл шки перекалывают на газон клеток Q 359, лизогенных по фагу Р2. Вставочный фрагмент из Л EMBL 3 обеспечивает spl+ фенотип, т.е. невозможность размножатьс на клеткахЕ, coli, лизогенных по фагу Р2. Поэтому из шести бл шек, не выросших на Q 359, наращивают фаг, выдел ют ДНК и анализируют с помощью рестриктаз EcoR 1, Bam 1 и sal 1. Два из них имеют ожидаемую структуру и названы ASK15A и Я5К15В.
Применение ASK15. Фаг вектор ASK15 используют дл получени библиотек кДНК по стандартной методике с использованием EcoR 1 -участка. Дл элиминации нереком- бинантных и фальшивых рекомбинантов рассевают фаги на газон Е, coli Q 359. поскольку ни исходные, ни фаги, содержащие вставку, соединенную с линкером, не будут размножатьс на этих клетках. Фаги, образованные соединением плечей ЯЗК15 с линкером(ами), нежизнеспособны из-за малой длины ДНК на любых штаммах Е. coli. Минимальный размер ДНК, способной давать жизнеспособные частицы фага, 37,7 т.п.н., а размер плечей Я5К15 37,5, т.е. меньше минимального на 0,2 т.п.н., причем сно , что встраивание даже многих копий линкеров не приведет к существенному изменению длины ДНК и образованию жизнеспособных фальшивых рекомбинантов. При этом будет также практически исключено образование частичных рекомбинангов, т.е. фагов, содержащих как исходную вставку, так и вставку кДНК, так как размер А5К15(около51,2т.п.н.)близокк максимальному дл фага А (около 52,9 т.п.н ). Эффективность этого метода повышаетс , если предварительно очистить плечи ASK15 электрофорезом или центрифугированием от вставочного фрагмента. Дл конструировани библиотек кДНК по EcoR 1 участку используют ASK15 не в виде Я фага, а в виде дифазмиды, содержащей только плечи ASK15 и поэтому не способной к эффективной упаковке в белки фага А из-за недостаточной длины. Дл получени дифазмиды расщепл ют ДНКА5К15 рестриктазой EcoR 1 и провод т самолигирование при низкой концентрации ДНК, обеспечивающей образование в основном кольцевых, а не конкатемерных форм Этой ДНК трансформируют клетки Е. coli, не дающие возможности проходить полный лигический цикл фагу А (например, штамм НВ101). Очевидно, что при конструировании библиотеки генов в этой дифазмиде все жизнеспособные фаги будут рекомбинантными. В этой форме ASK15 напоминает векторы-фазмиды ApMYF131 nApSL51.
Однако более удобно использовать ASK15 дл конструировани библиотек кДНК с использованием Ват 1 участка. Дву- цепочечную ДНК синтезируют по обычной методике, однако обрабатывают не EcoR 1, а Ват 1 метилазой (или dam-метилазой). Затек к ней пришивают Ват 1-линкеры и обрабатывают рестриктазой Ват 1 (или МЬо г). ДНК ЯЗК15 гидролизуют одновременно рестриктазами Ват 1 и EcoR 1, После остановки реакции прогреванием 15 мин при 65°С провод т очистку от олигонук ео- тидных линкеров Ват 1 - EcoR 1 осаждением ПЭГ-6000. В результате плечи содержат липкие концы Ват 1, а вставочный фрагмент - EcoR 1 и, таким образом, образование исходного фага при лигирова- нии возможно только за счет остаточных линкеров Ват 1 - EcoR 1, причем эта реакци более высокого пор дка, чем образование рекомбинантного фага. Поэтому при получении библиотеки кДНК по этому методу опускают пассирование библиотеки на Е. coli Q 359.-Ясно, что и в этом случае фальшивые рекомбинанты нежизнеспособны.
Использование участка Ват 1 в ASK15 дл получени библиотек кДНК позвол ет объединить преимущества двух методик - с использованием техники частичной достройки липких концов и конструирование библиотек без применени метилаз. К кДНК
пришиваютс линкеры sal 1 (или Xho 1) без предварительной обработки метилазой Поскольку рестриктаза sal 1 щепит эукариоти- ческую ДНК редко (один участок узнавани
на 50 т.п.н } и преимущественно в регул - торных област х, которые не представлены в кДНК, то последующий гидролиз кДНК рестриктазой sal 1 не приведет к существенному изменению размеров кДНК После
инактивации фермента провод т в соответствующей инкубационной среде частичную достройку липких концов ДНК фрагментом Кленова (или ревертазой) в присутствии d СТР и d TTP ДНК ASK15 гидрслизуют рестриктазами EcoR 1 и Ват 1 и затем провод т частичную достройку липких концов ДНК с помощью фрагмента Кленовэ или ре- вертазы в присутствии d Al Pud GTP 06s препарата смешивают и лигируют, причем
лигирование в данном случае можег юпько в одном направлении кДНК пипюуе с векторной ДНК, так как сзмолигирсаанке и векторной и кДНК невозможно Исгюььзуч стандартные методы, легированную ДНК
упаковывают in vitro в белки фага Я и полученными фаговыми частицами заражают клетки Е coli штамм I E392 Сравнение этой методики с конструированием библиотек кДНКс использованием частичной достройки липких концов в других векторах (. Я5К12 ;.gt18/19;:gt22.AZAP) позвол в сделать вывод, что -ISK15 наибочзе сдобен из них.
Синтез специального линкера ппзг-ол ет обойтись без метилировани кДНК и ее дальнейшее гидролиза рестриктазой, ч го еще больше облегчает конструирование библиотеки. Особенно это удобно при использовании последней схемы, поскольку
отпадает необходимость частичной достройки липких концов.
В ASK 5 можно конструировать и направленные библиотеки кДНК с использованием двух рестриктаз (пары EcoR 1 - Xba
1, sac 1 - Bam 1 и др.
Экспрессию кДНК вЯ5К15 осуществл ют также, как и в других векторах с использованием lac-промотора (Ядт 11, /ISK11, /ZAP ит.д.), однако эффективна трансл ци этой
мРНК может осуществл гьс только в строго контролируемых услови х при наличии (или введении плазмиды, несущей соответствующий ген) в клетках Е. coli мутации sup С и/или sup G, sup В, sup V. Это св зано с
тем, что через 6 триплетов после инициирующего кодона AYG встроен терминирующий кодон YAA (охра), действие которого супрессируетс мутаци ми sup С, supG, sup V, sup В. Таким образом, конструирование
библиотеки кДНК в ASK15 позвол ет избежать неконтролируемой экспрессии кДНК, что приводит к повышению репрезентативности этой библиотеки. Следователь- HO.ASK15 представл ет собой в этом отношении новый тип векторов дл получени библиотек структурных генов(кДНК, поскольку в зависимости от используемого штамма E.-coli он может быть как экспрес- сирующим,та;с и не экспрессирующим и поэтому объедин ет достоинства обоих видов векторов.
При конструировании библиотеки кДНК в ASK15 можно осуществл ть и неконтролируемую экспрессию, как в других экспресси- рующих векторах. Дл этого достаточно в линкер, присоедин емый к кДНК, ввести ко- дон АТС. При этом транслируемый белок практически лишен дополнительных, чужеродных аминокислот.
Вставка кДНК B/ISK15 может быть легко переведена в плазммдную форму. При этом используетс иной принцип, чем в AZAP. ДНК рокомбинанта ASK 12 частично гидро- лизуют рестрикгазой sal 1 (можно примен ть также 1) и инэктивируют фермент .трехкратным замораживанием/оттаиванием . Обе рестриктазы достаточно редко расщепл ют эукариотическую ДНК, причем эти участки сосредоточены в основном в регул - торных област х, которые отсутствуют в кДНК. Затем ДНК разбавл ют и самолиги- руют. Цитированную ДНК ввод т в компетентные клетки Е. coli, которые высевают на L-arap с ампициллином. Выросшие колонии содержат вставку кДНК в плазмидной форме , причем плазмида либо вовсе не содержит нуклеотидных последовательностей фага А (в случае sal 1), либо небольшую их часть (в случае Da 1). Процесс перевода в плазмидную форму быстр (3-4 ч) и эффективен . 0,1 мкг ДНК рекомбинанта дает много сотен и тыс ч колоний. При необходимости дл специальных экспериментов как фаг ASK15, так и его рекомбинанты, могут быть переведены в плазмидную форму и по другому методу, В этом случае достаточно адсорбировать фаг на клетках- E.coll, резистентных к размножению фага А (например , НВ101, j.M.109, Q 359) в течение 5-10 мин при 0-37°С и рассе ть клетки на газон с ампициллином. В этом случае, однако , плазмида содержит и все нуклеотидные последовательности фага А, присутствующие в SK12. С другой стороны, така плазмида может быть легко переведена в форму фага А, что может быть полезно дл специальных целей.
При суперинфекции клеток Е coli, содержащих плазмуду, фагом М 13 ДНК плаз- миды упаковывают в белки фага в одноцепочечной форме, удобной дл секвенировани по известному методу Сэнгера. Другое преимущество ASK15, св занное с тем, что это вектор замещени , заключаетс в том, что при конструировании в нем библиотек кДНК давление отбора направлено
на клонирование более крупных вставок кДНК (2-8 т.п.н.), а не мелких, как во всех других векторах этого класса, вл ющихс векторами включени . Емкость ASK15 - до 15,4т.п.н., что достаточно дл клонировани
полных копий мРГК практически всех генов.
Процент рекомбинантов в библиотеке,
полученной в ASK15, легко определить по
фенотипу, перекалыва бл шки на газон Q
359 или использу двойной газон
LE392/Q359. При перекапывании на газон Q 359 не рекомбинажные фаги не размножаютс , а рекомбинантные размножаютс . Однако перекалывание довольно трудоемкий процесс, а пр мой посев фагов на газон
Q 359 может привести к артефактным результатам . Разработанна нами техника двойного газона позвол ет преодолеть эти недостатки. В этом случае анализируемые фаги инкубируют с клетками Е. coli штамм
LE392 и после добавлени 0,6%-ного L-ara- ра высевают на чашки Петри. Поверх этого газона высевают газон клеток Q 359 также в 0,6%-ном L-arape. При этом рекомбинантные фаги дают прозрачные бл шки, а не
рекомбинантные - мутные, что легко детектируетс визуально.
Таким образом, фаг ASK14 - единственный вектор замещени , который можно использовать дл конструировани библиотек
кДНК.
Основные достоинства этого вектора заключаютс в возможности получени библиотек как по стандартным, так и по новым методикам, в том числе, с использованием
частичной достройки липких концов и без применени метилаз, возможности использовать дл клонировани рестриктазу Ват 1, объедин ет достоинства экспрессирую- щих и не экспрессирующих векторов и может быть использован з зависимости от штамма Е. coli как в виде экспрессирую- щего, так и в виде не экспрессирующе- го, фенотипическом определении доли рекомбинантных фагов, минимальной (до
15,4 т.п.н.) емкости среди векторов этого класса, возможности биохимической и генетической селекции против исходных, не рекомбинантных фагов, наличии эффективного механизма элиминации как фальшивых.
так и частичных рекомбинантов, возможности быстрого, эффективного и контролируемого перевода в плазмидную форму, свободную от плечей фага, возможности перевода в одноцепочечную форму дл определени первичной структуры по методу Сэнгера, гарантированное™ невозможности неконтролируемого перевода вставки кДНК в в одноцепочечную форму , возможности специфического мечени как 5-, так и З -концов вставки кДНК с использованием стандартных, коммерчески доступных препаратов затравок.
П р и м е р 2. Клонирование в ASK15 фрагментов геномной ДНК человека.
3 мкг ДНК человека расщепл ют ре- стриктазой Ват 1 в стандартных услови х и инактивируют фермент прогреванием 15 мин при 65°С. 3 мкг ДНКА5К9 гидролизуют рестриктазами Ват 1 и EcoR 1 и инактиви- руют ферменты прогреванием и очищают от олигонуклеотидных линкеров осаждением ПЭГ-6000.
Оба препарата смешивают (весовое соотношение ДНК вектора и геномной ДНК 2:1) и провод т лигирование при суммарной концентрации ДНК 250 мкг/мл. 1 -10 мкг лигированной ДНК упаковывают в белки фага In vitro и 1/500 полученных фаговых частиц рассевают на газон Е. coll штамм LE329. При переколе 50 бл шек на газон Q 359 только одна из них не выросла, таким образом , рекомбинантные фаги составл ют свыше 95%.
Из шести случайно отобранных бл шек С газона LE392 в 10 мл L-среды с LE392 были выращены фаги и выделена из них ДНК. Электрофоретический анализ ДНК показал, что все они рекомбинанты и содержат вставку ДНК от 4 до 7 т.п.н. 0,5 мкг ДНК одного
из них (№ 1) гидролизуют в течение 30 мин 1 ед. рестриктазы sal I. Фермент инактивируют трехкратным замораживанием/оттаиванием . ДНК развод т и лигируют при
комнатной температуре в течение 1 ч. 0,1 мкг лигированной ДНК добавл ют к компетентным клеткам Е. coli штамм j M 109, инкубируют 10 мин, при 0°С, затем 5 мин при 38°С и после добавлени 1 мл L-среды
еще 45 мин при 37°С. Затем 0,2 мл клеток рассевают на L-arap с ампициллином (25 мкг/мл). Из трех колоний в 10 мл L-среды с ампициллином (50 мкг/мл) наращивают клетки и выдел ют ДНК щелочным
лизисом. Электрофоретический анализ ДНК показывает, что плазмиды содержат ту же вставку ДНК, что и исходный фаг № 1
Claims (1)
- Формула изобретени Фаговый вектор замещени ASK15 дл конструировани библиотек структурных генов кДНК размером 51,2 т.п.н., содержащий ДНК фага ASK9 размером 47,7 т.п.н.; sal 1 - фрагмент плазмиды рИС4К размером 1,5 т.п.н.; встроенный в sat 1 участок размером 20,3 т.п.н. ДНК фагаА5К9; Hind III - фрагмент фага Д. размером 2,023 т.п.н. (23130 н. - 25157 н.), встроенный в Hind III участок sal 1 - фрагмент плазмиды рИС4К; места вставки чужеродного фрагмента EcoR 1 и Bam H 1; емкость вектора 0,2- 15,4 т.п.н,; спектр хоз ев; хоз евами могут служить штаммы Е. coll, используемые при работе с Agt 11.AEMBL 3. /IZAP, рИС 18, mp 18 и др., в том числе;LE 392 F1, hsd R 514 (г. m). skp Е 44, sup F 58, lac Y 1 OZ (lac 1Z Y) 6, gal К 2, gal Т 22, met В 1, trp R 55. Q 359 hsd RK. hsd MK+. skp F, Ф60. P 2.
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884478259A SU1650699A1 (ru) | 1988-08-31 | 1988-08-31 | Фаговый вектор замещени @ К15 дл конструировани библиотек структурных генов к ДНК |
JP50979389A JPH03505402A (ja) | 1988-08-31 | 1989-08-29 | cDNA構造遺伝子のライブラリーの作製のためのファージ置換ベクターλSK15 |
PCT/SU1989/000230 WO1990002188A1 (en) | 1988-08-31 | 1989-08-29 | SUBSTITUTION PHAGE VECTOR μSK15 FOR CONSTRUCTION OF kDNA STRUCTURE GENE LIBRARIES |
DE19893990972 DE3990972C2 (ru) | 1988-08-31 | 1989-08-29 | |
GB9009525A GB2230012A (en) | 1988-08-31 | 1990-04-27 | Substitution phage vector lambda sk15 for construction of kdna gene libraries |
SE9001560A SE465577B (sv) | 1988-08-31 | 1990-04-30 | Fagvektor, saerskilt substitutionsvektor lambda sk 15 foer framstaellning av bibliotek av cdna-strukturgener |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884478259A SU1650699A1 (ru) | 1988-08-31 | 1988-08-31 | Фаговый вектор замещени @ К15 дл конструировани библиотек структурных генов к ДНК |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1650699A1 true SU1650699A1 (ru) | 1991-05-23 |
Family
ID=21397371
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU884478259A SU1650699A1 (ru) | 1988-08-31 | 1988-08-31 | Фаговый вектор замещени @ К15 дл конструировани библиотек структурных генов к ДНК |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH03505402A (ru) |
DE (1) | DE3990972C2 (ru) |
GB (1) | GB2230012A (ru) |
SE (1) | SE465577B (ru) |
SU (1) | SU1650699A1 (ru) |
WO (1) | WO1990002188A1 (ru) |
-
1988
- 1988-08-31 SU SU884478259A patent/SU1650699A1/ru active
-
1989
- 1989-08-29 WO PCT/SU1989/000230 patent/WO1990002188A1/ru active Application Filing
- 1989-08-29 JP JP50979389A patent/JPH03505402A/ja active Pending
- 1989-08-29 DE DE19893990972 patent/DE3990972C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-04-27 GB GB9009525A patent/GB2230012A/en not_active Withdrawn
- 1990-04-30 SE SE9001560A patent/SE465577B/sv not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Han Т.Н., Rutter W.T. Nucl. Acids. Res. 1987, V.15, p. 6304. Han Т.Н., Stratowa C, Rutter W.T. Biochemistry, 1987. V.26, p. 1617-1625. |Б4) ФАГОВЫЙ ВЕКТОР ЗАМЕЩЕНИЯ ASK 15 ДЛЯ КОНСТРУИРОВАНИЯ БИБЛИОТЕК СТРУКТУРНЫХ ГЕНОВ кДНК * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB9009525D0 (en) | 1990-07-25 |
WO1990002188A1 (en) | 1990-03-08 |
DE3990972C2 (ru) | 1992-12-24 |
JPH03505402A (ja) | 1991-11-28 |
SE9001560D0 (sv) | 1990-04-30 |
SE465577B (sv) | 1991-09-30 |
GB2230012A (en) | 1990-10-10 |
SE9001560L (sv) | 1990-04-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Studier | Use of bacteriophage T7 lysozyme to improve an inducible T7 expression system | |
US5300431A (en) | Positive selection vector for the bacteriophage P1 cloning system | |
Zinder et al. | The filamentous phage (Ff) as vectors for recombinant DNA—a review | |
EP1068305B1 (en) | High throughput dna sequencing vector | |
JP2022137068A (ja) | 化学的に修飾されたガイドrnaを使用する高特異性ゲノム編集 | |
Pierce et al. | A mouse genomic library in the bacteriophage P1 cloning system: organization and characterization | |
Baird et al. | Micronuclear genome organization in Euplotes crassus: a transposonlike element is removed during macronuclear development | |
JPH0716419B2 (ja) | 組換えdna材料から得られるレンニン,プレ−プロレンニン,またはプロレンニン遺伝子、およびこれらの遺伝子を含有する生細胞 | |
JP2000515011A (ja) | 形質転換関連組換えクローニング | |
US5128256A (en) | DNA cloning vectors with in vivo excisable plasmids | |
CN116438302A (zh) | 用于对货物核苷酸序列转位的系统和方法 | |
CN107574178B (zh) | 真菌人工染色体、组成、方法和用途 | |
JP2003501082A (ja) | ハイブリッド酵母−細菌クローニング系およびその使用 | |
SU1650699A1 (ru) | Фаговый вектор замещени @ К15 дл конструировани библиотек структурных генов к ДНК | |
CA3225082A1 (en) | Enzymes with ruvc domains | |
EP0141790A2 (en) | A plasmid with stabilized inheritance | |
Putkey et al. | [25] Bacterial expression vectors for calmodulin | |
CN115427560A (zh) | 使用无催化活性rna指导的内切核酸酶的crispr-aid | |
AU631360B2 (en) | A p1 bacteriophage cloning system for dna fragments as large as 95 kb | |
SK278079B6 (en) | Microorganism of race escherichia coli or pseudomonas putida, method of its growing and recombinant dna | |
EP0286200A2 (en) | DNA cloning vector with in vivo excisable plasmids | |
US4845031A (en) | Recombinant DNA process for producing useful polypeptides | |
Yang et al. | Directional cloning of an oligonucleotide fragment into a single restriction site | |
SU1650698A1 (ru) | Фаговый вектор @ К9 дл конструировани геномных библиотек | |
WO2024080067A1 (ja) | ゲノム編集方法およびゲノム編集用組成物 |