SU1472501A1

SU1472501A1 - Способ получени липоксигеназы

Info

Publication number: SU1472501A1
Application number: SU864190486A
Authority: SU
Inventors: Николай Сергеевич Егоров; Маатасим Ахмедович Аль-Нури; Анна Юрьевна Кривова; Нинель Игоревна Прянишникова; Екатерина Арчиловна Васильева
Original assignee: МГУ им.М.В.Ломоносова
Priority date: 1986-12-05
Filing date: 1986-12-05
Publication date: 1989-04-15

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии и представл ет собой способ получени липоксигеназы, способной трансформировать жирные кислоты различной насыщенности. Перспективно применение продуктов реакции таких ферментов при предупреждении и лечении тромбоэмболических и геморрагических состо ний человека, животных. Целью изобретени вл етс повышение активности целевого продукта и ускорение процесса. Цель достигаетс направленным отбором штамма STR.SPHEROIDES ВКПМS-573 (М8-2) ПО ПРИЗНАКУ УВЕЛИЧЕННОГО СИНТЕЗА ЛИПОКСИГЕНАЗЫ. ШТАММ STR.SPHEROIDES М8-2 НА ИЗВЕСТНОЙ СИНТЕТИЧЕСКОЙ СРЕДЕ ПРОСТОГО СОСТАВА К 48 Ч КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА СРЕДЕ С РН 8,0 СТАБИЛЬНО ОБРАЗУЕТ ВЫСОКОАКТИВНУЮ ЛИПОКСИГЕНАЗУ В КОЛИЧЕСТВЕ 3,0 ЕД/Г БИОМАССЫ. 1 ТАБЛ.

Description

1

Изобретение относитс к биотехнологии и представл ет собой способ получени липоксигенозы, способной трансформировать жирные кислоты различной насьпценности.

1зобретение может быть применено в микробиологии, фармакологии, медицине , и медицинской промышленности.

. Цель изобретени - повышение активности целевого продукта и ускоре- нне процесса.

Изобретение заключаетс в использовании в качестве продуцента липок- сигеназы штамма Streptomyces spheroides ВКПМ8-573, известного ранее как продуцента протерлитических ферментов , рН среды в процессе культивировани поддерживают равным 8,0, оптимальным дл биосинтеза фермента.

Пример 1. Штамм S.spheroi- das ВКПМЗ-573 (а.с. № 1010127) культивируют на среде следующего состава, мас.%: NaNOj 0,1 ; MgSO 7НдО 0,01 ; KKjFO 0,1; соевое масло 55 при рН-8,0 (доведение рН осуществл ют 10 Н NaOH, чтобы не вводить новых ионов). Длительность культивировани составл ет 3 сут. (72 ч). Полученные данные сведены в таблицу

Активность липоксигеназы определ ют при помощи электрода Кларка ло поглощению кислорода, а в качестве субстрата используют линолевую и арахидоновую кислоты.

4; м IND ел

Пример 2о Актиномицет S.sphe roides S-573 выращивают на скошенной агаризованной среде, содержащей, г/л: кукурузньш экстракт 10; крахмал растворимый 10; аммоний сернокис льй 3; натрий хлористый 3; кальций углекисльй 2; агар 20; рН 8 при 28°С в течение 7 дней.

Посевным материалом служит суснен ЗИЛспор культуры S.spheroides ВКМП5-573. В 1 мл суспензии должно содержатьс около 2 млрд«спор (определ етс по стандарту мутности) Посевной материал внос т в количестве 1% синтетической среды известного состава, содержащий, г/л: глюкоза 4.0; калий фосфорнокислый (однозаме- щенный) 2; магний сернокислый 5,7; аммоний сернокислый 1,25, рН 8, ос-. тальное вода.

Выращивают на качалках 80- 200 об/мин в колбах емкостью 750 мл со 100 мл среды в каждой в течение

48 ч при 28 С.

Мицелий отдел ют от культуральной жидкости при помощи центрифугировани в течение 10 мин о При 4000 оборотов в минуту. Отделенный мицелий промывают трижды физиологическим раствором; Далее мицелий разрушают ультразвуком в течение 5 мин при интенсивном охлаждении и центрифугирую в течение 20 мин, при 18 тыс. оборотов в минуту. Полученный суперна-

тант обладает активностью 3,0 ед/г - биомассы

За единицу активности прин то количество фермента, необходимого дл поглощени 1 ммоль кислорода при трансформации субстрата в течение минуты при 30 С. I ..

Таким образом, способность к синтезу липоксигеназы у предлагаемого штамма вьш1е, чем у известного, что делает штамм Str.spheroides перспективным дл применени в микробиологической и медицинской промышленности дл получени активной дипоксиге-. назы.

Предлагаемое изобретение также может быть использовано в биохимии, физиологии животных и фармакологии.

Формула и-зобретени

Способ получени липоксигеназы, предусматривающий культивирование продуцента на питательной среде .до достижени максимального уровн активности , отделение мицели и разрушение его, отличающийс тем, что, с целью повьтени активности целевого продукта и ускорени процесса, в качестве продуцента используют штамм Streptomyces spheroides ВКПМ8-573, а культивирование ведут на питательной среде с рН 8,0

Claims

Формула изобретения

Способ получения липоксигеназы, предусматривающий культивирование продуцента на питательной среде .до достижения максимального уровня активности, отделение мицелия и разрушение его, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта и ускорения процесса, в качестве продуцента используют штамм Streptomyces spheroides BKnMS-573, а культивирование ведут на питательной среде с pH 8,0.

Штаммы pH Длительность культивирования, ч Активность липоксигеназы нМ · 0₂ г биомассы.мин субстраты Линолевая кислота Арахидоновая кислота Fusarium oxysporum 6,0 168 2,4 0,6 Streptomyces spheroides S-573 8,0 72 И, 2 3,0