SU413189A1 - - Google Patents

Description

I

Известен способ получени  хитиназы путем культивировани  ее продуцентов на водной питательной среде, содержащей источник углерода с последуюш,им выделением хитиназы из культуральной жидкости.

Предлагаемый способ позвол ет увеличить выход хитиназы.

Дл  этого в качестве продуцентов используют вид Actinomyces KurssanoviL

Из вида Actinomyces Kurssanouii используют штамм 93.

В качестве источника углерода можно использовать деминерализованный панцирь крабов .

Выращивание указанного штамма можно осуществл ть на водной питательной среде, содержащей 1-3% деминерализованного панцир  крабов, 0,1-0,5% пептона или казеинового гидролизата, 2-5% однозамещенного фофсфата кали  и 0,5% сернокислого магни .

Пример. Панцирь заливают 4-5%-ным раствором сол ной кислоты в соотношении 1 :4. Смесь оставл ют на 24 час при 4- 25° С. Деминерализованный панцирь промывают водой до нейтральной реакции и в измельченном виде используют в качестве источника углерода при культивировании продуцента хитиназы.

Дл  культивировани  микроорганизмов в ферментерах выращивают посевной материал в колбах емкостью 750 мл на качалке (150- 200 об/мин) в течение 3 суток при 27-28° С. Посевной материал внос т в среду в количестве 1-4% от общего объема среды, содержащей следующие компоненты, %: Деминерализованный панцирь

крабов3

Пентон0,2

К2НР043

MgS040,5.

Среду дл  культивировани  актиномицета стерилизуют при 1 атм в течение 1 час, при

этом рН после стерилизации равен 7,0-7,5.

Температура культивировани  27-28°С.

Аэраци  при выращивании в ферментерах

0,5-2 объема воздуха на 1 объем среды в 1 мин. Скорость вращени  мещалки 200-

400 об/мин. Длительность культивировани 

2,5-4,0 суток.

Сухой препарат хитиназы получают путем

осаждени  фермента из культуральной жидкости четырьм  объемами этилового спирта,

трем  объемами ацетона или сернокислым аммонием при полном насыщении. Менее очищенный технический препарат

можно получить высушиванием фильтрата культуры на распылительной сушке.

Культуральна  жидкость, полученна  после отделени  мицели , способна расщепл ть неизмененный нативный хитин, выделенный в виде очищенного соединени  из животных объектов и грибов, а--также хитин, содержащийс  непосредственно в панцир х ракообразных и скелетах насекомых (расщепление коллоидного хитина, регинированного из растворов в концентрированных кислотах, тем более не представл ет больщих трудностей и протекает значительно быстрее). При этом преобладающим продуктом ферментативного гидролиза  вл етс  N-ацетилглюкозамин. Активность 1 мл фильтрата культуральной жидкости предлагаемого щтамма (продуцента хитиназы ) 18-22 ед.

Деминерализованный панцирь крабов, предварительно измельченный в шаровой мельнице , можно расщепить на 32% до N-ацетилглюкозамина за 3 суток при 40° С под деиствием культуральной жидкости актиномицета А.

Концентраци  панцир  составл ет 5%, следовательно , 56% хитина, содержащегос  в деминерализованном панцире, превращаетс  в N-ацетилглюкозамин.

Вместо культуральной жидкости в качестве фермента может быть применен раствор сухого препарата хитиназы.

Культурально-морфологическа  характеристика Actiuomyces Kurssanovii 93.

На синтетических средах (Чапек-агар, сахарозо-нитратный агар) колонии темно-оранжевые , среды окрашиваютс  в желтый цвет. Воздушный мицелий темно-серый. На картофельных пластинах колонии оранжевые, буро-оранжевые , бурые. Среда не окрашена. Воздушный мицелий розовато-серый.

На синтетической среде СР 1 с глюкозой воздушный мицелий телесно-розовый (05) (обозначени  окраски даны по «шкале цветов Бондарцева, 1954) мучнистый, субстратный ржавый (Ж 1), пигмент буланый (Ж 1).

На среде Ваксмана воздушный мицелий мучнистый, темно-инкарнатный (В 5), субстратный буланый (К 1), пигмента нет.

На овс ной среде воздушный мицелий мучнистый , бледно-сероватый (А 6), субстратный рыжеватый (Ж 2), пигмент кожано-бурый (Ж 2).

На гороховом агаре воздушный мицелий белый (Д 3), мучнистый, субстратный бистровый (К 7), пигмент темно-коричневый (Л 5).

На среде Гаузе 2 воздушный мицелий не образуетс . Субстратный мицелий темно-коричневый (Л 5), пигмент темно-коричневый (Л 5).

На кукурузной среде № 2 воздушный мицелий не образуетс , субстратный мицелий бист.. ровый (К 7), пигмент сигарный (Д 7).

Спороносцы короткие образуют петли и крючки. Споры цилиндрические с гладкой оболочкой .

Физиолого-биохимические свойства штамма 75. Штамм гидролизует крахмал, образует меланоидный пигмент. Использует в качестве единственных источников углерода глюкозу, сахарозу, ксилозу, фруктозу, Не использует арабинозу, рамнозу, инозит, маннит. Желатину окрашивает в светло-оливковый цвет, разжижает ее. Молоко пептонизирует без коагул ции . На клетчатке растет слабо. Нитраты восстанавливает слабо.

Нредмет изобретени 

Claims (4)

1.Способ получени  хитиназы путем культивировани  ее продуцентов на водной питательной среде, содержащей источник углерода , с последующим выделением хитиназы из культуральной жидкости, отличающийс  тем, что, с целью повышени  выхода хитиназы , в качестве продуцентов используют вид Actinomyces Kurssanovii.

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что из вида Actinomyces Kurssanovii используют штамм 93.

3.Способ по пп. 1-2, отличающийс  тем, что в качестве источника углерода используют деминерализованный панцирь крабов .

4.Способ по пп. 1-3, отличающийс  тем, что выращивание указанного штамма осуществл ют на водной питательной среде, содержащей 1-3% деминерализованного панцир  крабов, 0,1-0,5% пептона или казеинового гидролизата, 2-5% однозамещенного фосфата кали  и 0,5% сернокислого магни .