SU1243504A1 - Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигена - Google Patents
Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигенаInfo
- Publication number
- SU1243504A1 SU1243504A1 SU843697952A SU3697952A SU1243504A1 SU 1243504 A1 SU1243504 A1 SU 1243504A1 SU 843697952 A SU843697952 A SU 843697952A SU 3697952 A SU3697952 A SU 3697952A SU 1243504 A1 SU1243504 A1 SU 1243504A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- antigen
- optical density
- analysis
- immunofermental
- heterogenous
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(21 )3697952/30-15
(22) 16,02.84
(46) 30,10.87. Бюл. № 40
(71)МГУ им. М.В.Ломоносова
(72)С.М.Аваева, И.Г.Атабеков, А.В.Кулинич и А.А.Байков
(53) 632.938 (088.8) (56) Дзантиев Б.Б. и Егоров А.М, Современное состо ние и перспективы развити иммуноферментного анализа. Ж. Всес. хим. общ-ваИМ. Д.И.Менделеева ,. 1982, т. 27, № 4, 82-89.
M.J.ОSullivan, J.W.Bridges, V.Marks. Enzyme innnunoassay: a revie Ann. Clin. Biochem, 1979, № 16, 221-240.
Патент OTA № 3839153, КП. 195-1-03, 5, 1974. .
Патент Велитсобритании № 597754, кл. С 01 В, 1979.
.Патент США № 4298686, кл. 435-7, 1981.
S.A.Lommel, А.Н.McCain, T.J.Morris . Evaluation of indirect of enzymelinked immimosorbentassay. 1982, 72, № 8, 1018-1022.
(54)(57) СПОСОБ ГЕТЕРОГЕННОГО ИШУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА АНТИГЕНА, включающий получение конъюгата специфического антитела и фермента, присоединение конъюгата и антитела из .образца к поверхности твердой фазы, проведение реакции с субстратом и определение количества антигена в образце визуально или колориметрически , отличающийс тем, что, с целью повышени чувствител.ности способа, после проведени реакции с субстратом в реакционную смесь внос т следующие ингредиенты, мас.%: соль молибденовой кислоты
0,15-0,9; краситель малахитовый зеленый 0,005-0,05} поверхностно-активное вещество 0,01-0,06 и неорганическую кислоту 3-7,5. Изобретение относитс к сельскому хоз йству и медицине и может быть использовано дл определени антигенов в биологических и других объектах . Цель изобретени - повышение чувствительности способа за счет использовани цветной реакции при определении количества продукта ферментативной реакции. Способ заключаетс в проведении последовательности следующих операций: получение конъюгата специфического антитела и фермента, присоединение конъ.югата и антитела из образца к поверхности твердой фазы, проведени реакции с субстратом и определении количества антигена в образце ризуальноили колориметрически, ПоаЬе проведени реакции с субстратом в реакционную смесь внос т ингре диенты, обеспечивающие цветную реакцию , мас,%: соль молибденовой кислоты 0,15-0,9; краситель малахитовый зеленый 0,005-0,05; поверхностноактивное вещество 0,01-0,06 и неорга ническую кислоту 3-7,5, Коэффициент экстинции дл цветной реакции состав л ет около 70000 см , что в 4,6 раза превышает коэффициент эксти ции п-нйтрофенола. Кроме того, измер ема окраска измен етс от бледножеоПой в отсутствие антигена до рко при высокой его концентрации что наиболее благопри тно дл визуальной .оценки результатов анализа Эти два фактора значительно увеличивают чувствительностьопределени , особенно при качественном анализе низких концентраций антигена, Е -р и м е р 1, Определение антигена - вируса У картофел , Конъюгат антител вируса У и щелоч ной фосфатазы кишок теленка получали обра.боткой их смеси 0,1%-ным водным раствором глутарового альдегида, В углублении микроплаты дл иммуноферментного анализа последовательно помещали на 10-15 ч при 4°С по 0,2 мл раствора антител (2 мкг/мп) в карбонатном буфере (рН 9,6), суспензию вируса У известной концентрации в 0,1 М буфере трис-НС (рН 7,4) и конъюгата (0,3 ед/мл) в 0,1 М буфере трис-НС1 (рН 7,4) с промежуточной промывкой 0,1%-ным водным раствором твина - 20 и водой, Затем прибавл ли 0,2 мл раствора п-нитрофен илфосфата (2 мм) в 0-, 1 М буфере диэтаноламин-НС1 (рН 9,8), содержащем 0,5 мМ MgCl , и инкубировали 15 мин при 20°С, Реакцию останавливали прибавг лением 0,05 м. мл окрашивающего раствора , содержащего молибдат аммони , краситель малахитовый леный, поверхностно-активное вещество и кислоту . Через 10МИН измер ли оптическую плотность при 630 нм с помощью денситометра . Дл получени сравнительных дан ньгх параллельно определ ли вируса У известным методом, использу те же препараты специфических антител и коньюгата. Раствор субстрата содержал 10 мМ п-нитрофенилфосфат, 1 М буфер диэтаноламин-НС1 (рН 9,8) и Ор5 мМ MgCl. Дл остановки реакции гидролиза субстрата прибавл ли 0,05 мл 4 М водного раствора NaOH, Значени оптической плотности дл р да известных концентраций вируса У при различном соотношении ингредиентов окрашивающего раствора приведены в табл,1. Количество ингредиентов указано по отношению к конечной смеси окрашивающего раствора и раствора субстрата, В качестве кислоты в пробах 1-11 использована серна кислота, в пробе 12 - сол на кислота и в пробе 13 - хлорна кислота, В качестве поверхностно-активного вещества в пробах 1-9, 12 и 13 использован твин20 , в пробе 10 - стерокс, в пробе 11 - тритон Х-305,
Таблица 1
Как видно из табл.1, увеличение содер гани молибдата аммони от 0,15 до 0,9 мас,% приводит к возрастанию оптической плотности. При 0,15 и 0,3 мас,% мопибдата аммони оптическа плотность в отсутствие вируса не увеличивалась через 1ч после прибавлени окрашивающего раствора, а при 0,9 мас.% увеличивалась на 0,10 ,15, Поэтому оптимальной вл етс концентраци молибдата аммони 0,3 мас.%.
Увеличение количества малахитового зеленого также приводило к возрастанию оптической плотности, но из-за значительного увеличени фона в опыте с 0,05 мас,% малахитового зеленог oптимaль юй вл етс величина 0,017 мас,%.
Увеличение количества твина-20 снижало величину оптической плотности , но обеспечивало оптическую прозрачность раствора при более высоких значени х оптической плотности и снижало величину фона. Оптимальной вл етс концентраци твина-20 0,04 мас,%, при которой раствор оптически прозрачен до оптической плотности 5,0, а величина фона не превышает 0 ,07.
При использовании в качестве поверхностно-активного -вещества твина20 , стерокса или тритона Х-305 получены близкие значени оптической плоности .
Увеличение и уменьшение концентрации серной кислоты по сравнению с 5 мас.% снижало оптическую плотность
50 Использование сол ной и хлорной кислот несколько увеличивало оптическую плотность, но при этом оптическа плотность .в отсутствие вируса увеличивалась за Г ч на 0,1-0,15 и 0,2-0,3
55 соответственно. Поэтому оптимальной вл етс серна кислота в концентрации 5 мас.%, 1IO-желтой в отсутствие-вируса до р ко-синей при вь1сокой его концентрации .. Окраска в пробах с оптической плотностью вьше 0,15 достоверно отличаетс от окраски фона, В изйестном способе окраска измен етс от бесцветной в отсутствие антигена до желтой в присутствии антигена и окраска проб достоверно отличаетс от окраски фона лишь при оптической плотности вьппе Ь,0, Предлагаемым и Известным способа ми измерено содержание вируса У в экстрактах двух образцов листьев картофел с помощью окрашивающего раствора состава, использованного в примере 1, Полученные данные приведены в табл. 2, Т а б л и ц а 2
0,13
0,12 . 1,15 1,15
О 6,7
0,071 0,141
200,291
600,632 46 Как видно из табл.2, два способа дают близкие значени . Предлагаемым способом наличие, вируса в образце 1 определ етс визуально, тогда как в известном способе об зательно использование денситометра. П р и м е р 2. Определение антигена ЗЗ-глобулина сем н гречихи. Способ осуществл етс согласно г, примеру 1, использу антитела к 13Sглобулину сем н гречихи и концентрацию , 10 0,1 NM. Данные дл р да концентраций 3S глобулина сем н гречихи приведены в табл.З. ТаблицаЗ Оптическа Концентраци сем н гречихи, плотность мкг/л
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU843697952A SU1243504A1 (ru) | 1984-02-16 | 1984-02-16 | Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигена |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU843697952A SU1243504A1 (ru) | 1984-02-16 | 1984-02-16 | Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигена |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1243504A1 true SU1243504A1 (ru) | 1987-10-30 |
Family
ID=21102515
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU843697952A SU1243504A1 (ru) | 1984-02-16 | 1984-02-16 | Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигена |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1243504A1 (ru) |
-
1984
- 1984-02-16 SU SU843697952A patent/SU1243504A1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE3486052T2 (de) | Verfahren zur unabaenderlichen bindung von proteinen auf polystyren-oberflaechen mit aufrechterhaltung ihrer biologischen wirksamkeit, derart erhaltene polystyren-oberflaechen und ihre verwendung. | |
DE68911633T2 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Peroxidase-Aktivität unter Verwendung von Chemilumineszenz. | |
DE3049711C2 (de) | Ladungseffekte bei Immunassays | |
US4578361A (en) | Creatinine antibody | |
DE69025940T2 (de) | Durch Silber intensiviertes, auf Goldmarkierung beruhendes Immuntestverfahren | |
DE2811228A1 (de) | Assay zur quantitativen bestimmung von immonogenen und antikoerpern | |
DE69326806T2 (de) | Chemilumineszente Zusammensetzung, enthaltend kationische Tenside oder Polymere und 4'Hydroxyacetanilid, Testkits und deren Verwendung in analytischen Verfahren | |
DE3686409T2 (de) | Substratenansatz von mischungen in einem 2-amino-2-methyl-1-propanil enthaltenden puffer fuer alkalin-phosphatase-probe. | |
Waisman et al. | Chemical estimation of nicotinic acid and vitamin B6 | |
DE3872575T2 (de) | Ckmb-bestimmung, monoclonale antikoerper zur verwendung darin und hybrid-zellinien. | |
JPH02227098A (ja) | マレイミド基を測定する方法および測定剤 | |
SU1243504A1 (ru) | Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигена | |
KR900002840B1 (ko) | 안정화된 효소 결합체 조성물 | |
DE69626639T2 (de) | Phycobilisome, derivate und ihre verwendung | |
Meighen et al. | Hybridization of native and chemically modified enzymes. II. Native and succinylated glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase | |
Lui et al. | An improved method for determining glyoxylic acid | |
SU416969A3 (ru) | ||
US4151043A (en) | Enzyme determination method | |
DE4237479A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Konjugaten aus einem spezifischen Bindungspartner und einem kohlenhydrathaltigen Protein | |
SU1153669A1 (ru) | Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигена | |
Hwang | Interference of ATP and acidity in the determination of inorganic phosphate by the Fiske and Subbarow method | |
Bowen et al. | Analysis of serum magnesium in presence of calcium with chrome fast blue BG | |
DE4227102C2 (de) | Immunchemisches Verfahren zum Nachweis eines Analyten | |
DE69720602T2 (de) | Enzymsubstrat | |
SU966594A1 (ru) | Способ определени 1-амино-4,8-дисульфокислоты нафталина мононатриевой соли в биологических жидкост х |