SU1158579A1 - Штамм микроскопического гриба @ @ НРВ-169- продуцент @ -амилазы - Google Patents

Abstract

Штамм микроскопического гриба Aspergillus oryzae НРБ-169. (коллекци  Центрального Музе  промышленных микроорганизмов Института ВНИИГенегика , коллекционный номер ЦМПМ F-257) - продуцент б -амилазы.

Description

сл

СХ)

ел

со Изобретение.относитс  к ферментной отрасли микробиологической промьшшенности и может быть использовано в хлебопекарной, спиртовой, пивоваренной и других отрасл х промьшшен ности. Существует р д штаммов-продуцентов амилазы, образующих комплекс амилолитических ферментов при поверхностном и глубинном культивировании. Это прежде всего грибы из рода AspergillusJ штамм Aspergillus oryzae И-476-76-А, обладающий активностью культуры 400-500 ед/г (АС) по колориметрическому методу (ОСТ 59-3-71). Цель изобретени  - получение высокоактивного штамма-продуцента амилазы в услови х глубинного культивировани . Предлагаемый штамм получен в реэультате трех ступенчатого отбора пр использовании мутагенов физической и химической природы. На первом этапе селекции в качестве мутагенов использовали 1%-ный раствор нитрозометилмочевины (НИМ), на втором этапе - 1%-ный НММ в комбинации с УФ-лу чами (доза 25-10 эрг/см), на третьем этапе - УФ-лучи. Исходным микроорганизмом дл  индуцировани  селек ции служил штамм Aspergillus oryzae, В результате индуцированной селекции была выделена нова  мутантна  форма НРВ-169, активно.синтетизирующа  aL-амилазу. Штамм имеет следующие характеристики . 1.Морфологи . Мицелий с ветв щимис  гифами,разделенными на много дерные клетки.Ширина клеток мицели  вырьируетс в пределах 2-6 мк. Конидиеносцы - длинные и короткие, расшир ющиес  кверху. Головки конидиеносцев имеют булавовидную форму диаметром 13,5-15,5 мк. Конидии - , блест щие, круглые 2.Культурально-биохимические при 3 наки. Среда сусло-агар. Небольша  колони  характеризуетс  белым пушистым мицелием с ровными кра ми, диаметр колоний 2-4 см. При росте среда не окрашиваетс . Шнеральна  агаризованна  среда Чапека. Пушистые белые колонии с неровными кра ми. Диаметр колоний 2-3 см. На обратной стороне колонии наблюдаетс  радиальна  складчатость. Конидиеносцы с кониди ми формируютс  в большей степени по краю колонии. Картофельный агар. Бела  пушиста  кол.они  с неровными кра ми. Диаметр колонии 2-3 см. Складчатость отсутствует. Морковньй агар. Рост очень йнтенсивньй колонии белые, пушистые. На обратной сторот не колонии наблюдаетс  радиальна  складчатость. Диаметр колонии 5-7 -см. Синтетическа ,агаризованна  ереда Колонии мелкие, пушистые, серого цвета. Диаметр колонии 1-1,5 см. Складчатость отсутствует. Рост на молоке. Растет хорошо, молоко пептонизирует . Рост на ломтиках картофел . Рост очень интенсивный, образует много конидий зеленого цвета. Желатину не разжимает. Ассимилирует маннит, сорбит, декстринь, крахмал, глюкозу, галактозу , арабинозу, ксилозу, рамнозу, лактозу, са арозу потребл ет, при росте происходит подщелачивание среды . , Температурные границы развити  Азрег. oryzae НРВ-169: при 20°С рост замедленный, при 30°С рост хороший, при 40С рост слабый, при 50°С рост очень слабый. Отношение к кислороду: аэроб. Пример. 0 -амилазу получают путем вьфащивани  штамма Asper. oryzae НРВ-169 при глубинном культивировании на среде следующего состава. Крахмал картофельный или кукурузный5,0 ВВК1.0 КС10,05 KjHPO 0,10 ,45 MgS04 .0,05 ч рН исходной среды5,2 Колбы на 750 мл с готовой питательной средой засевают конидиальной суспензией. Кукурузу выращивают на качалке при 180 об/мин при 30°С в течение 4 сут. Активность ot-амилазы, определ ема  по колориметрическому методу (ГОСТ 2.264.4-74), составл ет 4055 ед/мп. . Результаты культивировани  получе кого мутанта представлены в таблице . Таким образом, в результате 3-х ступеней селекции получили мутант с активностью в 2,,5 раза выше активности исходного штамма. Амилолитическа  активность в культуральной опыта жидкости, ед/мл ;- ;i : 2 Примечание. В таблице :представлены средние данные не менее З-х повторностей.