SU761561A1

SU761561A1 - ШТАММ ВАСША15 БиВПДЛ5 М-71 -ПРОДУЦЕНТ ЩЕЛОЧНОЙ ПРОТЕАЗЫ 1 "

Info

Publication number: SU761561A1
Application number: SU782643200A
Authority: SU
Inventors: Irina V Bakhmatova; Galina G Zharikova; Antanas-Skajstutis A Glemzha; Vida G Bendikene; Tadas Yu Padegimas; Vitaustas S Vesa; Ionas-Genrikas Peslyakas
Original assignee: Vnii Prikladnoj Enzimologii
Priority date: 1978-07-11
Filing date: 1978-07-11
Publication date: 1980-09-07

Description

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма, селективно синтезирующего щелочную протеазу.

Наиболее распространенными продупентами щелочных протеаз являются микроорганизмы - грибы, дрожжи, бактерии, в частности бактерии рода ВасдС&иь , нап— . ример штамм йщстС&из 5иЪЪтСд£ —623, обладающий протеолитической активностью щелочной протеазы по ГОСТу 20264.2.74. Главмикробиопром в культуральной жидкости при культивировании штамма в колбах на круговых качалках при 180 об/мин и 37°С - 1,15 ед/мл ОД.

Недостаток штамма в том, что при культивировании культура нестабильна, синтезирует сложную смесь ферментов несколько нейтральных и щелочных протеаз, с! -амилазу, обладает низкой _мспособностью синтезировать щелочную протеазу.

Наиболее близким к предложенному

является штамм ВскЛЕЬиз 5υΐΛι?.ΐ53102

продуцент щелочной протеазы. При культивировании штамма в глубинных условиях на жидкой питательной среде, содержащей, %: картофельный крахмал 12, кукурузная мука 3, казеин 1, кукурузный экстракт 1, дрожжи кормовые 1, аммоний фосфорнокислый двузамещенный 0,1, вода до 1 л, на качалке при 200 об/мин, 40 °С, в колбах емкостью 750 мл (40 мл питательной среды) за 42-44 ч культивирования получают щелочную протеазу с активностью до 12000 - 16000 ед/мл (по методу ФОЛП).

Цель изобретения - получение нового высокоактивного штамма, селективно синтезирующего щелочную протеазу и сохраняющего стабильность во время глубинного культивирования.

Предлагаемый штамм ВцспСЕ-ич зДЪАпЬт'Э М-71 получен генетико-селекционным методом из исходного штамма Васд&Ьи 5 βυΊ)ЬлСдв К -623, хранящегося в музее чистых Культур микроорганизмов ВНИИ

прикладной зкзимологии под регистрационным номером ИПЭ-3.

Полученный новый штамм Васд&Ьи^зиЪЫЕлЧ М-71 (продуцент щелочной протеазы) хранится в коллекции лаборатории чистых микробных культур Всесоюзного научно-исследовательского института прикладной энзимологии. Регистрационный номер ИПЭ-78.

Морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размерами 1,5 —

2,8 мк х 0,3-0,6 мк, расположенных отдельно друг от друга или в коротких цепочках, выращенные на богатой среде с глюкозой или на картофельной среде.

В мазках под микроскоп они выглядят в виде толстых палочек. Палочки подвижны с помощью перетриховык жгутиков, окрашиваются равномерно, граммположительные, образуют споры, размером 1,5 -1,8 мк х 0,6 - 0,8 мк, эллипсоидальные, прорастают экваториально путем разрыва мембраны вдоль экв'атора. Форма спорангия плектридиальная.

Культуральные признаки. На мясо- .

’йептонном агаре после суточной инкубации в термостате при 37 С образуются колонии диаметром 1-4,5 мм. Колонии слизисто-складчатые, амебовидной формы с неровными краями, сероватого цвета. Культура на ломтиках кортофеля образует тонкую морщинистую пленку розоватокоричневого цвета с мелкими складками} на мясо-пептонном бульоне образует тонкую пленку серовато-белого цвета, причем наблюдается помутнение бульона.

Физиологические признаки. Культура является аэробом с оптимальной температурой роста 37°С при рН 7,0 - 7,3. Не гидролизует крахмал, хорошо гидролизует казеин, пептонизирует молоко, разжижает желатину. Культура усваивает /Глюкозу, сахарозу, мальтозу, арабинозу и маннит < с образованием кислоты без выделения газа, не усваивает лактозу, ксилозу, рамнозу, дульцит, инозит, сорбит. На сре761561

10

15

20

25

30

35

40

45

де Кларка слабо образует а цетил метилкарбинол, не растет на среде с цитратом, восстанавливает нитраты до нитритов, хорошо растет на среде с 5%-ным и 7%-ным раствором ΝαΟί, . Культура хорошо растет на среде с тирозином, не образует индол и сероводород, обладает широким . спектором антибиотического действия по отношению к грибам, бактериям и дрожжам.

Культура хранится в консервированном виде на ломтиках картофеля в пробирках, лишенных кислорода, с дополнительной пробкой, смоченной пирогаллолом, а также в лиофилизированном виде.

Пример. Для выращивания штамма продуцента щелочной протеазы Вс|С1€51/ЫН &Ϊ5Μ-71 используют производственную регламентную питательную среду следующего состава, г/л:

Крахмал осахаренный

Мука кукурузная

Казеин по Гамерстону

Дрожжи кормовые

Кукурузный экстракт

(МЧ₄ )₂ иро₄Вода

120,0

30,0

10,0

1,0

Остальное

Штамм выращивают при 37^вС в термостате на круговых качалках при .

180 об/мин, а также на бродильных установках типа 'Биолофит'. Активность щелочной протеазы определяют по ГОСТ 20264.2.74 Главмикробиопром на 56-ом ч роста в культуральной жидкости.

Во всех опытах контрольным штаммом служит штамм В<зсйЕ.£и% βυ1>νΐδΐ3Ρ-623.

Результаты испытания нового штаммапродуцента щелочной протеазы ВаспССи 5 аЪЫдЕлЧ М-71 приведены в табл. 1.

Кроме того, исследовали уровень протеолитической активности методом АнсОна-^йрСкого и методом ФОЛП (ТУ-59-100-76).,

Результаты приведены в табл. 2. Таблица 1

Штамм	Способ культивирования	Количество опытов	Протеолитическая активность щелочной протеазы, ед/мл
Р-623	В колбах	7	1,15
М-71		7 .	4,48
Р-623	В биоло— фитах	5	2,03
М-71		5	8,91

Таблица 2

761561

1			-
Штамм	Протеолитическая способность, ед/мл (метод Ансона-Мирского)	Протеолитическая способность, ед/мл (метод ФОЛП) ,	Отличия от прототипа

виЪЫ'ЪЧв

М-71

Селективно яин— тезируют только

17000 20000 щелочную протеазу и не синтезируют ферменты амилолитического * комплекса·

При вне прении изобретения снижается себестоимость изготовления продукции за счёт селективности синтеза только щелочной протеазы и повышается ее активность.

Ожидаемый экономический эффект

1,2 млн. руб./г.

Claims

Формула изобретения

* . · ' · ·3ί

Штамм ВаспЗДиэ 5иЪ Ъд645 М-71. продуцент щелочной протеазы.

Морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размерами 1,5—
2,8 мк х 0,3 - 0,6 мк, обычно распо- ' ложенные отдельно друг от друга или ³³в коротких цепочках. Выращенные на богатой среде с глюкозой или на картофельной среде в мазках под микроскопом представляются в виде толстых палочек. Палочки, подвижны с помощью перетриховых жгутиков, окрашиваются равномерно, грамм положительны, образуют сЪоры размером 1,5-1,8 мк х 0,6-0,8 мк, эллипсоидальные, прорастают экваториально путем разрыва мембраны вдоль экватора. Форма спорангия, плектридиальная.

Культуральные признаки. На мясо-; пептонном агаре после суточной инкубации в термостате при температуре 37°С образуются колонии диаметром .1—4,5 мм. Колонии слизисто-складчатые, амебовидной формы с неровными краями, сероватого цвета. Культура на ломтиках картофеля образует тонкую морщинистую пленку розовато-коричневого цвета с мелкими ⁵⁵

ЦНИИПИ Заказ 6067/10

складками. На мясо-пептонном бульоне образует тонкую складчатую пленку серовато-белого цвета, причем наблюдается помутнение бульона.

Физиологические признаки. Культура является аэробом с оптимальной температурой роста 37°С при рН 7,0-7,3. Не· гидролизует крахмал, хорошо гидролизует казеин, пептонизирует молоко, разжижает желатину. Культура усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу, арабинозу и маннит с образованием кислоты без выделения газа, не усваивает лактозу, ксилозу, рамнозу, дульцит, инозит и сорбит. На среде Кларка слабо образует ацётилметилкарбинол, не растет на среде с цитратом, восстанавливает нитраты до нитритов, хорошо растет на среде с 5% и 7% раствором ΝαС£. Культура хорошо растет на среде с тирозином, не образует индол и сероводород, обладает широким спектром ; антибиотического действия по отношению к грибам, бактериям и дрожжам.

Культура хранится в консервированном виде на ломтиках картофеля в пробирках, лишенных кислорода, е'дополнительной ' пробкой, смоченной пирогаллолом, а также в лиофилизированном виде.