SU721484A1

SU721484A1 - Штамм вниигенетика-42-продуцент- -амилазы

Info

Publication number: SU721484A1
Application number: SU782588998A
Authority: SU
Inventors: Лидия Марковна Ермакова; Захар Талхумович Абрамов; Екатерина Анатольевна Максимова; Людмила Ивановна Ерохина; Валентин Михайлович Степанов
Original assignee: Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов
Priority date: 1978-02-02
Filing date: 1978-02-02
Publication date: 1980-03-15

Description

Изобретение относитс к микробиологическо промыншенности и касаетс получени штаммов-продуцентов а-амилазы. Препараты, содержащие а-амилазу, используютс в хлебопекарной , текстильной, меховой и отрасл х npoMi iuuieHHOCTH. Широкое применение препараты а-амилазы, главным образом бактериального происхождени , наход т также в качестве биологически активных веществ в составе моющих средств. Известны штаммы грибных и бактериальны культур, продуцирующих амилолитические ферменты. Наиболее близким по своей технической сущности к предлагаемому вл етс пггамм Bacillus subtilis .G-43 1, который характеризуетс максимальной амилазной активностью , зарегистрированной к насто щему времени в патентной литературе 1 . Уровень активности а-амилазы штамма после 48 час. роста составл ет 303 ед/м ( колориметрический метод ОСТ 59-3-71). Предлагаемый штамм Bacillus subtilis ВПНИгенетика-42, хран щийс в Музее живых культур института ВПИИгенетика под регистра ционным номером ЦМПМ В-1498, отличаетс от прототипа более высоким уровнем активности а-амилазы (в 1,5 раза выше): сниженной в 1.5-2 раза активностью щелочной протеиназы; возможностью культивировани на более дешевых по составу средах. На среде, содержащей картофельный крахмал, кукурузный экстракт и соли, активность а-амилазы через 48 час ферментации достигает 450 ед/мл. Штамм Вас. subtilis ВНИИгенетика-42 вл етс мутантом исходзюго штамма Вас. subtilis В-340. полу11енного из Музе живых культур ВНИИгенетика. Снижение активности шел(зчной протеиназы в культуральной жидкости продуцента может иметь практическое значение, поскольку при выделении целевого продукта а-амилазы будут сокращены возможньге потери за счет гидролитического воздействи щелочной протеазы. Предлагаемый штамм Вас. subtilis БНИИгенетика-42 способен расти на менее богатых и сложных (по сравнению с примен ем1,1ми в промышленности ;UIH нроичволства «-aMU.iaзы ) питательных сред и требует -зиачшельно

меньшее количества основного сырь - крахмала (0,9 вместо 8%).

Культуралыю-морфологические признаки штамма ВНИИгенетика-42.

Морфологи . Штамм представл ет собой грамположительн то, спорообразующую палочку размером 2,5 х 0,5-0,8 мкм.

Размер спор: 1,0-1,2 0,6-0,7 мкм.

Культуральные и физиологические признаки

М со-пептонный агар (МПА). Через 48 час инкубации при 37° с образует желтовато-серые плоские, круглые колонии диаметром 2,5 - 3,0 мм с лопастными кра ми, не врастают в среду. Поверхность гладка , матова .

Посев штрихом на м со-пептонком агаре. При инкубации в течение 24 час при 37°С рост хороший. Штрих нитевидный с лопастным краем и матовой, гладкой поверхностью.

Посев уколом. Рост на поверхности. Культура аэробна .

М со-пептонный бульон (МПБ). При инкубации в течение 24 час при 37°С без встр хивани рост без помутнени среды, на поверхности образуетс суха пленка. При встр хивании на качалке наблюдаетс сильное помутнение среды. При сто нии образуетс пленка.

Агаризированна среда Хоттингера. При инкубации в течение 48 час при 37°С образует желтовато-серые колонии с белым краем, крулые , плоские, диаметром 3-4 мм, с лопастными кра ми. Поверхность шероховата , матова

На синтетической среде с минеральным азотом (среда Спицайзена). Растет в виде мелких , круглых колоний диаметром 1 - 1,5 мм, серовато-белого цвета. Поверхность матова . Колонии врастают в субстрат.

На ломтиках картофел пигмента не образует , имеет матовую, сухую, морщинистую поверхность.

Желатину разжижает на вторые сутки.

Крахмал гидролизует.

Молоко пентонизирует и пошелачивает.

.Отношение к источникам углерода. Глюкозу лактозу, фруктозу, сахарозу ассимилирует.

В лабораторных услови х при ферментации в жидких питательных средах иттамм ВНИИгенетика-42 выдел ет а-амилазу с активностью, достигающей 450 ед/мл.

Хранение штамма производит в лиофильно высушенном состо нии в стекл нных ампулах Примеры использовани штамма Вас. subtil is ВНИИгенетика-42 дг1 получени а-амилазы.

Пример 1. Культурой из нескольких типичных шероховатых колоний с агаризооанной среды Хоттин -ера засевают ломтики картофел . В качестве инокул та используют кусочки пленки, выросшей через 24 час при 37°С на ломтиках картофел . Инокул т внос

в ферментационную cpeziy следующего состава (%):

KapXMaJ картофельный0,9

МЙ4МОз0,18

Кукурузный экстракт0,75

СаСОз0,2

Вода водопроводна , рН 6,8 довод т до стерилизации 5 КОН. Активность а-амилазы через 48 час. Ферментаци в колбах составл ет .450 ед/мл.

Пример 2. Штамм-продуцент, приготовление посевного материала, состав ферментационной среды то же, что и в примере 1. . Отличие состоит в услови х ферментации. Процесс ферментации провод т методом глубинного культивировани в ферментере Bioflo емкостью 500 мл с 300 мл ферментационной среды при расходе воздуха 1 объем на 1 объем среды в 1 мин и скорости оборотов мешалки 500 об/мин. Температура процесса 30°С, рН поддерживаетс равным 6, 8. Врем ферментации 40 час. В среду вноситс пеногаситель-пропинол в количестве 2%. Активность а-амилазы составл ет 360 ед/мл. Таким образом, как следует из примеров использовани предлагаемого штамма, новый штамм ВНИИгенетика-42 способен продуцировать в лабораторных услови х а-амилазу с максимальной активностью до 450 ед/мл, что превышает активность штамма-прототипа в 1,5 раза.

Дл вырашивани предлагаемого штамма примен ютс более простые по составу питательные среды, в которых значительно снижено содержание основного сырь крахмала (в 8 раз , меньше по сравне шю с производственными средами).

Новый штамм ВНИИгенетика-42 рекомендован институтом ВНИИгенетика ;ш промыш-. ленного получе}ш а-а.милазы.

Claims

Формула изобретени

Штамм Baciilus subtilis ВНИИгенетика-42продуцент а-амилазы, хранитс в Музее культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под регис1рационным номером ПМПМ В-1498.

Морфологи , г раммоложигельна , спорообразующа палочка размером 2,5 4x0,5-0,8 мкм. Размер спор 1,0-1,2x0,6-0,7 мкм. М со-пептонный агар (МПА). Через 48 час инкубации при 37° С образует желтовато-серые

плоские, круглые колонии диаметром 2,5 3 ,0 мм с лопастными кра ми, не врастают в среду. Поверхность г.падка . матова . При посеве уколом рост ).ч,аетс только на поверхности . -721484 3 М со-пептонный бульон (МПБ). При инкубации в течение 24 час при без встр хивани рост без номутнени среды, на поверхности образуетс суха пленка. При встр хивании на качалке - сильное помутнение среды.j При сто нии образуетс пленка. Агаризованна среда Хоттингера. При инкубации в течение 48 час при 37°С образует желтовато-серые колонии с белым краем,ю круглые, плоские, диаметром 3-4 мм, с лопастными кра ми. Поверхность щероховата . матова . На синтетической среде с минеральным азотом (среда Спидайзена) растет в виде мелких15 6 -1,5 мм диаметром, круглых колоний, с-е|нь вато-белого цвета. Поверхность матовпс. Колонии врастают в субстрат. На ломтиках картофел пигмента не образует , имеет матовую, сухую, морщинистую поверхность . Желатину разжижает на вторые сутки. Крахмал гидролизует. Молоко пептонизирует и подщелачивает, Отношение к источникам углерода. Глюкозу, лактозу, фруктозу, сахарозу ассимилирует, Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Авторское сввдетельство СССР № 538024, кл. С 12 К 1/00, 1976.