SK684990A3

SK684990A3 - Drug composed of a first and second active substance

Info

Publication number: SK684990A3
Application number: SK6849-90A
Authority: SK
Inventors: Michael Zeppezauer; Hans-Peter Leinenbach
Original assignee: Symbiotec Gmbh
Priority date: 1990-01-04
Filing date: 1990-12-28
Publication date: 1999-06-11
Also published as: SK279960B6; CA2033249C; EP0438756B1; JPH04305535A; ATE104553T1; DE4000154A1; CZ684990A3; CA2033249A1; CZ283924B6; UA27704C2; EP0438756A1; DE59005456D1; US5578571A; JPH0813756B2

Description

Liečivo zložené z prvej a druhej účinnej látky

Oblasť techniky

Vynález sa týka cytostatlckého alebo cytostatlckého kombinačného liečiva zloženého z prvej a druhej účinnej látky, ktoré vykazujú synergický účinok v mieste patogénneho procesu. Dotera.iSi stav techniky

Cytostatiká sa používajú napr. pri terapii zhubných nádorov.

nádorov sú dnes kľúčovými s úspechom sa tiež používa terapia ožarovania pri lokálne ohraničených nádoroch a tiež ako prídavná terapia k chirurgii. Pri diseminovaných a metastazujúcich nádoroch však zostávajú ako liečebné postupy chemoterapia a imunoterapla. S chemoterapiou sa pravidelne spájajú ťažké vedľajšie nepriaznivé účinky. Cytostatiká použité v kombinačných pokusoch tak spôsobujú poškodenie obličiek, pečene, poruchy hemopoézy a mnohé ďalšie poškodenia, ktoré značne ovplyvňujú celkový stav a odolnosť pacientov. K tomu Je nutné pripomenúť, že prakticky všetky cytostatiká účinkujú silne imunosupresívne. Tieto vedľajšie účinky majú za následok to, že sa dávkovanie cytostatík nedá nasadiť v dostatočnej výške, alebo že sa terapia musí prerušiť pred docielením požadovaného efektu.

Situáciu navyše komplikuje skutočnosť, že sa pri dlhšom podávaní cytostatík často dostavuje rezistencia nádorových buniek. Napokon existujú tiež také rakovinové bunky, proti ktorým sú známe cytostatiká neúčinné.

ľmunoterapie sa väčšinou uskutočňujú s interferónml a interleukínmi, na stimuláciu bunkovej aktivity. Zvyčajne ide o podobné, aditívne opatrenia. Pre lmunosupresívny účinok cytostatík sa tieto používajú tiež pri terapii autolmunitných chorôb, ako napr. reumatických chorôb, sclerosis multiplex a lupienky, pričom ale aj tu Je nutné rátať s ťažkými vedľajšími účinkami a preto dávkovanie nie Je často dostačujúce alebo sa liečba musí predčasne ukončiť.

Cieľom predloženého vynálezu Je pripraviť takú kombináciu účinných látok, ktorá preukáže podstatne zlepšený cytostatlcký, alebo dokonca cytotoxický účinok, ako doteraz používané cytostatlká, napr. vincristin, methotrexát, clsplatlna samotné, aby sa takto dala uskutočniť účinnejšia chemoterapia s podstatne zmiernenými alebo značne zmenšenými vedľajšími účinkami a aby sa dala výrazne znížiť účinná dávka cytostatík. Kombináciou účinných látok sa tiež zvýši terapeutický účinok známych cytostatík alebo sa tento vôbec umožní. Z prihlášky európskeho patentu 85 100

179.2 Je už známe, že minimálne Jeden histón a/alebo najmenej Jeden fragment hlstónu môže prejaviť hormonálny účinok, ktorý sa dá s výhodou využiť napr. pri liečení rakoviny. Predovšetkým ide o hlstóny Hl, H2A a/alebo H2B a H3. V prihláške nemeckého patentu 37 37 274 Je poukaz na priamy cytostatlcký účinok zmesi histónov H2A/H2B na určité nádorové bunkové línie. Cytostatlcký účinok Hl na rôzne neoplastické bunkové línie Je popísaný v prihláške amerického patentu 07/332, 658 z 3.4.1989. Ide o doplnok CCIP) k prihláške USP 777, 783 z 10.1.1985.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu Je liečivo zložené z prvej a druhej účinnej látky, ktoré vykazujú synergický účinok v mieste patogénneho procesu, ktoré podstata spočíva v tom, že ako prvú účinnú látku obsahuje aspoň Jedno cytostatikum a ako druhú účinnú látku, ktorá má cytostatlcký alebo cytotoxický účinok, obsahuje aspoň Jeden histón alebo aspoň Jeden aktívny fragment hlstónu alebo kombináciu aspoň Jedného hlstónu a aspoň Jedného aktívneho fragmentu hlstónu.

Ako druhú účinnú látku obsahuje liečivo podía vynálezu s výhodou látku zvolenú zo súboru zahrnujúceho Hl, H2A, H2B,

H2A«H2B a H3. Ako aktívny fragment hlstónu v druhej účinnej látke obsahuje liečivo podľa vynálezu s výhodou evolučné variabilný fragment. Aktívny fragment hlstónu v druhej časti účinnej látky

Je s výhodou N- alebo C-termlnálny.

Podlá jednej realizácie obsahuje liečivo podľa vynálezu v druhej účinnej látke aspoň Jeden fragment histónu H2A s čiastkovou sekvenciou 1 -41 alebo 1-36 alebo 1-12 alebo 1 11 alebo 12 - 36 alebo 12 - 41 alebo 1-28 alebo 11-23.

Podľa ďalšej realizácie obsahuje liečivo podľa vynálezu v druhej účinnej látke aspoň Jeden fragment histónu podtypu H2A Z s čiastkovou sekvenciou 1-30 alebo 9-25.

Podľa ďalšej realizácie obsahuje liečivo podľa vynálezu v druhej účinnej látke aspoň Jeden fragment histónu ·Η2Β s čiastkovou sekvenciou 1-35 alebo 1 - 34 alebo 1-32 alebo 1 31 alebo 1-29 alebo 1-26 alebo 1-23 alebo 24 - 35 alebo 24 - 34 alebo 24 - 32 alebo 24 - 31 alebo 24 - 29 alebo 1-20 alebo 21 - 29 alebo 21 - 31 alebo 21 - 32 alebo 21 - 34 alebo 21 - 35 alebo 14 - 26.

Podľa ďalšej realizácie obsahuje liečivo podľa vynálezu v druhej účinnej látke aspoň Jeden fragment histónu H2B P.A. s čiastkovou sekvenciou 17 - 50.

Podľa ďalšej realizácie obsahuje liečivo podľa vynálezu v druhej účinnej látke aspoň Jeden fragment histónu H3 s čiastkovou sekvenciou 3 - 34 a 17 - 29.

Podľa ďalšej realizácie obsahuje liečivo podľa vynálezu v druhej účinnej látke aspoň Jeden hlstón a/alebo fragment histónu, kde tento hlstón a/alebo fragment histónu obsahuje aspoň Jednu z aminokyselinových sekvenclí zvolených zo súboru zahrnujúceho KRAA (Lys Arg Ala Ala) a KRVA (Lys Arg Val Ala).

Podľa ďalšej realizácie obsahuje liečivo podľa vynálezu v druhej účinnej látke C-terminálny fragment histónu Hl alebo

Jeho časť s opakujúcou sa sekvenciou aminokyselín KRAA (Lys Arg

Ala Ala) a/alebo N-terminálny fragment histónu H2B alebo Jeho časť s opakujúcou sa sekvenclou aminokyselín KRVA (Lys Arg Val Ala) .

Pri dvoch posledných uvedených realizáciách Je prvá účinná látka s výhodou zvolená zo súboru zahrnujúceho vincristlne, methotrexate a cisplatin. Pokiaľ Je to takto, obsahuje druhá účinná látka s výhodou H2A*H2B.

Predmetom vynálezu Je ďalej liečivo podľa niektorého z vyššie uvedených realizácií na liečenie rakoviny a autolmunltných chorôb.

Účinnosť kombinovaného liečiva podľa vynáleiu Je dokumentovaná v popísaných pokusoch a tiež v náväznostl na grafy, ktoré sú znázornené na priložených obrázkoch 1 až

Prehľad obrázkov na výkresoch

Na obr. 1 Je znázornený graf, v ktorom Je komplex H2A*H2B charakterizovaný pomocou absorbancle eluátu z delenia pomocou HPLC.

Na obr. 2 až 7 sú uvedené stĺpcové diagramy ilustrujúce prírastky buniek pri použití rôznych liečivových kombinácií podľa vynálezu.

Príklady i“eall2ďčlfa vynálezu

Používa sa vždy zmes hlstónov H2A*H2B, prípadne komplex

H2A*H2B podľa obr. 1, ktoráCý) sa získa z týmusového preparátu

Chomeostatický tymlcký hormón) z teľacieho týmusu podľa Comsu &

Bernardiho CExtraction, Fractlonating and Testlgn of Homogenous

Thymic Hormon Preparation, Annals of the Neu York Academy of

Sciences, Vol. 240, s. 402-403; 28.2.1975) vysokóúčinnou kvapalinovou chromatograflou. Elúcia sa uskutočnila na kolóne uBondak C-18 pomocou lineárneho₍gradlentu (%B) acetonitrllu od 20 do 80% v 0,1% kyseline trifluóroctovej pri prietokovej rýchlosti 1 ml/min. Absorbanda eluátu sa merala pri 214 nm. Na obr. 1 Je na osi X objem v ml, na ľavom ordlnáte absorbancle pri 214 nm a pravom ordlnáte lineárneho gradlentu C XB).

Takisto sa dá pripraviť čistý H2A alebo čistý H2B. Treba len objasniť, či H2A:H2B Cobr. 1) Je zmesou histónov H2A a H2B alebo Je to zlúčenina H2A a H2B C H2A >H2B-komplex) . Je Jasné, že sa môžu použiť aj rôzne iné známe postupy prípravy histónov. Vynález sa neobmedzuje na použitie H2A:H2B, ale pokrýva aj ich áktívne fragmenty s cytostatickým alebo cytotoxickým účinkom.

AJ keď nie Je známy mechanizmus cytostatického alebo cytotoxického účinku histónov, z vynálezu vyplýva, že aktívny význam majú reprezentatívne aminokyselinové sekvencie KRAA a KRV A. Prvá z nich sa napr. nachádza v C-terminálnom úseku Hl a druhá napr. v N-terminálnom úseku H2B.

I

Malígne bunky sa pestovali v kompletovanom živnom médiu CRPľlI 1640 s 10% FCS). Kultivačné médium sa denne obnovovalo. Keď dno kultivačnej nádoby zarástlo, bunky sa zotreli a čiastočne opäť nasadili, pretože na pokusy sú potrebné bunky z oblasti optimálneho rastu. Kultivácia prebiehala pri 36,5 °C a 5,5X C0₂ v termostate. Koncentrácia živých buniek sa určila s farbivom nlgrozín (0,2% vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom CPBS3) v NeubaueroveJ počítacej komôrke.

Zložky chemoterapeutlka podľa vynálezu (napr. H2A<H2B a Jedno zo známych cytostatík) sa pridali do živného média vždy Jednotlivo, ako aj v kombinácii podľa vynálezu a sterilné sa prefiltrovali.

Pre pokusy sa zotreli nie príliš husto narastené malígne bunky z dna kultivačnej nádoby, určil sa počet živých buniek a nastavil na 3,5x10® buniek/ml. Časť tejto suspenzie sa inkubovala s pridaním chemoterapeutika podľa vynálezu, prípadne s Jeho zložkami v termostate. Konečná koncentrácia malígnych buniek v Jamke bola 1,75x10® buniek/ml.

- // i - '

Príklad 1

Účinnosť H2A>H2B v kombinácii s cytostatikami cysplatlnou. methotrexátom a vincristlnom sa testovala na línii lymfómových buniek OH 77. Na obr. 2 sú uvedené testy cytotoxlclty s týmito cytostatikami a s H2A1H2B vždy samotnými oproti bunkám línie lymfómu OH 77. Inkubovali sa bunky tejto línie počas 48 hodín ss CisPl (1 μg/ml clsplatlna), CisP2 <2 ug/ml clsplatlna), ΠΤΧ1 C5 jjg/ml methotrexát), MTX2 (10 u g/ml methotrexát), Mini C 5 ug/ml vlncristln), Vin2 (10 ug/ml vlncristln) a 250 ug/ml H2A:H2B a zaznamenal sa prírastok buniek v X. K znamená kontrolu prírastku buniek počas 48 hodín (rast buniek bez pridania cytostatika alebo H2A«H2B). Cytostatlká, ak aj H2A«H2B, preukázali len malý alebo žiadny cytostatický účinok.

Na obr. 3 Je uvedený iný test cytotoxlclty, pričom sa uvedená cytostatlká použili vždy v kombinácii s H2A<H2B. Jednotlivé pokusy ukazujú inkubáciu buniek línie lymfúmu OH 77 počas 4Θ hodín s·

Vlnl/H2AsH2B (5 ug/ml vlncristln + 100 ug/ml H2A>H2B), MTX1/H2A.H2B (5 ug/ml methotrexát 100 ug/ml H2A»H2B), C1SP1/H2AsH2B (1 ug/ml clsplatlna + 100 ug/ml H2A>H2B), a zaznamenal sa prírastok buniek v %. K opäť znamená kontrolu prírastku buniek počas 48 hodín bez akéhokoľvek prídavku a na lepšie porovnanie s H2AxH2B Je pripojený cytostatický účinok samotného prídavku 100 ug/ml H2AxH2B.

Kombinácia H2AtH2B + vlncristln, a to v koncentráciách, ktoré naznačovali pri Jednotlivých substanciách len ľahký cytostatický účinok (obr. 2), viedla oproti tomu k synergickému účinku s cytotoxlckým efektom (obr. 3). Cytostatické účinky s kombináciami H2AiH2B + methotrexát, resp. H2A>H2B + clsplatlna sú oproti Jednotlivým látkam zlepšené. To platí predovšetkým pre kombináciu H2AxH2B · methotrexát.

Príklad 2

ÚClnok H2A:H2B v kombinácii s uvedenými cytostatlkaml sa testoval na melanémové bunkové línie. EG 463 ln vltro. Obr. 4 ukazuje ďalší test cytotoxldty s príslušnými cytostatlkaml a H2AiH2B, vždy s bunkami melanómovej línie EG 463. Bunky tejto línie sa Inkubovall vždy Jednotlivo s nasledovnými substanciami a zaznamenal sa prírastok buniek x CisPl Cl ug/ml clsplatina), CisP2 C2 ug/ml clsplatlna), MTX1 C5 ug/ml methotrexát), ΙΊΤΧ2 <10 ug/ml methotrexát). Vlni C5 ug/ml vlncrlstln), Vln2 CUlI ug/ml vlncrlstln) a 250 ug/ml H2AxH2B. K znamená kontrolu prírastku buniek poCas 4Θ hodín bez akéhokoľvek prídavku.

Na obr. 5 sa Inkubovall bunky melanúmovej bunkovej línie EG 463 poCas 48 hodín s uvedenými cytostatlkaml v kombinácii s H2A:H2B a zaznamenal sa prírastok buniek v X x

Vlnl/H2AsH2B <5 ug/ml vlncrlstln + 100 U9/ml H2A:H2B), NTX1/H2AxH2B C5 ug/ml methotrexát + 100 ug/ml H2AxH2B), C1SP1/H2AxH2B Cl ug/ml clsplatlna + 100 ug/ml H2AxH2B).

K opäť znamená kontrolný prírastok buniek poCas 48 hodín bez akéhokoľvek prídavku a pre H2AxH2B označuje cytostatlcký úClnok samotného prídavku 100 ug/ml H2A:H2B. Obr. 5 zdôrazňuje, že pri kombinácii H2AxH2B + vlncrlstln, z ktorej Jednotlivé zložky samostatne účinkujú ľahko cytostatlcky Cobr. 4), neúčinkujú tieto synerglcky, ale len aditívne.

Oproti tomu sa ukazuje, že methotrexát a clsplatlna, ktoré ako samostatné látky neúčinkujú ani cytostatlcky Cobr. 4), v kombinácii s H2A x H2B pôsobia cytotoxlcky C synerglcky) C obr. 5).

Príklad 3

ÚClnok H2AxH2B v kombinácii s uvedenými cytostatlkaml sa testoval in vltro aj na línii flbroblastov Hufibl. Obr. 6

Ilustruje ešte ďalší test cytotoxiclty s cytostatlkami á H2A:H2B a to vždy samostatne oproti bunkám línie flbroblastov Hufibl. Bunky tejto línie sa inkubovali 48 hodín s nasledovnými látkami a zaznamenal sa prírastok buniek v %» CisPl Cl ug/ml cisplatlna), CisP2 C 2 ug/ml cisplatlna), MTX1 C 5 ug/ml methotrexát), MTX2 <10 ug/ml methotrexát), Viní C 5 ug/ml vlncrlstin), Vin2 C10 ug/ml vlncristín) a 250 ug/ml H2A<H2B. K znamená kontrolu prírastku buniek bez akéhokoľvek prídavku.

Na obr. 7 sú zobrazené prírastky buniek v % počas 48 hodín inkubácie flbroblastovej bunkovej línie Hufibl s uvedenými cytostatlkami kombinovanými týmto spôsobom s H2A>H2B>

Vinl/H2A:H2B C5 ug/ml vlncrlstln + 100 ug/ml H2A:H2BÔ, MTX1/H2AsH2B C5 ug/ml methotrexát + 100 ug/ml H2A:H2B), C1SP1/H2A*H2B Cl ug/ml cisplatina + 100 ug/ml H2A.H2B).

Okrem toho sa bunková línia inkubovala len so 100 ug/ml H2A1H2B. K opäť znamená kontrolný prírastok buniek počas 48 hodín bez akéhokoľvek prídavku.

Nepozoruje sa synerglcký účinok H2A:H2B s cytostatlkami na netransformované ľudské fibroblasty. Už dokumentovaný cytostatlcký účinok chemoterapeutík sa s pomocou H2A>H2B zvýši Cobr. 6), ale nemení sa na cytotoxický účinok.

ajúce dených

použív rlam mycln,

Carbo

Methotrex

Cytos e Arabitiôfurarioside jnkami b lo zaočkova latín), lnaktlvované fetálne teľ terapeut Lc od

niťových 11

Leukeml

omnostd éhc ytroVeukémjou

Taxol

Are-c).

fate.

é médium R cle sérum hemopoe lie či

kým ttc vým odrol iené klin .cky

CBC 4U)

Paraplatln uorour

Paclita ahujúce tepelne

I 1640 o

Etopos ide.

C10 %),

-glutamín CtyiN), •42-

K562

250

Bunková Hlstčn Chemoterapeutic línia Cjjg/ffil) liečivo

ud³ a ud® spol >30 >100 >20 >10 oncentrácla použi koncentráci

BONU Adriamy/in 5-Flu Carbo ľleth Tax atln rexate

LD50)

LD50 /	LD50	Zníženie
liečilo	s Hl	kiwncen-
samo/né	Cug/ml)	jKrácle
Cug/ml)		/liečiva

CX)

Eťoposlde /	>200	/ 30
ýídriamycin /	0,7	/ <0,03
'fcytoslne Ariablno-
furanosidiy	>50 /	' <0,2
5-Fluorou/acil	>2 /	<0, 005
ľlethotrexate	>20 /	>20
Taxol /	1, 05 /	<0, 002

erateľné o LD50) použitá

ud³>99, 3 ud³ud³ud³ud³

391 □78 002 ud¹>95,

nižšia ud³>99,8 liečiva vyššia

Vynález nie Je obmedzený na kombináciu zmesi alebo komplexu hlstónov H2AxH2B s cytostatlkami. Je možné predpokladať, že porovnateľný účinok sa docieli so samotným hlstčnom

H2A alebo hlstčnom H2B v kombinácii s cytostatíkaml, ďalej

Je možné predpokladať.

že porovnateľné účinky budú mať hlstčny

Hl a H3 v kombinácii s cytostatíkaml.

Odborníkovi Je nakoniec

Jasné, že namiesto hlstčnov sa môžu zobrať aktívne zložky, ktoré sú zložené z najmenej piatich amlnokysellnových zvyškov a majú cytostatlcký alebo cytotoxický účinok.

Vynález nie Je nakoniec obmedzený ani na použitie cytostatiká. Podľa poznatkov, vyplývajúcich z vynálezu, dokáže odborník vytvoriť kombinácie ľubovoľných cytostatík s minimálne

Jedným hlstčnom alebo aktívnym fragmentom hlstčnu, na prípravu /D kombinovaného chemoterapeutlka podľa poznatkov vynálezu, ktoré vykazuje prinajmenšom zvýšený chemoterapeutický účinok aj napriek zníženej dávke použitého cytostatlka, takže dokonca pri zvýšenom cytostatickom účinku sú vedľajšie účinky cytostatika podstatne zmiernené alebo sa môžu ponúkať nové kombinované chemoterapeutiká, ktoré vykazujú synergický účinok s cytotoxlckým efektom, pričom aj tu sa dá znížiť dávka cytostatika a príslušným spOsobom sa môžu zmierniť vedľajšie účinky. Synergickým účinkom môžu doteraz neúčinné cytostatiká nadobúdať svoju účinnosť, aj keď samotné nepreukázali terapeutický účinok pri liečení nádorových a autoimunitných chorôb.

Pretože podávanie histónov nesprevádzajú žiadne vedľajšie účinky, vzniká podľa poznatkov vynálezu nakoniec pri kombinácii s cytostatikami možnosť chemoterapie s podstatne vyšším predpokladom úspešnosti počas dlhšej doby aplikácie, pričom Je možné udržiavať vedľajšie účinky na únosnej hranici.

Kombinácia účinných látok podľa vynálezu sa môže podávať aj tak, že prvá a druhá účinná látka sa podávajú spolu alebo oddelené, synergický účinok kombinácie účinných látok podľa vynálezu sa vyskytuje vždy na mieste patogénneho procesu, nezávisle od toho, či sa Jednotlivé účinné látky podali spolu alebo oddelene.

AJ keď uvedené pokusy ukazujú účinnosť kombinácie účinných látok podľa vynálezu len proti rakovinovým bunkám, predovšetkým proti bunkám malígnych nádorov lymfatických žliaz a malígneho melanómu, neobmedzuje sa vynález len na použitie terapeutických postupov na liečenie malígnych nádorov. Je pravdepodobné, že kombináciu účinných látok podľa vynálezu bude možné použiť na liečenie autoimunitných chorôb.

Claims

1. Liečivo zložené z prvej a druhej účinnej látky, ktoré vykazujú synergický účinok v mieste patogénneho procesu, vyznačujúce sa t ý m, že ako prvú účinnú látku obsahuje aspoň Jedno cytostatlkum a ako druhú účinnú látku, ktorá má cytostatlcký alebo cytotoxický účinok, obsahuje aspoň Jeden histón alebo aspoň Jeden aktívny fragment histónu alebo kombináciu aspoň Jedného histónu a aspoň Jedného aktívneho fragmentu histónu.

2. Liečivo podľa nároku 1, vyznačujúcie sa tým, že ako druhú účinnú látku obsahuje látku zvolenú zo súboru zahrnujúceho Hl, H2A, H2B, H2AtH2B a H3.

3. Liečivo podľa nároku 1, vyznačujúce sa tým, že ako aktívny fragment histónu v druhej účinnej látke obsahuje evolučné variabilný fragment.

4. Liečivo podľa nároku 1, vyznačujúce sa tým, že ako aktívny fragment histónu v druhej účinnej látke obsahuje N- alebo C-terminálny fragment.

5. Liečivo podľa nároku 1, vyznačujúce sa tým, že v druhej účinnej látke obsahuje aspoň Jeden fragment histónu H2A s čiastkovou sekvenciou 1 -41 alebo 1 - 36 alebo 1-12 alebo 1-11 alebo 12 - 36 alebo 12 - 41 alebo 1-28 alebo 11 - 23.

6. Liečivo podľa nároku 1, vyznačujúce sa tým, že v druhej účinnej látke obsahuje aspoň Jeden fragment histónu podtypu H2A Z s čiastkovou sekvenciou 1-30 alebo 9 -

25.

7. Liečivo podľa nároku 1» vyznačujúce sa tým, že v druhej účinnej látke obsahuje aspoň Jeden fragment histónu H2B s Čiastkovou sekvenclou 1-35 alebo 1 - 34 alebo 1-32 alebo 1-31 alebo 1-29 alebo 1-26 alebo 1-23 alebo 24 - 35 alebo 24 - 34 alebo 24 - 32 alebo 24 - 31 alebo 24 - 29 alebo 1-20 alebo 21 - 29 alebo 21 - 31 alebo 21 - 32 alebo 21 - 34 alebo 21 - 35 alebo 14 - 26.

8. Liečivo podľa nároku 1» vyznačujúce sa tým, že v druhej účinnej látke obsahuje aspoň Jeden fragment histónu podtypu H2B P.A. s čiastkovou sekvenclou 17 - 50.

9. Liečivo podľa nároku 1, vyznaCuJúce sa tým, že v druhej účinnej látke obsahuje aspoň Jeden fragment histónu H3 s čiastkovou sekvenclou 3 - 34 a 17 - 29. *

10. Liečivo podľa nároku 1, vyznačujúce sa tým, že v druhej účinnej látke obsahuje aspoň Jeden hlstón a/alebo fragment histónu, kde tento hlstón a/alebo fragment obsahuje aspoň Jednu z amlnokysellnových sekvencií zvolených zo súboru zahrnujúceho KRAA (Lys Arg Ala Ala) a KRVA (Lys Arg Val Ala) .

11. Liečivo podľa nároku 10. vyznačujúce sa tým, že v druhej účinnej látke obsahuje C-termlnálny fragment histónu Hl alebo Jeho časť s opakujúcou sa sekvenclou aminokyselín KRAA (Lys Arg Ala Ala) a/alebo N-termlnálny fragment histónu H2B alebo Jeho časť s opakujúcou sa sekvenclou aminokyselín KRVA (Lys Arg Val Ala).

12. Liečivo podľa nároku 10 alebo 11. vyznačujúce sa t ý m, že prvá účinná látka Je zvolená zo súboru zahrnujúceho vincrlstln, methotrexate a cisplatin.

13. Liečivo podľa nároku 12, vyznač tým, že ako druhú účinnú látku obsahuje H2AxH2B.

14. Liečivo podľa niektorého z nárokov 1 až rakoviny a autolmunitných chorôb.