KR20080099234A - 콤브레타스타틴 및 항암제를 포함하는 조합물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 스틸벤 유도체 및 VEGF 저해제, 보다 구체적으로는 VEGF 트랩으로부터 선택되는 항암 화합물을 포함하는 항종양 조합물을 제공한다. 또한, 고형 암종 등의 치료를 위한 이들 제약 제제의 사용 방법도 제공한다.

스틸벤 유도체, VEGF 저해제, 콤브레타스타틴, 항암제, 고형 종양

Description

콤브레타스타틴 및 항암제를 포함하는 조합물 {COMBINATION COMPRISING COMBRETASTATIN AND ANTICANCER AGENTS}

본 발명은 스틸벤 유도체 및 항암제, 예컨대 VEGF 저해제를 포함하는 치료 조합물에 관한 것이다.

혈관 내피 성장 인자의 저해제인 VEGF 저해제는 대부분의 경우에 가용성 수용체, 안티센스, RNA 압타머 및 항체로부터 선택되는 생물학적 생성물이다.

본 발명은 스틸벤 유도체 및 VEGF 저해제의 조합물에 의한 암, 보다 구체적으로는 고형 종양의 치료, 상기 조합물의 암에 대한 개선된 치료를 위한 용도, 및 이들 유효 성분의 종양 등의 치료 (치료요법), 억제 및 경감을 위한 용도에 관한 것이다.

현재, 광범위하게 다양한 화학요법제가 종양, 특히 악성 고형 종양의 치료 및 억제를 위해 사용되고 있다. 이들 작용제는 종양에 대한 감소 효과를 가질 수 있지만, 암에 의한 작용제 내성 획득, 종양의 재발 등으로 인해, 이들 공지된 작용제로는 회복을 달성하는 것이 불가능한 경우가 잦았다. 따라서, 보다 효과적인 다른 항종양제가 요구되고 있다.

주요 골격으로서 시스-스틸벤을 갖는 스틸벤 유도체는 강력한 유사분열 저해 활성 및 세포독성을 갖는 것으로 알려져 있지만, 대부분의 스틸벤 유도체는 그들의 낮은 수용해도로 인해 아직 제약상 작용제로 이용할 수 없다.

최근에 튜불린 중합에 대해 저해 활성을 갖는 특정 스틸벤 유도체가 개선된 수용해도도 갖는 것이 발견되었다. 이러한 유도체는 콤브레타스타틴-A4의 인산화 전구체 (미국 특허 제5 561 122호 참조) 및 미국 특허 제5 674 906호에 기재된 스틸벤 유도체를 포함한다. 이들 스틸벤 유도체의 임상학적 용도는 유망한 것으로 나타났다.

본 발명의 목적은 높은 효능을 갖는 항종양제의 조합물을 개발하는 것이고, 특히 스틸벤 유도체의 효능을 개선시킬 수 있는 제약 제제를 개발하는 것이며, 구체적으로는 사용하기에 안전하고 악성 종양의 치료에 있어서 보다 높은 효능을 갖는 항종양제를 개발하여 제공하는 것이다.

스틸벤 유도체를 VEGF 저해제와 같은 또 다른 항암제와 함께 투여하면, 종양 발달을 저해하는 치료 효과가 개선되는 것으로 밝혀졌다.

VEGF 트랩 (Trap) 키메라 단백질인, 본 발명에서 바람직하게 사용되는 VEGF 저해제의 설명 및 제조는 특허 출원 WO 00/75319에 기재되어 있다. 키메라 단백질의 몇몇 실시양태가 존재한다.

VEGF 트랩에 대응하는 실시양태는 도 24 (서열)에 도시된 것이다. 본 발명에서 사용되는 VEGF 트랩은 VEGFR1R2-FcΔC1 또는 Flt1D2.Flk1D3.FcΔC1이라고도 불리는, VEGFR1 신호 서열이 VEGFR1 수용체의 Ig 도메인 D2에 융합되고, 이것 자체가 VEGFR2 수용체의 Ig 도메인 D3에 융합되고, 이것이 다시 IgG1 Fc 도메인에 융합된 것을 포함하는 융합 단백질이다.

이제 스틸벤 유도체와 조합한 상기 신규 항암제가 고형 종양의 치료에 특히 효과적임이 밝혀졌다. 그 중에서도 효과적인 스틸벤 유도체는 콤브레타스타틴 A-4 및 하기 화학식 II의 생성물로서도 나타내는 화합물의 유도체, (Z)-1-(3-아미노-4-메톡시페닐)-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)에탄이다. 이들 두 화합물은 강력한 유사분열 저해 활성 및 세포독성을 나타내고, 튜불린 중합을 저해한다.

콤브레타스타틴 A-4는 하기 화학식 I을 갖는다.

화학식 II의 생성물은 하기 화학식을 갖는다.

이들 콤브레타스타틴은 난수용성이고, 염, 예를 들어 히드로클로라이드, 아 세테이트, 포스페이트, 메탄술포네이트 및 아미노산 염의 형태로 사용될 수 있다.

제약상 허용가능한 염, 수화물 및 용매화물의 형태로 사용될 수 있는 스틸벤 유도체의 제조, 및 상기 화합물, 그의 담체(들) 및/또는 그의 제약상 허용가능한 희석제(들)를 함유하는 경구 및/또는 비경구 제약 조성물의 제조는 화학식 II의 생성물 및 전구체에 대한 미국 특허 제5 525 632호, 제5 731 353호 및 제5 674 906호에 기재되어 있다. 본원에 참고문헌으로서 포함되는 상기 특허는, 그들을 단독으로 사용하는 경우, 화학식 II의 콤브레타스타틴 생성물을 포함하는 스틸벤 유도체가 생체내에서 암세포 성장저해 효과를 가짐을 나타낸다.

최근에는 화학식 II의 콤브레타스타틴의 세린 염과 VEGF 트랩의 조합물이, 각 화합물을 종양이 있는 포유동물에 단독으로 투여한 후에 예상되는 것에 비해 종양 부피의 발달을 유의적으로 감소시키는 것이 발견되었다.

따라서, 본 발명은 신규 항종양제, 예를 들어 2가지 유형의 활성 성분, 즉 스틸벤 유도체 및 VEGF 트랩을 동시에 또는 개별적으로 포함하는 암에 대한 화학요법적 의약 (암 화학요법제)을 제공하므로 유망하다.

본 발명은 또한 스틸벤 유도체 및 VEGF 트랩을 2종의 개별적인 제약 제제로 제조하여 이를 필요로 하는 환자에게 동시에, 반-동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여하는 조합 요법을 포함한다.

본 발명의 항종양제가 투여되는 종양에는 동물, 특히 인간에게서 출현할 수 있는 모든 유형의 종양이 포함된다. 바람직하게는, 본 발명의 항종양제는 인간에서의 종양 세포의 증식을 저해하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 항종양제는 2 종 이상의 화합물이 종양을 치유 (치료)하거나 억제하기 위해 사용되는 제약 제제이다.

항종양제의 투여 형태에 대해 특별한 제한은 없다. 항암제는 통상적으로는 정맥내, 비경구 및 경구 투여된다. 본 발명은 또한 별개의 투여 형태를 갖는 2종의 화합물의 조합물을 포함하는 항종양제를 포함한다.

본 발명에서 사용되는 스틸벤 유도체는 주요 골격으로서 시스-스틸벤을 갖고, 튜불린 중합에 대한 생체내 저해 활성 및/또는 항종양 활성을 나타낸다. 본 발명의 스틸벤 유도체는 또한 생체내에서 스틸벤 유도체로 전환될 수 있는 전구체를 포함한다. 적절하고 제약상 허용가능한 모든 유도체 형태, 예컨대 그의 염, 에스테르, 아미드, 용매화물 (용매화 생성물) 및 수화물은, 유도체가 생체내에서 사용될 때 항종양 활성을 나타내는 한, 본 발명에서 스틸벤 유도체로서 사용될 수 있다.

화학식 II의 생성물의 전구체는 바람직하게는 아미노산 염이다.

아미노산으로는 α 아미노산, β 아미노산 및 γ 아미노산을 열거할 수 있다. 바람직한 아미노산의 예에는 글리신, 알라닌, 류신, 세린, 리신, 글루탐산, 아스파르트산, 트레오닌, 발린, 이소류신, 오르니틴, 글루타민, 아스파라긴, 티로신, 페닐알라닌, 시스테인, 메티오닌, 아르기닌, -알라닌, 트립토판, 프롤린, 히스티딘 등이 포함된다. 특히, 트레오닌 및 세린이 제약상 효과 및 사용상 안전성의 관점에서 바람직하다. 이들 모든 아미노산은 L, D 또는 DL 형태일 수 있지만, L 형태가 바람직하다.

앞서 기재한 바와 같이, 본 발명의 스틸벤 유도체는 그의 구조 내에 시스-스틸벤 골격을 갖고, 튜불린 중합에 대한 저해 활성 및/또는 항종양 활성을 갖는 화합물이다. 이러한 스틸벤 유도체는 종래 기술 간행물, 예컨대 미국 특허 제4 996 237호, 제5 561 122호 및 제5 430 062호에 기재된 콤브레타스타틴 A-4 및 화학식 II의 생성물로 예시된다. 이들 특허 간행물에 기재된 종래 기술의 스틸벤 유도체 및 미국 특허 제5 525 632호 및 제5 731 353호에 기재된 화학식 II의 콤브레타스타틴은, 이들이 본 발명에서의 스틸벤 유도체의 정의에 상응하는 한, 본 발명의 스틸벤 유도체로 사용될 수 있다.

상기 스틸벤 유도체는 상기 공지된 간행물에 기재된 방법을 포함하는 통상적인 기술에 의해 제조될 수 있다.

그 중에서도 본 발명의 스틸벤 유도체는 스틸벤의 염, 에스테르 및 다른 유도체, 및 생체내에서 스틸벤 유도체로 전환될 수 있는 유도체이며, 단, 상기 스틸벤 유도체는 동물의 체내에서 상기 목적 활성을 명확히 나타내는 것이다.

그 중에서도 상기 화학식 II로 표시되는 화합물은 하기 화학식 IIa로 표시되는 화합물이다.

화학식 IIa의 화합물은 수용성이고, 염, 예를 들어 히드로클로라이드, 아세테이트, 메탄술포네이트 등의 형태로 사용될 수 있다.

결과로서, 본 발명의 목적을 위해, 조합물은 구성성분의 물리적인 결합에 의해 얻어지는 것에만 배타적으로 제한되는 것이 아니라, 동시이거나 시간 간격을 둘 수 있는 개별적인 투여를 허용하는 것도 포함한다.

본 발명에서의 바람직한 실시양태 중 하나는 유효량의 화합물 (IIa)의 VEGF 트랩과의 조합물에서의 종양 성장을 저해하기 위한 용도이다.

본 발명의 항종양제는 앞서 논의한 바와 같이 비경구적으로 투여될 수 있다. 이 경우, 항종양제는 볼루스로서 정맥내 투여되거나, 당업자에게 공지된 다양한 방법에 의해서 제약상 허용가능한 벡터와 함께 정맥내 주입 백 내에 제조될 수 있다. 바람직하게는, 제약상 작용제는 통상적인 기술에 의해, 예를 들어 단위 제약상 형태 및 동결건조 제제의 형태로 제조되고, 이것은 다시 투여에 적합한 물 또는 또 다른 액체 주입물 내에 제조된다.

본 발명의 항종양제를 위한 제약 제제에 대한 2종 성분의 비율은 사용하는 목적 투여량 및 제약상 허용가능한 벡터와 같은 특정 수의 인자에 따라 폭넓은 범위 내에서 다양할 수 있다. 본 발명의 항종양제로서의 제약 제제 내 스틸벤 유도체의 투여에서의 양 또는 조합과 관련하여, 스틸벤 유도체는 제약 제제에 존재하는 VEGF 트랩 1 중량부에 대해, 바람직하게는 대략 0.01 내지 100 중량부, 특히 대략 0.1 내지 10 중량부의 양으로 사용된다. 따라서, 2종의 활성 성분을 함유하는 본 발명에서의 제약 제제를 환자에게 투여해야 하는 경우, 그것은 앞서 정의된 투여 범위를 부여하는 양으로 투여된다.

제약 제제를 단계 중에 투여해야 하는 경우, 앞서 정의된 투여 범위는 개별적인 제약 제제에 대한 평균 비율로서 수립될 수도 있다.

본 발명을 이제 그의 바람직한 실시양태를 참고하여 보다 상세히 설명한다. 상기 실시양태는 단지 예시의 수단으로 주어진 것이고, 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아님에 주의하여야 한다.

조합물의 효능은 그의 치료적 상승작용을 측정함으로써 증명할 수 있다. 조합물은 그것이 최적 투여량으로 단독 사용된 최상의 작용제보다 치료적으로 우수한 경우 치료적 상승작용을 나타내는 것이다 (T.H. Corbett et al., Cancer Treatment Reports, 66, 1187 (1982)).

조합물의 효능은 또한 해당 연구에서 조합물의 최대 내성 용량을 개별적인 구성성분 각각의 최대 내성 용량과 비교함으로써 증명할 수도 있다. 상기 효능은 예를 들어 하기 식에 의해 결정되는 log₁₀ 세포사에 의해 정량화할 수 있다.

log₁₀ 세포사 = T-C (일)/3.32×T_d

식 중, T-C는 대조군 (C)의 종양이 소정의 값 (예를 들어, 1 g)에 도달하기까지 걸리는 평균 시간 (일)에 대한 처리군 (T)의 종양이 동일한 값에 도달하기까지 걸리는 평균 시간 (일)인 종양 성장의 지연을 나타내고, T_d는 종양 성장의 대수기 동안 대조군에서 종양의 부피가 2배로 될 때까지 필요한 시간 (일)을 나타낸다 (T.H. Corbett et al., Cancer, 40, 2660.2680 (1977); F.M. Schabel et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17, 3-51, New York, Academic Press Inc. (1979)). 생성물은 log₁₀ 세포사가 0.7 이상인 경우 활성인 것으로 간주된다. 생성물은 log₁₀ 세포사가 2.8 초과인 경우에는 매우 활성인 것으로 간주된다.

각 구성성분이 일반적으로 그의 최대 내성 용량을 초과하지 않는 투여량으로 존재하는, 그 자체의 최대 내성 용량으로 사용된 조합물은, log₁₀ 세포사가 각 구성성분을 단독으로 투여하였을 때의 최상의 구성성분의 log₁₀ 세포사의 값보다 1 log₁₀ 이상 큰 경우 치료적 상승작용을 나타낼 것이다.

종양 성장의 저해는 이하에 기재되는 바와 같은 유효량의 콤브레타스타틴 및 유효량의 제2 항암 화합물을 암을 앓고 있는 인간에게 투여하는 것을 포함하는 치료요법에 대한 반응으로부터 유래한다. 허용가능한 경우에, 상기 투여는 종양 성장을 억제하고, 그 결과로 종양의 측정가능한 크기를 감소시킨다. 최적의 경우에, 종양은 완전히 퇴화된다.

앞서 기재한 바와 같이, 본 발명의 항종양제를 치료할 포유동물에게 투여하는 방법에 대해 특별한 제한은 없다. 그것은 경구 또는 비경구, 예를 들어 정맥내, 피하 또는 근육내 투여될 수 있다. 신속한 효능을 위해, 예컨대 볼루스로서 또는 주입에 의해 정맥내 투여함에 의한 콤브레타스타틴의 비경구 투여가 바람직하다. 본 발명에 따른 제약 제제의 투여 방법에서는, 콤브레타스타틴을 또 다른 항암제와 동시에 투여하거나 둘을 임의적인 순서로 순차적으로 투여할 수 있다. 콤 브레타스타틴 및 제2 항암제를 투여하는 최적의 방법 및 최적의 순서는 통상적인 기술 및 본원에 포함된 정보에 의해서 당업자에 의해 적합하게 선택될 수 있다.

콤브레타스타틴과 VEGF 트랩을 조합하여 종양 성장을 저해하는 유효량은 상기 조합물의 성분에 민감한 종양을 앓고 있는 인간에게 투여할 수 있는 치유 단위에 상응한다. 실제적으로 바람직한 치유 단위는 사용되는 콤브레타스타틴의 개개의 제약상 형태, 사용되는 제2 항암제의 개개의 제약상 형태, 치료할 개개의 종양 세포 및 치료할 개개의 숙주에 따라 다양하다. 미리 수립된 주어진 조건에 최적인 치유 투여량은 시험 치유 단위 및 본원에 포함된 정보에 의해서 당업자에 의해 적합하게 선택될 수 있다.

본 발명의 항종양제는 적어도 앞서 기재한 바와 같은 콤브레타스타틴 및 VEGF 트랩을, 2종의 활성 성분이 제약 제제 내에 혼합물의 형태로 함유될 수 있는 방식으로 포함하는 제약 제제이다. 그러나, 본 발명에서의 2종의 활성 성분은 또한 순차적으로 및 조합하여 사용되는 별개의 제약 제제 내에 개별적으로 함유될 수도 있다. 다른 항종양제와 같은 다른 작용제 (제3 및 제4 의료용 성분 등)를 함유하는 이러한 제약 제제는, 본 발명에서 사용되는 유효 성분이 제약 제제에 함유되는 한, 본 발명에 자연적으로 포함될 수 있음에 주의하여야 한다. 또한, 본 발명에서의 제약 제제 (본 발명에서의 2종의 성분을 함유하는 단일의 제약 제제 및 조합하여 사용하기 위한 2종의 성분 중 1종을 각각 개별적으로 함유하는 개별적인 제약 제제) 중 임의의 하나에 대한 제약상 허용가능한 벡터, 희석제 및 다른 물질을 본 발명의 항종양제에 함유시키는 것이 가능하다.

본 발명을 이제 그의 바람직한 실시양태를 참고하여 보다 상세히 설명한다. 상기 실시양태는 단지 예시의 수단으로 주어진 것이고, 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아님에 주의하여야 한다.

주입용 제약 제제를 각각 하기 화학식 IIa 및 I로 표시되는 화합물인 화학식 IIa 및 A4의 콤브레타스타틴을 사용하여 하기 조성에 따라 제조하였다.

<화학식 IIa>

<화학식 I>

화합물 (I) (포스페이트 형태) 10 mg

및

생리 식염수 9.5 ml

화합물 (IIa) (히드로클로라이드 형태) 5 mg

0.5 ml 및

생리 식염수 9.5 ml

항종양 효과 및 시험

조합물의 고형 종양에 대한 효능을 하기 방식으로 실험적으로 측정하였다.

실험에 사용하는 동물은 0일째에 MA13/C 쥐 유선암 종양 단편 30 내지 60 mg을 양측 피하 이식한 암컷 C3H/HeN 마우스이다. 초기 종양 치료의 경우에는, 이식된 동물을 치료(들)를 받게 하거나 그렇게 하지 않을 (대조군) 다양한 군으로 무작위 분배하였다. 진행된 종양의 치료에 관해서는, 200 mg을 초과하는 소정의 종양 크기에 도달한 종양이 있는 동물을, 종양 크기 범위를 한 군에서 다른 군으로 비교하는 방식으로 다양한 치료군 및 대조군으로 분배하였다. 종양이 없는 동물도 종양이 있는 동물과 동일한 치료를 받게 함으로써, 종양에 대한 특정 효과로부터 독성 효과를 분리시키는 것이 가능하다. 일반적으로, 화학요법은 종양의 유형 및 목적한 종양의 크기에 따라 이식 후 3 내지 22일째에 시작하였다. 동물을 매일 관찰하고 체중을 측정하였다. 최하위 점에서 20％ 이상의 체중 손실 (군의 평균) 또는 10％ 이상의 죽음을 유도하는 투여량을 독성인 것으로 간주하였다. 최대 비독성 투여량에서 종양 활성을 평가하였다.

종양이 대략 2 g에 도달할 때까지 또는 동물이 죽을 때까지 (종양이 2 g에 도달하기 전에 죽은 경우), 종양을 일주일에 2 또는 3회 측정하였다. 동물이 희생된 경우 부검하였다.

항종양 활성을 다양한 기록 매개변수, 예컨대 투여량 (mg/kg), 투여 방법, 투여 시간, 독성, 및 종양 성장 지연 및 종양 2배 증가 시간에 의존하는 log 세포 사에 따라 측정하였다.

Claims (3)

1. 유효량의 콤브레타스타틴과 조합한 유효량의 VEGF 트랩 (Trap)으로부터 선택되는 항암 화합물을 포함하는, 고형 종양의 치료를 위한 제약 조합물.
2. 유효량의 콤브레타스타틴과 조합한 유효량의 VEGF 트랩으로부터 선택되는 항암 화합물을 포함하며, 여기서 상기 콤브레타스타틴은 하기 화학식에 대응하는 것인, 고형 종양의 치료를 위한 제약 조합물.

   
3. 제2항에 있어서, 상기 콤브레타스타틴이 히드로클로라이드 염의 형태인 조합물.